KR101150999B1 - 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 함유하는, 뇌혈관 질환 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 유효성분으로서 두릅(Aralia elata), 목과(Chaenomeles Fructus) 및 감초(Glycyrrhizae Radix)의 에탄올 추출물을 함유하는, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물에 관한 것으로서, 상기 세 가지 성분의 상호 보완적 작용기전에 의해 현저한 상승효과를 나타냄으로써 뇌신경세포를 보다 효과적으로 보호할 수 있고 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈, 혈관성 치매 및 기억손상을 부작용 없이 보다 효과적으로 예방?치료 및 개선할 수 있다.

Description

두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 함유하는, 뇌혈관 질환 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물{Compositions for prophylaxis or treatment of cerebrovascular diseases, for improving memory impairments, or for protecting neuronal cells, containing ethanol extract from Aralia elata, Chaenomeles Fructus and Glycyrrhizae Radix}

본 발명은 뇌혈관 질환 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용 또는 뇌신경세포 보호용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 유효성분으로서 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 함유하는 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물에 관한 것이다.

허혈성 뇌졸중(cerebral apoplexy), 즉 뇌경색(cerebral infarction)은 혈관의 동맥경화증으로 인한 뇌동맥의 혈전이나 색전과 심장질환 등에 의한 심인성 색전이 주된 원인이다. 뇌혈관이 막혀서 발생하게 되는 뇌경색증은 다시 뇌혈전증과 뇌색전증으로 구분하게 된다. 뇌혈전증은 고혈압, 당뇨병, 고지혈증 등에 의하여 동맥경화증이 초래되어 동맥의 벽이 두꺼워지거나 딱딱해지게 된다. 이로 인해 혈관이 좁아지고 혈관의 안벽이 상처받기 쉬워 매끄럽지 못해서 피가 엉겨 붙으면서 결국 막히게 되어 혈액의 공급이 현저히 줄거나 중단되어 뇌세포로 가는 산소 및 영양공급이 부족하여 뇌기능의 장애가 초래된다. 뇌색전증은 심장판막증 또는 심방세동 등의 질환에 의하여 심장 내의 피의 흐름에 이상이 생겨 혈액의 일부가 심장 내에 부분적으로 정체해 있게 되고 따라서 응고되어 피찌꺼기가 생기게 되며, 이것이 떨어져나가 뇌혈관을 막게 되어 뇌경색이 발생하게 된다. 뇌조직에 5~6분 이상 산소공급이 중단되면 불가역적인 뇌의 변화와 뇌조직의 괴사를 초래할 수 있다. 그 결과 경색부위는 대개 빈혈을 나타내며, 점차로 진흙색이 된다. 일부 경색 부위는 충혈되어 보이며, 다른 부분은 점상출혈이 산재해 있는 것처럼 보이기도 한다. 뇌의 산소가 결핍되거나 뇌조직 속으로 혈액 유출이 있을 경우에는 뇌조직의 손상, 뇌부종(cerebral edema) 및 지각과 조정의 변화가 일어날 수 있다. 뇌부종이 심한 경우에는 두개내압 상승에 대한 위험이 있다. 세포내액과 세포외액은 일차적으로 백색질 내에 축적된다. 부종 상태의 뇌는 패인 곳이 많아지고 무거워져서 부종으로 인해 뇌실계는 압박을 받게 된다.

퇴행성 뇌질환은 뇌신경세포의 사멸이 주요한 원인이 되는 질환으로, 치매(dementia), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke), 헌팅턴병(Huntington's disease), 크루츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 픽병(Pick's disease), 파킨스-ALS-치매 복합증(Parkinson-ALS-dementia complex of Guam), 윌슨병(Wilson's disease), 진행성 핵상 신경마비(progressive supranuclear palsy) 등 다양한 질환을 포함한다. 대표적인 퇴행성 뇌질환인 치매는 전반적인 인지기능의 장애를 나타내는 뇌질환으로, 보통 만성 또는 진행성 뇌질환에 의해서 발생하고 기억, 사고, 이해, 계산, 학습, 언어 판단 등 다수의 고위 대뇌기능에 장애가 나타난다. 치매의 원인 중 가장 흔한 것은 퇴행성 뇌질환의 일종인 알츠하이머병(AD; Alzheimer's dementia)으로 약 50-60%를 차지하고, 그 다음으로는 혈관성 치매(VaD; Vascular dementia)가 20-30%를 차지하며, 나머지 10-30%는 기타 원인에 의한 치매라 할 수 있다. 알츠하이머병은 베타아밀로이드(Aβ; Amyloid β)라는 독성 물질이 뇌에 축적되면서 뇌신경세포가 점진적으로 소멸되는 병으로, 임상적으로는 매우 서서히 발병하여 매우 서서히 악화되는 특징적인 경과를 보인다. 사망한 알츠하이머병 환자의 뇌를 현미경으로 검사하면 Aβ가 침착된 특징적인 노인반(senile plaque)과 신경원섬유 농축(neurofibrillary tangle)이 관찰된다. 알츠하이머병 다음으로 많이 나타나는 것이 뇌혈관이 막히거나 좁아지는 등(예를 들어, 뇌경색)의 원인으로 발생하는 혈관성 치매이다. CT 또는 MRI 등 뇌영상검사를 시행하면 혈관성 치매 환자의 경우 뇌경색 또는 뇌출혈 등 뇌혈관질환의 흔적이 확인된다.

대부분의 퇴행성 뇌질환들은 치매, 특히 인지 장애와 기억 장애(기억력 감퇴)를 수반한다. 따라서, 치매를 비롯한 퇴행성 뇌질환의 바람직한 치료제는 뇌세포의 파괴와 노화를 지연시켜 뇌세포를 보호하고, 인지 기능을 회복시켜야 한다. 지금까지 개발된 약제로는 활성산소에 의한 뇌 세포의 파괴를 억제하는 비타민 E와 셀레질린(selegiline)과 같은 항산화제, 타크린(Tacrine), 아리셉트(Aricept) 및 엑셀론(Exelon)과 같은 아세틸콜린 분해효소 억제제(acetylcholinesterase-inhibiting drugs) 등이 있다. 그러나 이와 같은 약제들은 상당한 부작용을 유발하는 것으로 보고되고 있으며, 그 효능이 우수하지 못한 단점이 있다. 또한, 최근 복잡한 사회활동에 의한 스트레스 및 공해와 같은 생활환경 악화로 일반인에서도 기억력 및 집중력 감퇴 현상이 나타나고 있다. 이에 기억력을 개선시킬 수 있는 약물이 퇴행성 뇌질환이나 노화 또는 스트레스로 인해 기억력이 감퇴된 사람들에게 기억력을 개선시키고, 정신지체가 있는 환자에게는 새로운 기억을 형성하는 회로를 재구성할 수 있을 것으로 기대되고 있다.

두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 두릅나무(Aralia elata, 참두릅 또는 나무두릅)는 한국을 비롯하여 일본, 중국 등에 분포하며 5-6월에 새싹은 인기 있는 식품으로 한국에서 애용되고 있다. 땅두릅(Aralia cordata, 그 뿌리를 '독활'이라 함)이 땅에서부터 줄기로 자라는 것에 비해, 두릅은 나무에서 새순으로 나와 채취하며, 나무 머리 꼭대기에 나는 나물이라고 하여 목두채 또는 문두채로 불린다. 두릅은 항당뇨, 항염, 진통, 항산화 및 항암 효과도 알려져 있다. 두릅은 강정 작용을 하며 특히 당뇨에 부작용이 없으면서도 탁월한 효과를 낸다고 한다. 두릅나무 껍질을 한방에서는 총목피라고 하는데 신경통과 고혈압에도 좋다고 하며 한방에서는 감기초기와 신경통, 관절염에 뿐만 아니라 신경을 안정시켜 불안, 초조, 우울증도 없애고 또한 독특한 향기와 쓴맛은 식욕을 향상시킨다. 두릅에는 단백질이 많고 지방, 당질, 섬유질, 인, 칼슘, 철분, 비타민(B1,B2,C)과 사포닌 등이 들어있어 혈당을 내리고 혈중지질을 낮추어 주므로 당뇨병, 신장병, 위장병에 좋다고 한다. 한국공개특허 제2006-0072642호는 독활, 목두채, 해동피, 속단, 우슬, 위령선 중에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 뇌기능 개선제를 개시하고 있는바, 목두채 추출물이 β 아밀로이드에 의한 신경세포 독성을 저해하고 아세틸콜린의 전달을 방해하는 스코폴아민에 의한 기억력 감퇴를 막아주는 것으로 기재하고 있다. 그러나 상기 공개특허는 두릅의 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료 효과나, 목과 및 감초와 같은 다른 성분과 배합 시 현저히 상승된 효과를 나타낼 수 있음에 대해 전혀 교시 또는 암시한 바 없다.

모과나무의 열매, 목과(木瓜)(Chaenomeles fructus, fruits of Chaenomeles sinensis Koehne, Rosaceae)는 항산화 효과, 항바이러스 효과 등을 갖는 것으로 알려져 있다. 또한, 마우스에서 β 아밀로이드로 유도된 기억손상을 유의성 있게 억제하며, 뇌조직의 허혈상태를 유의성 있게 개선하고 허혈로 인한 뇌조직 손상을 억제하는 것으로 보고되어 있다(김명진 외, 동의신경정신과 학회지 제16권 제1호 2005). 그러나, 두릅 및 감초와 같은 다른 성분과 배합 시 현저히 상승된 효과를 나타낼 수 있음에 대해서는 전혀 알려진 바 없었다.

감초(Glycyrrhizae Radix, the root of Glycyrrhiza uralensis(Lycophodiaceae))의 경우, 인삼, 백출, 백복령, 감초, 당귀, 천궁, 숙지황, 백작약, 원지 및 석창포를 함유하는 팔물총명탕(八物聰明湯)이 허혈에 의한 기억과 학습능력 손실을 억제한다는 보고(경희대학교 동서의학대학원 석사학위논문, 윤영주(2006. 2.) "국소 전뇌허혈 동물 모델에서 팔물총명탕이 학습과 기억에 미치는 효과") 외에는, 그의 뇌경색 등 및 기억손상에 대한 직접적인 효과는 보고된 바 없었다.

본 발명자들은, 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물에 대하여 뇌경색 억제효과 및 β 아밀로이드에 의한 기억손상 억제효과를 시험한 결과, 허혈성 뇌경색을 유발한 랫트의 뇌경색 및 부종을 현저히 억제하고, 기억손상도 예방함을 확인하였다. 또한 이 약리학적 활성에 대한 생화학적 기전으로서 뇌신경세포를 배양하여 각 신경독성물질에 의한 세포사를 억제하는 효과를 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서 본 발명의 목적은 유효성분으로서 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 함유하는 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명은 유효성분으로서 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 함유하는, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서, 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물은 두릅, 목과 및 감초를 혼합한 후 이 혼합물을 에탄올로 추출한 것이나, 두릅, 목과 및 감초를 각각 에탄올로 추출한 후 이 추출물을 혼합한 것일 수 있다. 각각의 생약 또는 생약 추출물은 0.5~2 : 0.5~2 : 0.5~2의 중량비로 사용하는 것이 바람직하며, 1 : 1 : 1의 중량비로 사용하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 두릅은 전초(全草)나 식용으로 사용하는 어린 순(筍)을 사용하는 것이 보다 바람직하다.

본 발명에 따르면, 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물은 랫트 허혈 모델에서 경색 및 부종 부피를 현저히 감소시키고, Aβ에 의해 유도된 마우스 기억손상 모델에서 기억손상을 효과적으로 억제하며, 배양 신경세포에 대해 과산화수소, 흥분성 아미노산인 글루타메이트, 저산소증 및 Aβ에 의해 유발된 신경세포사를 효과적으로 억제하는 것으로 확인되었다. 특히, 예기치 않게도 두릅, 목과 및 감초의 세 가지 성분이 다른 성분에 결여된 작용기전을 상호 보완하는 상호 보완적 작용기전에 의해 현저한 상승효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물은 뇌신경세포를 보다 효과적으로 보호하여 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈, 혈관성 치매 및 기억손상을 부작용 없이 보다 효과적으로 예방?치료 및 개선할 수 있다.

도 1은 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG)의 결찰/재관류에 의한 뇌경색 억제효과를 보여주는 사진이고;
도 2는 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG)의 뇌경색 억제효과를 보여주는 그래프이며;
도 3은 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG)의 뇌부종 억제효과를 보여주는 그래프이고;
도 4는 수동회피시험에서 (A) 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG) 및 (B) 목과 추출물(CS)의 Aβ(25-35)에 의한 기억손상 억제효과를 보여주는 그래프이며;
도 5는 수중미로시험에서 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG)에 의한 기억손상 억제효과를 보여주는 그래프이고;
도 6은 (A) 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG), (B) 두릅 추출물(AE) 및 (C) 감초 추출물(GR)의 H₂O₂-유도 신경세포사 억제효과를 보여주는 그래프이며;
도 7은 (A) 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG) 및 (B) 두릅 추출물(AE)의 글루타메이트-유도 신경세포사 억제효과를 보여주는 그래프이고;
도 8은 (A) 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG), (B) 두릅 추출물(AE), (C) 목과 추출물(CS) 및 (D) 감초 추출물(GR)의 저산소증-유도 신경세포사 억제효과를 보여주는 그래프이며;
도 9는 (A) 두릅, 목과 및 감초 추출물(ACG), (B) 두릅 추출물(AE), (C) 목과 추출물(CS) 및 (D) 감초 추출물(GR)의 Aβ(25-35)-유도 신경세포사 억제효과를 보여주는 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서는, 두릅, 목과 및 감초 각각의 에탄올 추출물을 혼합하여 혼합추출물(이하, 'ACG'라 약칭하기로 함)을 조제하고, 뇌경색 모델로서 허혈/재관류에 의한 허혈성 뇌경색에 대한 억제효과를 조사하였다. 또한, 그 생화학적 기전을 밝히기 위하여, 배양 뇌신경세포에 대하여 과산화수소, 흥분성아미노산인 글루타메이트 및 저산소증에 의한 신경세포사에 대한 억제효과를 조사한 결과, ACG가 우수한 효과를 가짐을 확인하였다. 또한, 기억손상 모델로서 마우스에 Aβ(25-35)를 뇌실 내 투여하여 나타나는 기억손상에 대한 ACG의 억제효과를 확인하였으며, 그 생화학적 기전으로서는 Aβ(25-35)에 의한 배양 뇌신경세포의 고사성 세포사를 억제함을 확인하였다. 이 결과는 ACG가 치매, 뇌졸중을 포함한 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료제로서 사용될 수 있음을 보여주는 것이다.

특히, 상기 세 가지 성분들은 모든 독성물질의 독성을 억제하는 비특이적 억제가 아니라 독성물질의 종류에 따라 독성을 선택적으로 억제하는 특이적 억제 효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 즉, 과산화수소-유도된 세포독성에 대해서는 두릅과 감초가 아주 높은 농도에서 독성을 억제하는 반면, 모과는 전혀 억제효과를 갖지 않음에도 불구하고, ACG는 뛰어난 억제효과를 나타내고, 글루타메이트 유도된 독성에 대해서는 두릅만이 약하게 억제 효과를 나타내는 반면, ACG는 뛰어난 억제효과를 나타내며, 저산소증 유도된 독성에 대해서는 감초만이 뛰어난 억제효과를 나타내는데 ACG 또한 우수한 억제효과를 나타낸다. 이는 두릅, 목과 및 감초의 세 가지 성분이 다른 성분에 결여된 작용기전을 상호 보완함을 보여주는 것으로, 이러한 상호 보완적 작용기전에 의해 ACG는 현저히 상승된 효과를 나타내는 것으로 여겨진다. 또한, Aβ 유도된 세포독성에 대해서는 모든 성분이 어느 정도의 억제효과를 나타내나 두릅과 목과의 경우 일정 농도(10 ㎍/㎖) 이상에서는 오히려 독성을 나타냄에 비해, ACG의 경우 50 ㎍/㎖의 농도까지 용량의존적으로 높은 억제효과를 나타내는 것으로 확인된바, ACG는 각각의 성분을 훨씬 적은 양으로 사용하여 부작용 없이 안전하게 우수한 효과를 나타낼 수 있다. 따라서, ACG는 뇌신경세포를 보다 효과적으로 보호하고, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈, 혈관성 치매 및 기억손상을 부작용 없이 보다 효과적으로 예방?치료 및 개선할 수 있다.

본 발명에서는, 두릅, 목과 및 감초를 혼합한 후 이 혼합물을 에탄올로 추출하거나, 두릅, 목과 및 감초를 각각 에탄올로 추출한 후 이 추출물을 혼합하여 사용할 수 있다. 각각의 생약 또는 생약 추출물은 0.5~2 : 0.5~2 : 0.5~2의 중량비로 사용하는 것이 바람직하며, 1 : 1 : 1의 중량비로 사용하는 것이 보다 바람직한바, 이는 상기 비율에서 보다 우수한 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 및 혈관성 치매의 예방 및 치료효과 및 기억손상 개선효과를 얻을 수 있기 때문이다. 또한, 두릅은 전초를 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 뇌경색 또는 기억손상 예방 또는 치료제를 약제학적 제제의 형태로 제조하는 경우, 유효성분을 약제학적으로 허용되는 통상적인 담체와 함께 배합하여 투여 목적에 따라, 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 츄잉정, 분말제, 액제나 현탁제와 같은 경구 투여용 제제 또는 주사가능한 액제나 현탁제, 비강세척제 등과 같은 비경구 투여용 제제의 형태로 제형화할 수 있다.

경구 투여의 목적으로 본 발명의 유효성분을 정제, 캅셀제, 츄잉정, 분말제, 액제, 현탁제 등의 제제로 제형화하는 경우에는, 아라비아 고무, 옥수수 전분, 미세결정질 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 인산이칼슘 또는 락토스와 같은 부형제, 알긴산, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 붕해제, 스테아르산마그네슘과 같은 활택제, 슈크로스 또는 사카린과 같은 감미제 및 페퍼민트, 메틸 살리실산염 또는 과일향과 같은 향미제가 포함될 수 있다. 단위 투여형이 캅셀제인 경우에는 상기 성분 외에도 폴리에틸렌글리콜 또는 지방유와 같은 액상 담체가 포함될 수도 있다.

또한, 비경구 투여를 위한 용액 또는 현탁액 형태의 주사제는 비경구적으로, 예를 들면 피하, 정맥 내, 근육 내 또는 복강 내로 투여될 수 있다. 일반적으로, 주사가능한 용액 또는 현탁액은 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 설탕 용액제, 비휘발성 오일, 에탄올, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜과 같은 글리콜류 등의 약제학적으로 허용되는 액상 담체 중에 유효량의 유효성분을 균질하게 혼합시켜 제조할 수 있다. 이외에도 필요에 따라 가용화제, 항세균제, 킬레이트제, 완충제, 보존제와 같은 보조제를 포함시킬 수도 있다.

상기 약제학적으로 허용되는 담체로는 약제학적으로 순수하고, 실질적으로 무독성이며, 유효성분의 작용을 저해하지 않는 임의의 모든 보조제를 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물은 천연추출물로서, 동물실험 결과 모든 용량에서 특이한 증상을 보이지 않아, 생체에 무독하고 어떠한 부작용도 유발하지 않는 것으로 나타났다. 따라서 본 발명의 예방 또는 치료제는 상기한 약학적 제제 외에도, 기존의 청량 음료, 미네랄 워터, 알콜 음료 등의 음료 제품 또는 츄잉껌이나 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등에 적당량 배합하거나, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강 보조 식품, 또는 식품 첨가제 등에 포함시켜 식품 또는 식품 보조제의 형태로 제조할 수도 있다.

본 발명에 따른 예방 또는 치료제의 1일 투여용량은 투여하고자 하는 대상의 질환의 중증도, 합병증, 체중, 연령, 성 등의 다양한 요인에 따라 변화될 수 있으나, 일반적으로는 혼합추출물 1 내지 1,000 ㎎/㎏, 바람직하게는 10 내지 500 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 10 내지 100 ㎎/㎏을 1일 1 내지 3회 경구투여할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하나, 이들은 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물의 제조

두릅은 2009년 3월부터 5월에 걸쳐 경북 상주일대에서 재배하고 있는 것을 채취하고 경북대학교 천연물화학연구실에서 동정하여 보관 중인 표본(표본번호 KNUNPC-AE-09-001)을 사용하였다. 두릅은 통풍이 잘 되는 곳에서 음건한 다음 건조된 두릅 3.12 ㎏을 95% 에탄올로 78 ℃에서 3시간 동안 3회 추출하였다. 이 용액을 합치고 여과하여 회전농축기로 감압 농축하여 에탄올 가용성 성분을 얻었다.

목과는 2009년 9월 대구소재 약령시에서 구입하여 경북대학교 천연물화학연구실에서 동정하여 보관 중인 표본(표본번호 KNUNPC-CF-09-001)을 사용하였다. 건조된 모과 2.7 ㎏을 95% 에탄올로 78 ℃에서 3시간 동안 3회 추출하였다. 이 용액을 합치고 여과하여 회전농축기로 감압 농축하여 에탄올 가용성 성분을 얻었다.

감초는 대구소재 한약재 시장에서 구입하여 경북대학교 천연물화학연구실에서 동정하여 보관 중인 표본(표본번호 KNUNPC-GR-06-001)을 사용하였다. 건조된 감초 4 ㎏을 세절하여 95% 에탄올로 환류응축기를 사용하여 수욕 중에서 3시간 동안 3회 추출하였다. 이 용액을 합치고 여과하여 회전농축기로 감압 농축하여 에탄올 가용성 성분을 얻었다.

상기에서 얻어진 세 가지 추출물을 1:1:1의 중량비로 혼합하여 혼합추출물(ACG)을 제조하였다.

실시예 2: 경질 캅셀제의 제조

실시예 1의 혼합추출물의 10배 농축물 10 ㎎

D-소르비톨 10 ㎎

락토스 5 ㎎

콜로이달실리콘디옥사이드 5 ㎎

스테아르산마그네슘 3 ㎎

총량 33 ㎎

통상적인 캅셀제의 제조방법에 따라 상기 성분들을 지정된 양으로 배합한 후, 1 캅셀 당 33 ㎎의 배합물이 되도록 적절한 크기의 경질 젤라틴 캅셀에 충진하여 목적하는 캅셀제를 제조하였다.

실시예 3: 정제의 제조

실시예 1의 혼합추출물의 10배 농축물 10 ㎎

D-소르비톨 10 ㎎

락토스 5 ㎎

콜로이달실리콘디옥사이드 5 ㎎

스테아르산마그네슘 3 ㎎

총량 33 ㎎

상기 성분들을 지정된 양으로 혼합한 후, 통상적인 정제의 제조방법에 따라 정제를 제조하였다.

실시예 4: 연질 캅셀제의 제조

실시예 1의 혼합추출물의 10배 농축물 10 ㎎

콩기름 100 ㎎

팜유 76 ㎎

총량 186 ㎎

상기 성분들을 지정된 양으로 배합한 후, 통상의 연질 캅셀제 제조방법에 따라 연질 캅셀제를 제조하였다.

실시예 5: 주사제의 제조

실시예 1의 혼합추출물의 10배 농축물 10 ㎎

토코페롤 172 ㎎

셀레늄 30 ㎎

주사용 증류수 적량

PH 조정제 적량

1 바이알 (10 ㏄)의 주사에 상기 성분들을 통상적인 주사제 제조방법에 따라 제조하였다.

실험예 1: MCAO(middle cerebral artery occlusion)법에 의한 허혈/재관류 후의 뇌경색에 대한 ACG의 억제효과 측정

300±5 g의 스프래그-도울리(Sprague-Dawley, SD) 랫트를 1-2% 이소플루란(N₂O:O₂=4:1)으로 흡입마취한 후, 외과적 수술로 오른쪽 경동맥을 조심스럽게 노출시켰다. 외경동맥에서 중앙부로 분지되는 서혜동맥과 외경동맥에서 내경동맥 쪽으로 분지되는 갑상선 동맥을 전기소작하여 결찰하였다. 내경동맥의 위쪽으로 Y자 모양의 분지가 확인될 때까지 주변을 잘 정리한 후, 외경동맥의 머리쪽 부분을 실로 묶어 혈류 흐름을 차단하고 총경동맥과 내경동맥 사이의 혈류 흐름을 방지하기 위해 위 아래를 클립으로 막았다. 이후 총경동맥에 작은 구멍을 내어 탐침(probe)을 삽입한 후 탐침과 외경동맥의 아래 부분을 출혈이 되지 않을 정도로만 실로 살짝 묶은 후 혈류를 막았던 클립을 제거하였다. 탐침을 삽입한 구멍과 외경동맥을 묶은 부분 사이를 자른 후 외경동맥에 삽입된 탐침을 내경동맥 쪽으로 조심스럽게 삽입하였다. 내경동맥 위쪽에서 Y자 모양으로 분지되는 혈관 중 안쪽 혈관으로 탐침을 삽입하였다. 탐침은 총경동맥 분지로부터 20 ㎜만 삽입하였다. 수술 직후 직장체온을 재었으며 이후 6시간 동안 히팅 패드(heating pad)를 이용하여 체온을 37±0.5 ℃로 유지하였다. 결찰(occlusion) 2시간 후에 탐침을 제거하여 재관류(reperfusion)시켰다. 24시간 후 랫트를 탈골치사시킨 후 뇌를 분리하여 뇌 기질(bone matrix)을 이용하여 2 ㎜ 두께로 자른 후 2% TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) 용액으로 37 ℃에서 30분간 염색한 후 디지털카메라로 촬영하여 이미지 분석 시스템을 이용하여 경색 부피 및 부종 부피를 측정하였다.

경색 부피 = [(우측 정상조직 부피 - 좌측 정상조직 부피) / 우측 정상조직 부피] × 100

그 결과를 도 1 내지 3에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 좌측에서 첫 번째 줄의 뇌조직은 아무것도 처리하지 않은 상태에서 뇌허혈을 유도하였을 때 좌측 반구에 뇌경색이 하얗게 생겼음을 알 수 있고, 이에 비해 좌측에서 두 번째 및 세 번째 줄의 뇌는 ACG 10, 50 ㎎/㎏을 동맥 결찰 전 30분 및 결찰 후 1시간, 및 결찰 제거 후 1시간에 경구로 투여한 동물의 뇌로, 경동맥 결찰에 의하여 유발되는 뇌허혈로 인한 뇌경색을 현저히 억제하였음을 알 수 있다.

또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 대조군은 339.7 ㎣의 경색부피를 나타낸데 비하여, ACG 10 ㎎/㎏ 투여군은 142.9 ㎣, 50 ㎎/㎏ 투여군은 53.9 ㎣의 경색부피를 나타내어, 용량의존적으로 경색을 억제하는 것을 알 수 있었다.

또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 대조군의 뇌부종 부피는 77.4 ㎣인데 비하여 ACG 10 ㎎/㎏ 투여군은 30.2 ㎣, 50 ㎎/㎏ 투여군은 10.7 ㎣으로 뇌부종을 현저히 감소시켰다.

결론적으로, ACG는 허혈/재관류에 의하여 경색을 일으킨 랫트 뇌조직의 경색 부피 및 부종 부피를 현저히 감소시킨다.

실험예 2: 수동회피시험(스텝쓰루(Step through)법)에 의한 기억 및 학습의 측정

수동회피시험(Passive Avoidance Test)은 기억 및 학습에 미치는 약물의 효과를 측정하는 방법 중 설치류에 사용하는 가장 일반적이면서도 우수한 실험법 중의 하나이다. 스텝쓰루 장치(Step through apparatus)(Gemini II avoidance system, Sandiego Instrument)는 두 구획(25(W) × 21(D) × 19(H) ㎝)으로 나누어진 셔틀 박스(shuttle box)로 양측은 포토셀-가아디드 게이트(photo cell-guarded gate)로 연결되어 있으며, 바닥은 그리드(grid)로 이루어져 있다. 한 쪽은 조명을 사용하여 밝은 환경을 조성하고 문을 통한 다른 쪽은 어두운 환경으로 하며 어두운 박스의 그리드를 통하여 전기자극을 가하였다.

동물로는 ICR 마우스를 사용하였으며, 구입 후 일정기간의 적응기간을 가진 후 실험 첫날(0 일)에 ACG(10, 25 및 50 ㎎/㎏)를 경구투여하고, 30분 후에 27 게이지(gage)의 니들(needle)이 장착된 마이크로시린지(microsylinge)를 사용하여 1 mM Aβ(25-35) 15 ㎕(15 nmol)를 뇌실 내에 천천히 주입하였다. 그 후 1주일간 ACG를 1일 1회 경구투여하면서 동물을 밝은 상자에 놓아 양 구획에 적응하게 하는 적응시험을 3회 이상 실시하였다. 제7일에 ACG를 경구투여하고, 30분 후에 동물을 밝은 상자에 놓고 10초 후 문을 열고 동물이 어두운 상자로 들어오면 문이 닫히면서 전기자극(0.2 mA, 2초)이 가해지도록 하였다. 따라서 동물은 어두운 상자 내에서의 전기쇼크 경험을 기억하게 된다. 24시간 후에 동물을 밝은 상자에 넣어 같은 실험을 하면 전날의 쇼크를 기억하는 동물은 어두운 상자로 이동하지 않는다. 따라서 밝은 상자에서의 동물의 체재시간을 측정하여 기억형성의 지표로 삼으며, 5분 이상의 체재시간을 가지는 것은 5분으로 하였다.

그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4의 (A)에 나타낸 바와 같이, Aβ(25-35)(15 nmol)를 뇌실 내에 투여하고 1주일 후에 수동회피시험을 하면 투여하지 않은 군이 259초에 어두운 곳으로 가는 것에 비하여, Aβ(25-35) 투여군은 32초에 어두운 방으로 이동하였다. 이는 기억이 형성되지 않았음을 뜻한다. 이에 비하여, ACG 10, 25 및 50 ㎎/㎏을 매일 1주일간 투여한 군들은 용량 의존적으로 어두운 곳으로 들어가기까지의 시간이 증가하여, 10 ㎎/㎏ 투여군은 169초, 25 ㎎/㎏ 투여군은 205초, 50 ㎎/㎏ 투여군은 256초로, 모든 그룹이 유의성 있게 증가하여 Aβ(25-35)에 의한 기억손상을 억제함을 알 수 있었다. 이에 비해, 각 성분 단독의 기억손상 억제효과를 시험한 결과, 목과만이 25 및 50 ㎎/㎏ 투여군에서 유의성 있게 기억손상을 억제하였다(도 4의 (B)). 이는 목과에, 단독으로는 기억손상 억제효과가 없는 두릅과 감초를 배합함으로써 기억손상 억제효과가 증가하여 추출물 총량 기준으로 동일하거나 더 적은 용량의 ACG 추출물이 목과 추출물과 견줄만한 현저히 우수한 기억손상 억제효과를 나타내는 것을 의미하는 것이다. 이로써, 목과 추출물에 기억손상 억제효과가 없는 두릅과 감초의 추출물을 배합함으로써, 훨씬 적은 양의 목과 추출물을 사용하여 뛰어난 기억손상 억제효과를 나타낼 수 있는 것으로 확인되었다.

실험예 3: 수중미로(water maze)법에 의한 기억 및 학습의 측정

직경 90㎝, 깊이 40㎝의 원형수조를 4등분하고 한 구획에 높이 20㎝의 플랫폼을 설치하였다. 물의 온도를 20℃로 하여 플랫폼보다 1.5㎝ 높게 채운 후 전지분유로 불투명하게 하여 수면에서 플랫폼이 보이지 않게 하였다. 마우스를 임의로 그룹으로 나누고 각 구획에서 한 번씩 수영을 시작하게 하여 플랫폼을 찾아가게 하는 시험을 4구획에서 한 시간 간격으로 수행하여 그 시간을 측정하였다(예비값). 최대 수영시간을 2분으로 하여 플랫폼을 못 찾을 경우 인위적으로 플랫폼에 1분간 올려놓았다. 이튿날 실험예 2에서와 마찬가지로 마우스의 뇌실 내에 15 nmol의 Aβ(25-35)를 투여하고, 대조군에게는 멸균생리식염수를 투여하였다. ACG는 Aβ(25-35)를 투여하는 날부터 시작하여 수중미로 시험이 끝나는 날까지 매일 한 번씩 경구로 투여하였다. Aβ(25-35)를 투여하고 제5일째부터 매일 5일 동안(제1일부터 제5일로 표시됨) 예비시험과 같은 방법으로 각 마우스마다 플랫폼을 찾을 때까지의 시간을 한 시간 간격으로 4회 측정하여 평균값(latency time)을 측정하여 기억형성정도를 측정하였다.

그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 모든 그룹에 대하여 Aβ(25-35)(15 nmol)를 투여하기 전의 값(제0일)과 투여 후 실험 제5일째 값을 비교하면, 대조군이 110.3초에서 27.3초로 기억이 형성된 데 비하여, Aβ(25-35)만을 투여한 군은 112.2초에서 85.7초로 기억이 형성되지 않았음을 알 수 있었다. 이에 비해, ACG를 5일 동안 경구투여한 경우, 10 ㎎/㎏ 투여군은 103.0초에서 30.4초, 25 ㎎/㎏ 투여군은 94.6초에서 37.2초, 50 ㎎/㎏ 투여군은 105.0초에서 22.7초로 모든 투여군에서 기억이 형성되어 Aβ(25-35)에 의한 기억손상을 억제함을 알 수 있었다.

실험예 4: 신경세포 사멸 억제효과 측정 - MTT 측색 어세이

⑴ 대뇌피질 신경세포의 배양

임신 15 일의 랫트를 에테르 마취 하에서 태자를 꺼내고, 현미경 하에서 대뇌피질만을 분리하였다. 이를 트립신(0.25 ㎎/㎖)을 함유하는 조클릭-변형 이글즈 배지(Joklik-modified Eagle's medium)에 가하고, 5 ㎖ 피펫에 의해 기계적으로 분산하였다. 이를 37 ℃에서 10분간 배양하여 효소적 분리를 수행하였다. 세포 현탁액을 1,500 rpm으로 5분간 원심분리하여 얻은 세포를 함유하는 침전층에 중탄산나트륨(44 mM), 페니실린(40 U/㎖), 겐타마이신(50 g/㎖), KCl(5 mM) 및 10% 우태아혈청(FBS)을 함유하는 DMEM을 가하여 세포 농도를 2×10⁶ 세포/㎖로 조정하여, 나일론 메쉬(35 ㎛)를 통과한 후, 미리 폴리-L-리신으로 코팅한 배양용 용기에 심었다. 37 ℃, 5% CO₂/95% 공기를 유지하는 조건의 CO₂ 배양기에서 배양하였다.

⑵ 소뇌 과립세포(granule cell)의 신경세포 배양

생후 7~8일령의 SD 랫트의 소뇌 과립세포 부분만을 적출하여, 대뇌피질 신경세포 배양과 같이 우태아혈청(FBS)-DMEM 배지로 배양하되, FBS의 농도는 계속 10%로 유지하였다. 씨딩 후 2일째에 20 μM 시토신 아라비노사이드(cytosine arabinoside)를 함유하는 FBS-DMEM 배지로 치환하여 배양하고 배양 7~10일째에 실험하였다.

⑶ MTT 어세이(생존 세포 수 측정)

뇌경색에 대한 ACG의 억제효과를 설명하는 기전을 밝히기 위하여, 상기 ⑴의 배양 뇌세포를 사용하여 실험하였다. 모든 실험은 MTT(3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐-테트라졸륨 브로마이드) 어세이에 의하여 세포생존율을 측정하였다. 이 방법은 세포의 생존, 증식을 양적으로 측정하는 매우 민감하고 안정된 방법으로서, 살아있는 세포 내에서 노란색의 수용성 기질 MTT를 진한 파란색의 포마잔(formazan)으로 전환시키는 미토콘드리아의 활성을 근거로 하는 것이다. 따라서 생성되는 포마잔의 양은 살아있는 세포의 수와 비례하며, 흡광도가 높을수록 살아있는 세포수가 많은 것이다.

약물 처리후 일정시간 동안 배양한 세포의 배지를 제거한 후, MTT(0.5 ㎎/㎖) 용액을 가하고 4시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 이후 MTT 용액을 제거하고 200 ㎕의 산-이소프로판올(이소프로판올 중 0.04 N HCl)을 모든 웰에 가하여 형성된 진한 푸른색의 포마잔 결정을 용해시킨 후, 마이크로엘라이자 리더(microelisa reader)에 의하여 파장 570 ㎚(참조파장 630 ㎚)에 의하여 흡광도를 측정하였다. 이 때 약물처리를 하지 않은 세포를 대조군(control)으로 하여 이를 100%로 하였을 때 H₂O₂, 글루타메이트, 저산소증 및 Aβ(25-35), 및 이들과 ACG를 함께 처리한 세포군의 흡광도를 %로 나타내었다.

⑷ 과산화수소-유도 신경세포사에 대한 억제효과 측정

허혈성 뇌손상을 설명하기 위하여, 배양된 대뇌피질 신경세포에 과산화수소(H₂O₂)(100 μM)를 15분 동안 가하고 다시 세척하여 H₂O₂-결핍 및 FBS-결핍 배지에서 12시간 배양하여 산화성 스트레스(oxidative stress)를 가하고, 이에 의한 상기 ⑴의 배양 신경세포의 세포사에 대한 ACG의 억제효과를 조사하였다.

그 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6의 (A)에 나타낸 바와 같이, 대조군(100%)에 비하여 H₂O₂를 가한 신경세포는 57.8%의 생존율을 보이는 세포사를 유발하였으며, 1 ㎍/㎖ ACG에 의하여 76.2%, 10 ㎍/㎖ ACG에 의하여 81.0%, 50 ㎍/㎖ ACG에 의하여 102.2%의 세포생존율을 보였다. 이로부터 ACG가 산화적 스트레스성 뇌신경세포사를 억제함을 알 수 있었다. 한편, 각 성분의 H₂O₂-유도세포독성에 대한 억제효과를 조사한 결과, 두릅은 100 ㎍/㎖의 높은 농도에서 ACG 50 ㎍/㎖과 유사한 정도의 효과를 나타내었으며(도 6의 (B)), 감초도 100 ㎍/㎖의 높은 농도에서 약 50%(56.1%에서 80.0%)의 세포사 억제를 나타내는 약한 효과를 나타내었으며(도 6의 (C)), 목과는 H₂O₂-유도 세포독성을 전혀 억제하지 못하였다. 이로써, 두릅과 감초 추출물에 H₂O₂-유도 세포독성 억제효과가 없는 목과 추출물을 배합함으로써, 훨씬 적은 양의 두릅 및 감초 추출물을 사용하여 뛰어난 H₂O₂-유도 세포독성 억제효과를 나타낼 수 있는 것으로 확인되었다.

⑸ 글루타메이트-유도 신경세포사에 대한 ACG의 억제효과 측정

뇌경색 등의 퇴행성 뇌질환에서는 흥분성 아미노산인 글루타메이트가 다량 유리되어 신경세포사를 일으킴이 알려져 있다. 따라서 상기 ⑴의 배양 대뇌피질 뇌세포에 글루타메이트(500 μM)를 가하고 8시간 배양하여 이로 인한 신경세포사에 대한 ACG의 억제효과를 조사하였다.

그 결과를 도 7에 나타내었다. 도 7의 (A)에 나타낸 바와 같이, 대조군(100%)에 비하여 글루타메이트 처리군은 69.3%의 생존율을 나타내었다. 이에 비하여 ACG 0.1 ㎍/㎖에 의하여 83.6%, 1 ㎍/㎖에 의하여 88.9%, 10 ㎍/㎖에 의하여 거의 완벽하게 세포사를 억제하여 98.4%, 50 ㎍/㎖에 의하여서는 115.8%까지 오히려 글루코스-결핍 HEPES 완충액에서 배양하는 가혹한(severe) 조건에서 일어나는 세포사까지 억제하는 양상을 나타내었다. 즉, ACG는 10 ㎍/㎖의 낮은 농도에서도 글루타메이트에 의한 세포사를 완벽하게 억제함을 알 수 있었다. 한편, 각 성분에 대한 효과를 조사한 결과, 두릅(AE)만이 10 ㎍/㎖ 농도에서 약한 글루타메이트-유도 세포독성의 억제효과를 나타내었으며(도 7의 (B)), 다른 성분들은 전혀 효과가 없었다. 이로써, 두릅 추출물에 글루타메이트-유도 세포독성 억제효과가 없는 목과 및 감초 추출물을 배합함으로써, 훨씬 적은 양의 두릅 추출물을 사용하여 뛰어난 글루타메이트-유도 세포독성 억제효과를 나타낼 수 있는 것으로 확인되었다.

⑹ 저산소증(hypoxia)-유도 신경세포사에 대한 ACG의 억제효과 측정

허혈의 조건을 충족하기 위하여, 상기 ⑵의 배양 소뇌 과립세포의 신경세포를 저산소증의 조건을 만드는 챔버에 배양하여 세포사를 유발하고 이에 대한 ACG의 억제효과를 조사하였다. 즉, 배양한 소뇌 과립세포를 시토신 아라비노사이드를 함유하는 배양배지로 교환한 후 제5-7일에 배지를 글루코스-결핍 HEPES 완충액으로 갈아준 후 2% O₂, 5% CO₂, 93% N₂를 유지하는 저산소성 챔버에 웰 플레이트를 넣고, 챔버 내에서 24시간 배양하였다. 그 후 배지를 무혈청(serum-free) DMEM으로 교환하고 5% CO₂ 인큐베이터에서 6시간을 더 배양하고 MTT 어세이를 통하여 세포 생존율을 측정하였다. 대조군으로는 무혈청 DMEM 및 글루코스-결핍 HEPES 완충액으로 치환한 세포를 5% CO₂ 인큐베이터에 같은 시간 동안 노출시킨 것으로 하였다.

그 결과를 도 8에 나타내었다. 도 8의 (A)에 나타낸 바와 같이, 저산소증에 의하여 43.6%의 세포생존율을 보였으며, 이에 대하여 ACG 1, 10, 50 ㎍/㎖은 각각 55.6, 63.0, 74.6%의 뇌세포 생존율을 보여 저산소증에 의한 세포사를 용량의존적으로 억제함을 알 수 있었다. 각 성분에 대한 효과를 조사한 결과, 두릅은 50 ㎍/㎖의 높은 농도에서 ACG의 50 ㎍/㎖과 유사한 정도의 효과를 나타내었고(도 8의 (B)), 모과는 10 ㎍/㎖에서 약하게 억제하였으며(도 8의 (C)), 감초는 10 ㎍/㎖에서 우수한 효과를 나타내었다. 감초가 저산소증에 의해 유도된 신경세포사를 억제하는 효과를 갖는다는 것 자체가 전혀 알려진 바 없었던 것으로서, 미미한 정도의 억제효과만을 나타내는 두릅과 모과에 우수한 억제효과를 나타내는 감초를 배합함으로써, 역시 우수한 억제효과를 거둘 수 있는 것으로 확인되었다.

⑺ Aβ(25-35)-유도 신경세포사에 대한 ACG의 억제효과 측정

Aβ(25-35)를 마우스의 뇌실에 투여하여 기억손상을 야기하였으며, 이에 대하여 ACG를 경구로 만성투여하면 기억손상을 억제함을 상기 실험예 2에서 알 수 있었다. 이에 생화학적 기전을 밝히기 위한 실험으로, 대뇌피질 신경세포를 배양하고, 10 μM Aβ(25-35)에 의한 세포사를 유발하고 이에 대한 ACG의 억제효과를 조사하였다.

그 결과를 도 9에 나타내었다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 10 μM Aβ(25-35)를 처리하면 대조군(100%)에 비하여 70.2%의 세포생존율을 보였고, 이에 대하여 ACG를 배양신경세포에 처리하면, 1, 10, 50 ㎍/㎖에 의하여 각각 75.2, 85.1, 103.6%로 생존율을 회복시켰다(도 9의 (A)). 각각의 성분에 의한 10 μM Aβ(25-35)-유도 세포독성에 대한 억제효과를 살펴보면, 두릅(AE) 및 모과(CS)가 10 ㎍/㎖에서 약하게 회복시켰으며 이 농도 이상에서는 오히려 심한 독성을 야기하였다. 감초는 25 및 50 ㎍/㎖의 농도에서 우수한 억제효과를 나타내었다(도 9의 (B), (C) 및 (D)). 감초가 Aβ에 의해 유도된 신경세포사를 억제하는 효과를 갖는다는 것 자체가 전혀 알려진 바 없었던 것으로서, 미미한 정도의 억제효과만을 나타내고 일정 농도 이상 사용 시 심한 독성을 야기하는 두릅과 모과에 감초를 배합함으로써 탁월한 억제효과를 거둘 수 있는 것으로 확인되었다.

상기 결과들로부터, 본 발명에 따른 두릅, 목과 및 감초의 혼합추출물은 뇌경색, 뇌허혈, 뇌졸중, 혈관성 치매와 같은 뇌혈관질환의 예방 또는 치료제로서 효과적으로 활용될 수 있음을 알 수 있었다.

Claims (5)

1. 유효성분으로서 두릅, 목과(Chaenomeles Fructus) 및 감초(Glycyrrhizae Radix)의 에탄올 추출물을 0.5~2 : 0.5~2 : 0.5~2의 중량비로 함유하는, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물은 두릅, 목과 및 감초를 혼합한 후 이 혼합물을 에탄올로 추출하거나, 두릅, 목과 및 감초를 각각 에탄올로 추출한 후 이 추출물을 혼합한 것인, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물.
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 두릅, 목과 및 감초의 에탄올 추출물을 1 : 1 : 1의 중량비로 함유하는, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 두릅은 두릅나무(Aralia elata)의 전초(全草) 또는 식용의 순(筍)인 것인, 뇌경색, 뇌부종, 뇌허혈 또는 혈관성 치매의 예방 또는 치료용, 기억손상 개선용, 또는 뇌신경세포 보호용 조성물.

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