KR100960597B1 - 레보시멘단의 조절 방출성 경구 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 부작용이 감소된, 방출조절방식으로 레보시멘단을 방출하는 경구용 약학적 조성물에 관한 것이다. 레보시멘단, (-) [[4-(1,4,5,6,-테트라히드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐)히드라조노]프로판디니트릴은 울혈성 심장마비의 치료에 유용하다.

레보시멘단, 경구, 조절방출, 심장마비

Description

레보시멘단의 조절 방출성 경구 조성물 {Controlled release peroral compositions of levosimendan}

본 발명은 부작용이 감소된, 방출조절방식으로 레보시멘단을 방출하는 경구용 약학적 조성물에 관한 것이다. 레보시멘단, (-) [[4-(1,4,5,6,-테트라히드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐)히드라조노]프로판디니트릴은 울혈성 심장마비의 치료에 유용하다.

레보시멘단은 [[4-(1,4,5,6,-테트라히드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)이성질체이고, 그 합성 방법은 유럽 특허 565546 B1에 기술되어 있다. 레보시멘단은 심장 마비에 효능이 있고, 트로포닌에 대하여 유의성 있는 칼슘 의존성 결합을 한다. 레보시멘단은 다음 구조식으로 표시된다.

I

사람에게 있어 레보시멘단의 혈류동력학적 효과는 문헌(Sundberg, S. et al., Am. J. Cardiol., 1995; 75: 1061-1066 )에 설명되어 있다. 사람의 정맥주사와 경구투여후 나타나는 레보시멘단의 약물동력학 특성은 문헌(Sandell, E-P. et., J. Cardiovasc. Pharmacol., 26 (Suppl.1), S57-S62, 1995)에 기술되고 있다. 심근허혈의 치료에 있어 레보시멘단의 용도는 WO 93/21921에 기술된다. 레보시멘단이 심장마비 환자에게 이로운 효과를 준다는 것은 임상연구에서 확인되었다.

특히, 장기간동안에 걸쳐 치료 효과를 얻고자 할 때, 레보시멘단의 경구투여는 어렵다는 것이 증명되었다. 첫째로, 사람에게서 레보시멘단이 제거되는 반감기는 대략 한 시간 정도로 짧다. 그러므로, 기존의 즉시방출성(immediate release) 경구제형을 이용할 때는, 레보시멘단을 하루동안에도 여러번 투여해야한다. 둘째로, 레보시멘단의 위장흡수가 빠르다. 그러므로, 즉시방출성 기존의 제형을 이용하면, 레보시멘단 혈장농도의 최고점이 보통 한 시간 이내에 빠르게 갑자기 이르게 된다. 레보시멘단의 높은 혈장농도는 심장마비 환자에게 바람직하지 않는 효과로 심장박동수를 증가시키는 경향이 있다.

지속-작용성 경구 조성물은 통상의 신속 방출성 경구 조성물보다 많은 이점을 갖는다. 그런 이점은 혈장 내에서 약물의 농도의 변화를 줄여주고, 그것의 결과로서 안정한 치료반응과, 투약횟수의 감소와 부작용을 감소시킨다. 보통 지속-작용성 조성물은 약물, 방출조절제 및 사용 가능한 부형제를 혼합하여, 그 혼합물을 매트릭스 정제로 압착하여 제조한다. 전형적인 지속-작용성 조성물은 위장관의 상부는 물론 하부에서도 약물을 방출한다.

레보시멘단을 통상의 지속-방출성 제제로서 투여하는 시도는 실패해오고 있다. 연장된 기간에 걸쳐 레보시멘단의 치료 효과를 얻기 위해, 레보시멘단을 통상 사용되는 지속-방출성 제제로서 투여할 때, 심각한 두통, 심계항진, 증가된 심장박동수와 같이 바람직하지 않은 효과가 빈번히 나타난다. 그러므로, 레보시멘단을 경구투여하기 위한 새로운 방법과 조성물, 특히 연장된 기간(extended period)에 걸친 레보시멘단의 치료효과를 주고, 기존의 지속-작용성 레보시멘단 제제의 단점을 피하기 위한 새로운 방법과 조성물이 필요하다.

[발명의 요약]

레보시멘단은 특히 대장과 같은 위장관 하부에서 장내세균에 의해 신진대사에 민감한 것으로 알려져 있다. 그러한 대사경로는 궁극적으로 레보시멘단보다 실질적으로 더 긴 제거 반감기를 갖는 (R)-N-[4-(1,4,5,6-테트라히드로-4,-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]아세트아미드 (Ⅱ)라는 제1 단계의 활성 대사물질을 형성시킨다. 상기 활성 대사물질의 축적은 레보시멘단의 지속-작용성 제제와 관련되는 부작용의 원인이 된다고 알려져 왔다. 활성 대사물질과 그 형성 경로의 발견으로써 부작용의 발생을 줄이고 심장마비 환자의 치료에 매우 적당한 방출조절 제제의 설계가 가능하게 되었다.

그러므로, 본 발명의 목적은 레보시멘단을 위장관 하부, 특히 대장에 이르기 전에 안정적으로, 그리고 실질적으로 완전히, 방출하여 활성 대사물질의 형성을 낮은 수준으로 유지시킴으로써, 장기간동안 치료효과를 제공하는 경구 조성물을 제공하는 것이다. 그럼으로써, 환자의 혈장의 활성 대사물질의 농도를 충분히 낮은 수준 으로 유지하여 활성 대사물질의 축적으로부터 야기되는 바람직하지 않은 효과를 피하는 반면, 연장된 기간동안 치료 효과를 얻을 수 있게 된다.

도 1은 액체 크로마토그래피-탠덤(tandem) 질량 분광법에 의해 결정된 지원자의 활성 대사물질에 대한 기준눈금 결정(calibration) 시료값을 보여준다.

도 2는 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분광법에 의해 결정된 약물투여후 지원자의 활성 대사물질에 대한 혈장 시료값을 보여준다.

도 3은 pH 5.8 인산염 완충용액에서 실시예 1의 제형 1의 시험관내 용해곡선을 보여준다.

도 4는 pH 5.8 인산염 완충용액에서 실시예 1의 제형 2의 시험관내 용해곡선을 보여준다.

도 5는 pH 5.8 인산염 완충용액에서 실시예 1의 제형 3의 시험관내 용해곡선을 보여준다.

도 6은 pH 5.8 인산염 완충용액에서 실시예 3의 비교 제형에 대한 시험관내 용해곡선을 보여준다.

본 발명은 통상의 즉시방출성 및 지속-작용성 제제에 비하여 개선된 경구 전달 시스템을 제공한다. 그 장점은 다음을 포함한다.

- 증가된 심장박동수와 같은 높은 수준의 레보시멘단의 부작용 발생을 감소시키는 낮은 피크의 레보시멘단 혈장 수준.

- 투약횟수를 감소.

- 약물의 높은 저항성을 의미하는 활성 대사물질(II)의 축적의 감소, 즉, 심각한 두통, 심계항진, 증가된 심장 박동수와 같은 활동적인 물질대사에 의해 야기되는 바람직하지 않은 효과의 감소.

대사물질(Ⅱ)의 혈장수준은 심한 두통, 심계항진, 증가된 심장박동수와 같은 바람직하지 않은 효과의 발생과 많은 관련이 있다. 심장병 환자의 최적의 레보시멘단 치료에 있어서 대사물질(Ⅱ)의 안정한 상태의 혈장 수준은 20ng/ml 미만, 바람직하게는 10 ng/m 미만이어야 한다.

본 발명에 따라 a) 치료학적으로 유효량의 레보시멘단과 b) 환자에게 연장된 시간에 걸친 레보시멘단의 방출과 20ng/mg 미만의, 바람직하게는 10 ng/ml 미만의 대사물질(Ⅱ)의 안정한 상태의 혈장수준을 제공하는 약물 방출 조절 성분을 포함하는 조절 방출성 조성물에 의해 상기 장점들이 달성된다.

"연장된 기간"이라는 용어는 복용 후 적어도 한 시간 이상을 의미하고, 바람직하게는 적어도 두 시간을 의미한다. 위에서 정의된 대사물질(Ⅱ)의 안정한 상태의 혈장 수준은 환자들 사이의 평균값을 말한다.

바람직하게 약물 방출 조절 성분은 조성물이 대장에 이르기 전에, 레보시멘단이 실질적으로 완전하게 방출되도록 한다.

"약물 방출 조절 성분" 이라는 용어는 일반적으로 본 발명에 따라 레보시멘단의 방출을 조절하고, 연장시키기 위해 적용될 수 있는 다른(새로운) 기술을 말한다. 이러한 기술은 매트릭스 제형(예를 들면, 매트릭스 정제, 과립, 펠렛)이나, 코팅 제형(예를 들면, 코팅된 정제, 과립 또는 펠렛, 또는 마이크로캡슐)을 포함한다. 코팅 또는 매트릭스 물질과 같은 약물 방출 조절 성분과, 매트릭스 및 코팅 제형의 제조방법은 이 분야에서 잘 알려져 있다. 물질의 선택과 사용량은 의도하는 방출 형식에 의존하고, 이 분야에 숙련된 이들에게는 용이한 일이다. 예를 들면, 본 발명의 방출 형식을 얻는데 적당한 여하한 매트릭스 물질이나 코팅 물질, 또는 그 조합물은 약물 방출 조절 성분으로 사용될 수 있다. 본 발명에 유용한 전형적인 방출 조절 성분은 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 히드록시프로필 셀룰로즈, 카르복실메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그 혼합물과 같은 친수성 겔 형성 폴리머류; 수소화 콩기름, 경화 피마자유나 피마자씨유 (Cutina HR이라는 상품명으로 판매됨), 면실유(Sterotex 또는 Lubrotab이라는 상품명으로 판매됨) 또는 그 혼합물과 같은 식물성 고체유를 포함하는 식물성 지방 및 기름; 포화지방산의 트리글리세리드류나 그것의 혼합물과 같은 지방산 에스테르류(예를 들면, 글리세릴 트리스테아레이트, 글리세릴 트리팔미테이트, 글리세릴 트리미리스테이트, 글리세릴 트리베헤네이트(Compritol이라는 상품명으로 판매됨) 및 글리세릴 팔미토스테아린산 에스테르)를 포함하지만 이것들에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따라서 또한 위장과 같은 위장관 상부에서 오래 머물도록 설계된 제형을 이용하는 것을 가능하다. 이것은 대장에서의 레보시멘단의 신진대사의 위험과 그에 따른 활성 대사물질(Ⅱ)의 형성을 감소시킨다. 부유(floating) 즉 부력(buoyant) 제형과 같은 제형은 조성물이 위장관 하부에 닿을 때까지 오랜 시간이 걸리기 때문에 약물의 총 방출시간을 더 길게 설계할 수 있는 장점을 갖는다. 위장에서 오래 머무는 조성물은 예를 들면 US4,126,672, US4,814,178, US4,777,033, US 5,232,704, 그리고, EP539059에 기술되어 있다.

그러므로, 20ng/ml 미만, 바람직하게는 10ng/ml 미만의 대사물질(Ⅱ)의 안정한 상태의 혈장 수준을 제공하는, 레보시멘단의 어떠한 조절/연장 방출 조성이라도 본 발명에 이용될 수 있다.

어떠한 조성물의 대사물질 (Ⅱ)에 대한 정상-상태의 혈장 수준은 레보시멘단의 조성물을 대사물질(Ⅱ)의 정상-상태 수준에 닿을 때까지 수여일 동안 하루에 한 번이나, 여러 번 지원자나 지원자 군에게 투약함으로써 측정할 수 있다. 그런 다음 활성 대사물질(Ⅱ)의 혈장 수준은 7일의 투여기간의 마지막 투여 후 8시간에서(여기에서 레보시멘단 1mg을 일일 3회 투여된다)의 혈장수준을 의미하며(이하 “정상-상태의 혈장 수준(steady-state plasma level for metabolite(II)”이라 한다) 실시예 2에서 상세하게 설명되어 있는 방법에 따라 측정한다.

본 발명의 한 측면은 조성물의 시험관내 용해 방식에 따라 특징지어지는 경구투여용 레보시멘단의 조절 방출성 조성물이다.

특히, 본 발명은 a) 치료적으로 유효량의 레보시멘단과 b) 연장된 기간동안 레보시멘단의 방출을 제공하는 약물 방출 조절 성분을 포함하는 경구 투여용의 조절 방출성 조성물에 관한 것으로, 이 조성물은 pH 5.8의 인산염 완충용액에서 USP ⅩⅩⅡ 바스켓 조합법(50rpm이나 100rpm에서)에 따라 측정하여 적어도 레보시멘단 함량의 90 %에 대해서 실질적으로 1시간 내지 4시간 사이의 총 시험관내 용해 시간을 나타내는 조성물에 관한 것이다.

더욱 바람직하게, 본 발명의 조성물은 적어도 레보시멘단 함량의 90%에 대해서 실질적으로 1시간 내지 3시간의 총 시험관내 용해 시간을 보여준다.

약물 방출 조절 성분 또는 성분들은 위에서 기술한 바와 같이 선택된다. 다시 말하면, 전형적인 방출 조절 성분은 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 히드록시프로필 셀룰로즈, 카르복시메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그 혼합물과 같은 친수성 겔 형성 폴리머류; 수소화 콩기름, 경화 피마자유 또는 글리세릴 팔미토스테아레이트와 같은 식물 지방 또는 오일류를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물의 시험관내 용해 방식(pattern)을 결정하는 방법은 실시예 3에 설명된다.

본 발명의 조성물은 예를 들면, 정제, 캡슐제, 과립제 또는 분말제의 형태로 이루어진다.

본 발명의 특히 바람직한 실시형태의 예는 레보시멘단과 선택적으로 부형제를 함유하는 신속 방출 부분과 레보시멘단과 약물 방출 조정 성분을 함유하는 조절 방출부분을 조합함으로써 얻어진다. 약물 방출 조절 성분은 위에서 기술한 바대로 선택할 수 있으나, 바람직하게는 친수성 겔 형성 폴리머이다. 특히 바람직하게는 (a) 레보시멘단과 적어도 하나의 부형제를 함유하는 분말 형태의 신속 방출 부분과 (b) 레보시멘단과 방출 조절 친수성 겔 형성 폴리머를 함유하는 과립 형태의 조절 방출 부분을 포함하는 조성물이다. 분말 형태의 신속 방출 부분과 과립형태의 조절 방출 부분은 바람직하게는, 젤라틴 캡슐 또는 HPMC 캡슐과 같은 캡슐에 충전될 수 있는

자유롭게 흐르는 혼합물형태이다.

본 발명의 더욱 바람직한 조성물은 레보시멘단 조성물 중량대비 0.05% 내지 20%, 바람직하게는 0.1% 내지 10%, 더 바람직하게는 0.2% 내지 3%의 레보시멘단을 포함한다. 약물 투여는 신속 방출 및 조절 방출 부분으로 나누어진다. 약물의 중량대비 약 25% 내지 75%, 바람직하게는 30% 내지 70%, 더 바람직하게는 40% 내지 60%는 조절 방출 부분에 있다.

일반적으로 사람에서 레보시멘단의 경구 투여로 일일 투여량은 약 0.1mg 내지 20mg, 전형적으로는 0.5mg 내지 10mg을 매일 한 번이나, 하루에 여러 번 나누어 투여한다. 투여량은 환자의 나이, 체중, 상태에 의존한다. 바람직한 실시형태의 조성물은, 신속 방출과 조절 방출 부분으로 분리되는 0.1mg 내지 5mg, 전형적으로 0.2mg 내지 2mg의 레보시멘단을 포함한다. 울혈성 심장마비의 치료에 대해서 안정적인 레보시멘단의 바람직한 혈장 수준의 최고점(peak)은 1ng/ml 내지 100ng/ml, 바람직하게는 5ng/ml 내지 60ng/ml, 더 바람직하게는 10ng/ml 내지 50ng/ml의 범주 내에 있다.

신속 방출 부분에 적당한 부형제는 미결정 셀룰로즈나 락토오즈와 같은 충전물이다. 미결정 셀룰로즈가 바람직한 부형제이고, 아비셀 PH101, 아비셀 PH102이나 아비셀 PH200과 같이 다양한 등급의 물성으로 이용될 수 있다. 신속 방출 부분에서 부형제의 양은 조성물 중량대비 대략 20% 내지 70%, 바람직하게는 30% 내지 60%이다. 스테아린산이나 마그네슘 스테아레이트와 같은 적당한 활택제가 상기 신속 방출부분에 첨가될 수 있다. 스테아린산이 더 바람직한 활택제이다.

방출 조절성 친수성 겔 형성 폴리머류는 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 히드록시 프로필 셀룰로즈, 카르복실메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그 혼합물을 포함하나, 이것들에 제한되지 않는다. 알긴산과 다른 친수성 겔 형성 폴리머의 혼합물이 바람직하며, 특히 알긴산과 히드록시프로필메틸 셀룰로즈의 혼합물이 더 바람직하다. 히드록시프로필메틸 셀룰로즈는 메토셀 K101 (분자량 26,000g/mol), 메토셀 K4M (분자량 86,000g/mol), 메토셀 K15M (분자량 120,000g/mol), 메토셀 K100M과 같은 다양한 형태로 상업적으로 이용가능하다. 2% 수용액(20。C에서)에서 이들의 점성은 각각 100cP, 4000cP, 15000cP, 100000cP이다. 50cP 내지 2000 cP의 점성을 가진 히드록시프로필메틸 셀룰로즈가 바람직하다. 메토셀 K100은 더 바람직한 등급의 히드록시프로필메틸 셀룰로즈이다.

스테아린산이나 마그네슘 스테아레이트와 같은 적당한 활택제를 방출 조절 부분에 첨가할 수 있다. 스테아린산이 더욱 바람직한 활택제이다.

본 발명의 특히 바람직한 실시 형태에서 친수성 겔 형성 폴리머의 양은 조성물 중량대비 20% 내지 80%, 바람직하게는 30% 내지 70%이다. 바람직하게는 친수성 겔 형성 폴리머는 알긴산과 히드록시프로필메틸 셀룰로즈의 혼합물이다. 적당한 알긴산 양은 총 신수성 겔 형성 폴리머의 중량대비 10% 내지 50%, 바람직하게는 20% 내지 40%이다.

신속 방출 부분의 양은 조성물 중량대비, 20% 내지 80%, 바람직하게는 30% 내지 70%, 더욱 바람직하게는 40% 내지 60%이다. 활택제를 사용하는 경우, 그 양은 조성물 중량대비 0.3% 내지 10%, 바람직하게는 0.5% 내지 5%이다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시 형태의 하나는, 모두 분말 형태인, 약물 방출 조절 성분, 레보시멘단과 부형제를 혼합하고 그 혼합물을 젤라틴 캡슐이나 HPMC 캡슐과 같은 캡슐 안에 충전하여 얻는다. 약물 방출 조절 성분은 위에서 설명한 것과 같이 선택할 수 있다. 바람직한 약물 방출 조절 성분은 친수성 겔 형성 폴리머인데, 이 실시형태에서는 조성물의 중량대비 10% 내지 70%, 바람직하게는 15%내지 60%, 가장 바람직하게는 20% 내지 40%의 양이 사용된다. 방출 조절 친수성 겔 형성 폴리머류는 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 히드록시프로필 셀룰로즈, 카르복실메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그 혼합물을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 가장 바람직한 약물 방출 조절 성분은 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 특히 메토셀 K100과 같은 점도가 50cp 내지 2000cP인 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그들의 혼합물이다. 이 실시형태에서 부형제 (예를 들면, 미결정 셀룰로즈나 락토오즈)의 양는 조성물 중량대비 30%내지 90%, 바람직하게는 40%내지 80%, 바람직하게는 50% 내지 70%이 사용되는 것이 적절하다. 레보시멘단은 앞의 바람직한 실시 형태에서 설명한 양만큼 사용한다.

또 다른 본 발명의 바람직한 실시 형태의 하나는, 약물 방출 조절 성분, 레보시멘단 그리고, 미결정 셀룰로즈, 락토오즈, 스테아린산과 같은 부형제를 혼합하고, 적당한 타정기로 혼합물을 매트릭스 정제로 압착하여 제조되는 매트릭스 정제 형태이다. 다시 말하면, 약물 방출 조절 성분은 위에서 기술한 대로 선택한다. 바람직하게 약물 방출 조절 성분은 위에서 설명한 바와 같이 친수성 겔 형성 폴리머나 식물성 지방이나 기름(oil), 지방산 에스테르이다. 이 실시형태에서 약물 방출 조절 성분은 조성물의 중량대비 0.5%내지 60%의 양으로 사용하고, 부형제(예를 들면, 미 결정 셀룰로즈)는 조성물의 중량대비 30%내지 99%의 양으로 적절히 사용한다. 만약, 약물 방출 조절 성분이 히드록시프로필메틸 셀룰로즈와 같은 친수성 겔 형성 폴리머, 바람직하게 메토셀 K100과 같은 점성이 50cP 내지 2000cP인 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 알긴산이나 그것들의 혼합물인 경우, 약물 방출 조절 성분은 조성물 중량대비 5%내지 60%, 바람직하게는 10%내지 50%, 더욱 바람직하게는 15%내지 40%의 양이 사용되고, 부형제(예를 들면, 미결정 셀룰로즈)의 양은 조성물 중량대비 30 내지 95%, 바람직하게는 50 내지 90%, 더 바람직하게는 60 내지 85%를 사용한다. 만약 약물 방출 조절 성분이 수소화된 콩기름, 경화 피마자유, 글리세릴 팔미토스테아레이트와 같은 식물성 지방이나 기름 또는 지방산 에스테르인 경우, 약물 방출 조절 성분은 조성물 중량대비 0.5% 내지 30%, 바람직하게는 2% 내지 20%, 더 바람직하게는 3% 내지 15%의 양이 사용되며, 부형제(예를 들면 마이크로크리스탈린 셀룰로즈)는 조성물의 중량대비 70%내지 99%, 바람직하게는 80% 내지 98%, 더 바람직하게는 85% 내지 97%의 양을 적절히 사용된다. 레보시멘단은 앞의 바람직한 실시형태에서 설명한 양만큼 사용된다.

다음의 실시예는 제한 없이 본 발명을 더욱 잘 설명하고자 함이다.

실시예 1. 제형 실시예

제형 1.

과립 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

알긴산 18.0 mg

메토셀 K100LV 37.0 mg

스테아린산 0.6 mg

분말 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

아비셀 PH101 84.0 mg

스테아린산 1.5 mg

제형 2.

과립 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

알긴산 23.0 mg

메토셀 K100LV 46.0 mg

스테아린산 -

분말 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

아비셀 PH101 69.5 mg

스테아린산 1.5 mg

제형 3.

과립 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

알긴산 28.0 mg

메토셀 K100LV 56.0 mg

스테아린산 0.9 mg

분말 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

아비셀 PH101 56.0 mg

스테아린산 1.5 mg

제형 4

과립 부분 : 레보시멘단 1.0 mg

알긴산 33.0 mg

메토셀 K100LV 66.0 mg

스테아린산 0.6 mg

분말 성분 : 레보시멘단 1.0 mg

아비셀 PH101 43.0 mg

스테아린산 1.5 mg

위의 실시예에서 과립 부분 물질을 체로 걸러서 터뷸라 혼합기(Turbula mixer) 나 잔체타 용기 혼합기(Zanchetta container mixer)와 같은 적당한 혼합기로 균일해질 때까지 혼합하였다. 분말 혼합물은 망의 크기가 0.6mm인 체로 거른다. 혼합물(mass)을 타정하여(by slugging)(타정기(tabletting machine)를 이용하여 압 축시켜서) 건조 과립으로 만든다. 이 과정에서 혼합물을 장치(Bepex Phamapacter L200/50P)를 이용하여 대략 45KN의 압축력으로 압착하였다. 압착된 혼합물은 체로 걸러 0.7mm내지 1.7mm크기의 과립을 선별하였다.

스테아린산을 제외한 분말 성분 물질을 체로 걸러서, 터뷸라 혼합기나 잔체타 혼합기와 같은 적당한 혼합기에서 균일해질 때까지 혼합한다. 과립부분과 분말부분과 스테아린산을 터뷸라 혼합기나 잔체타 혼합기와 같은 적당한 혼합기에서 균일해질 때까지 혼합한다. 이 혼합물을 경질 젤라틴 캡슐 3번에 충전한다. 경질 젤라틴 캡슐 대신에, HPMC 캡슐 3번을 사용할 수도 있다.

실시예 2. 액체 크로마토그래피-탠덤(tandem) 질량 분광법에 의한 사람의 혈장 내 활성 대사물질 (Ⅱ)의 결정.

기준(calibration) 시료의 제조

pH 7.2인 인산염 완충용액 20㎕중의 활성 대사물질(II)을 분석물질이 없는 혈장 0.5ml에 첨가한다. 첨가한 분석물질의 양은 0.100, 0.250, 0.500, 1.00, 2.50, 3.75, 5.00, 7.50 그리고 12.5ng이다. 20초 동안 강렬하게 섞고(vortex), 10분간 방치후, pH 7.2 인산염 완충용액 20㎕중의 내부 표준 물질 (R)-N-[4-(1,4,5,6,-테트라히드로-4-에틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]아세트아미드 2500pg를 첨가한다. 1분 동안 혼합물을 격렬하게 섞고, 15분 동안 방치하였다. 기준 시료를 0.1M의 수산 화나트륨 50㎕으로 알칼리화하고, 20초동안 격렬하게 섞는다. 기준 시료는 3분 동안 강렬하게 섞어주며 에틸 아세테이트:헥산 (8:2) 5ml로 추출한다. 7분 동안 원심 분리한 후에 유기물 층을 분리하고, 증발기(TurboVap evaporator)를 이용하여 40。C에서 농축시킨다. 기준 시료가 건조되었을 때, 에틸아세테이트:헥산(8:2) 200㎕를 가하고, 1분간 격결하게 섞어주고 증발기(TurboVap evaporator)를 이용하여 40℃에서 농축한다. 메탄올-2mM 암모늄 아세테이트 (1:1) 200㎕l를 첨가한 후에, 기준 시료를 1분 동안 격렬히 섞어주고, 5분 동안 방치한다. 7분 동안 원심 분리한 후에, 상청액을 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분광분석용의 새 원뿔형의 자동시료채취기 유리병 안에 옮긴다.

시료의 제조

시료들은 위에서 설명한대로 진행, 제조되었지만, 첫 번째 완충용액 첨가물에 분석물질이 들어있지 않았다.

액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분광법

분석은 가열 분무기 연결장치(heated nebulizer interface)를 갖춘 질량분석기 (PE Sciex API 300 tandem quadrupole mass spectrophotometer)를 이용하여 수행하였다. HPLC에 장치(Hewlett-Packard HP 1090L)를 이용하였다. 사용되는 컬럼은 컬럼(LiChrosorb RP-18 reversed phase column)(내경 250×4mm , 입자크기 10㎕ , E. Merck)이다. 이동상은 pH 5의 메탄올-2mM 암모늄 아세테이트 (60 : 40 v/v)로 이루 어진다. 유속은 1ml/min이다. 추출물 100 ㎕을 액체 크로마토그래피 컬럼안에 주입시킨다.

컬럼 용리액은 나누지 않고 질량 분석기로 흘렸다. 방전자(discharge needle) 전류는 4KV에 설정하였다. 5bars의 분무기 기체 압력(질소)을 사용했다. 경계면 가열기(interface heater)는 500。C에 맞추어 놓는다. 동공 판(Orifice plate)의 전압은 25V이다. 양이온을 4극자 질량 분석기(quadrupole mass analyser)로 채취하였다.

선택적 반응 모니터링 기술로 측정하였다. 질량 분광계의 첫 번째 4극자 필터 Q1에서 활성 대사물질(Ⅱ)에 대해서는 246 m/z에서, Q2에서 충돌 유발된 부분의 내부표준 물질에 대해서는 260 m/z에서 양성자화(protonated) 분자가 통과하도록 설정하였다. 그 다음에, 205m/z와 218m/z의 각 생성물 이온을 Q3으로 통과시키며 모니터링 하였다. 200ms의 체류 시간과 100ms의 정지 시간이 소요된다. 선택 반응 모니터링 크로마토그램은 PE Sciex API 300 데이터 시스템으로 기록한다.

정량과 계산

분석물질과 내부 표준 물질의 피크(peak) 면적률을 농도에 따라 나타낸다. 기준 곡선식의 결정과 미지의 시료에 대한 농도는 PE Sciex API 300 데이터 시스템과 PE Sciex MacQuan 1.4 프로그램으로 수행한다. 정량의 한계는 0.200ng/ml이다. 활성 대사물질(Ⅱ)에 대한 기준 곡선(calibration curve)을 작성한다.

특이성

활성 대사물질(Ⅱ)과 그것의 내부 표준 물질의 생성 이온을 선택적 반응 모니터링 기술로 관찰한다. 이 방법은 혈장에서 나오는 배경이온들에 대하여 특이적이다. 순수 혈장 추출물에서는 간섭 피이크(peak)가 관찰되지 않는다. 도 1과 도 2는 지원자로부터의 기준(calibration) 혈장 시료와 약물투여후 혈장 시료를 보여준다.

실시예 3. 본 발명의 조성물에 대한 시험관내 및 생체내 실험

실시예 1의 제형 1, 2, 3을 용해도 시험에 사용하였다. 제형의 용해속도는 50rpm에서 pH 5.8 인산염 완충용액중에서 미국 약전 ⅩⅩⅡ(바스켓 조합법: basket assembly method)에 의해 측정하였다. 제형 1, 2, 3의 결과를 각각 도 3, 4, 5에 나타낸다.

다음, 실시예 1의 제형 1, 2, 3을 레보시멘단 2mg의 1회 경구투여로서 건강한 지원자에게 투여하였다. 각 그룹은 9명으로 이루어진다. 대사물질 (Ⅱ)의 혈장 수준은 투약 후 12시간에 측정하였다. 결과는 표1에 나타낸다.

표 1. 건강한 사람(n=9)에게 레보시멘단 1회 경구 투여후 12시간 후에 나타난

대사물질(Ⅱ)의 혈장 농도 (pg/ml). 임상 조사 3001047

피검자	제형 1	제형 2	제형 3
1	<	<	<
2	<	205	<
3	298	295	347
4	214	240	262
5	<	<	<
6	249	572	1300
7	<	<	<
8	<	<	<
9	<	392	<
평균값	85	189	212
SD	129	208	429

SD = 표준편차

< = 측정 한계값 이하 (200 pg/ml)

실시예 4. 비교 조성물에 대한 시험관내 및 생체내 실험

다음과 같이 구성되는 비교제형을 용해도 시험에 사용하였다.

레보시멘단 2.0 mg

메토셀 K4M 35.0 mg

아비셀 PH101 101.6 mg

스테아린산 1.4 mg

상기 제형은 분말성 물질을 체로 거르고 균일해질 때까지 혼합하고, 그 혼합물을 경질 젤라틴 캡슐 3번에 충전하여 제조하였다.

제형의 용해속도는 50rpm에서 pH 5.8 인산염 완충용액중에서 미국 약전 ⅩⅩⅡ(바스켓 조합법: basket assembly method)에 의해 측정하였다. 결과는 도 6에 나타낸다.

다음, 비교 제형을 레보시멘단 2mg의 1회 경구 투여량으로 건강한 지원자 8명에게 투여하였다. 대사물질 (Ⅱ)의 혈장 수준은 투약 후 12시간에 결정하였다. 그 결과를 표 2에 나타낸다.

표 2. 건강한 사람(n=8)에게 레보시멘단의 1회 경구 투여 12시간후 대사물질(Ⅱ)의 혈장 농도 (pg/ml). 임상 조사 3001047

피검사자	비교 제형
1	<
2	283
3	1330
4	1260
5	253
6	268
7	492
8	833
평균값	590
SD	496

SD = 표준편차

< = 한계 측정값 이하 (200 pg/ml)

그러므로, pH 5.8 인산염 완충용액중에서 미국 약전 ⅩⅩⅡ(바스켓 조합법: basket assembly method)에 따라 결정할 때 레보시멘단 함량의 적어도 90%에 대하여 실질적으로 1 내지 4시간 사이에 총 시험관내 용해 시간을 갖는 본 발명의 제형들은 느린 용해속도를 갖는 비교 제형에 대하여 생체내 대사물질(II)의 유의성 있게 낮은 혈장 수준을 제공한다.

실시예 5. 레보시멘단 투여 7일후 레보시멘단과 활성 대사물질(Ⅱ)의 혈장 수준

안정-상태 임상 연구로서, 레보시멘단 1mg을 건강한 사람에게 7일 동안 하루에 세 번 경구투여하였다. 레보시멘단과 대사물질(Ⅱ)의 혈장 수준을 치료 중에 계속 측정하였다. 사용한 제형은 실시예 1의 제형 3대로였고, 다만 레보시멘단 총량이 1mg이고, 미세결정 셀룰로즈(아비셀 PH-200)의 총량이 51.0mg인 것만 달랐다. 마지막 투여(7일째)후 1시간 내지 4시간 후 레보시멘단의 평균 혈장 수준과 마지막 투여후(7일째) 8시간 후 대사물질(Ⅱ)의 평균 혈장 수준을 표 3에 나타낸다.

표 3. 레보시멘단 투여 7일후 레보시멘단과 활성 대사물질(Ⅱ)의 평균 혈장 수준

	레보시멘단 (7일째)		대사물질 (Ⅱ) (7일째)
	1시간	4시간	8시간
혈장수준	15.4	8.9	3.44
표준편차	8.9	4.9	1.84
인원수	14	14	13

위 결과는 본 발명의 제형이 장기간에 걸쳐 안정하고 치료학적으로 유효한 레보시멘단의 혈장 수준을 제공하는 반면, 대사물질(II)의 안정-상태의 혈장 수준은 허용치 범위내에 유지된다는 것을 보여준다.

실시예 6. 추가의 제형 실시예

제형 6. (캡슐)

레보시멘단 1.0 mg

메토셀 K100LV 35.0 mg

아비셀 PH-200 80.5 mg

스테아린산 6.4 mg

레보시멘단, 메토셀 K100LV과 미결정 셀룰로즈(아비셀)를 체로 걸러서, 적당한 혼합기(튜뷸라나 유사장치)로 혼합한다. 스테아린산을 체로 거르고, 적당한 혼합기(튜뷸라나 유사장치)로 혼합물과 섞는다. 혼합물을 캡슐 충전기(Harro Hofliger, MG2)를 이용해서 흰색 젤라틴 캡슐 3번에 충전하였다.

상기 제형에 대한 용해 결과(USP ⅩⅩⅡ, 인산염 완충용액, pH 5.8, 100 rpm)를 표 4에 나타낸다.

표 4. 인산염 완충용액, pH 5.8, 100 rpm에서 제형 6의 시험관내 용해 곡선

분	용해도 (%)
5	12,1
15	43,7
30	65,0
45	77,4
60	88,3
120	95,7
180	97,4
240	97,8
300	98,1
360	98,1

제형 7. (매트릭스 정제)

레보시멘단 1,0 mg

메토셀 K100LV 30,0 mg

크로스카멜로즈 소디움 0,27mg

아비셀 PH- 200 100,0 mg

스테아린산 4,0 mg

레보시멘단, 메토셀 K100LV, 크로스카멜로즈 소디움(Croscarmellose sodium)과 미결정 셀룰로즈(아비셀)를 체로 걸러서, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 혼합한다. 이 단계에서 얻어지는 분말 혼합물을 체로 거르고, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 혼합한다. 스테아린산을 체로 거르고, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 상기 분말 혼합물과 섞는다. 상기 혼합물을 적당한 타정기(펀치반경 7mm, 동공 반지름 10,5mm, 경도 60N)로 정제로 압착한다.

상기 제형에 대한 용해시험(USP ⅩⅩⅡ, 인산염 완충용액, pH 5.8, 100 rpm) 결과는 다음과 같다.

표 5. 인산염 완충용액, pH 5.8, 100 rpm에서 제형 7에 대한 시험관내 용해곡선

분 용해도 %
10 33,7
20 47,8
30 60,9
40 72,6
50 78,5
60 82,5
90 88,5
120 90,0
180 92,2
240 94,8
300 96,9

제형 8 (매트릭스 정제)

레보시멘단 1,0 mg

크로스카멜로즈 소디움 0,11 mg

아코핀 NF 10,0 mg

아비셀 PH- 200 100,0 mg

레보시멘단, 크로스카멜로즈 나트륨, 미결정 셀룰로즈(아비셀)를 체로 걸러서, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 혼합한다. 이 단계에서 얻어지는 분말 혼합물을 체로 거르고, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 혼합한다. 아코핀(Akofine) NF(수소화 식물성 기름)를 체로 거르고, 적당한 혼합기(터뷸라나 유사장치)로 상기 분말 혼합물과 섞는다. 이 혼합물을 적당한 타정기(반경 7mm, 동공 반지름 10,5mm, 경도 60N)로 정제형태로 압착한다.

다음 청구범위에서 정의되는 바 본 발명의 요지로부터 벗어나지 않은 범위 내에 서 본 발명에 개시된 실시형태들에 다양한 변경과 변화를 가할 수 있을 것이다.

Claims (14)

1. a) 치료학적으로 유효량의 [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 레보시멘단)과 b) 1시간 이상 기간동안 레보시멘단의 방출과 20ng/ml 미만의 대사물질(Ⅱ)(R-N-[4-1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]아세트아마이드(II))을 7일의 투여기간의 마지막 투여후 8시간에서의 혈장수준(이하 “정상-상태의 혈장 수준(steady-state plasma level for metabolite(II)”이라 한다.)을 유지하는 약물 방출 조절 성분을 포함하는 경구 투여용 조절 방출 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 약물 방출 조절 성분이 상기 조성물이 대장에 도달하기 전에 [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 레보시멘단)이 방출되도록 하는 조성물.
3. 제 1항 또는 2항에 있어서, 하이드록시프로필메틸 셀률로즈, 하이드록시프로필 셀룰로즈, 카르복시메틸 셀룰로즈 및 알긴산 또는 그 혼합물에서 선택된 친수성 겔형성 폴리머류, 수소화 콩기름, 경화 카스터 오일, 면실유 및 그 혼합물에서 선택된 식물성 지방 및 오일, 및 그리세릴 트리스테아레이트류, 그리세릴 트리미리스테이트류, 그리세릴 트리팔미테이트류, 그리세릴 트리베헤네이트류, 그리세릴 팔미토스테아린산 에스테르에서 선택된 포화지방산의 트리그리세라이드류나 그 혼합물에서 선택된 지방산 에스테르류에서 선택된 약물방출조절성분인 조성물.
4. a) 치료학적으로 유효량의 [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴(일반명 : 레보시멘단)과 b) 1시간 이상 기간동안 레보시멘단의 방출을 제공하는 경구용 조절 방출성 조성물에서, 미국약전 XXII바스켓 조합법(basket assembly method)으로 붕해도 측정시에 pH5.8 인산염완충액중에서 및 100rpm에서 1～4시간내에 레보시멘단의 90%이상이 용해 또는 붕해되는 용해속도를 가지는 조성물
5. a) [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 레보시멘단)과 부형제를 함유하는 신속 방출 부분과 b) 레보시멘단과 청구항 3의 약물 방출 조절 성분을 함유하는 조절 방출성 부분을 포함하는 경구투여용 조절 방출성 조성물.
6. 제 5항에 있어서, a) [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 레보시멘단)과 부형제를 포함하는 분말 형태의 신속 방출 부분과 b) 레보시멘단과 청구항 3의 방출 조절 친수성 겔 형성 폴리머를 포함하는 과립 형태의 조절 방출 부분을 포함하는 조성물.
7. 제 5 항에 있어서,

   신속방출부분이 [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 보시멘단)와 미세결정성 셀룰로오스를 포함하는 조성물.
8. 제 6 항에 있어서,

   방출 조절 친수성 겔 형성 폴리머가 히드록시프로필메틸 셀룰로즈, 알긴산, 또는 그 혼합물인 조성물.
9. 제 5 항에 있어서,

   약물 중량대비 25% 내지 75%가 조절 방출 부분에 존재하는 조성물.
10. 제 6 항에 있어서,

    친수성 겔 형성 폴리머의 양이 조성물 중량대비 20% 내지 80%인 조성물.
11. 제 1항에 있어서, a) 치료학적으로 유효량의 [[4-(1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]히드라조노]프로판디니트릴의 (-)에난티오머(일반명 : 보시멘단)과 b) 1시간 이상 기간동안 레보시멘단의 방출과 20ng/ml 미만의 대사물질(Ⅱ)(R-N-[4-1,4,5,6-테트라하이드로-4-메틸-6-옥소-3-피리다지닐)페닐]아세트아마이드(II))을 7일의 투여기간의 마지막 투여후 8시간에서의 혈장수준(이하 “정상-상태의 혈장 수준(steady-state plasma level for metabolite(II)”이라 한다.)을 제공하는 청구항 3의 약물방출 조절성분을 포함하는 경구 투여용 조절 방출 조성물.
12. 제 6 항에 있어서,

    약물 중량대비 30%내지 70%가 조절 방출 부분에 존재하는 조성물.
13. 제 6 항에 있어서,

    약물 중량대비 40%내지 60%가 조절 방출 부분에 존재하는 조성물.
14. 제 6 항에 있어서,

    친수성 겔 형성 폴리머의 양이 조성물 중량대비 30%내지 70%인 조성물.

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