KR102017002B1

KR102017002B1 - 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물

Info

Publication number: KR102017002B1
Application number: KR1020180007231A
Authority: KR
Inventors: 김태완; 박년호; 조국영; 설두진; 권순재; 권승혁; 김유정; 이혜민
Original assignee: 안동대학교 산학협력단; 주식회사 아이썸; 농업회사법인 주식회사 생생초; 주식회사 아리바이오
Priority date: 2018-01-19
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2019-09-02
Anticipated expiration: 2038-01-19
Also published as: KR20190088758A

Abstract

본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물에 관한 것으로, 금강송 간벌 부산물의 추출물은 송엽 및 송절에 비해 T-세포 활성에 의한 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 발현을 현저히 감소시키고, 히스타민의 발현을 억제하는 효과가 우수하므로, 본 발명의 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 아토피 피부염용 화장품 또는 아토피 피부염의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물{Anti-atopic composition comprising extract of Geomgangsong thinning by-product as effective component}

본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물에 관한 것이다.

아토피 피부염(atopic dermatitis)은 유전적, 환경적, 면역학적인 원인에 의해 발생하고, 피부 가장 바깥에서 보호벽 역할을 하는 각질층에 이상이 생긴 것으로 건조한 기후에서 더욱 심해지는 알레르기 질환이다. 아토피 피부염은 전 세계적으로 약 10~20%의 유병률을 보이며, 생후 1개월에서 1년 사이의 유아에게서 주로 발병하고 3세가 되면 어느 정도 완화되나 생활환경, 개인차 등에 의해 다시 재발할 수 있다.

아토피 피부염의 주요 증상은 심한 가려움증, 피부건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘) 등으로 주로 만성 피부염증이 동반된다. 긁고 싶은 감정을 불러일으키는 가려움증은 히스타민(histamine)과 같은 가려움 매개 물질에 의해서 유도되는데, 정상인의 경우 긁으면 그 증상이 쉽게 완화되지만, 아토피 환자의 경우 긁으면 긁을수록 더욱 긁고 싶은 감정이 형성되어 더욱 더 심하게 긁게 된다. 아토피 환자의 이러한 긁는 행동으로 인해서 피부장벽이 붕괴되고 2차 감염을 유발하여 염증이 더욱 악화된다. 아토피 피부염은 일시적으로 완화될 수 있지만, 환경 및 식품 등의 자극원에 의해서 재발되어 악화될 수 있으며, 악화와 완화가 반복된다.

이러한 아토피 피부염의 원인은 잘 알려져 있지 않으나 주로 유전적인 요소가 많고 면역 반응과 관련되어 있는 것으로 밝혀져 있으며, 그 외에 건조한 피부, 정상인에 비해 쉽게 피부 가려움증을 느끼는 특성, 세균, 바이러스 및 곰팡이 등에 의한 감염, 정서적 요인 및 환경적 요인 등이 서로 복합적으로 작용하여 일어나는 것으로 보인다. 아토피 피부염에 동반되는 염증은 과도한 면역세포 작용으로 인해 종양괴사인자-알파(TNF-α, tumor necrosis factor-α)와 인터루킨-1(IL-1, interleukin-l) 등의 염증성 사이토카인과 하이드록시 라디칼(·OH), 슈퍼옥사이드 라디칼(·O₂-), 과산화수소(H₂O₂) 등과 같은 활성산소종(ROS, reactive oxygen species)을 대량생산하기 때문에 주변 조직의 손상을 야기한다.

또한, 비만세포(mast cell)는 아토피 피부염을 비롯한 대부분의 알레르기성 질환에서 급성 및 만성 염증 질환을 일으키는 핵심 세포로 알려져 있다. 비만세포가 활성화되면, TNF-α, IL-1과 IL-6 등 염증성 사이토카인(inflammatory cytokines)의 생성뿐만 아니라 히스타민과 같은 가려움 유발물질(pruritogen)을 방출한다. 이와 같이 비만세포 유래 염증성 사이토카인은 염증반응을 더욱 촉진시키는 동시에 히스타민과 같은 가려움 유발물질의 분비를 더욱 촉진시켜 피부장벽을 붕괴시키는 원인이 된다. 따라서 부작용 없이 염증성 사이토카인과 가려움 매개물질을 억제시킬 수 있는 물질을 발굴한다면, 아토피 피부염을 비롯한 각종 알레르기성 질환을 제어하는데 효과적일 것이다.

아토피성 피부염에 대한 처방은 스테로이드제, 항히스타민제, 항생제 등과 같은 약물요법이 주로 이루어지고 있다. 스테로이드제(부신피질호르몬제)는 크게 소염작용과 면역억제 작용이 있고 효과가 우수하지만, 장기간 바르면 피부약화, 전신 호르몬증상, 중독성 등의 부작용이 나타날 수 있다. 최근 연구중인 아토피성 피부염의 치료 방향은 면역억제제를 사용하는 것과 새로운 항히스타민제를 사용하는 것이다. 그러나 항히스타민제만으로는 알레르기 반응을 완벽하게 차단하지는 못한다. 이는 알레르기 반응을 야기하는 화학전달물질이 히스타민만은 아니기 때문이다. 따라서 아토피성 피부염에 효과가 있으면서도 부작용이 없는 새로운 아토피성 피부염 치료를 위한 조성물 개발이 요구되고 있다.

한편, 금강송(Pinus desiflora for. erecta)의 서식 분포지역은 금강산 줄기의 계곡과 산복에서 태백산맥을 따라 경북 북부의 울진, 봉화군 일대와 강원 남부의 강릉, 삼척 등지에 넓게 분포하였으나, 벌목과 화전으로 크게 훼손돼 오늘날은 울진 소광리 일대에 국내 최대의 군락지가 형성되어 있다. 소나무는 한국, 일본, 만주 등에 자생하고 있고, 예로부터 잎, 솔방울, 꽃가루, 송진, 껍질 등 모든 부위가 구황식물로 이용되었다. 특히, 쉽게 채취할 수 있는 솔잎은 민간요법 등에 이용되어 고혈압, 당뇨병, 피부질환, 신경통 등의 성인병 치료와 불로장수를 위한 건강식품으로 이용되어 왔다.

현재 울진에 자생하는 금강송은 울진 지역의 관광지 조성과 육림 및 관리를 위해 지속적으로 이루어지는 간벌작업으로 인해 무한한 양의 간벌 부산물이 생산되고 있으며, 부산물은 대부분 퇴비나 톱밥제조 등에 사용되고 있다. 현재 송엽의 기능성에 대한 보고는 많이 있지만, 간벌 부산물인 송엽과 송절의 혼합물의 기능성에 대한 연구는 활발히 이루어지지 않아 기능성에 대한 과학적인 검증 연구가 요구된다. 불용자원으로서 경제성이 우수한 간벌 부산물의 기능성 연구를 통해 기능성 식품 및 고부가가치 상품을 개발함으로써 새로운 소득원으로 이용 가능하다.

한편, 한국공개특허 제2017-0045085호에는 소나무 껍질 추출물을 포함하는 피부 개선용 조성물 및 그의 용도가 개시되어 있지만 본 발명의 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물에 대해 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피용 조성물을 제공하고, 송엽과 송절의 혼합 추출물인 금강송 간벌 부산물의 추출물이 송엽 및 송절 추출물 단독에 비해 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 저해하는 효과가 현저하여 시너지 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물에 관한 것으로, 금강송 간벌 부산물의 추출물은 T-세포 활성에 의한 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 분비, 히스타민 분비, IL-4 및 TNF-α의 분비를 억제하는 효과가 있으므로, 본 발명의 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 아토피 피부염용 화장품 또는 아토피 치료제로 사용할 수 있다.

도 1은 금강송 간벌 부산물, 송엽 및 송절의 세포독성을 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이다.
도 2는 금강송 간벌 부산물, 송엽 및 송절의 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 생성 저해능을 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 사용하여 베타-헥소사미니다아제 생성을 유도하였다.
도 3은 금강송 간벌 부산물에 의한 히스타민 분비의 저해효과를 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 사용하여 히스타민 분비를 촉진시켰다.
도 4는 금강송 간벌 부산물에 의한 염증성 사이토카인(IL-4 및 TNF-α)의 분비 억제효과를 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 사용하여 염증성 사이토카인의 발현을 유도하였다.

본 발명은 금강송 간벌 부산물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

상기 금강송 간벌 부산물은 송엽(금강송의 잎) 및 송절(금강송의 가지와 줄기)의 혼합물로 이루어진 것이며, 바람직하게는 송엽과 송절을 1~3:0.5~2의 중량비로 혼합하는 것이며, 더욱더 바람직하게는 송엽과 송절을 2:1의 중량비로 혼합하는 것이지만, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 바람직한 일 구현 예에서, 상기 조성물 중의 금강송 간벌 부산물의 추출물의 농도는 100㎍/㎖ 이상, 바람직하게는 150~250㎍/㎖, 더욱 바람직하게는 200㎍/㎖일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 바람직한 일 구현 예에서, 상기 금강송 간벌 부산물의 추출물은 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출하는 것이며, 보다 바람직하게는 알코올을 용매로 사용하여 추출하는 것이지만, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건강기능식품 조성물은 아토피 피부염을 예방하거나 개선하기 위해 섭취할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않는다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 그러나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 안전성 면에서 아무런 문제가 없는 범위의 양으로 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨 로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 조합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제제, 외용제, 좌제 및 주사제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 금강송 간벌 부산물의 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 금강송 간벌 부산물의 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이 외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

제조예 1. 금강송 간벌 부산물의 추출물의 제조

금강송 간벌 부산물은 2015년 가을에 채취한 송엽 및 송절을 2:1의 중량비로 혼합하여 사용하였다. 채취된 간벌 부산물은 세척과 건조 후 분쇄하였다. 이후, 시료 1 중량부 당 10 중량부의 70%(v/v) 에탄올을 첨가하여 실온에서 10시간 동안 교반 추출하였다. 교반 추출 후 상등액과 침전물은 Whatman No.1 여과지로 분리하여 농축 및 동결건조 후 냉장실에 보관하면서 실험의 시료로 사용하였다. 금강송의 송엽 또는 송절 추출물도 금강송 간벌 부산물의 추출물과 동일한 방법을 이용하여 추출하였다.

실시예 1. 세포생존율 확인

ATCC(American Type Culture Collection)에서 분양받은 RBL-2H3(Rat Basophil Leukemia) 세포는 DMEM 배지에서 배양하였다. 실험에 사용될 농도 범위를 결정하기 위해 제조예 1의 금강송 간벌 부산물, 송엽 및 송절 추출물을 농도별로 처리하여 Mosmann(1983)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltet razolium bromide) 분석을 실시하였다.

RBL-2H3 세포를 96 웰 플레이트에 100㎕의 DMEM 배지와 함께 하루 동안 배양한 다음, 다양한 농도(50, 100 및 200㎍/㎖)의 제조예 1의 시료를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 각 웰에 5㎎/㎖ 농도의 MTT 용액을 10㎕씩 넣은 후 3시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도하였으며, 100㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 보라색의 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해하였다. 발색 정도는 분광광도계를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였으며, 세포독성은 세포만 배양한 무처리군의 생존율 100%를 기준으로 시료 처리군의 상대적인 세포 생존율을 계산하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 금강송 간벌 부산물, 송엽 및 송절은 200㎍/㎖까지 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다.

실시예 2. 금강송 간벌 부산물의 베타- 헥소사미니다아제 (β- hexosaminidase )발현 저해능 확인

RBL-2H3 세포를 24 웰 플레이트에 웰 당 3×10⁵개의 세포를 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 베타-헥소사미니다아제 생성을 유도하기 위해 PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 처리하였으며, 제조예 1의 시료를 각각의 농도별(50, 100 및 200㎍/㎖)로 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후 얼음에서 10분 동안 반응정지하고, 그 후 1mM 4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide(0.05M citrate buffer, pH 4.5) 기질과 1시간 반응 후 정지시약(0.1M Carbonate buffer)을 넣고 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 금강송 간벌 부산물 200㎍/㎖ 처리시 송엽과 송절을 각각 처리하는 것에 비해 베타-헥소사미니다아제의 분비가 더욱 감소하여 금강송의 송엽과 송절 단독에 비해 금강송 간벌 부산물은 아토피 치료에 시너지 효과를 가진다는 것을 알 수 있었다.

실시예 3. 금강송 간벌 부산물의 히스타민 저해효과 확인

탈과립에 의해 분비되는 히스타민에 대한 금강송 간벌 부산물 추출물의 효과를 확인하기 위해 RBL-2H3 세포를 24 웰 플레이트에 웰 당 3×10⁵개의 세포를 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 그 후 PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 처리하였으며, 제조예 1의 시료를 각각의 농도별(50, 100 및 200㎍/㎖)로 함께 처리하여 1시간 동안 배양하면서 히스타민을 유리시켰다. 반응종결을 위해 얼음에서 10분 동안 정치하였으며, 배양이 끝난 상층액을 이용하여 히스타민 농도를 히스타민 측정 키트(Histamine ELISA kit, abcam)를 사용하여 측정하였다.

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 PA에 의해 증가되었던 세포 외로 방출된 히스타민의 농도가 금강송 간벌 부산물을 처리하였을 경우 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 4. 금강송 간벌 부산물의 염증성 사이토카인 분비억제 확인

비만세포에서 분비되는 IL-4 및 TNF-α의 농도를 측정하기 위해 RBL-2H3 세포를 24 웰 플레이트에 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 그 후 PA(PHORBOL 12-MYRISTATE 13-ACETATE(PMA) 100pg/㎖ 및 Calcium Ionophore A23187 1μM)를 처리하였으며, 제조예 1의 시료를 각각의 농도별(50, 100 및 200㎍/㎖)로 함께 처리하여 1시간 동안 배양하면서 IL-4 및 TNF-α의 발현을 유도하였다. 반응종결을 위해 얼음에서 10분 동안 정치하였으며, 배양이 끝난 상층액을 원심분리(1200rpm, 5분)한 후, IL-4 및 TNF-α 키트(ELISA kit, R&D)를 이용하여 함량을 측정하였다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 금강송 간벌 부산물의 추출물을 처리하였을 경우 IL-4 및 TNF-α의 분비가 저해되는 것을 확인하였고, 특히 금강송 간벌 부산물의 추출물을 200㎍/㎖ 농도로 처리하였을 때 분비 저해효과가 우수함을 확인하였다.

Claims

1~3:0.5~2의 중량비로 혼합된 금강송 송엽 및 송절 혼합물의 추출물 200㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.

삭제

제1항에 있어서, 상기 추출물은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 및 히스타민의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.

1~3:0.5~2의 중량비로 혼합된 금강송 송엽 및 송절 혼합물의 추출물 200㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

1~3:0.5~2의 중량비로 혼합된 금강송 송엽 및 송절 혼합물의 추출물 200㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.