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KR101716136B1 - 식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법 - Google Patents

식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법 Download PDF

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KR101716136B1
KR101716136B1 KR1020150086337A KR20150086337A KR101716136B1 KR 101716136 B1 KR101716136 B1 KR 101716136B1 KR 1020150086337 A KR1020150086337 A KR 1020150086337A KR 20150086337 A KR20150086337 A KR 20150086337A KR 101716136 B1 KR101716136 B1 KR 101716136B1
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김시욱
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Abstract

본 발명은 항진균성 활성을 가지는 황토유래 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) EML-BC32-1에 관한 것으로, EML-BC32-1을 이용한 항진균성 활성물질 정제 및 생산방법을 통해 다양한 식물병 방제제를 얻을 수 있어, 작물의 상품성 및 생산성을 증대시키는데 이용할 수 있을 것으로 기대된다.

Description

식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법{Method of purification and production of bioactive compound for biocontrol of plant diseases from Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum EML-BC32-1}
본 발명은 황토에서 분리한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1 균주를 이용한 식물병 곰팡이 방제에 관한 것으로, 구체적으로는 식물병 곰팡이 방제 활성이 있는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 활성물질 정제 및 이의 생산방법에 관한 것이다.
세계적으로 시들음병 (wilt), 탄저병, 잘록병 (damping-off) 등의 식물 병원성 질병은 여러 작물에 심각한 피해를 입히는 질병으로 이러한 식물병을 방제를 위해 미생물이 생산하는 생물학적 활성물질을 이용하는 연구가 활발히 진행되고 있다. 미생물은 서식하는 환경에 따라 특정한 물질을 생산할 수 있는데, 특히 척박한 환경에서 서식하는 미생물이 특정 물질을 생산할 가능성이 더 높다.
우리나라의 약 30%를 차지하는 황토는 일반 토양에 비해 척박한 환경으로 미생물이 개체수가 일반 토양에 비하여 적게 발견된다. 개체수는 적으나 황토에서 서식하는 미생물은 척박한 환경에서 적응하여 살아가고 있어, 일반 토양에서 서식하는 미생물과 구분되는 특정 물질을 생산할 가능성이 높다. 따라서, 황토 유래의 유용한 미생물을 발견하여 이들의 생물학적 활성물질 생산을 통한 생물자원 확보의 연구가 필요하다.
대한민국 등록특허 제1181756호에서는 항진균 활성 및 유기물 분해능을 가지는 바실러스균 (Bacillus sp.) 및 이들을 이용하는 항진균성 미생물 수화제에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 등록특허 제0132218호에서는 신규 바실러스속 (Bacillus sp.) 및 이들로부터 생산한 신규 항진균성 항생물질을 개시는 등 미생물을 이용한 생물학적 방제제에 대한 발명이 지속적으로 이루어지고 있다. 그러나, 특정 환경 특히 척박한 조건에서 분리한 미생물에 대한 것은 거의 없는 실정이다.
본 발명은 국내 황토 서식 미생물들을 연구하고 그 과정에서 식물병 방제에 이용할 가능한 것으로 기대되는 바실러스 (Bacilus) 속 (genus)에 속하는 박테리아에 관한 것이다. 황토에서 분리된 바실러스 속 박테리아는 식물병원성 균주에 항진균 활성을 나타내었고, 이를 통해 작물의 식물병 예방에 적합한 친환경적이고 고부가가치가 있는 생물학적 방제제의 개발 가능성을 제시할 수 있다.
한국등록특허 제0132218호 한국등록특허 제1181756호
본 발명은 식물병 방제를 위한 항진균성을 나타내는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) EML-BC32-1(수탁번호: KCTC12729BP)의 생물학적 활성물질 및 이의 생산방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 항진균성을 나타내는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1 및 이의 배양액을 포함하는 식물병 방제용 항진균성 방제제를 제공한다.
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성물질의 정제 및 생산방법을 제공한다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1 또는 이의 배양액은 항진균성 효과를 나타내고, 이는 다양한 식물병 방제 및 병원성 진균에 효과적인 항진균성 작용을 할 수 있는 활성물질을 포함한 조성물의 생산을 통해 작물의 상품성 및 생산성을 효과적으로 증대시킬 수 있다.
도 1은 분리한 미생물이 gyrase A (gyr A) 유전자 염기서열 분석을 통해 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼임을 나타낸다.
도 2은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성을 나타낸다.
도 3은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 형태(morphology)를 나타낸다.
도 4은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 후사륨 (Fusarium oxysporum f. sp. radicis - lycopersici (KACC 40031))에 대해 (A)는 30 ℃, (B)는 37 ℃에서 항진균성 활성을 나타내며, 각 한천평판(agar plate)에서 왼쪽은 EML-BC32-1 상등액, 오른쪽은 TSB 대조군이다.
도 5은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1 배양액을 HP-20 수지에서 80% 에탄올로 용리시켜 분획한 배양액의 균사 생장 저해 정도를 나타내고, (A)는 후사륨 (Fusarium oxysporum f. sp. radicis - lycopersici (KACC 40031))에 대한 저해 정도이고 (B)는 잿빛곰팡이병 (Botrytis cinerea (KACC 40574))에 대한 저해 정도이고 (C)는 탄저병 (Colletotrichum gloeosporioides (KACC 40003))에 대한 저해 정도를 나타낸 것이며, 이는 8 ㎜ 페이퍼 디스크(paper disc에)를 사용하여 80% 에탄올로 용리 분획 한 EML-BC32-1 배양액의 활성도이다.
도 6은 항진균성 활성물질 분석에서 역상-HPLC 결과를 나타낸다.
도 7은 항진균성 활성물질 분석에서 (A)는 UV 결과, (B)는 FT-IR 결과를 나타낸다.
도 8은 항진균성 활성물질인 수펙틴, 펜기신 및 이투린의 후사륨 (Fusarium oxysporum f. sp. radicis - lycopersici (KACC 40031))에서 균사 생장 저해 정도를 나타낸다.
도 9는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼의 gyr A 유전자 염기서열을 나타낸다.
이하 본 발명에 대하여 구체적으로 상세히 설명하고자 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 기술자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 황토에서 유래되고, 항진균성을 나타내어 식물병 방제에 이용할 수 있는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) EML-BC32-1에 관한 발명이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위해 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1은 한국생명공학연구원 유전자원센터 (KCTC)에 2014년 12월 5일자로 기탁하였다 (수탁번호: KCTC 12729BP).
본 발명의 EML-BC32-1 균주는 동정결과 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼과에 속하는 균주에 해당한다.
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1는 항진균성을 가지는 균주로서 황토로부터 유래되었으며, 박테리아와 균류의 성장을 억제하며, 특히 식물병 방제에 효과적이다. 식물병 방제 효과는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1이 생산하는 다양한 항진균성 물질에 의해 식물 병원균의 생장을 억제하여 달성될 수 있다.
바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1이 생산하는 항진균성 물질은 다양한 형태의 지질펩티드 (lipopeptide)에 해당하는 것으로서 구체적으로 환상형 지질펩티드인(cyclic lipopeptide) 이투린형 (iturin-type), 펜기신형 (fengycin-type) 및 수펙틴형 (surfactin-type)에서 선택되는 1종 이상의 지질펩티드이다. 이투린형은 이투린 A, C, L, N, O 등 아미노산에 따라 구분되는 이투린 펩티드와 인투린에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 인투린을 포함하는 것을 의미하고, 펜기신형은 아미노산에 따라 구분되는 펜기신 펩티드와 펜기신에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 펜기신을 포함하는 것을 의미하며, 수펙틴은 아미노산에 따라 구분되는 수펙틴 펩티드와 펜기신에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 수펙틴을 포함하는 것을 의미한다. 상기 항진균성 물질은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1로부터 RP-HPLC 및 LC/MS를 통해 분획 및 정제할 수 있으며(도 6 및 도 7), 분자량 14 내지 28 Da에 포함되는 다양한 동종 분자가 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가지고 있다.
바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1가 생산하는 항진균성 물질 중에서 펜기신형의 지질펩티드가 뛰어난 항진균성 활성을 가지고 이투린형의 지질펩티드인 이투린도 일반적으로 펜기신처럼 항진균성 활성을 가진다. 반면에, 수펙틴형 지질펩티드는 항진균성 활성보다는 생물적 계면활성 (biosurfactant)을 가진다. 상기 수펙틴형은 실질적으로는 항진균 활성적 측면에서 다른 지질펩티드보다 효과가 덜 할 수 있으나, 항진균성 활성을 가지는 다른 지질펩티드와 함께 작용하는 경우 더욱 상승된 항진균성 효과를 나타낸다. 구체적으로, 상기 지질펩티드 중에서 펜기신형의 항진균성 활성이 가장 뛰어나며, 펜기신형에서 이투린 또는 수펙틴이 함께 작용할 때 항진균성 효과가 상승한다. 특히, 수펙틴이 이투린과 함께 작용할 때 항진균성 효과가 더욱 상승한다. 또한, 수펙틴은 다른 세균 및 균류의 생체막 형성의 억제에 중요한 작용기 때문에 균주 생장 억제에 의한 항진균성 활성의 상승효과를 기대할 수 있다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1은 식물병 중에서 시들음병, 균핵병, 탄저병 및 잿빛곰팡이병에 특히 효과적이나, 이들 식물병에 외에 다른 식물병 방제에도 이용될 수 있다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 병원균 중에서 후사륨 옥시스포럼 (Fusarium oxysporum), 스클레로티니아 스크레로티오럼 (Sclerotinia sclerotiorum), 콜레토트리쿰 (Colletotrichum gloeosporioides) 및 보트리티스 씨네리아 (Botrytis cinerea)에 특히 효과적이나, 다른 병원균의 생장 억제 및 이들로 인한 식물병의 예방에도 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 식물병 방제는, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1가 생산하는 항진균성 활성물질을 이용하는 것으로서 식물병 방제를 위하여 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1 자체를 이용할 수 있고, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1를 배양한 배양액을 유효성분으로 포함하는 방제제를 이용할 수도 있다. 상기 배양액에 포함되는 유효성분은 이투린형, 펜기신형 및 수펙틴형에서 선택되는 1 종 이상의 지질펩티드이다.
바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성물질을 포함하는 배양액은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1를 배양하여 배양 상등액을 수득하고, 상기 배양 상등액을 에탄올로 용리하는 단계를 포함하는 방법으로 수득할 수 있다. 이 때, 상기 에탄올은 60 초과 90%(v/v)미만, 70 내지 90%(v/v) 바람직하게는 75 내지 85%(v/v) 에탄올이며 해당 범위에서 용리시킨 배양액의 경우 식물병을 일으키는 병원성 균주의 생장 억제에 특히 효과적일 수 있다.
이하에서 본 발명에 대한 실시예를 통해 보다 구체적으로 설명하며, 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
광주광역시, 나주시, 무안군, 해남군, 영암군을 포함한 지역에서 총 165점의 황토시료를 확보하였다. 채취한 황토시료 (각 1g)를 멸균수 9ml에 현탁하고 10배 희석시킨 후 TSA (Tryptic soy agar)배지에 고르게 분주하여 37℃에서 하루 동안 배양하였다. 미생물의 보관은 20% 글리세롤이 첨가된 배지에 담아 -70℃, TS 브로스에서 보관한다.
게놈 DNA(Genomic DNA) 추출은 HiGeneTM Genomic DNA Prep Kit (Biofact Co., Daejeon, South Korea)를 사용하였으며, PCR 반응은 2㎕ genomic DNA, 각 primer 당 1.5㎕ (5 pmol), 14㎕ 증류수, 1㎕ PCR premix (Bioneer Co., Daejeon, South Korea) 반응 혼합물을 이용하였다. 자이레이스(gyrase) A 유전자 (Chun and Bae 2000) 분석은 gyr AF (5'-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3') 및 gyr AR (5'-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3') 세트 프라이머를 증폭에 이용하였다. PCR은 다음과 같은 조건에서 실시하였다. 초기 변성(denaturation) 단계는 95℃에서 5 분, 그리고 95℃에서 1분에서 30 cycle 후 53℃에서 40초 또는 1 분간 어닐링(annealing)하고 72℃에서 1 분 후 최종 신장 단계(elongation step)는 72℃에서 10 분간 반응하였다. PCR 수행 후 순화된 PCR 산물은 ABI 3700 automated DNA sequencer를 이용하여 염기서열을 분석하였다. 본 균주와 GenBank DB 유래의 유전자서열은 Clustal X windows interface v. 2.1 (Larkin et al. 2007)과 BioEdit software v. 7.2.5.를 이용하여 분석하였다. 유전자 정열은 MEGA v. 6.0 (Tamura et al. 2013)을 이용하였으며 Kimura's two-parameter distance model 을 이용하여 계통도를 작성하여 근연관계를 파악하였다.
분리한 DNA로부터 gyrase A 유전자 (gyr A) 염기서열을 분석하여 분자계통분류학 방법을 통해 동정하였다. 그 결과 기존에 알려진 Bcillus amyloliquefaciens subsp. plantarum과 99.6%(885/889 bp)의 매우 높은 유사도를 나타내었다. 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 gyrA 염기서열은 도 9와 같다(서열번호 3). 본 균주의 동정결과 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum)임을 확인하였다(도 1). 동정된 미생물을 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1로 명명하여 한국생명공학연구원 유전자원센터 (KCTC)에 기탁하였다 (수탁번호: KCTC 12729BP).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1은 많은 완전배지 중에 TSA (Tryptic soy agar) 및 LB (Luria-Bertani) 배지에서만 오로지 형태적 차이를 보이는 단일 콜로니를 확인하였으므로 이를 최적배지로 선별 분리하여 TSA (Tryptic soy agar)배지에 스트리킹(streaking) 하여 형태(morphology)를 관찰하였다(도 3).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성을 확인하기 위해 LB 배지 (트립톤 10g, 염화나트륨 10g, 효모추출물 5g, 증류수 1L)에서 180rpm, 37℃, 24시간 동안 배양하였고 대조군으로 다른 주 (strain)인 BC32-2, BC32-3 및 BC32-4도 배양하였다. 배양 후 상기 각각의 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼을 후사륨(Fusarium oxysporum f. sp . radices - lycopersici ) 배양 배지에 접종하였다. 접종결과 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 중 EML-BC32-1만이 항진균성 활성이 있는 것으로 나타났다(도 2).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 최적 생육 조건을 확인하기 위해 TSB (Tryptic soy broth)에서 각각 (A) 30 ℃와 (B) 37 ℃ 에서 배양하였다. 이 균체액을 15,000 rpm으로 10 분간 원심분리 하여 0.45 ㎛로 여과한 상등액 (좌)을 8 ㎜의 페이퍼 디스크(paper disc)를 사용하여 후사륨 (Fusarium oxysporum f. sp. radices - lycopersici(KACC 40031) 배양 배지에 TSB 배지를 대조군(우)으로 하여 동량의 100 ㎕로 확인한 결과, 37 ℃에서 클리어 존(clear zone)이 더 큼을 확인하여 37 ℃가 항진균 활성의 최적 온도로 확인되였다(도 4).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성물질의 정제를 위해 LB 배지 (트립톤 10g, 염화나트륨 10g, 효모추출물 5g, 증류수 1L)에서 180rpm, 37℃, 24시간 동안 배양하였고, 배양 후 7,000rpm, 4℃, 10분간 원심분리 하여 상등액을 얻었다. 얻은 상등액은 Diaion HP-20 (제조원: 미쓰비시케미칼) 수지를 이용하여 알코올로 0%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100%의 에탄올(v/v)을 사용하여 각각 용리하였다. 이후, 후사륨(Fusarium), 잿?곰팡이병균(Botrytis) 및 탄저병균 (Colletotrichum)에 대해 용리한 상등액을 평판 대치 배양하는 방법으로 식물병원성균의 균사 생장 저해정도로 측정하였으며 전혀 저해하지 못하거나 저해가 거의 일어나지 않는 경우는 ×, 0.5 mm 이상 저해시 ○로 표시하여 아래 표 1에 나타내었다.
용리시 사용 에탄올(v/v) 항진균성 활성 여부
0% EtOH ×
20% EtOH ×
40% EtOH ×
60% EtOH ×
80% EtOH ○
100% EtOH ×
항균활성을 확인한 결과 80% 에탄올 분획에서 항진균활성이 나타났다(도 5).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성물질을 상기 항진균 활성이 나타나는 80% 에탄올로 용리하여 분획한 상등액으로부터 정제하였다. 증발기를 사용하여 완전히 증발시키고 최소량의 메탄올 농도로 녹여낸 다음 0.20㎛ 2㎜ non-sterile hydrophilic syringe filter (MACHEREY-NAGEL)를 이용하여 여과하였다. 여과 후 최소량의 메탄올 농도로 녹여낸 다음 0.1 % TFA(trifluoroacetic acid)을 함유한 50 % 아세토나이트릴에 녹여 0.2㎛ non-sterile single use syringe filter (RC-membrane, PP-housing, Sartorius)에 여과하였다. 여과액은 C18 컬럼(Waters μBondapak C18 3.9×300㎜)을 이용한 역상(reversed-phase) HPLC(Shimadzu 10AD, Japan)를 사용하여 분리 정제하였다. 0.1% TFA를 함유한 5% 아세토나이트릴에 0.1% TFA를 함유한 95% 아세토나이트릴까지 1분당 1㎖씩 50분간 농도 구배를 주어 흘려줌으로써 분리 정제하였다. 정제 결과는 230㎚에서 흡광도의 변화로 시료의 용출을 확인하였고, 각 분획별로 물질을 모아 동결건조 시킬 후 최소량의 메탈올에 녹여 이중 100㎕를 이용하여 항진균 활성을 확인하였다. 그 결과 활성이 있는 단일 피크를 얻어 잘 정제된 것을 알 수 있었다. 바실러스 아밀로리퀴페이션스 플랜타럼 EML-BC32-1의 항진균성 활성물질의 분석은 LC/MS(API 2000, USA) 및 FT-IR 분광법으로 수행하였다(도 6 및 도 7). 분석결과 활성물질은 리포펩타이드인 이투린(inturin), 펜기신 (fengycin) 및 수펙틴(surfactin)이 것으로 나타났고 각각의 물질별 탄소개수 수에 따라 측정 값이 조금씩 다르게 나타났다(표 2).
바실러스 아밀로리퀘페이션스 아종 플랜타럼 EML-BC32-1에서 생산되는 리포펩타이드
리포펩타이드 체류시간
(min)		 분자량
[M + H]+
분자량
[M + Na]+
#1 이투린
(iturin)

 28.7 1,031.9 1,054.2
#2 30.5 1,046.1 1,068.9
#3 32.0 1,059.7 1,082.8
#4 펜기신
(fengycin)

 33.5 1,463.8 1,486.9
#5 34.3 1,477.6 1,499.4
#6 35.5 1,505.4 1,527.5
#7 수펙틴
(surfactin)

 40.5 1,008.8 1,031.1
#8 41.5 1,023.1 1,044.9
#9 45.0 1,037.2 1,058.8
상기 표 2에 나타난 각 리포펩타이드의 항진균성 활성을 후사륨(Fusarium oxysporumf. f. sp . radices - lycopersici ) 배양 배지에 접종 실험한 결과 리포펩타이드 중 페기신의 활성이 이투린 및 수펙틴보다 더 우수하게 나타났다(도 8).
추가적으로, 포장실험에서도 본 균주는 상기의 병원균에 대해 동일한 병방제활성 스펙트럼을 나타냈다.
한국생명공학연구원 KCTC12729BP 20141205
<110> CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY <120> Method of purification and production of bioactive compound for biocontrol of plant diseases from Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum BC32-1 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gyr A forward primer <400> 1 cagtcaggaa atgcgtacgt cctt 24 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gyr A reverse primer <400> 2 caaggtaatg ctccaggcat tgct 24 <210> 3 <211> 900 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum BC32-1 gyrase A <400> 3 tgaagccggt tcacagacgg attttgtacg caatgaatga tttaggcatg accagtgaca 60 aaccatataa aaagtctgcc cgtatcgtcg gtgaagttat cggtaagtac catccgcacg 120 gtgactcagc ggtttacgaa tcaatggtca gaatggcgca ggattttaac taccgctaca 180 tgcttgttga cggacacggc aacttcggtt cggttgacgg cgactcagcg gccgcgatgc 240 gttacacaga agcgagaatg tcaaaaatcg caatggaaat tctgcgtgac attacgaaag 300 acacgattga ctatcaagat aactatgacg gttcagaaag agagcctgcc gtcatgccat 360 cgagatttcc gaatctgctc gtaaacgggg ctgccggtat tgcggtcgga atggcgacaa 420 acattcctcc gcatcagctt ggagaagtca ttgaaggcgt gcttgccgta agtgagaatc 480 ccgagattac aaaccaggag ctgatggaat acatcccggg cccggatttt ccgactgctg 540 gtcagatttt gggccggagc ggcatccgca aggcatatga atccggacgg ggatcaatca 600 caatccgggc taaggctgaa atcgaagaga catcatcagg aaaagaaaga attattgtta 660 cggaacttcc ttatcaggtg aacaaagcga gattaattga aaaaatcgca gatcttgtcc 720 gagacaaaaa aatcgaagga attaccgacc tgcgagacga atccgaccgt aacggaatga 780 gaatcgtcat tgagatccgc cgtgacgcca atgctcacgt cattttgaat aacctgtaca 840 aacaaacggc cctgcagacg tctttcggaa tcaacctgct ggcgctcgtt gacggacagc 900 900

Claims (7)

  1. 항진균성 활성 물질로 이투린, 펜기신 및 수펙틴을 생산하고,
    후사륨 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides), 및 보트리티스 씨네리아 (Botrytis cinerea)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 대하여 항진균성을 나타내는,
    황토 유래 미생물인 식물병 방제용 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) EML-EML-BC32-1 (수탁번호: KCTC 12729BP).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 식물병은 시들음병, 균핵병, 탄저병 및 잿빛곰팡이병으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 식물병 방제용 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) EML-EML-BC32-1 (수탁번호: KCTC 12729BP).
  3. 삭제
  4. 제1항의 미생물 배양액을 유효성분으로 포함하고,
    후사륨 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides), 및 보트리티스 씨네리아 (Botrytis cinerea)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 대하여 항진균성을 나타내는 식물병 방제용 항진균성 방제제.
  5. 삭제
  6. 제4항에 있어서,
    상기 배양액은 70 내지 90% 알코올(v/v)에서 용리된 배양액인 식물병 방제용 항진균성 방제제.
  7. 삭제
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