KR100584157B1 - 퀴나졸린 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 티로신 키나제에 대한 억제활성이 우수하여 비정상적인 키나제의 활성으로 야기되는 질환 예를 들면 암, 건선, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증 등의 치료에 유용한 신규 화합물로서 퀴나졸린의 C-6과 C-7번 위치가 1,4-디옥산기에 의해 연결된 3환 구조의 퀴나졸린 유도체와 이의 제조방법 그리고 이의 의약적 용도에 관한 것이다.

티로신 키나제, 퀴나졸린 유도체, 1,4-디옥산

Description

퀴나졸린 유도체{Quinazoline derivatives}

도 1은 본 발명에 따른 화합물과 대조화합물(Iressa™)의 세포성장억제 활성을 비교하여 나타낸 그래프이다.

본 발명은 티로신 키나제에 대한 억제활성이 우수하여 비정상적인 키나제의 활성으로 야기되는 질환 예를 들면 암, 건선, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증 등의 치료에 유용한 신규 화합물로서 퀴나졸린의 C-6과 C-7번 위치가 1,4-디옥산기에 의해 연결된 3환 구조의 퀴나졸린 유도체와 이의 제조방법 그리고 이의 의약적 용도에 관한 것이다.

다양한 종류의 티로신 키나제 억제제들이 개발되어 암과 관련된 질병을 치료할 목적으로 연구가 진행되고 있다. 이들 티로신 키나제 억제제는 상피세포 성장인자 수용체(EGFR) 티로신 키나제의 ATP 결합부 주변에 경쟁적으로 결합하여 키나제의 티로신에 자가인산화를 방해함으로써 신호전달 경로를 저해하여 종양의 성 장을 억제하고 결국에는 소멸을 일으키게 된다.

성장인자와 결합하는 수용체 티로신 키나제는 세포내 신호전달체계에 있어 가장 중요하게 작용하는 단백질이다. 단백질 티로신 키나제의 신호체계는 다양한 세포내 작용, 대표적으로 세포의 성장, 분화, 이동, 그리고 대사를 조절하게 된다. 그러나 신호전달체계가 비정상적으로 활성화됨으로써 암의 생성, 성장과 확산을 하게 된다. 수용체 티로신 키나제는 세포의 티로신 키나제 도메인과 연결된 세포외 리간드 결합도메인으로 이루어져 있다. 상피세포 성장인자 수용체(EGFR)는 다수의 아군(subfamily)을 포함하는데, 대표적으로 EGFR, HER2(ErbB2), HER3(ErbB3), 및 HER4(ErbB4)가 알려져 있다. 상피세포 성장인자(EGF)가 리간드 결합도메인의 수용체(EGFR)에 결합하게 되면 수용체 키나제는 이합체(homo- 또는 hetero-dimerization)를 형성하게 된다. 동시에 ATP에 의한 티로신 잔기의 인산화가 이루어지게 됨으로써 키나제의 신호전달체계의 활성을 이루게 된다. 형성된 생물학적 신호전달은 다단계의 신호를 거쳐 결국에는 세포의 성장 및 분화를 조절하게 된다.

현재 개발되어 있거나 또는 개발이 진행중인 상피세포 성장인자(EGF)의 신호체계를 저해하는 퀴나졸린 계열 화합물들로서는 PD-153035, Iressa™(ZD-1839), OSI-774, PKI166, GW572016, CI-1033 등이 알려져 있는데, 대부분 상피세포 성장인자(EGF)에 우수한 선택성을 보이고 있다. 이중에서도 이레사(Iressa™)는 비소세포성폐암 치료제로서 2002년에 일본에서 먼저 발매가 되었고, 이어서 2003년 미국에서도 발매가 허용되었다. 이레사(Iressa™)는 특별한 경우에 한하여 치료 효과가 우수하게 나타나고는 있지만, 여러 가지 부작용을 가지며 말기 비소세포성폐암 환자군에 제한적으로 사용되는 단점이 있다. 또한, 상기한 대부분의 개발중인 퀴나졸린 화합물들은 경구투여 때 낮은 용해도에 의한 낮은 생체이용율을 나타내는 바, 이에 약동력학적(pharmacokinetic) 특성을 증가시키는 방향으로 개발이 진행되어 왔다. 가장 우수한 티로신 키나아제 활성을 보이는 것으로 알려져 있는 PD-153035는 낮은 용해도에 의한 낮은 생체이용율 때문에 더 이상 개발이 진행되지 못하였다. 용해도를 증가시키기 위한 노력의 일환으로 퀴나졸린의 C-6 위치에 아민기를 도입하는 방법에 대하여 많은 연구가 이루어져 있다. 그 예로서, 이레사(Iressa™)는 C-6에 몰폴리닐프로폭시(morpholinyl propoxy)기가 도입됨으로써 생체 이용율뿐만 아니라, 생체 내 화합물의 안정성도 현저히 증가되었다. 이레사의 성공적인 합성전략을 이용하여 용해도, 흡수율 그리고 생체이용율을 증가시키는 연구는 지금도 적극적으로 이루어지고 있다. 본 발명 역시 퀴나졸린의 C-6 또는 C-7 위치를 변화시켜 수용성을 증가시키는 연구의 일환으로 수행된 결과이기도 하다.

본 발명자들은 다양한 암과 관련된 다수의 수용체 티로신 키나제의 신호체계를 저해하는 억제제로 사용될 수 있으며, 용해도가 우수하여 생체이용율이 높은 신규 화합물을 개발하고자 다년간 연구 노력을 해왔다. 그 결과, 퀴나졸린의 C-6과 C-7이 1,4-디옥산기에 의해 서로 결합하여 3환 구조를 이루게 되는 신규 구조의 퀴나졸린 유도체를 합성하게 되었고, 또한 합성된 신규 화합물이 상피세포 성장인자 수용체(EGFR) 티로신 키나제에 대하여 우수한 활성을 보이고, 동시에 1,4-디옥산기가 결합되어 있어 화합물의 용해도가 증가되어 생체이용율을 높일 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 퀴나졸린의 C-6과 C-7이 1,4-디옥산기에 의해 서로 연결된 3환 구조의 신규 퀴나졸린 유도체를 제공하는데 그 목적이 있다.

또한, 본 발명은 상기한 신규 화합물의 제조방법을 제공하는데 다른 목적이 있다.

또한, 본 발명은 상기한 신규 화합물이 대조약제와 비교하여 상피세포 성장인자 수용체(EGFR)에 우수한 활성을 나타내므로 비정상적인 티로신 키나제의 활성으로 야기되는 각종 질환의 치료제로서 사용하는 용도를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.

본 발명은 티로신 키나제에 대하여 억제활성을 나타내는 다음 화학식 1로 표시되는 3환 구조의 퀴나졸린 유도체와 이의 제조방법 그리고 이의 의약적 용도를 그 특징으로 한다.

상기 화학식 1에서,

m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 할로알킬기, 시아노기, C_1-6의 알킬기, C_1-6의 알콕시기, 메틸티오기, 니트로기, 또는 -NR⁴R⁵(이때, R⁴ 및 R⁵는 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자 또는 C_1-6의 알킬기)이고; R² 및 R³은 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자, C_1-6의 알킬기, C_2-3의 히드록시알킬기, 또는 치환된 벤질기(이때, 치환기는 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 알킬기 또는 C_1-6의 알콕시기)이고; 또는 R² 및 R³ 는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 또는 O, S, 및 NR⁶에서 선택된 또다른 헤테로원자와 함께 서로 고리로 연결된 5 내지 7원의 헤테로시클릭기(이때, R⁶은 수소원자, C_1-6의 알킬기 또는 C_3-7의 시클로알킬기)를 나타낸다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있다. 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마린산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콘산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루투론산, 엠본산, 글루탐산, 또는 아스파트산 등을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 용매화물(예를 들면 수화물)의 형태로도 존재할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있고, 이러한 화합물의 경우 거울상 이성질체 또는 부분입체이성질체가 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명은 각 이성질체 또는 이들 이성질체 혼합물을 포함한다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어서, 바람직하기로는 m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, C_1-6의 할로알킬기, C_1-6 의 알킬기, 또는 C_1-6의 알콕시기이고; R² 및 R³는 서로 같거나 다른 것으로, 각각 C_1-6의 알킬기, 또는 C_2-3의 히드록시알킬기이거나, 또는 R² 및 R³는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 또는 O 및 NR⁶에서 선택된 또다른 헤테로원자와 함께 서로 고리로 연결된 5 내지 7원의 헤테로시클릭기(이때, R⁶은 수소원자, C_1-6의 알킬기 또는 C_3-7 의 시클 로알킬기)를 형성하는 화합물의 경우이다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어서, 더욱 바람직하기로는 상기 m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, 트리플루오로메틸기, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 또는 메톡시기이고; R² 및 R³는 서로 같거나 다른 것으로 에틸기, 또는 히드록시에틸기이거나, 또는 R² 및 R³가 서로 고리로 연결되어 피페리딘, 피롤리딘, 몰폴린, 또는 N-메틸피페라진기를 형성하는 화합물의 경우이다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어서, 특히 바람직한 화합물을 예시하면 다음과 같다 :

(3-클로로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민,

(3-클로로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

2-[{2-[4-(3-클로로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올,

(3-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-브로모페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민,

(3-브로모페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-브로모페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-브로모페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

2-[{2-[4-(3-브로모페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올,

(3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로-4-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민,

(3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

2-[{2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올,

(4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(4-브로모-2-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민,

(4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-트리플루오로메틸페닐)-아민,

[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-프로필페닐)-아민,

(4-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

(3-클로로-4-트리플루오로메틸페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민,

그리고 상기 화합물들의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물(예를 들면 수화물), 및 이의 이성질체 등이 포함될 수 있다.

한편, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 3환 구조의 퀴나졸린 유도체의 제조방법을 포함한다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법은 다음 반응식 1에 나타낸 바와 같이,

1) 다음 화학식 2로 표시되는 디옥시노 퀴나졸린 화합물과 다음 화학식 3으로 표시되는 아닐린 화합물을 결합반응시켜 다음 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 과정,

2) 상기 화학식 4로 표시되는 화합물을 탈보호 반응하여 다음 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 과정, 및

3) 상기 화학식 4로 표시되는 화합물의 히드록시기를 이탈기로 전환한 후에, HNR²R³로 표시되는 아민 화합물과 결합반응하여 다음 화학식 1로 표시되는 3환 구조의 퀴나졸린 유도체 또는 이의 이성질체를 제조하는 과정을 포함하여 수행한다.

상기 반응식 1에서, R¹, R², R³, 및 m은 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.

본 발명에 따른 제조방법은 각 제조과정별로 구분하여 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

상기 화학식 2로 표시되는 화합물과 상기 화학식 3으로 표시되는 다양한 치환체를 포함하는 아닐린 화합물의 결합반응은, 다양한 유기아민 즉, 피리딘, 트리에틸아민, 2,6-루티딘, 디이소프로필에틸아민 같은 유기염기 또는 탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 수산화나트륨 같은 무기염기의 존재 하에서 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 테트라히드로퓨란, 디옥산과 같은 용매 중에서 10 ℃ 내지 150 ℃에서 임의로 수행한다.

상기 화학식 4의 벤질 보호기의 탈보호 반응은 문헌(Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Green and R.G.M. Wuts, 3rd Ed. Wiely)에서 잘 알려진 방법에 의해 수행할 수 있다. 구체적으로는 팔라듐착콜(Pd/C), 플라티늄옥사이 드를 이용하는 수소화 반응을 수행하거나, 또는 유기산(예를 들면, 트리플루오르아세트산 또는 메탄술폰산)의 존재 하에서 용매가 없거나, 디클로로메탄, 클로로포름, 벤젠 및 톨루엔과 같은 용매 중에서 20 ℃ 내지 120 ℃에서 임의로 수행하거나, 또는 루이스산(예를 들면, 트리브로모보란 또는 트리클로로보란)의 존재 하에서 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄과 같은 용매 중에서 -20 ℃ 내지 50 ℃에서 임의로 수행할 수 있다.

상기 화학식 5로 표시되는 화합물의 히드록시기에 아민기를 도입하기 위해서는, 먼저 히드록시기를 이탈기로 전환시킨 후에 적절한 아민 화합물과 결합반응한다. 이탈기가 술포닐옥시기인 화합물은 유기 염기(예를 들면, 트리에틸아민, 피리딘, 디이소프로필에틸아민)의 존재 하에서 메탄술포닐클로라이드 또는 p-톨루엔술포닐클로라이드와의 반응을 수행하여 얻을 수 있고, 이탈기가 할로젠(Cl, Br)인 화합물은 티오닐클로라이드(SOCl₂), 포스포러스트리클로라이드(PCl₃), 또는 트리페닐포스핀과 테트라클로로메탄 또는 테트라브로모메탄과의 반응을 수행하여 각각 얻을 수 있다. 이탈기가 치환된 화합물에 상기 다양한 R²와 R³가 치환된 아민 화합물의 도입반응은 무기 또는 유기염기(예를 들면 탄산나트륨, 수산화칼슘, 트리에틸아민, 피리딘, 디이소프로필에틸아민)의 존재 하에서 25 ℃ 내지 100 ℃의 온도에서 통상의 유기용매(예를 들면 디클로로메탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭사이드, N-메틸피롤리돈)의 존재 하에서 임의의 다양한 아민화합물을 사용하여 수행하거나, 용매나 염기의 사용함이 없이 R²와 R³가 치환된 아민 화합물만 을 사용하여 반응을 수행할 수 있다. 이때 촉매량의 포타슘요오드, 소디움요오드를 사용할 수 있다.

상기 반응식 1에 따른 제조방법에서 출발물질로 사용되는 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 광학활성을 가지고 있는 바, 이에 광학적으로 순수한 상기 화학식 2로 표시되는 이성질체를 사용함으로써 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 순수한 광학 이성질체로서 제조할 수도 있다.

한편, 상기 반응식 1에 따른 제조방법에서 출발물질로 사용되는 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은, 다음 반응식 2에 따른 제조방법을 수행하여 합성할 수 있다.

상기 반응식 2에서 사용되는 상기 화학식 6으로 표시되는 벤질옥시에틸옥시 란 화합물은 이미 널리 알려진 방법(J. Org. Chem. 1988, 53, 1026; Tetrahedron Lett. 1987, 28, 3597; J. Med. Chem. 1990, 33, 2476)에 의하여 합성할 수 있다. 상기 화학식 6으로 표시되는 벤질옥시에틸옥시란 화합물은 상업적으로 구입한 상기 화학식 7로 표시되는 화합물과 무기염기(예를 들면, 소디움플로라이드, 포타슘플로라이드, 세슘플로라이드)의 존재 하에서 100 ℃ 내지 150 ℃에서 디메틸포름아미드, 디메틸술폭사이드, 또는 N-메틸피롤리딘 같은 용매 하에서 고리화 반응을 시도하여 상기 화학식 8로 표시되는 화합물을 얻을 수 있다. 상기 화학식 8로 표시되는 화합물은 디이소프로필아조디카르복실에이트(DIAD)와 트리페닐포스핀(PPh₃)을 사용하는 미추노부(Mitsunobu) 반응을 수행하여 상기 화학식 9로 표시되는 벤조디옥신 화합물을 얻을 수 있다. 상기 화학식 9로 표시되는 화합물에 니트로기를 도입하고, 니트로기의 환원반응, 그리고 고리화 반응과 할로겐화 반응을 수행하여 상기 화학식 2로 표시되는 화합물을 얻을 수 있다. 상기 화학식 2로 표시되는 화합물의 합성을 위한 각 과정은 일반적으로 잘 알려진 공지방법(J. Med. Chem. 1977, 20, 146; J. Med. Chem. 2002, 45, 3865; J. Med. Chem. 1996, 30, 267; Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997, 7, 2723; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 1911; U.S patent 5,770,599)에 의해 시도할 수 있다.

본 발명에서는 상기 화학식 9로 표시되는 화합물을 질산과 아세트산 또는 황산의 혼합액에 가하여 0 ℃ 내지 100 ℃에서 교반하여 상기 화학식 10으로 표시되는 니트로화합물을 얻을 수 있었다. 니트로기의 환원은 팔라듐착콜(Pd/C) 또는 백금의 존재 하에서 수소화시키거나, 또는 철분말과 암모늄클로라이드의 존재 하에서 50 ℃ 내지 100 ℃로 가열하여 상기 화학식 11로 표시되는 아민화합물을 얻을 수 있었다. 상기 화학식 11로 표시되는 화합물의 고리화 반응은 암모늄카보네이트와 포름아미드 존재 하에서 150 ℃로 가열하여 수행하였다. 상기 화학식 12로 표시되는 화합물의 할로겐화 반응은 티오닐클로라이드나 포스포러스옥시클로라이드의 존재 하에서 가열환류시켜 수행하였으며, 용매를 감압 농축시켜 상기 화학식 2로 표시되는 퀴나졸린 화합물을 얻을 수 있다

이상의 제조방법을 수행하는데 있어 얻어지는 반응 중간체 화합물 또는 상기 화학식 1로 표시되는 목적 화합물은 크로마토그래피와 재결정화와 같은 통상적인 방법에 의하여 분리 및 정제될 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 화합물들은 통상의 무독성 약제학적으로 허용 가능한 담체, 보강제 및 부형제 등을 첨가하여 약제학적 분야에서 통상적인 제제로 제형화할 수 있다. 통상적인 제형이라 함은 예를 들면 경구(정제, 캡슐제, 분말제), 구강 내, 혀 밑, 직장 내, 질 내, 비강 내, 국소 또는 비경구(정맥 내, 해면체 내, 근육 내, 피하 및 관 내를 포함) 투여 제형을 일컫는다. 예를 들면, 본 발명에 따른 화합물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강 내 또는 혀 밑 투여될 수 있다. 액체 제제는 현탁제(예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔(witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유(apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제조된다. 또한, 비경구적으로 예를 들면, 정맥 내, 해면체 내, 근육 내, 피하 및 관 내를 통하여 주사될 수 있다. 비경구 투여를 위해서는 무균의 수용액 형태로서 사용하는 것이 가장 바람직하며, 이때 상기 용액은 혈액과의 등장성을 갖기 위하여 다른 물질들(예를 들면 염(salt) 또는 만니톨, 글루코오스와 같은 단당류)를 함유할 수도 있다.

또한, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 인체에 대한 투여용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 ㎏인 성인환자를 기준으로 할 때 일반적으로 0.01 ∼ 400 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

이상에서 설명한 바와 같은 본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 4-(4-벤질옥시-2-히드록시부톡시)-3-히드록시벤조산 에틸에스테르

3,4-디히드록시벤조산 에틸에스테르(7.5 g, 41 mmol)와 세슘플로라이드(0.14 g, 0.9 mmol)를 디메틸포름아미드(100 mL)에 녹이고 130 ℃에서 교반하면서 2-(2-벤질옥시에틸)-옥시란(8.0 g, 44.9 mmol)을 천천히 넣어 준 다음 같은 온도에서 14 시간 교반시켰다. 반응 후 반응혼합물에 아세트산 에틸에스테르(200 mL)를 가하여 희석시키고 소금물로 세척 후 무수 마그네슘술페이트(MgSO₄)로 건조한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관 크로마토그래피법(헥산/에틸아세테이트=3:1)으로 정제하여 4-(4-벤질옥시-2-히드록시-부톡시)-3-히드록시벤조산 에틸에스테르(6.2 g, 42%)를 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ7.59(d, J=2.1Hz, 1H), 7.54(dd, J=8.3, 2.1Hz, 1H), 7.25-7.37(m, 5H), 6.82(d, J=8.3Hz, 1H), 4.54(s, 2H), 4.32(q, J=7.2Hz, 2H), 4.08-3.92(m, 3H), 3.76-3.69(m, 2H), 1.90-1.76(m, 2H), 1.37(t, J=7.2Hz, 3H); MS-ESI 360(M⁺, 1), 179(5), 137(6), 91(100).

실시예 2. 3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르

4-(4-벤질옥시-2-히드록시부톡시)-3-히드록시벤조산 에틸에스테르(8.5 g, 23.5 mmol)를 무수 벤젠(200 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 디이소프로필아조디카르복실에이트(DIAD; 4.1 mL, 25.9 mmol)와 트리페닐포스핀(PPh₃)을 가하고 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후 관 크로마토그래피법(헥산/에틸아세테이트=5:1)으로 정제하여 3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(7.9 g, 98%)를 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ7.57-7.54(m, 2H), 7.34-7.25(m, 5H), 6.87(d, J=9.0Hz, 1H), 4.53(s, 2H), 4.31(q, J=6.9Hz, 2H), 3.97(dd, J=11.6, 7.8Hz, 1H), 3.72-3.64(m, 2H), 1.98(m, 2H), 1.37(t, J=6.9Hz, 3H); MS-ESI 342(M⁺, 6), 161(4), 91(100).

실시예 3. 3-(2-벤질옥시에틸)-7-니트로-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르

3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(4.2 g, 11.7 mmol)를 아세트산(30 mL)에 가한 후 65% 질산(10 mL)을 천천히 넣어 주었다. 그런 다음 3시간 동안 50 ∼ 60 ℃에서 교반한 후 냉각수에 반응 혼합물을 가하였다. 디클로로메탄(100 mL)으로 2번 추출한 뒤 물로 2번 세척하고, 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고 유기층을 무수 마그네슘술페이트로 건조한 뒤 감압 농축하여 3-(2-벤질옥시에틸)-7-니트로-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(1.9 g, 45%)를 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ7.50(s, 1H), 7.37(m, 5H), 7.14(s, 1H), 5.20(s, 2H), 4.71(m, 1H), 4.38(q, J=7.1Hz, 2H), 4.06(m, 1H), 2.85(dd, J=16.2, 6.4Hz, 1H), 2.70(dd, J=16.2, 6.4Hz, 1H), 1.32(t, J=7.1Hz, 1H).

실시예 4. 7-아미노-3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르

메탄올과 물의 혼합용액(2:1, 60 mL)에 철(2.5 g)과 암모늄클로라이드(4 g)를 넣고 15분 동안 가열환류하였다. 3-(2-벤질옥시에틸)-7-니트로-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(6.2 g, 16.0 mmol)를 가하고 3시간 동안 가열환류하였다. 반응액을 상온으로 냉각시킨 후 고체물질을 여과하고 고체는 디클로로메탄으로 수 번 세척한 다음 여액과 세척액을 합하여 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고 유기층을 무수 마그네슘술페이트로 건조한 뒤 감압 농축하여 7-아미노-3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(4.7 g, 82%)를 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ7.4-7.25(m, 6H), 6.13(s, 1H), 4.52(s, 2H), 4.40-4.1(m, 5H), 3.89-3.71(m, 2H), 1.97-1.86(m, 2H), 1.39-1.3(m, 3H); MS-ESI 357(M⁺, 52), 196(32), 167(13), 91(100).

실시예 5. 7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-3H-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-온

7-아미노-3-(2-벤질옥시에틸)-2,3-디히드로벤조[1,4]디옥신-6-카르복실산 에틸에스테르(2.2 g, 6.2 mmol)를 포름아미드(25 mL)와 암모늄카보네이트(0.99g, 9.9 mmol)에 가하고 3시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 후 반응 혼합물을 실온으로 식힌 후 소량의 물을 가하여 교반시킨 후 형성된 고체를 여과하고 건조하여 백색 고체 7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-3H-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-온(1.5 g, 72%)을 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.83(b, 1H), 7.95(t, J=22.5Hz, 2H), 7.45(d, J=8.1Hz, 1H), 7.35-7.26(m, 4H), 7.0(d, J=10.8Hz, 1H), 4.51-4.37(m, 4H), 4.11-4.04(m, 1H), 3.68-3.62(m, 2H), 1.97-1.91(m, 2H); MS-ESI 338(M⁺, 6), 229(3), 202(2), 174(1), 91(100).

실시예 6. 7-(2-벤질옥시에틸)-4-클로로-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린

7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-3H-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-온(0.9 g, 2.7 mmol)을 티오닐클로라이드(SOCl₂, 10 mL)에 녹이고, 디메틸포름아미드(2 방울)를 가한 후 2시간 동안 가열 환류하였다. 반응액을 상온으로 식힌 후 감압 농축하여 티오닐클로라이드를 제거하였다. 잔류물질에 디클로로메탄(15 mL)을 가하여 녹인 후 포화 중탄산나트륨 수용액으로 수회 세척한 다음, 무수 마그네슘술페이트로 건조한 뒤 농축하여 관크로마토그래피법(30% EtOAc/Hexane)으로 정제하여 7-(2-벤질옥시에틸)-4-클로로-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린(0.7 g, 74%)을 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.85(s, 1H), 7.51(d, J=11.5Hz, 1H), 7.34-7.26(m, 6H), 4.54-4.41(m, 4H), 4.14(q, J=18.9Hz, 1H), 3.68-3.6(m, 2H), 1.99-1.90(m, 2H); MS-ESI 356(M⁺, 2), 338(15), 174(11), 91(100).

실시예 7. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4- 일]-(3-클로로페닐)-아민

7-(2-벤질옥시에틸)-4-클로로-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린(0.40 g, 1.12 mmol)을 이소프로필알코올(5 mL)에 녹인 다음, 3-클로로아닐린(0.21 g, 1.36 mmol)을 넣고 2시간 동안 가열 환류한 후 실온으로 냉각한 다음, 형성된 고체를 여과하여 [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3- g]퀴나졸린-4-일]-(3-클로로페닐)-아민(0.34 g, 67%)을 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.0(b, 1H), 8.88(s, 1H), 8.39(d, J=12.3Hz, 1H), 7.95(t, J=4.8Hz, 1H), 7.74(d, J=9.9Hz, 1H), 7.52(t, J=16.2Hz, 1H), 7.39-7.28(m, 7H), 4.59(m, 4H), 4.20(dd, J=16.2, 6.4Hz, 1H), 3.7(t, J=13.5Hz, 2H), 2.09-1.96(m, 2H); MS-ESI 447(M⁺, 9), 354(1), 257(2), 222(1), 104(4), 91(100).

실시예 8. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4- 일]-(3-브로모페닐)-아민

수율 71%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ10.98(b, 1H), 8.87(s, 1H), 8.37(d, J=12.3Hz, 1H), 8.06(d, J=5.0Hz, 1H), 7.77(t, J=7.8Hz, 1H), 7.50-7.26(m, 8H) 4.63-4.52(m, 4H), 4.23(dd, J=16.1, 6.4Hz, 1H), 3.69(t, J=12.9Hz, 2H), 2.08-1.95(m, 2H); MS-ESI 492(M⁺, 1), 384(1), 340(2), 291(12), 220(10), 164(100).

실시예 9. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4- 일]-(3-클로로-4-플루오로페닐)-아민

수율 97 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.1(b, 1H), 8.83(s, 1H), 8.34(s, 1H), 8.02(m, 1H), 7.70(m, 1H), 7.51(t, J=9.0Hz, 1H), 7.37(s, 1H), 7.32-7.28(m, 6H), 7.72(m, 1H), 4.53-4.69(m, 2H), 4.49(s, 2H), 4.24(dd, J=16.2, 6.4Hz, 1H), 3.7(m, 2H), 2.09-1.96(m, 2H); MS-ESI 465(M⁺, 6), 274(1), 157(2), 91(100).

실시예 10. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-브로모-3-클로로페닐)-아민

수율 67%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.32(b, 1H), 8.79(s, 1H), 8.32(d, J=12.6Hz, 1H), 7.77(d, J=9.9Hz, 1H), 7.58-7.26(m, 8H), 4.57(m, 2H), 4.52(s, 2H), 4.23(dd, J=16.1, 6.3Hz, 1H), 3.67(m, 2H), 2.05-1.95(m, 2H); MS-ESI 510(M⁺, 3), 490(2), 430(5), 269(7), 131(4), 91(100).

실시예 11. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-트리플루오로메틸페닐)-아민

수율 84%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.64(s, 1H), 8.90(s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.18-8.09(m, 2H), 7.74-7.38(m, 8H), 4.56(m, 2H), 4.52(s, 2H), 4.23(dd, J=16.1, 6.2Hz, 1H), 3.66(m, 2H), 2.04-1.94(m, 2H); MS-ESI 481(M⁺, 5), 314(4), 302(4), 222(3), 91(100), 145(79), 921(100).

실시예 12. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-프로필페닐)-아민

수율 90 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.04(s, 1H), 8.72(s, 1H), 8.32(s, 1H), 7.54-7.26(m, 10H), 4.56(m, 2H), 4.52(s, 2H), 4.23(dd, J=16.1, 6.2Hz, 1H), 3.66(m, 2H), 2.55(t, J=7.5Hz, 2H), 2.04-1.94(m, 2H), 1.57(m, 2H), 0.86(t, J=7.5Hz, 3H).

실시예 13. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-플루오로-3-트리플루오로메틸페닐)아민

수율 91 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.01(brs, 1H), 8.80(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.23-8.15(m, 2H), 7.72-7.4(m, 6H), 7.33(s, 1H), 4.56(m, 2H), 4.53(s, 2H), 4.24(dd, J=16.0, 6.1Hz, 1H), 3.65(m, 2H), 2.04-1.94(m, 2H).

실시예 14. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-메톡시페닐)-아민

수율 89%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.19(s, 1H), 8.83(s, 1H), 8.46(s, 1H), 7.57-7.3(m, 9H), 6.93-6.9(m, 1H), 4.57(m, 2H), 4.54(s, 2H), 4.24(dd, J=16.1, 6.1Hz, 1H), 3.77(s, 3H), 3.64(m, 2H), 2.04-1.93(m, 2H).

실시예 15. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-브로모페닐)-아민

수율 94%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ11.1(brs, 1H), 8.86(s, 1H), 8.36(s, 1H), 8.05(m, 1H), 7.73(m, 1H), 7.6-7.04(m, 6H), 7.31(s, 1H), 4.57(m, 2H), 4.54(s, 2H), 4.24(dd, J=16.0, 6.1Hz, 1H), 3.63(m, 2H), 2.04-1.93(m, 2H).

실시예 16. [7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-클로로-4-트리플루오로메틸페닐)-아민

수율 72 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.69(s, 1H), 9.47(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.23-8.2(m, 1H), 7.86-7.21(m, 6H), 4.56(m, 2H), 4.55(s, 2H), 4.24(dd, J=16.2, 6.2Hz, 1H), 3.64(m, 2H), 2.01-1.92(m, 2H).

실시예 17. 2-[4-(3-클로로-4-플로오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2.3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

[7-(2-벤질옥시에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-클로로-4-플루오로페닐)-아민(0.3 g, 0.64 mmol)을 건조된 디클로로메탄(20 mL)에 녹이고 -30 ℃에서 1N-BBr₃(0.97 mL, 0.97 mmol)을 천천히 가하고 2시간동안 교반하였다. 반응 혼합물에 메탄올을 천천히 가한 후 감압 농축하였다. 잔사에 디클로로메탄을 가하여 녹이고 2N-NaOH 수용액으로 세척한 다음, 소량의 소금물로 씻어준 후 Na₂SO₄로 건조하여 농축하여 2-[4-(3-클로로-4-플로오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올(0.16 g, 67%)을 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.62(b, 1H), 8.54(s, 1H), 8.3(m, 1H), 8.12(s, 1H), 7.91(m, 1H), 7.48(t, J=18.2Hz, 1H), 7.27(s, 1H), 4.80(t, J=5.0Hz, 1H), 4.77-4.49(m, 2H), 4.17(dd, J=11.4, 7.7Hz, 1H), 3.70(m, 2H), 1.88(m, 2H); MS-ESI 375(M⁺, 99), 374(100), 44(34).

실시예 18. 2-[4-(3-클로로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.50(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.14(d, J=8.2Hz, 1H), 7.87(d, J=7.3Hz, 1H), 7.3(t, J=12.4Hz, 1H), 7.17(m, 2H), 4.75(d, J=3.5Hz, 1H), 4.49(s, 2H), 3.34(s, 2H), 1.83(d, J=6.2Hz, 2H); MS-ESI 357(M⁺, 2), 356(100), 286(23), 127(14), 9(21).

실시예 19. 2-[4-(3-브로모페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 94 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(b, 1H), 8.56(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.99(d, J=9.0Hz, 1H), 7.55-7.25(m, 3H), 4.59-4.47(m, 2H), 4.19(dd, J=11.7, 7.8Hz, 1H), 3.77-3.46(m, 2H), 1.97-1.86(m, 2H); MS-ESI 402(M⁺, 100), 275(38), 251(47), 193(42), 114(29), 43(4).

실시예 20. 2-[4-(4-브로모-2-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 75 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.57(brs, 1H), 8.33(s, 1H), 7.96(s, 1H), 7.67(d, J=11.2Hz, 1H), 7.54-7.43(m, 2H), 7.18(s, 1H), 4.71(m, 1H), 4.53-4.41(m, 2H), 4.12(dd, J=11.7, 7.8Hz, 1H), 3.64(m, 2H), 1.9-1.77(m, 2H); MS-ESI 420(M⁺, 55), 403(46), 269(88), 103(39), 91(76), 71(81), 43(100).

실시예 21. 2-[4-(3-트리플루오로메틸페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 88 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.63(s, 1H), 8.56(s, 1H) 8.32(s, 1H), 7.89(d, J=10.9Hz, 1H), 7.75-7.38(m, 3H), 7.19(s, 1H), 4.56(m, 2H), 4.52(s, 2H), 4.23(dd, J=11.1, 6.2Hz, 1H), 3.66(m, 2H), 2.04-1.94(m, 2H).

실시예 22. 2-[4-(4-프로필페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 90%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.58(s, 1H), 9.27(s, 1H), 8.38(s, 1H), 7.78(s, 1H), 7.71(d, J=8.4Hz, 2H), 7.16(m, 2H), 4.56(m, 2H), 4.52(s, 2H), 4.23(dd, J=11.1, 6.2Hz, 1H), 3.66(m, 2H), 2.54(t, J=7.3Hz, 2H), 2.04-1.94(m, 2H), 1.60(m, 2H), 0.91(t, J=7.3Hz, 3H).

실시예 23. 2-[4-(4-브로모페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 69 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.68(s, 1H), 9.44(s, 1H), 8.46(s, 1H), 7.88(m, 2H), 7.8(m, 2H), 7.21(s, 1H), 4.59-4.47(m, 2H), 4.21(dd, J=11.7, 7.8Hz, 1H), 3.77-3.46(m, 2H), 1.97-1.86(m, 2H)

실시예 24. 2-[4-(3-클로로-4-트리플루오로메틸페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올

수율 72 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.69(s, 1H), 9.47(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.23-8.2(m, 1H), 7.83(m, 2H), 4.56(m, 2H), 4.24(dd, J=11.2, 6.2Hz, 1H), 3.64(m, 2H), 2.01-1.92(m, 2H).

실시예 25. 메탄술폰산 2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸에스트

2-[4-(3-클로로-4-플루오로)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에탄올(0.15 g, 0.40 mmol)을 디클로로메탄(15 mL)에 녹인 후 트리에틸아민(0.22 mL, 1.60 mmol)과 메탄술포닐 클로라이드(0.07 mL, 0.8 mmol)를 0 ℃에서 넣어 주었다. 5시간 동안 실온에서 교반 후 감압 농축한 다음 잔류물질에 디클로로메탄(15 mL)를 가하여 녹인 후 포화 중탄산나트륨 수용액으로 수회 세척한 다음, 무수 마그네슘술페이트로 건조한 뒤 농축하여 메탄술폰산 2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸에스트(0.27 g)를 얻었다. 더 이상의 정제 과정없이 다음 반응에 사용하였다.

실시예 26. (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-4-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

메탄술폰산 2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸에스트(94 mg, 0.21 mmol)과 소량의 포타슘요오드(KI, 3 mg)를 몰폴린(2 mL)에 가하고 80 ℃에서 3시간 교반하였다. 반응이 종결된 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 관크로마토그래피(2% MeOH/MC)로 분리하여 (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-4-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민(48 mg, 57%)을 얻었다.

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.61(b, 1H), 8.54(s, 1H), 8.31(dd, J=7.1, 2.5Hz, 1H), 8.13(s, 1H) 7.95-7.90(m, 1H), 7.48(t, J=9.1Hz, 1H), 7.27(s, 1H), 4.57(d, J=10.1Hz,1H), 4.46(m, 1H), 4.18(dd, J=11.5, 8.1Hz, 1H), 3.65(m, 2H), 3.39(m, 4H), 2.46(m, 4H), 1.96-1.85(m, 2H); MS-ESI 444(M⁺, 2), 433(30), 84(66), 66(100).

실시예 27. (3-클로로-4-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민

수율 42 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.58(b, 1H), 8.49(s, 1H), 8.26(dd, J=7.0, 2.4Hz, 1H), 8.08(s, 1H), 7.89-7.84(m, 1H), 7.45(t, J=9.1Hz, 1H), 7.21(s, 1H), 4.52(d, J=10.2Hz, 1H), 4.4(m, 1H), 4.13(dd, J=11.3, 8.0Hz, 1H), 3.33(m, 6H), 2.33-2.21(m, 7H), 1.9-1.83(m, 2H); MS-ESI 457(M⁺, 18), 152(19), 113(89), 70(52), 55(38), 39(100).

실시예 28. (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 58 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.61(brs, 1H), 8.49(s, 1H), 8.25(dd, J=7.1, 2.4Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.88-7.83(m, 1H), 7.44(t, J=9.0Hz, 1H), 7.23(s, 1H), 4.51(d, J=11.0Hz, 2H), 4.30(m, 1H), 4.01(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 2.51(m, 2H), 2.41(m, 4H), 1.89(m, 2H), 1.49(m, 4H), 1.37(m, 2H); MS-ESI 442(M⁺, 4), 410(100), 307(16), 98(76).

실시예 29. (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 51 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(brs, 1H), 8.50(s, 1H), 8.24(dd, J=7.2, 2.4Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.87-7.84(m, 1H), 7.43(t, J=9.1Hz, 1H), 7.23(s, 1H), 4.45(d, J=10.9Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 4.01(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 2.52(m, 2H), 2.41(m, 4H), 1.77(m, 2H), 1.02(m, 6H).

실시예 30. 2-[{2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올

수율 22 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(brs, 1H), 8.50(s, 1H), 8.24(dd, J=7.2, 2.4Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.87-7.84(m, 1H), 7.43(t, J=9.1Hz, 1H), 7.23(s, 1H), 4.45(d, J=10.9Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 4.01(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 3.71(m, 4H), 2.51(m, 2H), 2.41(m, 4H).

실시예 31. (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로- [1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 51 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(b, 1H), 8.50(s, 1H), 8.24(dd, J=7.2, 2.4Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.87-7.84(m, 1H), 7.43(t, J=9.1Hz, 1H), 7.23(s, 1H), 4.45(d, J=10.9Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 4.01(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 2.52(m, 2H), 2.36(m, 4H), 1.91(m, 2H), 1.59(m, 6H).

실시예 32. (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.66(b, 1H), 8.34(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.65(d, J=9.9Hz, 1H), 7.45-7.56(m, 2H), 7.23(s, 1H), 4.55(d, J=10.1Hz,1H), 4.45(m, 1H), 4.19(dd, J=11.3, 8.0Hz, 1H), 3.64(m, 2H), 3.40(m, 4H), 2.42(m, 4H), 1.96-1.85(m, 2H); MS-ESI 489(M⁺, 2), 401(9), 395(100), 84(12).

실시예 33. (4-브로모-2-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민

수율 40%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.66(b, 1H), 8.33(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.65(d, J=9.9Hz, 1H), 7.45-7.56(m, 2H), 7.23(s, 1H), 4.51(d, J=10.1Hz, 1H), 4.4(m, 1H), 4.12(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 3.32(m, 6H), 2.33-2.21(m, 7H), 1.90-1.83(m, 2H); MS-ESI 502(M⁺, 2), 342(41), 246(30), 230(28), 84(73), 66(10).

실시예 34. (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 35%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.66(brs, 1H), 8.33(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.65(d, J=9.9Hz, 1H), 7.45-7.56(m, 2H), 7.23(s, 1H), 4.50(d, J=10.9Hz, 2H), 4.30(m, 1H), 4.02(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 2.51(m, 2H), 2.41(m, 4H), 1.88(m, 2H), 1.47(m, 4H), 1.36(m, 2H); MS-ESI 487(M⁺, 1), 440(1), 399(2), 110(1), 84(57), 66(100).

실시예 35. (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 55%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.65(b, 1H), 8.34(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.64(d, J=10.0Hz, 1H), 7.54-7.46(m, 2H), 7.23(s, 1H), 4.46(d, J=11.0Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 4.02(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 2.52(m, 2H), 2.41(m, 4H), 1.77(m, 2H), 1.02(m, 6H).

실시예 36. (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 40%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.65(b, 1H), 8.34(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.64(d, J=10.0Hz, 1H), 7.54-7.46(m, 2H), 7.23(s, 1H), 4.44(d, J=10.9Hz, 1H), 4.32(m, 1H), 4.02(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 2.53(m, 2H), 2.36(m, 4H), 1.90(m, 2H), 1.60(m, 6H); MS-ESI 489(M⁺, 1), 467(12), 463(16), 460(100), 395(8), 271(9), 78(12).

실시예 37. (3-클로로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 45%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(b, 1H), 8.54(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.92(d, J=8.2Hz, 1H), 7.43(t, J=8.2Hz, 1H), 7.35(m, 1H), 7.15(d, J=7.9Hz, 1H), 4.56(d, J=11.5Hz,1H), 4.45(m, 1H), 4.16(dd, J=11.5, 8.0Hz, 1H), 3.64(m, 2H), 3.40(m, 4H), 2.43(m, 4H), 1.96-1.84(m, 2H).

실시예 38. (3-클로로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민

수율 32%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.61(brs, 1H), 8.53(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.14(s, 1H), 7.93(d, J=8.1Hz, 1H), 7.43(t, J=8.1Hz, 1H), 7.35(m, 1H), 7.14(d, J=7.9Hz, 1H), 4.52(d, J=10.1Hz, 1H), 4.40(m, 1H), 4.11(dd, J=11.2, 8.0Hz, 1H), 3.33(m, 6H), 2.33-2.24(m, 7H), 1.90-1.80(m, 2H).

실시예 39. (3-클로로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 33%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(brs, 1H), 8.54(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.92(d, J=8.0Hz, 1H), 7.42(t, J=8.0Hz, 1H), 7.35(m, 1H), 7.13(d, J=7.9Hz, 1H), 4.51(d, J=11.0Hz, 2H), 4.31(m, 1H), 4.01(dd, J=11.0, 8.0Hz, 1H), 2.51(m, 2H), 2.40(m, 4H), 1.89(m, 2H), 1.47(m, 4H), 1.35(m, 2H).

실시예 40. (3-클로로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 43%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.61(brs, 1H), 8.54(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.91(d, J=8.0Hz, 1H), 7.42(t, J=8.0Hz, 1H), 7.35(m, 1H), 7.13(d, J=7.9Hz, 1H), 4.45(d, J=11.1Hz, 1H), 4.30(m, 1H), 4.02(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 2.51(m, 2H), 2.40(m, 4H), 1.79(m, 2H), 1.01(m, 6H).

실시예 41. (3-클로로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 54%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.60(b, 1H), 8.54(s, 1H), 8.21(s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.90(d, J=8.0Hz, 1H), 7.42(t, J=8.0Hz, 1H), 7.34(m, 1H), 7.13(d, J=7.9Hz, 1H), 4.42(d, J=11.0Hz, 1H), 4.32(m, 1H), 4.02(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 2.52(m, 2H), 2.35(m, 4H), 1.91(m, 2H), 1.62(m, 6H).

실시예 42. 2-[{2-[4-(3-클로로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4-디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올

수율 29%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.62(b, 1H), 8.53(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.91(d, J=8.0Hz, 1H), 7.40(t, J=8.0Hz, 1H), 7.33(m, 1H), 7.13(d, J=7.9Hz, 1H), 4.44(d, J=10.9Hz, 1H), 4.30(m, 1H), 4.03(dd, J=11.1, 8.1Hz, 1H), 3.70(m, 4H), 2.51(m, 2H), 2.42(m, 4H).

실시예 43. (3-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 41%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.50(b, 1H), 8.48(s, 1H), 8.25(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.91(d, J=7.1Hz, 1H), 7.34-7.17(m, 3H), 4.50(d, J=10.5Hz, 1H), 4.39(m, 1H), 4.10(dd, J=11.4, 7.9Hz, 1H), 3.58-3.55(m, 4H), 3.31(m, 2H), 2.39-2.37(m, 4H), 1.86-1.75(m, 2H); MS-ESI 471(M⁺, 1), 230(100), 156(78), 129(32), 40(74).

실시예 44. (3-브로모페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민

수율 44%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.50(brs, 1H), 8.47(s, 1H), 8.25(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.90(d, J=7.1Hz, 1H), 7.34-7.16(m, 3H), 4.48(d, J=10.1Hz, 1H), 4.38(m, 1H), 4.08(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 3.30(m, 6H), 2.30-2.22(m, 7H), 1.88-1.78(m, 2H); MS-ESI 484(M⁺, 3), 113(100), 84(72), 70(99), 66(77).

실시예 45. (3-브로모페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 47%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.58(b, 1H), 8.50(s, 1H), 8.26(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.91(d, J=7.1Hz, 1H), 7.38-7.20(m, 3H), 4.53(d, J=11.0Hz, 2H), 4.35(m, 1H), 4.15(dd, J=11.0, 8.0Hz, 1H), 2.51(m, 2H), 2.40(m, 4H), 1.89(m, 2H), 1.47(m, 4H), 1.36(m, 2H); MS-ESI 469(M⁺, 1), 320(5), 267(4), 193(5), 95(8), 44(100).

실시예 46. (3-브로모페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 41%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.51(b, 1H), 8.50(s, 1H), 8.28(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.93(d, J=8.5Hz, 1H), 7.36-7.19(m, 3H), 4.50(d, J=11.3Hz, 1H), 4.42(m, 1H), 4.11(dd, J=11.3, 8.0Hz, 1H), 2.61(m, 2H), 2.47(m, 4H), 1.89(m, 2H), 1.71(m, 4H); MS-ESI 455(M⁺, 2), 362(71), 178(30), 84(55), 66(100).

실시예 47. (3-브로모페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

수율 41%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.51(b, 1H), 8.50(s, 1H), 8.27(s, 1H), 8.10(s, 1H), 7.91(d, J=8.5Hz, 1H), 7.37-7.18(m, 3H), 4.40(d, J=11.0Hz, 1H), 4.31(m, 1H), 4.04(dd, J=11.0, 8.0Hz, 1H), 2.52(m, 2H), 2.34(m, 4H), 1.90(m, 2H), 1.62(m, 6H).

실시예 48. 2-[{2-[4-(3-브로모페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4-디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올

수율 29%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.53(b, 1H), 8.50(s, 1H), 8.27(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.90(d, J=8.0Hz, 1H), 7.37-7.19(m, 3H), 4.44(d, J=10.9Hz, 1H), 4.30(m, 1H), 4.03(dd, J=11.1, 8.1Hz, 1H), 3.70(m, 4H), 2.51(m, 2H), 2.42(m, 4H); MS-ESI 489(M⁺, 1), 457(20), 129(15), 118(26), 88(100), 65(49).

실시예 49. [7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-트리플루오로메틸페닐)-아민

수율 38 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.53(s, 1H), 8.52(s, 1H) 8.30(s, 1H), 7.87(d, J=10.9Hz, 1H), 7.75-7.38(m, 3H), 7.19(s, 1H), 4.51(d, J=10.5Hz, 1H), 4.38(m, 1H), 4.11(dd, J=11.2, 7.9Hz, 1H), 3.58-3.53(m, 4H), 3.31(m, 2H), 2.39-2.37(m, 4H), 1.86-1.74(m, 2H).

실시예 50. [7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-프로필페닐)-아민

수율 40%; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.50(s, 1H), 9.27(s, 1H), 8.38(s, 1H), 7.77(s, 1H), 7.72(d, J=8.4Hz, 2H), 7.15(m, 2H), 4.51(d, J=11.1Hz, 1H), 4.36(m, 1H), 4.10(dd, J=11.1, 8.0Hz, 1H), 3.58-3.53(m, 4H), 3.31(m, 2H), 2.54(t, J=7.3Hz, 2H), 2.39-2.37(m, 4H), 2.04-1.94(m, 2H), 1.86-1.74(m, 2H), 0.91(t, J=7.3Hz, 3H).

실시예 51. (4-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로[2,3-g] 퀴나졸린-4-일]아민.

수율 42 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.52(s, 1H), 9.28(s, 1H), 8.45(s, 1H), 7.88(m, 2H), 7.80(m, 2H), 7.21(s, 1H), 4.50(d, J=11.0Hz, 1H), 4.37(m, 1H), 4.10(dd, J=11.0, 8.0Hz, 1H), 3.58-3.53(m, 4H), 3.32(m, 2H), 2.40-2.36(m, 4H), 1.85-1.72(m, 2H).

실시예 52. (3-클로로-4-트리플루오로메틸페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로[2,3-g]퀴나졸린-4-일]아민.

수율 22 %; ¹H-NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.52(s, 1H), 9.46(s, 1H), 8.45(s, 1H), 8.23-8.20(m, 1H), 7.82(m, 2H), 4.51(d, J=10.9Hz, 1H), 4.35(m, 1H), 4.11(dd, J=11.0, 7.9Hz, 1H), 3.58-3.52(m, 4H), 3.33(m, 2H), 2.41-2.35(m, 4H), 1.87-1.73(m, 2H).

한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 다음은 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

제제 1 : 정제(직접 가압)

활성성분 5.0 ㎎을 체로 친 후, 락토스 14.1 ㎎, 크로스포비돈 USNF 0.8 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎을 혼합하고 가압하여 정제로 만들었다.

제제 2 : 정제(습식 조립)

활성성분 5.0 ㎎을 체로 친 후, 락토스 16.0 ㎎과 녹말 4.0 ㎎을 섞었다. 폴리솔베이트 80 0.3 ㎎을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음, 미립화하였다. 건조 후에 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎과 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 만들었다.

제제 3 : 분말과 캡슐제

활성성분 5.0 ㎎을 체로 친 후에, 락토스 14.8 ㎎, 폴리비닐 피롤리돈 10.0 ㎎, 마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎와 함께 섞었다. 혼합물을 적당한 장치를 사 용하여 단단한 No. 5 젤라틴 캡슐에 채웠다.

제제 4 : 주사제

활성성분 100 mg을 함유시키고, 그 밖에도 만니톨 180 mg, Na₂HPO₄·12H₂O 26 mg 및 증류수 2974 mg를 함유시켜 주사제를 제조하였다.

또한, 본 발명에 따른 화합물들의 수용체 티로신 키나제에 대한 활성을 알아보기 위하여, 다음과 같은 방법으로 상피세포 성장인자 수용체(EGFR)의 활성 억제율 확인 실험을 수행하였다.

실험예 1. EGFR 티로신 키나제 효능검색

EGFR 티로신 키나제의 활성도는 Alpha Screen™ P-Tyr-100 검색 장치(Packard BioScience 사)를 이용하여 측정하였다. Alpha Screen이란 Amplified Luminescent Proximity Homogenous Assay를 의미하며, Luminescent Oxygen Radical Channel을 이용하는 면역정량법(Immunoassay)이다. 본 실험에서는 비오틴화된 poly[Glu:Tyr](4:1)(Packard BioScience 사)를 반응효소에 대한 기질로 사용하였고, 이 기질들과 결합할 수 있도록 스트렙타비딘(Streptavdin)이 코팅된 공여체 비드와 인산화된 기질을 인지하여 반응할 수 있는 항체(P-Tyr-100)가 결합된 수용체 비드가 효소 반응에 사용되었다. EGFR 티로신 키나제는 Sf21 곤충세포를 EFGR이 재조합된 pBacPAK8 곤충 발현 벡터(Clontech 사)로 감염시켜 효소의 다량 발현을 유도하여 분리하였다.

분석은 희고 불투명한 384-웰 플레이트(Greiner Bio-One사)를 사용하여 각 웰(well)의 전체 반응 부피가 25 μL 되도록 다음의 3 과정을 통하여 진행되었다. 첫째, 5 μL의 EGFR 및 VEGFR 효소(5 ng)를 5 μL의 알려진 표준 억제제인 Tyrphostin A51(Upstate Biotech 사) 혹은 시험하고자 하는 화합물과 384-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하여 15분 동안 상온에서 반응하였다. 둘째, 반응 15분 후, 각 웰에 5 μL의 비오틴화된 poly[Glu:Tyr](4:1)와 ATP를 각각 최종농도가 5 nM과 100 μM이 되도록 첨가하여 1 시간 동안 상온에서 효소 반응을 진행하였다. 이때 효소 반응에 사용된 완충용액의 조성은 50 mM Tris-HCl(pH 7.5), 5 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 2 mM DTT와 0.01 % Tween-20 이었다. 셋째, 1시간의 효소 반응 후, 여기에 공여체 및 수용체 비드가 포함된 10 μL의 감지완충액(Capture buffer)을 첨가하여 1 시간 동안 상온에서 효소 반응을 추가 진행하였다. 이 과정은 진행 중인 효소 반응을 중지시키면서 기질의 인산화 정도를 인지하도록 최종농도가 각각 20 μg/mL인 스트렙타비딘(Streptavdin) 공여체와 P-Tyr-100 비드 수용체 및 EDTA가 포함된 감지완충액(Capture buffer)을 사용하였다. 감지완충액(Capture buffer)의 조성(2.5배 농도)은 62.5 mM HEPES(pH 7.4), 250 mM NaCl, 100 mM EDTA 및 BSA 0.25 % 이었다. 반응 후, 효소의 활성도는 Fusion™ microplate 분석장치(PerkinElmer사)를 이용하여 AlphaScreen 신호를 측정함으로써 구할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물들의 상피세포 성장인자 수용체(EGFR)에 대한 활성을 비교하기 위하여, 아스트라제네카사의 ZD-1839(Iressa™) 화합물과 PD-150307 화합물을 대조화합물로 사용하였다. 활성 비교 결과는 다음 표 1에 나타내었다.

본 발병에 따른 실시예 26, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 44, 45 및 46 화합물은 EGFR에 대한 억제활성이 ZD-1839와 비교하여 비슷하거나 더 우수한 것으로 나타났으며, in vitro에서 가장 우수한 약효를 보이는 화합물로 알려진 PD-150305 화합물과 비교한 경우에도 실시예 37, 39 및 46 화합물은 90% 이상의 더 높은 저해작용을 보이는 것으로 확인되었다.

시험예 2: MTT 효능검색(Growth-inhibitory assay)

여러 종류의 인간 암세포에 대한 화합물들의 성장 억제 효과는 (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT)를 사용하여 측정하였다. 이를 위해서는 먼저 96-웰 플레이트의 각 웰에 지시된 농도로 화합물을 넣고 여기에 확인하고자 하는 세포가 포함된 100 μL의 세포배양액을 넣어 화합물과 배양액이 잘 섞이도록 흔들어 주었다. 이때 사용되는 세포의 양은 약 10⁴ cells/100 μL 세포 배양액(RPMI-1640 [Gibco 사]; 10% FBS[Gibco 사], 100 μg/mL 스트렙토마이신, 및 100 U/mL 페니실린)으로 배양을 시작하여 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터 안에서 48시간 동안 배양하였다. 48시간 배양 후, 각 웰에 PBS에 5 mg/mL로 녹여진 20 μL의 MTT(Sigma 사)를 넣어주고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터 안에서 1시간 30분 동안 배양하면서 반응을 유도하였다. 반응 후 상등액을 제거하고 100 μL의 디메틸술폭사이드(DMSO: Sigma 사)를 가하여 진탕기(plate shaker)에서 섞어준 다음, ELISA 판독기를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.

본 발명에 따른 화합물들에 대한 활성을 비교하기 위하여, 아스트라제네카사의 ZD-1839(Iressa™) 화합물을 대조화합물로 사용하였다. 합성된 실시예 화합물과 대조화합물에 대한 활성 비교 결과는 도 1에 나타내었다. 도 1에 의하면, 실시예 37, 38 및 48의 화합물은 Iressa™와 비슷한 세포성장억제효과를 나타내지만 실시예 46은 Iressa 보다 우수한 효과를 보이고 있다.

시험예 3 : 경구독성 시험

본 발명에 따른 몇몇 화합물에 대해서는 랫트를 대상으로 급성독성 시험을 수행하였다. 그 결과 경구 투여량 10 mg/kg 까지는 목적에 반하는 심각한 독성의 증상이 없으며, 경구 투여량 100 mg/kg 까지는 사망이 전혀 없었다.

이상에서 상세히 살펴 본 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 신규 퀴나졸린 유도체는 1,4-디옥산기가 퀴나졸린의 C-6과 C-7 위치에 연결된 3환 구조의 물질로서 1,4-디옥산기의 도입으로 화합물의 용해도가 증가되는 효과를 기대할 수 있고, 티로신 키나제의 억제 활성이 우수하므로 비정상적인 키나제의 활성으로 야기되는 질환 특히 폐암이나 유방암의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (11)

1. 다음 화학식 1로 표시되는 퀴나졸린 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염, 또는 이의 이성질체 :

   [화학식 1]

   

   상기 화학식 1에서,

   m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 할로알킬기, 시아노기, C_1-6의 알킬기, C_1-6의 알콕시기, 메틸티오기, 니트로기, 또는 -NR⁴R⁵(이때, R⁴ 및 R⁵는 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자 또는 C_1-6의 알킬기)이고; R² 및 R³은 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자, C_1-6의 알킬기, C_2-3의 히드록시알킬기, 또는 치환된 벤질기(이때, 치환기는 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 알킬기 또는 C_1-6의 알콕시기)이고; 또는 R² 및 R³는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 또는 O, S, 및 NR⁶에서 선택된 또다른 헤테로원자와 함께 서로 고리로 연결된 피페리딘, 피롤리딘, 몰폴린, 또는 피페라진기(이때, R⁶은 수소원자, C_1-6의 알킬기 또는 C_3-7의 시클로알킬기)를 나타낸다.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, C_1-6의 할로알킬기, C_1-6의 알킬기, 또는 C_1-6의 알콕시기이고; R² 및 R³는 서로 같거나 다른 것으로, 각각 C_1-6의 알킬기, 또는 C_2-3의 히드록시알킬기이거나; 또는 R² 및 R³는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 또는 O, 및 NR⁶에서 선택된 또다른 헤테로원자와 함께 서로 고리로 연결된 피페리딘, 피롤리딘, 몰폴린, 또는 피페라진기(이때, R⁶은 수소원자, C_1-6의 알킬기 또는 C_3-7의 시클로알킬기)를 형성하는 것임을 특징으로 하는 화합물.
3. 제 1 항에 있어서, 상기 m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, 트리플루오로메틸기, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 또는 메톡시기이고; R² 및 R³ 는 서로 같거나 다른 것으로 에틸기, 또는 히드록시에틸기이거나, 또는 R² 및 R³가 서로 고리로 연결되어 피페리딘, 피롤리딘, 몰폴린, 또는 N-메틸피페라진기를 형성하는 것임을 특징으로 하는 화합물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 퀴나졸린 유도체가

   (3-클로로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민;

   (3-클로로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   2-[{2-[4-(3-클로로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올;

   (3-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3- g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-브로모페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민;

   (3-브로모페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-브로모페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-브로모페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   2-[{2-[4-(3-브로모페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올;

   (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로-4-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민;

   (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디 옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   2-[{2-[4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]-에틸}-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올;

   (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (4-브로모-2-플루오로페닐)-{7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)-에틸]-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일}-아민;

   (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피페리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-피롤리딘-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   (4-브로모-2-플루오로페닐)-[7-(2-디에틸아미노-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민;

   [7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(3-트리플루오로메틸페닐)-아민;

   [7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-(4-프로필페닐)-아민;

   (4-브로모페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민; 및

   (3-클로로-4-트리플루오로메틸페닐)-[7-(2-몰폴린-1-일-에틸)-7,8-디히드로- [1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-일]-아민

   중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 화합물.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 약학적으로 허용 가능한 염이 유리산(free acid)에 의해 형성되는 산부가염의 형태인 것임을 특징으로 하는 화합물.
6. 제 5 항에 있어서, 상기 유리산이 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸말리산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콘산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루투론산, 엠본산, 글루탐산 및 아스파트산 중에서 선택된 유기산이거나, 또는 브롬산, 황산 및 인산 중에서 선택된 무기산인 것임을 특징으로 하는 화합물.
7. 다음 화학식 2로 표시되는 디옥시노 퀴나졸린 화합물과 다음 화학식 3으로 표시되는 아닐린 화합물을 결합반응시켜 다음 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 과정,

   상기 화학식 4로 표시되는 화합물을 탈보호 반응하여 다음 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 과정, 및

   상기 화학식 5로 표시되는 화합물의 히드록시기를 술포닐옥시기 및 할로젠 중에서 선택된 이탈기로 전환한 후에, HNR²R³로 표시되는 아민 화합물과 결합반응하여 다음 화학식 1로 표시되는 3환 구조의 퀴나졸린 유도체 또는 이의 이성질체를 제조하는 과정

   으로 이루어진 것을 특징으로 하는 제조방법 :

   

   상기에서, R¹, R², R³, 및 m은 각각 상기 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
8. 제 7 항에 있어서, 상기 화학식 2로 표시되는 디옥시노 퀴나졸린 화합물은 라세미체 또는 광학 이성질체인 것을 특징으로 하는 제조방법.
9. 다음 화학식 1로 표시되는 퀴나졸린 유도체, 이의 약제학적 허용 가능한 염, 이의 용매화물, 또는 이의 이성질체가 함유된 것임을 특징으로 하는 종양질환 치료용 약제조성물 :

   [화학식 1]

   

   상기 화학식 1에서,

   m은 1 내지 5의 정수이고; R¹은 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 할로알킬기, 시아노기, C_1-6의 알킬기, C_1-6의 알콕시기, 메틸티오기, 니트로기, 또는 -NR⁴R⁵(이때, R⁴ 및 R⁵는 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자 또는 C_1-6의 알킬기)이고; R² 및 R³은 서로 같거나 다른 것으로, 각각 수소원자, C_1-6의 알킬기, C_2-3의 히드록시알킬기, 또는 치환된 벤질기(이때, 치환기는 수소원자, 할로젠원자, 히드록시기, C_1-6의 알킬기 또는 C_1-6의 알콕시기)이고; 또는 R² 및 R³ 는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 또는 O, S, 및 NR⁶에서 선택된 또다른 헤테로원자와 함께 서로 고리로 연결된 5 내지 7원의 헤테로시클릭기(이때, R⁶은 수소원자, C_1-6의 알킬기 또는 C_3-7의 시클로알킬기)를 나타낸다.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 조성물은 경구 투여제 또는 주사제로 제형화된 것임을 특징으로 하는 종양질환 치료용 약제 조성물.
11. 제 10 항에 있어서, 상기 경구 투여 제형이 정제, 캡슐제 및 분말제 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 종양질환 치료용 약제 조성물.

Images