KR100695322B1 - 메밀등겨로부터 수용성섬유소 및 파고피리톨의 저온 및 연속추출 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 메밀등겨로부터 콜레스테롤 저하 작용 및 혈당저하 기능이 있는 수용성섬유소(Water soluble fibers)와 파고피리톨(fagopyritol) 성분을 저온 및 연속적으로 추출 정제하는 방법 및 이의 추출물을 포함하는 당뇨병 치료용 조성물 가공에 관한 것으로서,

메밀등겨에 고농도의 에탄올을 넣고 가열하여 짧은 시간에 효소 활성을 정지시키는 단계;

상기 효소활성을 정지시킨 후 원심분리 하여 잔사와 에탄올을 분리하는 단계; 상기 잔사에 5배량의 물을 가하여 슬러리를 형성하는 단계;

상기 슬러리를 30 내지 50℃의 수조에서 교반하면서 1차 가온 추출하는 단계;

상기 가온 추출 후 슬러리를 균질기로 3분간 2차 추출하는 단계;

상기 2차 추출한 슬러리를 원심분리 하여 침전물과 상등액으로 분리하는 단계;

상기 분리되어진 상등액에 에탄올을 가하여 최종 에탄올의 농도가 65%가 되도록 하여 수용성섬유소를 침전시켜 원심분리 한 후 침전물-Ⅰ과 상등액을 분리하는 단계;

상기 분리된 상등액에 최종 에탄올의 농도가 75%가 되도록 하여 수용성섬유소와 파고피리톨을 침전시켜 침전물-Ⅱ와 상등액을 분리하는 단계;

상기 분리된 상등액에 최종 에탄올 농도가 85%가 되도록 하고 침전시켜 고순도의 파고피리톨 침전물-Ⅲ을 얻는 단계를 포함하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 저온 및 연속 추출 방법에 관한 것이다.

수용성섬유소, 파고피리톨, 메밀등겨, 당뇨병

Description

메밀등겨로부터 수용성섬유소 및 파고피리톨의 저온 및 연속추출 방법{Extraction methods of water soluble fibers and fagopyritol from buckwheat bran at a low temperature and in a continuous manipulation}

도 1는 본 발명에 따른 정제 과정을 보인다.

도 2는 앰버라이트 XAD 7를 이용하여 서당(sucrose)의 제거가 효율적임을 보인다. (a) 표준 다당류의 가스크로마토그램, (b) 65% 에탄올 침전물의 가스크로마토그램, (c) 75% 에탄올 침전물의 가스크로마토그램, (d) 85% 에탄올 침전물의 가스크로마토그램, (e) 파고피리톨 분말을 앰버라이트 XAD 7을 이용하여 서당을 제거한 후 가스크로마토그램

본 발명은 메밀등겨로부터 수용성 섬유소와 파고피리톨의 연속 추출방법에 관한 것으로서, 메밀등겨로부터 연속적으로 수용성섬유소(water soluble fiber) 및 파고피리톨(fagopyritol)을 추출하는 방법에 관한 것이다.

곡물의 저분자 수용성섬유소는 면역성이 높아 최근에 와서 전 세계적으로 폭 넓게 연구가 진행되고 있으며 면역증강 작용뿐만 아니라 콜레스테롤 저하 작용, 혈당 저하작용 등 여러 가지 기능성을 갖고 있는 물질로 알려져 있다. 곡류 세포벽의 주요 구성성분인 헤미셀룰로오스(hemicellulose) 가운데 펜토산인 아라비노자일란(arabinoxylan)은 대표적인 헤테로글루칸류(heteroglucan)의 일종으로서 면역부활작용, 항당뇨, 감염에 대한 저항력 강화, 악성 종양 치료보조제 등의 생리활성 작용이 알려지면서 새로운 기능성 식품소재로서 주목받고 있다(Maeda, H., Food Style 21, 3(12): 56-58,1999). 그러나 아라비노자일란의 경우에는 곡류의 세포벽 내에서 자유형으로 존재하는 것이 아니라 다른 세포벽 성분과 강하게 결합된 불용성의 상태로 분포하고 있다는 연구보고가 있다(Hatfield, R.D. et al., J. Sci. Food Agric., 79: 404-407, 1999). 인체 내에는 상기와 같은 불용성 조직을 수용화하는 효소체계가 없어 아라비노자일란의 생체이용성을 기대하기가 어렵다. 아라비노자일란은 아라비노오스와 자일로스의 구성으로 만들어 진 대표적인 수용성섬유소로서 저분자량의 아라비노자이란은 면역성이 보다 강한 것으로 연구보고 된 바 있다(田澤賢次 등, 富山醫科藥科大學 醫學剖 成人看護學科 外科系. 前田浩明, 日本 大和藥品株式會社). 수용성섬유소의 인체 내 대사성 질환에 대한 작용으로는 고점성에 의한 소화관 내에서의 통과시간의 지연과 대장 내에서 발효되기 쉬운 점이 특징이라 할 수 있다. 당뇨병의 역학조사 결과로는 제2차세계대전시에 영국에서 당뇨병 사망률이 현저하게 감소하였는데 그 원인은 공급된 빵의 정백도가 낮은 시기와 잘 일치함으로서 밀기울 성분 중의 수용성섬유소가 당뇨병 예방 및 치유에 효과가 있다는 것을 확인하게 되었다. 밀기울 중의 헤미셀룰로오스는 잘 알려진 수용성섬 유소로서 초기의 제조방법은 전처리→ 분리→ 정제 3공정으로 알려져 있으며 일반적으로 전처리에서는 프로티아제 혹은 글루코시다아제 등의 효소를 처리하여 단백질과 탈 전분하는 전처리 과정이며, 분리처리에서는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 암모늄 등의 강알칼리에 의하여 추출하는 것이 일반적이다. 분리는 에탄올, 아세톤 등으로 유기용매 침전법에 의하여 분리하는 것이 일반적이다. 그러나 침전물에 염류 또는 아세톤과 같은 유기용매가 혼입되기 때문에 그러한 물질들이 인체 내에서 생리활성에 저해를 가져올 수 있다. 따라서 최근에 와서 이온교환수지 혹은 진공건조 등의 방법으로 정제하는 경우가 많다. 밀기울 중의 헤미셀루로오스 성분조성은 자이로오스 46.2%, 아라비노오스 38.1%, 글루코오스 8.3%, 우론산 3.9%, 조단백질 5.3%로 구성되어 있다(森 文平, 食物纖維の科學, 朝倉書店, 25p). 따라서 수용성섬유소 중의 헤미셀루로오스를 가스 크로마토그래피 등으로 분석하면 아라비노오스와 자이로오스 등이 검출되며 그 외 글루코오스 및 우론산 등이 소량 출현된다.

일반적으로 곡물로부터 헤미셀루로오스를 추출하는 방법으로는 알칼리로 추출하는 것이 좋지만 기능성 식품의 가공을 목적으로 추출할 경우에는 시료에 대하여 5배 이상의 물을 가한 다음 냉각장치가 부착된 추출 탱크에서 95 ℃의 온도로 4시간 교반 추출하는 것이 일반적이다. 델코어 등은(J. A. Delcour et al : Nuclear Magnetic Resonance and Methylation analysis-Derived Structural Features of Water-Extractable Arabinoxylans from Barley Malts. J. Agric. Food Chem. 1997, 45, 2914-2918) 보리를 시료로 하여 130 ℃에서 5시간 추출하여 아라비노자일란을 제조하여 보고한 바 있다.

메밀의 등겨에 함유되어 있는 수용성섬유소는 아직 연구된 것이 없으며 본 연구에서는 건조된 메밀등겨에 5배량의 물을 가하여 저온으로 추출하였으며 이 때 파고피리톨 성분을 연속 추출함으로서 제조과정을 간소화 시키는데 목적을 두었다. 메밀등겨 중의 파고피리톨은 갈락토오스와 카이로-이노시톨의 결합물질로서 체내에서 분해되어 생성된 카이로-이노시톨이 인슐린의 대사 조절작용을 나타냄으로서 제2당뇨병 환자에 대한 혈당량을 효과적으로 조절하는 기능을 갖는 물질로 알려져 있다. 최근에 메밀등겨로부터 추출된 파고피리톨은 갈락토오스와 카이로-이노시톨의 결합체로서 이성체 6개(파고피리톨 B1은 갈락토오스와 카이로-이노시톨의 비율이 1 : 1의 결합체로서 혈당저하 기능에서 가장 활성이 높음)가 발견되었으며, 오벤도르프(Obendorf, R. L. et al. Fagopyritol, D-chiro-Inositol, and Other Soluble Carbohydrates in Buckwheat Seed Milling Fractions : J. Agric. Food Chem. 2000, 48, 2843-2847)등의 연구에 의하면 메밀등겨 100g 중 6.4g 의 수용성 당류가 함유되어 있고 그 중 서당(sucrose)이 55%, 파고피리톨은 40% 함유되어 있는 것으로 보고되어 있다. 오벤도르프(R. L. Obendorf, Kathryn j. Steadman, David J. Fuller, Marcin Horbowicz, Betty A. Lewis ; Carbohydrate Research (2000). 328, 623-627) 등은 메밀 등겨를 에탄올과 물을 1 : 1로 혼합하여 균질기에서 2분간 추출하였다. 그러나 균질기만으로는 수용성섬유소와 파고피리톨을 대량 추출 생산하는 것이 불가능하다. 오벤돌프 등은 50% 에탄올로 2분간 와링브랜더로 추출했지만 본 발명에서는 물로 30-50℃로 저온 추출한(대체적으로 수용성섬유소 추출) 후 즉시 균질기(대체적으로 파고피리톨 추출)로 연속 추출하면 수용성 섬유소와 파고피 리톨이 대량 추출 생산되어지는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 메밀등겨로부터 당뇨병 예방, 콜레스테롤 저하작용 및 혈당 저하 기능성 물질인 수용성섬유소와 파고피리톨의 경제적이면서, 간편한 추출 방법 개발을 목적으로 한다.

본 발명은 연속적으로 추출되어진 고순도의 수용성섬유소와 파고피리톨을 포함하는 당뇨병 치료용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 메밀등겨로부터 수용성섬유소 및 파고피리톨을 저온에서 물로 추출하는 것을 특징으로 하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 연속 추출 방법에 관한 것이다.

본 발명은 메밀등겨로부터 수용성섬유소를 물을 용매로하여 저온 추출하고 연속적으로 파고피리톨을 물로 추출하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 메밀등겨로부터 연속적으로 추출되어진 수용성섬유소와 파고피리톨을 포함하는 것을 특징으로 하는 당뇨병치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따라 사용되어질 수 있는 추출 용매는 물 이외에 에탄올 등의 유기용매가 사용되어질 수 있다.

이하 본 발명을 설명하면 다음과 같다.

메밀등겨로부터 수용성섬유소를 저온 추출할 때 파고피리톨을 연속해서 추출하는 수용성 섬유소와 카이로-이노시톨 유도체의 추출방법은 다음과 같다. 즉 메밀등겨에 90% 고농도의 에탄올을 넣고 단시간(10분간) 가열하여 효소 활성을 정지시키는 단계;

이를 원심분리 하여 잔사와 에탄올을 분리하는 단계, 잔사에 물을 가하여 슬러리를 형성하는 단계;

상기 메밀등겨 슬러리를 30 내지 50 ℃의 수조에서 교반하면서 1차 가온 추출하는 단계(여기에서 추출 온도가 50 ℃가 넘으면 단백질 등 기타물질의 동시 추출 가능성이 있으므로 바람직하지 않고, 30 ℃ 이하에서는 실온 추출이 되어 가온 추출보다 효율이 떨어진다);

상기 가온한 슬러리를 균질기(waring blandor)로 2차 추출하는 단계;

상기 2차 추출물을 원심분리 하여 침전물과 상등액으로 분리하는 단계;

상기 상등액에 에탄올을 가하여 최종 에탄올의 농도가 65%가 되도록 하여 침전시킨 다음 침전물-Ⅰ과 상등액을 분리하는 단계;

상기 상등액에 최종 에탄올의 농도가 75%가 되도록 하여 침전물-Ⅱ와 상등액을 분리하는 단계;

상기 상등액에 에탄올 농도가 85%가 되도록 하여 침전물-Ⅲ과 상등액을 분리하는 8단계 조작을 거쳐 수용성섬유소와 파고피리톨 혼합물을 얻는 단계의 가공방법을 포함한다.

상기 본 발명에 따른 파고피리톨의 저온 추출물 및 수용성섬유소 추출물을 추가적으로 정제할 수 있다. 정제 목적은 추출물에 혼합되어 있는 서당을 제거하는데 있다. 서당(sucrose)은 인체 내에서 흡수되어 포도당과 과당을 만들어 당뇨병 치료용 기능식품의 효과를 저하시키는 저해요인으로 판명되기 때문에 정제과정이 반드시 필요하다. 따라서 추가적인 정제 방법으로 인버타아제(invertase) 처리 후 원심분리하고 상등액에 대한 크로마토그래피 방법이 사용되어질 수 있다. 크래마토그래피는 칼럼흡착 크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피, 칼럼분배 크로마토그래피, 겔-여과 크로마토그래피, 가스크로마토그래피 방법 등이 사용되어질 수 있다.

본 발명에서는 이온교환수지 정제법을 실시하였으며 그 방법은 다음과 같다. 즉 동결건조 하여 얻은 분말을 증류수에 용해시켜 1% 농도로 만든 다음 암바라이트 XAD7을 충진시킨 칼럼에 흡착시키고 증류수로 용출시켜 수용성섬유소와 파고피리톨을 회수한다. 흡착되어 있는 글루코오스 등은 50% 에탄올로 용출하여 서당 분해물을 제거할 수 있으므로 암바라이트 XAD7을 이용한 칼럼 크로마토그래피 방법은 목적하는 당뇨병 치료용 조성물을 얻는데 적합하다.

이하 본 발명을 실시 예를 통해 설명하면 다음과 같다. 그러나 본 발명의 범위가 다음의 실시예로 한정되어지는 것은 아니다.

[실시예 1] 메밀등겨로부터 수용성섬유소를 추출하면서 연속하여 파고피리톨을 추출(도1 참조)

메밀등겨를 고농도에 에탄올(90% EtOH)을 처리하여 주고, 75 ℃에서 10분간 가열 교반 하여 주면서 효소 활성을 정지시킨다.

상기 단계에서 얻어진 메밀등겨 가열물을 원심분리(5000rpm/10분)하여 잔사를 모은다.

상기 단계에서 얻어진 잔사를 물에 현탁시킨 후 슬러리를 교반하면서 40 ℃의 저온으로 90분간 가열하여 수용성섬유소를 1차적으로 추출한다

상기 단계에 이어 슬러리를 균질기(waring blandor) 18,000rpm에서 3분간 균질화하여 파고피리톨을 2차적으로 추출한다.

상기 단계에서 얻어진 균질화물을 원심분리(5000rpm/10분)하여 잔사와 상등액으로 분리한다. 분리되어진 상등액을 농축하여 Brix. 12(Brix degree 12)로 조절한다.

상기 단계에서 얻어진 농축된 상등액에 에탄올을 가하여 전체 에탄올의 농도가 65%가 되도록 하여준 후 분자량이 큰 수용성섬유소를 침전시키고 이를 원심분리(10,000rpm/10분)하여 침전물-I과 상등액을 분리한다.

상기 단계에서 얻어진 상등액에 에탄올을 가하여 전체 에탄올의 농도가 75%가 되도록 하여준 후 수용성섬유소와 파고피리톨을 침전시키고 이를원심분리(10,000rpm/10분)하여 침전물 II와 상등액을 분리한다.

상기 단계에서 얻어진 상등액에 에탄올을 가하여 전체 에탄올의 농도가 85%가 되도록 하여준 후 분자량이 작은 수용성섬유소 및 파고피리톨을 침전시키고 이를 원심분리(10,000rpm/10분)하여 침전물-III과 상등액을 분리한다.

침전물 I, II 및 III을 동결건조한 후 조성물을 가스크로마토그래피로 분석한 결과를 표1에 나타내었다.

표 1. 수용성섬유소 및 파고피리톨의 구성당 함량(GC분석)

(단위 : g/100g)

추출분말	아라비노스	자일로오스	람노오스	만노오스	카이로- 이노시톨	갈락토오스	글루코오스
종래추출방법	0.00	0.00	1.48	0.00	7.37	8.18	15.93
65%EtOH침전	1.20	1.81	0.97	1.48	0.00	6.42	2.81
75%EtOH침전	0.54	0.00	0.79	0.00	8.51	12.87	3.42
85%EtOH침전	0.00	0.00	0.96	0.00	14.50	14.55	13.55

※ 종래추출방법 / 50% 에탄올로 균질기에서 추출

표 1에서 보는바와 같이 종래추출 방법으로 얻은 제품 중의 카이로-이노시톨은 7.37g/100g, 갈락토오스 8.18g/100g에 비하여 85% 에탄올로 침전시킨 침전물-Ⅲ에서는 카이로-이노시톨과 갈락토오스의 함량이 14.50 : 14.55g로서 약 2배 정도로 함량이 많았으며 파고피리톨을 구성하는 2가지 성분의 비율이 정확하게 1:1로 나타났다는 것을 알 수 있다.

65% 에탄올 침전물-Ⅰ에서는 아라비노스와 자일로스의 함량은 1.2%와 1.8%로 각각 분석되어 아라비노자일란을 함유하고 있는 것을 알 수 있다. 여기에서 파고피리톨을 형성하는 카이로-이노시톨은 측정되지 않았다. 그러나, 75% 에탄올로 침전시킨 침전물-Ⅱ에서는 카이로-이노시톨과 갈락토오스의 함량은 8.51 : 12.87g이었고, 따라서 수용성섬유소를 침전시키는 에탄올의 농도를 달리함으로서 파고피리톨의 순도를 높일 수 있다는 것을 확인하였으며, 이 때 2가지 물질이 동시에 침전된다는 사실을 확인하게 되었다. 따라서 65%에탄올로 침전시켰을 때 분자량이 큰 수 용성섬유소 침전물을 얻을 수 있고, 75% 에탄올로 침전시켰을 때 비교적 분자량이 작은 수용성섬유소가 침전하면서 파고피리톨이 동시에 침전되었고, 85%의 에탄올로 침전시켰을 때 고순도의 파과피리톨을 얻을 수 있었다.

[실시예 2] 침전물 중의 서당을 제거하기 위한 정제조작은 다음과 같다.

실시예 1에 의해 균질기를 통과한 추출액에 함유되어 있는 서당은 1차적으로 에탄올 농도를 달리하면서 수용성섬유소를 침전시킬 때 유리당이 상등액으로 유입됨으로서 제거되어진다.

추출물 속에 들어 있는 서당은 효소를 처리하여 분해하여 준다. 서당을 분해하는 효소는 인버타아제를 처리한다. 처리 조건은 효소의 제조 판매자의 지침에 따라서 행하였다. 인버타아제는 서당을 포도당과 과당으로 분해한 후 상등액으로 유입시켜 서당을 제거한다.

최종적으로 침전물에 남아있는 서당은 이온교환 크로마토그래피로 2차적인 제거가 가능하다. 즉 암바라이트 XAD7을 직경 5㎝ x 길이 75㎝ 칼럼에 충진 시키고 침전물-Ⅲ의 분말을 1% 농도로 물에 용해시킨 것을 서서히 흘려보내면서 흡착시킨 후 증류수로 칼럼 부피의 10배량이 되게 용출하면서 수용성섬유소와 파고피리톨을 수거한 다음 용출액을 농축하여 다시 동결건조 하여 분말을 만든다. 흡착되어 있는 유리당은 50% 에탄올 용액으로 칼럼 부피의 10배량이 되도록 용출하여 농축한 후 동결건조 하여 분말을 만든다. 이상의 2가지 분말시료 중의 당 성분을 가스 크로마토그래피로 분석 비교한 결과는 표 2 및 도 2와 같다.

표 2. 정제 한 건조분말 중의 구성 당 성분 함량(GC 분석)

(단위 : g/100g)

용매	아라비노오스	자이로오스	람노오스	만노오스	카이로- 이노시톨	갈락토오스	글루코오스
증 류 수	0.45	0.00	0.86	0.00	10.63	13.40	9.37
50%에탄올	0.53	0.00	3.03	0.00	0.00	0.00	17.29

표2에서 보는바와 같이 증류수로 용출한 구에서는 카이로-이노시톨의 분석치 10.63g/100g에 비하여 갈락토오스는 13.40g/100g로서 다소 많은 값을 보이고 있으며 이는 아라비노갈락탄 및 람노갈락탄 등의 구성분으로 해석된다. 특히 글루코오스의 량은 증류수 용출 구에 비하여 50% 에탄올 용출 구에서 약 2배의 량으로 분석됨으로서 앞에서 언급한 추출물 중의 파고피리톨과 서당의 분리 방법으로는 암바라이트 XAD7 칼럼 크로마토그래피가 적합하다(표 2 참조). 이와 같은 결과는 에탄올로 추출하여 정제한 추출물의 암바라이트 XAD7 정제 후 가스크로마토그래피로 분석한 결과에서도 같은 양상으로 분석되었다(표 3 참조).

표 3. 에탄올로 추출한 후 85% 에탄올 침전물 중의 구성 당

(단위 : g/100g)

용매	아라비노오스	자이로오스	람노오스	만노오스	카이로- 이노시톨	갈락토오스	글루코오스
85%침전물	2.12	2.39	1.34	2.19	6.07	16.79	4.93
85%상등액	0.00	0.00	1.74	0.00	14.81	16.12	32.70
증 류 수	0.83	0.54	0.75	0.00	12.13	14.60	22.33
50%에탄올	0.72	0.00	5.29	0.00	1.18	1.62	23.59

85% 에탄올 침전물에서는 글루코오스 함량이 4.93g/100g로서 이는 85% 상등액 중의 글루코오스의 함량은 32.70g/100g에 비하여 적은 편이며, 50% 에탄올로 용출한 액 중의 카이로-이노시톨은 1.18g/100g, 갈락토오스 1.62g/100g이고 글루코오스의 함량은 23.59g/100g로서 연속 추출물에 비해 많은 편이었다.

본 발명은 메밀등겨를 원료로 하여 수용성섬유소와 파고피리톨을 별개로 추출하여 제품을 만들기보다 같은 원료로부터 2가지 물질을 연속적으로 추출 정제하는 방법을 제공한다. 따라서 메밀등겨로부터 효율적으로 당뇨병에 치유효과를 가지는 물질을 간편한 방법으로 추출 분리할 수 있으며, 고순도의 파고피리톨을 얻을 수 있어서, 추출, 분리 및 정제에 소요되는 비용을 절감할 수 있다.

Claims (5)

1. 메밀등겨로부터 수용성 섬유소를 추출하는 방법에 있어서,

   메밀등겨에 90%농도의 에탄올을 넣고 가열하여 효소 활성을 정지시키는 단계;

   상기 효소활성 정지물을 원심분리하여 잔사와 에탄올을 분리하는 단계;

   상기 잔사에 물을 가하여 슬러리를 형성하는 단계;

   상기 슬러리를 30 내지 50 ℃의 수조에서 교반하면서 가온하는 단계;

   상기 가온 슬러리를 균질기로 단시간 균질화하는 단계;

   상기 균질화물을 원심분리 하여 침전물과 상등액으로 분리하는 단계;

   를 포함하는 것을 특징으로 하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 저온 추출 방법.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 파고피리톨 및 수용성섬유소에서 인버타아제 처리하여 서당(sucrose)을 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 저온 추출 방법.
3. 메밀등겨로부터 수용성 섬유소를 추출하는 방법에 있어서,

   메밀등겨에 90% 농도의 에탄올을 넣고 가열하여 효소 활성을 정지시키는 단계;

   상기 효소활성 정지물을 원심분리하여 잔사와 에탄올을 분리하는 단계;

   상기 잔사에 물을 가하여 슬러리를 형성하는 단계;

   상기 슬러리를 30 내지 50 ℃의 수조에서 교반하면서 가온하는 단계;

   상기 가온 슬러리를 균질기로 단시간 균질화하는 단계;

   상기 균질화물을 원심분리 하여 침전물과 상등액으로 분리하는 단계;

   상기 분리되어진 상등액에 에탄올을 가하여 최종 에탄올의 농도가 65%가 되도록 하여 수용성섬유소를 침전시켜 침전물-Ⅰ을 얻는 단계; 및,

   상기 수용성섬유소가 분리된 상등액에 최종 에탄올의 농도가 75%가 되게 하여 수용성 섬유소가 포함된 침전물-Ⅱ를 얻는 단계;

   상기 상등액에 최종농도가 85%가 되도록 하고 침전시켜 침전물-Ⅲ을 얻는 것을 특징으로 하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 연속 추출 방법.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 파고피리톨 및 수용성섬유소에서 인버타아제 처리하여 서당(sucrose)을 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 파고피리톨 및 수용성섬유소의 연속 추출 방법.
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