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KR101133769B1 - 신규한 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물 - Google Patents

신규한 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물 Download PDF

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KR101133769B1
KR101133769B1 KR1020110035774A KR20110035774A KR101133769B1 KR 101133769 B1 KR101133769 B1 KR 101133769B1 KR 1020110035774 A KR1020110035774 A KR 1020110035774A KR 20110035774 A KR20110035774 A KR 20110035774A KR 101133769 B1 KR101133769 B1 KR 101133769B1
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이경
최정호
이우송
이승웅
박수진
장종선
정화영
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한국생명공학연구원
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Abstract

본 발명은 신규한 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법, 및 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 신규 화합물은 염증성 질환 및 암을 유발하는 신호전달과정에서 중요한 매개자로 작용하는 IL-6 또는 IL-11 신호전달 체계를 저해하는 활성이 우수하므로, 항암제 및 항염증제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

신규한 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물 {New oxazolidin and indole compounds, process for the preparation thereof and pharmaceutical composition comprising the same}
본 발명은 신규 합성 화합물인 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물들, 이들의 합성방법 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항염증 및 항암제에 관한 것이다.
인터류킨-6 (IL-6) 는 B 세포 자극 인자 2 (BSF2) 또는 인터페론β2 (INF-β2)로도 불리는 사이토카인이다. IL-6는 B 임파구의 활성화에 관여하는 분화인자로서 발견되었다 (Hirano, T. et al., Nature (1986) 324, 73-76). 그 후, 여러 가지 세포의 기능에 영향을 미치는 다기능 사이토카인이라는 것이 밝혀졌다 (Akira, S. et al., Adv. in Immunology (1993) 54, 1-78). IL-6는 세포막위에 두 종류의 단백질을 매개로 그 생물학적 활성을 전달한다. 하나는 IL-6가 결합하는 단백질인 IL-6 수용체이다. IL-6 수용체는 세포막을 관통하여 발현되어있는 분자량 약 80kD의 막결합형 단백질이다. 다른 하나는, 비리간드 결합성의 시그날 전달에 속하는 분자량 약 130kD의 막단백질 gp130 이다. IL-6와 IL-6 수용체는 IL-6/IL-6 수용체 복합체를 형성하고, 이어서 gp130과 결합한다. (Taga et al., J. Exp. Med. (1987) 166, 967). 리간드와 수용체들의 결합 후, 세포내에서는 Janus Kinases 2 (JAK2)가 인산전이반응(transphosphorylation)에 의해 활성화된다. 활성화된 JAK2에 의해 수용체 세포질 도메인(cytoplasmic domains)의 여러 타이로신 잔기(tyrosine residues)가 인산화 (phosphorylation)되고 이것은 SH2나 다른 인산타이로신 결합 모티프(phosphotyrosine binding motif)를 가지고 있는 STAT3 (signal transducers and activators of transcription 3)와 같은 세포질(cytoplasm) 내 단백질의 docking site 역할을 하게 된다. 수용체의 세포질 도메인(cytoplasmic domain)에 결합한 STAT3는 JAK2에 의해 인산화(phosphorylation)가 된 후 수용체에서 떨어져 나온다. 활성화된 STAT3들은 세포질내에 서로서로 결합하여 호모(homo-) 또는 헤테로다이머(heterodimer)를 이룬 후 핵(nucleus) 내로 들어가 목적 유전자의 인식 서열(recognition sequence)에 결합하여 전사(transcription)을 증가시킨다 (Levy, D.E., 등, Nat Rev Mol Cell Biol, 2002, 3, 651-62, Darnell, J.E., J.r., Science, 1997, 277, 1630-1635).
이러한 IL-6에 의해 유도되는 신호전달체계는 염증성 질환 및 여러 암 질환과의 관련이 보고되어 있으며, 따라서 IL-6에 의해 유도되는 신호전달체계의 억제는 치료적으로 유용하다. 현재, IL-6의 신호전달체계의 억제하는 기능에 대한 연구는 항 IL-6 R 항체가 가장 많이 연구되어 있다. 이 항 IL-6 R 항체는 류마티스성 관절염에 대하여 활액 세포 성장 억제제가 보고되었고 (국제특허공개 제98/11020호), 형질구 증가증, 초면역 글로불린 혈증, 빈혈, 신염, 악액질, 류마티스성 관절염, 목축업자 질병, 및 맥관증식신염과 같은 IL-6 산물에 기여하는 질병의 치료에 기술된 바 있다 (국제특허공개 제96/12503호). 다발성 경화증, 포도막염, 만성 갑상선염, 지연과민증, 접촉피부염 및 아토피성 피부염과 같은 민감성 T 세포 관련 질병의 예방/보호제에서도 기술되어있고 (국제특허공개 제98/42377호), 전신성 홍반증의 치료제를 기술하는 특허도 보고 있다 (국제특허공개 제98/42377호). 또한, 크론병의 치료제를 기술하는 보고에서도 (국제특허공개 제99/47170], 이것의 활성성분은 항-IL-6R 항체이었다. 췌장염의 치료제를 기술하고 있는 특허도 활성성분으로 보고되었고 (국제특허공개 제00/10607), 건선의 치료제를 기술하고 있는 특허인 국제특허공개 제02/3492호에서도 활성성분은 항-IL-6R 항체이다. 추가로, 연소성 특발성 위축증의 치료제를 기술하고있는 국제특허공개공보 제02/080969호에서도 이것의 활성성분은 항-IL-6R 항체이다. 그러나, 이들 단백질은 외래 단백질로서 인지되어질 수 있는 에피토프를 가질 수 있으며 치료제로서 사용될 경우 여전히 면역원성일 수 있다. 그러나 단백질이 아닌 작은 분자 화합물(small molecule compound)들은 이러한 면역체계에 인지되지 않아 현재 많은 연구가 이루어지고 있다.
또한 암과 관련되어 IL-6 신호전달체계는 그 중간 매개인자인 STAT3와 많은 관련이 있다. 이것은 골수종, 유방 암종, 전립선 암, 뇌 종양, 두경부 암종, 흑색종, 백혈병 및 림프종, 특히 만성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종을 포함하여 여러 형태의 암에 관여하는 것으로 보고되었다 (Niu, 등, Cancer Res., 1999, 59, 5059-5063). 쥐 및 인간 전립선 암 양쪽에서 유래된 세포들은 구조적으로 활성화된 STAT3을 갖는 것으로 밝혀졌으며, STAT3는 일부 급성 백혈병(Gouilleux-Gruart, V. 등, Leuk.Lymphoma, 1997, 28, 83-88) 및 T 세포 림프종 (Yu,C.L.등, J.Immunol., 1997, 159, 5206-5210) 에서 구조적으로 활성화되는 것으로 밝혀졌다. 흥미롭게도, STAT3은 만성 림프성 백혈병에서 세린 잔기 위에 구조적으로 인산화 되는 것으로 밝혀졌다 (Frank, D.A., 등, J.Clin.Invest., 1997, 100, 3140-3148). STAT3은, 다발성 골수종을 가진 환자로부터의 골수 단핵 세포 및 배양액 양쪽 모두에서, 골수종 종양 세포에서 구조적으로 활성인 것으로 밝혀졌다. 이러한 세포는 Fas-매개 세포고사에 내성이고 높은 수준의 Bcl-xL을 발현한다. STAT3 시그날링은 세포고사에 대한 내성을 부여함으로써 골수종 종양 세포의 생존을 위해 필수적인 것으로 밝혀졌다 (Catlett-Falcone, R. 등, Immunity, 1999, 10, 105-115). 한편, 최근에는 췌장암을 비롯한 Ras 에 의해 유도되는 암 환자군에서 이상적으로 IL-6가 분비되고, IL-6를 제거함으로서 Ras에 의한 종양세포의 성장과 혈관생성이 억제될 뿐 아니라 종양의 크기가 감소됨이 보고되었다 (Brooke Ancrile 등, Gene & Development, 2007, 21, 1714-1719). 또한 EGFR이 변이된 폐 선암(lung adenocarcinoma)에서 IL-6가 과발현됨으로서 STAT3가 활성화됨이 밝혀지면서 IL-6에 의한 gp130/JAK/STAT3 경로가 항암치료에 있어서 새로운 타켓으로 부각되고 있다 (Sizhi Paul Gao 등, J. Clin. Invest. 2007, 117, 38463856).
한편, 인터류킨-11 (IL-11)은 IL-6 family에 속해 있는 염증성 사이토카인으로 IL-6와 거의 같은 신호전달체계를 갖는 것으로 조혈, 면역반응, 염증 및 각종 암세포에서 그 발현이 증가되어 암 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 알려지고 있다 (Jackson CB 등 J Pathol 2007, 213, 140-151). 최근 IL-11이 그 수용체인 IL-11Rα와 gp130에 결합하여 위암, 대장암 세포 증식 및 암 침윤을 촉진시키는 작용이 있음이 보고되었고 (Nakayama T 등 Int J Oncol, 2007, 30, 825-833, Yoshizaki A 등, Int J Oncol 2006, 29, 869-876), Ernst 등은 IL-11/Stat3 신호에 의해 smad7이 활성화되고 동시에 TGF β 시그날을 유도하는 smad activator가 차단됨으로서 oncogenic program (antiapoptotic gene, proangiogenic gene, proliferative gene)이 활성화되어 염증관련 위종양이 유도된다고 보고하였다(Ernst 등 J. Clin. Invest 2008, 118(5), 1728-1738). 따라서 IL-11에 의한 gp130/JAK/STAT3 경로가 항암치료에 있어서 새로운 타켓으로 부각되고 있다.
이에, 본 발명자들은 유기합성 시료로 부터 IL-6 및 IL-11에 의해 유도되는 신호전달체계의 저해제를 탐색한 결과, 신규 합성한 옥사졸리딘계 및 인돌계 화합물들이 IL-6 및 IL-11에 의해 유도되는 신호전달체계를 저해하는 활성이 우수하므로 염증성 질환 및 암 치료제로 유용하다는 것을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 신규한 옥사졸리딘계, 인돌계 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 하나의 목적은 상기 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 염증성 질환 또는 암의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 옥사졸리딘계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
<화학식 1>
Figure 112011028633390-pat00001
상기에서 R1은 수소 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고; R2는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고; R3는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고; R4는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이다.
보다 바람직하게는, 상기 R1은 아이소프로필 또는 벤질이고; R2는 C1-5의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고; R3는 수소이고; 및 R4는 C1, C4-7알킬, 아이소프로필, 또는 벤질이다.
본 발명의 화학식 1의 화합물 중 바람직한 화합물은 구체적으로 하기와 같다:
1) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2,4-디메틸펜트-4-에노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4a),
2) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2,5-디메틸-4-메틸렌헥사노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4b),
3) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌옥타노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4c),
4) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노나노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4d),
5) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌데카노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4e),
6) (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌운데카노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4f),
7) (S)-3-((2S,3S)-4-벤질-3-하이드록시-2-메틸펜트-4-에노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4g),
8) (S)-3-((2S,3S)-3-사이클로헥세닐-3-하이드록시-2-메틸프로파노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(4h),
9) (R)-3-((2R,3R)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노나노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(5),
10) (S)-4-벤질-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노나노일)옥사졸리딘-2-온(7a),
11) (S)-4-벤질-3-((2R,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노나노일)옥사졸리딘-2-온(7b), 및
12) (S)-3-((2S,3R)-3-하이드록시-2-메틸노나노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온(9).
화합물 R1 R4 4 2' 3'
4a CH(CH3)2 CH3 S S S
4b CH(CH3)2 CH(CH3)2 S S S
4c CH(CH3)2 C4H9 S S S
4d CH(CH3)2 C5H11 S S S
4e CH(CH3)2 C6H13 S S S
4f CH(CH3)2 C7H15 S S S
4g CH(CH3)2 benzyl S S S
4h CH(CH3)2 1-Cyclohexene S S S
5 CH(CH3)2 CH(CH3)2 R R R
7a benzyl C5H11 S S S
7b benzyl C5H11 S R S
9 CH(CH3)2 C6H15 S S R
본 발명의 화학식 1의 옥사졸리딘계 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 포함된다. 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 말레인산, 벤조산, 글루콘산, 글리콜산, 숙신산, 4-모폴린에탄술폰산, 캠포술폰산, 4-니트로벤젠술폰산, 히드록시-O-술폰산, 4-톨루엔술폰산, 칼룩투론산, 엠보산, 글루탐산, 아스파르트산 등을 사용할 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 인돌계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
<화학식 2>
Figure 112011028633390-pat00002
상기에서 R1은 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고; R2는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고; R3는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고; R4는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고; X는 수소, 할로겐, 하이드록시, 메톡시, 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고; Y는 산소이고; Z는 하이드록시, C1-10의 알콕시, -OCOCH3 또는 산소이고; 상기
Figure 112011069568910-pat00003
는 단일 또는 이중 결합이다.
보다 바람직하게는, R1은 하이드록시에틸 또는 터트-부틸디메틸실릴옥시에틸이고; R2는 C1-5의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고; R3는 수소이고; R4는 수소 또는 C1-5의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고; X는 수소, 할로겐, 하이드록시, 메톡시, 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고; Y는 산소이고; Z는 하이드록시, C1-5의 알콕시, -OCOCH3 또는 산소이고; 및 상기
Figure 112011069568910-pat00004
는 단일 또는 이중 결합이다.
본 발명의 화학식 2의 화합물 중 바람직한 화합물은 구체적으로 하기와 같다:
1) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온(13a),
2) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트(14a),
3) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트(15a),
4) (2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트(15b),
5) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온(16a),
6) (2S,3S)-3-하이드록시-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온(16b),
7) (2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올(17a),
8) (2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올(18a),
9) (2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올(18b),
10) (2S,3S)-3-하이드록시-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온(13b),
11) (2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트(14b) 및
12) (2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올(17b).
화합물 R1 Y Z 인돌유도체결합
13a (CH2)2-OTBS O H 단일결합
14a (CH2)2-OTBS O OCOCH3 단일결합
15a (CH2)2-OTBS O OCOCH3 이중결합
15b (CH2)2-OH O OCOCH3 이중결합
16a (CH2)2-OTBS O H 이중결합
16b (CH2)2-OH O H 이중결합
17a (CH2)2-OTBS H H 단일결합
18a (CH2)2-OTBS H H 이중결합
18b (CH2)2-OH H H 이중결합
13b (CH2)2-OH O H 단일결합
14b (CH2)2-OH O OCOCH3 단일결합
17b (CH2)2-OH H H 단일결합
본 발명의 화학식 2의 인돌계 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 포함된다. 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 말레인산, 벤조산, 글루콘산, 글리콜산, 숙신산, 4-모폴린에탄술폰산, 캠포술폰산, 4-니트로벤젠술폰산, 히드록시-O-술폰산, 4-톨루엔술폰산, 칼룩투론산, 엠보산, 글루탐산, 아스파르트산 등을 사용할 수 있다.
<반응식 1>
Figure 112011028633390-pat00005

<반응식 2>
Figure 112011028633390-pat00006

<반응식 3>
Figure 112011028633390-pat00007

<반응식 4>
Figure 112011028633390-pat00008

<반응식 5>
Figure 112011028633390-pat00009

<반응식 6>
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<반응식 7>
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<반응식 8>
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<반응식 9>
Figure 112011028633390-pat00013

<반응식 10>
Figure 112011028633390-pat00014

상기 각 반응 또는 모든 반응이 완결된 후의 생성물은 통상적인 후처리 방법, 예를 들면 크로마토그래피, 재결정화 등의 방법에 의해 분리 및 정제할 수 있다.
본 발명의 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물인 화학식 1과 인돌계 화합물인화학식 2는 합성방법에 의해 합성하여 사용하였으며, 통상적인 모든 방법에 의해 얻을 수 있고, 시판되는 시약을 사용할 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 염증성 질환 또는 암의 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화합물은 IL-6 또는 IL-11 에 의해 유도되는 신호전달체계를 억제하는 효과가 우수하므로, IL-6 또는 IL-11 에 의해 매개되는 질환, 특히 염증성 질환 또는 암 질환의 치료 또는 예방에 우수한 효과가 있다.
상기 염증성 질환은 류마티스 관절염, 골다공증, 형질구 증가증, 초면역 글로불린 혈증, 빈혈, 신염, 악액질, 목축업자 질병, 맥관증식신염, 다발성 경화증, 포도막염, 만성 갑상선염, 지연과민증, 접촉피부염 아토피성 피부염, 전신성 홍반증, 크론병, 췌장염, 건선, 연소성 특발성 위축증, 당뇨병 및 알쯔하이머를 포함하나, 이에 제한되지 않으며, IL-6 또는 IL-11 에 매개되는 모든 염증성 질환을 포함한다. 또한, 상기 암 질환은 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 흑색종, 백혈병, 림프종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 및 중추신경계 종양을 포함하나, 이에 제한되지 않으며, IL-6 또는 IL-11 에 매개되는 모든 암 질환을 포함한다.
본 발명의 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.0001 내지 10 중량%로, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량%를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 옥사졸리딘계 화합물인 화학식 1과 인돌계 화합물인 화학식 2를 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 옥사졸리딘계 화합물인 화학식 1과 인돌계 화합물인 화학식 2의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 옥사졸리딘계 화합물인 화학식 1과 인돌계 화합물인 화학식 2를 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물 또는 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 옥사졸리딘계 화합물인 화학식 1과 인돌계 화합물인 화학식 2의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물 또는 화합물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 IL-6 및 IL-11에 의해 유도되는 신호전달체계의 저해 활성을 가지는 화학식 1 의 옥사졸리딘계 또는 화학식 2의 인돌계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이들을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 류마티스 관절염, 골다공증, 형질구 증가증, 초면역 글로불린 혈증, 빈혈, 신염, 악액질, 목축업자 질병, 맥관증식신염, 다발성 경화증, 포도막염, 만성 갑상선염, 지연과민증, 접촉피부염 아토피성 피부염, 전신성 홍반증, 크론병, 췌장염, 건선, 연소성 특발성 위축증, 당뇨병 및 알쯔하이머을 포함하는 염증성 질환, 그리고 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 흑색종, 백혈병, 림프종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 및 중추신경계 종양을 포함하는 암의 예방 및 치료용 의약품으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물과 인돌계 화합물이 HepG2 세포에서 IL-6로 유도되어지는 루시퍼라제(luciferase)의 발현 저해활성의 IC50을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 화학식 4d로 표시되는 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물이 HepG2 세포에서 IL-11으로 유도되어지는 luciferase의 발현 저해활성을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 화학식 4d로 표시되는 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물이 HepG2 세포에서 IL-6 유도 STAT3 인산화 저해 활성을 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명에 따른 화학식 4d로 표시되는 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물이 U266 세포에서 IL-6 유도 JAK2 와 gp130 인산화 저해 활성을 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명에 따른 화학식 4d로 표시되는 아이소프로필옥사졸리딘계 화합물이 3T3L1 세포에서 인슐린 유도 아디포제네시스(adipogenesis)를 저해하는 IL-6 효과를 회복하는 활성을 나타낸 도이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 : 화학식 1과 2로 표시되는 화합물의 합성
< 실시예 1>
Figure 112011028633390-pat00015

3- 메틸 -2- 메틸렌부타날의 제조(2b)
1b 아이소발리알디하이드 (500 mg, 58mmol, 1eq)에 포말알디하이드 수용액 (0.434ml, 58 mmol, 1eq, 37%)과 다이메틸아민하이드로클로라이드 용액을 (440mg, 50mmol, 0.93 eq) 첨가하여 70℃로 48시간 교반 하였다. 반응이 완결된 것을 TLC로 확인하였다. 모든 화합물이 2b가 된 것을 확인한 후에 물을 첨가하여 반응을 정지 시킨 후, 다이에틸이터를 첨가하여 유기층을 분리하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시킨 후, 노란색 액체물질 2b (44-62%)을 얻었다. 컬럼을 하지 않고 바로 다음 반응에 교반시겼다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.52 (1H, s, -CHO), 6.23 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.94 (1H, s, -C=CHαHβ), 2.78 (1H, m, -CH(CH3)2), 1.07 (6H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)2)
2- 메틸렌헥사날의 제조(2c)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 2c (44-62%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.53 (1H, s, -CHO), 6.24 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.98 (1H, s, -C=CHαHβ), 2.23 (2H, t, J = 7.3 Hz, -CH 2CH2CH2CH3), 1.35-1.30 (4H, m, -CH2CH 2CH 2CH3), 0.90 (3H, t, J = 7.3Hz, -CH2CH2CH2CH 3)
2- 메틸렌헥타날의 제조(2d)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 2d(44-62%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.52 (1H, s, -CHO), 6.23 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.97(1H, s, -C=CHαHβ), 2.21 (2H, t, J = 7.8Hz, -CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.31-1.25 (6H, m, -CH2CH 2CH 2CH 2CH3), 0.87 (3H, t, J = 6.8Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3)
2- 메틸렌옥타날의 제조(2e)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 2e(65%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.52 (1H, s, -CHO), 6.23 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.97 (1H, s, -C=CHαHβ), 2.21 (2H, t, J = 7.8Hz, -CH 2CH2CH2CH2CH2CH3), 1.31-1.25 (8H, m, -CH2CH 2CH 2CH 2CH 2CH3), 0.87 (3H, t, J = 6.8Hz, -CH2CH2CH2CH2CH2CH 3)
2- 메틸렌노네놀의 제조(2f)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 2f(44-62%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.53 (1H, s, -CHO), 6.24 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.98 (1H, s, -C=CHαHβ), 2.22 (2H, t, J = 7.3 Hz, -CH2(CH2)4CH2CH3), 1.43 (2H, m, -CH2(CH2)4CH 2CH3), 1.18-1.30 (8H, m, -CH2(CH 2)4CH2CH3), 0.87 (3H, t, J = 6.8Hz, -CH2(CH2)4CH2CH 3).
2- 벤질아크릴알디하이드 (2g)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 2g (51%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 9.56 (1H, s, -CHO), 7.25-7.10 (5H, m, Ar-H), 6.05 (1H, s, -C=CHαHβ), 6.01 (1H, s, -C=CHαHβ), 3.50 (2H, s, Ar-CH 2C=CH2).
< 실시예 2>
Figure 112011028633390-pat00016

(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2,4- 디메틸펜트 -4- 에노일 )-4- 이소프로필옥사졸 리딘-2-온의 제조(4a)
다이클로로메탄 (1.1 ml)에 용해시킨, (R)-(+)4-아이소프로필-3-프로피놀-2-옥사졸리디논 3a (100 mg, 0.541 mmol, 1eq)을 얼음수조에서 빙냉 시킨 후, 1M 다이클로로메탄에 용해되어져 있는 다이부틸보론 트리플로로메탄 썰퍼네이트(596, 0.596 mmo)와 다이아이소프로필에틸아민(90.6, 0.650mmol, 1.2eq)을 천천히 적가하여 같은 온도에서 50분 동안 교반하였다. 교반시킨 반응 혼합물을 영하 78℃에서 10분 동안 냉각시킨 후, 다이클로로메탄 (0.70 ml)에 용해시킨 메틸아크로렌 2a (59.0, 0.704 mmol)를 영하 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 다시 얼음수조에서 빙냉 시킨 후 1시간 동안 교반한 후, pH 7.0 포스페이트 (1.2 ml), 메탄올 (1.1 ml), 30%wt 하이드로겐페록싸이드수용액(0.6 ml), 메탄올(1.1 ml)을 차례 대로 첨가하여 반응을 정지시킨다. 다시 얼음수조에서 1시간 더 교반시킨 후 다이클로로메탄과 물을 넣어 분리하여, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (18 % n-헥산:에틸아세테이트)하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 4a (68mg, 49%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.12 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.97 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.48 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.40 (1H, brs, -CH(OH)), 4.30 (1H, dd, J = 17.1, 8.3 Hz, -OCHαHβCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.97 (1H, dq, J = 7.3, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.11 (1H, brs, J = 2.4 Hz, -OH), 2.39-2.32 (1H, m, -CH(CH3)2), 1.72 (s, 3H, -C(=CH)CH 3), 1.18 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.92 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)2), 0.89 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)2).
(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2,5-디메틸-4- 메틸렌헥사노일 )-4- 이소프로필옥 사졸리딘-2-온의 제조(4b)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4b (43%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.19 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.04 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.48 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.46 (1H, brs, -CH(OH)), 4.30 (1H, dd, J = 17.1, 8.3 Hz, -OCHαH βCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.2, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.96 (1H, dq, J = 6.8, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.08 (1H, brs, -OH), 2.38-2.32 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.18-2.13 (1H, m, -C(=CH)CH(CH3)2), 1.19 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 1.09 (3H, d, J = 6.3 Hz, -C(=CH)CH(CH 3)2), 1.05 (3H, d, J = 6.8Hz, -C(=CH)CH(CH 3)2), 0.93 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)2), 0.89 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)2).
(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2- 메틸 -4- 메틸렌옥타노일 )-4- 이소프로필옥사졸 리딘-2-온의 제조(4c)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4c (16%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.16 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.97 (1H, s, -C=CHαH β), 4.46 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.41 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28 (1H, dd, J = 17.6, 9.2 Hz, -OCHαH βCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 6.8, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.13 (1H, brs, -OH), 2.38-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 1.98 (2H, m, -C(=CH)CH 2CH2CH2CH3), 1.46-1.40 (2H, m, -C(=CH)CH2CH 2CH2CH3), 1.35-1.23 (2H, m, -C(=CH)CH2CH2CH 2CH3), 1.17 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.91 (3H, d, J = 6.8Hz, -CH(CH 3)2), 0.87 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)2), 0.86 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)2), 0.85 (3H, t, J = 5.6Hz, -C(=CH)CH2CH2CH2CH 3).
(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2- 메틸 -4- 메틸렌노나노일 )-4- 이소프로필옥사졸 리딘-2-온의 제조(4d)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4d (84%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz δ 5.18 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.99 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50-4.47 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.42 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28 (1H, dd, J = 17.4, 9.0 Hz, -OCHαHβCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 7.3, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.15 (1H, brs, -OH), 2.39-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.04-1.90 (2H, m, -C(=CH)CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.49-1.43 (2H, m, -C(=CH)CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.34-1.28 (4H, m, -C(=CH)CH2CH2CH 2CH 2CH3), 1.18 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.93 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)2), 0.88 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)2), 0.88 (3H, t, J = 5.4 Hz, -C(=CH)CH2CH2CH2CH2CH 3).
(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2- 메틸 -4- 메틸렌데카노일 )-4- 이소프로필옥사졸 리딘-2-온의 제조(4e)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4e (87%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.18 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.99 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50-4.47 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.42 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28 (1H, dd, J = 17.4, 9.0 Hz, -OCHαHβCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 7.3, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.15 (1H, brs, -OH), 2.39-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.04-1.90 (2H, m, -C(=CH)CH 2CH2CH2CH2CH2CH3), 1.49-1.43 (2H, m, -C(=CH)CH2CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.34-1.28 (6H, m, -C(=CH)CH2CH2CH 2CH 2CH 2CH3), 1.18 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.93 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH3)2), 0.88 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)2), 0.88 (3H, t, J = 5.4 Hz, -C(=CH)CH2CH2CH2CH2CH2CH 3).
(S)-3-((2S,3S)-3- 하이드록시 -2- 메틸 -4- 메틸렌운데카노일 )-4- 이소프로필옥사 졸리딘-2-온의 제조(4f)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4f (41%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 5.18 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.99 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50-4.46 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.42 (1H, brs, -CH(OH)), 4.30 (1H, dd, J = 17.4, 9.1 Hz, -OCHαH βCHN), 4.23 (1H, dd, J = 9.1, 3.1 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 7.1, 2.8 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.12 (1H, brs, -OH), 2.37-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 1.95 (2H, m, -C(=CH)CH 2(CH2)5CH3), 1.19-1.26 (10H, m, -C(=CH)CH2(CH 2)5CH3), 1.18 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.93 (3H, d, J = 7.0 Hz, -CH(CH 3)2), 0.89 (3H, d, J = 6.72 Hz, -CH(CH 3)2), 0.86 (3H, t, J = 5.8 Hz, -C(=CH)CH2(CH2)5CH 3).
(S)-3-((2S,3S)-4-벤질-3- 하이드록시 -2- 메틸펜트 -4- 에노일 )-4- 이소프로필옥 사졸리딘-2-온의 제조(4g)
상기의 동일한 방법을 사용하여 노란색 액체물질의 4g(72%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 7.28 ( 5H, m, Ar-H), 5.33 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.98 (1H, s, -C=CHαH β), 4.42-4.41 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.39 (1H, d, J=3.3Hz, -CH(OH)), 4.25 (1H, dd, J=9.0,8.3Hz, -OCHαH βCHN), 4.19 (1H,dd,J=9.0,3.2Hz,-OCHαHβCHN), 4.01 (3H, dq, J=7.1,3.0Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.44 (1H, d, J=15.4Hz, -C(=CH)CHαHβPh), 3.30 (1H, d, J=15.4Hz, -C(=CH)CHαH βPh), 3.14 (1H, brs, -OH) ,2.35-2.29 (1H, m, -CH(CH3)2), 1.22 (3H, d, J=7.1Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.91(3H, d, J=7.1Hz,-CH(CH 3)2), 0.87 (3H, d, J=6.8Hz, -CH(CH 3)2).
< 실시예 3>
Figure 112011028633390-pat00017

다이클로로메탄 (1.5 ml)에 용해시킨, (R)-(+)4-아이소프로필-3-프로피놀-2-옥사졸리디논 3a (100 mg, 0.541 mmol, 1 eq)을 얼음수조에서 빙냉 시킨 후, 1M 다이클로로메탄에 용해되어져 있는 다이부틸보론 트리플로로메탄 썰퍼네이트 (596 , 0.596 mmo)와 다이아이소프로필에틸아민 (90.6 , 0.650 mmol, 1.2 eq) 을 천천히 적가하여 같은 온도에서 50분 동안 교반하였다. 교반시킨 반응 혼합물을 영하 78℃ 에서 10분 동안 냉각시킨 후, 다이클로로메탄 (0.70 ml)에 용해시킨 1-싸이클로헥센 카복실알디하이드 2h (92.25, 0.81 mmol)를 영하 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 다시 얼음수조에서 빙냉 시킨 후 1시간 동안 교반한 후, pH 7.0 포스페이트 (1.2 ml), 메탄올 (1.1 ml), 30%wt 하이드로겐페록싸이드수용액 (0.6 ml), 메탄올(1.1 ml)을 차례대로 첨가하여 반응을 정지시킨다. 다시 얼음수조에서 1시간 더 교반시킨 후 다이클로로메탄과 물을 넣어 분리하여, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (18 % n-헥산:에틸아세테이트)하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 4h (22.3 mg 14.8 %)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.81 (1H, t, J = 3. 4 Hz ,Cyclo = (CH2)), 4.50-4.47 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.42 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28 (1H, dd, J = 17.4, 9.0 Hz, -OCHαHβCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 7.3, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 2.93 (1H, brs, -OH), 2.40-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.07-2.05 (2H, m, -Cyclo(CH 2)), 1.927 (2H, t, J = 17.60 Hz, -Cyclo(CH 2)), 1.67-1.55 (4H, m, -Cyclo(CH 2CH 2), 1.18 (3H, d, J = 7.3 Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.93 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)2), 0.88 (3H, d, J = 7.1 Hz, -CH(CH 3)2).
< 실시예 4>
Figure 112011028633390-pat00018
다이클로로메탄 (2.0 ml)에 용해시킨, (R)-(-)4-아이소프로필-3-프로피놀-2-옥사졸리디논 3b (100 mg, 0.541 mmol, 1 eq)을 얼음수조에서 빙냉 시킨 후, 1M 다이클로로메탄에 용해되어져 있는 다이부틸보론 트리플로로메탄 썰퍼네이트 (596 , 0.596 mmo)와 다이아이소프로필에틸아민 (90.6 , 0.650 mmol, 1.2 eq) 을 천천히 적가하여 같은 온도에서 50분 동안 교반하였다. 교반 시킨 반응 혼합물을 영하 78℃에서 10분 동안 냉각시킨 후, 다이클로로메탄 (0.70 ml)에 용해시킨 2-메틸렌헵탈 2d (68.14 , 1.07 mmol)를 영하 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 다시 얼음수조에서 빙냉 시킨 후 1시간 동안 교반한 후, pH 7.0 포스페이트 (0.1 ml), 메탄올 (0.2 ml), 30%wt 하이드로겐페록싸이드수용액(0.2 ml), 메탄올(0.2 ml)을 차례대로 첨가하여 반응을 정지시킨다. 다시 얼음수조에서 1시간 더 교반시킨 후 다이클로로메탄과 물을 넣어 분리하여, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (15 % n-헥산:에틸아세테이트)하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 5 (146.3 mg 87.2 %)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.18 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.99 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50-4.47 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.42 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28(1H, dd, J = 17.4,9.0 Hz, -OCHαHβCHN), 4.22 (1H, dd, J = 9.3, 2.9 Hz, -OCHαHβCHN), 3.95 (1H, dq, J = 7.3, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 3.15 (1H, brs, -OH), 2.39-2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.04-1.90 (2H, m, -C(=CH)CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.49-1.43 (2H, m, -C(=CH)CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.34-1.28 (4H, m, -C(=CH)CH2CH2CH 2CH 2CH3), 1.18 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.93 (3H, d, J = 7.1Hz, -CH(CH3)2), 0.88 (3H, d, J=7.1Hz,-CH(CH 3)2), 0.88 (3H, t, J = 5.4 Hz, -C(=CH)CH2CH2CH2CH2CH 3).
< 실시예 5>
Figure 112011028633390-pat00019
다이클로로메탄 (1.5 ml)에 용해 시킨, (R)-4-벤질-3-프로피오닐옥사졸리딘-2-온 6 (100 mg, 0.43 mmol, 1 eq)을 얼음수조에서 빙냉 시킨 후, 1M 다이클로로메탄에 용해되어져 있는 다이부틸보론 트리플로로메탄 썰퍼네이트 (515 , 0.51 mmol)와 다이아이소프로필에틸아민 (104 , 0.60 mmol, 1.4 eq) 을 천천히 적가 하여 같은 온도에서 50분 동안 교반하였다. 교반 시킨 반응 혼합물을 영하 78℃에서 10분 동안 냉각시킨 후, 다이클로로메탄 (0.70 ml)에 용해시킨 2-메틸렌헵탈 2d (68.14 , 1.07 mmol)를 영하 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 다시 얼음수조에서 빙냉 시킨 후 1시간 동안 교반한 후, pH 7.0 포스페이트 (0.1 ml), 메탄올 (0.2 ml), 30%wt 하이드로겐페록싸이드수용액 (0.2 ml), 메탄올 (0.2 ml)을 차례대로 첨가하여 반응을 정지시킨다. 다시 얼음수조에서 1시간 더 교반시킨 후 다이클로로메탄과 물을 넣어 분리하여, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (18 % n-헥산:에틸아세테이트)하여 물질을 분리여 건조시켜 노란색 액체물질 7a (105mg, 68%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.36-7.33 (2H, m, Ar-H), 7.30-7.27 (1H, m, Ar-H), 7.22-7.21 (2H, m, Ar-H), 5.19 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.00 (1H, s, -C=CHαH β), 4.74-4.69 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.45 (1H, brs, -CH(OH)), 4.23 (2H, m, PhCH 2-), 3.96 (1H, dd, J = 10.2, 3.4 Hz, -OCHαHβCHN), 3.27 (1H, dd, J = 13.2, 3.4 Hz, -OCHαH βCHN), 3.01 (1H, brs, -OH), 2.81 (1H, dd, J = 13.2, 9.2 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 2.00 (2H, m, -C(=CH)CH 2(CH2)2CH2CH3), 1.48 (2H, m, -C(=CH)CH2(CH2)2CH 2CH3), 1.32 (4H, m, -C(=CH)CH2(CH 2)2CH2CH3), 1.20 (3H, d, J = 6.8 Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.90 (3H, t, J = 6.8Hz, -C(=CH)CH2(CH2)2CH2CH 3)
실시예5에서 얻은 잔사를 실리카켈컬럼크로마토그래피(18 % n-헥산:에틸아세테이트)에서 7a를 얻은 뒤, (12 % n-헥산:에틸아세테이트)에 7b (21mg, 14%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ7.36-7.33 (2H, m, Ar-H), 7.30-7.27 (1H, m, Ar-H), 7.22-7.21 (2H, m, Ar-H), 5.19 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.00 (1H, s, -C=CHαH β), 4.74-4.69 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.45 (1H, brs, -CH(OH)), 4.26-4.19 (2H, m, PhCH 2-), 3.95 (1H, dd, J=10.2, 3.4 Hz, -OCHαHβCHN), 3.27 (1H, dd, J = 13.7, 3.6 Hz, -OCHαH βCHN), 3.01 (1H, brs, -OH), 2.81 (1H, dd, J=13.2, 9.8 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 2.00 (2H, m, -C(=CH)CH 2(CH2)2CH2CH3), 1.48 (2H, m, -C(=CH)CH2(CH2)2CH 2CH3), 1.32 (4H, m, -C(=CH)CH2(CH 2)2CH2CH3), 1.20 (3H, d, J = 6.8 Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.90 (3H, t, J = 6.8 Hz, -C(=CH)CH2(CH2)2CH2CH 3).
< 실시예 6>
Figure 112011028633390-pat00020
다이클로로메탄 (1.5 ml)에 용해시킨, (S)-(+)4-아이소프로필-3-프로피놀-2-옥사졸리디논 3a (100 mg, 0.541 mmol, 1 eq)을 얼음수조에서 빙냉시킨 후, 1M 다이클로로메탄에 용해되어져 있는 다이부틸보론 트리플로로메탄 썰퍼네이트 (596 , 0.596 mmol)와 다이아이소프로필에틸아민 (90.6 , 0.650 mmol, 1.2eq) 을 천천히 적가하여 같은 온도에서 50분 동안 교반하였다. 교반 시킨 반응 혼합물을 영하 78°C 에서 10분 동안 냉각시킨 후, 다이클로로메탄 (0.70 ml)에 용해시킨 헥타날 8 (92.25 , 0.81 mmol)를 영하 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 다시 얼음수조에서 빙냉 시킨 후 1시간 동안 교반 한 후, pH 7.0 포스페이트 (1.2 ml), 메탄올 (1.1 ml), 30%wt 하이드로겐 페록싸이드수용액 (0.6 ml), 메탄올 (1.1 ml)을 차례대로 첨가하여 반응을 정지시킨다. 다시 얼음수조에서 1시간 더 교반 시킨 후 다이클로로메탄과 물을 넣어 분리하여, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (18 % n-헥산:에틸아세테이트)하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 9 (22.3 mg, 14.8%)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 5.54 (1H, t, J = 7.3 Hz, -CH(CH3)CH(OH), 4.48 - 4.41 (1H, m, -OCHαHβCHN), 4.39 (1H, brs, -CH(OH)), 4.28 (1H, dd, J = 17.6, 9.3 Hz, -OCHαH βCHN), 4.23 (1H, dd, J = 7.8, 2.9Hz, -OCHαHβCHN), 3.94 (1H, dq, J = 6.8, 2.9 Hz, -CH(CH3)CH(OH)-), 2.38 - 2.33 (1H, m, -CH(CH3)2), 2.10 - 2.01 (3H, m, -CHαHβCH 2(CH2)3CH3), 1.82 - 1.76 (1H, m, -CHαH βCH2(CH2)3CH3), 1.37 - 1.27 (6H, m, -CHαHβCH2(CH 2)3CH3), 1.17 (3H, d, J = 7.3Hz, -CH(CH 3)CH(OH)-), 0.92 (3H, d, J = 6.8 Hz, -CH(CH 3)2), 0.90 (3H, d, J = 7.3 Hz, -CH(CH 3)2), 0.87 (3H, t, J = 5.8 Hz, -CHαHβCH2(CH2)3CH 3).
< 실시예 7>
Figure 112011028633390-pat00021
(2S,3S)-3- 하이드록시 -2- 메틸 -4- 메틸렌노나노익 애시드의 제조(10d)
실시예 2에서 제조된 (S)-3-((2S,3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노나노일)-4-이소프로필옥사졸리딘-2-온 4d( 948 mg, 3.05 mmol)를 테트라하이드로퓨란 : 물 (27 ml : 27 ml)의 혼합물에 용해시키고, 상온에서 리튬히드록사이드(256 mg, 6.10 mmol)를 첨가하였다. 상온에서 12시간 동안 교반하여 반응을 완료시켰다. 감압 하에서 테트라하이드로퓨란을 제거하고 pH 7까지 중화시킨 후 반응혼합물에 에틸아세테이트를 첨가하여 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 액체물질 10d (647 mg, 106.1 %)를 바로 다음 반응에 첨가시켰다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 5.10 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.99 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.52 (1H, d, J = 3.4 Hz, -CH(CH3)CH-OH), 2.71 (1H, m, -CH(CH3)CH-OH), 2.02-1.93 (2H, m, -CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.48 (2H, m, -CH2CH2CH2CH 2CH3), 1.31 (4H, m, -CH2CH 2CH 2CH2CH3), 1.14 (3H, d, J = 37.3 Hz, -CH(CH 3)CH-OH), 0.90 (3H, t, J = 6.8 Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3).
< 실시예 8>
Figure 112011028633390-pat00022
2-( 인돌린 -3-일)에탄올의 제조(11)
아세틱에시드 (41.5 ml)에 용해 된 2-(3-인돌)-에탄올 (1.2 g, 7.06 mmol)을 얼음 수조에 넣어 빙냉시킨 후 소듐싸이아노보로하이드라이드 (2.2 g, 35.34 mmol)를 첨가하였다. 얼음 수조를 빼고 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인하고, 포화상태의 소듐바이오카보네이트 수용액을 첨가하여 반응을 정지 시켰다. 반응 혼합물을 중화시킨 다음, 에틸아세테를 넣어 유기층을 분리 하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n-헥산 : 에틸아세테이트 = 10 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 11 (432 mg 37.4 %)을 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 500 MHz) : δ 7.10 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.06 (1H, dd, J = 7.9, 7.3 Hz), 6.76 (1H, dd, J = 7.6, 7.3 Hz), 6.68 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.74 - 3.55 (3H, m), 3.44 (1H, m), 3.28 (1H, dd, J = 8.6, 5.9 Hz), 3.10 (1H, brs), 2.09 (1H, m), 1.79 (1H, m)
3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸) 인돌린의 제조(12)
2-(인돌린-3-일)에탄올 11 (365 mg, 2.23 mmol)을 다이클로로메탄에 녹인 후, 빙냉 시킨 얼음 수조에서 이미다졸 (182.6 mg, 2.68 mmol)과 터셔리-부틸다이메틸실릴 클로라이드 (404.2 mg, 2.68 mmol)를 차례대로 첨가하였다. 상온에서 3시간 동안 교반 시킨 후, 반응이 완결된 것을 확인하였다. 반응 혼합물에 물과 다이클로로메탄에 넣어 반응을 중지시킨 후, 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n-헥산 : 에틸아세테이트 = 20 : 1) 하여 물질을 분리하고 건조시켜 노란색 액체물질 12 (570.5 mg, 92.8 %)를 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 7.10 (1H, d , J = 7.9 Hz), 7.06 (1H, dd, J = 7.9, 7.3 Hz), 6.76 (1H, dd, J = 7.6, 7.3 Hz), 6.68 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.74 - 3.55 (3H, m), 3.44 (1H, m), 3.28 (1H, dd, J = 8.6, 5.9 Hz), 2.09 (1H, m), 1.79 (1H, m), 0.92 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.09 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
< 실시예 9>
Figure 112011028633390-pat00023
(2S,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸) 인돌린 -1-일)-3- 하이드록시 -2-메틸-4- 메틸렌노난 -1-온의 제조(13a)
3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린 12 (405 mg, 1.45 mmol) ,(2S, 3S)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸레노넥스 에스드 (438 mg, 2.18 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N`,N`-테트라메틸-우라늄 (832.4 mg, 2.18 mmol) 을 디메틸포름아미드 20.0 ml에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.17 ml, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 상온에서 교반시키고, 에틸아세테이트 및 염화나트륨 수용액으로 분리시키고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시킨 후, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(n-헥산 : 에틸아세테이트 = 10 : 1)로 정제하여 목적 화합물1 3 a (404 mg, 60.2 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.22 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.22 (2H, m, Ar-H), 7.09 (1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 5.27 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.02 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50 (1H, brs, HC-OH), 4.27 (1H, t, J = 6.35 Hz, -CHαHβ-OTBS), 3.92 (1H, q, J = 5.86, 4.4 Hz, -CHαHβ-OTBS), 3.87-3.76 (2H, m, -N-CH 2), 3.56 - 3.53 (1H, m, -CO-CH(CH3), 2.80 (1H, m, Ar-CH), 2.01 (2H, m, -CH 2-CH2-OTBS), 2.91 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.82 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.51 (2H, m, -CH 2-CH3), 1.34-1.32 (4H, m, -CH 2CH 2CH2CH3), 1.21 (3H, d, J = 6.84 Hz, C=O-CH(CH 3), 1.19 (3H, t, J = 7.33 Hz, CH2CH 3), 0.90 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.09 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
(2S,3S)-3- 하이드록시 -1-(3-(2-하이드록시에틸) 인돌린 -1-일)-2- 메틸 -4- 메틸 렌노난-1-온의 제조(13b)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온 13a (54.5 mg, 0.12 mmol)을 테트로하이드로퓨란 (5 ml)에 용해 시킨 후, 테트로하이드로퓨란에 1.0 M로 녹여져 있는 테트라부틸암모니움 플로라이드 (0.15 ml)를 얼음 수조 상태에서 첨가하였다. 상온에서 2시간 동안 교반 한 후, 반응이 완결된 것을 확인하였다. 반응 혼합물에 메탄올을 넣어 반응을 중지 시킨 후, 얻어진 잔사를 바로 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n-헥산:에틸아세테이트 = 1 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 13b (39 mg, 95 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.25 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.25 (2H, m, Ar-H), 7.08 (1H, t, J = 6.8 Hz, Ar-H), 5.27 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.02 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.50 (1H, brs, HC-OH), 4.49 (2H, s, HC-OH), 4.28 (1H, q, J = 6.35 Hz, -CHαHβ-OH), 3.89 (1H, q, J = 5.86, 4.4 Hz, -CHαHβ-OH), 3.83 - 3.82 (2H, m, -N-CH 2), 3.79 (1H, brs, CH2CH2OH), 3.63 - 3.59 (1H, m, -CO-CH(CH3), 2.78 (1H, m, Ar-CH), 2.06 (2H, m, -CH 2-CH2-OH), 1.88 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.86 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.50 (2H, m, -CH 2-CH3), 1.34-1.32 (4H, m, -CH 2CH 2CH2CH3), 1.21 (3H, d, J = 7.3 Hz, C=O-CH(CH 3), 0.91 (3H, t, J = 6.84 Hz, CH2CH 3).
(2S,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸) 인돌린 -1-일)-2- 메틸 -4-메틸렌-1- 옥소노난 -3-일 아세테이트의 제조(14a)
디클로로메탄으로 녹인 (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온 13a (357 mg, 0.77 mmol)에 피리딘 (0.34 ml, 3.88 mmol)을 첨가 한 후, 아세틱언하이드로스를 천천히 적가 하였다. 상온에서 12시간 동안 교반하였는데, 출발물질이 조금 남아 있어 4-다이메틸아미노피리딘 (1 eq) 첨가하여 상온에서 2시간 더 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인하고, 감압기로 피리딘을 제거한 뒤, 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 20 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 14a (570.5 mg, 92.8 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.11 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.10 (2H, m, Ar-H), 6.95 (1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 5.42 (1H, d, J = 8.3 Hz, -CHOCOCH3), 5.04 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.84 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.14 (1H, t, J = 9.2 Hz, -CHαHβ-OTBS), 3.76 - 3.68 (2H, m, -N-CH 2), 3.69 (1H, t, J = 6.3Hz, -CHαHβ-OTBS), 3.44 (1H, m, -CO-CH(CH3), 2.94 (1H, m, Ar-CH), 2.01 (3H, s, CHOCOCH 3), 1.96 (2H, m, -CH 2-CH2-OTBS), 1.66 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.37 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.17 (2H, m, -CH 2-CH3), 0.86 (4H, m, -CH 2CH 2CH2CH3), 0.85 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.85 (3H, d, J = 6.84 Hz, C=O-CH(CH 3), 0.76 (3H, t, J = 7.33 Hz, CH2CH 3), 0.01 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
(2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸) 인돌린 -1-일)-2- 메틸 -4-메틸렌-1- 옥소노난 -3-일 아세테이트의 제조(14b)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트 14a (64.4 mg, 0.12 mmol)을 메탄올 (3 ml)에 용해시킨 후, 피리딘 피-톨루엔-썰포네이트를 소량 넣어 준 후 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인한 후, 감압기로 메탄올을 날린 뒤 바로 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 14b (21.3 mg, 42.8 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.23 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.21 (2H, m, Ar-H), 7.05 (1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 5.55( 1H, d, J = 8.3 Hz, -CHOCOCH3), 5.12 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.93 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.24 (2H, t, J = 9.2 Hz, -CH2CH 2-OH), 3.94 (2H, t, J = 9.2Hz, -CH 2CH2-OH), 3.80 (2H, d, J = 7.3 Hz, -N-CH 2), 3.57 (1H, m, -CO-CH(CH3), 3.04 (1H, t, J = 6.8 Hz, N-CH2CH-C2H4-OH), 2.09 (3H, s, CHOCOCH 3), 1.56 (2H, m, -CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.45 (4H, m, -CH2CH2CH 2CH 2CH3), 1.26 (3H, m, CO(CH 3)CH), 0.86 (3H, t, J = 6.3Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3).
(2S,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸)-1H-인돌-1-일)-2- 메틸 -4-메틸렌-1- 옥소노난 -3-일 아세테이트의 제조(15a)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트 14a (344 mg, 0.68 mmol)를 벤젠 (7 ml)에 용해 시킨 후, 2,3-다이클로로-5,6-다이싸이아노-1,4-벤조큐논 (778.2 mg, 3.42 mmol)을 첨가하여 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인하고, 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 7 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 15a (85 mg, 24.8 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.46 (1H, d, J = 8.3Hz, Ar-H), 7.72 - 7.70 (1H, m, Ar-H), 7.54 - 7.52 (2H, m, Ar-H), 7.37-7.27 (1H, m, Ar-H), 5.66 (1H, d, J = 7.3Hz, -CHOCOCH3), 5.12 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.93 (1H, s, -C=CHαHβ), 3.92 (2H, m, -CH 2-OTBS), 3.53 (1H, m, -CO-CH(CH3), 2.93 (2H, m, -CH 2CH2-OTBS), 2.11 (3H, s, CHOCOCH 3), 2.04 (2H, t, J = 7.8 Hz, -CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.43 (2H, m, -CH2CH2CH2CH 2CH3), 1.38 (3H, d, J = 7.3 Hz, -CO-CH(CH 3), 1.32 - 1.23 (4H, m, -CH2CH 2CH 2CH2CH3), 0.90 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.84 (3H, t, J = 7.3 Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3), 0.04 (6H, d, J = 4.89 Hz, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
(2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2- 메틸 -4-메틸렌-1- 옥소노 난-3-일 아세테이트의 제조(15b)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트 15a (88.3 mg, 0.17 mmol)을 테트로하이드로퓨란 (5 ml)에 용해 시킨 후, 테트로하이드로퓨란에 1.0 M 로 녹여져 있는 테트라부틸암모니움 플로라이드 (1.76 ml)를 얼음 수조 상태에서 첨가 하였다. 상온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응이 완결된 것을 확인하였다. 반응 혼합물에 암모니움 클로라이드 수용액을 넣어 반응을 중지시킨 후, 에틸아세테이트를 넣어 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1) 하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 15b (21.3 mg, 31.3 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.47 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.55 (1H, d, J = 6.84 Hz, Ar-H), 7.38 (1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.37 (1H, s, Ar-H), 7.30(1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 5.60 (1H, d, J = 7.3 Hz, -CHOAc), 5.11 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.94 (1H, s, -C=CHαHβ), 3.96 (2H, t, J = 6.35 Hz, -CH 2-OTBS), 3.76 - 3.68 (2H, m, -N-CH 2), 3.69 (1H, t, J = 6.3 Hz, -CHαHβOH), 3.56 (1H, m, -CO-CH(CH3), 2.99 (2H, m, CH 2CH2OH), 2.09 (3H, s, CHOCOCH 3), 2.05 (2H, s, CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.42 - 1.52 (6H, m, CH2CH 2CH 2CH 2CH3), 0.85 (3H, m, -CH2CH 3).
< 실시예 10>
Figure 112011028633390-pat00024
(2S,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸)-1H-인돌-1-일)-3- 하이드록 시-2- 메틸 -4- 메틸렌노난 -1-온의 제조(16a)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온 13a (156 mg, 0.31 mmol)를 벤젠 (30 ml)에 용해 시킨 후, 2,3-다이클로로-5,6-다이싸이아노-1,4-벤조큐논 (352.8 mg, 1.55 mmol)을 첨가하여 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인하고, 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 20 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 16a (102 mg, 73.9 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.48 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.55 (1H, d, J = 7.8Hz, Ar-H), 7.38 (1H, t, J = 8.31 Hz, Ar-H), 7.33 (1H, s, Ar-H), 7.3 (1H, t, J = 6.35 Hz, Ar-H), 5.28 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.04 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.62 (1H, s, -OH), 3.93 (2H, t, J = 6.35 Hz, -CH 2-OTBS), 3.66 (1H, m, -HC-OH), 3.31 - 3.27 (1H, m, -CO-CH(CH3)), 2.94 (1H, t, J = 6.84 Hz, -CHαHβ-OTBS), 2.93 (1H, q, J = 6.35 Hz, -CHαHβ-OTBS), 2.07 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.97 (1H, m, -C=CH-CHαHβ-CH2), 1.50 (2H, m, -CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.35 (3H, s, -CO-CH(CH3)), 1.34 (4H, m, -CH2CH2CH 2CH 2CH3), 0.89 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.03 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
(2S,3S)-3- 하이드록시 -1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2- 메틸 -4- 메 틸렌노난-1-온의 제조(16b)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온 16a (9.9 mg, 0.02 mmol)을 메탄올 (2 ml)에 용해시킨 후, 피리딘 피-톨루엔-썰포네이트를 소량 넣어 준 후 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인한 후, 감압기로 메탄올을 날린 뒤 바로 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 16b (6.9 mg, 94.5 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ 8.49 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.57 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.41 - 7.31 (3H, m, Ar-H), 5.27 (1H, s, -C=CHαHβ), 5.04 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.61 (1H, s, C=OCH(CH3)CH-OH), 3.98 (2H, t, J = 5.8 Hz, -CH 2-OTBS), 3.51 (1H, brs, CH-OH), 3.34 - 3.29 (1H, m, C=OCH(CH3), 3.00 (2H, t, J = 6.3 Hz, -CH 2CH2-OTBS), 2.12 - 2.06 (1H, m, -C=CHαHβ), 2.00 - 1.94 (1H, m, -C=CHαHβ), 1.60 (1H, brs, CH2CH2-OH), 1.55 - 1.47 (2H, m, -CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.36 (3H, d, J = 1.46 Hz, -CO-CH(CH 3)), 1.35 - 1.31 (4H, m, -CH2CH2CH 2CH 2CH3), 0.90 (3H, t, J = 5.8 Hz, CH2CH 3).
(2R,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸) 인돌린 -1-일)-2- 메틸 -4- 메 틸렌노난-3-올의 제조(17a)
(2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온 13a (250 mg, 0.54 mmol)를 테트로하이드로퓨란 (15 ml)에 용해 시킨 후, 테트라하이드로퓨란에 2M로 녹여져 있는 보란-다이메틸 썰파이드 (0.5 ml)를 얼음으로 빙냉 시킨 상태에서 첨가하였다. 얼음 수조에서 2시간 동안 교반하여 반응이 완결된 것을 확인한 뒤 메탄올 (1 ml)을 넣어 3시간 동안 더 교반해준다. 반응혼합물을 감압기를 이용하여 날린 후, 바로 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 15 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 17a (178 mg, 73.4 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.07 (2H, t, J = 7.8 Hz, Ar-H), 6.66 (1H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 6.53 (1H, t, J = 6.8 Hz, Ar-H), 5.08 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.95 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.25 (1H, d, J = 8.3 Hz, -CH(CH3)CH-OH), 3.75 (2H, d, J = 5.86 Hz, N-CH 2), 3.64 - 3.54 (1H, m, CH2CH 2-OTBS), 3.34 (1H, brs, -OH), 3.29 (1H, q, J = 8.3 Hz, N-CH2CH), 3.16 - 3.07 (1H, m, N-CHαHβ-CH(CH3), 3.08 - 2.98 (1H, m, N-CHαHβ-CH(CH3), 2.84 (1H, m, CH2CH(CH3), 2.05 (2H, q, J = 7.8 Hz, CH 2CH2-OTBS), 1.94 (2H, t, J = 7.3Hz, =C-CH 2), 1.78 (2H, m, -CH2CH2CH2CH 2CH3), 1.47 (2H, m, -CH2CH 2CH2CH2CH3), 1.30 (2H, m, -CH2CH2CH 2CH2CH3), 0.92 (3H, d, J = 7.3 Hz, CH2CH(CH 3)), 0.92 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3), 0.09 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3).
(2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸) 인돌린 -1-일)-2- 메틸 -4- 메틸렌노난 -3-올의 제조(17b)
(2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올 17a (31 mg, 0.06 mmol)을 메탄올 (1.3 ml)에 용해시킨 후, 피리딘 피-톨루엔-썰포네이트를 소량 넣어 준 후 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결 된 것을 확인 한 후, 감압기로 메탄올을 날린 뒤 바로 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 17b (18.4 mg, 79.8 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ7.09 (2H, m, Ar-H), 6.70 (1H, t, J = 7.3Hz, Ar-H), 6.59 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 5.09 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.96 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.23 (1H, d, J = 7.3 Hz, CH(CH3)CH-OH), 3.77 - 3.71 (2H,m, N -CH 2CH(CH3)), 3.58 (1H, t, J = 8.3 Hz, N-CHαHβ-CH(CH3)), 3.52 (1H, t, J = 8.8 Hz, N-CHαHβ-CH(CH3)), 3.40 (1H, q, J = 7.3 Hz, N-CH2CH), 3.20 (2H, m, N-CH 2), 2.92 (1H, m, N-CH2CH(CH3), 2.05 (2H, m, CH 2CH2-OH), 1.83 (2H, m, =C-CH 2CH2CH2CH2CH3), 1.47 (2H, m, -CH2CH2CH2CH 2CH3), 1.31 (4H, m, -CH2CH 2CH 2CH2CH3), 0.91 (3H, s, -CH2CH(CH 3), 0.89 (3H, t, J = 7.3 Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3).
(2R,3S)-1-(3-(2-( 터트 - 부틸디메틸실릴옥시 )에틸)-1H-인돌-1-일)-2- 메틸 -4-메틸렌노난-3-올의 제조(18a)
(2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올 17a (87.8 mg, 0.19 mmol)를 벤젠 (18 ml)에 용해 시킨 후, 2,3-다이클로로-5,6-다이싸이아노-1,4-벤조큐논 (89.43 mg, 0.39 mmol)을 첨가하여 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 것을 확인하고, 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 20 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 18a (32 mg, 36.6 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ7.59 (1H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.34 (1H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.18 (1H, t, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.08 (1H, t, J = 7.8 Hz, Ar-H), 6.97 (1H, s, Ar-H), 5.05 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.92 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.21 (1H, q, J = 8.3 Hz, N-CHαHβCH(CH3)), 3.99 (1H, q, J = 8.3 Hz, N-CHαHβCH(CH3)), 3.86 (2H, t, J = 7.3 Hz, CH2CH 2-OTBS), 3.83 (1H, d, J = 6.3 Hz, CH(CH3)CH-OH), 2.98 (2H, t, J = 7.3 Hz, CH 2CH2-OTBS), 2.26 (1H, m, CH2CH(CH3)), 1.87 (1H, m, =C-CHαHβC4H11), 1.77 (1H, m, =C-CHαHβC4H11), 1.30 - 1.16 (6H, m, -CH2CH 2CH 2CH 2CH3), 0.90 (9H, s, -Si-(CH3)2-(CH 3)3)), 0.84 (3H, s, CH2CH(CH 3), 0.83 (3H, t, J = 7.3Hz, -CH2CH2CH2CH2CH 3), 0.04 (6H, s, -Si-(CH 3)2-(CH3)3)).
(2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2- 메틸 -4- 메틸렌노난 -3-올의 제조(18b)
(2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올 18a (35.2 mg, 0.08 mmol)을 테트로하이드로퓨란 (4 ml)에 용해 시킨 후, 테트로하이드로퓨란에 1.0 M로 녹여져 있는 테느라부틸암모니움 플로라이드를 얼음 수조 상태에서 첨가하였다. 상온에서 2시간 동안 교반 한 후, 반응이 완결된 것을 확인하였다. 반응 혼합물에 암모니움 클로라이드 수용액을 넣어 반응을 중지시킨 후, 에틸아세테이트를 넣어 유기층을 분리하였다. 분리한 유기층을 소듐클로라이드 수용액으로 씻어준 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피 ( n - 헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1)하여 물질을 분리하고 건조시켜 목적화합물 18b (12.02 mg, 36 %)를 오일상태로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : δ7.62 (1H, d, J = 7.8Hz, Ar-H), 7.38 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.22 (1H, t, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.11 (1H, t, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.04 (1H, s, Ar-H), 5.07 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.94 (1H, s, -C=CHαHβ), 4.23 (1H, q, J = 8.3 Hz, N-CHαHβCH(CH3)), 4.02 (1H, q, J = 7.3Hz, N-CHαHβCH(CH3)), 3.90 (2H, t, J = 6.3 Hz, CH2CH 2-OH), 3.83 (1H, s, -CH2CH(CH3)CH-OH), 3.04 (2H, t, J = 6.3 Hz, CH 2CH2-OH), 2.31 - 2.26 (1H, m, -CH2CH(CH3)), 1.90 (1H, m, =C-CHαHβC4H11), 1.76 (1H, m, =C-CHαHβC4H11), 1.60 (1H, brs, -CH(CH3)CH-OH), 1.30 - 1.17 (6H, m, -CH2CH 2CH 2CH 2CH3), 0.857 (3H, s, CH2CH(CH 3), 0.84 (3H, s, -CH2CH2CH2CH2CH 3).
실험예 1. IL -6 매개성 luciferase 저해활성
<1-1> 형질전환체 제조
96 웰 플레이트에 5×104 세포/웰로 HepG2 세포(ATCC HB-8065)를 분주한 후, 10% FBS(v/v), 60.0 ㎎/ℓ 카나마이신 설페이트(kanamycin sulfate; Gibco., USA) 및 2.0 g/ℓ 탄산수소나트륨(NaHCO3; Sigma, USA)이 포함된 DMEM 배양 배지를 사용하여, 37℃에서 5% CO2의 조건으로 배양접시에 80% 가득찰(confluent) 때까지 배양하였다. 이후 무혈청 배지 50 ㎕로 교환하고, 0.1 ㎍ pSTAT3-TA-Luc (Clontech, CA)와 0.3 ㎕ 리포펙타민 시약(lipofectamin reagent; Invitrogen, USA)의 혼합액을 각 웰에 첨가하여 3시간 반응시킴으로써 pSTAT3-TA-Luc를 형질감염시켰고, 새로 제조한 200 ㎕ DMEM 배양 배지로 바꾸어 추가로 24시간 배양하였다.
<1-2> IL -6 및 IL -11 반응성 STAT3 리포터 유전자 검사
상기 형질감염된 세포를 1% BSA/DMEM으로 무혈청 배양(serum starvation)하고 시료를 하기와 같이 1시간 처리한 후 10 ng/㎖ IL-6(R&D system, USA)를 첨가하여 3시간 동안 배양하였다.
1: 음성대조군(비처리군);
2: 양성대조군(IL-6 10 ng/㎖);
3: 화합물들 (0.3, 1, 3, 10, 30, 100 μM); 및
4: Madindoline (0.3, 1, 3, 10, 30, 100 μM)
상기 반응한 세포를 PBS로 세척하고 50 ㎕ 용해 완충용액(luciferase assay system, promega, USA)을 넣고 1분간 교반한 후, 30-100 ㎕의 루시퍼라제 기질(luciferase assay system, promega, USA)을 넣고 발색정도를 루미노미터(luminometer; EG&G BERTHOLD, USA)로 5분 안에 측정하였다.
각 화합물들의 IL-6 유도 루시퍼라제 저해활성 효과의 IC50 값은 도 1과 같으며 화합물 4d 는 농도의존적으로 IL-11 유도 루시퍼라제 저해활성을 도 2와 같이 나타냈으며 그 IC50 값은 2.1 mM이었다.
<1-3> IL -6에 의해 유도된 STAT3 인산화 저해활성 검정
6 웰 플레이트에 5×104 세포/웰로 HepG2 세포를 분주하여 배양접시에 80% 가득차게 배양한 후, 무혈청 배지로 교환하여 추가로 6시간 배양하고 하기와 같이 시료를 30분간 처리하였다.
1: 음성대조군(비처리군);
2: 양성대조군(IL-6 20 ng/㎖); 및
3: 화합물 4d 처리군(1, 3, 0.39, 10, 30 및 100 μM)
이후 20 ng/㎖ IL-6를 처리하여 10분간 반응한 뒤 40 ㎕ 용해 완충용액[pH 8, 20 mM Tris-HCl, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, 1 mM Na3VO4, 2 mM EDTA, 1 mM PMSF, 20 mM 류펩틴(leupeptin), 20 ㎍/㎖ 아포로토닌(aprotonin); Sigma, USA]을 사용하여 세포를 용해시킨 후, 원심분리 (13000g, 15분)하여 단백질이 녹아있는 상등액을 수득하였다. 이때, 시료 및 IL-6을 처리하지 않은 HepG2 세포를 대조군으로 사용하였다. 단백질의 농도는 DC 단백질 검사 키트(Bio-Rad, USA)를 이용하여 정량하였고, 10% SDS 폴리아크릴아마이드 겔(SDS-PAGE)에 단백질을 로딩하여 30 mA에서 2시간 동안 전기영동 하였다. 전기영동이 끝난 후 겔의 단백질을 PVDF 멤브레인(Westran S, pore size 0.2 ㎜; Whatman, USA)으로 90 V에서 90분 동안 전사시켰다. 전사된 멤브레인을 Tris-완충용액(T-TBS; 50 mM Tri-HCl, pH 7.6, 150 mM NaCl, 0.2 % Tween-20, 5% skim milk; Sigma, USA)으로 4℃에서 12시간 차단하고 T-TBS로 5번 세척하였다. 상기 멤브레인에 일차항체로 phospho-STAT3(1:1000 희석)의 다중클론 항체를 2시간 동안 처리하였다. T-TBS로 5번 세척 후 이차항체로 HRP-결합 항-래빗 항체(1:5000 희석)를 1시간 반응시켰다. T-TBS로 세척한 다음 암실에서 ECL 키트(Amersham, USA)를 이용하여 필름을 현상시켰다.
그 결과, 도 3에서 나타난 바와 같이 본 발명의 화학식 1 화합물은 IL-6 유도 STAT3 인산화 저해 활성을 나타내었다.
<1-4> IL -6에 의해 유도된 JAK2 와 gp130 인산화 저해활성
6 웰 플레이트에 5×104 세포/웰로 HepG2 세포를 분주하여 배양접시에 80% 가득차게 배양한 후, 무혈청 배지로 교환하여 추가로 6시간 배양하고 하기와 같이 시료를 30분간 처리하였다.
1: 음성대조군(비처리군);
2: 양성대조군(IL-6 20 ng/㎖); 및
3: 화합물 4d 처리군(1, 3, 0.39, 10, 30 및 100 μM)
이후 20 ng/㎖ IL-6를 처리하여 10분간 반응한 뒤 40 ㎕ 용해 완충용액[pH 8, 20 mM Tris-HCl, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, 1 mM Na3VO4, 2 mM EDTA, 1 mM PMSF, 20 mM 류펩틴(leupeptin), 20 ㎍/㎖ 아포로토닌(aprotonin); Sigma, USA]을 사용하여 세포를 용해시킨 후, 원심분리 (13000g, 15분)하여 단백질이 녹아있는 상등액을 수득하였다. 여기에 항-JAK2 항체와 anti-gp130항체(Cell signaling, INC.)를 사용하여 4℃에서 12시간 반응시킨 후, protein A/G plus agarose (Santa Cruz Biotechnology, USA)로 침강시켰다. 원심분리 후 침강물은 완충용액으로 3회 세척 후 전기영동 시료로 사용하였다. 이 때 IL-6 및 시료를 처리하지 않은 HepG2 세포를 대조군으로 사용하였다. 단백질의 농도는 Bio-Rad DC protein assay kit를 이용하여 정량하였고, 8 % SDS-polyacryl-amide gels (SDS-PAGE)에서 단백질을 loading하여 30 mA에서 2시간동안 전기영동 하였다. 전기영동이 끝난 후 gel의 단백질을 PVDF membrane (WeatranS, pore size 0.2 ㎜)으로 90V에서 90분 동안 전사시켰다. 전사된 membrane을 Tris-buffered solution (T-TBS; 50 mM Tri-HCl, pH 7.6, 150 mM NaCl, 0.2 % Tween-20, 5% skim milk)로 4℃에서 12시간 blocking하고 T-TBS로 5번 세척하였다. 이 membranes에 일차항체로 phospho-tyrosine antibody (1:1000 dilutions, respectively)의 polyclonal antibodies를 2시간 동안 처리하였다. T-TBS로 5번 세척 후 이차항체로 HRP-conjucated anti-mouse antibody (1:5000 dilutions)를 1시간 반응시켰다. T-TBS로 세척한 다음 암실에서 ECL을 이용하여 필름을 현상시켰다. 그 결과, 도 4에서 나타난 바와 같이 본 발명의 화학식 1 화합물은 IL-6 유도 JAK2 및 gp130의 인산화 저해 활성을 나타내었다.
<1-5> Insulin 에 의해 유도된 adipogenesis 에 대한 화합물 4d의 효과
3T3L1 세포를 24 웰 세포 배양 플레이트에 confluence하게 되기 이틀 전에 분화배지(containing 5mg/ml insulin, 1mM dexamethasone, and 0.5 mM IBMX)로 바꾸어주고 8일 동안 2일에 한번 씩 분화배지로 바꾸어주면서 실험을 하였다. 이때 분화용 배지를 사용하지 않거나 분화배지에 IL-6 나 화학식 1 각각 단독으로 혼합하여 처리한 세포 그리고 분화배지에 IL-6와 화학식 1을 함께 혼합하여 처리한 세포를 비교하여 실험하였다. 8일후 세포는 PBS로 세척하고 PBS에 3.7% formaldehyde가 첨가된 용액으로 고정을 시킨 후, Oil Red O dye를 처리하여 1 시간동안 염색을 한다. 그리고 25 % isopropanol을 첨가하여 세척하고 현미경으로 관찰하였다. 그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 화합물은 인슐린-유도 아디포제네시스(adipogenesis)를 저해하는 IL-6 효과를 회복하는 활성을 나타내었다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 인돌계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    <화학식 1>
    Figure 112011069568910-pat00025

    상기에서 R1은 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고;
    R2는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고;
    R3는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고;
    R4는 수소, 또는 C1-10의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬, 또는 치환 또는 비치환된 벤질이고;
    X는 수소, 할로겐, 하이드록시, 메톡시, 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고;
    Y는 산소이고;
    Z는 하이드록시, C1-10의 알콕시, -OCOCH3 또는 산소이고; 및
    상기
    Figure 112011069568910-pat00026
    는 단일 또는 이중 결합이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 R1은 하이드록시에틸 또는 터트-부틸디메틸실릴옥시에틸이고;
    R2는 C1-5의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고;
    R3는 수소이고;
    R4는 수소 또는 C1-5의 직쇄, 측쇄 또는 사이클로 알킬이고;
    X는 수소, 할로겐, 하이드록시, 메톡시, 치환 또는 비치환된 C1-10 알킬이고;
    Y는 산소이고;
    Z는 하이드록시, C1-5의 알콕시, -OCOCH3 또는 산소이고; 및
    상기
    Figure 112011069568910-pat00027
    는 단일 또는 이중 결합인 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 1) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온,
    2) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트,
    3) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트,
    4) (2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트,
    5) (2S,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-3-하이드록시-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온,
    6) (2S,3S)-3-하이드록시-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온,
    7) (2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올,
    8) (2R,3S)-1-(3-(2-(터트-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올,
    9) (2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올,
    10) (2S,3S)-3-하이드록시-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-1-온,
    11) (2S,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌-1-옥소노난-3-일 아세테이트 및
    12) (2R,3S)-1-(3-(2-하이드록시에틸)인돌린-1-일)-2-메틸-4-메틸렌노난-3-올
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 인돌계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 염증성 질환 또는 암의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 염증성 질환 또는 암은 IL-6 또는 IL-11 에 의해 유발되는 것인 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 염증성질환은 류마티스 관절염, 골다공증, 형질구 증가증, 초면역 글로불린 혈증, 빈혈, 신염, 악액질, 맥관증식신염, 다발성 경화증, 포도막염, 만성 갑상선염, 지연과민증, 접촉피부염 아토피성 피부염, 전신성 홍반증, 크론병, 췌장염, 건선, 연소성 특발성 위축증, 당뇨병 및 알쯔하이머로 구성되는 군으로부터 선택되는 질환인 조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 암은 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 흑색종, 백혈병, 림프종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 및 중추신경계 종양로 구성되는 군으로부터 선택되는 암인 조성물.
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