JPH10506125A - 広面積粘膜下組織グラフト構成物およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 多層組織グラフト構成物、擬似等方性グラフト構成物およびこのような構成物の製法が記載されている。多層組織グラフト構成物は、部分的に重なり合った粘膜下組織片を、脱水条件のもとで圧縮することによって、融合して単一のグラフト構成物にするという方法で作られる。擬似等方性グラフト構成物は第１粘膜下組織片と最低２枚の粘膜下組織片とを、各片の縦方向軸が最低２枚の他の粘膜下組織片の縦方向軸と約１８０度／Ｎの角度を形成するような向きに重ねることによって作られる。

Description

【発明の詳細な説明】 広面積粘膜下組織グラフト構成物およびその製法技術分野 本発明は損傷−または疾病組織構造の再増殖および治癒の促進に有用な組織グ ラフト構成物に関するものである。より詳細に述べるならば、本発明は温血脊椎 動物の複数の粘膜下組織片から形成される粘膜下組織グラフト構成物および前記 構成物の製法に向けられる。背景技術及び発明の開示 温血脊椎動物の腸の粘膜の少なくとも内腔部分及び筋層の両方から剥離した粘 膜下層を含んでなる組成物が組織グラフト材料として用いられることは公知であ る。例えば米国特許第４,９０２,５０８号および第５,２８１,４２２号を参照さ れたい。これらの特許に記載されている組成物はすぐれた機械的特性、例えば高 コンプライアンス、高い破裂圧力点および、このような組成物を血管グラフト構 成物として、また結合組織置換用途に好都合に使用せしめる有効多孔度指数など 、を特徴とする。このような用途に用いるとき粘膜下グラフト構成物は、そのグ ラフト構成物によって置換される組織の再増殖のための基質として役立つように みえる。６００以上のcross-species（異種間）移植組織において、粘膜下組織 由来グラフト組成物が組織グラフト拒否反応をおこすことは決して見られなかっ たことも注目に値する。 本発明によって使用する粘膜下組織由来基質は、高度に保存されたコラーゲン 類、糖蛋白質類、プロテオグリカン類、およびグリコサミノグリカンを天然の形 で、天然濃度で含むコラーゲン基礎−生体内分解可能基質である。 本発明に使用する細胞外コラーゲン性基質の一つは、温血脊椎動物の粘膜下組 織である。粘膜下組織は種々のソースから、例えば、ブタ、ウシおよびヒツジま たはその他の温血脊椎動物を含める食肉生産のために飼育される動物から収穫し た腸組織などから得ることができる。脊椎動物の粘膜下組織は商売上の食肉生産 処理の副産物として豊富にあり、そのため低価格の組織グラフト材料である。 上記特許に記載される粘膜下組織グラフト構成物の１つの制約は、グラフトの 大きさが粘膜下組織を作成するソース材料の大きさによって制限されることであ る。例えば、腸組織から作成される粘膜下組織グラフトの大きさはソースとなる 腸部分の組織の長さおよび周囲によって制限される。しかし粘膜下組織グラフト 構成物の幾つかの用途―ヘルニア修復、皮膚グラフト、髄膜被覆、腹壁破裂の修 復（先天性胃欠陥）および器官組織修復を含める―は天然資源から直接作成でき るものより大きいグラフト材料シートを必要とすることが多い。 大きい粘膜下組織シートはより小さい粘膜下組織部分から、織る、編む、また は接着剤使用などの一般的方法によって作ることができる。しかしこのような技 術を商業的に実施することは非現実的で、費用がかかることが多い。その上、組 織片の接着を促進するための接着剤の使用または化学的前処理は粘膜下組織グラ フトの生物向性（biotropic）を損なうことがある。そのため生物向性を保持す る、安価で、生産性がよく、且つ大きい面積を有する粘膜下組織グラフト構成物 が必要である。 本発明の用途の１実施態様によると、広面積粘膜下組織グラフト構成物が脊椎 動物粘膜下組織由来材料の多数の小片から形成される。粘膜下組織の単一シート （すなわち一体化されたグラフト構成物）が本発明により、複数の粘膜下組織片 を互いに融合してその構成する粘膜下組織片のどれよりも大きい表面積を有する １枚の組織を形成するという方法で作られる。この方法は、１粘膜下組織片の少 なくとも一部分を他の粘膜下組織片の少なくとも一部分と重ね、その粘膜下組織 の脱水を可能とする条件のもとで前記の重なり部分に圧力を加える諸段階を含ん でなる。これらの条件下で重なり部分は“融合”し、１枚の大きい組織シートを 形成する。本発明によって形成される広面積グラフト構成物は実質的に粘膜下組 織からなり、汚す可能性のある接着剤および化学的前処理を含まず、そのグラフ ト構成物を形成するために使用した個々の片よりも大きい表面積および大きい機 械的強度を有する。 温血脊椎動物の組織から作られる個々の粘膜下組織片は方向的に特異な機械的 特性を有する（すなわち組織の軸が異なると物理的特性が異なる）。これらの方 向特性は主として組織内のコラーゲンの並び方によって支配される。コラーゲン 線維は脳粘膜下組織内の耐力成分であり、主として腸内腔軸に平行に配列してい る。腸粘膜下組織におけるコラーゲンのこの縦方向の配列（disbursement）が粘 膜下組織構成物の物理的特性の方向変動性に貢献している。 本発明の１実施態様により、単一の擬似等方性（pseudoisotropic）多層グラ フト構成物が複数の粘膜下組織片から作られる。ここに用いる用語“擬似等方性 ”は、グラフト材料の各軸に沿って大体同じような物理的特性を有するグラフト 材料を説明する。本発明の擬似等方性多層グラフト構成物は個々の粘膜下組織片 または粘膜下組織片を含む粘膜下組織シートから作られる。擬似等方性グラフト 構成物の製法は、第１片（または第１シート）の一部を第２片（または第２シー ト）と重ね合わせることを含み、その際第２片（またはシート）は第１片（また はシート）に平行な面に置かれるが、第１片（またはシート）の縦方向軸が第２ 片（またはシート）の縦方向軸に対して角度を成すように第２片（またはシート ）を回す。他の片（またはシート）を同様にして加え、所望数のラミネート層を 有する多層構造を作り出すことができる。その後粘膜下組織の少なくとも重なり 部分に圧力をかけることによって、個々の粘膜下組織片（またはシート）を互い に融合し、１枚の多層擬似等方性構成物を形成する。図面の簡単な説明 図１は、複数の粘膜下組織片から形成されるホモラミネートグラフト構成物の 線図である； 図２は、４枚の粘膜下組織片から形成される擬似等方性ヘテロラミネートグラ フト構成物の線図である； 図３は、３枚の粘膜下組織シートから形成される擬似等方性ヘテロラミネート グラフト構成物の線図であって、ここで各シートは複数の粘膜下組織片から形成 される； 図４は、本発明による粘膜下組織グラフトに孔を形成するために適した器具の 線図である。好適実施態様の詳細な説明 本発明により、広面積粘膜下組織シートを含んでなる組織グラフト構成物の製 法が提供される。さらに本発明は粘膜下組織の多層擬似等方性シートを作る方法 を提供する。この方法は複数の粘膜下組織片を融合して、単一の粘膜下組織多層 シートを形成する段階を含む。 本発明のグラフト構成物の生成に使用するために適した粘膜下組織は天然に関 係する細胞外基質蛋白質、糖蛋白質およびその他の因子類を含む。粘膜下組織の 一つのソースは温血脊椎動物の腸組織である。小腸組織は本発明に使用するため の粘膜下組織の好適ソースである。 適した腸粘膜下組織は、典型的には、粘膜の少なくとも内腔部分及び筋層の両 方から剥離した粘膜下層を含んでなる。本発明の１実施態様において、腸粘膜下 組織は、粘膜下層および、粘膜筋板および緻密層を含める粘膜の基底部を含む； これらの層はソースである脊椎動物の種類によって厚さおよび定義が種々異なる ことが知られている。 本発明によって使用する粘膜下組織の調製は米国特許第４,９０２,５０８号に 記載されている；この開示はここに引例によって明白に挿入される。脊椎動物、 好適にはブタ、ヒツジまたはウシ―ただしこれらに制限されるものではない―の 腸切片を縦方向のふきとり運動を用いてこすり、平滑筋組織を含む外側層および 最も内側の層、すなわち粘膜の内腔部分を取り外す。粘膜下組織を生理食塩液で 洗い、任意に滅菌する。 本発明の多層粘膜下組織グラフト構成物は在来的滅菌法、例えばグルタールア ルデヒド−タンニン処理、酸性ｐＨにおけるホルムアルデヒド−タンニン処理、 プロピレンオキシドまたはエチレンオキシド処理、ガス プラズマ滅菌、ガンマ 線照射、電子ビーム、過酢酸滅菌などを用いて滅菌することができる。粘膜下組 織の機械的強度、構造および生物向性に悪影響を与えない滅菌法が好ましい。例 えば、強いガンマ線は粘膜下組織シートの強度の損失をおこすかも知れない。好 適滅菌法としては、グラフトを過酢酸、１−４Ｍｒａｄガンマ線（より好適には １−２.５Ｍｒａｄガンマ線）、エチレンオキシド処理またはガスプラズマ滅菌 にさらすことなどがある；過酢酸滅菌が最も好ましい滅菌法である。粘膜下組織 を２種類以上の滅菌法にかけるのが一般的である。粘膜下組織を例えば化学処理 などで滅菌した後、その組織をプラスチックまたはホイルラップに包み、電子ビ ームまたはガンマ線滅菌法を用いてさらに滅菌する。 粘膜下組織は水和−または脱水状態で保存できる。凍結乾燥または空気乾燥し た粘膜下組織を再水和し、生物向性および機械的特性を著しく喪失せずに本発明 によって用いることができる。 本発明の１実施態様において、粘膜下組織のコンプライアントな広面積シート が多数の粘膜下組織片から形成される。使用する個々の粘膜下組織片の寸法は重 要でなく、“粘膜下組織片”という用語は、ここでは１種類以上の脊椎動物ソー スおよび臓器から得られた種々の大きさおよび形の粘膜下組織を含むと定義され る。１実施態様において、片は薄層脳組織切片から作られ、その際薄層切片を任 意にしかし好適に切り、平らにして、２つの概ね平行した両サイドと、対性の両 端とを有する細長い粘膜下組織片を作る。“粘膜下組織シート”とは、ここでは 複数の粘膜下組織片からなる組織構成物を含むものとする。その際それらの片は 重なり合って、前記構成物の形成に用いた個々のシートのどれよりも大きい表面 積を有する構成物を形成する。“粘膜下組織層”とは、多層粘膜下組織構成物の 個々の層を意味する。 粘膜下組織の単一の広面積シートは、本発明によって個々の粘膜下組織片を重 ね、重なり部分を加圧し、組織を融合することによって形成される。１実施態様 においては、粘膜下組織の脱水を許す条件のもとで、重なり合った組織に圧をか ける。粘膜下組織の広面積シートはヘテロラミネート シートとしてもホモラミ ネート シートとしても形成できる。ここに用いる用語“ヘテロラミネート（ヘ テロ層状）”とは、単一グラフト構成物上の異なる箇所において種々の数の重な った（そして融合した）粘膜下組織層を有する多層組織を言う。ここに用いる用 語“ホモラミネート（ホモ層状）”とは、単一グラフト構成物上のあらゆる箇所 で同一の数の粘膜下組織層を有する多層組織グラフト構成物について言う。 １実施態様において、大きい粘膜下組織シートを形成する方法は、１粘膜下組 織片の少なくとも一部を第２の粘膜下組織片の少なくとも一部と重ね、粘膜下組 織の脱水を許す条件のもとで少なくとも前記重なり部分を加圧する諸段階を含ん でなる。隣接粘膜下組織片間の組織の重なりの量は、各粘膜下組織片の少なくと も一部が他の粘膜下組織片の一部分と重なるという条件のもとで、その広面積グ ラフト構成物の使用目的および所望特性によって種々変動する。加圧により、粘 膜下組織片は重なった部分に沿って互いに融合し、粘膜下組織のコンプライアン トな１枚のヘテロラミネート シートが生成する。 別の実施態様において、粘膜下組織の１枚のホモラミネート シートを粘膜下 組織片から作ることができる。ホモラミネート組織グラフト構成物を形成する方 法は、第１粘膜下組織層を形成する諸段階からなる；ここでは粘膜下組織片は第 １面上に並べて置かれる。第１層の粘膜下組織片は、互いに実質的には重ならず 、個々の片の端が互いに接触するように隣接して置かれる。それから第１の粘膜 下組織層に第２の粘膜下組織層を重ねる。第２層の粘膜下組織片は第１層の粘膜 下組織片と同様に（すなわち個々の片の端が互いに実質的に重なることなく、互 いに接触するように、互いに隣接し）互いに隣接して置かれる。１実施態様にお いては、第２層の粘膜下組織片は第１層の粘膜下組織片と同じ方向ではあるが、 第１層の粘膜下組織片に対して埋め合わせるように配置され、そのため第１層の 個々の粘膜下組織片は第２層の粘膜下組織片によって架橋される（図１参照）。 その後粘膜下組織片の重なり部分を２面の間で圧縮する；その２面のうち少なく とも１面は水透過性である。この圧縮は圧縮される粘膜下組織の少なくとも部分 的脱水を可能とする条件下で行われる。 有利に、本発明によって形成される粘膜下組織のヘテロラミネート−並びにホ モラミネート広面積シートは両方とも実質的に粘膜下組織からなり、高められた 機械的強度を有し、この粘膜下組織の形成に用いられた個々の片のどれよりも大 きい面積を有する。 粘膜下組織はabluminal（内腔と離れた）面と内腔面とを有するのが一般的で ある。内腔表面はソースである器官の管腔に面する粘膜下組織面で、in vivoで は一般的に内側粘膜層に隣接する。一方、abluminal面は器官ソースの管腔から 離れる側に面をなす粘膜下組織面であり、in vivoでは典型としては平滑筋組織 と接触する。複数の粘膜下組織片は、abluminal面が内腔面と接触か、内腔面が 内腔面と接触か、またはabluminal面が隣接する粘膜下組織片のablum inal面と接触するように、重ねることができる。同一のまたは異なる脊椎動物ま たは器官ソースからの粘膜下組織片の重なり方のこれらの組み合わせはすべて、 組織の脱水を許す条件下で、重なり部分を加圧することにより、本発明による広 面積粘膜下組織シートを生成する。 本発明の粘膜下組織片は米国特許第５,２７５,８２６号に記載されるように条 件づけられ（この開示は引例によってここに明白に挿入される）、粘膜下組織の 粘弾性を変えることができる。１実施態様により、筋層および筋層の内腔部分か ら薄片として剥ぎ取った粘膜下組織をわずか２０％の歪みを有するように条件づ ける。粘膜下組織は引張ったり、化学的処理、酵素処理により、または組織をそ の他の環境因子にさらすことによって条件づけられる。１実施態様において腸粘 膜下組織片を、縦方向または横方向に引張ることによって条件づけ、腸粘膜下組 織片がわずか２０％の歪みを有するようにする。条件づけられた粘膜下組織片を 用いて本発明による広面積シートまたは多層構造を形成することができる。別法 として、広面積シートまたは多層広面積シート構成物の形成後にその粘膜下組織 材料を条件づけ、わずか２０％の歪みを有する粘膜下組織材料を生成することが できる。 粘膜下組織の広面積シートの形成中に粘膜下組織を２面間で圧縮することによ って重なり部分に圧力をかける。その２面は、種々の材料から、単一グラフト構 成物の所望の形および仕様に応じていかなる形にでも形成できる。その２面は平 坦なプレートとして形成されるのが一般的であるが、その他の形、例えばスクリ ーン、向かい合ったシリンダーまたはローラーおよび相補的非平面なども含まれ る。これらの表面の各々は任意に加熱することも孔をあけることもできる。好適 実施態様において、２面のうちの少なくとも１面は水透過性である。ここで用い る用語“水透過性面”とは、吸水性、微孔性またはマクロ多孔性である表面を含 む。マクロ多孔性材料にはプラスチック、金属、セラミックスまたは木材から作 られた有孔板またはメッシュが含まれる。 粘膜下組織を１実施態様によって、粘膜下組織片の重なり部分を第１の面に置 き、第２の面を露出した粘膜下組織の最上部に置くことによって加圧する。２面 に互いにバイアスがかかるように力をかけて、粘膜下組織を２面間で圧縮する。 バイアス力は熟練せる当業者に公知の下記の多くの方法によって形成される；装 置を１対のピンチローラーを通す（２ローラーの表面間の距離は２プレート間の 元々の距離より小さい）、最上部のプレートに重量をかける、および２面に静水 圧の使用または大気圧をかけるなど。 １好適実施態様において、粘膜下組織片は粘膜下組織の圧縮と同時に、組織の 脱水を許す条件にさらされる。用語“粘膜下組織の脱水を許す条件”とは、少な くとも重なり合った点において粘膜下組織からの水分の除去を促進または誘起す る機械的または環境的条件を含めるものとする。圧縮する粘膜下組織の脱水を促 進するために、組織を圧迫している２面のうちの少なくとも１面は水透過性であ る。組織の脱水は任意に、吸い取り材料の使用、組織の加熱、または２加圧面の 内側に空気を通すことによってさらに高めることができる。 複数の粘膜下組織片を室温で１２−４８時間圧縮するのが一般的である、ただ し熱を加えてもよい。例えば暖かい毛布で圧縮面の外側を覆い、圧縮組織の温度 を約４０℃ないし約５０℃に高めることができる。重なり部分を圧縮する時間は 、普通は組織の脱水程度によって決まる。熱の使用は脱水速度を高め、したがっ て組織の重なり部分の圧縮に必要な時間は減少する。一般には、組織は、固いが フレキシブルな材料を形成するのに十分な時間加圧される。組織の十分な脱水は 、その組織を通過する電流のインピーダンスの増加によっても示される。インピ ーダンスが１００−２００オーム増加したとき、組織は十分に脱水されており、 圧力を除去することができる。 圧縮粘膜下組織は２面から単一のコンプライアントな広面積組織構成物として 取り出される。その構成物をさらに処理し（すなわち切る、折る、縫うなど）、 本発明の粘膜下組織材料を必要とする種々の医学的用途に適合させる。 圧縮操作中、粘膜下組織を任意に真空下に置くことができる。真空は組織の脱 水を促進するし、組織の圧縮に役立ててもよい。或いは、真空の適用は複数の粘 膜下組織片の重なり部分を圧縮するための一つの圧縮力を提供してもよい。例え ば、重なり合った粘膜下組織を２面間に横たえ、好適にはその１つの面は水透過 性である。装置を水を吸い取る吸取り材料および空気を通過せしめる通気性毛布 で覆う。装置をその後真空室に置き、概ね１４−７０インチＨｇ（３５．６−１ ７７．８ｃｍＨｇ）（７−３５ｐｓｉ（０．４９−２．４６ｋｇ／ｃｍ2））の 真空にする。約５１インチＨｇ（１２９．５ｃｍＨｇ）（２５ｐｓｉ（１．７５ ｋｇ／ｃｍ2））の真空にするのが好ましい。任意に加熱毛布を室の最上部に置 き、粘膜下組織の圧縮中に、その組織を加熱することができる。この実施態様に 使用するのに適した室は当業者には公知であり、真空口を備えたデバイスを含む 。この結果起こる雰囲気圧の低下は２面と協同して粘膜下組織を圧縮し、同時に 粘膜下組織を脱水する。 任意に、組織グラフト用途に用いる広面積組織グラフトを種々の形で形成する ことができる。例えば器官再構成に使用する場合は、広面積シートを中空球また はパウチ（pouch）の形に形成される。このような形の構成物は膀胱または胃の 広い領域を置換するのに好都合である。これらの形の粘膜下組織構成物は、その 組織を切る、縫うなどの一般的技術で所望の形に形成される。 あるいは、簡単な製法によって粘膜下組織片から大きい非平面形粘膜下組織シ ートを作ることができる。その方法は複数の粘膜下組織片を２枚の相補的非平面 形の面の間に置き、２面間にある重なった粘膜下組織片を圧縮する。相補的形の これらの面は、２面間に顕著な空気ポケットを残さずに２面がぴったりフィット して互いに圧し合うことができるように形成される。好適には２枚の相補的面の 少なくとも１面が水透過性であるのが好ましい。 成形粘膜下組織構成物を形成する１方法は、複数の粘膜下組織片を非平面状に 成形された多孔性表面上に置き、その際粘膜下組織がその多孔性表面の形になじ むように置くことを含んでなる。粘膜下組織はそれを引張らずに多孔性表面上に 置くことが好ましいが、成形多孔性表面への被覆を容易にするために引張って伸 ばすこともできる。各粘膜下組織片を、粘膜下組織の隣接片の少なくとも一部が 重なるように、多孔性表面上に置く。その粘膜下組織の重なり部分をそれから、 第１の多孔性面と相補的形を有する第２の成形面で覆い、粘膜下組織の脱水を許 す条件のもとで加圧して粘膜下組織を２面間で圧縮する。 別法として、本発明の広面積シートをダイ プレス法を使用して延伸すること によって、広面積シートを非平面形に成形することができる；その際粘膜下組織 は、生成した組織グラフトがその形を保持するような脱水条件下で、多孔性ダイ によって非平面形に加圧される。多層広面積シートはこのような処理法に好適に 用いられる。 多層粘膜下組織構成物は、本発明によって１粘膜下組織片の一部を他の粘膜下 組織片の一部と重ねることによって形成される。類似の方法で、広面積多層組織 グラフト構成物は本発明により、粘膜下組織シート（上記のように形成された） を第２の粘膜下組織シートの少なくとも一部と重ねることによって形成できる。 多層粘膜下組織構成物の大きさおよび物理的特性は重ねる粘膜下組織片の数およ び各片の重なる部分のパーセントによって調節できる。 多層組織グラフト構成物は本発明によって、１粘膜下組織片の一部を他の粘膜 下組織片の一部と重ね合わせて第１シートを形成することによって作られる。付 加的粘膜下組織片を第１シートの重なり部分の上に置いて第２シートを形成する 、その際第２シートの片（複数）の端は任意に第１シートの片（複数）の端に対 して急角度を形成し、前記形成された第２シートは第１シートと同一平面である 。第２シートの複数の粘膜下組織片は、第２シートの１粘膜下組織片の少なくと も一部が第２シートの他の粘膜下組織片の少なくとも一部と重なるように置くこ とができる。付加的粘膜下組織片を第１および第２シートの重なった部分の上に 重ねて、付加的粘膜下組織層を作ることができる。複数の粘膜下組織層をこうし て脱水条件のもとで圧縮し、多層構成物を形成するために用いた粘膜下組織の個 々の片のどれよりも大きい表面積を有する多層ヘテロラミネート粘膜下組織構成 物が形成される。 本発明の１実施態様において、粘膜下組織をいくつかの片に切り分ける；各片 は概ね平行した端を有し、本発明の多層ヘテロラミネートシートの形成に用いら れる。この実施態様では、第１層粘膜下組織片の端が第２粘膜下組織片の端に対 して或る角度を形成するように、第２層の粘膜下組織片を第１層の重なり部分上 に置く。粘膜下組織の重なり部分は脱水条件下で圧縮され、多層ヘテロラミネー トシートを形成する。これらのシートはほぐれずに切ることができ、宿主にシー トを移植するために必要な時間に相当する時間（１時間以上）水に浸しても剥離 することはない。もしシートが、全ての側を縫合するなど、正しく移植されたな らば、移植後に剥離は起きるはずがない。 本発明により、擬似等方性を有する組織グラフト構成物が粘膜下組織片から形 成される。擬似等方性組織グラフト構成物は接着剤または縫合を用いずに多層構 造に融合した多数の粘膜下組織片を含んでなる。擬似等方性多層組織グラフトは 本発明により温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した最低３ 枚の腸粘膜下組織片から作られる。各脳粘膜下組織片の各々は、粘膜下組織片内 にあるコラーゲン線維の主方向に対応する縦方向軸を有するように特徴づけられ る。擬似等方性グラフト構成物の生成法は、第１粘膜下組織片を第１面に置き、 前記第１片に最低２枚の他の粘膜下組織片を重ね、そのとき個々の粘膜下組織片 の各々の縦方向軸が他の最低２枚の粘膜下組織片の縦方向軸と約１８０°／Ｎの 角度を形成し、ヘテロラミネートグラフトを形成するように重ねる。ここでＮは 粘膜下組織片の総数である（図２参照）。例えば、疑似等方性グラフト構成物が ４枚の粘膜下組織片から形成されたとき、１８０／４＝４５度の角度を、各片は 他の３片のうち２片に対して、その中心軸間で形成される。粘膜下組織（少なく とも重なった部分）をそれから第１面と第２面との間で圧縮する。１実施態様に おいて、圧縮される粘膜下組織の少なくとも部分的脱水が可能な条件のもとで組 織を圧縮する。好適実施態様では前記面の最低１つの面は水透過性である。 擬似等方性を有する広面積組織グラフト構成物を広面積粘膜下組織シートから 形成することもできる。これらの擬似等方性組織グラフト構成物は広面積粘膜下 組織シートの多層からなる。重なり合った粘膜下組織片を含んでなる粘膜下組織 シートは本明細書において前に述べたように、ホモラミネートまたはヘテロラミ ネート組織構成物として形成され得る（図３参照）。 擬似等方性を有する広面積多層組織グラフト構成物の製法の１つは、複数の粘 膜下組織片から第１粘膜下組織シートを形成し、その第１シートを最低２枚の別 のシートと重ねることからなる。各シートを構成する個々の粘膜下組織片はその 粘膜下組織片にあるコラーゲン線維の主方向に対応する縦方向軸を有する。個々 の粘膜下組織片を、各片が隣接片と一直線に並び、各粘膜下組織片の縦方向軸が 実質的に互いに平行であるように重ねることによって、第１シートを第１面上に 形成する。こうして第１シートのコラーゲン線維は圧倒的に１方向に整列し、シ ートはコラーゲン線維の主方向に対応する縦方向軸を有するように特徴づけられ る。 上記のように、広面積粘膜下組織シートが、重なり合う粘膜下組織から形成さ れ、粘膜下組織のヘテロラミネートーまたはホモラミネートシートかどちらかを 形成することができる。ヘテロラミネートおよびホモラミネートシートは両方と も本発明の広面積擬似等方性組織グラフト構成物の形成に適している。 第１粘膜下組織シートを第１面上においた後、粘膜下組織シートの別の層を、 第１シートと同じ形成法で第１シートの上に形成する（すなわち複数層の各粘膜 下組織シートは重なり合った粘膜下組織片からなり、その際各シートを構成する 粘膜下組織片の縦方向軸は実質的に互いに平行である）。個々のシートの各々を 他のシート上に重ね、その際上に重なるシートの粘膜下組織片の縦方向軸が多層 構成物を形成する他の最低２枚のシートの粘膜下組織片の縦方向軸と約１８０° ／Ｓ（Ｓ＝粘膜下組織シートの総数）の角度を形成するようにする。すべての数 のシートを重ねたとき、それらの粘膜下組織シートを、圧縮粘膜下組織の少なく とも部分的脱水を許す条件のもとで、第１面と第２面との間で圧縮する。好適実 施態様において、前記面の少なくとも１面は水透過性である。 １実施態様において、複数の粘膜下組織片を互いに重ね合わせた後、それらの 片を１枚の粘膜下組織シートに融合する前に、重なり部分を処理して、閉じ込め られている空気や多量の水を除去する。一般に閉じ込められた気泡および多量の 水は、重なり部分の表面を横切って移動する圧縮力の使用によってしぼり出され る。圧縮力は重なり部分の表面を回転しながら横切るシリンダーの形をとっても よいし、重なり部分を２個以上のローラーの間を通過させることもできる。後者 の場合向かい合うローラーの面の間の距離は粘膜下組織シートの厚さより小さい 。必要ならばその後重なり部分をさらに付加的時間だけ脱水条件下で圧縮して、 複数片を融合し、本発明による１枚の粘膜下組織シートにすることができる。 擬似等方性多層グラフトの余りの部分（すなわちＮまたはＳより少ない層数を 有するグラフト部分）は多層の形成後除去することができる。さらに、粘膜下組 織の隣接片の重なりのパーセントの調節、粘膜下組織層の数の変更、隣接層相互 の角度の変化、圧縮面の水透過性および／または圧縮面の組成物の変化、圧縮面 の形の選択および重なった粘膜下組織の圧縮のためにかける負荷の変更によって 、 多層粘膜下組織材料の機械的特性を医学的用途に必要なものに合わせて作ること ができる。 本発明の擬似粘膜下組織材料は多数の孔を含むようにさらに変えることができ る。最近の実験は、移植多層粘膜下組織グラフト構成物を用いた場合、単一層ま たは２層粘膜下組織グラフトを用いる場合より再構成過程が遅いことを明らかに した。その上、多層粘膜下組織グラフト構成物は軟組織部位（ラットの筋体など ）に移植後最初の１４−２８日間に隣接層間の嚢胞様ポケットに組織液を蓄積さ せる傾向がある。液体ポケットは創傷治癒には不都合である、なぜならばそれら は結合組織の成長を遅らせ、細菌増殖に導く環境を作り、治癒および引張り強度 を高める天然の（自生の）体組織の沈着を阻害するからである。 多層グラフト構成物の孔はそのグラフトのin vivo再建特性を高め、組織グラ フト層の相互の接着を高めることが判明した。孔は粘膜下組織と内因性液体およ び細胞との接触を促進し（移植グラフトの表面積の増加によって）、孔は細胞外 液をグラフト全体を通過せしめる導管としても役立つ。 本発明により、用語“孔”は全グラフト構成物を通って延びる孔を意味する。 しかし、ここで組織に侵入はするが全グラフト構成物を通過しない空洞と定義づ けられる“穴（holes）”を有する構成物も本発明の範囲内である。孔の間隔お よび大きさ、並びに孔が組織に達するまでの深さは所望機械的特性、多孔性、大 きさおよび厚さ（層の数）およびその組織グラフトの医学的用途に関するその他 の要因によって変化する。孔の大きさは０.５ないし３ｍｍ、より好適には０.６ ないし２ｍｍである。１実施態様において孔は互いに２ないし２０ｍｍ、より好 適には３ないし７ｍｍの距離で規則正しく配置される。 粘膜下組織が少なくとも一部水和している間に孔を組織に形成するのが一般的 である。本発明の擬似等方性多層粘膜下組織材料において、多層構成物の形成後 、組織を約１０−２０重量％の水分量（１０−２０％水和）にまで乾燥したとき に孔を形成するのが好ましい。組織が十分乾燥したことは、新鮮組織を秤量し、 その組織を乾燥して新鮮組織の１０−２０％の重量にすることで確認される、ま たは既述のようにインピーダンス測定によって十分な乾燥を確認することができ る。 １実施態様において穴（組織の部分的厚さだけ延びる）または孔は組織グラフ トの両側に形成することができる。その上組織を少し変えて、孔も、組織の部分 的厚さだけ延びる穴も含むようにすることができる。さらに粘膜下組織が多数の 穴を含み、その穴には種々の組があり、或る組は他の形成された穴とは異なる深 さだけ組織内に延びる、というように粘膜下組織を変えることもできる。これは 例えば、粘膜下組織の個々の層を重ねて多層構成物を形成する前に、個々の層に 孔をあけることによって実現する。若干の層には孔があいておらず、または個々 の層の孔が整列していない場合は生成した多層構成物は組織内に種々の深さだけ 延びる穴を有することになる。組織には組織グラフトの表面に一様に分布する孔 をあけ、グラフト構成物の第１平面から第２の反対側平面への液体連絡を可能に する一連の孔を形成するのが好ましい。 １実施態様において、孔は組織グラフト構成物の表面に垂直に形成される、す なわち孔／穴の縦方向軸はグラフト表面となる平面と９０度の角度を形成する。 或いは、孔の軸がグラフトの表面に垂直でないように孔を形成することもできる （すなわち孔／穴を輪郭づける壁に平行な縦方向軸がグラフト表面の平面と９０ 度以外の角度を形成する)。１実施態様によると、孔はグラフト表面に対して４ ５度ないし９０度の範囲の角度で形成される。 多層組織グラフトはほぐれることなく切ることができ、シートを宿主に移植す るためにかかる時間（１時間以上）水に浸した場合でも剥離しない。しかし多層 組織構成物は軟組織部位（ラットの筋体など）に移植後最初の１４−２８日に隣 接層間の嚢胞様ポケットに組織液を蓄積させる傾向がある。本発明の擬似等方性 多層グラフト構成物の穿孔は、液体がその組織から流れ出る導管を提供すること によって、多層構成物の層間の液体蓄積を軽減する。その上それらの孔は層の相 互接着を高める“ステープル”効果を有する。 よって、多層組織グラフトの全厚または部分的厚さの穴をあけると、孔のない 多層シートに比べて下記のような利点が生ずる： １．この材料を通過する液体（組織液も含める）の増加； ２．隣接層間の接着力の増加。 粘膜下組織には熟練せる当業者には公知の種々の器具を用いて孔をあけること ができる。粘膜下組織の総合的構造の一体性が維持される限り、粘膜下組織に孔 をあけるのに用いる方法は重要でない。 好適実施態様においては、粘膜下組織の穿孔は組織の実質的量を除去する結果 にはならない。例えば、尖った固い物体を組織に押し込み、固い物体の挿入中、 組織を取り出すのでなく、組織を横に押しやる。組織に孔をあけるその他の手段 は、弾道学、切断器具、レーザービームまたは酵素的または化学的処理の使用で ある。 １実施態様において、粘膜下組織にはピンまたは固い針を組織内に、または組 織を通して圧迫することによって孔をあける。普通は２０−２３ゲージの固い針 を用いて孔を形成する。この方法では、孔の形成過程において著量の組織が除去 されることはなく、むしろ各層の一部がちぎれ、隣接層に押し込まれてステープ ル効果を生ずる。この“ステープル”効果は、一部の孔はグラフトの１面から形 成し、残りの孔はグラフトの反対側から形成することによってさらに高めること ができる。 図４は、粘膜下組織グラフト構成物の穿孔器具の１実施態様を示す。この器具 は基板（１）、および基板に埋め込まれ、基板表面から外に延びている複数のス テンレス鋼製ピン（２）からなる。基板はエポキシ（Ｅ）およびデルリン（Delr in）（Ｄ）部分からなり、長さ３.２インチ（８.１ｃｍ）、幅１.８５インチ（ ４.７ｃｍ）で、厚さは０.５インチ（１.２７ｃｍ）である。エポキシ及びデル リン各々が長さ３.２インチ（８.１ｃｍ）、幅１.８５インチ（４.７ｃｍ）で、 厚さ０.２５インチ（０.６３５ｃｍ）である。この実施態様によると、ピン（２ ）は互いに実質的に平行で、基板表面とは９０度の角度を形成する。ピン（２） は直径０.０４０インチ（０.１ｃｍ）で、器具の端から０.４以内の縁取りで０. ２６４インチ（０.６７ｃｍ）間隔（隣接ピンの中心から中心まで）に配置され 、基板から０.２５インチ（０.６３５ｃｍ）突き出ている。この器具は合計５０ 本のピンを有する。 例１ 米国特許第４,９０２,５０８号に記載の方法によって、粘膜下組織を脊椎動物 腸組織から作った。粘膜下組織片を温血脊椎動物の腸組織切片から作った；上記 切片は上記腸組織切片の粘膜の少なくとも内腔部分および筋層の両方から剥離し た粘膜下層を含む。腸組織切片を切片の縦方向軸に沿って切り、平らにして置い た。その組織をそれからさらに、一連の、概ね平行した両端を有するいくつかの 片に切り分けた。 複数の粘膜下組織片を１２×１２インチ（３０×３０ｃｍ）の有孔ステンレス 鋼プレート上で、１粘膜下組織片の一部が隣接粘膜下組織片の一部と重なるよう に組織的に並べた。それから第２の１２×１２インチ有孔ステンレス鋼プレート をその粘膜下組織の上に置いた。この実施態様に用いたこれらの有孔ステンレス 鋼プレートは、中心から真っすぐに配列した０.０４５インチ（０.１１ｃｍ）の 孔を有し、各孔は０.０６６インチ（０.１７ｃｍ）離れていた。５０〜１００ポ ンドの重りを第２ステンレス鋼プレート上に置き、組織を室温で２４時間圧縮し た。 例２ 粘膜下組織片を例１に記載のように作った。多数の粘膜下組織片を２枚の有孔 ステンレス鋼プレートの間に、１粘膜下組織片の一部が隣接粘膜下組織片の一部 と重なるように置いた。“プレート−粘膜下組織−プレート”装置を平坦な面上 に置き、水を吸い上げるための吸い取り材料および空気を通すことにできる通気 性毛布で覆った。この装置を真空口を有するナイロン性バッグに入れて密封した 。真空（２８インチＨｇ（７１ｃｍＨｇ）以上）にして真空バッグから空気を引 き抜き、雰囲気圧の低下は粘膜下組織を同時に圧縮、脱水した。２４時間の真空 後、生成したシートは湿っており、非常にフレキシブルであった。粘膜下組織層 の継ぎ目は全く見えなかった、そしてプロトタイプの８枚厚さのシートの強度は 、ボール破裂試験により測定した場合８０ポンドであった。 例３ 粘膜下組織片を例１に記載のようにして作った。粘膜下組織片をメッシュ上に 、１粘膜下組織片の一部が隣接粘膜下組織片の一部と重なるように組織的に並べ た。メッシュが１層の粘膜下組織でおおわれたとき、第２の粘膜下組織層を第１ 粘膜 下組織層の上に、第２層の粘膜下組織片の末端が第１層の粘膜下組織片の末端に 対して或る角度を形成するように置いた。 すべての粘膜下組織片をメッシュ上に置いた後、別のメッシュを粘膜下組織層 の最上部に置き、“メッシュ−粘膜下組織−メッシュ”サンドイッチを負荷をか けて圧縮し、乾燥した。この方法により、単一のグラフト構成物としてメッシュ から剥がされる乾燥した広面積粘膜下組織シートが生成した。 例４ 粘膜下組織の過酢酸による滅菌 粘膜下組織を過酢酸／エタノール溶液に室温で２時間浸した。このとき比２０ ：１以上（過酢酸溶液のミリリットル：粘膜下組織のグラム）を用いた。過酢酸 ／エタノール溶液は４％エタノール、０.１％（容量：容量）過酢酸および水（ 残りの部分）からなる。０.１％過酢酸成分は表１に示される市販の３５％過酢 酸保存溶液を希釈したものである。粘膜下組織は過酢酸溶液に浸している間、回 転器で振動するのが好ましい。２時間後、過酢酸溶液を流し去り、その代わりに 等量のラクテート加リンゲル溶液またはリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）を加え、１ ５分間浸した（振動しながら）。粘膜下組織をラクテート加リンゲルまたはＰＢ Ｓで４回以上洗い、それからさらに１５分間滅菌水ですすいだ。 粘膜下組織のエチレンオキシドによる滅菌 無菌条件を用いて多層構成物を生成した後、その材料を包装し、第２ラウンド の滅菌にかけた（最終的滅菌）。その組織はエチレンオキシド透過性プラスチッ クに包装することができ、熟練せる当業者には公知の方法によってエチレン滅菌 することができる。実質的には包装した材料を華氏１１５度で４時間エチレンオ キシドにさらす。滅菌中、組織は４時間処理のうち最低７５分間は６５％相対湿 度下に置かれた。高湿度は組織のエチレンオキシド取り込みを高める。４時間後 、エチレンオキシド、エチレンクロロヒドリンおよびエチレングリコールを窒素 および空気でさっと流し去る。 例５ 圧縮ケージおよびＭＴＳ引張り試験機によるボール破裂強度試験 多層粘膜下組織グラフトの強度を材料試験装置（ＭＴＳ）引張り試験機を使用 して測定した。多層組織構成物を四側型枠クランプ（試料クランプ）内に固定し 、組織構成物全体の負荷分布が均一になるようにする。鋼鉄ボールのてっぺんが 試験試料の平面の直下に位置するように、最初の固定レベルを決める。試料クラ ンプのハンドルをその最も高い位置に上げて、クランプのジョーが試験試料を受 け入れることができるようにする。粘膜下組織構成物は試料クランプに合うよう に切られる；クランプの開口は１と３／４インチ（４.４ｃｍ）の直径を有する 。十分な型締め領域を確保するために、試験試料の周囲には１／２インチ（１. ２７ｃｍ）の余分の材料分がなければならない。粘膜下組織はクランプのジョー に置かれ、固定される。締め力はクランプの最上部にあるサムホィール（thumwh eel）手段によって調節される。 その後、試験試料にかかる力をコントロールおよび測定するために引張り試験 機ソフトウェアーを用いて、クランプで締めた粘膜下組織を調節した速度で金属 ボール上に押し付ける。試料の破損がおきるまで力を増強する。破損とは、“試 料平面の目に見える非自然的不連続を通してボールが見えたときの最大負荷”と 定義される。破損する前に最上部固定位置に達した場合は、ソフトウェアーリミ ットが働き、試験を中止させる。マイクロプロフィラー４５８.０１にあらわれ るピーク負荷値を記録し、試料を取り外す。 例６ 多層組織グラフト構成物を次のように作った： 十分量の粘膜下組織を脊椎動物の腸から作り、切り、平らにして、例４に記載 したように過酢酸で殺菌する（１０ｃｍ×１５ｃｍのデバイスには約７０ｇの粘 膜下組織が必要である）。組織を過酢酸で滅菌した後は外科用手袋、フェースマ スク、およびキャップを装着し、有機物質および空気中の粒子からの汚染を最小 にしなければならない。 粘膜下組織片を第１の有孔ステンレス鋼プレート上に所望方向で置く。使用す るステンレス鋼プレートは、真っすぐな中心について周囲が０.０４５インチの 孔が０.０６６インチ間隔であいている有孔ステンレス鋼プレートである。粘膜 下組織層の形成後、その粘膜下組織を平らに均して気泡を除く。そのデバイスが 完成するまで他の層を重ねる。余分の材料は鋏で多層構造から取り去る。多層粘 膜下組織の重量を記録する。第２のステンレス鋼プレート（真っすぐな中心を有 する周囲０.０４５インチの孔が０.０６６インチ間隔であいている）をその多層 構成物の最上部に置く。 多層構成物は任意に“ピンチロール”して、捕捉空気および水を除去すること ができる。材料のピンチロールのためには、粘膜下組織を取り巻く２枚の有孔金 属プレートを２枚のポリプロピレンシート（Kimberly Clark、クラス１００“ク リューワイプ（Crew Wipe）”）の間に置き、全装置を１°×１°より大きいナ イロン包装フィルム（Zip Vac，アーバーン ＷＡ）の２層間に置く。重みをつ けたシリンダーをその装置上に何回も（最低３回）回転させる。 多層粘膜下組織グラフト構成物に孔をあけるためには、装置を部分的に剥がし て、組織グラフトの最上部表面を露出させ、ナイロン包装フィルムの１枚を粘膜 下組織の最上部層上に置く。多層粘膜下組織グラフト構成物をそれからスチロフ オーム作業面上で反転し、第１ステンレス鋼プレートを注意深く除去する。それ から露出した粘膜下組織面を１枚のナイロン包装フィルムで覆う。組織グラフト 構成物にその後孔をあけ、それからてっぺんのナイロン包装フィルムを除去する 。多層粘膜下組織グラフト構成物を再び反転し、有孔ステンレス鋼プレート上に 元通り置く。ナイロン包装フィルムを粘膜下組織最上面から除去し、第２の有孔 ステンレス鋼プレートを多層粘膜下組織グラフト構成物上に置く。 多層粘膜下組織グラフト構成物をそれから脱水条件下で下記のようにして圧縮 する： 有孔プレートの大きさより大きい１層の吸い取り材料（NuGauze）を台（また はその他の平滑な表面）上に置く。間に多層粘膜下組織グラフト構成物をはさん で含むステンレス鋼プレートを吸い取り材料の上に置く。もう１枚の吸い取り材 料（第１吸い取り材料シートと大体同じ大きさ）をステンレス鋼プレート上に置 く。通気性毛布（Zip Vac、アンバーン、ＷＡ）を吸い取り材料の上に置く。通 気性毛布はそれが覆う物より少し大きいのが好ましい。 オプション的には電極を粘膜下組織と接触させて置き、組織のインピーダンス を測定することができる。普通は、こわばってはいるがフレキシブルな材料を生 成するのに十分な時間、組織を圧縮する。組織を流れる電流のインピーダンスの 増加によって組織の十分な脱水が示される。インピーダンスが１００〜２００オ ーム増加したとき、組織は十分に脱水され、圧力を除去することができる。 クロメートテープのへり（border）を台上の装置および真空圧にすべき領域の 周りに置く。テープから裏打ちを除去し、すでにノズル口をもっている１枚のナ イロン包装フィルムを、ダイ クロメートテープによって取り囲んだ領域の上に 置き（図３ａおよび３ｂ参照）、テープにくっつける。加熱毛布（もし使用する 場合）にスイッチを入れ、真空ポンプにスイッチを入れる。バッグはしわがある かどうか調べ（見つけた場合はそれらを平らにする）、クロメートテープとナイ ロン包装フィルムとの間の封止が不十分ではないかどうかを検査する（もし不十 分な封止が見つかった場合は直す）。２５ないし３０ｐｓｉvac範囲のレベルに なるまで真空引きしなければならない。真空下で所望水和レベルに達した後（約 ２４時間）、バッグのシールをテープ部分で壊し、真空ポンプを止め、単一の有 孔多層粘膜下組織グラフト構成物を取り出す。重なりの量が完全にならなかった 組織グラフト部分を鋏で切り取ることができる。 例７ 粘膜下組織グラフト構成物は、単一多層構成物の形成後に次のようにして孔を あけることもできる。多層構成物を例３によって形成する。メッシュ／粘膜下組 織サンドイッチを乾燥しつつある装置から取り出し、その組織に孔をあける。グ ラフトに孔をあけるにはワイヤーメッシュ間に釘を挿入し、その釘をグラフト表 面の多数の点において組織に押し込む。有孔多層粘膜下組織をその後四角（４ １／２×４ １／２インチ（１１.４×１１.４ｃｍ））に切り、確認の目的でマ ークをつける。 例８ 有孔擬似等性ラミネート構成物を次のようにして作った：粘膜下組織片をワイ ヤーメッシュ上に４層に配列した。第１層はメッシュ上に直接置いた。残りの３ 層は第１層の上に第１層に対してそれぞれ４５°、９０°および１３５°の角度 で置いた（図２参照）。第２メッシュを粘膜下組織の最上部に置き、その組織を メッシュ間にはさみ、乾燥棚に一緒にクランプした。棚の前方にファンを置き、 スイッチをオンにした。メッシュをガイドとして用い、組織にチェッカー盤のよ うな模様に穴をあけた。（すなわち組織に孔をあけるためにメッシュのすべての 交互空間を利用した）。そのため次のような模様があらわれた： 組織の穿孔は完成する前に中止した、というのは粘膜下組織が壊れてきたから である。そこで高所のファンで粘膜下組織を２５分間乾燥した。それから組織に 残りの孔を最初の模様のように作った。 そのシートを１晩乾燥させ、取り外し、四角に切り、確認の標識をつけた。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年１月３１日 【補正内容】 請求の範囲 １．実質的に、脱水条件下で圧縮されることによって互いに融合した複数の腸 粘膜下組織片からなる単一の多層組織グラフト構成物であって、各片は温血脊椎 動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離され、各片は第１および第２の平 坦な表面を有し、 前記構成物は平面を有するように形成され、その平面は前記構成物の形成のた めに用いた個々の片のどの平面の表面積より大きい表面積を有する組織グラフト 構成物。 ２．腸粘膜下組織片が実質的に粘膜の緻密層、筋粘膜及び粘膜下層からなる請 求の範囲１に記載の組織グラフト構成物。 ３．腸粘膜下組織片がわずか２０％以下の歪みを有するように条件づけられる 請求の範囲１に記載の組織グラフト構成物。 ４．単一ヘテロ層状のグラフト構成物として形成される請求の範囲１に記載の グラフト構成物。 ５．単一のホモ層状のグラフト構成物として形成される請求の範囲１に記載の グラフト構成物。 ６．実質的に、脱水条件下における圧縮によって互いに融合した腸粘膜下組織 複数片からなる単一多層非平面形組織グラフト構成物であって、 各片は温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離され、各片は第 １および第２の平坦な表面を有し、 前記構成物は非平面を有するように形成され、その非平面は前記構成物の形成 のために用いた個々の片のどの平坦な表面の表面積より大きい表面積を有する組 織グラフト構成物。 ７．温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した複数の粘膜下 組織片から単一ホモ層状の組織グラフト構成物を形成する方法であって、前記構 成物は前記構成物を形成するために用いた個々の片のどれよりも大きい表面積を 有し、前記方法は 粘膜下組織片を第１面上に置くことによって第１粘膜下組織層を形成し、その 際第１層の粘膜下組織片は互いに大体に重なることなく互いに隣接、および接触 されているステップと； 第１粘膜下組織層を粘膜下組織片の第２層と重ね合わせ、その際第２層の粘膜 下組織片は互いに大体に重なることなく互いに隣接し、接触し合っており、第２ 層の粘膜下組織片群を第１層の粘膜下組織片群に関してオフセットし、よって第 １層の個々の粘膜下組織片の接触する末端は第２層の粘膜下組織片によって架橋 されるようにするステップと； 粘膜下組織片の重なり部分を、第１面および第２面の間でその粘膜下組織が圧 縮されて少なくとも部分的脱水を許す条件下で、圧縮するステップ、とを含んで なる方法。 ８．粘膜下組織の圧縮中にその粘膜下組織を真空にさらす段階をさらに含む請 求の範囲７に記載の方法。 ９．適用した真空が前記２つの面と協力して粘膜下組織を圧縮する請求の範囲 ７に記載の方法。 １０．粘膜下組織の圧縮中、その粘膜下組織に熱をかける段階をさらに含む請 求の範囲７に記載の方法。 １１．前記面の少なくとも１つが水透過性である請求の範囲７に記載の方法。 １２．前記２つの面が相補的非平面であって、その２面間の圧縮がこれらの面 に合う形の組織グラフト構成物を生成する請求の範囲７に記載の方法。 １３．温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した最低３枚の 腸粘膜下組織片を含む単一擬似等方性多層組織グラフト構成物であって、これら の片は脱水条件下における圧縮によって互いに融合し、各片は片内コラーゲン線 維の圧倒的方向に対応する縦方向軸を有し、各片の縦方向軸は前記構成物を形成 する２枚の他の片の縦方向軸と約１８０度／Ｎの角度を形成し、ここでＮ＝粘膜 下組織片の総数である組織グラフト構成物。 １４．腸粘膜下組織が実質的に粘膜の緻密層、筋粘膜及び粘膜下層からなる請 求の範囲１３に記載の組織グラフト構成物。 １５．腸粘膜下組織がわずか２０％以下の歪みを有するように条件づけられる 請求の範囲１３に記載の組織グラフト構成物。 １６．擬似等方性を有する多層組織グラフト構成物の調製方法であって、前記 構成物は温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した最低３枚の 腸粘膜下組織片から形成され、各腸粘膜下組織片は粘膜下組織片内コラーゲン線 維の主方向に対応する縦方向軸を有し、前記方法は 前記第１片に最低２枚の追加的な粘膜下組織片を、各個々の粘膜下組織片の縦 方向軸が２枚の他の重ね合わせた粘膜下組織片の縦方向軸と約１８０度／Ｎの角 度を形成するように重ね、その際Ｎは粘膜下組織片の総数であり； 粘膜下組織片の少なくとも重なり部分を２面間で、圧縮粘膜下組織の少なくと も部分的脱水を許す条件下で圧縮する諸段階を含んでなる方法。 １７．面の少なくとも１つが水透過性である請求の範囲１６に記載の方法。 １８．粘膜下組織の圧縮中にその粘膜下組織を真空下に置く段階をさらに含む 請求の範囲１６に記載の方法。 １９．粘膜下組織の圧縮中にその粘膜下組織に熱をかける段階をさらに含む請 求の範囲１６に記載の方法。 ２０．２面が相補的非平面であって、その２面間の圧縮が、これらの面に従う 形をもった組織グラフト構成物を形成する請求の範囲１６に記載の方法。 ２１．擬似等方性を有する多層組織グラフト構成物であって、前記構成物は複 数の粘膜下組織層からなり、各層は温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両 方から剥離した複数の腸粘膜下組織片からなり、各片は前記片内コラーゲン線維 の主方向に対応する縦方向軸を有し、 各それぞれの層の片の縦方向軸は実質的に互いに平行であり、他の２層を形成 する片の縦方向軸とは約１８０度／Ｌの角度を形成し、ここでＬは層の総数であ り、これらの片を脱水条件下で圧縮することによって前記片は互いに融合する多 層組織グラフト構成物。 ２２．単一のヘテロ層状のグラフト構成物として形成される請求の範囲２１に 記載のグラフト構成物。 ２３．単一のホモ層状のグラフト構成物として形成される請求の範囲２１に記 載のグラフト構成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 パテル，ウメッシュ，エイチ. アメリカ合衆国・インディアナ州 47906・ウェスト ラファイエット・ウェ イク ロビン ドライブ 2215 (72)発明者 ハイルズ，マイケル，シー. アメリカ合衆国・インディアナ州 46208・インディアナポリス・コロン コ ート 3817 (72)発明者 ホィットソン，ブライアン，エー. アメリカ合衆国・インディアナ州 47906・ウェスト ラファイエット・ノー ス 50 ウェスト 7120 (72)発明者 チェン，ボイル アメリカ合衆国・コロラド州 80631・グ リーレイ・ウェスト エイティーンス ス トリート ロード 2509 (72)発明者 バディラック，ステファン，エフ. アメリカ合衆国・インディアナ州 47906・ウェスト ラファイエット・ノッ ティンガム プレイス 2610 (72)発明者 コキニ，クロッド アメリカ合衆国・インディアナ州 47905・ラファイエット・ドウ パス レ ーン 4814

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．複数の腸粘膜下組織片から形成される単一のホモ層状の組織グラフト構成 物であって、前記腸粘膜下組織片は温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両 方から剥離され、前記構成物は実質的に粘膜下組織からなり、ここで前記構成物 は前記構成物の形成のために用いた個々の片のどれよりも大きい表面積を有する 前記グラフト構成物。 ２．腸粘膜下組織片が実質的に粘膜の緻密層、筋粘膜及び粘膜下層からなる請 求の範囲１に記載の組織グラフト構成物。 ３．腸粘膜下組織片がわずか２０％以下の歪みを有するように条件づけられる 請求の範囲１に記載の組織グラフト構成物。 ４．温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した複数の粘膜下 組織片から単一ホモ層状の組織グラフト構成物を形成する方法であって、前記構 成物は前記構成物を形成するために用いた個々の片のどれよりも大きい表面積を 有し、前記方法は 粘膜下組織片を第１面上に置くことによって第１粘膜下組織層を形成し、その 際第１層の粘膜下組織片は互いに大体に重なることなく互いに隣接、および接触 されているステップと； 第１粘膜下組織層を粘膜下組織片の第２層と重ね合わせ、その際第２層の粘膜 下組織片は互いに大体に重なることなく互いに隣接し、接触し合っており、第２ 層の粘膜下組織片群を第１層の粘膜下組織片群に関してオフセットし、よって第 １層の個々の粘膜下組織片の接触する末端は第２層の粘膜下組織片によって架橋 されるようにするステップと； 粘膜下組織片の重なり部分を、第１面および第２面の間でその粘膜下組織が圧 縮されて少なくとも部分的脱水を許す条件下で、圧縮するステップ、とを含んで なる方法。 ５．粘膜下組織の圧縮中にその粘膜下組織を真空にさらす段階をさらに含む請 求の範囲４に記載の方法。 ６．適用した真空が前記２つの面と協力して粘膜下組織を圧縮する請求の範囲 ５に記載の方法。 ７．粘膜下組織の圧縮中、その粘膜下組織に熱をかける段階をさらに含む請求 の範囲４に記載の方法。 ８．前記面の少なくとも１つが水透過性である請求の範囲４に記載の方法。 ９．前記２つの面が相補的非平面であって、その２面間の圧縮がこれらの面に 合う形の組織グラフト構成物を生成する請求の範囲４に記載の方法。 １０．温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した腸粘膜下組 織からなり、擬似等方性を有するように形成された単一のホモ層状の組織グラフ ト構成物。 １１．腸粘膜下組織が実質的に粘膜の緻密層、筋粘膜及び粘膜下層からなる請 求の範囲１０に記載の組織グラフト構成物。 １２．腸粘膜下組織がわずか２０％以下の歪みを有するように条件づけられる 請求の範囲１０に記載の組織グラフト構成物。 １３．擬似等方性を有する多層組織グラフト構成物の製法であって、前記構成 物は温血脊椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した最低３枚の腸粘 膜下組織片から形成され、各腸粘膜下組織片が粘膜下組織片内コラーゲン線維の 主方向に対応する縦方向軸を有し、前記方法が 前記第１の片にその他の最低２枚の粘膜下組織片を重ね、その際各個々の粘膜 下組織片の縦方向軸が、重なっている最低２枚の他の粘膜下組織片の縦方向軸と 約１８０度／Ｎの角度を形成するようにし、ここでＮは粘膜下組織片の総数であ り；粘膜下組織片の少なくとも重なり合った部分を、２面間で、圧縮される粘膜 下組織の少なくとも部分的脱水を許す条件のもとで圧縮する諸段階を含んでなる 方法。 １４．面の少なくとも１つが水透過性である請求の範囲１３に記載の方法。 １５．擬似等方性を有する多層組織グラフト構成物の製法であって、前記構成 物は複数の腸粘膜下組織シートから形成され、その際前記シートの各々は温血脊 椎動物の粘膜の内腔部分及び筋層の両方から剥離した、重なり合う粘膜下組織片 からなり、前記片の各々は粘膜下組織片のコラーゲン線維の主方向に対応する縦 方向軸を有し、各シートの粘膜下組織片の縦方向軸は互いに実質的に平行してお り、前記方法は 前記第１の粘膜下組織シート上に最低２枚の付加的粘膜下組織シートを重ね、 その際１シートの粘膜下組織片の縦方向軸が最低２枚の重なる粘膜下組織シート の粘膜下組織片の縦方向軸と約１８０度／Ｓの角度を形成し、ここでＳは粘膜下 組織シートの総数であり； これらの粘膜下組織シートを２面間で、圧縮粘膜下組織の少なくとも部分的脱 水を許す条件のもとで圧縮する諸段階を含んでなる方法。 １６．粘膜下組織の圧縮中、粘膜下組織を真空下に置く段階をさらに含む請求 の範囲１５に記載の方法。 １７．適用した真空が２つの面と協力して粘膜下組織を圧縮する請求の範囲１ ６に記載の方法。 １８．粘膜下組織の圧縮中、粘膜下組織に熱をかける段階をさらに含む請求の 範囲１５に記載の方法。 １９．面の最低１つが水透過性である請求の範囲１５に記載の方法。 ２０．２つの面が相補的非平面であって、その２面間の圧縮が、これらの面に 従う形をもった組織グラフト構成物を形成する請求の範囲１５に記載の方法。 ２１．擬似等方性を有する多層組織グラフト構成物であって、前記構成物は複 数の腸粘膜下組織シートから形成され、前記シートの各々は温血脊椎動物の粘膜 の内腔部分及び筋層の両方から剥離した、重なり合った粘膜下組織片からなり、 前記片の各々は粘膜下組織片のコラーゲン線維の主方向に対応する縦方向軸を有 し、各それぞれのシートの粘膜下組織片の縦方向軸は実質的に互いに平行である 多層組織グラフト構成物。 ２２．重なり合う粘膜下組織片が、隣接粘膜下組織片の一部と重なった部分を 有する各粘膜下組織片からなる請求の範囲２１に記載の多層組織グラフト構成物 。 ２３．重なり合う粘膜下組織片が、第２層の粘膜下組織片で覆われる第１層の 粘膜下組織片を構成し、その際各それぞれの層の粘膜下組織片は隣接粘膜下組織 片と明白には重ならず、互いに隣接し、互いに接触して置かれ、前記第２層の粘 膜下組織片は前記第１層の粘膜下組織片を埋め合わせるように置かれ、そのため 第１層の個々の粘膜下組織片の接触する末端は第２層の粘膜下組織片によって架 橋される請求の範囲２１に記載の多層組織グラフト構成物。 ２４．粘膜下組織片が実質的に粘膜の緻密層、筋粘膜及び粘膜下層からなる請 求の範囲２１に記載のグラフト。 ２５．腸粘膜下組織片がわずか２０％以下の歪みを有するように条件づけられ る請求の範囲２１に記載のグラフト。 ２６．腸組織切片が粘膜下層および粘膜の基底組織を含んでなる請求の範囲２ １に記載の組織グラフト材料。