KR101122116B1 - 경옥고를 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 경옥고는 아토피 피부염 동물 모델인 NC/Nga 마우스에서 T 림프구의 활성을 억제하고, 아토피로 인한 가려움증 등의 피부질환, 부종, 혈청 IgE 및 비만 세포수를 감소시켜 적은 양으로도 아토피 피부염증을 완화시킬 수 있다는 사실을 확인하였다. 따라서 본 발명에 따른 경옥고는 아토피 질환의 예방과 치료용 조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용할 수 있음을 제시한다.

경옥고, 아토피, IgE, 피부염증 완화 효과

Description

경옥고를 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물 {A composition for treatment of Atopic dermatitis containing Gyungokgo}

본 발명은 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 자세하게는 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물과 건강기능식품에 관한 것이다.

아토피피부염은 피부건조화 뿐만 아니라 표피의 과증식, 홍반, 부종, 심한 소양증, 삼출과 부스럼딱지를 특징으로 하는 만성 피부질환이다. 아토피 피부염의 원인은 아직 명확히 밝혀지지 않았으나 유전적인 요소와 면역기능의 불균형 및 환경적인 요인이 관련되어 있는 것으로 알려져 있다.

지금까지 알려진 바로는 면역학적으로 T 림프구의 활성화, 사이토카인 체계의 이상, 세포매개성면역의 감소, IgE의 증가 등이 아토피성 피부염의 병리상태에 중요한 역할을 한다고 보고되고 있다.

아토피 피부염은 산업화가 진행되는 국가에서 더욱 많이 증가하고 있으며 적 절한 예방과 치료가 없으면 더욱 가속화될 것으로 보인다.

아토피 피부염의 주요 증상은 심한 가려움증, 피부 건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부 인비늘 등이다.

아토피 피부염을 완치시킬 수 있는 뚜렷한 치료법은 현재까지 없으며 아토피 피부염은 완치를 목표로 치료하기 보다는 유발 인자를 피하고 아토피 체질을 바꾸는 장기적인 치료와 처치가 필요하다.

현재까지 아토피 피부염에 대한 처방은 스테로이드제, 항히스타민제, 항생제 등과 같은 화학적 약물요법이 대세를 이루었다. 스테로이드제 (부신피질호르몬제)는 크게 소염 작용과 면역억제 작용이 있으며 효과가 우수하지만, 장기간 사용하면 피부 색소침착, 피부 각화, 복통, 발열 등의 다양하고 엄중한 부작용이 나타날 수 있다. 항히스타민제는 비만세포에서 히스타민이 유리되지 못하도록 하여 가려운 증상을 경감시키지만, 근본적인 치료 방법이 아니고, 임시방편으로 이용되는 것으로서, 장기간 복용 시에는 마찬가지로 불면, 불안, 식욕감퇴 등의 부작용이 있을 수 있다.

이에 따라 치료 효과가 높고 부작용이 적은 치료제를 천연물이나 한약에서 찾고자 하는 시도가 많이 있으며, 현재 활발한 연구가 진행되고 있다.

본 발명자들은 부작용이 없으면서 아토피 피부염 개선에 효과적인 조성물을 찾고자 연구 노력한 결과, 경옥고가 적은 양으로도 아토피 피부염 완화에 효과적이면서, 아토피로 인해 발생하는 가려움증, 염증 등의 증상, 피부 부종, 혈청 IgE 및 비만 세포수를 감소시킬 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서 본 발명의 목적은 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물과 건강기능식품을 제공하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물과 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 경옥고는 생지황, 복령, 인삼, 꿀 등의 4가지 약재를 이용하여 전통방식에 따라 생산할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 약재의 분량은 경옥고 100g에는 인삼 6.2g, 복령 12.4g, 생지황즙 39.9g 및 꿀 41.5g으로 구성되도록 하였다.

경옥고란 정혈(精血)을 돕고 생명을 연장시키는 익수 보약의 일종으로서, 동의보감에 의하면 인체 내 모든 기관의 기능을 유지 및 활성화시키는 데에 매우 큰 효과가 있다고 한다. 또한, 경옥고는 정혈, 정력제로서의 약효뿐만 아니라, 구체적으로는 오장이 허약하여 피로를 자주 느끼는 사람, 위장이 약하여 소화불량이 심한 사람, 장염, 장경련이 자주 일어나 복통이 심한 사람, 날씨가 조금만 변하거나 차 가워지면 감기에 잘 걸리고 기관지 천식으로 숨이 차고 해수 기침이 심한 사람에게 효과적이며 특히, 심신이 허약한 노약자들이 장복할 경우 흰머리가 검어지고 치아가 새로 돋아나며 생명을 연장시키는 효과가 있는 것으로 고서에 기재되어 있다.

한편, 경옥고의 현대적 연구 결과에 의하면, 경옥고는 항산화 효과를 가짐으로써, 세포 생리 활성에 기여한다. 뿐만 아니라, 경옥고는 피부 노화 현상을 완화하는 데에도 유효하여, 피부 주름을 개선하고 피부 미백 효과를 갖는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 주요한 치료 목적이 되는 아토피 피부염이란 주로 유아기 혹은 소아기에 시작되는 만성적이고 재발성의 염증성 피부질환으로 소양증 (가려움증), 피부건조증과 특징적인 습진을 동반한다. 유아기에는 얼굴과 팔다리의 펼쳐진 쪽 부분에 습진으로 시작되지만, 성장하면서 특징적으로 팔이 굽혀지는 부분과 무릎 뒤의 굽혀지는 부위에 습진의 형태로 나타나게 되며, 많은 경우에 성장하면서 자연히 호전되는 경향을 보인다. 어른의 경우 접히는 부위의 피부가 두꺼워지는 태선화(lichenification)가 나타나고, 유소아기에 비해 얼굴에 습진이 생기는 경우가 많다. 아토피 피부염은 세계적으로 증가하는 추세이며 유병률이 인구의 20%라는 보고도 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, DNCB 로 아토피를 유발시킨 NC/Nga 마우스에서, 경옥고를 저농도 (12.5 mg/kg), 고농도 (25.0 mg/kg)로 투여했을 시 아토피군 에 비해 경옥고 투여군의 아토피 증상이 현저하게 억제됨을 확인할 수 있었다 (실시예 4 참조).

상기에서 언급한 아토피군이란 아토피 유발 시약인 DNCB 만을 피부도포한 그룹을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, DNCB 투여로 인한 아토피 군에서 피부 염증과 귀 부종을 경옥고가 감소시킬 수 있음을 확인하였다 (실시예 5, 6 참조).

일반적으로 아토피를 유발한 마우스 모델에서는 혈청 총 IgE가 증가하고, 면역에 관계하는 생체기관에서는 염증과 관련된 많은 사이토카인이 만들어진다. 이러한 사실을 바탕으로, 실험 종료 후 면역에 관계하는 대표적 기관인 비장의 무게를 측정하였다. 비장은 혈류속의 항원에 대한 면역 반응을 유발시키는 중요한 역할을 수행하는 곳으로 전신성 감염에 반응하는 곳이다. DNCB를 도포할 때 발생하는 아토피 피부염에서 면역에 관계하는 기관들이 활발하게 항원을 수집하고 T세포와 B세포를 발생시키며 그에 따른 면역 반응을 발생시켜서 비장의 무게는 증가하게 된다.

본 발명의 실험에서 아토피군의 비장무게가 정상군의 것보다 3배 증가하였고, 경옥고를 투여했을 때 비장의 무게가 감소한 것으로 보아 경옥고를 함유하는 조성물이 아토피 피부염을 유의적으로 감소시키는 것으로 확인되었다 (실시예 7, 8 참조).

아울러, 아토피 피부염이 유발된 마우스에 경옥고를 투여했을 때 경옥고가 DNCB의 반복적인 피부 도포로 증가하는 비만세포 침윤 및 탈과립을 유의적으로 억제함을 확인할 수 있었다 (실시예 9 참조).

결론적으로, 본 발명에서는 경옥고를 함유하는 조성물이 아토피 피부염증을 개선시키는 작용이 있음을 규명하였다.

본 발명의 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물은 경옥고에 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 희석제를 추가하여 약제학적 단위 투여형으로 제형화되어 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 약제학적 단위 투여형의 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 유제, 시럽제 등 경구 투여용 제형, 에어로졸제, 멸균 주사제, 좌제 및 경피 투여용 제제로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 유당, 포도당, 백당, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 옥수수전분, 감자전분, 아라비아 고무, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 정제수, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산프로필, 탈크, 스테아린산마그네슘을 들 수 있다. 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제형화한다.

한 가지 형태의 예로서, 본 발명의 경옥고를 함유하는 조성물은 경구 투여용 고형 제제로 제형화할 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되는데, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 백당 또는 유당, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산마그네슘, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.

다른 형태의 예로서, 본 발명의 경옥고를 함유하는 조성물은 경구 투여용 액상 제제로 제형화하여 사용될 수도 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 이러한 액상 제제에는 통상적으로 사용되는 불활성 희석제 (예를 들면, 정제수, 에탄올, 유동파라핀) 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

또 다른 형태의 예로서는 본 발명의 경옥고를 함유하는 조성물은 비경구용 제제로 제형화할 수도 있다. 경옥고를 함유하는 비경구용 제제로는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁주사제, 유제형 주사제, 동결건조 주사제 등이 있다.

또 다른 형태의 예로서 본 발명은 경옥고를 함유하는 조성물을 포함하는 위생용품을 제공한다.

본 발명의 경옥고를 함유하는 위생용품으로 생리대, 비누, 샴푸, 바스붐 등으로 이용할 수 있으며 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일 등과 같은 식물성 기름과 필요에 따라 방부제, 안정화제, 습윤제, 또는 유화제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제를 이용할 수도 있다.

바람직하게는, 아토피 피부염의 개선을 위해서 경옥고를 함유하는 조성물을 경구 투여함과 동시에 피부에 도포할 수 있다.

상기에서"유효량"이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 조성물의 투여량은 투여 경로, 대상, 연령, 성별, 체중, 개인차 및 질병 상태에 따라 적절히 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으나, 바람직하게는 경옥고가 0.0001 내지 10000mg/kg 으로 함유되도록 할 수 있다. 보다 바람직하게는, 0.0001 내지 1000mg/kg 의 양으로 투여된다.

또한 본 발명은 경옥고를 유효성분으로 포함한, 아토피 피부염 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

건강 기능 식품이란, 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제ㆍ캅슐제ㆍ산제ㆍ과립제ㆍ액제ㆍ환제 등의 형태로 제조ㆍ가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 말한다. 경옥고의 유효성분을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 다양한 형태의 제형으로 제조한 식품으로, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강 기능 식품은 아토피 피부염 개선을 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

상기의 건강 기능 식품은 경옥고 및 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨 가제를 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 건강 기능 식품 중 건강 기능성 음료 조성물은 상기 경옥고을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외에 향미제로써 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

또한 본 발명의 경옥고를 유효성분으로 함유하는 조성물은 아토피 피부염 개선을 위한 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서의 경옥고 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 부형제를 포함한다. 또한 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증진시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 추가로 포함할 수 있다.

발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 모든 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 모발 화장료, 오일 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 자외선 차단제, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저, 유액, 프레스 파우더, 루스파우더 및 아이섀도의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 부형제 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 벤토나이트, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 부형제 성분으로서 유당, 탈크, 수산화알루미늄, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 부형제 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 부형제 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린싱인 경우에는 부형제 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서,하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것을 뿐 본 발명의 내용이 이들 실시예에 의해 제한되는 것이 아니고, 당업자에 의해 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본원 발명의 범위에 포함됨은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 실험 동물 준비 및 시료 조제

1-1. 실험 동물

이 실험에서 사용한 실험동물은 8주령된　SPF 암컷 NC/Nga mice(23±3g)로, 중앙실험동물(주)에서 공급받아 실험동물 사육장에서 1주일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 실험 기간 중 고형사료와 물은 자유로이 섭취시켰으며 사육실의 온도(22 ± 2℃), 상대습도(60 ± 5%)와 명암은 12시간 주기를 유지하였다. 실험 시작일 하루 전 실험동물의 귀 하단 부분에서 꼬리 상단 부분까지 등 부위 전체를 마우스 제모용 클리퍼로 털을 제거한 후에 크림형 제모제를 발라 피부가 깨끗이 드러나도록 잔털을 완전히 제거하였다. 이 동물실험은 원광대학교 동물실험윤리위원회의 사전 심의를 받아 동물실험윤리위원회의 규정에 따라 수행되었다.

1-2. 시료 조제

실험에서 사용한 아토피 유발 시약인 DNCB(Junsei Chemical Co., Ltd)를 1%와 0.5%의 농도가 되도록 용매(acetone : olive oil = 4 : 1 혼합)에 용해하여 제조하였다. 이 실험에 사용한 경옥고는 생지황, 복령, 인삼, 꿀 등의 4가지 약재를 전통방식에 따라 본 실험실에서 직접 제조하여 사용하였다. 경옥고를 구성하는 각각의 약재는 100g당 표 1과 같은 비율이다.

[표 1] 경옥고의 구성성분 및 비율

본초명	생약명	용량
인삼	Ginseng Radix Alba, KP	6.2g
복령	Hoelen, KP	12.4g
생지황즙	Rehmannia Juice	39.9g
봉밀	Honey, KP	41.5g
Total		100g

<실시예 2> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 아토피 피부염 유도 및 시료 처리

모든 동물군에는 자유로운 식이와 식수를 제공하였다. 실험동물은 총 12마리를 사용하였으며 4군으로 나누어 각 실험군을 3마리씩 배정하였다. DNCB를 도포하지 않으면서 정제수 100㎕를 경구투여한 정상군 3마리, DNCB를 도포하며 정제수 100㎕를 경구투여하고 연고기제로 친수 바셀린를 등부위에 바른 아토피군 3마리, DNCB를 도포하면서 저농도의 경옥고를 경구투여(12.5 mg/kg)하고 피부도포(0.5 mg/mouse)를 병행한 저농도 시료 투여군 3마리, 고농도의 추출물을 경구투여(25.0 mg/kg)와 피부도포(1.0 mg/mouse)를 병행한 고농도 시료투여군 3마리를 사용하였다.

8주령 암컷 NC/Nga 마우스의 등 부위를 깨끗하게 제모한 후 제모 과정에서 발생할 수 있는 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다. 24시간 후 마우스 마리당 1% DNCB 100㎕를 4일간 연속으로 등 부위와 양쪽 귀 뒤쪽에 도포하여 아토피 피부염을 유발하였다. DNCB 도포를 멈추고 3일 경과 후, 0.5% DNCB 100㎕를 주 3회 1주 동안 동일한 부위에 고르게 도포하여 아토피 피부염이 지속되도록 하였다. 시료는 실험시작부터 매일 투여하였다 (도 1).

<실시예 3> 통계학적 처리

모든 실험결과는 평균±표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검정은 Student's t-test로 처리하였다.

<실시예 4> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 아토피 피부염 증상에 대한 경옥고의 효과

실험의 시작과 함께 마우스 등 피부 조직의 외형적 변화 (홍반, 가려움, 건조피부, 부종, 짓무름 및 태선화)를 3주 동안 관찰하였다.

DNCB 용액을 도포함과 동시에 시료를 경구투여하고 피부에 도포한 마우스의 등 피부에 나타난 아토피 증상을 관찰하였다. 정상군의 피부는 깨끗하였고 아토피군에서는 홍반, 부종, 인설, 가피, 태선화 등의 다양한 아토피 증상이 뚜렷하게 나타났으며 저농도(12.5 mg/kg)와 고농도(25.0 mg/kg)의 시료 투여군에서는 아토피군에 비해 아토피 증상이 현저하게 억제되었다 (도 2).

<실시예 5> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서체중 변화에 대한 경옥고의 효과

실험의 시작과 함께 마우스 등 피부 조직의 외형적 변화 (홍반, 가려움, 건조피부, 부종, 짓무름 및 태선화)를 관찰하면서 체중 변화를 측정하였다. 실험 시작일에 확인한 실험동물의 체중은 평균 22~23g으로 각 군 사이에 차이가 없었다. 실험을 진행하는 동안 아토피군은 정상군에 비해 현저하게 체중의 증감 변동 폭이 심하였고, 실험 종료일에는 실험 시작일에 비해 체중이 감소하였다. 시료 투여군은 약간의 증감은 있었으나 아토피군에 비해 체중이 증가하였다. 각 실험군 간에 체중 변화는 유의성이 있었다 (도 3).

<실시예 6> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 귀 부종에 대한 경옥고의 효과

실험의 시작과 함께 마우스 등 피부 조직의 외형적 변화 (홍반, 가려움, 건조피부, 부종, 짓무름 및 태선화)를 관찰하면서 귀 두께 변화를 측정하였다. 귀 두께(ear swelling)는 vernier calipers(Mitutoyo, Japan)를 사용하였다.

마우스의 귀두께는 실험 시작부터 종료하는 날까지 이틀에 한번씩 측정하였다. 아토피군은 귀의 두께가 4일과 8일에 측정치가 가장 높게 나타났으며 그 이후 귀두께가 약간 줄어들기는 하였으나 정상군이나 시료 투여군에 비해 증가하였으며, 시료투여군은 고농도군(25.0 mg/kg)과 저농도군(12.5 mg/kg) 모두 귀의 부종이 억제되었으며 특히 고농도군은 정상군보다 더 줄어들었다. (도 4).

<실시예 7> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 비장무게에 대한 경옥고의 효과

DNCB에 대한 마우스의 면역반응을 검토하기 위하여 실험종료일에 마우스를 희생하여 조직과 혈액을 채취한 후 비장을 적출하여 무게를 측정하였다 (표 2). 아 토피군의 비장무게는 정상군에 비해 약 3배 증가하였고, 시료투여군은 아토피군에 비해 각각 49.6 %, 44.8 %를 억제하였다.

[표 2]

그룹	비장무게 (g)
정상군 (Normal)	0.0867±0.0065
아토피군 (Atopy)	0.2874±0.0823 *
경옥고 투여군(12.5mg/kg)	0.1921±0.0177 **
경옥고 투여군(25.0mg/kg)	0.1985±0.2017

(*p<0.05, **p<0.01 versus normal group)

<실시예 8> 아토피실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 혈청 IgE 농도에 대한 경옥고의 효과

실험 종료일에 주사기로 심장에서 채혈한 후 5,000rpm, 4℃에서 3분 동안 원심 분리하여 혈청을 분리하였다. 실험에 사용하기 전까지 -75℃ 냉동고에서 보관하였다. NC/Nga 마우스의 혈청에서의 IgE 농도는 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay kit (Shibayagi사))를 사용하여 측정하였다. 각 96 웰 플레이트 (well plates)에 마우스에서 취한 혈청 5㎕와 희석 버퍼 (dilution buffer) 45㎕를 혼합하여 각각의 웰 (well)에 50㎕를 분주하고 실온에서 쉐이커 (shaker)에 올려 2시간 동안 방치한 후 세척 완충 용액 (washing buffer solution)으로 5분씩 3회 세척하였다.

다시 비오틴이 결합된 항-IgE 항체 (Biotin-conjugated anti-IgE antibody)를 넣고 2시간 실온에 방치한 후에 다시 3회 세척하였다. HRP가 결합된 아비딘 (HRP-conjugated avidin) 50㎕를 넣고 실온에서 쉐이커 (shaker)에 올려 1시간 방 치한 후 다시 세척하였다. 크로모제닉 서브스트레이트 시약 (Chromogenic substrate reagent(TMB)) 50㎕를 넣고 5분간 방치한 후 50㎕의 정지 용액 (stop solution)을 넣고 ELISA 판독기 (reader) (450nm)에서 흡광도를 측정하였다.

정상군에서의 IgE의 농도는 465.33±86.43 ng/ml이었고, 아토피군에서는 1082.4±170.93 ng/ml로 정상군에 비해 약 2.3배 증가하였다. 시료투여군의 경우, 저농도군 (12.5 mg/kg)에서는 763.0±57.98 ng/ml이었고, 고농도군(25.0 mg/kg)에서는 632.5 ± 3.54 ng/ml로 아토피군에 비해 유의하게 억제하였다 (표 3).

[표 3]

그룹	IgE (ng/ml)
정상군 (Normal)	465.33±86.43
아토피군 (Atopy)	1082.4±170.93 *
경옥고 투여군(12.5mg/kg)	763.0±57.98 **
경옥고 투여군 (25mg/kg)	632.5±3.54 ***

각 값은 mean ± S.D. (n=3)으로 표시하였다. *p<0.001, **p<0.05, ***p<0.005 versus atopy

<실시예 9> 아토피 실험 동물인 NC/Nga 마우스에서 비만세포 수에 대한 경옥고의 효과

DNCB에 의한 유발된 아토피 피부에서 비만세포의 침윤을 관찰하기 위해 등 피부조직을 알시안 블루 (Alcian blue)로 염색하여 비만세포를 관찰하였다.

실험 종료에 마우스를 희생시킨 다음 등과 귀 조직을 떼어 내어 10% 중성 포르말린에서 24시간 고정하였다. 그 조직을 파라핀으로 포매하고 5㎛ 두께로 절단하여 사용하였다. 조직중의 비만세포(mast cell)는 알시안 블루 (alcian blue)로 염 색하여 관찰하였다. 알시안 블루에 양성인 비만세포는 100배율에서 1개의 계수선(graticule) 안에 있는 세포를 세어 세포수/mm²로 표현하였다.

정상군은 비만세포의 수가 7.5±0.58개였고, 아토피군은 59.75±2.75개로 그 수가 정상군에 비해서 약 8배 증가하였다. 시료를 저농도로 경구투여하고 연고를 도포한 시료투여군의 비만세포의 수는 40±5.35개였고 고농도군은 42.75±2.75개로 정상군에 비해서는 높았으나 아토피군에 비해서는 그 수가 유의성 있게 낮았다 (표 4, 도 5, 도 6).

[표 4]

그룹	비만세포수
정상군 (Normal)	19.038±10.75
아토피군 (Atopy)	167.2±42.36 #
경옥고 투여군 (12.5mg/kg)	90±8.48 ##
경옥고 투여군 (25mg/kg)	50.667±17.32 ###

(#p<0.001 versus normal group, ## p<0.01 ### p<0.005 versus atopy group.)

도 1은 실험 프로토콜의 도식화된 도표를 나타낸 것이다. 마우스 마리당 1% DNCB 100㎕를 4일간 연속으로 등 부위에 도포하고, 0.5% DNCB 100㎕를 8, 10, 12일째에 고르게 도포하였다.

도 2는 DNCB 로 유도된 아토피 피부염을 가진 마우스에서 경옥고의 아토피 개선 효과를 나타낸 것이다. 정상 (Normal (n=3)) 은 아무것도 처리하지 않은 그룹이고, Atopy (n=3)는 DNCB만을 처리한 아토피군이고, 3번째, 4번째는 경옥고를 각각 12.5mg/kg, 25mg/kg 으로 처리한 군이다.

도 3은 DNCB 를 적용한 마우스의 체중변화를 나타낸 것이다. 각 값은 mean ± S.D. 로 나타내었다. *p<0.05, **p<0.01 범위에서 정상군에 비해 유의적인 변화가 있었고, #p<0.05의 범위에서 아토피 그룹과 비교했을 때 유의적인 변화가 있음을 뜻한다.

도 4는 DNCB 를 적용한 마우스의 귀 부종에 대한 경옥고의 효과를 나타낸 것이다. 각 값은 mean ± S.D. 로 나타내었다. *p<0.05, **p<0.01 범위에서 정상그룹과, #p<0.05, ##p<0.005의 범위에서 아토피 그룹과 유의적인 변화가 있었다.

도 5는 DNCB 를 적용한 마우스에서 비만세포의 침윤을 관찰한 결과를 나타낸 것이다.

도 6은 DNCB 를 적용한 마우스에서 피부 병변의 병리학적 검사 결과를 나타낸 것이다. 피부 검사는 헤마토실린과 에오신으로 염색하였다 (확대 x100).

Claims (8)

1. 생지황, 복령, 인삼 및 꿀을 포함하는 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물.
2. 삭제
3. 제 1항에 있어서, 상기 경옥고는 0.0001 내지 1000mg/kg 으로 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 삭제
5. 제 1항에 있어서, 상기 경옥고는 아토피에 의한 T 림프구의 활성을 억제함으로써 혈청 총 IgE 농도를 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 생지황, 복령, 인삼 및 꿀을 포함하는 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선을 위한 화장료 조성물.
7. 생지황, 복령, 인삼 및 꿀을 포함하는 경옥고를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선을 위한 건강기능식품.
8. 생지황, 복령, 인삼 및 꿀을 포함하는 경옥고를 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 아토피 피부염 개선을 위한 위생용품.

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