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KR102117810B1 - 재조합 개파보바이러스 2c 항원 단백질 및 이의 용도 - Google Patents

재조합 개파보바이러스 2c 항원 단백질 및 이의 용도 Download PDF

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KR102117810B1
KR102117810B1 KR1020180151127A KR20180151127A KR102117810B1 KR 102117810 B1 KR102117810 B1 KR 102117810B1 KR 1020180151127 A KR1020180151127 A KR 1020180151127A KR 20180151127 A KR20180151127 A KR 20180151127A KR 102117810 B1 KR102117810 B1 KR 102117810B1
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KR
South Korea
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canine
protein
recombinant
virus
canine parvovirus
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KR1020180151127A
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Inventor
송재영
우인옥
조수동
이용직
박세연
이주연
강병술
강재구
강석진
Original Assignee
대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)
주식회사 바이오앱
우진 비앤지 주식회사
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Abstract

본 발명은 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터, 상기 벡터에 의해 형질전환된 재조합 식물체, 상기 재조합 식물체에서 수득한 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 포함하는 개파보바이러스에 대한 백신 조성물 및 개파보바이러스 진단용 조성물을 제공한다. 본 발명의 재조합 식물체를 이용할 경우, 개파보바이러스 2c 항원 단백질을 신속하게 고효율로 생산할 수 있다. 본 발명의 개파보바이러스 진단용 조성물은 재조합 항원 단백질을 이용하기 때문에 살아있는 바이러스 취급에 따른 오염 가능성이 없어 안전하고, 대량의 시료로부터 신속하게 개파보바이러스 감염 여부를 진단할 수 있다.

Description

재조합 개파보바이러스 2c 항원 단백질 및 이의 용도{Recombinant Canine Parvovirus 2c Antigenic Protein and Uses Thereof}
본 발명은 재조합 개파보바이러스 2c 항원 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다.
개파보바이러스(Canine Parvovirus: CPV) 감염증은 1987년이래 전세계적으로 발생이 보고된 전염성 질병이며 우리나라에는 1980년대 경기도에서 최초로 유행된 것이 확인되었으며 그 후 전국적으로 발생되었다. 임상적으로나 병리학적으로 주로 3-8주 령의 어린 강아지에서 볼 수 있는 심장형과 이유 후의 개에서 볼 수 있는 장염형의 2가지로 크게 구분할 수 있다. 장염형은 심한 구토, 출혈성 설사, 탈수, 백혈구 감소증이 주요 증상이며 폐사율이 높다.
임상증상과 병리소견은 고양이 범백혈구 감소증(Feline Panleukopenia: FPL)과 유사하고 이에 대한 치료는 대중요법이 효과적으로 알려져 있다. 심장형에서는 좌심실을 중심으로 비화농성 심근염을 특징으로 하고, 일반적으로 급성으로 진행되어 폐사율이 높고 예후도 불량하다.
파보바이러스는 감염된 개의 설사분변을 통해 입으로 감염되며 급성형의 경우 감염 후 1-2주간 엄청난 양의 바이러스가 분변을 통해 배출되고, 배출된 바이러스는 보통의 생활환경에서 수개월간 생존하며 병원성이 유지된다.
CPV는 파보바이러스 개 미니트 바이러스(CMV 또는 CPV-1)과 구분하여 "CPV-2"로 기재한다. CPV-2는 일반적으로 고양이 범백혈구 감소증 바이러스(feline panleukopenia viru: FPV)나 밍크 장 바이러스(mink enteric virus: MEV)의 유전자 변이체인 것으로 생각되었으며, 밍크, 여우, 라쿤 및 그외 육식 동물을 감염시키는 파보바이러스와 유전자 및 항원 측면에서 매우 가까운 관계이다. 개파보바이러스 캡시드는 대안적인 mRNA 스플라이싱으로 인해 4개 이상의 단백질이 코딩되지만 단지 2개의 ORF(open reading frame)를 가진 약 5,200개의 염기로 구성된 단일 가닥의 DNA 게놈을 포함하고 있다.
파보바이러스의 캡시드는 2종의 바이러스 단백질(VP) VP1과 VP2로 구성되어 있으며, 이중 VP2가 주요 면역원성 파보바이러스 캡시드 단백질이다. 오리지날 개파보바이러스 분리물에 대한 유전자 변이체들이 동정되어 개파보바이러스 타입 2a로 명명되었고, 또 다른 변이체인 타입 2b가 명명되었고, 최근에는 2c가 동정되었다.
개파보바이러스 감염을 예방하기 위한 최선의 방법은 백신접종이다. 약독화된 개파보바이러스 백신은 면역을 오랫동안 지속시킬 수 있으며 유효하고 이상적이나 모체이행항체의 영향을 받아 백신의 효과가 반감될 수도 있어 주의하여야 한다.
현재 국내에서 주로 사용하는 개파보바이러스 백신은 조직순화 생독백신으로서 개 디스템퍼, 개 전염성간염, 파라인플루엔자 및 렙토스파이라 등과 5종 혼합 백신의 형태로 시판되고 있다.
본 발명자들은 항원 단백질로써 우수한 항원성 및 면역원성을 갖는 재조합 개파보바이러스 항원 단백질을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 개파보바이러스 2c VP2 유전자의 코돈(codon)을 최적화(optimization)하여 합성하고 이를 포함하는 재조합 발현 벡터에 의해 형질전환된 재조합 식물체로부터 수득한 개파보바이러스 2c VP2 항원 단백질이 높은 안정성 및 면역원성을 갖는다는 것을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질 발현 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 발현하는 형질전환 재조합 식물체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개파보바이러스 백신용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개파보바이러스 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개파보바이러스 진단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다.
본 발명자들은 항원 단백질로써 우수한 항원성 및 면역원성을 갖는 재조합 개파보바이러스 2c 항원 단백질을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 개파보바이러스 2c VP2 유전자의 코돈(codon)을 최적화(optimization)하여 합성하고 이를 포함하는 재조합 발현 벡터에 의해 형질 전환된 재조합 식물체로부터 수득한 개파보바이러스 2c VP2 항원 단백질이 높은 안정성 및 면역원성을 갖는다는 것을 규명하였다.
상기 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 것 또는 이와 기능적으로 동등한 염기서열을 가질 수 있다.
상기 "기능적으로 동등한"이란 염기의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 3으로 표시되는 염기서열에 의해 코딩된 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 코딩할 수 있는 염기서열을 의미한다. 예를 들어, 일부 염기서열이 결실(deletion), 치환(substitution) 또는 삽입(insertion)에 의해 변형되었지만, 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 핵산 분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체(variants)를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 상기 재조합 발현 벡터에 의해 형질전환된 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 발현하는 재조합 식물체를 제공한다.
상기 식물체는 니코티아나(Nicotiana) 속 식물일 수 있다.
상기 니코티아나(Nicotiana) 속 식물은 니코티아나 아쿠미나타(Nicotiana acuminata), 니코티아나 아프리카나(Nicotiana africana), 니코티아나 알라타(Nicotiana alata), 니코티아나 아테누아타(Nicotiana attenuata), 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana), 니코티아나 클레베란디(Nicotiana clevelandii), 니코티아나 이그지구아(Nicotiana exigua), 니코티아나 글라우카(Nicotiana glauca), 니코티아나 글루티노사(Nicotiana glutinosa L.), 니코티아나 랑스도르피(Nicotiana langsdorffii), 니코티아나 롱기플로라(Nicotiana longiflora), 니코티아나 옥시덴탈리스(Nicotiana occidentalis), 니코티아나 옵투시폴리아(Nicotiana obtusifolia), 니코티아나 오토포라(Nicotiana otophora), 니코티아나 플럼바기니폴리아(Nicotiana plumbaginifolia), 니코티아나 쿠아드리발비스(Nicotiana quadrivalvis), 니코티아나 루스티카(Nicotiana rustica L.), 니코티아나 수아베올렌스(Nicotiana suaveolens Lehm.), 니코티아나 실베스트리스(Nicotiana sylvestris), 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum L.) 또는 니코티아나 토멘토시포르미스(Nicotiana tomentosiformis Goodsp.)일 수 있고, 예를 들어, 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana) 일 수 있다.
본 발명에 따른 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터에 의해 형질전환된 재조합 식물체는, 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 발현할 수 있다.
본 발명에 따른 개파보바이러스 2c VP2 단백질은 개파보바이러스를 진단하는데 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 형질전환된 식물체에서 발현되는 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 포함하는 개파보바이러스 진단용 조성물 및 진단 키트를 제공한다.
본 발명에서 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 개파보바이러스의 발병 여부 또는 발병 가능성 여부를 확인하는 것이다.
상기 진단 키트는 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 이러한 진단 키트는 개파보바이러스 2c VP2 항원 단백질뿐만 아니라 면역학적 분석에 사용되는 당 분야에서 일반적으로 사용되는 도구, 시약 등이 포함된다. 이러한 도구/시약으로는 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나, 이로 제한되지 않는다. 표지 물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 적합한 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 가용성 담체, 예를 들어 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS, 불용성 담체, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 형질전환된 식물체에서 발현되는 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 항원으로 이용하여, 시료 내에서 항원-항체 반응을 통해 개파보바이러스 2c VP2 단백질에 대한 항체를 검출하는 것을 특징으로 하는, 개파보바이러스의 진단 방법을 제공한다.
상기 항원-항체 반응은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법을 모두 이용할 수 있으며, 예를 들어 조직면역염색, 방사능면역분석법(RIA), 효소면역분석법(ELISA), 웨스턴 블럿(Western Blotting), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산분석법(Immunodiffusion Assay), 보체고정분석법(Complement Fixation Assay), FACS(Fluorescence-activated cell sorter) 및 단백질칩(protein chip) 분석법으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 이용할 수 있다.
상기 시료는 개파보바이러스에 감염된 것으로 예상되거나 감염된 세포, 혈액, 소변, 타액, 조직 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된 식물체에서 발현되는, 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 포함하는, 개파보바이러스에 대한 백신 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 용어 '백신 조성물'은 대상(subject)의 면역 반응에 긍정적으로 영향을 주는 조성물을 의미한다. 상기 백신 조성물은 대상(subject)에게 세포성 면역 반응, 예를 들어 CTL(Cytotoxic T Lymphocyte) 또는 체액성 면역 반응, 예를 들어 항체에 의해 유발되는 향상된 전신적 또는 국소적 면역 반응을 제공한다.
상기 백신 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 백신 조성물은 기타 구성성분, 예컨대 안정화제, 부형제, 기타 약학적 허용 화합물 또는 임의의 기타 항원 또는 그의 일부를 포함할 수 있다. 백신은 냉동 건조된 제제 또는 현탁액의 형태로서 존재할 수 있으며, 이들은 모두 백신 생성 분야에 일반적인 것들이다.
본 발명인 백신 조성물의 투여 형태는 장용피 사용 단위체의 형태, 복강내, 근육내 또는 피하 투여용 접종, 에어로졸 분무, 경구 또는 비강내 용도일 수 있다. 음용수 또는 식용 펠렛으로 투여하는 것도 가능하다.
본 발명의 백신 조성물은 이종 항원 및 사이토카인과 같은 면역 조절 분자를 동일한 재조합체내에서 발현시켜 단일 백신으로 전달할 수도 있으며, 면역증강제와 함께 투여할 수 있다. 본 명세서의 용어, "면역증강제(adjuvant)"는 일반적으로 항원에 대한 체액 또는 세포 면역 반응을 증가시키는 임의의 물질(예컨대, alum, 프로인트 완전 어주번트, 프로인트 불완전 어주번트, LPS, poly IC, poly AU 등)을 의미한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터, 상기 벡터에 의해 형질전환된 재조합 식물체, 상기 재조합 식물체로부터 수득한 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 포함하는 개파보바이러스에 대한 백신 조성물 및 개파보바이러스 진단용 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명의 재조합 식물체를 이용할 경우, 개파보바이러스 2c 항원 단백질을 신속하게 고효율로 생산할 수 있다.
(c) 본 발명의 개파보바이러스 진단용 조성물은 재조합 항원 단백질을 이용하기 때문에 살아있는 바이러스 취급에 따른 오염 가능성이 없어 안전하고, 대량의 시료로부터 신속하게 개파보바이러스 감염 여부를 진단할 수 있다.
도 1은 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터 구조에 대한 모식도이다.
도 2는 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 웨스턴 블롯을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질의 닷 블롯팅 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질에 대한 혈구응집능을 측정한 결과이다.
도 5는 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질로 면역한 기니피그에서 HI titer를 측정한 결과이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예 1. 재조합 개파보바이러스 2c VP2 항원 식물 발현 벡터 제작
개파보바이러스 VP2 유전자는 개 분변 시료에서 얻어낸 개파보바이러스 2c VP2 DNA 서열을 사용했으며 Genescript 코돈 최적화(optimization) 프로그램을 통해 Nicotiana benthamiana에 맞게 최적화 하여 바이오니아에 의뢰하여 합성하였다. 최적화된 VP2의 뉴클리오티드 서열은 1753 bp로 구성된다.
개파보바이러스 2c VP2 항원의 식물 발현을 위해 pCAMBIA1300 벡터의 CaMV 35S 프로모터 유전자와 NOS 종결자(terminator) 사이에 루비스코(RuBisCO) 트렌짓 펩타이드(transit peptide)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 1), 6개의 연속된 히스티딘(Histidin)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 2) 및 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 3)를 순서대로 연결하여 재조합 개파보바이러스 2c VP2 식물 발현 벡터를 제작하였다(도 1).
실시예 2. 식물체에서 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질의 발현
식물에서 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 발현시키기 위해 상기의 실시예 1 에서 준비한 재조합 발현 벡터는 제조사의 지시에 따라 Gene plusure XCell(Bio-Rad, USA)을 사용하여 전기 천공을 통해 아그로박테리아 균주 GV3101로 형질전환되었다. 형질전환된 GV3101을 안정기(stationary phase)에 도달할 때까지 적절한 항생제를 함유하는 YEP 배지(효모 추출물 10 g, 펩톤 10 g, NaCl 5 g, 카나마이신 50 mg/L, 리팜피신 25 mg/L)에서 성장시켰다. 배양물을 원심 분리하고, 침전물을 침윤 배지(10 mM Mes, 10 mM MgCl2, 100 mM 아세토시린곤)에 0.5의 OD 600으로 재현탁시킨 후 1시간 동안 실온에서 배양하였다. 25℃ 조건 하에서 4-6 주령으로 자란 니코티아나 벤타미아나 잎에 아그로박테리아 현탁액을 주사기 또는 진공 침투시키는 방법으로 아그로-인필트레이션(Agro-infiltration)을 수행하였다.
실시예 3. 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질의 생산
약 3 cm2의 잎 조직을 100 μl의 분쇄 완충액(20 mM Tris-HCl [pH 7.5], 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 % Triton X-100, 0.1 % SDS, 5 mM DTT 및 식물 프로 테아제 억제제 칵테일 [Sigma-Aldrich])을 이용하여 분쇄하고, 불용성 잔해를 4℃에서 10분 동안 20,000 x g에서 원심분리하였다. 샘플을 12% SDS-PAGE 겔에서 분리하고, PVDF 멤브레인(Millipore Merck KGaA of Darmstadt, Germany)으로 옮겼다. 그 다음 단클론 His 항체(1:1,000 dilution, Invitrogen)와 반응시켜 Chemiluminescent Substrate로 검출하였다(도 2).
앞서 추출된 단백질 용액을 2배로 계단 희석하여 NC 멤브레인(Millipore Merck KGaA of Darmstadt, Germany)에 올린 후 진공상태로 옮겼다. 그 후 5% milk 용액으로 Blocking하고 단클론 His 항체(1:1,000 dilution, Invitrogen)와 반응시켜 DAB staning을 통해 확인하였다(도 3).
실시예 4. 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질의 면역원성 평가
4-1. 혈구응집반응(Hemagglutination assay, HA)
HA 시험은 0.6% 돼지 적혈구와 Sorensen 버퍼(pH 6.8)로 2배 계단 희석(serial two-fold dilution)하여 준비한 재조합 개파보바이러스 VP2 단백질을 이용하여 수행하였다. HA 역가는 혈구응집이 나타난 가장 희석된 단백질의 희석 배수로 표시하였다. HA 시험은 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 사용하여 수행하였다. 실험 결과 HA 역가는 211 HA unit으로 나타났다(도 4).
4-2. 면역원성 평가
개 파보바이러스 특이적 항체가 없는 3마리의 건강한 암컷 기니피그를 한 그룹으로 나누고, 어쥬번트 A와 혼합한 개파보바이러스 2c VP2, 개파보바이러스 불활성화 백신 및 PBS로 각각 면역시켰다. 재조합 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 기니피그에 면역원 100 μl(적절한 HA 역가 1:28)를 근육 내 주사하고 2주 간격으로 2회 부스팅하였다. 1차 면역 반응 후 28일째에 혈액 샘플을 채취하여 37℃에서 2시간 동안 응고시키고 혈청을 채취하여 56℃에서 30분 동안 불활성화시켰다. HI는 개파보바이러스 특이적 항체를 분석하는 데 사용되었다. 25% Kaolin 용액과 1:1 비율로 섞고 1시간 동안 교반하고 50% 돼지 혈구용액과 1:1 비율로 섞고 1시간 동안 교반한 후 혈청을 분리하여 비 특이 항체를 제거 하였다. 혈청을 2배로 계단식 희석하고 Back titeration을 마친 8HA unit의 니코티아나 벤타미아나에서 발현된 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 1:1로 희석 후 4℃에서 1시간 동안 반응 하였다. 이후 0.6% 돼지혈구를 1:1로 희석하여 4℃에서 2시간 동안 반응 하여 측정하였다.
그 결과, 양성대조군의 개파보바이러스 불활성화 백신 접종은 28의 항체가를 확인하였고, 식물에서 발현된 개파보바이러스 2c 재조합 VP2 단백질를 접종한 기니피그 두 마리에서는 27의 HI titer를 확인 할 수 있었으며, 나머지 한 마리에서는 29의 HI titer를 확인할 수 있었다(도 5).
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Claims (8)

  1. 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 루비스코 트렌짓 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 6개의 연속된 히스티딘을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 코딩하는 유전자를 일련의 순서로 포함하는 재조합 발현 벡터.
  2. 제 1 항의 재조합 발현 벡터에 의해 형질전환된 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 발현하는 재조합 니코티아나 벤타미아나.
  3. 제 2 항의 재조합 니코티아나 벤타미아나가 발현하는, 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 포함하는, 개파보바이러스 백신용 조성물.
  4. 제 2 항의 재조합 니코티아나 벤타미아나가 발현하는, 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 포함하는, 개파보바이러스 진단용 조성물.
  5. 제 2 항의 재조합 니코티아나 벤타미아나가 발현하는, 개파보바이러스(canine parvovirus) 2c VP2 단백질을 포함하는, 개파보바이러스 진단용 키트.
  6. 제 2 항의 재조합 니코티아나 벤타미아나가 발현하는, 개파보바이러스 2c VP2 단백질을 항원으로 이용하여, 시료 내에서 항원-항체 반응을 통해 개파보바이러스의 VP2 항체를 검출하는 개파보바이러스 진단 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 항원-항체 반응은 조직면역염색, 방사능면역분석법(RIA), 효소면역분석법(ELISA), 웨스턴 블럿(Western Blotting), 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산 분석법(Immunodiffusion Assay), 보체고정 분석법(Complement Fixation Assay), FACS(Fluorescence-activated cell sorter) 및 단백질 칩(protein chip) 분석법으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 이용하여 수행하는 것인, 개파보바이러스 진단 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 시료는 세포, 혈액, 소변, 타액 및 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인, 개파보바이러스 진단 방법.
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