KR101396059B1

KR101396059B1 - 소귀나무잎으로부터 분리된 신규 황산염 페놀성 화합물 및 이의 항산화 및 항염 용도

Info

Publication number: KR101396059B1
Application number: KR1020120067875A
Authority: KR
Inventors: 이민원; 김한혁
Original assignee: 중앙대학교 산학협력단
Priority date: 2012-06-25
Filing date: 2012-06-25
Publication date: 2014-05-16
Anticipated expiration: 2032-06-25
Also published as: KR20140000757A

Abstract

본 발명은 소귀나무 잎 추출물로부터 분리된 신규 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 화합물 1 및 미리세틴 3′-O-포타슘 설페이트 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 강력한 자유 라디칼 소거능을 가짐으로써 항산화 활성을 나타내며, NO (Nitric oxide) 생성을 억제하는 강력한 항염증 활성을 보인다. 따라서, 본 발명의 신규 화합물은 항산화 및 항염증 활성이 필요한 의약품, 화장품, 기능성 식품 등의 활성성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

소귀나무잎으로부터 분리된 신규 황산염 페놀성 화합물 및 이의 항산화 및 항염 용도{Novel Sulfated Phenolic Compounds Isolated from the Leaves of Myrica rubra Sieb. et Zucc and Anti-Oxidative and Anti-Inflammatory Use Thereof}

본 발명은 소귀나무 잎으로부터 분리된 신규의 황산염 페놀성 화합물 및 이 화합물의 항산화 및 항염 용도에 관한 것이다.

소귀나무는 소귀나무과에 속하는 상록교목으로 따뜻한 난대지역에서만 자라는 난대수종이며 한국, 중국, 일본 등 아시아 국가에 널리 퍼져있다. 예로부터 중국전통의학에서는 소귀나무를 이용하여 화상과 피부질환에 효과가 있다고 기록되어 있으며, 일본의 민간에서는 소귀나무 가지를 이용하여 수렴, 해독, 설사약으로 쓰여져 왔다. 최근에 소귀나무의 성분 분리 연구에 의하면 탄닌, 플라보노이드, 트리테르페노이드, 사이클릭 디아릴헵타노이드 등 다양한 성분이 분리되었으며, 생리활성에 관한 연구로는 소귀나무 수피 추출물이 RBL-2H3 세포 내 β-헥소사미니다아제(hexosaminidase) 처리 시 즉시형 알러지 반응에 대한 억제 활성과 멜라닌 생성을 촉진한다고 보고되었고(Chem . Pharm . Bull. 50(2) 208215 (2002)), 2005년 손 등(Kor . J. Pharmacogn. 36(4) : 263-272 (2005))은 197종의 약용 및 야생식물의 다양한 부위로부터 aPTT 측정에 의한 혈액 항응고 활성 평가를 실시하여 소귀나무 메탄올 추출물에서 가장 강력한 항혈전 활성이 나타났다고 보고한 바 있다.

염증 반응은 생체나 조직에 물리적 작용이나 화학적 물질, 세균 감염 등의 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상 부위를 수복 재생하려는 기전이다. 일단 자극이 가해지면 국소적으로 염증성 성분과 같은 혈관 활성 물질이 유리되어 혈관 투과성이 증대되면서 염증을 유발하지만 지속적인 염증반응은 도리어 점막손상을 촉진하고, 그 결과 일부에서는 여러 질환을 발생시키는 원인이 된다. 대식세포는 선천면역 뿐만 아니라 획득면역 등 다양한 숙주반응에 관여하여 항상성 유지에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 염증반응 시에는 NO (nitric oxide)와 사이토카인을 생산하여 감염초기에 생체방어에 중요한 역할을 한다.

대한민국 공개특허 제2008-78753호에는 소귀나무(Myrica rubra) 잎 추출물이 폴리페놀 화합물을 포함하며, 항산화 활성과 피부미백활성을 가진다고 기재되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허 제2011-36317호에는 소귀나무(Myrica rubra) 잎 추출물이 NO의 생성을 억제하는 항염활성을 가진다는 내용이 개시되어 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

대한민국 공개특허 제2008-78753호 대한민국 공개특허 제2011-36317호

본 발명자들은 천연물로부터 항산화능 및 항염활성을 갖는 활성 화합물을 분리하기 위해 연구 노력한 결과, 소귀나무 잎 추출물로부터 신규의 황산염 페놀성 화합물인 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(Juglanin B 11-O-potassium sulfate)와 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트(Myricetin 3'-O-potassium sulfate)을 분리하였고, 이 화합물들이 DPPH 라디칼을 효과적으로 소거하며, LPS-유도시킨 Raw 264.7 세포에서 NO (nitric oxide) 생성을 억제하여 항산화 활성 및 항염 활성이 보유함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 신규의 황산염 페놀성 화합물인 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트와 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트 화합물을 제공하는 데에 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 신규 황산염 페놀성 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 용도 또는 항염 용도의 조성물을 제공하는 데에 있다.

본 발명의 목적 및 장점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구의 범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 (Juglanin B 11-O-potassium sulfate) 화합물; 또는 하기 화학식 2로 표시되는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트 (Myricetin 3'-O-potassium sulfate) 화합물을 제공한다.

상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물은 소귀나무 (Myrica rubra) 잎 추출물로부터 분리 및 동정된 신규한 황산염 페놀성 화합물이다.

본 발명에서 소귀나무 잎 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 분리할 수 있다.

본 발명의 소귀나무 잎 추출물을 추출하기 위한 추출 용매로는 추출공정에서 일반적으로 사용할 수 있는 용매를 사용할 수 있으며, 둘 이상의 서로 다른 용매를 순차적으로 사용하여 추출할 수도 있다. 본 발명의 추출용매는 바람직하게는, 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올), 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄(CH₂Cl₂), 클로로포름, 헥산(Hexane) 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 소귀나무 잎 추출물은 상기 용매에 의한 추출한 추출물을 추가적으로 더욱 정제하여 분리한 분획물도 포함하는 의미이다. 상기 추가적 분리는 바람직하게는 컬럼 크로마토그래피를 행하여 수행하며, 보다 바람직하게는 액체 컬럼 크로마토그래피를 이용한 크기배제(size-exclusion) 크로마토그래피, 이온교환(ion-exchange) 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피, 친화(affinity) 크로마토그래피 또는 이들 크로마토그래피의 조합을 이용하여 분리 정제할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 소귀나무 잎 추출물로부터 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 황산염 페놀성 화합물은 추출물로부터 단일 화합물을 분리 및 정제하는 통상적인 방법에 의해 얻을 수 있다. 예컨대, 실리카겔 또는 셀라이트(celite)겔 컬럼을 이용한 여과(filtration), 액체 컬럼 크로마토그래피를 이용한 크기배제(size-exclusion) 크로마토그래피, 이온교환(ion-exchange) 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피, 친화(affinity) 크로마토그래피 또는 이들 크로마토그래피의 조합을 이용하여 분리 정제할 수 있다.

상기 추출물로부터 분리된 단일 화합물은 MALDI-TOF MS (Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time Of Flight Mass Spectroscopy), EI MS (Electron Ionization Mass Spectroscopy), CI (Chemical Ionization Mass Spectroscopy), FABI (Fast Atom Bombardment Ionization), ESI-MS (Electrospray Ionization Mass Spectrometry)와 같은 질량분석법과, 적외선 분광법(IR Sectrum), 핵자기공명법(NMR, Nuclear Magnetic Resonance), CD (Circular Dichroism) 등의 방법을 이용하여 그 구조를 동정하여 확인할 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 또는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트를 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일 구현예에 의하면, 상기 항산화용 조성물은 자유라디칼 소거 활성을 갖는다.

본 발명의 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 또는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트는 자유라디칼 소거능이 매우 뛰어나므로 항산화 용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 또는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일 구현예에 의하면, 상기 항염증용 조성물은 NO (nitric oxide) 생성을 억제하는 활성을 갖는다.

본 발명의 항산화용 조성물 또는 항염증용 조성물은 약제학적 조성물의 형태로 사용될 수 있으며, 구체적으로 (a) 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 또는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트 화합물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약제학적 조성물의 경구 투여량은 바람직하게는 1일 당 0.001-100mg/kg (체중)이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구로 투여되는 경우, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적용되는 질환의 종류에 따라, 투여 경로가 결정되는 것이 바람직하다. 본 발명의 약제학적 조성물에서 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며 특정 범위의 농도로 한정되지 않는다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 항산화용 조성물 또는 항염증용 조성물은 화장품학적 조성물의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 화장품학적 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 로션, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림, 로션, 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품학적 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 황산염 페놀성 화합물 및 담체 성분 이외에, 화장품학적 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

본 발명의 상기 항산화용 조성물 또는 항염증용 조성물은 기능성 식품 조성물의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 기능성 식품 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 전술된 황산염 페놀성 화합물의 유효성분 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등); 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등); 올리고당; 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등); 및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다.

상술한 본 발명의 특징과 이점을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명은 소귀나무 잎 추출물로부터 분리된 신규 황산염 페놀성 화합물을 제공한다.

(ⅱ) 본 발명의 신규의 황산염 페놀성 화합물은 강력한 항산화 활성 및 항염활성을 가지므로, 항산화 활성과 항염증 활성이 필요한 의약품, 화장품, 기능성 식품 등의 활성성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 소귀나무 잎 추출물로부터 분리된 신규 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 화합물 1 및 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 강력한 자유 라디칼 소거능을 가짐으로써 항산화 활성을 나타내며, NO (Nitric oxide) 생성을 억제하는 강력한 항염증 활성을 보인다. 따라서, 본 발명의 신규 화합물은 항산화 및 항염증 활성이 필요한 의약품, 화장품, 기능성 식품 등의 활성성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트(화합물 2)의 COSY (H―H), HMBC (H→C) 및 NOESY (H--->H) Correlation 결과를 보여준다.
도 2는 소귀나무(Myrica rubra) 잎 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 측정결과를 보여준다. Vit.C는 비타민 C이다.
도 3은 본 발명의 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트(화합물 2)의 DPPH 라디칼 소거능 측정결과를 보여준다. Vit.C는 비타민 C이다.
도 4는 본 발명의 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트(화합물 2)이, LPS-자극된 RAW 264.7 대식세포(macrophage cell)에서 NO (nitric oxide) 생성에 미치는 영향을 측정한 결과를 보여준다. 각 막대는 3회 독립적 실험의 평균±SEM (n=3)으로 표시하였다. *P < 0.05, **P < 0.01: LPS 값과 유의성 있는 차이점.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: 소귀나무 잎 추출물로부터 활성 화합물의 분리

본 실험에 사용한 소귀나무 잎(Myrica rubra S. et Z.)는 2010년 8월 2.5kg을 완도 수목원에서 분양 받아 사용하였다. 소귀나무 잎 2.5kg을 80％ 아세톤으로 실온에서 3회 추출하였다. 추출액은 여과한 후 감압 농축하여 추출물(285.91g)을 얻었다. 그 중 80％ 아세톤 추출물 200g을 극성 차를 이용해 서로 다른 용매를 첨가하여 단계적으로 분획하였다. 추출물과 n-헥산(hexane)을 1:1 비율로 분획 깔대기에 넣고 n-헥산층과 H₂O층으로 분획하였고, n-헥산층은 감압, 농축하여 n-헥산 분획물 27.95g을 얻었다. H₂O층은 다시 에틸아세테이트(ethyl acetate)와 혼합하여 상기한 과정과 동일한 과정을 통하여 에틸아세테이트층 34.80g과 H₂O층 50g의 분획물을 각각 얻었다. 이들 분획물들을 감압, 농축 후 동결 건조하여 용매를 제거한 후 실험에 사용하였다. H₂O층 50g은 Sephadex LH-20 column chromatography (0→100％ MeOH, gradient system)를 실시하여 5개의 분획(Fr1, Fr2, Fr3, Fr4, Fr5)으로 나누었다. 그 중 Fr2, Fr3 분획은 YMC-gel ODS-A (0→100% MeOH, gradient system)을 실시하여 최종적으로 화합물 1(51.6 mg)과 화합물 2(78.0 mg)을 얻었다.

실시예 2: 화합물 1의 구조 동정

상기 소귀나무 잎 추출물로부터 분리한 항산화 및 항염 활성을 나타내는 화합물 1은 하기 화합물 구조 분석 데이터에 의해, 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트으로 동정되었다. 최종 분리된 화합물 1은 엷은 노란색 부정형 분말의 형태를 가졌다. [α]²⁵ _D-8°(c=0.001, MeOH); IR (KBr) cm^-1: 3373, 2936, 1600, 1508, 1463, 1414, 1380, 1242 HR-FAB-MS m/z: 445.0719 [M-H]^- (Calcd for C₂₀H₂₂KO₇S, 445.0723). c.d. [θ]₂₉₇ -2.68, [θ]₂₄₀ -5.71, [θ]₂₀₀23.22. ¹H- 및 ¹³C-NMR 데이터(CD₃OD+D₂O)는 아래 표 1에 나타내었다. 이 화합물의 화학구조식은 아래와 같다.

[화학식 1]

실시예 3: 화합물 2의 구조 동정

상기 소귀나무 잎 추출물로부터 분리한 항산화 및 항염 활성을 나타내는 화합물 2는 하기 화합물 구조 분석 데이터에 의해, 미리세틴 3’-O-포타슘 설페이트인 것으로 동정되었다. 이 화합물 2는 노란-오렌지색 부정형의 분말의 형태를 가졌다. [α]²⁵ _D+ 10° (c= 0.005, MeOH); IR (KBr) cm^-1: 3295, 1656, 1603, 1521, 1434, 1318, 1199, 1163, 1113, 1025 HR-FAB-MS m/z 434.9431 [M-H]^-, (Calcd. for C₁₅H₈KO₁₁S, 434.9424). ¹H- 및 ¹³C-NMR 데이터(CD₃OD+D₂O)는 아래 표 1에 나타내었다. 이 화합물의 화학구조식은 아래와 같다.

[화학식 2]

실시예 4: DPPH 라디칼 소거능의 측정

DPPH(200 mM) 용액 180 ㎕에 각 농도별로 시료 20 ㎕를 첨가하여 30 분간 방치 후 518 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 DPPH 라디칼 소거능은 [1-(sample O.D.- blank O.D.) / (control O.D. - blank O.D.)] X 100의 식을 통해 구하였다. 소귀나무 잎 추출물은 농도가 증가함에 따라 DPPH 라디칼 소거능이 증가됨을 보여주었고, 50 ㎍/㎖ 이상의 농도에서 비타민 C와 대등한 정도의 DPPH 라디칼 소거능을 보였다(도 2 참조). 또한, 본 발명의 신규 황산염 페놀성 화합물인, 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3’-O-포타슘 설페이트(화합물 2)는 50 μM 이상의 농도에서 비타민 C와 동등한 정도의 DPPH 라디칼 소거능을 보였다(도 3 참조).

실시예 5: DPPH 라디칼 소거능 IC ₅₀ 값

소귀나무 잎 추출물에 대해 측정한 DPPH 라디칼 소거능의 IC₅₀ 값을 하기 표 2에 나타내었다.

하기 표 3에는 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트(화합물 2)에 대해 측정한 DPPH 라디칼 소거능의 IC₅₀ 값을 나타내었다.

실시예 6: NO 생성 억제 활성의 측정

본 발명에서 분리한 화합물이 대식세포(macrophage cell)에서 LPS (Lipopolysaccharide)에 의해 유도되는 NO (nitric oxide) 생성을 억제하는 작용을 갖는지에 대해 측정하였다. RAW 264.7 대식세포에 LPS (lipopolysaccharide)를 처리하여, NO 합성효소(NO synthase enzyme)을 발현시키고 생성된 NO의 양을 Griess의 방법으로 측정하였다(15, 16). Griess 시약 (1％ 설파닐아민, 0.1％ N-(1-나프틸)-에틸렌 디아민 디하이드로클로라이드, 2.5％ H₃PO₄)는 NO를 산화시켜 NO₂로 변화시키며 생성된 NO₂는 540 nm에서 흡광도를 측정하여 그 농도를 NaNO₂의 검량선을 이용하여 구하였다. 즉, RAW 264.7 대식세포를 DMEM 배지1㎖ 당 5 X 10⁴세포가 되도록 배양한 다음, 1㎖ 당 1 X 10⁴세포의 농도로 희석하여 96 웰에 160 ㎕씩 넣고 2 시간 동안 배양하여, 세포가 부착되도록 한 다음, LPS (1㎍/㎖) 20 ㎕, 양성대조군(positive control)로서 케르세틴(quercetin) 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 각 시료를 20 ㎕씩 넣고 20 시간 배양시킨 후, 배양액에 생성되어 있는 NO의 양을 Griess reagent를 이용하여 정량하였다.

도 4의 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 신규 황산염 페놀성 화합물인 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트(화합물 1) 및 미리세틴 3’-O-포타슘 설페이트(화합물 2)는 농도 의존적 방식으로 RAW 264.7 대식세포에서 LPS 자극에 의해 유도되는 NO의 생성을 억제하였으며, 25μg/mL의 농도에서는 양성대조군 케르세틴과 동등한 정도의 NO 생성 억제 활성을 보였다(도 4 참조).

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

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소귀나무(Myrica rubra) 잎 추출물로부터 분리된, 하기 화학식 1로 표시되는 주글라닌 B 11-O-포타슘 설페이트 화합물; 또는 하기 화학식 2로 표시되는 미리세틴 3'-O-포타슘 설페이트 화합물을 유효성분으로 포함하여, 자유라디컬 소거 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 항산화용 조성물.
[화학식 1]

[화학식 2]
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제 3 항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용 기능성 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
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