KR102600182B1

KR102600182B1 - 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 글루타치온, pdrn 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR102600182B1
Application number: KR1020230059732A
Authority: KR
Inventors: 권한진; 함정율
Original assignee: 권한진; 함정율
Priority date: 2023-05-09
Filing date: 2023-05-09
Publication date: 2023-11-08
Anticipated expiration: 2043-05-09

Abstract

본 발명은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 및 소듐하이알루로네이트를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 상기 조성물은 증가된 보습력, 피부 재생 및 흡수력을 피부에 장기간 지속적으로 유지시킴을 확인함으로써 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 글루타치온, PDRN 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법{Cosmetic composition containing human cord blood cell conditioned media exosome, glutathione, PDRN, and sodium hyaluronate, and manufacturing method thereof}

본 발명은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 글루타치온, PDRN 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 고함량의 성장인자를 함유한 줄기세포 유래 엑소좀, 가수분해에 의해 열활성화된 PDRN 및 글루타치온 성분과 저분자량의 소듐하이알루로네이트를 동결건조하여 유효성분의 효과적인 유지 및 다양한 피부에 적용 가능하고 장기간 사용해도 부작용이 없는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

최근 생활수준의 향상으로 피부미용 및 피부관리에 대한 관심이 고조되고 있다. 다양한 소비자들의 선호도를 충족시키기 위하여 각종 인체 유래 세포의 활용으로 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 등이 용도에 맞추어 피부에 사용되거나 건강기능식품으로 시판되어 사용되고 있다.

그러나, 건강한 산모에서 추출한 배아 줄기세포 배양액 즉, 엑소좀은 실온에서 1 내지 2시간, -30 ℃에서 일주일 정도 성분의 특성을 유지하기 때문에 화장품 원료로 사용시 많은 제약이 따른다. 또한, 상기 배아 줄기세포의 경우 윤리적 논쟁이 있을 수 있다. 이에 반해, 성체 줄기세포는 윤리적 논쟁을 피할 수 있으며, 특히 성체 줄기세포 중에서 제대혈 유래 줄기세포는 지방 또는 골수 유래 성체 줄기세포와 달리 공여자의 임신주기 동안 형성된 제대혈을 사용하기 때문에 공여자의 상태에 따른 효능 차이가 발생하지 않는 장점이 있다.

PDRN은 뼈의 성장 촉진, 화상 환자의 피부재생, 혈액순환에 효과가 있어 신생 혈관재생을 촉진한다.

또한, 글루타치온은 기본적으로 세 개의 아미노산 즉, 글루탐산, 시스테인, 글리신이 결합하여 생성된 구조로 체내 모든 세포에서 합성될 수 있다. 글루타치온은 환원된 상태(GSH)와 산화된 상태(GSSG)로 존재하여 대부분의 생체 내 산화-환원 반응에 중요한 역할을 한다.

환원된 상태의 환원형 글루타치온(GSH)은 체내에서 글루타치온 산화-환원 반응을 통해 항산화 작용을 하고, 세포의 손상을 방지한다. 의약품으로는 환원형 글루타치온(GSH)이 허가되어 있다. 특히, 글루타치온은 간에서 약물, 알코올, 중금속 해독작용과 함께 산화-환원 조효소로 작용하여 단백질 합성을 촉진한다. 또한, 글루타치온의 구조 중에서 중금속에 높은 친화력이 있는 부분이 있어 항암제인 시스플라틴(cisplatin)의 독성을 감소시킨다.

그러나, 상기 인체 제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온에 고분자의 히알루론산이 결합된 제형은 아직 성분의 보관방법이나 제조방법에 대한 미비로 인해 각 물질의 지속성 및 유효성분의 유지가 어려운 상태이다. 따라서, 유효성분을 피부에 충분히 전달해주어 흐트러진 피부를 건강하고 탄력있는 피부로 가꾸는데 도움을 주고, 다양한 피부에 적용 가능하며, 장기간 사용해도 피부 트러블 등의 부작용이 없는 화장품에 대한 연구 개발이 필요한 실정이다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 화장품의 유효성분을 피부에 충분히 지속적으로 전달하기 위해 예의 연구한 결과, 소듐하이알루로네이트 성분을 이용하면서 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온의 특성 변화를 방지하기 위해 동결건조하는 단계를 포함하는 제조방법으로 제조된 화장료 조성물은 상기 유효성분이 지속적으로 피부에 전달되며 부작용이 없고 다양한 피부타입에 적용가능함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 i) 인체제대혈 세포 엑소좀 배양액을 냉동 후 동결하여 고체 타입의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더를 제조하는 단계; ii) 정제수에 PDRN을 용해시키고 가수분해 및 멸균된 PDRN 수용액을 제조하는 단계; iii) 정제수에 글루타치온 파우더를 용해시킨 글루타치온 수용액을 제조하는 단계; iv) 정제수에 소듐하이알루로네이트를 용해시켜 소듐하이알루로네이트 수용액을 제조하는 단계; v) 상기 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더, PDRN 수용액, 글루타치온 수용액 및 소듐하이알루로네이트 수용액을 혼합한 혼합액을 동결건조하여 제1 제제를 제조하는 단계; 및 vi) 상기 제1 제제와 분산제 조성물이 포함된 분산제 용액을 혼합하는 단계를 포함하는, 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 글루타치온, PDRN 및 소듐하이알루로네이트를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 제한되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에게 본 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 "포함한다 (comprises)" 및/또는 "포함하는 (comprising)"은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. 명세서 전체에 걸쳐 동일한 도면 부호는 동일한 구성 요소를 지칭하며, "및/또는"은 언급된 구성요소들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 비록 "제1", "제2" 등이 다양한 구성요소들을 서술하기 위해서 사용되나, 이들 구성요소들은 이들 용어에 의해 제한되지 않음은 물론이다. 이들 용어들은 단지 하나의 구성요소를 다른 구성요소와 구별하기 위하여 사용하는 것이다. 따라서, 이하에서 언급되는 제1 구성요소는 본 발명의 기술적 사상 내에서 제2 구성요소일 수도 있음은 물론이다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또한, 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

본 발명은 i) 인체제대혈 세포 엑소좀 배양액을 냉동 후 동결하여 고체 타입의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더를 제조하는 단계; ii) 정제수에 PDRN을 용해시키고 가수분해 및 멸균된 PDRN 수용액을 제조하는 단계; iii) 정제수에 글루타치온 파우더를 용해시킨 글루타치온 수용액을 제조하는 단계; iv) 정제수에 소듐하이알루로네이트를 용해시켜 소듐하이알루로네이트 수용액을 제조하는 단계; v) 상기 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더, PDRN 수용액, 글루타치온 수용액 및 소듐하이알루로네이트 수용액을 혼합한 혼합액을 동결건조하여 제1 제제를 제조하는 단계; 및 vi) 상기 제1 제제와 분산제 조성물이 포함된 분산제 용액을 혼합하는 단계를 포함하는, 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기 i) 단계에서 인체제대혈 세포 엑소좀 배양액은 바이알에 소분해서 극저온인 -70 내지 -80 ℃에서 냉동 후 동결하여 고체 타입의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더를 제조할 수 있다. 상기 인체제대혈 세포배양액 엑소좀은 GDF11을 포함할 수 있다.

본 발명의 엑소좀은 세포에서 유래된 지질 이중층으로 구성된 소낭으로, 세포 특유의 단백질, RNA, 지질 및 대사물질을 포함한 상태로 세포 밖으로 분비되어 다른 세포에게 단백질과 RNA 등을 전달한다. 엑소좀에 포함되어 있는 단백질은 세포막 형태의 인지질에 의해 보호되고 있어 단백질 분해효소 등에 의해 활성을 쉽게 잃지 않아 가용성 형태의 단순 단백질보다 안정적인 기능을 수행할 수 있다. 지질 이중층 구조는 세포막과 쉽게 융합되므로 엑소좀 내 물질들은 세포에 효율적으로 전달될 수 있다. 엑소좀은 세포를 배양한 후 수득된 배양액에서 얻을 수 있다.

본 발명의 엑소좀은 고함량의 성장인자를 함유한 줄기세포 유래 엑소좀으로, 상처 치유 및 재생 효과를 가지고 피부를 보호하고 건강하고 활력있는 피부 관리에 도움을 줄 수 있다. 상기 엑소좀은 GDF11를 포함한 성장분화인자로 섬유아세포 증식 및 콜라겐, 엘라스틴 등의 증가에 의해 노화로 인해 쳐진 피부에 탄력과 에너지를 부여하여 생기를 되찾는데 도움을 줄 수 있다.

상기 GDF11(growth differentiation factor 11)은 BMP-11(bone morphogenetic protein 11)로도 불리우며, 사람의 12번 염색체에 존재하는 GDF11 유전자에 의해 발현되는 단백질을 의미한다. 상기 GDF11은 미오스타틴 유사체 단백질로 알려져 있는데, 신경조직의 성장을 억제하는 억제제로 작용하며 운동능력을 회복시키고 퇴행성 뇌혈관을 재생시키는 효과가 있고, 섬유아세포의 증식을 촉진하여 피부재생 촉진, 주름개선 촉진, 창상 치료촉진 등의 효과를 나타낼 수 있다.

상기 ii) 단계에서 상기 가수분해 및 멸균은 100 내지 130 ℃에서 30 내지 120분 동안 수행될 수 있으며, 구체적으로 105 내지 125 ℃에서 40 내지 110분 동안 수행될 수 있으며, 보다 구체적으로 120 ℃에서 50 내지 100분 동안 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 ii) 단계에서 상기 PDRN의 중량비는 0.001 내지 5 중량%일 수 있으며, 구체적으로 0.001 내지 3 중량%일 수 있으며, 보다 구체적으로 0.001 내지 2 중량%일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 ii) 단계는 정제수에 PDRN을 용해시켜 고압멸균기를 통해 가수분해 및 멸균된 PDRN 수용액을 제조할 수 있다.

본 발명의 PDRN은 폴리데옥시리보뉴클레오티드(polydeoxyribonucleotide)로, DNA 복합체, 즉, 데옥시리보뉴클레오티드(deoxyribonucleotide) 중합체가 포함된 화합물로서 부작용 없이 세포 재생에 필요한 활성제로 사용될 수 있으며, 세포 분화를 촉진시킬 수 있다. 뼈의 성장 촉진, 화상 환자의 피부 재생, 혈액 순환에 효과가 있어 신생혈관 재생을 촉진시킬 수 있다.

상기 iii) 단계에서 상기 글루타치온의 중량비는 0.001 내지 5 중량%일 수 있으며, 구체적으로 0.001 내지 3 중량%일 수 있으며, 보다 구체적으로 0.001 내지 1 중량%일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 글루타치온(glutathione)은 생체에서 분리한 최초의 결정성 폴리펩타이드이며, 아미노산 3개 즉 글루탐산, 글리신, 시스테인의 결합으로 형성되며 자연계에 널리 분포하며 대부분의 생체 내 산화-환원 반응에 중요한 역할을 한다. 상기 글루타치온은 자유라디칼, 과산화물, 지질 과산화물, 중금속과 같은 활성산소로 인한 세포의 주요 성분의 손상을 방지할 수 있다.

상기 iv) 단계에서 상기 소듐하이알루로네이트의 중량비는 1 내지 10%일 수 있으며, 구체적으로 1 내지 7%일 수 있으며, 보다 구체적으로 1 내지 5%일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 iv) 단계에서 상기 소듐하이알루로네이트의 중량평균분자량은 0.1 내지 0.5 Mda일 수 있으며, 구체적으로 0.13 내지 0.4 Mda일 수 있으며, 보다 구체적으로 0.15 내지 0.3 Mda일 수 있다.

본 발명의 소듐하이알루로네이트(sodium hyaluronate)는 히알루론산(hyaluronic acid)으로 모든 생명체의 구성 물질로서, 생체 내에서 피부에 가장 많이 분포되어 있으며 피부 생명현상 유지에 중요한 역할을 하고, 20대 중반부터 생산량이 줄어 피부 주름의 원인이 될 수 있다.

상기 소듐하이알루로네이트는 수천가지의 이당류(disaccharide) 단위들(units)의 축합에 의해 생성된 비분지형 다당류 사슬을 갖는 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan)으로 정의되는 중합체 화합물(polymer compound)이며, 물에서 높은 용해도를 나타낸다. 특정 가교제와 적절한 작동 조건(온도, pH 등)을 통해 가교된 히알루론산을 형성하도록 하여 표피 조직의 모양과 색조를 유지시키기 위한 분자 골격을 생성할 수 있다.

나이가 들어감에 따라 피부의 히알루론산(hyaluronic acid)의 양이 감소하면서 피부의 노화가 진행되는 것인데 피부에 히알루론산을 함유한 화장품을 통해 이를 채워주면 피부에 탄력을 부여하는데 도움을 줄 수 있다.

상기 0.15 내지 0.3 Mda의 저분자량의 소듐하이알루로네이트는 피부 속까지 흡수가 용이하여 수분을 잡아주고, 피부 탄력을 높이는 역할을 한다.

상기 v) 단계에서는 상기 i 내지 iv 단계에서 제조된 파우더 및 수용액 즉, 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더, PDRN 수용액, 글루타치온 수용액 및 소듐하이알루로네이트 수용액을 혼합하여 혼합액을 제조한 후 10 내지 20 mL의 바이알에 소분한 후 동결건조하여 백색의 고체입자를 제조할 수 있다.

상기 혼합액에는 아미노산 즉, 글라이신, 프롤린, 라이신, 류신, 알지닌, 아세틸시스테인 등의 첨가물이 첨가될 수 있다.

본 발명의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 가수분해에 의해 열활성화된 PDRN, 글루타치온 성분이 소듐하이알루로네이트를 함유하여 특정 중량비로 배합되어 포함하는 것이 본 발명의 주요 기술적 특징이다.

본 발명의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀은 외부 환경에 민감한 성분으로, 온도를 상승시켜 멸균 등의 작업을 진행하는 경우 성장인자 및 유효성분의 성질이 변하게 되므로 본래의 효과가 미미하게 된다. 이에, 본 발명에서는 상기 인체제대혈 세포 엑소좀의 성질 변화를 방지하고 필터링을 통한 제균 작업을 진행하면서 유효성분을 보존하고 유지하기 위해 피부에 주는 유효성 있는 효과를 높이기 위한 동결건조 작업을 진행할 수 있다.

상기 v) 단계에서 상기 동결건조는 -70 내지 -80 ℃에서 예비동결을 수행한 후 -50 내지 -30 ℃에서 100 내지 300분, -30 내지 -10 ℃에서 200 내지 300분, 0 내지 5 ℃에서 700 내지 800분, 10 내지 30 ℃에서 300 내지 400분, 30 내지 50 ℃에서 100 내지 1500분 동안 수행될 수 있다.

상기 vi) 단계에서 상기 분산제는 세포, 성장인자, 펩타이드, 아미노산, 단백질, 당류 및 천연고분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 분산제는 생리 활성 물질을 분산시키기 위해 사용하는 것으로 저분자량의 분산제 또는 고분자량의 분산제 폴리머가 적용될 수 있다. 상기 저분자량의 분산제는 중량 평균 분자량이 15,000 MW 미만인 화합물을 의미하고, 상기 고분자량의 분산제 폴리머는 1개 이상의 모노머의 사이에 반복의 공유결합을 포함하고, 중량 평균 분자량이 15,000 MW 이상인 화합물을 의미한다. 저분자량의 분산제로서는, 의약 화합물, 기능성 식품 화합물, 기능성 화장품 화합물 등에 허용되는 것이면 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로 당류, 시클로덱스트린류, 아미노산류, 유기산류, 그 밖의 성분일 수 있으며, 이들을 1종 단독으로 사용할 수 있고, 2종 이상을 병용할 수 있다.

본 발명의 분산제는 세포 및 성장인자일 수 있다. 상기 세포 및 성장인자는 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cells), 유도만능줄기세포(iPSC) 섬유아세포 성장인자(FGF), 상피세포 성장인자(EGF), 케라티노사이트 성장인자(KGF), 형질전환 성장인자 알파(TGF-α), 형질 전환 성장인자 베타(TGF-β과립구 형성 자극인자(GCSF), 인슐린 유사 성장인자(IGF), 혈관내피 성장인자 (VEGF), 간세포 성장인자(HGF), 혈소판 유래 성장인자-BB(PDGF-BB), 뇌 유래 신경영양인자(BDNF) 및 아교세포 유래 신경영양인자(GDNF)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 분산제는 펩타이드, 아미노산 또는 단백질일 수 있다. 상기 펩타이드, 아미노산 또는 단백질은 알라닌(Alanine), 아르지닌(Arginine), 아스파라진(Asparagine), 아스파르트산(Aspartic acid), 시스테인(Cysteine), 글루타민(Glutamine), 글루탐산(Glutamic acid), 글리신(Glycine), 히스티딘(Histidine), 아이소루신(Isoleucine), 리신(Lysine), 메티오닌(Methionine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 트립토판(Tryptophan), 티로신(tyrosine) 및 발린(Valine)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 분산제는 당류일 수 있다. 상기 당류는 글루코스(Glucose), 만노스(Mannose), 이도스(Idose), 갈락토스(galactose), 푸코스(fucose), 리보스(Ribose), 크실로스(Xylose), 락토스(Lactose), 수크로스(Sucrose), 말토스(Maltose), 트레할로스(Trehalose), 투라노스(Turanose), 라피노스(Raffinose), 말토트리오스(Maltotriose), 아카보스(Acarbose), 수용성 셀룰로스(water-soluble cellulose), 합성 셀룰로스(Synthetic Cellulose), 당알콜(Sugar Alcohol), 글리세린(glycerin), 소르비톨(sorbitol), 락티톨(Lactitol), 말티톨(mannitol), 만니톨(mannitol), 크실리톨(Ksylitoli), 에리스리톨(Erythritol), 폴리올(polyol) 및 이들의 유도체(derivatives)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 천연고분자는 키토산 및 알지네이트로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 vi) 단계에서 상기 분산제 용액은 갈락토미세스 발효 여과물, 꿀추출물, 말굽잔나비 버섯 추출물, 바실러스 발효 추출물, 소이빈 발효 추출물, 병풀 추출물, 가시대나무 줄기 추출물 및 쇠비름 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, 글루타치온, PDRN 및 소듐하이알루로네이트를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 엑소좀, 글루타치온, PDRN 및 소듐하이알루로네이트는 상기 기재된 바와 같다.

상기 화장료 조성물은 분산제를 추가로 포함할 수 있다.

상기 분산제는 세포, 성장인자, 펩타이드, 아미노산, 단백질, 당류 및 천연고분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 향수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 상기 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.

본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하이드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 글리세린, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 글리세린, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 증가된 피부 재생, 보습력 및 흡수력을 3개월 이상 지속시킬 수 있다.

본 발명은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고, 상기 조성물은 증가된 보습력, 피부 재생 및 흡수력을 피부에 지속적으로 유지시킴을 확인함으로써 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법에 대하여 순서도로 나타낸 도이다.
도 2는 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 및 소듐하이알루로네이트를 포함하는 미세입자와 HA 미세입자의 주사전자현미경(SEM) 이미지를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 화장료 조성물의 유효성을 평가하기 위해 진피치밀도 향상을 테스트한 결과를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명의 내용을 하기의 실시예 및 실험예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

실시예 1. 화장료 조성물의 제조

인체제대혈 세포 엑소좀 배양액을 바이알에 소분해서 극저온인 -70℃에서 냉동한 후 동결한 고체 타입의 파우더, PDRN 수용액, 글루타치온 파우더를 용해시킨 수용액과 0.15 이상 0.3 Mda 미만의 분자량의 소듐하이알루로네이트 수용액에 표 1에 나타낸 첨가물을 첨가한 후에 동결건조하여 제1 제제를 만들었다.

이후, 하기 표 2에 나타낸 분산제 및 기타 첨가물을 포함하는 2차 수용액인 제2 제제를 제조하였다.

동결건조된 제1 제제(백색 고체상)와 2차 분산제 수용액(투명 액상)인 제2 제제를 혼합하여 최종적으로 화장료 조성물을 제조하였다.

실험예 1. 피부에 대한 유효성 평가

인체제대혈 세포배양액 엑소좀은 외부 환경에 민감한 성분으로서, 온도를 상승시켜 멸균 등의 작업을 진행하는 경우, 성장인자 및 유효성분의 성질이 변하게 되므로 본래의 효과가 현저히 감소하게 된다.

이러한 인체제대혈 세포배양액 엑소좀의 성질 변화를 방지하기 위해 필터링을 통한 제균 작업을 진행하면서 유효성분을 보존하기 위해 동결건조시키고, 가수분해에 의해 열활성화된 PDRN은 뼈의 성장촉진, 화상 환자의 피부재생, 혈액순환에 우수한 효과가 있어 신생 혈관재생을 촉진시킨다.

글루타치온은 환원된 상태(GSH)와 산화된 상태(GSSG)로 존재하여 대부분의 생체 내 산화-환원 반응에 중요한 역할을 한다. 환원된 상태의 환원형 글루타치온(GSH)은 체내에서 글루타치온 산화-환원 반응을 통해 항산화 작용을 하고, 세포의 손상을 방지한다.

또한, 소듐하이알루로네이트(sodium hyaluronate)는 생체 내에서 피부에 가장 많이 분포되어 있으며 피부 생명현상 유지에 중요한 역할을 한다.

상기 인체제대혈 세포배양액 엑소좀, PDRN, 글루타치온 및 소듐하이알루로네이트를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 유효성분을 효과적으로 유지하고 다양한 피부에 적용 가능하며 장기간 사용해도 부작용이 없고 증가된 피부 보습력, 재생효과, 피부 광채 및 흡수력을 장기간 지속시킬 수 있음을 확인하였다(도 3).

이상 본 발명의 실시예들을 설명하였으나, 본 발명은 상기 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

i) 인체제대혈 세포 엑소좀 배양액을 냉동 후 동결하여 고체 타입의 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더를 제조하는 단계;
ii) 정제수에 PDRN을 용해시키고 가수분해 및 멸균된 PDRN 수용액을 제조하는 단계;
iii) 정제수에 글루타치온 파우더를 용해시킨 글루타치온 수용액을 제조하는 단계;
iv) 정제수에 중량평균분자량 0.15 내지 0.3 Mda인 소듐하이알루로네이트를 용해시켜 소듐하이알루로네이트 수용액을 제조하는 단계;
v) 상기 인체제대혈 세포배양액 엑소좀 파우더, 가수분해 및 멸균된 PDRN 수용액, 글루타치온 수용액, 소듐하이알루로네이트 수용액, 글라이신, 프롤린, 라이신, 류신, 시스테인 및 알지닌을 혼합한 혼합액을 동결건조하여 제1 제제를 제조하며, 상기 동결건조는 -70 내지 -80 ℃에서 예비동결을 수행한 후 -50 내지 -30 ℃에서 100 내지 300분, -30 내지 -10 ℃에서 200 내지 300분, 0 내지 5 ℃에서 700 내지 800분, 10 내지 30 ℃에서 300 내지 400분 및 30 내지 50 ℃에서 100 내지 1500분 동안 수행되는 것인 단계; 및
vi) 상기 제1 제제와 분산제 조성물이 포함된 분산제 용액을 혼합하는 단계를 포함하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 ii) 단계에서 상기 가수분해 및 멸균은 100 내지 130 ℃, 50 내지 100분 동안 수행되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 ii) 단계에서 상기 PDRN의 중량비는 0.001 내지 2 중량%인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 iii) 단계에서 상기 글루타치온의 중량비는 0.001 내지 1 중량%인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
삭제
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제1항에 있어서,
상기 vi) 단계에서 상기 분산제는 세포, 성장인자, 펩타이드, 아미노산, 단백질, 당류 및 천연고분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제7항에 있어서,
상기 천연고분자는 키토산 및 알지네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 vi) 단계에서 상기 분산제 용액은 갈락토미세스 발효 여과물, 꿀추출물, 말굽잔나비 버섯 추출물, 바실러스 발효 추출물, 소이빈 발효 추출물, 병풀 추출물, 가시대나무 줄기 추출물 및 쇠비름 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물의 제조방법.
제1항 내지 제4항 및 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 화장료 조성물.
삭제
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제10항에 있어서,
상기 조성물은 증가된 피부 재생, 보습력 및 흡수력을 3개월 이상 지속시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.