KR100342806B1

KR100342806B1 - 신규합성펩티드,이를함유하는폐표면활성제및호흡장애증후군치료제

Info

Publication number: KR100342806B1
Application number: KR1019960703001A
Authority: KR
Inventors: 쓰네또모 다께이; 에이지 오쯔보; 히로시 오오까와
Original assignee: 미쯔비시 도꾜 세이야꾸 가부시끼가이샤
Priority date: 1993-12-08
Filing date: 1994-12-07
Publication date: 2002-11-29
Anticipated expiration: 2014-12-07
Also published as: CA2178345A1; US5827825A; DK0733645T3; KR960706507A; DE69432313T2; FI962355A7; HU215933B; NZ277095A; PT733645E; JP3644035B2; EP0733645A1; EP0733645A4; HU9601563D0; HUT74880A; SK71496A3; ES2189825T3; WO1995015980A1; AU682738B2; PL180020B1; BG100554A

Abstract

본 발명은 다음 특정 서열 Xaa-Pro-Val-Xbb-Xcc-Lys-Arg-W (여기서, Xaa는 존재하지 않거나 또는 Cys 또는 Ser을 나타낼 수 있으며, Xbb는 His 또는 Asn을 나타내고, Xcc는 Leu 또는 Ile를 나타내고, W는 소수성 펩티드 부분을 나타낸다)을 함유하는 합성 펩티드, 그 펩티드 제조용 중간체, 그 펩티드의 제조 방법, 펩티드 및 지질 혼합물로 이루어지는 폐 표면활성제 및 활성 성분으로서 표면활성제를 함유하는 호흡 장해 중후군의 치료제에 관한 것이다. 본 발명의 펩티드는 분리 및 정제 하기가 쉬워서 대량 생산에 적합하다. 메탄을 등에서 용해도가 높기 때문에, 지질 혼합물과 쉽게 혼합될 수 있으며 폐 표면활성제의 제조에 적합하다. 폐 표면활성제는 양호한 현탁능 및 강력한 표면 활성을 갖기 때문에, 호흡 장해 중후군의 치료제로서 유용하다.

Description

신규 합성 펩티두, 이를 함유하는 폐 표면활성제 및 호흡 장해 증후군 치료제

호흡 장애 중후군은 폐포 표면의 표면 활성이 폐 표면활성제의 부족으로 인해 저하되는 질환이다. 이것은 심각한 호흡 장애를 일으키는 폐포 허탈을 유도한다. 이 중후군은 미숙한 신생아에게서 자주 일어나며 높은 치사율을 나타낸다. 폐 표면 활성제 조성물은 신생아 호흡 장애 중후군에 매우 효과적인 것으로 알려져 있다.

성인은 또한 각종 원인으로 인한 혈중 산소 감소에 의해 고통당하며, X-선 가슴 사진에서 양 폐에 확산 배경-유리상 그림자가 나타나며 인공 호흡기 등으로 호흡을 조절함에도 불구하고 호흡 부전이 일어나는 많은 예가 있다. 우에다 등(Ue da and associates)은 문헌[Hiromoto Yasuda, "Biosurfactants. Chapter 3.Medical Practices Using Surfactants. Section 1. Clinical Applications of Surfactants V. Aspiration Pneumonia and Surfactants." p. 184, 1990, Science Forum, Co.,Ltd.]에는 기도를 통해 폐 표면활성제를 주입하여 증세를 상당히 호전시키고 생명을 구할 수 있는 2가지 성인 폐렴(즉, ① 질산염 가스 흡인성 폐렴 및 ② 뇌종양으로부터 유래된 재발성 흡인성 폐렴, 그것은 혈중 산소 감소를 유발하고 전반적인 상태 및 호흡 부전을 악화시킴)이 보고되어 있다. 심장 수술 중에는 호흡이 정지 되기 때문에 심장 수술 후 호흡 부전이 일어날 수 있다. 그러한 호흡 부전에 대한 폐 표면황성제의 효과도 또한 문헌[Shuichi Nosaka et al,, Journal of Japanese Medical Society for Biological Interface, Vol. 22, p, 66, 1991]에 보고되어 있다.

외부로부터 기도를 통해 폐 표면활성제를 투여하는 보충 요법은 호흡 장애 증후군에 대해 상당한 치료 효과를 나타낸다.

최근, 포유 동물의 폐 표면활성제에 유일하게 존재하는 4가지 유형의 아포프로테인이 발견되었다. 이것은 친수성인 표면활성제 아포프로테인 A 및 표면활성제 아포프로테인 D 및 소수성인 표면활성제 아포프로테인 B(이하, SP-B로 칭함)및 표면활성제 아포프로테인 C((이하, SP-C로 칭함)이다[Toyoaki Akino and Yoshio Kuroki, Respiration and Circulation, vol. 38. No. 18, p. 722, 1990; Hiromoto Yasuda et at., Biosurfactants: Chapter 2. The Biochemistry of Surfactants - Surfactants and Apoproteins, p. 131, 1990, Science Forum, Co., Ltd. 참조].

인간의 폐로부터 유래된 SP-C(서열 번호 1)는 35개의 아미노산으로 이루어져있으며, 발린이 풍부하고, N-말단 아미노산으로서 페닐알라닌을 갖는 고소수성 아 포프로테인이다. 소(서열 번호 2), 돼지(서열 번호 3), 쥐 등의 폐로부터 분리된 SP-C도 종마다 N-말단 아미노산 서열이 다르긴 하지만, 인간 SP-C와 상동성이 매우 높은 34 또는 35개의 아미노산으로 이루어져 있다.

일본국 특허 공보 (평) 3-502095호에는, SP-C의 구조의 일부인 하기 32 아미노산 서열을 갖는 합성 펩티드(서열 번호 4)가 높은 표면 활성을 나타내는 최소 단위이며, 이 펩티드와 지질과의 혼합물이 호흡 장애 증후군에 대해 효과적이며, 이 최소 단위 펩티드와 더 짧은 아미노산 서열을 갖는 다른 합성 펩티드의 표면 활성을 비교한 결과 표면 활성의 상실이 특정 아미노산의 결실에 의한 것이 아니라 펩티드 사슬의 길이의 감소에 인한 것임이 밝혀졌다고 기재하고 있다.

이전에, 본 발명자들의 일부는 SP-C 구조의 일부를 갖는 합성 펩티드(이하, TP-C로 칭함)와 지질의 혼합물이 호흡 장애 증후군의 치료에 효과적임을 발견하고 특허 출원(일본국 특허 출원 (평) 5-518188호)을 한 바 있다.

합성 펩티드의 제조와 관련해서는, 일반적으로 펩티드의 아미노산 서열이 길어질수록 펩티드 제조시 결함있는 펩티드가 빈번하게 생기고, 분리 및 정제가 어려워지고, 생성에 필요한 시간이 길어지고, 대량 생산이 어려워지는 것으로 알려져 있다.

또한, 일정한 품질을 유지하기 위해 폐 표면활성제 조성물은 사용시에 생리 식염수 현탁액으로서 투여될 건조 분말 조성물로서 제공된다. 페 표면활성제의 현 탁능을 개선시키기 위해 만니톨과 같은 현탁제를 첨가하고(일본국 특허 공보 (평)1-60451호), -1 내지 -10℃의 1차 동결 온도에서 동결건조시키는 방법이 제시되어 있다. 그러나, 이 방법들은 수술시에 이용이 번거로워 더 간단한 제제 제조 방법의 개발이 요망되어 왔다.

SP-C와, 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산 유사체로 이루어진 지질 혼합물을 혼합하여 제조한 페 표면활성제 조성물(이하, S-35로서 칭함)은 생리 식염수에서의 분산능이 극히 불량하므로 조성물로서 사용되기에 충분히 균일한 현탁액을 제조하기가 어려워진다. 이 이유들로는 펩티드의 결합성을 높게 만들는 펩티드의 시스테인 잔기에 의한 이황화 결합의 형성 및 폐 표면활성제 자체의 높은 소수성이 있다.

TP-C는 일반적인 용매에서 용해도가 낮기 때문에, 폐 표면활성제 조성물을 제조하는데 트리플루오로아세트산(TFA)을 사용할 필요가 있다. 따라서, TP-C는 TFA를 가능한한 많이 제거하는 데에 많은 농축 및 건조 시간이 요구되고 폐 표면활성제 현탁액이 잔류 TFA로 인해 페 표면활성제 조성물의 제조 중에 산성화되는 문제점을 갖고 있다.

본 발명은 신규 합성 펩티드에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 지질 혼합물 과 혼합됨으로써 강력한 표면 활성을 나타내는 합성 펩티드에 관한 것이다. 본 발 명은 또한 그러한 신규 합성 펩티드 제조용 중간체, 그러한 합성 펩티드의 제조 방 법, 펩티드 및 지질 혼합물로 이루어지는 폐 표면활성제 및 활성 성분으로서 상기 폐 표면황성제를 함유하는 호흡 장애 중후군의 치료제에 관한 것이다.

본 발명자들은 상기 문제점을 고려하여 합성 펩티드에 대해 집중적으로 연구한 결과, N-말단에 특정 서열의 친수성 펩티드 부분을 갖고 C-말단에 Leu 및(또는) Nle로 주로 이루어진 소수성 펩티드 부분을 갖는 하기 아미노산 서열을 갖는 신규 합성 펩티드(이하, "본 발명의 합성 펩티드"로 칭함)가 분리 및 정제하기 쉽고, 대량 생산될 수 있고, 포름산, TFA, 트리플루오로에탄올, 디메틸술폭시드(DMSO), 클로로포름, 클로로포름-메탄올 혼합물, 메탄올, 에틸렌 클로로히드린 및 테트라히드로푸란에 잘 용해되고, 특히 합성 SP-C 및 TP-C에 비해 메탄올에서 용해도가 아주 높다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다. 본 발명자들은 또한 본 발명의 합성 펩티드 및 지질 혼합물로부터 제조된 폐 표면활성제가 -20℃ 이하에서 현탁제의 첨가없이 수행되는 통상의 동결 건조 방법에 의해 생성될 때에도, S-35, 또는 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산 유사체로 이루어진 지질 혼합물로만 이루어진 합성 폐 표면활성제(이하, "SF-3"으로 칭함; 일본국 특허 공보 (평)2-87685호), 또는 지방산과 함께 포스포리피드, 중성 지질, 총 콜레스테롤, 탄수화물 및 포유동물의 폐에 존재하는 미량의 단백질로 이루어진 물질을 함유하는 물질(이하, "S-TA"로 칭함; 일본국 특허 공보 (소) 61-9924호)에 비해 양호한 균일한 현탁능을 나타내며, S-35, S-TA 또는 TP-C와 지질 혼합물로 이루어진 폐 표면활성제와 동등한 강한 표면활성을 나타낸다는 것을 발견하였다.

Xaa-Pro-Val-Xbb-Xcc-Lys-Arg-W

(여기서, Xaa는 존재하지 않거나 또는 Cys 또는 Ser을 나타낼 수 있으며, Xbb는 His 또는 Asn을 나타내고, Xcc는 Leu 또는 Ile를 나타내고, W는 소수성 부분을 나타낸다).

본 발명의 합성 펩티드는 N-말단에 하기 특정 서열로 표시되는 친수성 펩티드 부분을 갖고 C-말단에 Leu 및(또는) Nle로 주로 이루어진 소수성 펩티드 부분을 가지며, 지질 혼합물과 혼합될 때 강한 표면활성을 나타내는 합성 펩티드이다.

Xaa-Pro-Va1-Xbb-Xcc-Lys-Arg

(여기서, Xaa는 존재하지 않거나 또는 Cys 또는 Ser을 나타낼 수 있으며, Xbb는 His 또는 Asn을 나타내고, Xcc는 Leu 또는 Ile를 나타낸다).

소수성 펩티드 부분이 Leu, Nle, Ile, Val, Phe, Nva 및 Trp와 같은 소수성 아미노산으로 이루어지긴 하지만, 그것은 주로 Leu 및(또는) Nle 12 분자 이상, 바 람직하게는 12 내지 20 분자로 이루어진다. 이 소수성 펩티드 부분이 동일한 소수 성 아미노산으로 이루어진다는 것은 합성의 용이성 면에서 바람직하긴 하지만, 이 것은 적절한 순서의 Leu 및 Nle 분자로 이루어지거나 그 서열 내에 Ile, Val, Nva, Trp 및 다른 소수성 아미노산을 1 내지 5분자 포함할 수 있다.

본 발명의 합성 펩티드는 또한 상기 합성 펩티드의 N-말단 및(또는) C-말단에 아미노산 또는 펩티드가 첨가되어 있는 합성 펩티드를 포함한다. N-말단에 첨가되는 아미노산은 Cys 또는 Ser일 수 있다. 또한, 서열, Phe-Gly-Ile-Pro을 갖는 펩 티드가 N-말단에 첨가될 수 있다. 상기 합성 펩티드에 존재하는 티올기 또는 히드 록실기는 탄소 원자수가 14 내지 18인 지방산, 바람직하게는 팔미틴산에 의해 아실 화될 수 있거나 또는 아세토아미도메틸화될 수 있다. C-말단에 첨가될 펩티드는 서열, Gly-Ala-Leu-Leu 또는 Gly-Ala-Leu-Leu-Met-Gly-Leu를 가질 수 있다.

또한, 본 발명의 합성 펩티드로는 1개 또는 다수의 아미노산의 첨가, 제거 및 치환시에도 지질 혼합물과 혼합될 때 양호한 친수성 및 강한 표면활성을 나타내는 펩티드기를 함유하는 합성 펩티드(천연 SP-C의 부분 구조를 갖는 펩티드를 제외함)를 들 수 있다.

본 발명의 합성 펩티드는, 화학적인 제조 방법이 분리 및 정제 면에서 바람직 하긴 하지만 화학적 또는 유전공학적 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 합성 펩티드의 화학적 제조 방법으로는 아지드 방법, 산 클로라이드 방법, 산 무수물 방법, 혼합된 산 무수물 방법, DCC 방법, 활성화된 에스테르 방법(p-니트로페놀 에스테르 방법, p-히드록시숙신이미드 에스테르 방법, 카르보이 미다졸 방법 등), 산화-환원 방법 및 DCC-활성화 방법과 같은 액상 또는 고상 합성 방법을 비롯한 단계별 연장 방법 및 단편 축합 방법을 들 수가 있다.

본 발명은 또한 N-말단 및 관능기 측쇄가 보호된 친수성 펩티드기를 제조용 중간체로서 사용하는 본 발명의 합성 펩티드의 단편 축합 제조 방법을 제공한다.

단계별 연장 방법에 비해, 단편 축합 방법은 표적 물질의 정제를 더 용이하게 하며, 대량 합성에 더 적합하며 예상치 못한 실수로 인해 손실을 방지할 수 있는 특징을 갖는다. 본 발명의 합성 펩티드는 소수성 부분을, 액상 또는 고상 합성 방법에 의해 미리 제조된 N-말단 및 관능기 측쇄가 보호된 친수성 펩티드 부분과 축합시킴으로서 제조될 수 있다. N-말단 및 관능기 측쇄의 보호기는 통상의 펩티드 합성에 사용되는 보호기이기만 하면 특별히 제한되지 않는다. 9-플루오레닐메틸옥 시카르보닐(Fmoc), 2-클로로벤질옥시카르보닐(2-CLZ) 또는 t-부틸옥시카르보닐 (Boc)기가 말단 아미노산기의 보호기로서 사용될 수 있으며, Fmoc, Boc 또는 카르 보벤족시(Z) 또는 토실(Tos)기가 Lys의 보호기로서 사용될 수 있으며, Trt, Fmoc, Boc, Dnp, Bom, Bzl 또는 Tos가 His의 보호기로서 사용될 수 있으며 Mtr, Pmc, Mts 또는 Tos가 Arg의 보호기로서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 합성 펩티드의 생성에 중간체로서 사용될 수 있는 펩티드로는 Fmoc-Pro-Val-His(Trt)-Leu-Lys(Boc)-Arg(Mtr), Fmoc-Pro-Val-Asn-Leu-Lys(Boc)-Arg(Mtr) 및 Fmoc-Pro-Val-Asn-Ile-Lys(Boc)-Arg(Mtr)을 들 수가 있다.

폐 표면활성제(이후, "본 발명의 표면활성제"로 칭함)는 본 발명의 합성 펩티드와 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산 유사체로 이루어진 지질 혼합물을 혼합함으로써 제조될 수 있다.

최종 생성물의 총 건조 중량에 대한 이들 각 성분의 중량비가 합성 펩티드 0.1-5.0%(W/W), 콜린 포스포글리세리드 50.6-80.5%(W/W), 산 포스포리피드 4.5-37.6%(W/W) 및 지방산 유사체 4.6-24.6%(W/W)가 되도록 조성을 정하는 것이 바람직하다.

본 발명의 표면활성제에 적합하게 사용될 수 있는 콜린 포스포글리세리드의 예로는 1,2-디아실글리세로-(3)-포스포콜린, 예를 들면 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(디팔미토일포스파티딜콜린), 1,2-디스테아로일글리세로-(3)-포스 포콜린, 1-팔미토일-2-스테아로일글리세로-(3)-포스포콜린 및 1-스테아로일-2-팔미 토일글리세로-(3)-포스포콜린 등; 1-알킬-2-아실글리세로-(3)-포스포콜린, 예를 들 면 1-헥사데실-2-팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 및 1-옥타데실-2-팔미토일글리 세로-(3)-포스포콜린 등; 및 1,2-디알킬글리세로-(3)-포스포콜린, 예를 들면 1,2-디헥사데실글리세로-(3)-포스포콜린 등을 들 수가 있다. 글리세롤 잔기의 제2 탄 소를 기준으로 한 광학 이성질체가 상기 화합물에 대해 존재할 수 있긴 하지만, D-, L- 및 DL-형태 중 어떤 것이든 본 발명의 표면활성제에 사용될 수 있다. 상기 단일 콜린 포스포글리세리드 화합물 이외에, 탄소 원자수가 12 내지 24인, 아실기,바람직하게는 2개의 포화된 아실기를 갖는, 2개 이상의 다른 1,2-디아실글리세로-(3)-포스포콜린으로 이루어진 혼합물 또는 그러한 혼합물들의 혼합물 및 상기 단일 화합물이 콜린 포스포글리세리드로서 사용될 수 있다.

적합한 산 포스포리피드의 예로는 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-인산 (L-α-포스파티딘산), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-L-세린 (포스파티딜세린), 1,2 -디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 (포스파티딜글리세롤) 및 1,2-디아실 -sn-글리세로-(3)-포스포-(1)-L-미오-이노시톨 (포스파티딜이노시톨)을 들 수가 있다. 이러한 화합물의 제1 및 제2 위치는 동일한 아실기 또는 다른 아실기에 의해 치환될 수 있다. 본 발명에서는 탄소 원자수가 12 내지 24인 아실기가 바람직하다.

적합한 지방산 유사체의 예로는 유리 지방산, 지방산의 알칼리 금속염, 지방산 알킬 에스테르, 지방산 글리세린 에스테르 및 지방산 아미드 및 상기 물질의 2종 이상의 혼합물 및 지방 알코올 및 지방 아민을 들 수가 있다.

본 발명에서 "지방산 유사체"로는 상기 지방 알코올 및 지방족 아민을 들 수가 있다.

유리 지방산으로서는 미리스틴산, 팔미틴산 또는 스테아르산이 사용될 수 있으며, 팔미틴산이 바람직하게 사용된다.

상기 유리 지방산의 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염 및 칼슘염이 지방산의 알칼리 금속염으로서 사용 수 있으며, 팔미틴산 나트륨이 바람직하게 사용된다. 탄소 원자수가 1 내지 4인 저급 알킬 에스테르가 지방산 알킬 에스테르로서 사용될 수 있으며, 팔미틴산 에틸이 바람직하게 사용된다. 모노글리세린 에스테르가 지방산글리세린 에스테르로서 사용될 수 있으며, 모노팔미틴이 바람직하게 사용된다.

탄소 원자수가 14 내지 18인 알코올이 지방 알코올로서 사용될 수 있으며, 헥사데실 알코올이 바람직하게 사용된다. 탄소 원자수가 14 내지 18인 아민이 지방 족 아민으로서 사용 수 있으며, 헥사데실 아민이 바람직하게 사용된다.

상기 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산 유사체는 식물 또는 동물로부터 분리된 생성물이며, 반합성 제품 또는 합성 화학 제품 및 시판 제품이 사용될 수 있다.

본 발명의 표면활성제는 본 발명의 펩티드 용액과 상기 지질 혼합물과의 혼합물을 감압하에 건조 및 고상화시키고 얻은 잔류물을 적당한 현탁액에 현탁시키고 동결건조시킴으로서 제조될 수 있다.

본 발명의 펩티드 용액을 제조하는데 사용될 수 있는 용매의 예로는 포름산, TFA, 트리플루오로에탄올, DMSO, 클로로포름-메탄올, 클로로포름, 메탄올, 에틸렌클로로히드린 및 테트라히드로푸란을 들 수가 있다.

지질 혼합물 용액을 제조하는데 사용될 수 있는 용매의 예로는 클로로포름 및 클로로포름-메탄올[1:2-5:1(V/V)]을 들 수가 있다.

현탁액의 예로는 물 및 물-에탄올 혼합물[4:1-20:1(V/V)]을 들 수가 있으며, 물-에탄올 혼합물이 바람직하게 사용될 수 있다. 현탁 공정은 30 내지 60℃, 바람직하게는 40 내지 50 ℃에서 5 내지 60분, 바람직하게는 15 내지 30분 동안 수행된다.

이러한 방법으로 제조되는 본 발명의 표면활성제는 불가피하게 소량의 잔류수를 함유한다. 그러나, 표면활성제의 경우에는 잔류수의 중량비가 총 중량에 대해 5.0%(W/W) 이하가 될 때까지 건조시키는 것이 바람직하다. 표면활성제가 이 정도 로 건조되면, 물-에탄올 혼합물이 사용되는 경우에 에탄올 잔류물은 검출가능하지 않게 될 것이다.

본 발명의 표면활성제의 건조 분말 조성물은 일가 또는 이가 금속염의 적절한 생리학적 농도, 예를 들면 0.9% 염화나트륨 또는 1.5 mM 염화칼슘이 함유된 용액, 또는 그러한 염을 함유하는 생리 완충액에 진탕 수단 또는 가변 속도 혼합기 또는 초음파 장치를 사용하여 균일하게 현탁 및 분산될 수 있다.

이제, 이렇게 제조된 본 발명의 표면활성제의 표면활성, 현탁능 및 약리학적 특성이 설명될 것이다.

(1) 표면 활성

① 표면 장력 저하 효과

표면 장력 저하 효과는 다나까 등의 방법[Journal of Japanese Medical Society for Biological Interface, vol 13, No. 2, p 87, 1982]에 따라 측정하였 다.

본 발명의 표면활성제의 현탁액을 표면활성제의 농도가 1 ㎠ 당 1.0-2.0 ㎍ 이 되도록 생리 식염수(표면적이 54.0 ㎠임)에 적가하였다. 상기 표면적을 2 내지 5분 내에 54.0-21.6 ㎠의 범위로 수축 및 팽창시키고 표면 장력을 37℃에서 윌헬 미스(Wilhelmy's) 표면 발란스(Kyowa Interface Science Co., Ltd. 제품)로 연속적 으로 측정하였다. 최대 표면 장력은 24.7-34.1 dyne/cm이고 최소 표면 장력은 0.2-8.7 dyne/cm였으며, 이것은 생리 식염수의 표면 장력을 저하시키는 본 발명의 표면활성제의 표면 장력 저하 효과를 나타내는 것이다.

SF-3의 표면 장력 저하 효과를 동일한 방법으로 측정한 결과 최대 표면 장력이 26.8-50.3 dyne/cm였으며, 최소 표면 장력이 1.0-13.5 dyne/cm였다.

37℃에서의 생리 식염수 자체의 표면 장력은 70.5 dyne/cm였다.

② 가스-액체 계면에서의 확산능

본 발명의 표면활성제의 현탁액을 표면활성제의 농도가 생리 식염수 표면 1㎠ 당 0.8-1.5 ㎍이 되도록 생리 식염수 표면에 적가하고, 현탁액을 적가한 직후 에서부터 수직 플레이트 방법에 의해 시간에 따른 표면 장력 변화를 측정하였다. 측정 온도는 37℃였다.

평형화란 시료를 적가한 직후에서부터 고정된 값의 표면 장력까지 도달하는데 걸리는 시간을 의미하며, 그러한 시간 후의 값을 평형 표면 장력이라 부른다.

본 발명의 표면활성제는 30-60초의 단시간내에 가스-액체 계면에 막을 형성시켰으며, 표면 장력을 26.7-34.3 dyne/cm까지 저하시켰다.

SF-3의 가스-액체 계면 확산 효과를 동일한 방법에 의해 측정한 결과, 120초 후에 표면 장력이 38.1-52.9 dyne/cm인 것으로 나타났다.

이것은 본 발명의 표면활성제가 가스-액체 계면으로 신속히 확산하여 표면 장력을 신속히 저하시킨다는 것을 나타낸다.

③ 가스-액체 계면으로의 흡수능

37℃에서 1 ml 당 본 발명의 표면활성제 0.2-1.0 mg을 함유하는 생리 식염수현탁액을 제조하고, 생리 식염수의 가스-액체 계면으로 본 발명의 현탁된 표면활성 제가 흡수되는 속도를 측정하였다.

흡수능은 킹(King) 등의 방법(American Journal of Physiology, No. 223, p715, 1972)에 따라 측정하였다.

즉, 현탁액을 생리 식염수를 함유하는 5 cm 직경의 테프론 탱크의 바닥에 자석 교반기로 교반시키며 주입하였다. 교반을 중지한 후에, 표면 장력의 변화로부 터 흡수능을 결정하였다.

본 발명의 표면활성제는 교반을 중지한 후 30 내지 100초 내에 표면 장력을 28.3 내지 36.8 dyne/cm로 저하시켰으며 그 이후에 표면 장력은 일정하게 유지되었 다.

이것은 본 발명의 표면활성제가 현탁 상태에서 30 내지 100초 내에 가스-액체계면에 부유 및 흡수되어 강한 표면 활성을 갖는 막을 형성하였다는 것을 나타낸 다.

SF-3의 가스-액체 계면으로의 흡수능을 동일한 방법에 의해 측정한 결과, 150초 이상 동안 42.2 내지 58.3 dyne/cm의 일정한 표면 장력을 얻을 수 있는 것으로 나타났다.

이것은 SF-3의 가스-액체 계면 흡수 효과가 본 발명의 표면활성제의 것 보다 낮으며 본 발명의 표면활성제가 표면 흡수를 강력히 촉진시키는 능력을 갖는다는 것을 나타낸다.

(2) 현탁능

폐 표면활성제의 현탁능 시험은 일본국 실용신안 공보 (평) 4-76965호에 기재된 방법에 따라 수행하였다.

즉, 현탁 공정 시작 후 일정 시간에서의 분산 효율로부터 또한 현탁 공정 시작 후 2분에서 분산된 최대 입자 크기로부터 현탁능을 평가하였다.

분산 효능 시험은 다음과 같이 실시하였다. 폐 표면활성제 각 60 mg을 20 ml 바이알에 분배하였다. 생리 식염수 2 ml를 상기 각 바이알에 첨가하고 바이알을 이와끼(Iwaki) KM 쉐이커-V-S 타입 진탕기(Iwaki Sangyo Co., Ltd. 제품) 상에 놓고 270 스트록/분의 속도로 진탕시켰다. 각 시료의 분산 조건을 진탕 시작 후 처음 2분 동안 매 30초 마다, 진탕 시작 후 2분 내지 4분 사이에 매 1분 마다 또한 진탕 시작 4분후에 매 10분 마다 확대경을 사용하여 육안으로 관찰하였다.

현탁 조건은 10개의 시료를 2사람이 각각 일정 시간에서 평가하였다. 용기내에 작은 덩어리가 없었다면 또한 조성물이 생리 식염수에 균일하게 분산되어 백색의 균일한 현탁액을 형성하였다면 시료가 현탁된 것으로 판단하였다.

각각의 일정한 시간에서 2사람 각각에 의해 측정된, 시료 총 수(10개의 바이알)에 대해 현탁이 완결된 시료의 백분율을 분산 효능으로서 결정하였으며, 이것은 2사람에 의해 측정된 값의 평균으로서 나타내었다.

최대 분산된 입자 크기를 다음과 같이 측정하였다. 폐 표면활성제 각 60 mg을 20 ml 바이알에 분배하였다. 생리 식염수 2 ml를 각 바이알에 첨가하고 상기와 동일한 진탕 조건하에서 2분 동안 계속 바이알을 진탕시켰다. 현미경으로 현탁액중의 가장 큰 입자를 관찰하고 그의 직경을 칼리퍼(caliper)로 측정하였다. 따라서,본 발명의 표면활성제가 2분 내에 대부분 현탁되었으며, 그의 최대 입자 크기 가 0.8 mm 이하인 것으로 밝혀졌으며, 이것은 그들의 현탁능이 양호한 것임을 나타 내는 것이다.

(3) 약리학적 특성

① 급성 독성

본 발명의 표면활성제의 급성 독성을 5주된 수컷 ICR 마우스 및 위스터 (Wister) 쥐를 사용하여 시험하였다. 마우스의 경우 경구 LD_5O및 복막 LD_5O은 각각 2.4-10.0 g/kg 및 1.0-5.0 g/kg이었으며, 쥐의 경우 각각 1.5-5.0 g/kg 및 1.5-2.5 g/kg이었다.

② 아급성 독성

본 발명의 표면활성제를 1개월 동안 1일 투여량 300-600 mg/kg으로 성숙한 위스터 쥐에 복강내 투여하였다. 쥐의 체중에는 변화가 없었으며 육안으로 조직학적 관찰한 결과 이상이 없었다.

③ 폐포 용적 유지 효과

27일의 임신 기간에 있는 토끼 미숙 태아는 폐 표면활성제를 거의 생성하지 않아서 폐 표면활성제 결핍 상태에 있다. 따라서, 이것을 신생아 호흡 장애 중후 군의 연구용 동물 모델로서 사용하였다.

27일의 임신 기간에 있는 5마리의 토끼 태아를 사용하여 37 ℃에서 가변 기도압하에 폐포 공간 용적(이하, "폐 용적"이라 칭함)을 측정하였다.

토끼 태아의 목을 절단하고 기도를 통해 본 발명의 표면활성제를 투여한지 5분 후에 기관(氣管)에 부착된 수압계로 연속적으로 측정하였다. 2-채널 독립-구동 시린지 펌프 940호(Harvard Co., USA)로 기도압을 30 cm H₂O로 상승시켜 폐포를 팽 창시켰다. 기도압을 0 cm H₂O로 감소시켜 폐포 허탈시키며 다양한 수압에서 폐 용 적을 측정하였다. 폐 용적은 체중 1 kg 당 ml(ml/kg)로서 나타내었다.

표면활성제 농도가 1.0-6.0%(W/V)인 생리 식염수 현탁액 0.05-0.5 ml를 기도로 직접 주입하여 본 발명의 표면활성제(60 mg/kg)를 투여하였다.

압력이 5 cm H₂O로 감소 때의 폐 용적은 기능적인 잔류 용량을 나타내며, 이 용적이 클수록 폐 표면활성제의 활성이 높다.

대조군으로서 생리 식염수를 본 발명의 표면활성제 대신 투여하였다. 대조군의 토끼 미숙 태아의 폐 용적(5 cm H₂O에서)은 1-5 ml/kg이었으며, 이것은 폐포가 거의 팽창되지 않았다는 것을 나타낸다.

30일의 입신 기간에 있는 만삭 태아의 폐 표면활성제는 정상 수준이었다. 그들의 폐 용적(5 cm H₂O에서)은 35-53 ml/kg이었으며, 이것은 폐포가 적당하게 팽창하여 정상적인 호흡이 일어날 수 있다는 것을 나타낸다.

SF-3을 투여한 경우에, 미숙 태아의 폐 용적(5 Cm H₂O에서)은 15-25 m1/kg이 었으며, 이것은 폐포가 바람직하지 못하게 팽창되었음을 나타내는 것이다.

본 발명의 표면활성제를 투여한 경우에, 폐 용적(5 cm H₂O에서)은 39-55ml/kg이었으며, 이것은 본 발명의 표면활성제가 미숙 태아의 폐 용적을 정상 수준으로 개전시켰음을 나타내는 것이다.

상기한 바와 같이, 본 발명의 합성 펩티드는 지질 혼합물의 표면 활성을 강력하게 향상시키는 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명의 합성 펩티드와 지질 혼합물로 이루어진 본 발명의 표면활성제로부터 표면활성, 현탁능 및 약리학적 특성 면에서 효과적인 호흡 장애 중후군 치료제를 제조할 수가 있다.

본 발명의 표면활성제를 활성 성분으로서 갖는 조성물은 수술후 호흡 부전, 천식, 기관지염, 신생아 괴저성 장염, 위궤양 및 십이지장궤양, 바이러스에 인한 호흡기 질환 및 난관 폐쇄증을 비롯하여 폐 표면활성제가 치료 효과를 나타내는 다른 질환의 치료 및 난관 유착 및 수술후 기관 유착의 예방에 사용되며, 또한 거담제로서 사용될 수도 있다.

본 발명에 의해 제공되는 호흡 장애 증후군의 치료제는 본 발명의 표면활성제를 어린이에게 사용시 투여량 당 50-1000 mg을, 성인에게 사용시 투여량 당 500-5000 mg을 함유한다. 그러한 투여 제제는 1.0-10.0%(W/V)의 농도로 생리학적 내성인 물, 생리 식염수 또는 완충액 등에 현탁됨으로써 제조될 수 있다. 이들은 호흡기 장애가 발생한지 72시간 내에 기도로 1 내지 10회 주사 또는 분무시키는 방법으로 투여될 수 있다. 이 조성물은 그대로, 즉 현탁시키지 않고 분말 제제로서 투여할 수도 있다. 투여량, 사용 방법 및 횟수는 환자의 증상 및 현재의 치료법에 따라 적당하게 변화 수 있다.

본 발명의 치료제는 필요하다면 안정화제, 보존제, 둥장화제, 완충제, 현탁제, 산화방지제 및 계면활성제와 같은 제약학적 보조제 또는 기관지확장제, 항알레 르기제, 제암성 제제, 항바이러스제, 소염제 및 항진균제와 같은 약물을 함유할 수 있다.

투여형은 액체 또는 분말 형태를 취할 수 있다. 본 발명의 치료제는 바이알 및 앰플과 같은 밀폐 용기에 충전되어 멸균 조성물로서 보존될 수 있다.

[본 발명을 실시하기 위한 최선의 방식]

본 발명은 다음 실시예를 참고로 하여 좀 더 상세히 설명될 것이다.

(1) 펩티드의 제조

하기 실시예에서, 합성된 펩티드의 분자량은 고속 원자 충격 질량 분석법 (FABMS)으로 측정하였다. 사용된 질량 분석기는 JMS-S102A(JEOL., LTD, 제품)이었 으며, 세슘 총(10 KeeV)을 이온원으로서 사용하였다.

실시예 1

서열 번호 5로 표시되는 펩티드(펩티드 A)를 문헌["The Peptides" (Gross E. and Meinenhofe J. eds., Barany C. and Merrifield R. authors, vol. 2, pp.1-284, Academic Press, New York, 1980]에 기재된 방법에 따라서 고상 합성법으로 페닐아세토아미도메틸(PAM) 수지 표면 상에서 합성하였다.

C-말단 류신 잔기를 t-부틸옥시카르보닐-류신(Boc-Leu)으로 변환시키고 옥시 메틸페닐아세토아미드메틸 결합을 통해 PAM 수지에 결합시켰다. C-말단을 결합시킨 후, Boc-Leu-PAM 수지(0.70 mo1/g, 0.35 9)를 펩티드 합성기(Model 990E, Bookman Instruments, Inc.)의 반응 용기로 옳겼다. 보호 처리된 아미노산을 수지 표면에서N-말단 방향으로 대칭 무수물법에 의해 첨가하여 완전 보호된 펩티드 0-수지를 합성했다. 그러나, 아르기닌의 축합시에는 N,N-디시클로헥실카르보디이미드/히드록시벤조트리아졸을 이용하여 이중 커플링시켰다[Connie et at., Chem. Ber., 103, 788-798 (1970) 참조].

모든 아미노산의 N-말단 아미노기를 Boc기로 보호하고 아미노산을 반응에 사용하기 전에 다음 기로 관능기 측쇄를 보호시켰다.

Arg-Tos: (토실)

Lys-2CLZ: (2-클로로벤질옥시카르보닐)

Cys-4MeBzl: (4-메틸벤질)

His-Tos: (토실)

이들의 축합 반응을 닌히드린 방법 카이저 시험법으로 확인하였다. 완전 보 호된 펩티드-0-수지(155 mg)를 디클로로메탄에서 5분 동안 팽윤시켰다. N-α-Boc보호기를 1% (v/v) 인돌 및 0.1% (v/v) 에탄디티올을 함유하는 TFA로 제거하였다. 다음에, 비보호된 펩티드-0-수지를, 0 ℃에서 60분 동안 p-크레졸(1 ml), p-티오크레졸(0.2 g) 및 DMSO (1 ml)를 첨가한 무수 불화수소(HF)로 처리하여 수지로부터 펩티드를 절단했다.

HF 및 DMSO를 0 ℃에서 진공하에 증류시켰다. 제거된 펩티드 및 수지를 냉각 디에틸 에테르(15 ml)로 3회 세척하고 제거된 펩티드를 냉각 TFA(5 ml)로 4회 세척 하여 추출하였다. 추출액을 즉시 여과시키고 빙냉수(150 ml)를 첨가하여 조펩티드를 침전시켰다. 조펩티드를 0 ℃에서 30분 동안 1000 x g에서 원심분리시키고 침전물로서 회수하였다. 이 침전물을 디에틸에테르(15 ml)로 세척하였다. 디에틸에테르, 에틸 아세테이트 및 증류수를 사용하여 이 세척 공정을 반복한 후에, 펩티드 A 84 mg을 얻었다.

이 조 펩티드를DMSO 50% 수용액에 용해시키고, μ-본다스피(Bondaspheres) 및 C8-300 컬럼을 사용하여 역상 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 정제하여 순수한 펩티드 A를 얻었다.

용출제로서 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴 50% 수용액을 사용하여 5분 동안 용출시켰다. 상기 용출제 및 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴 80% 수용액에 의해 형성된 직선 농도 구배하에 30분 동안 용출시켰다.

용출액 중의 펩티드의 존재를 245 nm에서(스펙트로포토메터: Japan Spectroscopic Co., Ltd. Model 870-UV) 시차 회절계(Shimadzu Manufacturing Corporation Model RID-6A)를 사용하여 모니터하였다.

FABMS(M + H⁺); 3837.1 (계산된 분자량: 3835.9)

실시예 2

서열 번호 6으로 표시되는 펩티드(펩티드 B)를 다중 펩티드 고상 합성 시스템, "Kokku-San"(상품명; Kokusan Chemical Works Co., Ltd.)을 사용하여 고상법으로 문헌["Solid Phase Peptide Synthesis - A Practical Approach" by E, Atherton and R.C. Sheppard (pp. 25-189, Oxford University Press, Oxford) and by Kenichi Akagi et al. (Chem. Pharm. Bull , 37(10), pp 2661-2664, 1989]에 기재된 방법을 참고로 하여 합성하였다.

N-α-9-플루오레닐메틸옥시카르보닐-류신(Fmoc-Leu)이 4-(히드록시메틸)페녹시메틸-공중합체(스티렌 1% 디비닐 벤젠) 수지에 결합한 N-α-9-플루오레릴메틸옥시카르보닐-류신-0-수지 (Fmoc-Leu-0-수지)(0.20 mmo1/0.5 g)를 출발 수지로서 사용하였다. 이 수지를 N,N-디메틸포름아미드(DMF)로 20분 동안 팽윤시키고 DMF로 4회 세척하였다. DMF 중의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합물을 진탕시켜 보호기를 제거하였다. 이 공정을 3회 반복하여 보호기를 완전히 제거하였다. 이어서 DMF로 3회 세척하고, N-메틸-2-피롤리돈으로 3회, DMF로 다시 3회 세척하여 수지 중의 과량의 피페리딘을 제거하였다. 이때에, 피페리딘의 존재를 pH 종이를 사용하여 체크하였다.

DMF(6ml), Fmoc-Leu(0.5mmol), N-히드록시벤조트리아졸(0.5 mmol) 및 N,N'-디이소프로필카르보디이미드(0.5 mmol)를 첨가하고 혼합물을 90분 동안 진탕시켜 축합 반응을 실시하였다. 이 수지를 DMF로 4회 세척하여 과량의 시약을 제거하였다. 이 축합 반응을 닌히드린 방법 카이저 시험법으로 시험하였다.

합성 계획을 세워서 아미노산을 수지 표면 상에 N-말단 방향으로 단계별로 첨가하여 N-말단 및 관능기가 완전히 보호된 펩티드-0-수지를 형성하였다.

Arg, Lys, His, Pro 및 Cys의 도입을 위한 축합 반응을 각각 120분 동안 2회 실시하였다.

그후에, DHF 중의 20% 피리딘을 보호된 펩티드-0-수지에 첨가하여 N-말단의 Fmoc 보호기를 제거하였다. 펩티드-0-수지를 DMF로 6회 및 메탄올로 6회 세척하고감압하에서 건조시켰다. m-크레졸(0.2 ml), 1,2-에탄디티올 (0.5 ml), 티오아니솔 (1.2 ml), TFA (7.5 ml) 및 트리메틸실릴브로마이드(1.4 ml)를 건조된 펩티드-0-수 지(100 mg)에 첨가하면서 교반시키고 얼음을 이용하여 냉각시켰다. 이 혼합물을 얼음으로 냉각시키며 120분 동안 교반시켜 관능기 측쇄로부터 보호기를 제거하고 수지로부터 펩티드를 제거하고, 이어서 유리 필터(G3)를 통해 여과시켰다. 여액을 감압하에 증발기를 사용하여 약 5 ml로 농축시켰다. 디에틸 에테르를 첨가하여 펩 티드를 침전시켰다. 이 펩티드 침전물을 유리 필터(G3)로 모으고, 디에틸 에테르로 5회 세척하고 감압하에 건조시켜 펩티드 B 60 mg을 얻었다.

모든 아미노산의 N-말단 아미노기를 Fmoc기로 보호하고, 반응에서 아미노산을 사용하기 전에 다음 기로 관능기 측쇄를 보호하였다.

Arg-Mtr: (4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐)

Lys-Boc: (t-부틸옥시카르보닐)

Cys-Trt: (트리틸)

His-Trt: (트리틸)

조 펩티드 약 100 mg을 TFA(1 ml)에 용해시키고 동일량의 이동상 용매, 즉 TFA-디클로로메탄 중의 10 mM β-메르캅토에탄올(5:95, V/V)을 4회 첨가하여 HPLC (아사히팩 GS-510(φ 7.5 × 500 mm) 컬럼 (상품명: 아사히 케미칼 인더스트리 코.엘티디. 제품)을 사용) 정제용 시료 용액 20 mg/ml를 제조하여 순수한 펩티드 B를 모았다.

TFA-디클로로메탄 중의 10 mM β-메르캅토에탄올(5:95, V/V)을 용출제로서사용하고 0.8 m1/분의 유속으로 80분 동안 용출시켰다. 용출액 중의 펩티드 존재를 245 nM에서(분광기. Japan Spectroscopic Co., Ltd., Model 870-UV) 시차 회절계(Shimadzu Corporation Model RID-6A)를 사용하여 모니터하였다.

FABMS(M + H⁺): 3017.9 (계산된 분자량: 3016.9)

실시예 3

서열 번호 7로 표시되는 펩티드(펩티드 C)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABHS(M + H⁺): 3116.0 (계산된 분자량: 3115.1)

실시예 4

서열 번호 8로 표시되는 펩티드(펩티드 D)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2663.7 (계산된 분자량: 2662.5)

실시예 5

서열 번호 9로 표시되는 펩티드(펩티드 E)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺): 2211.2 (계산된 분자량: 2209.9)

실시예 6

서열 번호 10으로 표시되는 펩티드(펩티드 F)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2647.5 (계산된 분자량: 2646.4)

실시예 7

서열 번호 11로 표시되는 펩티드(펩티드 G)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 3018.1 (계산된 분자량: 3016.9)

실시예 8

서열 번호 12로 표시되는 펩티드(펩티드 H)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 고상 다중 펩티드 합성 시스템을 사용하여 고상 합성법으로 합성하였다.

N-α-9-플루오레닐메틸옥시카르보닐-노르류신-0-수지(Fmoc-Nle-0-수지)(0.20 mmo1/0.5 g) 수지를 출발 수지로서 사용하였다. 이 수지를 DMF로 20분 동안 팽윤 시키고 DMF로 4회 세척하였다 DMF 중의 20% 피페리딘을 첨가하고 이 혼합물을 진탕시켜 보호기를 제거하였다. 이 공정을 3회 반복하여 보호기를 완전히 제거하였다. 이어서 DMF로 9회 세척하여 수지 중의 과량의 피페리딘을 제거하였다. 이때에, 잔류 피페리딘의 존재를 pH 종이를 사용하여 체크하였다.

DMF(6 ml), Fmoc-Nle(0.5 mmol), N-히드록시벤조트리아졸(0.5 mmol) 및 N,N'-디이소프로필카르보디이미드(0.5 mmol)를 첨가하고 혼합물을 90분 동안 진탕시켜 축합 반응을 실시하였다. 이 수지를 DMF로 4회 세척하여 과량의 시약을 제거하였다. 이 축합 반응을 닌히드린 방법 카이저 시험법으로 시험하였다.

그후에, DMF 중의 20% 피리딘을 보호된 펩티드-0-수지에 첨가하여 N-말단의 Fmoc 보호기를 제거하였다. 펩티드-0-수지를 DMF로 6회 및 메탄올로 6회 세척하고 감압하에서 건조시켰다. m-크레졸(0.2 ml), 1,2-에탄디티온 (0.5 ml), 티오아니솔 (1.2 ml), TFA (7.5 ml) 및 트리메틸실릴브로마이드(1.4 ml)를 건조된 펩티드-0-수 지(100 mg)에 첨가하면서 교반시키고 얼음으로 냉각시켰다. 이 혼합물을 얼음으로 냉각시키며 120분 동안 교반시켜 관능기 측쇄로부터 보호기를 제거하고 수지로부터 펩티드를 제거하고, 이어서 유리 필터(G3)를 통해 여과시켰다. 여액을 감압하에 증발기를 사용하여 약 5 ml로 농축시켰다. 디에틸 에테르를 첨가하여 펩티드를 침 전시켰다. 이 펩티드 침전물을 유리 필터(G3)로 모으고, 디에틸 에테르로 5회 세 척하고 감압하에 건조시켜 펩티드 H 65 mg을 얻었다.

모든 아미노산의 N-말단 아미노기를 Fmoc기로 보호하고, 아미노산을 반응에 사용하기 전에 다음 기로 관능기 측쇄를 보호하였다.

Arg-Mtr: (4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐)

Lys-Boc: (t-부틸옥시카르보닐)

Cys-Trt: (트리틸)

His-Boc: (t-부틸옥시카르보닐)

펩티드 약 10 mg을 클로로포름-메탄올(C/M) 2:1(V/V)의 혼합 용매 3.0 ml에 용해시켰다. 이 시료를 C/M 혼합 용매 2:1(V/V)로 평형화시킨 세파덱스 LH-60 컬럼(φ 2.5 × 90 mm)으로 정제하여 순수한 펩티드 H를 모았다.

용출액 중의 펩티드의 존재를 245 nM에서(분광기; Japan Spectroscopic Co., Ltd., Model 870-UV) 시차 회절계(Shimadzu Corporation Model RID-6A)를 사용하여 모니터하였다.

FABMS(M + H⁺); 2663.6 (계산된 분자량: 2662.5)

실시예 9

서열 번호 13으로 표시되는 펩티드(펩티드 I)를 실시예 8에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2560.4 (계산된 분자량: 2559.3)

실시예 10

서열 번호 14로 표시되는 펩티드(펩티드 J)를 실시예 8에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺): 2663.8 (계산된 분자량: 2662.5)

실시예 11

서열 번호 15로 표시되는 펩티드(펩티드 K)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2663.5 (계산된 분자량: 2662.5)

실시예 12

서열 번호 16으로 표시되는 펩티드(펩티드 L)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2503.6 (계산된 분자량: 2502,4)

실시예 13

서열 번호 17로 표시되는 펩티드(펩티드 M)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2736.7 (계산된 분자량; 2735.5)

실시예 14

서열 번호 18로 표시되는 펩티드(펩티드 N)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2640.4 (계산된 분자량: 2639.4)

실시예 15

서열 번호 19로 표시되는 펩티드(펩티드 0)를 실시예 8에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2640.3 (계산된 분자량: 2639.4)

실시예 16

Fmoc-Pro-Val-His(Trt)-Leu-Lys(Boc)-Arg(Mtr)

표제의 펩티드(펩티드 P)를 펩티드 합성 시스템 9050 (Millipore Corp.)를 사용하여 고상법으로 합성하였다.

N-α-9-플루오레닐메틸카르보닐-N-ω-4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐-아르기닌(Fmoc-Arg(Mtr))이 2-메톡시-4-알콕시벤질알코올-수지(사스린 수지, 상품명 Bachem Co., Ltd.)에 결합된 N-α-9-플루오레닐메틸카르보닐-N-ω-4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐-아르기닌-0-수지(Fmoc-Arg(Mtr)-0-수지)(0.20 mmol)를 출발 수지로서 사용하고, 아미노산을 펩티드 합성기 시스템 9050의 합성 프로토콜에 따라서 수지 표면 상에 N-말단 방향으로 연속적으로 첨가하여 N-말단 및 관능기가 완전히 보호된 펩티드-0-수지를 형성하였다.

완전히 보호된 펩티드-0-수지를 메탄올로 5회 세척하고 감압하에서 건조시켰다. TFA-디클로로메탄 용액(1:99, V/V)를 교반시키고 얼음으로 냉각시키며 건조된 펩티드-0-수지(330 mg)에 첨가하였다. 이 혼합물을 얼음으로 냉각시키며 30분 동안 교반시키고 이어서 실온에서 90분 동안 교반시켜 보호기가 펩티드에 여전히 부착되어 있는 수지로부터 펩티드를 제거하였다. 이 혼합물을 유리 필터(G3)를 통해 여과시키고, 여액을 감압하에 증발기를 사용하여 약 5 ml로 농축시켰다. 디에틸 에테르를 첨가하여 펩티드를 침전시켰다. 이 펩티드 침전물을 유리 필터(G3)로 모으고, 디에틸 에테르로 5회 세척하고 감압하에 건조시켜 펩티드 P 180 mg을 얻었다.

Arg-Mtr: (4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐)

Lys-Boc: ( t-부틸옥시카르보닐)

His-Trt: (트리틸)

TFA-디클로로메탄(1:99, V/V) 용액을 조펩티드에 첨가하여 시료 용액 10 mg/ml를 준비하고, 아사히팩 G5-510(φ 21.5 x 500 mm) 컬럼 (상품명: 아사히 케미 칼 인더스트리 코. 엘티디.)을 사용하는 HPLC에 의해 정제하여 순수한 펩티드 P를 모았다.

TFA-디글로로메탄(1:99, V/V) 용액을 용출제로서 사용하고 8.1 m1/분의 유속으로 120분 동안 용출시켰다. 용출액 중의 펩티드 존재를 245 nm에서(분광기: Japan Spectroscopic Co., Ltd., Model 870-UV) 시차 회절계(Shimadzu Corporation Model RID-6A)를 사용하여 모니터하였다.

FABMS(M + H⁺): 1405.0 (계산된 분자량: 1403.8)

[실시예 17]

H-Nle-(Nle)14-Nle-0-수지를 실시예 8에 따라서 고상 다중 펩티드 합성 시스템으로 합성하였다.

다음에, DMF를 합성된 H-Nle-(Nle)14-Nle-0-수지에 첨가한 후에, 펩티드 P를 Fmoc-Arg(Mtr) 대신에 첨가하였다. N-히드록시벤조트리아졸 및 N,N'-디이소프로필카르보디이드를 첨가하고 혼합물을 8시간 동안 진탕시켰다. 이 축합 반응을 2회 실시하였다. 축합 반응을 닌히드린 방법 카이저 시험법으로 체크하였다.

그후에, 실시예 8의 방법에 따라서 관능기의 보호기를 제거하고 펩티드를 수지로부터 제거하고 HPLC에 의해 정제하여 서열 번호 13으로 표시되는 펩티드(펩티드 I)를 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2560.2 (계산된 분자량: 2559.3)

실시예 18

펩티드 D의 티올기가 아세토아미도메틸화된(ACM) 형태인 펩티드(펩티드 Q)를 Fmoc-Cys(Trt) 대신에 Fmoc-Cys(ACM)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 4에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺): 2734.7 (계산된 분자량: 2733.6)

실시예 19

펩티드 E의 티올기를 사린, 비렌더 및 쿠마의 방법(Sarin, Virender and Kumar (EP 0 458 167Al))에 따라서 팔미틴산으로 에스테르화하여 펩티드 R을 제조 하였다.

FABMS(M + H⁺): 2448.5 (계산된 분자량: 2448.3)

비교예 1

서열 번호 20으로 표시되는 펩티드(펩티드 S)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 2793.8 (계산된 분자량: 2792.6)

비교예 2

서열 번호 21로 표시되는 펩티드(펩티드 T)를 실시예 2에서와 동일한 방법으로 제조하였다.

FABMS(M + H⁺); 3018.3 (계산된 분자량: 3016.9)

[본 발명의 합성 펩티드의 아미노산 조성 분석]

본 발명의 합성 펩티드를 진공하에 150 ℃에서 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48 및 72시간 동안 5% (w/v) 페놀을 함유하는 12N HCl-TFA 용액[2:1(V/V)]으로 산 가수분해 시키고, 산을 제거한 후에 가수분해 생성물을 시마주 오토매틱 아미노산 분석 시스템(LC-9A)로 분석하였다. 펩티드 M의 Trp를 16, 24 및 32시간 동안 4.2N 수산화나트륨 수용액으로 알칼리 가수분해시키고 HCl로 중화시키고, 이어서 아미노산 분석 시스템으로 분석하였다. 1 내지 72시간의 가수 분해 중에서 더 큰 회수율을 나타내는 아미노산 값으로부터 계산된 아미노산 조성은 화학식으로부터 계산된 값과 거의 일치하는 값을 나타내었다.

이 결과를 표 1에 나타내었다.

(2) 본 발명의 표면활성제의 생성

본 발명의 표면활성제를 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산 유사체의 3가지 지질 성분과 본 발명의 펩티드를 혼합함으로써 제조하였다.

실시예 20

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(1350 mg), 1,2-디아실-sn-글리세로 -(3)-포스포-sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐; Sigma Chemical Co., Ltd. 제품)(450 mg) 및 미리스틴산(200 mg)의 멸균량을 실온에서 클 로로포름-메탄올 혼합물[2:1(V/V)](1000 ml)에 용해시키고 펩티드 A 25 mg을 TFA(1.0 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시키고 고상 화하였다. 얻은 잔류물을 40 ℃에서 15분 동안 물-에탄올 혼합물[9:1(V/V)](100 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -50 ℃에서 동결시키고, 85-100 μHg의 진공하에 서 36시간 동안 건조시켜 표면활성제(2070 mg)를 백색 분말로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 65.2%(W/W), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세를 21.7%(W/W), 미리스틴산 9.7%(W/W), 펩티드 A 1.2%(W/W) 및 물 2.2%(W/W)였다.

실시예 21

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(300.0mg), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐, Sigma Chemical Co,, Ltd. 제품)(100.0 mg) 및 팔미틴산(40.0 mg)을 클로로포름-메탄올혼합물[2:1(V/V)](300 ml)에 용해시키고 펩티드 B 10.0 mg을 클로로포름-메탄올 혼 합물[2:1(V/V)](2.0 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조 시키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 45 ℃에서 20분 동안 물-에탄올 혼합물 [9:1(V/V)](100 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -60 ℃에서 동결시키고, 60-110 μHg의 진공하에서 40시간 동안 건조시켜 표면활성제(459.1 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 합량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 65.3%(W/W), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 21.8%(W/W), 팔미틴산 8.7%(W/W), 펩티드 B 2.2%(W/W) 및 물 2.0%(W/W)였다.

실시예 22

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(280.0 mg), 1,2-디라우로일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(120.0 mg) 및 팔미틴산(27.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼합물[2:1(V/V)](150 ml)에 용해시키고 펩티드 C 2.8 mg을 클로로포름-메탄올 혼합물[1:2(V/V)](0.5 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 40 ℃에서 45분 동안 물-에탄올 혼합물 [8:2(V/V)](100 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -65 ℃에서 동결시키고, 50-80 μ Hg의 진공하에서 36시간 동안 건조시켜 표면활성제(437.6 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 64.0%(W/W), 1,2-디라우로일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 27.4%(W/W), 팔미틴산 6.2%(W/W), 펩티드 C 0.6%(W/W) 및 물 1.8%(W/W)였다.

실시예 23

펩티드 B 대신에 펩티드 D를 사용하고 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포 -sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐, Sigma Chemical Co.,Ltd, 제품) 대신에 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 표면활성제(451.9 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 66.4%(W/W), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 22.1%(W/W), 팔미틴산 8.9%(W/W), 펩티드 D 2.2%(W/W) 및 물 0.4%(W/W)였다.

실시예 24

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(320.0 mg), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(80.0 mg) 및 팔미틴산(60.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼합물[1:1(V/V)](200 ml)에 용해시키고 펩티드 E(14.0 mg)를 TFA (0.3 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 45 ℃에서 60분 동안 물-에탄올 혼합물[10:1(V/V)](50 ml)에 현탁시켰 다. 이 현탁액을 -45 ℃에서 동결시키고, 50-110 μHg의 진공하에서 24시간 동안건조시켜 표면활성제(479.2 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 66.8%(W/W), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 16.7%(W/W), 팔미틴산 12.5%(W/ W), 펩티드 E 2.9%(W/W) 및 물 1.1%(W/W)였다.

실시예 25

펩티드 B 대신에 펩티드 F(22.0 mg)를 사용하고 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐: Sigma Chemical Co., Ltd. 제품) 대신에 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 표면활성제(463.9 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 64.7%(W/W), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 21.6%(W/W), 팔미틴산 8.6%(W/W), 펩티드 F 4.7%(W/W) 및 물 0.4%(W/W)였다.

실시예 26

펩티드 B 대신에 펩티드 G를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 454.1 mg을 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 합량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 66.1%(W/W), 1,2-아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 (탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐: Sigma Chemical Co., Ltd, 제품) 22.0%(W/W), 팔미틴산 8.8%(W/W), 펩티드 G 2.2%(W/W) 및 물 0.9%(W/W)였다.

실시예 27

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(210.0mg), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 (탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐: Sigma Chemical Co., Ltd. 제품) (90.0 mg) 및 스테아르산(33.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼합물[3:1(V/V)](100 ml)에 용해시키고 펩티드 H(1.9 mg)를 메탄올(0.5 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 50 ℃에서 15분 동안 물-에탄올 혼합물[9:1(V/V)](90 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -55 ℃에서 동결시키고, 100-120 μHg의 진공하에서 28시간 동안 건조시켜 표면활성제(340.2 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔디토일글리세로-(3)-포스포콜린 61.7%(W/W), 1,2-디아실-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 26.5%(W/W), 스테아르산 9.7%(W/W), 펩티드 H 0.5%(W/W) 및 물 1.6%(W/W)였다.

실시예 28

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(210.0 mg), 1-팔미토일-2-올레오일 sn-글리세로-(3)-포스포-L-세린 (90.0 mg) 및 팔미틴산(33.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼합물[4:1(V/V)](100 ml)에 용해시키고 펩티드 I(11.0 mg)을 TFA(0.5 ml)에용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 45 ℃에서 25분 동안 물-에탄올 혼합물[9:1(V/V)](110 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -55 ℃에서 동결시키고 100-120 μHg의 진공하에서 28시간 동안 건조시켜 표면활성제(348.7 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 60.2%(W/W), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-(3)-포스포-L-세린 25.8%(W/W), 팔미틴산 9.5% (W/W), 펩티드 I 3.2%(W/W) 및 물 1.3%(W/W)였다.

실시예 29

펩티드 B 대신에 펩티드 J를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 459.3mg을 얻었다.

실시예 30

펩티드 B 대신에 펩티드 K를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 452.5 mg을 얻었다.

실시예 31

펩티드 B 대신에 펩티드 L을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 456.6 mg을 얻었다.

실시예 32

펩티드 B 대신에 펩티드 M을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 453.9 mg을 얻었다.

실시예 33

펩티드 B 대신에 펩티드 N을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 452.5 mg을 얻었다.

실시예 34

펩티드 B 대신에 펩티드 0를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 458.1 mg을 얻었다.

실시예 35

1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린(30.0 mg), 1,2-디아실-sn-글리세로 -(3)-포스포-sn-글리세롤 (탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐, Sigma Chemical Co., Ltd. 제품) (10.0 mg) 및 팔미틴산(4.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼 합물[2:1(V/V)](30 ml)에 용해시키고 펩티드 Q(1.0 mg)을 클로로포름-메탄올 혼합 물[2:1(V/V)](2.0 ml)에 용해시켰다. 이 용액을 혼합하고 이어서 감압하에 건조시 키고 고상화하였다. 얻은 잔류물을 45 ℃에서 20분 동안 물-에탄올 혼합물 [9:1(V/V)](10 ml)에 현탁시켰다. 이 현탁액을 -60 ℃에서 동결시키고 60-120 μ Hg의 진공하에서 36시간 동안 건조시켜 표면활성제(45.4 mg)를 백색 분말상으로서 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 66.1%(W/W), 1,2-디아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤 22.0%(W/W), 팔미틴산 8.8%(W/W), 펩티드 Q 2.2%(W/W) 및 물 0.9%(W/W)였다.

실시예 36

펩티드 Q 대신에 펩티드 R을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 35에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 45.7 mg을 얻었다.

비교예 3

클로로포름-메탄올 혼합물[2:1(V/V)](2.0 ml) 중의 펩티드 B(10.0 mg) 용액 대신에 TFA(0.3 ml) 중의 펩티드 S(10.0 mg) 용액을 사용하는 것을 제외하고는, 실 시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 455.2 mg을 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 65.9%(W/W), 1,2-아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐: Sigma Chemical Co,, Ltd. 제품) 22.0%(W/W), 팔미틴산 8.8%(W/W), 펩티드 S 2.2%(W/W) 및 물 1.1%(W/W)였다.

비교예 4

클로로포름-메탄올 혼합물[2:1(V/V)](2.0 ml) 중의 펩티드 B(10.0 mg) 용액 대신에 TFA(0.3 ml) 중의 펩티드 T(10.0 mg) 용액을 사용하는 것을 제외하고는, 실 시예 21에서와 동일한 방법을 수행하여 백색 표면활성제 분말 456.0 mg을 얻었다.

이 분말 중의 에탄올의 양은 검출가능하지 않았으며 표면활성제의 총 중량에 대한 각 성분의 함량은 1,2-디팔미토일글리세로-(3)-포스포콜린 65.8%(W/W), 1,2-아실-sn-글리세로-(3)-포스포-sn-글리세롤(탄소 원자수가 14 내지 24인 아실기를 가짐; Sigma Chemical Co,, Ltd. 제품) 21 9%(W/W), 팔미틴산 8.8%(W/W), 펩티드 T2.2%(W/W) 및 물 1.3%(W/W)였다.

표 2는 본 발명의 표면활성제의 표면활성 및 폐포 공간 용적 유지 효과에 대한 시험 결과를 나타낸다.

상기한 바와 같이, 본 발명의 신규 합성 폴리펩티드는 분리 및 정제하기가 쉬우며, 대량 생성 방법에 의해 제조 수 있으며, 일반적인 용매에서 높은 용해도를 나타내며 더욱 균일한 현탁능을 나타내고 종래의 조성물에 비해 동등하게 강력한 표면 활성을 나타낸다.

따라서, 본 발명은 심각한 호흡 부전을 일으키는 질환인 호흡 장애 중후군의 치료제로서 이용될 수 있다.

서열 표

서열 번호: 1

서열 길이: 35

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형 펩티드

서열

서멸 번호: 2

서열 길이: 34

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 3

서열 길이: 35

서열 유형, 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 4

서열 길이: 32

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 5

서열 길이: 35

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 6

서열 길이: 27

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 7

서열 길이: 27

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호. 8

서멸 길이: 23

서열 유형· 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 9

서열 길이: 19

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 10

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 11

서열 길이: 27

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 12

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 13

서열 길이: 22

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 14

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 15

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 16

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 17

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 18

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 19

서열 길이: 23

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 20

서열 길이: 27

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

서열 번호: 21

서열 길이: 27

서열 유형: 아미노산

위상: 직쇄

서열 유형: 펩티드

서열

Claims

하기서열을 갖는 합성 펩티드.

Xaa-Pro-Val-Xbb-Xcc-Lys-Arg-W

여기서, Xaa는 존재하지 않거나 또는 Cys 또는 Ser을 나타낼 수 있으며, Xbb는 His 또는 Asn을 나타내고, Xcc는 Leu 또는 Ile를 나타내고, W는Leu 및(또는) Nle 잔기 12 내지 20개로 이루어진소수성 부분을 나타낸다.
제1항에 따른 합성 펩티드의소수성 펩티드 부분을 구성하는 12 내지 20 개의 소수성 아미노산이Ile, Val, Nva및(또는)Trp잔기1 내지 5개를 포함하는합성 펩티드.
제1또는 2항에 있어서, 펩티드 서열이서열 번호 5 내지 19 중의 하나이거나, 또는 서열 번호 8의 펩티드의 S-아세트아미도메틸화된 형태이거나 또는 서열 번호 9의 펩티드의 S-팔미토일화된 형태인 합성 펩티드.
하기 서열로 표시되는 친수성 펩티드 부분의 N-말단 및 관능기가 보호되어 있는 합성용 펩티드.

Xaa-Pro-Val-Xbb-Xcc-Lys-Arg

여기서, Xaa는 존재하지 않거나 또는 Cys 또는 Ser을 나타낼 수 있으며, Xbb는 His 또는 Asn을 나타내고, Xcc는 Leu 또는 Ile를 나타낸다.
제4항에 있어서, Fmoc-Pro-Val-His(Trt)-Leu-Lys(Boc)-Arg(Mtr), Fmoc-Pro-Val-Asn-Leu-Lys(Boc)-Arg(Mtr) 또는 Fmoc-Pro-Val-Asn-Ile-Lys(Boc)-Arg(Mtr) 중의 하나인 펩티드.
제1항또는2항에 따른합성 펩티드의소수성 펩티드 부분을 제6항 또는 7항에 표시된 합성용 펩티드와축합시키는 것을 특징으로 하는 제1또는 4항에 따른 합성 펩티드의 제조 방법.
제1 내지 제3항 중 어느 한 상에 따른합성 펩티드, 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산으로 이루어진폐 표면활성제.
제1 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른합성 펩티드, 콜린 포스포글리세리드, 산 포스포리피드 및 지방산으로 이루어진폐 표면활성제를 활성 성분으로서 함유하는 호흡 장애증후군의 치료제.