KR102323657B1 - 항염용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아마이드계 화합물을 포함하는 항염용 화장료 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 상기 항염용 조성물은 PAR-2의 활성화 억제, 염증성 사이토카인인 IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 발현 억제 효과가 우수하여, 피부조직의 분해를 막아주고 다양한 원인에 의한 내/외인성 염증성 피부 질환 및 피부노화 촉진 현상 등에 유효한 효과를 발현할 수 있다.

Description

항염용 조성물{Composition for anti-inflammatory}

본 발명은 항염용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 염증성 피부 질환 관련 매개 인자의 발현을 조절함으로써 항염 효과를 구현할 수 있는 항염용 화장료 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다.

염증성 피부 질환은 물리적 자극이나 화학 물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될 때 이를 막기 위한 생체의 방어 작용으로부터 시작되며, 다양한 면역세포 및 염증 유도 사이토카인 등의 염증 유발 인자가 관여한다. 특히, G 단백질 결합 수용체(G-protein-coupled receptor, GPCR)에 속하는 PAR-2(Protease activated receptor 2)는 염증 유도 사이토카인의 활성화를 유도하며, 아토피 피부염을 포함하여 다양한 염증성 피부 질환에서 밀접한 관련이 있는 것으로 보고된 바 있다.

현재 염증성 피부 질환의 예방 및 치료를 위해, 이부프로펜과 같은 합성의약제제, 항히스타민제, 스테로이드, 코티손, 면역억제제, 면역 항진제 등이 사용되고 있다. 그러나, 치료 효과가 일시적이거나 단순 증상완화, 과민반응, 면역 체계 악화 등의 부작용이 많이 있고 염증의 근본적인 치료에는 한계를 가졌다.

이를 해결하기 위한 방안으로, 다양한 염증 유발 인자에 대한 저해 효능을 지닌 물질과 이를 적용한 화장료 및 약학 조성물에 대한 연구가 계속되고 있다. 그러나, 그 저해 효능이 충분하지 않으며, 피부 안전성 문제로 사용량이 제한되거나, 물에 대한 용해도가 좋지 않기 때문에 실제 제품 적용 시 유효농도 미만의 낮은 함량으로 포함될 수 밖에 없어 실직적인 효과를 거두기 어려운 한계가 있다.

이에, 생체에 안전하고 적은 양으로도 염증 유발 인자에 대한 저해 효능이 탁월한 새로운 항염 물질에 대한 개발이 요구되고 있다.

KR 10-2013-0069737 A

본 발명의 일 양태는 PAR-2 활성을 효과적으로 억제할 수 있는 유효성분을 포함하는 항염용 조성물을 제공하는 것이다.

구체적으로, 본 발명의 일 양태는 피부 부작용을 유발하지 않으며, 피부 염증 개선 효과가 탁월한 항염용 조성물을 제공하는 것이다.

상술된 목적을 위해, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 PAR2 활성 억제용 유효성분으로 포함하는, 항염용 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 조성물은 IL-6, IL-8, IL-17α, IL-1α, IL-1β 및 TNF-α로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 발현을 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 1 중량%로 포함되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 조성물은 에틸헥사나마이드 세린올을 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 조성물 내 상기 화학식 1의 화합물과 에틸헥사나마이드 세린올의 중량비는 0.01:99.99 내지 99.99:0.01로 포함되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 조성물은 항염용 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 에센스 또는 팩으로 제형화되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 조성물은 항염용 약학 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 약학 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제로 제형화되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 약학 조성물은 아토피피부염, 건선, 접촉성피부염, 습진성 피부염, 광선 피부염, 지루 피부염, 포진성 피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 농피증, 천포창, 수포성 표피박리증, 전신성 경화증, 피부근염, 다발성근염, 염증성 근병변 및 세자리 증후군을 포함하는 염증성 피부 질환의 치료 및 예방을 위한 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 항염용 조성물은 염증성 피부 질환과 관련된 염증 유발 인자의 발현을 효과적으로 억제할 수 있으며, 염증성 피부 질환의 예방 및 개선에 유효한 효과를 나타낼 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 일 양태에 따른 항염용 조성물은 PAR-2의 활성화억제 및 IL-8, IL-1β 및 TNF-α을 포함하는 염증성 사이토카인의 발현 억제 효과가 탁월하다. 이에, 염증 반응을 효과적으로 방지할 수 있고 염증성 피부 질환, 특히 아토피성 피부염이나 알러지성 피부염 등에 대한 우수한 항염 효과를 나타낼 수 있다.

또한, 본 발명의 일 양태에 따른 유효성분을 포함하는 항염용 조성물은 세포독성 및 피부 부작용이 없어 다양한 제형의 화장료 및 약학 조성물로 안전하게 적용할 수 있다.

도 1은 실시예 1 및 비교예 1의 Calcium Influx Assay 결과를 도시한 것이다.
도 2는 실시예 1 및 비교예 1의 β-Arrestin GPCR Assay 결과를 도시한 것이다.
도 3은 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 PAR2 발현 억제 효과를 정량화한 그래프이다.
도 4는 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 IL-8 발현 억제 효과를 정량화한 그래프이다.
도 5는 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 IL-1β 발현 억제 효과를 정량화한 그래프이다.
도 6은 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 TNF-α 발현 억제 효과를 정량화한 그래프이다.
도 7은 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 IL-8 발현 억제 효과를 면역조직화학을 통하여 확인한 결과를 도시한 것이다.
도 8은 항염 효능 측정 실험에서 실시예 1 및 비교예 1의 IL-1β 발현 억제 효과를 면역조직화학을 통하여 확인한 결과를 도시한 것이다.

이하, 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 이 때 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.

본 명세서에서 특별한 언급 없이 사용된 단위는 중량을 기준으로 하며, 일 예로 % 또는 비의 단위는 중량% 또는 중량비를 의미하고, 중량%는 달리 정의되지 않는 한 전체 조성물 중 어느 하나의 성분이 조성물 내에서 차지하는 중량%를 의미한다.

본 명세서의 용어, "포함한다"는 "구비한다", "함유한다", "가진다" 또는 "특징으로 한다" 등의 표현과 등가의 의미를 가지는 개방형 기재이며, 추가로 열거되어 있지 않은 요소, 재료 또는 공정을 배제하지 않는다.

본 발명에서 사용되는 용어, "염증"은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어 목적으로 나타나는 현상을 의미하는 것으로, 신경, 혈관, 임 파관, 체액 반응, 세포 반응을 일으켜 결과적으로 통증, 부종, 발적, 발열 등을 일으켜 기능장애를 유발하는 것을 통칭한다. 상기 염증으로 인한 염증성 피부 질환은 아토피성 피부염, 건선, 접촉성 피부염, 습진성 피부염, 광선 피부염, 지루 피부염, 포진성 피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 농피증, 천포창, 수포성 표피박리증, 전신성 경화증, 피부근염, 다발성 근염, 염증성 근병변, 나병, 세자리 증후군으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상일 수 있고, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지 및 약품 알러지 등의 알러지성 피부염 또한 동일 범주에 속한다.

이하, 본 발명에 대해 구체적으로 설명한다.

본 발명자들은 염증성 피부 질환을 근본적으로 예방 및 개선할 수 있는 새로운 소재에 대한 연구를 거듭하던 중, 특정 구조의 아마이드계 화합물이 염증성 피부 질환의 원인이 되는 염증성 인자의 활성화를 억제할 수 있음을 확인하였다. 구체적으로, 본 발명에 따른 아마이드계 화합물이 PAR-2의 활성화 억제, 염증성 사이토카인인 IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 발현 억제 효과가 탁월함을 확인하였다. 이에, 본 발명자들은 이와 같은 효과를 기반하여 기존에 알려지지 않았던 새로운 용도 및 놀랍도록 현저한 효과를 밝힘으로써, 본 발명을 제안하고자 한다.

본 발명의 일 양태에 따른 항염용 조성물은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 PAR2 활성 억제용 유효성분으로 포함한다.

[화학식 1]

염증성 피부 질환의 주된 원인 중 하나인 PAR-2의 과도한 활성화는 다른 염증 반응을 연쇄적으로 유발한다. 특히 PAR-2의 활성화로부터 유래된 활성 사이토카인은 염증의 중요한 유도인자이고, 다른 사이토카인 경로와 상호작용하여 면역 반응을 감염 및 상해로 정형화한다. 따라서, 본 발명의 일 양태 따른 항염용 조성물은 PAR-2 활성화를 억제함으로써 만성 염증반응으로 인한 피부 질환 및 피부 노화 현상 등의 개선을 가능하게 한다.

또한, 본 발명의 일 양태에 따른 상기 항염용 조성물은 IL-6, IL-8, IL-17α, IL-1α, IL-1β 및 TNF-α로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 발현을 억제할 수 있다. 염증 반응에 의해 생성되는 TNF-α와 IL-1β 등과 같은 사이토카인(cytokine)은 혈관 내피(vascular endothelium)에 존재하는 수용체에 결합하여 여러 염증 관련 신호 경로(signaling pathway)를 활성화시킨다. 또한, 이때 세포 부착 분자(cell adhesion molecule)의 발현이 증가되어 염증성 세포들의 분출(extravasation)이 일어나게 된다. 이러한 염증성 세포의 침투(infiltration) 후 여러 사이토카인이나 케모카인 등의 케모-어트랙티브 활성(chemo-attractive activity)이 있게 되고, 이들이 염증이 일어난 부위로 이동하면서 면역 반응을 일으키게 되며, 생성된 사이토카인은 다시 수용체에 결합하여 연쇄 반응을 일으키게 된다. 따라서, 본 발명의 일 양태에 따른 조성물이 염증성 사이토카인의 발현을 억제할 수 있다면 염증성 피부 질환의 예방 및 개선을 위한 물질로 작용할 수 있다고 판단할 수 있을 것이다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 PAR-2 활성화 억제, 사이토카인의 발현 억제, 피부 안전성 등의 요건에 따라 적절하게 함량 범위가 조절될 수 있다. 상기 유효성분의 함량 범위는 크게 한정되는 것은 아니지만, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 5 중량%로 포함될 수 있으며, 구체적으로 0.001 내지 3 중량%, 더욱 구체적으로 0.001 내지 1 중량%로 포함될 수 있다. 상술한 범위로 화학식 1의 유효성분을 포함하는 경우, 제형의 안정성을 해치지 않으면서도 항염 효과 및 피부 안전성을 더욱 우수하게 할 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 항염용 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 유효성분에 에틸헥사나아마이드 세린올(Ethylhexanamide serinol, Dualguard-9)을 더 포함할 수 있다. 유효성분과 에틸헥사나아마이드 세린올(Ethylhexanamide serinol, Dualguard-9)의 조합으로 사용하는 경우, 유효성분을 단일성분으로 사용하는 것 대비 현저한 시너지를 부여하여 보다 우수한 항염 효과를 구현할 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 항염용 조성물 내 상기 화학식 1로 표시되는 유효성분과 에틸헥사나아마이드 세린올의 중량비는 0.01:99.99 내지 99.99:0.01 로 포함될 수 있으며, 구체적으로는 1:99 내지 99:1, 더욱 구체적으로 1:9 내지 9:1 또는 3:7 내지 7:3으로 포함될 수 있다. 상술된 중량비 범위로 포함하는 경우, 제형의 안정성을 해치지 않으면서도 본 발명에서 목적하는 효과에 더욱 향상된 시너지를 부여할 수 있다.

또한, 본 발명의 일 양태에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 항염용 조성물은 피부에 대한 안전성이 우수하고, 물리적·화학적으로 매우 안정하기 때문에, 제형 개발이 용이하여 화장료 조성물, 약학 조성물 등으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따른 화장료 조성물은 상술된 유효성분 및 잔량을 물을 포함하는 것일 수 있으며, 다양한 양태로 제형화될 수 있음은 물론이다.

본 발명의 일 양태에 따른 화장료 조성물은 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형 등으로 제형화될 수 있다. 일 예로, 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 에센스, 팩 등에서 선택되는 제형으로 제형화되는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 화장료 조성물은 목적하는 바에 따라 적절하게 추가의 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 상기 화학식 1의 아마이드계 화합물과 함께 당업계에 공지된 주름 개선용 성분, 항산화용 성분, 미백 성분 등에서 선택되는 성분을 더 포함할 수 있다. 일 예로, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물 등에서 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 화장료 조성물은 안정화제, 유화제, 점증제, 보습제, 액정 막강화제, pH 조절제, 항균제, 수용성 고분자, 피막제, 금속 이온 봉쇄제, 아미노산, 유기 아민, 고분자 에멀션, pH조정제, 피부 영양제, 산화 방지제, 산화 방지조제, 방부제, 향료 등에서 선택되는 하나 이상의 수성 첨가제; 및 유지류, 왁스류, 탄화 수소유, 고급 지방산유, 고급 알콜, 합성 에스테르유 및 실리콘유 등에서 선택되는 하나 이상의 유성 첨가제;에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 더 포함할 수 있다.

이때, 상기 각 첨가제는 상기 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%로 포함될 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 10중량%, 0.05 내지 5중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 상기 조성물은 항염용 약학 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 약학 조성물은 염증성 피부 질환을 개선할 수 있으며, 상기 염증성 피부 질환의 일 예로, 아토피피부염, 건선, 접촉성피부염, 습진성 피부염, 광선 피부염, 지루 피부염, 포진성 피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 농피증, 천포창, 수포성 표피박리증, 전신성 경화증, 피부근염, 다발성 근염, 염증성 근병변, 나병 또는 세자리 증후군일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한 항염용 약학 조성물로 제형화될 수 있다. 일 예로, 상기 약학 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취, 분무제 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제형화되는 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 약학 조성물은 목적하는 바에 따라 적절하게 추가의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 일 예로, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 또는 미네랄 오일 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 담체 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제 또는 보존제 등의 담체를 더 포함할 수 있다.

이때, 상기 각 담체는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%로 포함될 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 10중량%, 0.05 내지 10중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 일 양태는 염증성 질환을 완화하거나 치료하기 위한 방법을 제공한다. 구체적으로, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 PAR-2 활성 억제용 유효성분으로 포함하는 조성물을 염증성 질환의 치료가 필요한 대상에게 유효량을 투여함에 따라 수행될 수 있다.

[화학식 1]

이하, 실시예 및 비교예를 비교예를 바탕으로 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예 및 비교예는 본 발명을 더욱 상세히 설명하기 위한 하나의 예시일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 비교예에 의해 제한되는 것은 아니다.

[제조예 1] CB060의 제조

반응기에 1,3-다이아미노-2-프로판올 (1,3-Diamino-2-propanol, 20.60 g, 228.55 mmol, Sigma-Aldrich)과 디클로로메탄 2.0 L를 투입하고 트리에틸아민 (TEA, 76.45 mL, 삼전순약)을 투입하여 반응액을 만들었다. 반응 온도를 0℃로 낮추고 라우로일클로라이드 (Lauroyl chloride, 100.00 g, 457.10 mmol, TCI)를 반응액에 천천히 가한 후 0℃에서 1시간 동안 교반하고 서서히 상온으로 올려 밤새 교반 하였다. 상기 반응액에 정제수 1.5 L를 넣고 교반하여 생성된 고체를 여과하여 모았다. 고체를 에탄올 0.3 L로 재결정하고 생성된 고체를 여과한 후 건조하여 흰고체인 화합물을 얻었다(70 g, 수율 = 67.4%). 수득된 고체를 'CB060'이라 명명하고, MS(Thermo Fisher, 미국) 및 NMR(Bruker Biospin, 캐나다)로 분석하였다. 상기 분석 결과는 다음과 같다.

MS (ESI pos. ion) m/z: 455 (MH⁺)

¹H NMR (700 MHz, CDCl₃): 6.39 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 4.31 (brs, 1H), 3.76 - 3.75 (m, 1H), 3.36 - 3.30 (m, 4H), 2.22 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 1.70 - 1.61 (m, 6H), 1.30 - 1.25 (m, 30H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

[실시예 1] 항염용 조성물의 제조

상기 제조예 1에서 제조된 화합물(CB060)을 다이메틸 설폭사이드(DMSO)에 1 wt%로 용해하여, 실시예 1의 항염용 조성물을 제조하였다. 제조된 실시예 1의 항염용 조성물을 각 평가방법에 따라 다양한 농도로 준비하여 항염 효능을 측정하였다.

[비교예 1] 항염용 조성물의 제조

하기 비교화합물 1((2-메틸-1-(3-메틸벤질)-1H-벤조[d]이미다졸-5일)(피페리딘-5-일)메탄온, Adfence-P)을 다이메틸 설폭사이드(DMSO)에 1 wt%로 용해하여, 비교예 1의 항염용 조성물을 제조하였다. 제조된 비교예 1의 항염용 조성물을 각 평가방법에 따라 다양한 농도로 준비하여 항염 효능을 측정하였다.

비교화합물 1:

<실험예>

평가 1. PAR-2 활성 억제 효능 측정

Calcium Influx Assay

PAR-2가 과발현된 세포주에서 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 조성물 처리에 따른 세포 내 칼슘 이온의 농도 변화를 실시간으로 측정하였다. PAR-2 활성화제로서는 활성 펩타이드 (activating peptide, AP)를 이용하였고, 세포 내 칼슘 이온 농도를 검출하기 위한 시약으로서는 Fluo-4 Direct™ Calcium Assay (Invitrogen, F10472)를 이용하였다. 세포주로서는 PAR-2가 과발현된 세포주인 HCT-15을 이용하였으며, 상기 세포주에 실시예 1 및 비교예 1의 조성물을 농도 별로 5분간 처리한 후, AP를 처리하였다. 그 후, Molecular Device사의 FlexStation II를 이용하여, 형광의 변화를 2분간 실시간으로 관찰하였으며, 조성물 처리 농도와 PAR-2 저해 정도 (POI: percentage of inhibition)의 상관관계를 도 1에 도시하였다.

β-Arrestin GPCR Assay

PAR-2가 과발현된 세포주에서 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 조성물 처리에 따른 PAR-2의 활성화에 의하여 1차적으로 발생하는 세포내 반응인 β-Arrestin의 축적을 농도 변화에 따라 실시간으로 측정하였다. PAR-2 활성화제로서는 활성 펩타이드 (activating peptide, AP)를 이용하였고, 세포 내 β-Arrestin의 축척을 검출하기 위한 시약으로서는 DiscoveRx사의 PathHunter™ β-Arrestin GPCR Assay을 이용하였다. 세포주로서는 PAR-2가 과발현된 세포주인 HCT-15을 이용하였으며, 상기 세포주에 실시예 1 및 비교예 1의 조성물을 농도 별로 30분간 처리한 후, AP를 90분 동안 처리하였다. 그 후 chemiluminescent signal을 측정하여 PAR-2의 저해 활성 변화를, 도 2에 도시하였다.

도 1 및 2에 도시한 바와 같이, CB060 화합물을 포함하는 본 발명의 항염용 조성물은 적은 양으로도 PAR-2의 활성을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다. 또한, PAR-2의 저해제로 활성이 있는 것으로 알려진 바 있는 Adfence-P을 포함하는 비교예 1의 항염용 조성물 대비 PAR-2 활성 억제 효능이 탁월함을 확인하였다.

평가 2. 항염 효능 측정

아토피 피부염 모델의 제조

항염 효능 측정을 위해, 아토피 피부염 피부 모델에서 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 조성물을 처리하여 RAR-2, IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 발현량을 비교하였다. 인간 각질형성세포(Human Epidermal Keratinocytes, GIBCO)에 Poly(I:C), TNF-α, IL-4 및 IL-13을 함유한 media를 처리하여, 아토피 피부염 피부 모델을 제조하였다. 이때, 상기 media 처리 전의 인간 각질형성세포는 정상 피부모델(control)을 의미한다. 구체적으로, 6웰 플레이트(well plate)에 1Х10⁵cells/dish의 세포를 준비한 뒤, 37℃및 5%의 CO₂ 조건에서 24시간 배양하였다. 인간 각질형성세포에서 TLR3 ligand의 agonist인 Poly(I:C) 10ug/ml와 Inflammatory cytokines으로 알려져 있는 TNF-α(3.5 ng/ml), IL-4(30 ng/ml), IL-13(30 ng/ml)을 복합 처리하여 상기 인자들의 활성화가 유도됨을 확인하였다.

q-PCR

상기 아토피 피부염 피부 모델에 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 조성물을 각각 50 μM 농도로 500㎕ 도포하여 24시간 처리한 후 배양액을 제거하였다. 수득한 세포를 각각 1.5mL microfuge 튜브로 옮긴 후, 클로로포름(Chloroform) 0.2mL를 첨가하여 실온에서 5분 방치하고, 14,000rpm으로 15분간 원심 분리를 수행하였다. 원심분리 수행 후, 세포를 파괴시킨 혼합액의 상등액을 새 1.5mL microfuge 튜브로 옮기고, 이소프로필알코올을 0.4mL 첨가하여 inverting 하였다. 실온(25℃)서 15분간 방치한 후, 14,000rpm으로 15분간 원심분리를 가하여 RNA를 침전시켜 수득하였다. 상기의 튜브에서 이소프로필알코올을 제거한 후, 75% 에탄올 1mL를 첨가하여 inverting하고 10,000rpm에서 5분간 원심분리하였다. 이후, 에탄올을 제거하여 정제된 RNA를 수득하고, RNA가 완전히 건조되면 DEPC-DW를 첨가하여 RNA를 획득하였다.

이는 하기 표 1과 같은 각각의 특이적 프라이머를 이용하여 q-PCR로 RAR-2, IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 mRNA양의 변화를 측정하였으며, 그 결과를 도 3 내지 도 6에 도시하였다.

	방향	염기서열
β-Actin	forward	ATTGGCAATGAGCGGTTCC
	reverse	GGTAGTTTCGTGGATGCCACA
PAR-2	forward	TGATTTACATGGCCAATCTG
	reverse	ACCCAATACCTCTGCACACT
IL-8	forward	ATGACTTCCAAGCTGGCCGT
	reverse	TCCTTGGCAAAACTGCACCT
IL-1β	forward	AGCTACGAATCTCCGACCAC
	reverse	CGTTATCCCATGTGTCGAAG
TNF-α	forward	ATGAGCACAGAAAGCATGATCCG
	reverse	GCAATGACTCCAAAGTAGACCTGCCC

면역조직화학

상기 아토피 피부염 피부 모델을 3D culture tissue(EpiDerm Full Thickness 400, MatTek)에 전용배지(EFT-400)에서 18시간 동안 안정화를 시킨 후, 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 조성물을 각각 0.1 % 농도로 30㎕ 도포하여 48시간 뒤에 10% 포르말린(formalin)으로 고정하였다. 이후, 파라핀으로 포매하여 5㎛로 박절한 조직을 이용하여 IHC 염색을 진행하여 염증에 대한 항염증 활성 효능을 평가하였으며, 그 결과를 도 7 및 도 8에 도시하였다.

도 3 내지 6에 도시한 바와 같이, CB060 화합물을 포함하는 본 발명의 항염용 조성물은 비교예 1의 조성물과 대비하여 RAR-2, IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 발현을 현저하게 억제할 수 있음을 확인하였다.

또한, 도 7 및 도 8에 도시한 바와 같이, 아토피 피부염이 유발된 피부모델에 본 발명에 따른 항염용 조성물을 처리함에 따라, control인 정상 피부모델에서와 유사한 수치의 IL-8, IL-1β 발현량을 구현할 수 있음을 확인하여, 아토피 피부염에 탁월한 효과를 보임을 확인하였다.

[실시예 2] 항염용 화장료 조성물의 제조

하기 표 2에 도시한 조성에 따라 안티인플라메이징 화장료 조성물을 제조하였다.

원료명	중량 %
스테아린산	1.5
CB060	0.06
세테아릴 알코올	3.5
소르비탄 스테아레이트	2
글리세릴 스테아레이트	1.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5
글리세린	5
잔탄검	0.2
소듐하이알루로네이트(1wt% sol)	3
아르기닌	0.1
1,3-프로판올	5
카보머	0.2
디메치콘	0.5
1,2-헥산디올, 카프릴글라이콜, 트로폴론	0.6
정제수	잔량
계	100

이상과 같이 본 발명에서는 특정된 사항들과 한정된 실시예에 의해 설명되었으나 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다.

따라서, 본 발명의 사상은 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등하거나 등가적 변형이 있는 모든 것들은 본 발명 사상의 범주에 속한다고 할 것이다.

Claims (10)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 PAR2 활성 억제용 유효성분으로 포함하는, 항염용 조성물.
   [화학식 1]
   

   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 항염용 조성물은 IL-6, IL-8, IL-17α, IL-1α, IL-1β 및 TNF-α로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 발현을 억제하는 것인, 항염용 조성물.
3. 제 1항에 있어서,
   상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 1 중량%로 포함되는, 항염용 조성물.
4. 제 1항에 있어서,
   에틸헥사나마이드 세린올을 더 포함하는, 항염용 조성물.
5. 제 4항에 있어서,
   상기 항염용 조성물 내 상기 화학식 1의 화합물과 에틸헥사나마이드 세린올의 중량비는 0.01:99.99 내지 99.99:0.01로 포함되는 것인, 항염용 조성물.
6. 제 1항에 있어서,
   상기 조성물은 항염용 화장료 조성물인, 항염용 조성물.
7. 제 6항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 에센스 또는 팩으로 제형화되는 것인, 항염용 조성물.
8. 제 1항에 있어서,
   상기 조성물은 항염용 약학 조성물인, 항염용 조성물.
9. 제 8항에 있어서,
   상기 항염용 약학 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제로 제형화되는 것인, 항염용 조성물.
10. 제 8항에 있어서,
    상기 항염용 약학 조성물은 아토피피부염, 건선, 접촉성피부염, 습진성 피부염, 광선 피부염, 지루 피부염, 포진성 피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 농피증, 천포창, 수포성 표피박리증, 전신성 경화증, 피부근염, 다발성근염, 염증성 근병변 및 세자리 증후군을 포함하는 염증성 피부 질환의 치료 및 예방을 위한 것인, 항염용 조성물.
    

Images