KR102236417B1

KR102236417B1 - 호랑가시나무 추출물을 포함하는 염증을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물 및 그 용도

Info

Publication number: KR102236417B1
Application number: KR1020190023533A
Authority: KR
Inventors: 윤석균; 김민지; 정수경; 강승현; 박명삼
Original assignee: 코스맥스 주식회사
Priority date: 2019-02-28
Filing date: 2019-02-28
Publication date: 2021-04-06
Anticipated expiration: 2039-02-28
Also published as: CN111616994A; KR20200104996A

Abstract

호랑가시나무 추출물을 포함하는 염증을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물 및 개체의 염증을 예방, 개선 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 호랑가시나무 추출물에 의하면, 피부 염증 또는 피부 자극 개선 효과가 우수하므로, 화장품, 식품, 약학 조성물 등 다양한 분양에 응용할 수 있다.

Description

호랑가시나무 추출물을 포함하는 염증을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물 및 그 용도{A composition for preventing or treating inflammation comprising an extract of Ilex cornuta and uses thereof}

호랑가시나무 추출물을 포함하는 염증을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물 및 개체의 염증을 예방, 개선 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하며, 이처럼 증가된 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인 등을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 해준다. 그러나, 이러한 작용은 인접해 있는 조직 세포와 비세포 성분들에 해로운 손상을 일으키기도 한다. 따라서, 적절한 조건 하에서는 염증 초기상태가 지난 후 정상 기능을 되찾게 되지만, 염증을 자극하는 자극제가 없어지지 않거나 계속해서 만들어질 경우에는 결과적으로 만성 염증이 일어나게 되어 더욱더 심각한 조직의 손상을 가져온다.

염증과 관계된 대표적인 피부 트러블의 형태로는 아토피와 여드름 등이 있으며, 아토피에 대해서 설명하면 다음과 같다. 아토피성 피부염 또는 아토피성 습진이라고 불리는 피부질환은 일반적으로 유아 및 소아에게 발생하는 만성 및 재발성 질환으로 심한 가려움(소양증, pruritus)과 피부습진 등 증상이 여러 가지 원인에 의해 악화, 완화, 재발 등의 악순환이 계속된다. 아토피 피부염의 임상적 증상들의 직접적인 원인은 알레르기 유발 물질에 대한 피부방어 및 보호기능이 약화되거나 피부 면역반응이 과민하게 발생하기 때문이다. 첫째 원인은 각질형성세포의 기능이상으로 피부의 각질층의 구조적 결함에 의해 수분유지기능과 피부장벽기능이 저하되고 정상피부에서는 침투가 어려운 세균 및 이물질이 피부에 침투하여 자극 및 알레르기 반응이 쉽게 일어나는 것이다. 둘째 원인은 피부 면역학적 과민반응으로, 아토피 피부염이 발생한 경우에 나타나는 여러 가지 면역학적 이상 현상은 면역글로브린(IgE)의 합성 증가, 다양한 항원들에 대한 면역글로브린의 증가, B 림프구와 단핵구의 IgE 수용체의 발현 증가, 비만세포/호염구에 의한 히스타민 분비 증가, 지연형 과민반응 증가, 호산구(eosinophil)의 증가, 제2형 보조 T 림프구(Th2 lymphocyte)에 의한 인터루킨 IL-4, IL-5, IL-13 의 분비 증가, 제1형 보조 T 림프구(Th1 lymphocyte)에 의한 인터페론 INF-γ 의 분비 감소 등이 있다. 그리고 면역학적 과민반응의 의해 나타나는 다양한 염증반응 사이토카인들 중 일부는 각질형성세포의 기능이상을 초래하는데, 이는 피부장벽의 기능이상이 염증반응을 유도하고, 유도된 염증반응이 다시 피부장벽 기능이상을 유도하는 순환과정에 의해 아토피 피부염이 악화되기도 한다. 한편, 항염 작용은 염증을 방어하는 기전으로, 염증은 조직에 해롭거나 해로울 가능성이 있는 요인들로부터 생체를 보호하는 국소적인 생리적 반응이다. 이러한 염증 현상이 과다하게 유발되면 염증성 세포 산물인 단백질 분해효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합조직의 손상은 피부탄력을 감소시켜 피부의 노화를 촉진시키므로 건강한 피부를 유지할 수 없게 된다.

한편, 호랑가시나무(Ilex cornuta)는 감탕나무과(Aquifoliaceae)에 속하는 쌍떡잎식물로, 높이는 4 ~ 5m까지 자란다. 잎은 두꺼운 타원상 육각형이며 모서리 끝이 가시모양이고 붉은 열매는 9 ~ 10월에 익는다. 한국의 변산반도 이남과 완도, 제주도에 자생한다. 한방에서는 잎과 열매를 약재로 이용한다. 잎은 거풍, 강장 등의 효능을, 열매는 강정 효능을 가지고 있으며 혈액 순환을 돕는다(「몸에 좋은 산야초」,2009. 11. 15., (주)넥서스). 그러나 호랑가시나무에 대한 피부 항염증 및 민감성 개선에 대한 효과는 보고된 바 없다.

일 양상은 호랑가시나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 또는 피부 자극을 예방, 개선 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물을 제공한다.

다른 양상은 호랑가시나무 추출물을 피부 염증 또는 피부 자극을 예방, 개선 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 피부 염증 또는 피부 자극을 예방, 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.

일 양상은 호랑가시나무(Ilex cornuta) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 또는 피부 자극의 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.

일 양상에 있어서, 따른 호랑가시나무 추출물은 자극, 피부 자극에 의해 발생한 염증성 사이토카인, 염증성 케모카인 및 TSLP(Thymic Stromal Lymphopoietin)의 발현을 억제하는 효과가 우수하기 때문에 피부 염증 또는 피부 자극의 예방, 개선 또는 완화에 유용하게 사용할 수 있다.

용어, "피부 염증 예방, 개선 또는 치료"는 "항염증"과 혼용될 수 있으며, 면역 반응이 완화되어 NO 생성, 염증성 사이토카인, 염증성 케모카인, 또는 TSLP 발현이 억제되는 작용을 의미할 수 있다.

상기 조성물은 항염증 효능으로 인한 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선, 또는 여드름의 예방, 개선 또는 치료 효과가 우수하다.

용어, "유효성분으로 포함"은 피부 염증 개선 및 자극 완화의 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 발명의 조성물에 호랑가시나무 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션 (formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.

용어, "개선"이란 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.

용어, "예방"이란 상기 호랑가시나무 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 피부 염증 또는 피부 자극 증상을 억제 또는 지연시켜 정상 대조군과 가까워지는 모든 행위를 말한다.

용어, "치료"란, 상기 호랑가시나무 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 상기 피부 염증 또는 피부 자극 증상이 정상 대조군과 같거나 비슷하게 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.

피부 염증 또는 피부 자극의 예방, 개선 활성을 갖는 호랑가시나무 추출물은 천연, 잡종, 변종 식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들어 뿌리, 줄기, 잎, 꽃, 열매의 몸통, 열매의 껍질뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하며 호랑가시나무의 잎에서 추출하는 것이 가장 바람직하다.

용어, "호랑가시나무"란, 감탕나무과(Aquifoliaceae)에 속하는 쌍떡잎식물로, 높이는 4 ~ 5m까지 자란다. 잎은 두꺼운 타원상 육각형이며 모서리 끝이 가시모양이고 붉은 열매는 9 ~ 10월에 익는다. 한국의 변산반도 이남과 완도, 제주도에 자생한다. 한방에서는 잎과 열매를 약재로 이용한다. 잎은 거풍, 강장 등의 효능을, 열매는 강정 효능을 가지고 있으며 혈액 순환을 돕는다다고 알려져 있다. 일 양상에 따른 호랑가시나무는 완도에서 재배된 호랑가시나무(Ilex x wandoensis)일 수 있다.

상기 호랑가시나무 추출물은 추출용매로 추출한 용매 추출물, 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획한 분획물 또는 상기 분획물에 크로마토그래피를 통하여 수득한 정제물일 수 있다.

상기 추출용매는 천연물 추출에 사용될 수 있는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합물, 예를 들면 물 또는 에탄올일 수 있다.

상기 호랑가시나무 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있다. 보다 구체적으로는, 상기 호랑가시나무 추출물의 제조는 불순물을 제거한 호랑가시나무의 건조물을 분쇄한 분쇄물에 추출용매를 가하고 추출하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 용매를 이용한 추출법은 냉침추출법, 온침추출법, 환류추출법 또는 초음파 분쇄 추출법일 수 있다. 상기 추출물은 호랑가시나무를 용매 중에서 인큐베이션하여 용매 중에서 활성 성분을 추출하는 것일 수 있다. 상기 인큐베이션은 4℃ 내지 환류 온도, 4℃ 내지 100℃, 4℃? 내지 80℃, 4℃? 내지 60℃, 4℃? 내지 50℃, 4℃? 내지 40℃, 4℃? 내지 35℃, 4℃? 내지 30℃, 4℃? 내지 25℃, 또는 실온에서 수행되는 것일 수 있다. 상기 인큐베이션은 활성 성분이 용매 중에 추출되는데 충분한 시간 동안 수행될 수 있다. 상기 시간은 1 시간 내지 2주일, 1 시간 내지 1주일, 1 시간 내지 5일, 1 시간 내지 3일, 12 시간 내지 5일, 12 시간 내지 3일, 12 시간 내지 2일, 24 시간 내지 5일, 또는 24 시간 내지 3일 일수 있다.

상기 조성물은 TSLP, 염증성 사이토카인, 염증성 케모카인의 발현을 감소시켜 염증 반응을 억제시키는 것일 수 있다.

상기 조성물은 자극에 의해 증가된 TSLP, 염증성 사이토카인, 염증성 케모카인의 발현을 감소시켜 피부 자극을 완화시키는 것일 수 있다.

일 구체예에 따른 조성물은 상기 추출물을 유효한 양, 또는 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 유효한 양은 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 추출물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

일 구체예에 따른 피부 염증 또는 피부 자극의 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 화장품학적으로, 식품적으로, 또는 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형 제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.

상기 조성물은 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 또는 피부외용제일 수 있다. 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다.

상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.

상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.

일 구체예에 따른 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 이 경우, 추출물은 화장수(스킨로션), 스킨소프너, 스킨 토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양 로션, 마사지크림, 영양 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크팩 또는 시트 또는 에어로졸 조성물을 포함하는 제형으로 제조될 수 있다.

또한 액상, 크림상, 페이스트상, 고체상 등 다양한 성상으로 적용 가능하다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 보존제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 5 중량%일 수 있다.

일 구체예에 따른 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 식품 조성물은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 환제, 캅셀제, 현탁액, 유제, 시럽제, 침제, 액제, 엑스제 등의 일반적인 제형으로 제조될 수도 있고, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 젤리, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등의 임의의 건강식품 형태로 제조될 수도 있다. 상기 건강식품의 제제화를 위해 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 사용할 수 있으며, 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다. 상기 첨가제로서 각종 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 이외에도 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 첨가제 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 5 중량%일 수 있다.

상기 식품 조성물 중의 상기 추출물의 함량은 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료로서 제조될 경우 100 mL를 기준으로 0.02 내지 10 g, 구체적으로 0.3 내지 1 g의 비율로 함유할 수 있다.

상기 음료는 상기 추출물 이외의 다른 성분을 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 음료에 사용되는 다양한 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 더 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 단당류(예: 포도당, 과당 등), 이당류(예: 말토즈, 수크로즈 등), 다당류(예: 덱스트린, 시클로덱스트린 등)와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 함유될 수 있다. 또한, 향미제로서 천연 향미제(예: 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예: 사카린, 아스파탐 등)를 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 음료 100 mL 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 구체적으로 약 5 내지 12g으로 함유될 수 있다.

일 구체예에 따른 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은 피부 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물일 수 있다. 상기 피부 질환은 피부 염증 질환, 피부 자극에 의한 질환일 수 있다.

상기 피부 염증 질환은 피부 자극, 면역 자극에 의해 유발되는 모든 질환을 의미할 수 있다. 예를 들어, 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선, 여드름 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 일 구체예에 따른 약학 조성물은 피부 수분 유지, 피부 수분 손실 방지, 피부 장벽 강화, 항염증 등의 효과에 의해 피부 염증 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.

상기 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 일 구체예에 따른 약학 조성물은 경피수분손실량 회복률을 증가시켜 피부 장벽 기능 손상을 예방 또는 치료할 수 있다.

상기 피부 노화는 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 상처 치유 능력의 저하, 피부 면역 기능의 저하 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 일 구체예에 따른 약학 조성물은 피부 장벽 강화, 피부 수분 유지, 피부 수분 손실 방지 등의 효과에 의해 피부 노화를 예방 또는 치료할 수 있다.

다른 양상은 상기 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부를 진정시키는 방법을 제공한다. 상기 조성물에 대해서는 상술한 바와 동일하다.

상기 방법은 구체적으로, 개체의 염증을 개선 또는 치료하는 방법, 개체의 피부 자극을 개선 또는 치료하는 방법일 수 있다.

용어, "투여하는", "도입하는" 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. 일 구체예에 따른 조성물의 추출물 또는 추출물 성분의 적어도 일부를 생존하는 개체 내에 서 원하는 위치로 전달하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.

투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.

상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 진정, 예를 들어 항염증, 아토피 피부염 치료를 필요로 하는 개체일 수 있다.

상기 투여는 호랑가시나무 추출물을 개체당 일당 0.1 mg 내지 1,000 mg, 예를 들면, 0.1 mg 내지 500 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 25 mg, 5mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 5 mg 내지 100 mg, 5 mg 내지 50 mg, 5 mg 내지 25 mg, 10mg 내지 1,000 mg, 10 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 100 mg, 10 mg 내지 50 mg, 또는 10 mg 내지 25 mg을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서 도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비 (예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.

일 양상에 따른 호랑가시나무 추출물에 의하면, 피부 염증 또는 피부 자극 개선 효과가 우수하므로, 화장품, 식품, 약학 조성물 등 다양한 분양에 응용할 수 있다.

도 1은 호랑가시나무 잎(a), 줄기(b), 뿌리(c) 에탄올 추출물 처리에 따른 인간 각질형성세포의 TSLP mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).
도 2는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 MDC mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).
도 3은 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 TARC mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).
도 4는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 TARC 단백질 발현 변화를 ELISA로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).
도 5는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 IL-6 mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).
도 6은 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 IL-8 mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 호랑가시나무 추출물 제조

본 실시예에서는 호랑가시나무(Ilex cornuta, Ilex x wandoensis)를 경동시장(서울, 한국)에서 구입하였다. 구입한 호랑가시나무의 잎, 줄기, 뿌리를 건조, 분말화하고, 각 분말 10 g 당 70%(v/v) 에탄올 100 ml을 가한 후 상온에서 1일 동안 정치하였다. 용액을 거름종이로 여과하여 얻어진 여과액(filtrate)을 40~60℃에서 감압 농축하여 추출물을 3.7g을 얻었다 (이하 '에탄올 추출물'이라 한다).

실험예 1: TSLP 저해능 평가

1.1. 인간피부 각질형성세포주 HaCaT 세포 배양

인간 각질형성세포 HaCaT를 한국세포주은행에서 분양받아 10% fetal bovine serum (FBS)과 항생제를 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 배양 용기는 75T-플라스크와 6 웰 플레이트를 사용하였으며 5% CO₂가 공급되는 37℃ 배양기에서 배양하였다. 배지는 3~4일마다 교환해 주며 세포가 과다하게 증식되었을 때는 계대배양 하였다. HaCaT를 5x10⁵/웰로 분주하고 배양한 24시간 후, 인산 완충 식염수 용액(PBS)로 세척하였다. 세척한 HaCaT를 각 웰에 FBS를 넣지 않은 DMEM 배지에 Poly I:C를 10 μg/ml, IL-4를 10 ng/ml로 첨가하고 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리의 에탄올 추출물을 최종 농도가 각각 0.1, 1, 10 ppm이 되도록 희석하여 각 웰에 첨가 후 배양하였다.

1.2. TSLP ( Thymic Stromal Lymphopoietin ) 발현 변화 측정

TSLP(thymic stromal lymphopoietin)은 아토피 피부염의 원인으로 파악되는 타입 2 헬퍼 T세포 매개성 면역 편향을 개시하는 최상위 싸이토카인으로 분류된다. Poly I:C/IL-4와 함께 4시간 동안 배양한 후 HaCaT 세포에서 cDNA를 합성하였고, 합성된 cDNA를 주형으로 하여 SYBR 그린(green) 마스터 혼합물(master mix)과 프라이머를 사용해 실시간 중합효소 연쇄반응 (real-time PCR)을 실시하여 TSLP의 유전자 발현 정도를 측정하였다. 양성 대조군으로 덱사메타손(Dex)을 -농도로 처리하였다. Ct(threshold cycle) 방법에 의한 내부 대조 유전자 β-액틴의 보정 정량화를 통한 상대적인 값으로 비교하였다.

본 발명의 실시예에서 사용된 프라이머 서열을 하기 표 1에 나타내었다.

유전자	서열
TSLP	정방향 5'- GCTATCTGGTGCCCAGGCTAT-3'	서열번호 1
TSLP	역방향 5'- CGACGCCACAATCCTTGTAAT-3'	서열번호 2
TARC	정방향 5'-CTTCTCTGCAGCACATCC-3'	서열번호 3
TARC	역방향 5'-AAGACCTCTCAAGGCTTTG-3'	서열번호 4
MDC	정방향 5'- GCATGGCTCGCCTACAGACT-3'	서열번호 5
MDC	역방향 5'- GCAGGGAGGGAGGCAGAGGA-3'	서열번호 6
IL-6	정방향 5'-TACCCCCAGGAGAAGATTCC-3'	서열번호 7
IL-6	역방향 5'-TTTTCTGCCAGTGCCTCTTT-3'	서열번호 8
IL-8	정방향 5'-CCAACACAGAAATTATTGTAAAGC-3'	서열번호 9
IL-8	역방향 5'-TGAATTCTCAGCCCTCTTCAA-3'	서열번호 10
β-actin	정방향 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3'	서열번호 11
β-actin	역방향 5'-GACACCTTCAACACCCCAGC-3'	서열번호 12

도 1은 호랑가시나무 잎(a), 줄기(b), 뿌리(c) 에탄올 추출물 처리에 따른 인간 각질형성세포의 TSLP mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).

(-): 음성대조군; (+): PolyI:C 및 IL-4 처리군; Dex: 양성대조군인 덱사메타손 처리군; 0.1: 호랑가시나무 추출물

도 1에 나타낸 바와 같이, poly I:C 및 IL-4를 처리하지 않은 HaCaT 세포(-)에 비하여 poly I:C 및 IL-4를 처리한 HaCaT 세포(+)에서 TSLP 발현이 매우 증가하였다. 호랑가시나무 추출물 처리에 의해 TSLP mRNA 발현이 농도 의존적으로 감소하였다. 특히 호랑가시나무 추출물 1 ppm 이상 처리에 의해 양성 대조군인 덱사메타손을 처리한 HaCaT 세포와 유사한 수준으로 TSLP 발현이 감소하는 것을 확인하였다.

실험예 2: 염증성 케모카인 저해능 평가

호랑가시나무 추출물의 염증성 케모카인 저해능을 평가하기 위해, 상기 실험예 1.1.과 동일한 방법으로 염증성 케모카인인 MDC(macrophage induced chemokine), TARC(thymus and activation regulated chemokine6)의 발현 변화를 측정하였다.TARC는 Chemokine (C-C motif) ligand 17 (CCL17)으로도 알려져있다.

도 2는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 MDC mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).

도 3은 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 TARC mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01, *: p<0.05).

도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, poly I:C 및 IL-4 처리에 의해 증가한 MDC, TARC의 mRNA 발현이 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리에 의해 유의적으로 감소한 것을 확인하였다.

(-): 음성대조군; (+): PolyI:C 및 IL-4 처리군; Dex: 양성대조군인 덱사메타손 처리군.

추가적으로, ELISA 키트를 사용하여 케모카인 발현 변화를 측정하였다. HaCaT (5x10⁵/웰) 세포를 FBS DMEM 배지에서 24시간 배양 후, FBS 없는 DMEM에 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물과 poly I:C 10 μg/ml 및 IL-4 10 ng/ml 을 동시에 처리하고, 72시간 동안 추가 배양하였다. 그 다음 각 웰의 상층액을 인간 CCL17/TARC ELISA 키트(R&D 사)를 사용하여 정량하였다.

도 4는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 TARC 단백질 발현 변화를 ELISA로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).

실험예 3: 염증성 사이토카인 저해능 평가

호랑가시나무 추출물의 염증성 사이토카인 저해능을 평가하기 위해, 상기 실험예 1.1.과 동일한 방법으로 염증성 사이토카인인 IL-6, IL-8의 발현 변화를 측정하였다.

도 5는 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 IL-6 mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).

도 6은 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리(10 ppm)에 따른 인간 각질형성세포의 IL-8 mRNA 발현 변화를 실시간 PCR로 측정한 결과를 나타내는 그래프이다 (-대조군에 대하여 ##: p<0.01; + 대조군에 대하여 **: p<0.01).

도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, poly I:C 및 IL-4 처리에 의해 증가한 IL-6, IL-8의 mRNA 발현이 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리 에탄올 추출물 처리에 의해 크게 감소한 것을 확인하였다. 특히 다른 부위에 비하여 호랑가시나무 잎의 에탄올 추출물 처리에 의해 IL-8의 mRNA 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인하였다.

따라서, 호랑가시나무 잎, 줄기, 뿌리의 에탄올 추출물은 TSLP, 염증성 케모카인, 염증성 사이토카인의 발현을 저해하는 효과를 나타내 염증 억제 효과, 자극 완화 효과가 우수하므로 아토피성 피부염, 간지러움증 등 염증에 의한 질환의 예방, 개선, 또는 치료 효과가 있다.

제형예 1: 크림제의 제조

호랑가시나무 추출물을 함유하는 크림제를 제조하기 위해의 표 2와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량%)
호랑가시나무 잎 추출물	1
글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트	2.0
폴리솔베이트60	0.5
소르비탄 스테아레이트	0.5
피토스쿠알란	5.0
호호바 오일	3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	10.0
알로에 버터	3.0
밀납	1.0
스테아릴 알코올	0.5
베헤릴 알코올	0.5
스테아린산	0.5
글리세린	7.0
부틸렌 글리콜	5.0
카르복시 비닐폴리머	0.2
아르기닌	0.3
디메치콘	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제형예 2: 로션제의 제조

호랑가시나무 추출물을 함유하는 로션제를 제조하기 위해의 표 3과 같은 조성성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량%)
호랑가시나무 잎 추출물	1
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	2.0
C14-22알코올/C12-20알킬글루코사이드	2.0
모노스테아린산글리세린	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	10.0
마이크로크리스탈린 왁스	5.0
카르복시 비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

<110> COSMAX, INC. <120> A composition for preventing or treating inflammation comprising an extract of Ilex cornuta and uses thereof <130> PN125582 <160> 12 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSLP forward primer <400> 1 gctatctggt gcccaggcta t 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSLP reverse primer <400> 2 cgacgccaca atccttgtaa t 21 <210> 3 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TARC forward primer <400> 3 cttctctgca gcacatcc 18 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TARC reverse primer <400> 4 aagacctctc aaggctttg 19 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MDC forward primer <400> 5 gcatggctcg cctacagact 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MDC reverse primer <400> 6 gcagggaggg aggcagagga 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 forward primer <400> 7 tacccccagg agaagattcc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 reverse primer <400> 8 ttttctgcca gtgcctcttt 20 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-8 forward primer <400> 9 ccaacacaga aattattgta aagc 24 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-8 reverse primer <400> 10 tgaattctca gccctcttca a 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta actin forward primer <400> 11 ggccatctct tgctcgaagt 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta actin reverse primer <400> 12 gacaccttca acaccccagc 20

Claims

호랑가시나무(Ilex cornuta) 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선 및 여드름으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 염증성 사이토카인, 염증성 케모카인 또는 TSLP(Thymic Stromal Lymphopoietin)의 발현을 억제하는 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 호랑가시나무 잎 추출물인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 C1-C6의 알콜, 물, 또는 이들의 혼합물의 추출물인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 에탄올 추출물인 것인 화장료 조성물.
호랑가시나무(Ilex cornuta) 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선 및 여드름으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 피부 염증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
호랑가시나무(Ilex cornuta) 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선 및 여드름으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 피부 염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
호랑가시나무(Ilex cornuta) 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염, 가려움증, 홍조, 홍반, 습진, 지루성 피부염, 건선 및 여드름으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 피부 염증의 예방 또는 개선용 피부외용제 조성물.
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