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JPH0780041A - 細胞保存バッグシステム - Google Patents

細胞保存バッグシステム

Info

Publication number
JPH0780041A
JPH0780041A JP5256467A JP25646793A JPH0780041A JP H0780041 A JPH0780041 A JP H0780041A JP 5256467 A JP5256467 A JP 5256467A JP 25646793 A JP25646793 A JP 25646793A JP H0780041 A JPH0780041 A JP H0780041A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
bag
tube
liquid
storage
blood
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP5256467A
Other languages
English (en)
Inventor
Norio Hosono
紀夫 細野
Noboru Ishida
登 石田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Terumo Corp
Original Assignee
Terumo Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Terumo Corp filed Critical Terumo Corp
Priority to JP5256467A priority Critical patent/JPH0780041A/ja
Priority to EP94114773A priority patent/EP0643975A1/en
Publication of JPH0780041A publication Critical patent/JPH0780041A/ja
Priority to US08/900,916 priority patent/US6068970A/en
Pending legal-status Critical Current

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    • A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
    • A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
    • A61M1/3687—Chemical treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61M1/02—Blood transfusion apparatus
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 第１、第２の接続チューブ１１、１２を有
し、血液を収容する単体の血液バッグ２と、第１、第２
の接続チューブ１１、１２にそれぞれ接続される、給液
チューブ１３と、廃液チューブ１４を有する給液バッグ
２と廃液バッグ５とを有し、第１、第２の接続チューブ
１１、１２と他のチューブは、チューブ接続装置４によ
って無菌的に接続され、添加液の交換を、多連バッグ以
外の閉鎖系で可能とした。 【効果】 チューブの接続が無菌的に、かつ容易に可能
となったので、血液バッグ２を単独で取り扱うことがで
き、作業上のトラブルや間違いを未然に防止できる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞保存システムに関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】同種血輸血による感染症（肝炎、ＡＩＤ
Ｓ等）や免疫学的副作用を防ぐため、近年、自己血輸血
が注目されている。この自己血輸血のうち、貯血式自己
血輸血は、手術時に輸血が必要とされる患者に対し、手
術前にその患者（供血者）自身から採血してその血液を
血液バッグに収納し、この血液バッグを保管容器に入れ
て保存しておき、手術の際に、保管容器からその患者の
血液が入った血液バッグを取り出し、その血液を輸血す
るものである。
【０００３】この場合、十分な輸血量を確保しなければ
ならず、そのための方法として、血液バッグ内の血液
を冷凍保存する方法、液状のまま血液バッグ内の血液
を保存する方法、その一例として、蛙飛び方式、スイッ
チバッグ方式などの短期間に比較的大量の血液を採血す
る方法などがあった。
【０００４】前記の方法では、冷蔵施設の維持管理や
凍結および解凍の手間等に膨大な費用がかかり適当でな
く、前記スイッチバッグ方式等の方法では、患者に対す
る身体的負担がかかりすぎ、またこれまで存在するバッ
グを使用し、これを行う場合、煩雑さが避けられない。
【０００５】前記の方法については、保存期間が短
く、保存期間内に十分な血液を貯めることができないと
いった欠点があったが、近年保存液を交換して保存期間
が延長できる方式が効果を上げている。この方式は、多
連バッグ（マルチプルバッグ）の内の１つに保存する血
液を収納し、他のバッグを赤血球のための保存液を収納
するバッグと、廃液を収納するバッグとに分け、保存の
途中においてグルコース等の栄養源の補給と、乳酸等の
老廃物の除去を閉鎖系（クローズドシステム）で逐次実
施するものである。この方法は、前記の方法やスイッ
チバッグ方式等の方法に比較して、大幅に血液保存期間
の延長が図られ、このため採血の間隔を長くすることが
できることから、患者に対する負担が軽減されるため、
将来的に有望視されている。
【０００６】しかし、上記多連バッグを用いたものは、
保存血液と共に、保存液や廃液を血液と一緒に保管しな
ければならず、保管場所が取られるといった欠点があ
る。また、血液バッグ内の老廃物の溜った保存液を廃液
として分離するには、遠心分離を行なわなければならな
いが、通常の遠心分離器の遠心カップでは、５〜６連バ
ッグを一度に収納できる程度に大きなものはない。
【０００７】持ち運ぶ際は、保存バッグに必ず繋がって
いる他の多数のバッグを同時に運ぶ必要があり、運ぶ途
中でバッグを落としたり、バッグを繋げているチューブ
を引っ掛けるといったトラブルが生じやすい。さらに保
存液の注入や保管、その他の操作において、その度に必
要でないバッグが付属しているため、操作が煩雑となっ
てしまい、時間がかかったり操作ミスが生じやすくな
る。
【０００８】一方、一般に細胞を培養する方法としてバ
ッグ内に収納された液体培地に、細胞を分散させて培養
するものがあり、このような培養方法においても定期的
に培地を交換する必要がある。従来、上記培地を交換す
る場合には、クリーンベンチ等の設備を使用し、この中
で、チューブの切断する部分をアルコール消毒し、火炎
滅菌を施した鋏またはナイフでチューブを切断し、バッ
グを軽く押して使用済みの培地をビーカー等に排出す
る。
【０００９】新鮮な培地の入っているバッグの供給用の
チューブの先に設けられている針を、前記細胞を収納し
ているバッグの導入部に穿刺して、培地をバッグ内へ導
入する。
【００１０】このような交換方法では、チューブの消毒
やナイフを殺菌する時、或は培地の排出の際など、細菌
による汚染を防止するために細心の注意を払って行う必
要があり、作業効率が悪く、また無菌状態を十分に維持
できない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、無菌
状態を維持しつつ、取扱を安全かつ容易に行うことがで
き、さらに低コスト化を図ることのできる細胞保存バッ
グシステムを提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】このような目的は、以下
の本発明により達成される。即ち、
【００１３】（１） 細胞を収納する保存バッグと、一
端が前記保存バッグ内に連通し、他端が閉塞されている
少なくとも１つの接続チューブと、添加液を収納する貯
留容器と、一端が前記貯留容器内に連通し、他端が閉塞
されている給液チューブと、廃液容器と、一端が前記廃
液容器内に連通し、他端が閉塞されている廃液チューブ
とを有し、チューブ接続装置を用いて前記接続チューブ
と前記給液チューブまたは前記廃液チューブとを無菌状
態に接続し、前記保存バッグへの前記添加液または前記
保存バッグからの廃液の回収を行うことを特徴とする細
胞保存バッグシステム。
【００１４】（２） 前記チューブ接続装置は、チュー
ブを加熱、溶融して切断する加熱切断手段と、チューブ
の切り口を突き合わせて接続する移動接続手段とを有す
る上記（１）に記載の細胞保存バッグシステム。
【００１５】（３） 前記各チューブは同一または同種
の熱可塑性樹脂で構成され、前記移動接続手段は、平行
に配置されたチューブを同時に保持する一対のホルダで
あり、前記加熱切断手段は、前記一対のホルダの間に交
換可能に配置され、チューブを加熱溶融して切断するウ
エハーである上記（２）に記載の細胞保存バッグシステ
ム。
【００１６】（４） 前記貯留容器は、給液バッグであ
り、前記廃液容器は廃液バッグである上記（１）ないし
（３）のいずれかに記載の細胞保存バッグシステム。
【００１７】（５） 前記保存バッグは、添加液を導入
する第１の接続チューブと、廃液を排出する第２の接続
チューブとを有し、前記チューブ接続装置により、前記
第１の接続チューブと前記給液チューブとを接続し、ま
たは前記廃液チューブと前記第２の接続チューブとを接
続する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の細胞
保存バッグシステム。
【００１８】（６） 前記保存バッグは血液を収納する
血液バッグであり、前記添加液は血液保存液である上記
（１）ないし（５）のいずれかに記載の細胞保存バッグ
システム。
【００１９】（７） 前記添加液は、液体培地である上
記（１）ないし（５）のいずれかに記載の細胞保存バッ
グシステム。
【００２０】
【実施例】以下本発明の好適実施例について、添付図面
に基づいて詳細に説明する。図１は、本発明の細胞保存
バッグシステム１の全体構成を示す模式図である。
【００２１】まず、本発明を血液保存システムとして用
いた場合について説明する。本発明の細胞保存バッグシ
ステム１は、保存バッグ２と、添加液としての血液保存
液を収納している貯留容器である給液バッグ３と、保存
バッグ２より排出された上澄を収納する廃液容器である
廃液バッグ５と、これらの各バッグに接続されたチュー
ブとを有し、チューブ接続装置４により、所定のチュー
ブを無菌状態を維持したまま接続するものである。
【００２２】図２に示されているように、保存バッグ２
は、樹脂製の可撓性を有するシート材を重ね、その周縁
のシール部２１において、融着（熱融着、高周波融着
等）または接着し、袋状としたものである。シール部２
１で囲まれる内側の部分に、採血された血液またはその
血液から遠心分離により得られた濃厚赤血球等が収納さ
れる収納部２２が形成されている。
【００２３】上記シート材としては、適度な気体透過性
を有し、赤血球、血小板等の細胞の保存に適するもの
で、高圧蒸気滅菌に際しての耐熱性に優れ、遠心分離操
作や振盪保存に耐えうる柔軟性を有しているものが好ま
しい。
【００２４】そのようなシート材の構成材料としては、
例えば軟質ポリ塩化ビニルまたはポリエチレン、ポリプ
ロピレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体などのポリオ
レフィンなどが挙げられる。特に軟質ポリ塩化ビニル
は、高圧蒸気滅菌に耐え得る耐熱性と、遠心分離操作や
振盪保存に耐え得る柔軟性とを有しており、また、バッ
グへの加工、製造が容易で、材料コストも安いため好ま
しい。
【００２５】以上のように構成されている保存バッグ２
の上部には、図２に示されているように、ピールタブを
備えた２つの排出口２３、２３が設けられており、その
間には、導入口２４と廃液口２５が設けられている。導
入口２４には第１の接続チューブ１１の一端が接続さ
れ、廃液口２５には第２の接続チューブ１２が接続さ
れ、各チューブ１１、１２の他端は、例えば融着により
閉塞されている。
【００２６】保存バッグ２の収納部２２内には、遠心分
離等の手段によって分離された濃厚赤血球等が収納され
る。また、図３中右側の給液バッグ３は、軟質ポリ塩化
ビニル等で構成されるシート材を重ね、その周縁のシー
ル部３１において、融着（例えば、熱融着、超音波融着
など）し、袋状としたものである。
【００２７】シール部３１で囲まれる内側の部分に、前
記濃厚赤血球等を保存するための保存液が収納される収
納部３２が形成されている。この保存液が添加液として
保存バッグ２へ添加される。給液バッグ３の上部には、
排出口３３が形成されている。該排出口３３には、給液
チューブ１３の一端が接続されており、その他端は閉塞
されている。
【００２８】また、図３中左側の廃液バッグ５は、軟質
ポリ塩化ビニル等で構成されるシート材を重ね、その周
縁のシール部５１において、融着（例えば、熱融着、超
音波融着など）し、袋状としたものである。
【００２９】シール部５１で囲まれる内側の部分に、前
記保存バッグ２からの廃液を収納するための収納部５２
が形成されている。廃液バッグ５の上部には、導入口５
３が形成されている。該導入口５３には、廃液チューブ
１４の一端が接続されており、その他端は閉塞されてい
る。
【００３０】上記各チューブ１１、１２、１３、１４は
熱可塑性樹脂により構成され、溶融して接合可能なもの
となっており、構成材料としては、例えばポリ塩化ビニ
ルであるのが好ましい。
【００３１】以上のように構成された保存バッグ２と給
液バッグ３との間の液流通、および保存バッグ２と廃液
バッグ５との間の液流通は、それぞれ第１の接続チュー
ブ１１と給液チューブ１３とを、または第２の接続チュ
ーブ１２と廃液チューブ１４とをチューブ接続装置４に
よって、液流通可能な状態に接続することによって可能
となる。
【００３２】次に、チューブ接続装置４の構成例につい
て説明する。図４はチューブ接続装置４の構成例を示す
斜視図、図５〜図７は該チューブ接続装置４による第１
の接続チューブ１１および給液チューブ１３の接続工程
を示す斜視図である。これらの図に示すように、チュー
ブ接続装置４は、移動接続手段である一対のホルダー４
１、４２の間に、加熱切断手段であるウエハー４０を交
換可能に配置した構造であり、ホルダー４１、４２の間
に、例えばポリ塩化ビニル製の２本のチューブ１１、１
３を並べて架設し、加熱されたウエハー４０にてこれら
を溶融、切断し、片方のホルダー４１を移動させ、ウエ
ハー４０を取り除いてチューブ１１および１３を融着す
るものである。
【００３３】さらに詳述すると、ホルダー４１、４２
は、それぞれ図４中上下に分割されたホルダー片４１
１、４１２および４２１、４２２から構成されており、
これらのホルダー片４１１、４１２および４２１、４２
２は、それぞれ、支点４４により回動可能となってい
る。
【００３４】また、各ホルダー片４１１、４１２および
４２１、４２２の対向面（内面）には、断面形状が半円
形の溝４５、４６がそれぞれ２つ形成され、ホルダー片
４１１、４１２および４２１、４２２を重ね合わせた状
態で、円形断面のチューブ保持部４７、４８が形成され
るようになっている。
【００３５】なお、図示されていないが、ホルダー４１
および４２のウエハー４０側の端部には、それぞれ、ホ
ルダー片４１１、４１２および４２１、４２２を閉じた
ときにチューブ１１および１３を圧迫してその内部を閉
塞するようなチューブ挟持部が設けられていてもよい。
【００３６】次に、チューブ接続装置４の使用方法につ
いて説明する。図５に示すように、チューブ１１および
１３を、それらの閉塞端１１ａおよび１３ａが相互に逆
方向に向くように一定長さ平行に重ねて、２つのホルダ
ー４１、４２の溝４５、４６内に設置し、ホルダー片４
１１、４１２および４２１、４２２を閉じて、２本のチ
ューブ１１および１３をチューブ保持部４７、４８に挟
持、固定する。
【００３７】次に、図示しない通電手段により、ウエハ
ー４０の端子４０１および４０２間に例えば１５〜２４
V の電圧を印加してウエハー４０内の抵抗体に通電す
る。これにより、抵抗体は発熱し、ウエハー４０は、チ
ューブ１１および１３の溶融温度以上の温度（例えば２
６０〜３２０℃程度）に加熱される。
【００３８】この状態で、図６に示すように、ウエハー
４０を図中上方に移動すると、ウエハー４０の熱によっ
てチューブ１１および１３は溶融、切断される。このと
き、チューブ１１および１３の切断端部は、溶融または
軟化した状態で高温であり、かつ外部と連通しないた
め、無菌状態が維持される。
【００３９】次に、図７に示すように、チューブ１１お
よび１３の切断端部の溶融状態を維持しつつ、一方のホ
ルダー４１をチューブ１１、１３の配列方向に移動し、
切断されたチューブ１１および１３の切口同士が対向す
る位置で停止、固定する。
【００４０】次に、図８に示すように、ウエハー４０を
図中下方に引き抜き、必要に応じ、一方のホルダー４１
を他方のホルダー４２の方向へ向けて押し付ける。これ
により、溶融したチューブ１１および１３の切口同士が
融着され、両チューブ１１および１３の接続がなされ
る。
【００４１】このようなウエハー４０による両チューブ
１１および１３の切断から接続までの一連の動作におい
て、チューブ１１および１３の切口およびその周辺部
は、溶融または軟化した状態で高温であり、また、切口
同士が密着、接合されるまでは高温のウエハー４０の表
面に密着しており、外部と連通しないため、無菌状態が
ほぼ完全に維持される。
【００４２】チューブ１１および１３の接続後、切断さ
れた閉塞端１１ａ、１３ａを含むチューブ片１１’およ
び１３’は廃棄される。また、次回に他のチューブの接
続を行う際には、使用済のウエハー４０を新たなウエハ
ーに交換し、使用済のウエハー４０は廃棄される。すな
わち、本発明のウエハー４０は、使い捨て（シングルユ
ース）であるのが好ましい。
【００４３】このような使い捨て用ウエハーは、それが
未使用か使用済であるかを判別することができるもので
あるのが好ましい。第２の接続チューブ１２と廃液チュ
ーブ１４との接続も、上記チューブ接続装置４を同様に
操作することによって行われる。
【００４４】このように、チューブ接続装置４によって
接続するために、好ましいチューブの径は、外径が４．
０〜５．０mm程度、内径が２．５〜３．５mm程度である
ことが好ましい。
【００４５】以上のように構成されている本発明の細胞
保存バックシステムの使用方法を濃厚赤血球を保存する
場合について、以下に順を追って説明する。 １− 採血された血液を血液バッグごと遠心分離器に
かけて、血漿、バフィーコートおよび赤血球の３成分に
分離する。
【００４６】１− 血漿およびバフィーコートは、他
の血液成分保存バッグ（図示せず）へ移送し、血液バッ
グ内には濃厚赤血球を残す。この時、血液バッグの採血
チューブと、血液成分保存バッグと接続されているチュ
ーブとを、それぞれ、その途中で封止切断し、この状態
の血液バッグが、保存バッグ２として用いられる。ま
た、封止切断された両チューブが、それぞれ第１の接続
チューブ１１、第２の接続チューブ１２となる。
【００４７】１− 第１の接続チューブ１１と、給液
バッグ３の給液チューブ１３をチューブ接続装置４で接
続し、添加液である保存液を保存バッグ２内へ適量導入
する。保存液の導入が終了したら第１の接続チューブ１
１と給液チューブ１３との接続部分を熱融着によって閉
塞して、該閉塞部分を切り離す。保存液の移送は、例え
ば給液バッグ３を圧迫するか、高所に位置させて落差に
よって行うか、またはローラポンプを用いて行うことが
できる。
【００４８】１− 所定期間保管したのち、保存液を
交換する。交換の際には、閉塞されている採血チューブ
を第２の接続チューブ１２として使用する。まず、保存
バッグ２を単独で遠心分離器にかけ、上澄液と赤血球と
を分離する。この場合、上澄液の大部分は保存液であ
る。
【００４９】１− 第２の接続チューブ１２と廃液チ
ューブ１４とをチューブ接続装置４にて接続し、保存バ
ッグ２を圧迫するか、またはチューブの途中にローラポ
ンプを設置して、保存バッグ２内の分離された上澄液を
空の廃液バッグ５内へ導入する。このようにして、古い
保存液を含む上澄液の排出が終了したら、第２の接続チ
ューブ１２と廃液チューブ１４との接続部分を熱融着に
よって閉塞して、該閉塞部分を切り離す。
【００５０】１− 次に、第１の接続チューブ１１
と、給液チューブ１３とをチューブ接続装置４によって
接続し、前記と同様にして所定量の保存液を給液バッグ
３から保存バッグ２へ導入する。保存液の導入が完了し
た後は、第１の接続チューブ１１と給液チューブ１３と
の接続部分を熱融着によって閉塞して、該閉塞部分を切
り離す。
【００５１】上記１−〜１−の作業を繰り返し行う
ことにより、保存液の交換を何回でも行うことができ
る。上記構成のシステムでは、保存液の供給経路と廃液
経路が異なるため、廃液と供給される液とが混ざらない
といった利点がある。
【００５２】上記濃厚赤血球に加えられる添加液として
は、血液保存液の他に、例えば血液の若返り液、血液を
洗浄する場合などに用いる生理食塩水などが挙げられ
る。血液保存液の例と組成は、表１に示す通りである。
また、採血バッグに予め入れられている保存液の種類お
よび組成は、表２に示されている。
【００５３】
【表１】
【００５４】
【表２】
【００５５】若返り液の例とその組成は表３に示されて
いる。
【００５６】
【表３】
【００５７】給液バッグ３と廃液バッグ５は、添加液の
１回の交換に用いる量の容量のバッグに限らず、複数回
分の添加液を収納した容器や複数回分の廃液を回収し得
る容器を用いて、添加液の交換をする度に同じ容器から
添加液を供給し、同じ容器に廃液を回収する構造として
もよい。また、給液バッグの形状、性状を保存用バッグ
と同様とし、廃液を排出した後に、細胞を給液バッグに
移送することとしてもよい。
【００５８】以上のような構成の他、図９および図１０
に示されているように、給液バッグ３の給液チューブ１
３と廃液バッグ５の廃液チューブ１４とを分岐コネクタ
１７で連結し、保存バッグ２の接続チューブに接続する
チューブを１本の連結チューブ１８とした構造としても
よい。この場合には、チューブ１１との接続作業が一回
で済むので作業効率が向上する。
【００５９】また、本発明のシステムは、保存バッグ２
を単体で保存する場合の他、血液バッグの他に、血漿を
収容するバッグなどが連結されている多連バッグに対し
て、給液バッグや廃液バッグを接続する構成のものとし
てもよい。
【００６０】次に、本発明のシステムを細胞培養システ
ムとして使用する場合について説明する。図１１に示さ
れているように、この場合には、培養バッグとして保存
バッグ６が用いられる。保存バッグ６は樹脂製の可撓性
を有するシート材を重ね、その周縁のシール部６１にお
いて、融着（熱融着、高周波融着等）または接着し、袋
状としたものである。シール部６１で囲まれる内側の部
分に、液体培地が収納される収納部６２が形成されてい
る。
【００６１】培養する細胞は、保存バッグ６内に収納さ
れている液体培地中に分散されている。細胞培養システ
ムとして用いる場合には、バッグを構成する前記シート
材の構成材料としては、例えば気体透過性に優れている
前述のポリオレフィンを用いるのが好ましい。
【００６２】保存バッグ６の上部には、導入口６３と廃
液口６４が設けられており、導入口６３には第１の接続
チューブ１５が、廃液口６４には第２の接続チューブ１
６がそれぞれ接続されている。
【００６３】また、給液バッグ３内には、液体培地が収
納され、廃液バッグ５は、空バッグとなっている。
【００６４】前記血液の保存を行う場合と同様に、第２
の接続チューブ１６には廃液チューブ１４が、第１の接
続チューブ１５には給液チューブ１３が、それぞれチュ
ーブ接続装置４によって接続される。
【００６５】保存バッグ６で培養されている細胞から液
体培地を分離する方法しては、遠心分離、フィルターを
通過せさて分離させるなど、種々の方法を取ることがで
きる。
【００６６】以上のように構成された、細胞保存バッグ
システムの使用方法を以下に順を追って説明する。
【００６７】２− 培地の交換時期が来たら、炭酸ガ
ス培養器から保存バッグ６を取り出し、第２の接続チュ
ーブ１６と廃液チューブ１４とを、チューブ接続装置４
によって接続する。
【００６８】２− 保存バッグ６内の古くなった液体
培地を廃液バッグ１４へ移送、回収する。このような液
移送は、例えば、保存バッグ６を軽く押す、しごく等し
て圧迫する方法、保存バッグを高所に位置させて落差に
より液流通を得る方法、チューブの途中にローラポンプ
を設置する方法等により行うことができる。また、培養
している細胞と液体培地の分離は、例えば遠心分離器に
かけたり、あるいはフィルターによって濾過することな
どの種々の方法によってなされる。
【００６９】２− 第２の接続チューブ１６と廃液チ
ューブ１４との接続部分を融着によって閉塞して、該閉
塞部分を切り離す。次いで、第１の接続チューブ１５と
給液チューブ１３とをチューブ接続装置４にて接続す
る。
【００７０】２− 給液バッグ３を前記と同様にし
て、添加液である新たな液体培地を、保存バッグ６へ導
入する。適量の液体培地を保存バッグ６へ導入した後、
第１の接続チューブ１５と給液チューブ１３との接続部
分を融着して閉塞した後、閉塞部分を切り離す。
【００７１】２− このようにして、液体培地の交換
が終わったら、保存バッグ６を炭酸ガス培養器へ戻す。
【００７２】以上の２−〜２−の作業を、培地の交
換時期が来る度に行う。培養器には、保存バッグ６のみ
を入れて置けばよいので、培養器の収容部のサイズを大
きくする必要もなく、収納スペースを有効に利用するこ
とができる。また、単一のバッグを培養器から出し入れ
すればよいので、取扱が容易で作業が迅速に行える。
【００７３】以下、本発明の細胞保存バッグシステムを
血液保存バッグシステムとして用いた場合の具体的実施
例について説明する。
【００７４】＜保存バッグシステムの構成＞
【００７５】図９および図１０に示す細胞保存バッグシ
ステムを製造した、各構成要素の条件は次の通りであ
る。
【００７６】Ｉ．保存バッグ 血液バッグとして用いられた保存バッグは、軟質ポリ塩
化ビニル製のシートで形成され、その特性は以下に示す
通りである。
【００７７】シートの厚み：０．３６mm バッグの容量：４００ml
【００７８】II．給液バッグと廃液バッグ 給液バッグと廃液バッグは同じ構成のバッグで容量も同
一のものを用い、これらのバッグは、軟質ポリ塩化ビニ
ル製のシートで構成した。容量は、共に３００mlのもの
とした。
【００７９】III.チューブ 上記各バッグに接続されているチューブは、軟質ポリ塩
化ビニル製であって、断面の径は外径４．４mm、内径
３．０mmのものを用いた。なお、構成材料の軟質ポリ塩
化ビニルの融点は、１７０℃程度である。
【００８０】IV．チューブ接続装置 チューブを加熱切断して、融着するためのウェハーは、
２６０℃程度に発熱するものを用いた。
【００８１】＜赤血球の保存方法＞
【００８２】保存バッグに採血した血液を遠心分離し、
血漿やバフィーコートと赤血球とを分離し、血漿とバフ
ィーコートは、他のバッグへ移送して、濃厚赤血球を保
存バッグ内に残した。保存バッグには、予め抗凝固剤と
してＡＣＤ−Ａ液を入れておく。その後４週間保存し、
２週間後に、以下の方法により保存液を、ＭＡＰ液に交
換した。
【００８３】３− 保存バッグを遠心分離器にかけ、
濃厚赤血球と保存液とに分離する。遠心分離は、ＩＥＣ
社の製品名ＤＰＲ６０００の遠心分離器を用いて、３３
００rpm(３０００×ｇ) ５〜７分の条件で行う。
【００８４】３− 給液バッグと廃液バッグが連結さ
れている２連バッグのチューブ閉塞端と、保存バッグの
接続チューブの閉塞端とをチューブ接続装置にて接続し
て、連結する。
【００８５】３− 給液バッグ側の給液チューブをク
レンメで閉塞し、分離されている保存液を廃液バッグへ
移送する。
【００８６】３− 次に、廃液バッグ側の廃液チュー
ブをクレンメで閉塞し、給液バッグからＭＡＰ液を保存
バッグの濃厚赤血球の上に添加し、混和する。
【００８７】３− 前記接続されたチューブを切り離
してそれぞれ閉塞する。
【００８８】以上の３−〜３−の交換作業を、２週
間毎に行った。
【００８９】＜結果＞
【００９０】赤血球の保存温度、および２週間毎に行っ
たグルコースと乳酸の測定結果を表４および表５に示
す。
【００９１】
【表４】
【００９２】
【表５】
【００９３】４℃で赤血球を保存した際には、１０〜１
２週間保存後も２週間保存したものと同等の代謝状態を
保つことができる。また０℃で赤血球を保存した際に
は、１２週間保存後も２週間保存したものと同等の代謝
状態を保つことができる。
【００９４】＜若返り液処理＞
【００９５】４− 上記方法にて保存液を交換しなが
ら、０℃で保存し、１２週間目に保存バッグを冷蔵庫か
ら取り出し、そのまま室温放置後、室温付近の温度とし
た後、遠心分離を行う。
【００９６】４− チューブ接続装置にて、給液バッ
グと廃液バッグの２連バッグに接続し、給液バッグ側の
チューブをクレンメで閉塞して、分離した上澄液を廃液
バッグへ移送する。
【００９７】４− 廃液バッグ側のチューブをクレン
メで閉塞し、給液バッグ側のチューブの閉塞を開放し、
給液バッグ内の若返り液を保存バッグ内の濃厚赤血球に
添加、混和し、接続されている２連バッグは切り離す。
混和する量は、濃厚赤血球の量とほぼ同量とする。
【００９８】４− ３７℃で６０分間、加温する。
【００９９】４− 再度遠心分離を行い、生理食塩水
バッグと廃液バッグが連結されている２連バッグを再度
接続する。前記遠心分離は、ＩＥＣ社の製品名ＤＰＲ６
０００の遠心分離器を用いて、３３００rpm(３０００×
ｇ) ５〜７分の条件で行う。
【０１００】４− 生理食塩水バッグ側のチューブを
クレンメで閉塞し、上澄液を廃液バッグへ移送する。
【０１０１】４− 廃液バッグ側のチューブをクレン
メで閉塞し、生理食塩水バッグ側のチューブを開放し、
生理食塩水を保存バッグ内の濃厚赤血球に添加し、混和
する。
【０１０２】４− 接続されている２連バッグを切り
離し、チューブの切断部分をそれぞれ閉塞する。
【０１０３】４− 上記４−〜４−の操作を２〜
３回繰り返して洗浄を行う。洗浄は合計１０００mlの生
理食塩水で行う。最後に、赤血球とほぼ等量の生理食塩
水を添加して終了する。
【０１０４】＜結果＞
【０１０５】若返り処理前後の、血液の２，３−ＤＰＧ
のレベルを測定した。その結果を表６に示す。
【０１０６】
【表６】
【０１０７】以上の各結果に示されるように、本発明に
よれば、保存液の交換による血液の長期保存などにおい
て、十分な保存効果を維持しつつ、遠心分離操作や保管
場所からの取り出し、収納などの際に、取扱が容易であ
った。また、保管スペースなども少なくて済み、管理が
しやすかった。
【０１０８】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の細胞保存
バッグシステムによれば、チューブ接続装置を用いてチ
ューブを接続するため、保存バッグへの添加液の添加
や、保存バッグからの廃液の回収に際し、確実に無菌状
態を維持しつつ、保存バッグを単独で取り扱うことがで
き、よって保存バッグを取り扱う操作や作業が単純とな
り、操作ミスや事故が生じにくい。
【０１０９】また、保管スペースを取らないので、保存
場所の有効利用ができて、コストの低減を図ることがで
きる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞保存システムの構成を示す模式図
である。
【図２】保存バッグの全体正面図である。
【図３】給液バッグと廃液バッグの全体正面図である。
【図４】チューブ接続装置の構成例を示す斜視図であ
る。
【図５】図４に示すチューブ接続装置によるチューブの
接続工程を示す斜視図である。
【図６】図４に示すチューブ接続装置によるチューブの
接続工程を示す斜視図である。
【図７】図４に示すチューブ接続装置によるチューブの
接続工程を示す斜視図である。
【図８】図４に示すチューブ接続装置によるチューブの
接続工程を示す斜視図である。
【図９】給液バッグと廃液バッグの２連バッグの構成を
示すバッグの全体正面図である。
【図１０】２連バッグを用いた、細胞保存システムの構
成を示す模式図である。
【図１１】細胞培養に用いる保存バッグの構成を示すバ
ッグの全体正面図である。
【符号の説明】
１ 細胞保存バッグシステム ２ 保存バッグ ２１ シール部 ２２ 収納部 ２３ 排出口 ２４ 導入口 ２５ 廃液口 ３ 給液バッグ ３１ シール部 ３２ 収納部 ３３ 排出口 ４ チューブ接続装置 ４０ ウエハー ４０１、４０２ 端子 ４１、４２ ホルダー ４１１、４１２ ４２１、４２２ ホルダー片 ４４ 支点 ４５、４６ 溝 ４７、４８ チューブ保持部 ５ 給液バッグ ５１ シール部 ５２ 収納部 ５３ 導入口 ６ 保存バッグ ６１ シール部 ６２ 収納部 ６３ 導入口 ６４ 廃液口 １１ 第１の接続チューブ １２ 第２の接続チューブ １３ 給液チューブ １４ 廃液チューブ １５ 第１の接続チューブ １６ 第２の接続チューブ １７ 分岐コネクタ １８ 連結チューブ

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 細胞を収納する保存バッグと、一端が前
    記保存バッグ内に連通し、他端が閉塞されている少なく
    とも１つの接続チューブと、添加液を収納する貯留容器
    と、一端が前記貯留容器内に連通し、他端が閉塞されて
    いる給液チューブと、廃液容器と、一端が前記廃液容器
    内に連通し、他端が閉塞されている廃液チューブとを有
    し、 チューブ接続装置を用いて前記接続チューブと前記給液
    チューブまたは前記廃液チューブとを無菌状態に接続
    し、前記保存バッグへの前記添加液または前記保存バッ
    グからの廃液の回収を行うことを特徴とする細胞保存バ
    ッグシステム。
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