KR100601395B1

KR100601395B1 - 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법

Info

Publication number: KR100601395B1
Application number: KR1020040089482A
Authority: KR
Inventors: 차환수; 김희성; 김병삼; 김순임
Original assignee: 한국식품연구원; 김희성
Priority date: 2004-11-04
Filing date: 2004-11-04
Publication date: 2006-07-18
Anticipated expiration: 2024-11-04
Also published as: KR20060040226A

Abstract

본 발명은 하기 단계를 포함함을 특징으로 하는 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법에 관한 것이다:

(i) 프로폴리스 원괴를 알콜 또는 주정으로 추출하는 단계;

(ii) 상기 단계 (i) 에 의해 제조된 추출물을 L-리신 모노히드레이트로 분해하는 단계.

프로폴리스, 수용성, L-리신 모노히드레이트, 분말화, 플라보노이드

Description

수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법{A Method For Preparing Water-soluble Propolis Extract And Powder}

본 발명은 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 본 발명에 따른 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법은, 프로폴리스 추출 후 L-리신 모노히드레이트에 의해 프로폴리스 중의 수지 등의 점질성 물질을 분해하는 것을 특징으로 한다.

프로폴리스는 각종 질환을 예방, 치료하기 위해 예로부터 사용된 천연물질이다. 현재, 프로폴리스는 건강증진, 항염작용, 심장병, 당뇨병, 암 등 각종 질병예방을 위해 각종 의약품, 건강보조식품, 건강음료, 기능식품, 화장품 등으로 그 사용범위가 점점 넓어지고 있다. 프로폴리스 표준규격 추출액(SPE)에 의한 실험실 내 동물실험으로부터 혈장내 단백질 증가, 감마 글로블린 증가, 이화(異化)작용, 면역반응의 자극, 혈액중 콜레스테롤 농도의 개선, 트렌스 아미나제 활성 수준의 변화, 단백질, 아미노산의 총량 변화 등 외에도, 임파기관에서의 글리코겐 저하, 셀로플러스민의 활동증가 등에 대한 효과들이 학계에 보고되어 있다. 또한, 프로폴리스의 플라보노이드의 기본적 작용과 생리적 영향에 관한 보고로는 인산화에 의한 효소활동의 변화, 항산화 작용, 유전자 발현의 억제 등의 3가지 효과에 의해 항알레르기 반응, 항바이러스반응, 진통작용, 항종양작용, 아스피린과 같은 효과(항염증 작용)의 생리적 효과에 대한 연구가 보고되어 있다.

따라서, 다양한 제품의 상용화에 따른 프로폴리스의 잠재적 시장은 매우 크다고 볼 수 있으며, 이러한 시장을 넓혀나가는데 있어서 무엇보다도 프로폴리스의 다양한 기능을 과학적으로 규명하고 보다 효율적이고 경제적인 측면에서 산업화가 용이하게 제품을 개발해나가는 연구 활동이 중요하다고 할 수 있다. 그러나 이렇게 탁월한 효과가 입증되더라도 기술적인 활용화와 상품성에 대한 그 지위를 인정받고 시장에서의 위치를 확고히 하기 위해서 현재 알콜에 용해되어 있는 프로폴리스 제품으로는 활용도가 제한되어 있고 또한 어린이들에게 사용이 제한되는 문제점을 안고 있다.

일반적으로 국내의 프로폴리스는 양봉농가에서 소량씩 수취하여 조분쇄한 후 조분쇄된 프로폴리스원괴 1 중량부에 대해 50∼90v/v% 알콜 또는 주정 3∼5 중량부를 가하여 1개월 내지 3개월 동안 정치, 숙성하여 여과한 후 알콜성 프로폴리스를 제조하고 있다.

원래 프로폴리스는 물에는 녹지 않지만, 성분의 일부는 물에 용해되어 녹고, 대부분의 나머지는 알코올, 아세톤, 에텔, 클로로포름, 프로피렌글리콜, 벤젠, 지메틸스루포키사이드, 에틸렌지아민 등의 유기물질에만 녹는다. 또한 온도조건에 따라 용해속도에 차이가 있을 뿐만 아니라 성분의 가용(可溶) 또는 불용(不溶)조건이 달라진다. 예를 들면 왁스성분은 고온의 알코올에는 녹지만 저온상태에서는 녹지 않는다. 알콜 등의 유기물질을 추출용매로 하여 수득한 프로폴리스는 알콜 또는 프로필렌글리콜 등의 용매에 의해 용해성을 갖는 물질로서 물에는 쉽게 녹지 않아 수용화가 어렵고 또한 알콜에 녹아있는 프로폴리스를 분말화하기 위해서는 알콜을 휘발시켜 농축한 후 동결건조하나 이는 알콜이 휘발된 후 프로폴리스의 상태가 물엿처럼 끈끈한 고점성을 띄고 있기 때문에 동결건조 또는 분무 건조 하여도 분말이 되지 않고 끈적한 상태를 유지하여 분말화가 어려운 문제점이 있으며, 이로 인해 프로폴리스의 제형화를 어렵게 하는 문제점을 유발한다.

또한, 일반적으로 국내 양봉농가에서 소량씩 유통되고 있는 프로폴리스는 알코올이 함유되어 있어 항균작용을 가지는 프로폴리스의 용도로 볼 때 어린 아이들에게 사용되기에는 부작용이 초래되어 업계에서는 새로운 수용성 프로폴리스의 제조 방법의 개발이 요구되기에 이르렀다.

이러한 문제점을 해결하기 위한 기술적 수단으로 다음과 같은 기술이 이 분야에서 개발되었다.

대한민국 특허공보(등록번호 10-0216438, 발명의 명칭 : 프로폴리스의 추출방법)에서는 프로폴리스 원괴로부터 프로폴리스를 추출하는 데 있어서, 1차로 프로폴리스 원괴를 -12∼-22℃의 냉동실에서 냉동하여 평균입경이 100∼150㎛까지 되도록 미분쇄한 다음, 여기에 2∼10℃의 냉수를 넣고 교반하여 상층의 밀랍을 제거한 다음 여액을 걸러 침전 불순물을 제거하고 순수 프로폴리스를 분리한 후, 이를 냉동건조하여 분말화하는 기술이 개시되어 있으며, 이와 같이 공지된 종래의 기술은 프로폴리스의 추출공정상 150㎛까지 미분쇄하여야 하는 공정이 필요할 뿐만 아니 라, 특히 여기에 냉수를 가하여 물용해성 프로폴리스만을 추출하는 기술로서, 프로폴리스 성분이 물보다는 알콜 등의 유기용매에 녹는다는 점을 무시한 기술로서 이러한 냉수추출시의 프로폴리스의 유용성분인 플라보노이드 함량이 아주 미세하게 함유되는 문제점이 있다.

대한민국 특허공보(등록번호 특0172568, 1998.10.24, 발명의 명칭 : 프로폴리스 추출정제물의 분말 및 그 수용성액)에서는 프로폴리스의 70% 에탄올 조추출물에 동량의 물을 가하여 35% 수용액을 제조하고, 상층액과 하층액이 형성되면 그 상층액을 분리 회수하여 농도 2w/w%에서의 흡광도로 환산한 경우 600nm에서의 흡광도에 대한 310nm에서의 흡광도가 25,000 이상인 프로폴리스 추출정제물을 제조하며, 여기에 L-리신 또는 L-알지닌을 0.5~2w/v%되도록 가한 후, 냉동, 건조시켜 프로폴리스분말을 제조하는 방법을 개시한다. 이러한 종래의 기술은 알콜에 추출된 프로폴리스에 동량의 물을 가한 후, 하층액을 제거하고, 상층액을 회수하여 농축한 후 여기에 L-리신 또는 L-알지닌을 0.5~2 w/w% 가하는 공정을 포함하며, 알콜에 의해 추출된 프로폴리스에 물을 가하여 1~4시간 동안 교반하고 하룻밤 방치하는 공정상 시간이 소요될 뿐만 아니라, 분리된 하층액을 제거하는데, 이는 상층부보다 하층부에 프로폴리스의 유효성분인 플라보노이드가 형성되어 있어 프로폴리스속에 함유된 플라보노이드를 전체로 수득하기가 어려운 기술상의 문제점이 있다.

일본국 공개특허공보 8－214797(헤세이 8년(1996) 8월 27일 공개, 발명의 명칭 : 수용성 프로폴리스 분말 및 그 제조 방법)에서는 프로폴리스의 물추출에 의한 분말화와 에탄올추출에 의한 분말화의 기술을 제시하고 있다. 즉, 프로폴리스원괴 에 대한 물 추출에 있어서 이용되는 물의 양은, 프로 폴리스 1 중량부에 대해, 4~6 중량부를 사용하고 추출 적정 온도를 40~50℃로 하며, 침지에 의한 추출은, 2회 이상 반복하고 1회당 침지 시간은, 3시간 이상이 바람직하고, 15시간 동안 추출하여 동결건조 등의 과정을 거쳐 분말화하는 기술과 이와는 별도로 파쇄된 프로폴리스원괴를 에탄올 또는 함수 에탄올 90 vol/vol %을 프로폴리스 1 중량부에 대해, 1. 5~5 중량부를 사용한 다음 다시 물로 여러차례 세정하는 과정을 거쳐 분말화하는 기술로서 물추출 분말화의 경우 알콜에 용해되어 있는 플라보노이드와 같은 프로폴리스 유용성분이 끈끈한 프로폴리스 점질성 물질을 분해시키지 못한 관계로 물에 추출된 부분만을 사용하여 프로폴리스 특유의 성분에 미치지 못하고, 에탄올추출 분말화 역시 공정상 물로 세정과정을 거쳐 결국에는 알콜에 용해되어 있는 플라보노이드 성분을 제거되고 또한 여과시 규조토를 사용하여 여과하므로써 규조토에 프로폴리스 유용성 성분에 결착되는 문제점을 내포하고 있다.

대한민국 특허공개 (특1998-075409, 발명의 명칭 : 수용성이 개선된 프로폴리스 추출물, 출원인 가부시키가이샤 하야시바라 세부쓰 가가쿠 겐쿠쇼)에서는 프로폴리스를 95v/v% 에탄올 수용액중에 침지하여 추출함으로써 추출액을 얻고, 침강물을 소량의 물로 세척하여 침강물을 추출하는 기술이 개시되어 있다. 이들 추출물을 한데 모아 농도 80v/v%의 에탄올 수용액중에 고형물을 약 20w/w% 함유하는조(粗)프로폴리스 추출물을 얻은 다음, 여기에 물을 혼합하여 에탄올 농도를 50v/v%로 저하시켰다. 이 희석액을 50℃에서 1시간 방치하여 두 층으로 분리하였는데, 한 층은 프로폴리스의 유효성분을 가진 윗층이었고, 나머지 층은 점착성의 침강물을 가 진 아래층이었다. 이들 층을 실온에서 하룻밤 방치하여 윗층을 회수한 다음, 여기에 탄산수소 나트륨을 가하여 pH를 6.4로 조정한 후, 흡광도비 A310nm/A660nm가 8.425이고 개선된 수용성을 가진 액상의 프로폴리스 추출물을 고형물 기준으로조 프로폴리스 추출액에 대해 약 45%의 수율로 얻었다. 상기의 pH 조절제로는 산화 마그네슘, 산화 칼슘, 수산화 나트륨, 수산화 칼륨, 수산화 마그네슘, 수산화 칼슘, 탄산수소 나트륨, 탄산수소 칼륨, 탄산 나트륨 및 탄산 마그네슘 등의 pH 조절제를 사용하여 pH 5.5~7.0인 추출물을 여과 및 원심 분리하여 물질 C 등의 프로폴리스의 유효성분을 함유한 획분을 얻어 이를 농축, 분말화하여 분말상 프로폴리스 추출물을 얻는 기술이다. 즉 이 기술은 에탄올에 추출된 프로폴리스에 물을 50v/v% 혼합하고 이를 50℃에서 1시간 방치 후 하층액은 버리고 상층액에 대해 pH 조절제를 가하여 pH를 5.5~7로 만든후 농축하여 분말화하는 기술로서, 이 공지된 기술 역시 프로폴리스의 유용성분이 남아있는 점질성 하층부가 pH 조절제로는 분해되지 않은 관계로 이를 제거하여 100% 프로폴리스 추출물을 공정상 획득하지 못하는 단점이 있을 뿐만 아니라 알칼리성 무기염류 pH 조절제의 경우 쓴맛이 강하게 남아있는 문제점을 내포하고 있다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 기존의 프로폴리스는 분말화하기 위하여 알콜에 의해 추출된 프로폴리스 농축물을 용해할 경우 상층부와 하층부를 분리한 후 하층부의 끈끈한 점질성 때문에 분해되지 않아 물에 용해되기가 문제점이 있었고, 이러한 문제점을 해결하고자 당업계에서는 많은 연구가 수행되고 있다. 그러나, 종래에 개발된 프로폴리스의 추출 방법 및 분말화 방법은, 프로폴리스 추출물내 활성성 분인 플라보노이드와 같은 수난용성 물질을 수용성 형태로 제조함에 있어서 한계가 있고, 이러한 한계로 인해 다양한 제형으로의 프로폴리스의 응용을 제한한다.

이에, 본 발명자들 또한 기존의 프로폴리스는 수난용화성인 프로폴리스로부터 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말을 제조할 수 있는 기술을 개발하고자 많은 연구를 수행한 결과, 프로폴리스를 추출할 때 생성되는 수지 등의 점질성 물질을 L-리신 모노히드레이트에 의해 분해하고, 이후 이를 분말화할 경우, 생성된 추출물 및 분말이 수용성이 우수함을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서, 본 발명의 목적은 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 프로폴리스의 수용성 추출물의 제조 방법은, 하기의 단계를 포함함을 특징으로 한다:

(i) 프로폴리스 원괴를 알콜 또는 주정으로 추출하는 단계;

한편, 본 발명에 따른 프로폴리스의 수용성 추출물의 제조 방법은, 상기 단계 (i) 에 앞서, 추출 효율을 상승시키기 위하여 프로폴리스 원괴를 조분쇄하여 프로폴리스 조분쇄물을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

또한, 단계 (i)에서, 추출은 50∼80℃, 바람직하게는 60℃에서 수행되는 것 이 추출 효율면에서 바람직하며, 알콜 또는 주정의 첨가량은, 예를 들어 프로폴리스 원괴 1 중량부에 대하여 알콜 또는 주정 10 중량부의 비율로 할 수 있다. 한편, 추출한 후 -20℃에서 냉장 정치시켜 밀납성분을 제거함으로써, 이후의 단계를 보다 효율적으로 수행할 수 있다. 여기에서, 알콜은 특별히 한정되지는 않지만, 50∼70 부피%, 바람직하게는 70 부피% 의 에탄올 수용액 또는 주정이다. 추출 단계는 1 회만을 수행할 수도 있고, 여러 번 반복하여 추출 효율을 상승시킬 수 있다. 사용된 알콜은 재사용함으로써, 추출시간을 단축시키고, 추출 수율을 증가시킬 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 프로폴리스의 수용성 추출물의 제조 방법은, 단계 (ii)에서 L-리신 모노히드레이트에 의한 분해를 보다 용이하게 하기 위하여, 단계 (i) 및 (ii) 사이에, 상기 단계 (i)에서 제조된 추출물을 여과하여 추출물 중의 고형물을 제거한 다음, 감압 농축 또는 증발 농축 등에 의해 알콜 등을 휘발시켜 농축시키는 단계를 더 포함할 수 있다.

또한, 상기 단계 (ii)에서, L-리신 모노히드레이트 처리에 의한 분해는, 프로폴리스 농축물 1 중량부당(추출 후 에탄올을 모두 휘발시켰을 때의 중량) 3~15 부피% 의 L-리신 모노히드레이트 5~15 중량부의 양으로 처리할 수 있고, 처리 후의 용액의 pH 는 8~12 가 되도록 하는 것이 바람직하다. 가장 바람직하게는, 프로폴리스 농축물 1 중량부당 8 부피%의 L-리신 모노히드레이트 10 중량부의 양으로 처리할 수 있고, 처리 후의 용액의 pH 는 8~12 가 되도록 하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법은, 프로폴리스 추출 물의 수용화 공정이 매우 단순하며, 프로폴리스내 활성성분으로서 유용성분을 80% 이상 함유하며, 이들 유용성분은 물에 쉽게 용해될 수 있다. 이러한 수용성 프로폴리스 추출물은 추출시 사용했던 알콜 등의 추출용매를 휘발시켜 분말화함으로써, 무알콜 분말화 제품으로 상품화하여, 의약품, 식품, 화장품 등의 다양한 소재로 활용할 수 있고, 또한 분말화된 무알콜분말화 제품은 물에 타서 어린이들도 쉽게 부작용 없이 사용할 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 수용성의 프로폴리스 분말을 제조하는 방법은, 하기의 단계를 포함함을 특징으로 한다:

(a) 상기에 기재된 방법에 의해서, 수용성 프로폴리스 추출물을 제조하는 단계;

(b) 상기 단계 (a)에서 제조된 프로폴리스 추출물에, 덱스트린류의 화합물을 첨가한 후, 동결 건조 또는 분무 건조하는 단계.

상기 단계 (b)에서 사용될 수 있는 덱스트린류의 화합물에는, 특별히 한정되지는 않지만, 덱스트린, 말토덱스트린 또는 사이클로덱스트린, 트레할로스 등을 포함하며, 이들의 사용량은 단계 (a)에서 제조된 프로폴리스 추출물 전체량 (추출 후 에탄을 휘발시킨 다음 칭량된 총 중량)에 대해 3∼10 중량부 (다르게 표현하면, 프로폴리스 추출물 1중량부에 대해 0.02∼0.1 중량부), 가장 바람직하게는 5 중량%의 양으로 사용된다.

이렇게 제조된 수용성 프로폴리스 분말 중에는 유용성분이 80% 이상 함유되어 있으며, 이들 성분들은 물에 쉽게 용해될 수 있다.

프로폴리스 원괴로부터 수용성 프로폴리스 추출물을 제조하고, 이어서 수용성인 프로폴리스 분말을 제조하는 방법은, 구체적으로, 예를 들어 다음과 같은 방법에 의해서 수행될 수 있다. 프로폴리스원괴를 보다 빠르고 용이하게 추출될 수 있도록 조분쇄하고, 수득된 조분쇄물에 70 부피%의 알콜 또는 주정을 프로폴리스 조분쇄물 1 중량부에 대해 10중량부의 양으로 첨가한 후, 60℃에서 10시간동안 환류 추출한 후 여과한다. 여액을 모으고 침전물에 다시 상기의 에탄올을 가하여 동일한 방법으로 반복 추출한 후 여액을 결합한다. 여액을 감압하에 농축하여 프로폴리스 알콜 농축물을 얻는다. 원괴에 대한 농축물의 수율은 45% 정도로 얻어질 수 있다. 이때, 수득한 농축물의 플라보노이드는 6% 이상이다. 이 농축물에 대해 분해제인 L-리신 모노히드레이트 수용액을 프로폴리스 농축물 중량에 대해 10배의 양으로 첨가하고, 교반 분해하며, 이때 분해된 수용액의 pH가 8~12가 된다. 수득된 분해물에, 반응계 전체량에 대해 덱스트린류를 5 중량% 의 양으로 첨가하여 혼합한 후, 최종적으로 동결건조 또는 분무건조하여 프로폴리스분말을 제조한다.

또한, 본 발명에 따른 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법은, 알콜에 용해된 프로폴리스 추출물을 80% 이상 취득한 후 분말화시킬 수 있으며, 좀더 상세한 설명을 하자면, 프로폴리스원괴 조분쇄물을 70v/v%알콜로 60℃에서 추출한 다음 냉동(-20℃)에 의해 밀납성분을 제거한 프로폴리스추출물을 감압 또는 증발농축에 의해 완전히 알콜을 휘발시켜 농축시킨 후, 이 농축물에 대해 분해제인 L-리신 모노히드레이트 8v/v% 수용액을 제조하여 프로폴리스 농축물 1중량부에 대해, 8v/v% L-리신 모노히드레이트를 10중량부로 가하여 교반 분해시키고 분해된 수용액 의 pH가 8~12가 되는 수용성 프로폴리스를 제조하고, 전체량에 대해 덱스트린류를 중량대비 5% 가하여 혼합한 후 최종적으로 동결건조 또는 스프레이드라이하여 프로폴리스분말을 제조하여 수용성이 우수한 프로폴리스 분말을 수득할 수 있다.

본 발명의 방법에 따라 제조된 프로폴리스 분말은 수용성이 매우 우수하며, 따라서, 프로폴리스의 여러 생리 기능을 발휘하기 위한 여러 가지 제형을 제조함에 있어, 많은 이점을 갖는다. 또한, 본 발명의 방법에 따라 제조된 수용성이 우수한 프로폴리스 분말은, 건강음료, 캔디, 치약, 구강청정제 및 각종 의약품, 건강보조식품, 기능성식품, 화장품 등의 소재로 널리 활용될 수 있다.

본 발명에 따르면, 프로폴리스 추출물에 대하여 수지 등의 끈끈한 점질성 물질을 분해하여 수용성으로 만들기 위한 분해제로 L-리신 모노히드레이트를 사용하는 경우, L-리신 모노히드레이트와 유사한 HCl 기가 부착된 L-리신-HCl, 및 종래에 프로폴리스 분해제로서 사용된 L-리신과 비교하여, 점질성 물질의 분해가 현저하였고, 제조된 프로폴리스 추출물 및 제조된 분말의 수용성 특성이 매우 우수하다. 이러한 효과에 대해서는 종래에 보고된 적이 없었다. 또한, L-리신 모노히드레이트는 3∼15v/v% 수용액으로 제조하여, 프로폴리스 추출물 1 중량부 대해 5∼15 중량부의 양으로 사용할 경우, 그의 분해 효과가 탁월하였으며, 상기 범위를 벗어난 양으로 사용하면, 분해효과가 없고, 제조된 분말의 수용성 특성이 열화된다.

이하, 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이에 의해서 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1

조분쇄된 프로폴리스 원괴 1kg과 주정 70v/v% 10ℓ를 가하고 환류추출관으로 60℃에서 10시간동안 환류 추출하였다. 추출된 액을 1차로 여과포로 찌꺼기를 여과하고 여과된 추출액을 -20℃의 냉동실에서 2일동안 방치하여 밀납 등의 성분을 제거하고 알콜에 용해된 프로폴리스 추출물 10.43 ℓ를 획득하였다.

총플라보노이드 함량 분석

프로폴리스의 주요 구성 성분인 페놀성 화합물의 대부분을 차지하는 총 플라보노이드의 함량은 식품공전법에 따라 추출액(프로폴리스 추출물로 약 60∼100mg에 상당하는 양)을 칭량하고 90% 에탄올 20ml를 가해 용해, 원심분리(3000rpm, 10min)하였다. 상등액만 취하고 잔류물은 다시 80% 에탄올 8ml로 3회 세척, 추출하고 전추출액을 합하여 80% 에탄올을 사용하여 전량 50ml로 해서 시험용액으로 하였다.

시험 용액 0.5ml를 시험관에 취하고 에탄올 1.5ml, 10% 질산알루미늄용액 0.1ml, 1M 초산칼륨용액 0.1ml, 물 2.8ml를 가하여 충분히 교반하였다. 이를 실온에서 40분간 정치후 액층을 10mm cell을 사용하여 415nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료의 블랭크 대조군으로는 상기 조작중 질산알루미늄용액 대신 물 0.1ml를 가한 것을 흡광도차로 이용하여 퀘세친(Quercetin)으로 작성한 검량선에 의거 총플라보노이드 a mg/ml를 산출하였다.

아래 계산식에 의해 총 플라보노이드 함량을 구하였다.

수율 측정

추출 조건에 따른 제조된 추출액의 수율은 항량이 구해진 라운드 플라스크에 100g 정확히 칭량하고 이를 감압 농축을 해 용매를 완전히 제거하였다. 이를 105℃ 건조 오븐에 넣고 항량이 나올 때까지 건조, 방냉, 칭량을 반복하였다. 전후 차이가 0.3mg이하가 날 때를 항량으로 하여 아래와 같은 식으로 계산하였다.

A : 건조후 수기와 시료 함유된 수기의 항량

B : 건조전 빈 수기의 항량

S : 채취한 시료의 무게(g)

상기와 같은 방법에 의해서 수득된, 가열 온도 및 주정 함량에 따른 프로폴리스 추출 수율 및 플라보노이드 함량을 하기 표 1 에 나타낸다.

구 분		수 율(%)	플라보노이드 함량(%)
가열 온도 (℃)	45	32.5	2.21
	60	44.6	3.12
	75	45.1	3.05
	90	41.3	2.68
주정 함량 (v/v%)	40	25.6	1.54
	55	33.7	2.76
	70	44.6	3.31
	85	46.8	2.77
	98	50.5	2.58

* 상기의 표 1에서 가열시간은 10시간으로 동일하게 추출하였다.

상기에서 확인되는 바와 같이 가열온도에 따른 수율 및 프로폴리스의 유용성분인 플라보노이드 함량이 차이가 있음을 알 수 있었다. 가열온도가 60℃일때 수율 및 플라보노이드 함량이 90℃보다 높게 측정되었으며, 프로폴리스를 추출하기 위한 주정함량을 40, 55, 70, 85, 98%로 조정하여 프로폴리스 원괴 1중량부에 대해 10 중량부로 가하여 가열 추출한 결과, 수율은 주정함량이 높을수록 증가하였으나 플라보노이드 함량은 70%에서 가장 높은 3.31%를 나타내었다. 이것은 주정함량이 높을수록 왁스 성분 등이 함께 용출되어 수율을 증가시킨 것으로 판단된다.

실시예 2

실시예 1에서와 같이 밀납이 제거된 프로폴리스 추출물 10.43 ℓ를 감압농축기로 에탄올을 휘발시켜 농축한 프로폴리스 농축물 310g을 획득하였다. 프로폴리스 농축물은 끈끈하여 점성이 강한 갈색상의 물질이었다. 이와는 별도로 수지 등의 점질성 분해제인 L-리신 모노히드레이트를 8v/v% 수용액으로 제조하였다. 실시예 1에서 제조한 프로폴리스 농축물 310g에 대해 8v/v% L-리신 모노히드레이트를 3.1ℓ를 가한 다음 교반기로 3시간동안 교반 분해한 다음 원심분리기로 잔사를 제거하여 수용성 프로폴리스 수용액 2.4ℓ를 획득하였다.

분해율(수용화율) 측정

프로폴리스 농축물을 L-리신 등으로 분해된 분해물을 미리 계량한 원심분리용기에 200ml을 칭량하고 5,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 분해된 상등액을 분 리하고 용기에 남은 잔사를 측정하였다.

A : 원심분리후 상등액을 제거한 잔사의 무게

S : 채취한 시료의 무게(g)

상기와 같이 하여, 분해제로서 L-리신 모노히드레이트 및 L-리신-HCl 함량에 따른 프로폴리스 농축물의 분해율(수용화율)을 하기 표 2 에 나타낸다.

구 분	L-리신 모노히드레이트(v/v%)					L-리신 HCl(v/v%)
구 분	3	5	8	15	20	3	5	8	15	20
분해율 (%)	65	80	93	95	98	5	12	20	25	28

상기에서 확인된 바와 같이 프로폴리스 점질성 농축물 1중량부에 10중량부의 L-리신 모노히드레이트 및 L-리신 HCl 수용액 함량에 따른 프로폴리스 농축물의 분해율을 측정한 결과, L-리신 모노히드레이트는 낮은 수용액 농도에서도 분해율이 좋았으나, L-리신 HCl의 경우 높은 20%의 농도에서도 분해가 이루어지지 않아, 유사한 L-리신이라도 상당한 차이가 있음을 알 수 있었다. L-리신 모노히드레이트의 농도를 20v/v%로 하였을 경우 분해율은 좋았으나 냄새취가 발생하여 좋지 않았으며, 5∼15v/v% 수용액으로 제조하여 사용하였을 경우 프로폴리스 점질성 농축물의 분해율이 80∼95%까지 분해되어 본 발명에서 이루고자 하는 기술적 수단을 완성할 수가 있었다.

또한, 프로폴리스 농축물 1중량부에 대한 8v/v% L-리신 모노히드레이트의 첨 가량에 따른 분해율은 하기 표 3 에 나타낸다.

구 분	L-리신 모노히드레이트(v/v%)
구 분	1중량부	5중량부	10중량부	15중량부	30중량부
분해율 (%)	62	85	93	94	96

상기와 같이 프로폴리스 농축물 1중량부에 대한 8v/v% L-리신 모노히드레이트 수용액의 첨가량에 따른 분해율을 측정한 결과 수용액이 양이 많을수록 분해율이 증가하였으나 프로폴리스 농축물 1중량부에 대해 8v/v% L-리신 모노히드레이트 수용액 30중량부를 첨가하여 분해시킨 결과 냄새취가 발생하여 상품성이 떨어지는 문제점이 발생하였다. 따라서 프로폴리스 농축물 1중량부에 대한 8v/v% L-리신 모노히드레이트 수용액의 첨가량에 따른 분해율로 보았을때, 분해율은 농축물 1중량부에 대해 8v/v% L-리신 모노히드레이트 수용액 5∼15중량부를 사용하였을 때 최적이었다.

실시예 3

실시예 2에서 얻은 프로폴리스 수용액 2.4ℓ에 분말화가 용이하도록 사이클로덱스트린 120g을 첨가 혼합하여 -20℃에서 동결시킨 다음 동결건조기로 건조하였다. 건조된 프로폴리스를 분쇄기로 분쇄하여 100 mesh 크기의 체에 통과시켜 최종적으로 수용성 프로폴리스 분말 360g을 획득하였다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 수용성 프로폴리스 추출물 및 분말의 제조 방법은, 프로폴리스내에 함유된 유용성 성분을 80% 이상 포함할 수 있 으며, 제조된 프로폴리스 추출물 및 분말은 물에 쉽게 용해될 수 있다.

Claims

하기의 단계를 포함함을 특징으로 하는 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법:

(i) 프로폴리스 원괴를 추출용매로서 알콜 또는 주정으로 추출하는 단계;

(ii) 상기 단계 (i) 에 의해 제조된 추출물을 L-리신 모노히드레이트로 분해하는 단계.
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (i)에서 추출은 50∼80℃에서 수행되며, 추출 용매는 70 부피% 의 에탄올 수용액 또는 주정을 사용하는 것을 특징으로 하는 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법.
제 1 항에 있어서, 추출 후, 추출물을 여과 농축하는 단계를 더 포함함을 특징으로 하는 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (ii)에서, L-리신 모노히드레이트 처리에 의한 분해는, 추출 후 에탄올을 모두 휘발시켰을 때의 중량으로서 프로폴리스 추출물 1 중량부당 3~15 부피% 의 L-리신 모노히드레이트 5~15 중량부의 양으로 처리하고, 처리 후의 용액의 pH 는 8~12 가 되도록 함을 특징으로 하는 수용성 프로폴리스 추출물의 제조 방법.
하기의 단계를 포함함을 특징으로 하는 수용성의 프로폴리스 분말의 제조방법:

(a) 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해, 수용성 프로폴리스 추출물을 제조하는 단계;

(b) 상기 단계 (a)에서 제조된 프로폴리스 추출물에, 덱스트린, 말토덱스트린, 사이클로덱스트린 및 트레할로스로 이루어진 군으로부터 선택된 덱스트린류의 화합물을, 추출 후 에탄올을 휘발시킨 다음 칭량된 프로폴리스 추출물의 총 중량에 대하여 3∼10 중량부의 양으로 첨가한 후, 동결 건조 또는 분무 건조하는 단계.