JPH06503817A - アグルコテイコプラニンから誘導されるヘキサペプチド及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アクルコテイコブラニンから誘導されるヘキサペプチド及びその製造法本発明は 次式（１） ［式中、 Ｒは水素又はアミノ部分の保護基である１により表されるアグルコテイコブラニ ンのへキサペプチド誘導体、及びその酸又は塩基との塩ならびにその分子内塩に 関する。

本発明は、式（Ｉ　Ｉ） （ＩＩ） ［式中Ｒは水素又はアミノ部分の保護基である］のアクルコテイコブラニン又は その誘導体及びその酸又は塩基との塩、ならびにその分子内塩からの、式（１） のへキサペプチドの製造法にも関する。

アグルコテイコプラニン（上記式（Ｔ　Ｉ）　、Ｒ＝Ｈ）　、すなわちティコプ ラニンのアグリコンは既知化合物であり、グラム−陽性微生物による感染を防除 するために用いられる抗生物質であるティコプラニンＡ。

複合体（例えばヨーロッパ特許出願公開第３７６０４２号を参照）の酸加水分解 により製造することができる。

アミノ部分が保護されたいくつかのアグルコティコプラニン誘導体も既知化合物 であり、半一合成ティコプラニン、例えばヨーロッパ特許出願公開第２１８０９ ９号に開示されているティコプラニンアミドの製造に用いられてきた。

ティコプラニンの化学においてＮ　Ｉ　５７５１部分の保護のために最も頻繁に 用いられる保護基は低級アルコキシカルボニル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカル ボニル及びフェニル低級アルコキシカルボニル基、例えばベンジルオキ７カルポ ニルである。

しかし本発明の方法の間に適用される条件に抵抗性で容易に除去てきる、アミノ 残基のためのいずれの典型的保護基もここで用いることができる。

アミノ官能基の適した保護基は、例えば：Ｔ、Ｗ、Ｇｒｅｅｎｅ。

”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅ ｓｉｓ”、Ｊ、Ｗｉ　Ｉｅｙ、Ｎ、Ｙ、、１９８１に記載されている。

特にこの場合、アミノ部分のアシル化により形成される保護基が好ましい。通常 アシル化剤はアルカノイル又はアロイル基、あるいはカーボネート部分を与える 反応物、例えば脂肪族鎖が任意にハロ又は低級アルコキシにより置換されている ことができる低級脂肪酸ハライド、無水物、又は低級脂肪酸の活性化エステル、 例えば酢酸、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸及びメトキシ酢酸、 アリール部分が任意にハロ、低級アルキル、低級アルコキシ又はニトロにより置 換されていることができる芳香族酸のハライド、無水物あるいは活性化エステル 、例えば安１、香酸、４−クロロ安叡香酸、４−メトキシ安息香酸及び２−ニト ロ安い香酸、又は炭酸ハライド、無水物、あるいは活性化エステル、例えばジエ チルカーボネート、ジーｔｅｒｔ−ブチルカーボネート、ジーｔｅｒｅ−ブチル ージカーボネート、２．　２．　２−トリクロロエチルクロロホルメート、アリ ルクロロホルメート、ベンジルクロロホルメート及び２、　４．　５−１−リク ロロフェニルーｔｅｒｔ−ブチル−カーボネートである。Ｎ　＋　５部分の最も 好ましい保護基はｔ　ｅ　ｒ　ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−ｒ３０ｃ）で ある。

式（１）のへキサペプチドは抗微生物剤（ａｎｔ　１ｍ１ｃｒｏｂｉａＩ　ａｇ ｅｎｔ）として、及びアグルコテイコブラニンの新規合成誘導体、例えば第３ア ミノ酸のアリール部分が修飾され、新規第１アミノ酸残基を適当に選択し、ペプ チド化学における反応を介してヘキサペプチド鎖のＮ−末端アミノ酸（式Ｉの残 基２）に結合したアグルコテイコプラニン一様生成物の製造の中間体又は出発材 料として有用である。

式（１）のへキサペプチドの、式（Ｉ　Ｉ）のアグルコテイコプラニン及びその 誘導体からの製造法は、第１及び第２アミノ酸フラグメントを結合しているアミ ド結合の還元的加水分解を含む。この反応はこれまで用いられてきた条件下で、 Ｒが上記と同義である式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）のペンタペプチドを与える第２及び第３ アミノ酸を結合しているアミド結合の還元的切断を伴って起こる。この後者の化 合物を得るために特に適合させた方法及び手順が同時係属ヨーロッパ特許出願公 開第４０９０４５号及び米国特許出願第５５２．２７５号に記載され、フレイム されている。

反応の最終生成物中で最も好ましい比率でヘキサペプチド（１）を得ることがで きる反応条件は、式（Ｉ　Ｉ）のアグルコティコブラニン誘導体を大過剰モル量 （例えば１００−３００モルの割合）のアルカリ金属ボロハイドライド、好まし くはナトリウムポロノゾドライド又はカリウムポロハイドライドと、アルカノー ル：水混合物中、０−４０’Ｃの温度、好ましくは１０−２５℃の温度にて回収 可能な量の式（１）のへキサペプチドが製造されるのに十分な時間接触させるこ とを含む。

「アルカノール」という用語により、低級直鎖状もしくは分枝−状Ｃ，−Ｃ，ア ルキルアルコールを意味する。

好ましいアルカノールはエタノール及びイソ−プロパツールであり、エタノール が最も好ましい。

「回収可能な量」により、通常の回収、分離及び精製法を用いて反応混合物から 単離することができ、実験的試験及び本発明に開示する利用に十分な生成物のあ る量を意味する。

通常反応時間は１０−３０時間の範囲である。この間隔内の好ましい反応時間は 、基質の量と比較した溶媒及び還元剤の量、温度及び用いた還元剤の種類に依存 し、反応に続く分析法、例えばＩＩＰＬＣにより決定することができる。実際に は、本発明の方法の一般的条件下で式（ＩＩ■）の副生成物の池に別の副生成物 が形成されることが観察された。そのような副生成物は、上記の式（１）におい て３の番号で示したアリール部分に結合する炭素、すなわち最初の式（Ｉ　Ｉ） のアグリコテイコプラニン原料の第３アミノ酸フラグメントの脂肪族炭素原子に 対応する炭素原子における式（［）のへキサペプチドのエピマーに相当する。

ペンタペプチド生成物（ＩＮ）は上記の同時係属出願に示す通り有用な生成物で あるが、エピマーは生物学的に不活性なので実際上の用途はない。従って反応経 路の分析的制御の主目的のひとつは、本発明の方法から得られる生成物中のエピ マーの量を最少にすることである。

より高い収率を得るために、アルカノール・水混合物に特別に注意しなければな らない。実際、１１　：　６　（ｖ／ｖ）の比率のエタノール・水混合物を用い ることにより式ＩＩの非−保護化合物から出発して本発明のへキサペプチド化合 物を製造することができる場合でさえ、式■１のＮ　＋　５保護化合物を用いて ｉテつた予備実験は、２　：　８　（ｖ／ｖ）の比率のエタノール　水混合物を 用いることにより有意な変換は起こらないことを示した。

アルカノール：水の比率を上げることにより、生成物の収率は上がり、エピマー の形成は実質的に減少する。好ましいアルカノール：水の比率は４：６（ｖ／ｖ ）から９　：　１　（ｖ／ｖ）に含まれる。

Ｎ”ｔｅｒｔ−プチルオキシカルポニルアグルコティコプラニンがら出発し、エ タノール：水９：１の溶媒混合物を用いて最高の結果が得られた。

これらの条件下で、対応するヘキサペプチド化合物が８０％の収率で主生成物と なったつ三フッ化酢酸を用いた脱保護及びカラムクロマトグラフィーによる精製 の後、所望の生成物を約５０％の全収率で得た。

エタノールの代わりにイソプロピルアルコールを用い、類似の挙動が観察された が、比較的反応時間が長かった（３０％）。

無水エタノール又はイソプロパツール中で変換は起こらないので、水は反応に不 可欠であり、機構が加水分解段階を含むことを証明している。

上記に概略を示した工程条件に従い、反応を止めたら適量の酸、例えば（ＣＩ　 Ｃ４）脂肪族酸、（ＣＩ　ＣＪアルカンスルホン酸、アリールスルホン酸、例え ばベンゼンスルホン酸又はナフタレンスルホン酸を加えることにより過剰のアル カリ金属ボロハイドライドを分解する。

式（１）の所望の生成物よりエピマー生成物の溶解度が低い溶媒、例えば低級ア ルカノール又はそれらの混合物（例えばメタノールとエタノールの混合物）から 選ばれる溶媒を加えることにより、はとんどのエピマー性不活性生成物を反応混 合物から除去することができる。分離する固体、通常は懸濁液、を濾過又は好ま しくは遠心により除去する。

１尋られた溶液を濃縮し、この段階の間に形成された不溶性物質（主にホウ素ｔ ！りを濾別する。残りの溶液をシラン化シリカゲル上のクロマトグラフィーにか け、最初に水で、その復水ニアセトニトリル１，１の混合物で溶離する。留分を 集め、ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃにより調べる。式（ＩＩＩ）のペンタペプチドを含む留 分を分離し、必要なら蒸発させて関連生成物（ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｐｒｏｄｕｃ ｔ）を回収する。式（１）のアグルコテイコプラニンヘキサベブチドを含む留分 をプールし、濃縮し、ジエチルエーテルなどの非溶剤を加えて式（１）の粗生成 物を沈澱させる。

まだこの生成物はある量の望ましくない不活性エピマーを含み、従って結晶化又 はカラムクロマトグラフィーなどの通常の方法を用いてさらに精製する必要があ る。

好ましい精製法に従い、上記の粗生成物を十分な量の水に溶解し、シラン化ンリ カゲル力うム上のクロマトグラフィーにかけ、水中のアセトニトリルの線状段階 −勾配（ｌｉｎｅａｒ　ｓｔｅｐ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）を用いて展開し、Ｉ−１ ））　Ｌ　Ｃによる制御下で数個の留分を集める。純粋な化合物（Ｔ）を含む留 分をプールし、蒸発させて西望の生成物を得る。

ト紀の本発明の方法に従い、非−塩の形態て単離されるヘキサ・ペプチドは、酸 又は塩基との対応する付加塩に変換することができる。代表的酸付加塩は、ヘキ サペプチドのアミン残基と無機及び有機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、コハク 酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸。

コリン酸、ｄ−グルタミン酸、ｄ−樟脳酸、グルタル酸、フタル酸、酒石酸、メ タンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、サリチル酸、三フッ化酢酸な どから形成される塩である。

塩基どの塩は、ヘキサペプチドのカルボン酸残基と塩基、例えばアルカリ金属水 酸化物又は炭酸塩、あるいは有機アミン、例えばモノ−、ジー又はトリアルキル −アミンなどとの反応により形成される塩である。

製薬学的に許容しうる酸及び塩基との付加塩が特に好ましい。

非−塩の形態から対応する塩への変換の方法は、実行において通常用いられる方 法であり、例えば非−塩の形態を水性溶媒中に溶解し、そこに少し過剰モル量の 選ばれた酸又は塩基を加え、塩が不溶性の水混和性有機溶媒を加えるか、又は水 溶液を濃縮して沈澱を得る方法が含まれる。

同様に、逆の操作により塩から非−塩の形態を得ることができ、それは塩を水性 溶媒中に溶解し、酸又は塩基を加えてヘキサペプチドを遊離させ、それを例えば 部分的水混和性有機溶媒を用いた抽出により回収する段階を含む。

これらの方法は、ヘキサペプチド誘導体をさらに精製するためにも用いることが できる。

「分子内塩」は、／＼キサペプチド（１）の分子内に含まれる酸及び塩基官能基 の間の内部塩化により形成される塩であり、本発明の化合物の記載及び利用に関 してｊｊ非−塩の形態と同等である。

最小阻止濃度（ＭｉＣ）として表される、式（＋）　、Ｒ−水素のへキサペプチ ドのグラム−陽性菌の選ばれた株に対する抗微生物活性を、ティコプラニンと比 較して決定した。Ｄｉｆｃｏ　Ｔｏｄｄ−１１ｅｗｉｔｔブロス（ストレプトコ ックス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ））、又はオキソイド　イソーセンンテスト （Ｏｘｏｉｄ　［５ｏ−３ｅｎｓｉｔｅｓｔ）ブロス（スタフィロコックス（（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ））中で微小希釈法（ｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ 　ｍｅｔｈｏｄ）を用いた。最終的接種は約１０’ｃ　ｆｕ／ｍＩであり、３７ ℃でＩＬ−２４時間培養したｉ税に目に見える成長を示さない最低の濃度（ｍｃ ｇ／ｍｌ）としてＮｌＩＣを読み取った。

下表１に報告する通り、上記のへキサペプチドは一般に、スタフィロコンクス及 びストレプトコックスに対してティコプラニンより活性が低く、コアグラーゼ（ ｃｏａｇｕｌａｓｅ）−陰性スタフィロコックス（ＣＮＳ）の２つの種であるＳ 、　エビデルミジス（Ｓ、ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）及びＳ、ヘモリチクス（Ｓ 、ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）に対して同程度の活性を維持しているが、ティコ プラニンに対して感度の低いＳ、アラ−にりｚ（ト　リー１引見互）及び旦　玉 ビデルミジスの２つの株に対して４−１６倍活性である。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　（Ｍ　Ｉ　Ｃ，ｍｃ　ｇ／ｍ　Ｉ　）活性＊ｒ　−７７”１ １　微生物　１ヘキサペプチド１テイコプラニン１１　株　１　（実施例１）　 １　１ ）−−−−−−−−−−−−一一−＋−−一−−−−＋−−−−−−＠１ｓｔａ ｐｈ、７’７Ｌｚ’ｚＸ　Ｉ　２　１　０．５　１ｌｓｔａｐｈ、　アウレウス 　＋２１８１１　、Ｓ　ｔ　ａ　ｐ　ｈ、　ｘｅｙ−ｔＬ＝主９２１　０．５１ 　０．５　１１　ＡＴＣＣ１２２２８＋　１　１ トー−−−−−−−−−−−−十−−−−−−−＋　−−−−−−−−１１Ｓｔ ａｐｈ、エビデルミジス１１１１６１１Ｓｔａｐｈ　ヘモリチクス　＋１６１１ ６１１　臨床的単離（ＴＬＳ）　ｌ　ｌ　１μｍ−−−−一−−−−−−−−＋ −一−−−−−＋−−−−−−−一−＋１ｓｔｒｅｐ　ピオゲネス　＋　８　＋ 　０．０６３１１　Ｃ２０３＋　＋　１ トー−−−−−−−−−−−−−−＋　−−−−−−＋−−−−−−−−＋ｌ５ ｔｒｅｐ　ニュー＋Ｈヱｊ’１　４　１　０．０６３１１Ｅｎｔｒｏ、ファカリ ス　＋　８　１　０．１２５１１ＡＴｃｃ７０８０　１　１　１ Ｌ−一一一一−−−−−−−−工−−−−−−一上一　ＪＴＬＳ−ティコプラニ ンに対して感度が低い＊接種：　１０５ｃ　ｆ　ｕ／ｍ　１ 本発明のへキサペプチド誘導体の抗微生物活性は、ティコプラニン基礎構造の結 合領域における構造的修飾が抗微生物活性の損失の根拠となる事実を見ても驚く べきことである。実際、近年ダルバヘプチドグループと定義された抗生物’Ｎ（ Ｆ、Ｐａｒｅｎｔｉ　ａｎｄ　Ｂ、Ｃａｖａｌｌｅｒｉ　Ｎｏｖｅｌ　Ｇｌｙｃ ｏｐｅｐｔｉｄｅ　Ａｎｔｉｂｊ。

ｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄａｌｂａｈｅｐｔｉｄｅ　Ｇｒｏｕｐ”。

Ｄｒｕｇｓ　Ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｆｕｔｕｒｅ、Ｖｏｌ、１５（１）：５７−７２　 （１９９０を参照）の作用の通常の機構の決定因子である細胞壁生合成の中間体 のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン末端の腹合作用に対応する結合部位は、例えばＮ 、Ｐａｎｔ　ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ。

Ｓａｃ、１９８８：１１０：２００２−２００３の論文中のバンコマイシンにつ き示された通り主に分子の右側に存在する。

アグルコテイコプラニンから誘導するヘキサペプチドの微生物学的活性は、そ第 １を対応するバンコマイシンへキサペプチド及び対応するアグリコンにより示さ れる生物学的不活性と比較するとさらに驚くべきことである。（Ｎ、Ｐａｎｔ　 ｅｔ　ａｌ　上記で引用、及びＰ、　Ｍ、Ｂ。

ｏｔｔ＋　ｅｔ　ａｌ　°Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｎｆ。

ｒｍａｔｉｏｎａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＶａｎｃｏｍｙｃｉｎＨｅｘａ ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　Ａｇｌｕｃｏｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ　Ｈｅｘａｐｅｐ ｔｉｄｅ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ、Ｉ、１９８９．２ ３３５−２３３９を参照）。

」二記の抗微生物活性を見ると、本発明の化合物は人間の医学及び獣医学におい て該活性成分に敏感な病原菌によって起こる感染症の予防及び処置、特にコアグ ラーゼー陰性スタフィロコックス及びテイコブラ二二ノに対して感度が低い互、 アウレウス及び旦、ヘモリチクス株によって起こる感染の処置のために用いられ る抗微生物調剤の活性成分として有効に用いることができる。

本発明の化合物は経口的、局所的又は非経口的に投与することができるが非経口 的投与が好ましい。

投与の経路に依存してこれらの化合物は種々の投薬形態に調製することができる 。経口的投与のための調剤はカプセル、錠剤、液体溶液又は懸濁液の形態である ことができる。当該技術において既知の通りカプセル及び錠剤は活性成分の他に 従来の賦形剤、例えばラクトース、リン酸カルシウム、ソルビトールなどを例と する希釈剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールを例 とする滑剤、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、 アラビアゴムを例とする結合剤、風味料及び許容しつる崩壊剤ならびに湿潤剤を 含むことができる。一般に水性又は油性溶液あるいは懸濁液の形態である液体調 剤は、懸濁剤などの従来の添加剤を含むことができる。

局所的使用の場合本発明の化合物は、鼻及び喉又は気管組織の粘膜を通って吸収 するために適した形態で調製することができ、簡便に液体スプレー又は吸入剤、 ロゼンジあるいは咽頭塗り薬の形態を取ることができるう 目又は耳の薬物処置の場合、調剤は液体又は半一液体の形態で与えることができ る。局所的外用薬は、疎水性又は親水性ベース中で軟膏、クリーム、ローション 、塗り薬又は粉末として調製することができる。

腸管内投与の場合、本発明の化合物は従来のビヒクル、例えばココアバター、ワ ックス、鯨蝋又はポリエチレングリコール及びその誘導体と混合した座薬の形態 で投与することができる。

注射のための組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、又は乳液の形 態を取ることができ、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの配合剤（ｆｏｒｍ ｕｌａｔｏｒｙ　ａｇｅｎｔ）を含むことができる。

別の場合、活性成分は与える時点で無菌水などの適したビヒクルを用いて再構築 するための粉末の形態であることができる。

投与するべき活性成分の量は、処置する患者の大きさ及び状態、投与の経路及び 顆間ならびに含まれる原因物質などの種θの因子に依存する。

本発明の化合物は一般に体重１ｋｇ当たり約１−約４０　ｍ　ｇの活性成分を好 ましくは１日当たり２−４回の投与に分けて含む投薬量で有効である。特に望ま しい組成物は、１単位当たり約３０−約５００ｍｇを含む投薬単位の形態で調製 された組成物である。

実施例 以下の実施例に従って製造した化合物の特性化に用いた分析法及び手順は、実施 例の項に続く別の章に記載する。

実施例１　非−保護アグルコティコプラニンからの出発によるアグルコテイコブ ラニンヘキサペプチト（式（１）、Ｒ−水素）の製造３５リツトルの水　エタノ ール６　：　４　（ｖ／ｖ）混合物中の１００ｇ（約８０ミリモル）の撹拌溶液 に、１５−２５℃に冷却しながら６００ｇ（約１６モル）のＮａＢＨ４ペレット を２時間でわけて加える。反応混合物を室温で２２時間撹拌し、そのｉ＆１０℃ に冷却しなから５５リンドルのメタノール・エタノール６５　：　３５　（ｖ／ ｖ）混合物中の９６０ｍ１の氷酢酸の溶液中にそれを注ぐ。得られた懸濁液を遠 心し、不溶性物質（主に不活性エピマー）を捨てる。透明な溶液を、泡を防ぐた めにｎ−ブタノールの存在下で減圧下にて４５℃で濃縮し、約５００ｍ１の最終 体積とする。

得られた懸濁液を濾過しく主にホウ素塩である不溶性物質を捨てる）、その後水 中の２．５ｋｇのシラン化シリカゲル（０，０６−０，２ｍｍ；Ｍｅｒｋ）のカ ラムに装填する。カラムを１０リツトルの水、その後１０リツトルのアセトニト リル：水１　：　１　（ｖ／ｖ）の混合物で溶離しその間５００ｍ１の留分を集 め、ＨＰ　Ｌ　Ｃにより調べる。留分９−１６が式１１１（Ｒ＝水素）の粗ペン タペプチドを約１０５ｇ含んだ。標題化合物を含む留分（２１−３０）をプール し、９リツトルのｎ−ブタノールを加える。ｉ）られた混合物を減圧下にて４０ ℃で濃縮し、小体積（約２００ｍ１）とする。

ジエチルエーテル（５００ｍｌ）を加えた後、沈澱した固体を濾過により集め、 ｌＱＱｍｌのジエチルエーテルで洗浄し、粗（５５％、ＨＰＬＣ力価）標題化合 物及び少量のその不活性エピマーを含む粗粉末４９ｇを得る。上記の粗生成物を ５００ｍ１の水に溶解し、得られる濁った溶液を水中の１．２ｋｇのシラン化ノ リカゲルのカラムに装填する。カラムを水中の２０−５０％のアセトニトリルの 線状段階−勾配を用い、２５０ｍ１／時間の流量で２０時間で展開し、２５ｍ１ の留分を集める。

純粋な（ＬＩＰＬＣ）標題化合物を含むこれらの留分をプールし、上記の要領で 仕上げ、１８ｇの標題化合物を得る。

実施例２・Ｎ　Ｉ　５保護アクルコテイコブラニンからの出発によるアグルコテ イコブラニンヘキサペプチド（式（１）、Ｒ＝水素）の製造２、Ｉ　Ｎ１′−ｔ ｅｒｔ−プチルオキシ力ルポニルアグルコテイコブラニンの製造 １００ｍ１のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の５ｇ（約４ミリモル）のアグ ルコテイコプラニン、２ｍｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ）及び２ｇのｔｅｒｔ −ブチル−２，４，５−トリクロロフェニルカーボネートの溶液を室温で２４時 間撹拌する。９００ｍ１のエチルエーテルを加えることにより固体が分離し、そ れを集め、１リツトルの水：メタノール７　：　３　（ｖ／ｖ）混合物に再溶解 する。得られた溶液をＩＮ塩酸を用いてｐＨ３，５とし、５００ｍ１のエチルエ ーテルで抽出し、それを捨てる。水層を１リツトルのｎ−ブタノールで再度抽出 し、有機相を水（２ｘ５００ｍｌ）で洗浄し、その後それを減圧下にて３５℃で 濃縮えることにより固体を沈澱させ、それを集め、エチルエーテル（２ｘ２ＱＱ ｍｌ）で洗浄し、真空中４０℃にて終夜乾燥し、４８５ｇの標題化合物を得る。

２、　２　Ｎ”　−ｔ　ｅ　ｒ　ｔ−プチルオキシ力ルポニルアグルコテイコプ ラニンヘキサペプチドの製造 ３００ｍ１のＥｔＯＨＨ２Ｏ９／１の混合物中の１０．５ｇ（約８ミリモル）の Ｎ１５−ｔｅｒｔ−プチルオキシカルポニルアグルコテイコプラ二ンの撹拌溶液 に、６０ｇのＮａＢ）（４（粉末）を２時間で分けて加えた（２０℃にて）。そ の後室温で９６時間撹拌を続け、反応混合物を３００ｍ１のＭｅｏｌｌ−ＥｔＯ Ｔ−（−Ａｃ０１１３／２／１溶液中にゆっくり注いだ。泡を防ぐために１−Ｂ ｕＯＨを加えた後、溶媒を減圧下で４５℃にて蒸発させた。固体残留物を集め、 クロマドラフィーにかけ、５．６ｇの純粋な標題化合物を得た。

２３　アグルコテイコプラニンヘキサペプチドの製造１０ｍ１の乾燥圧フッ化酢 酸（ＴＦＡ）中の１．１ｇのＮ”−ｔｅｒｔ−プチルオキシカルボニルヘキサペ プチドアグルコティコブラニンの溶液を室温で５分間撹拌した。その後溶媒を蒸 発させ、油性残留物を５０ｍ１のＥｔ０２を用いてスラリ化し、１ｇの純粋な標 題化合物をジー三フッ化酢酸塩として得た。

ｆｆ１Ｎ”−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルへキザベブチドアグルコテイコ プラニンをＴＦＡで処理し、得られた粗ヘキサペプチドアグルコテイコプラニン ジー三フッ化酢酸塩を逆相カラムクロマトグラフィーで最終的に精製することに より、実質的に類似の結果（Ｎ”−ｔｅｒｔ−プチルオキシ力ルポニルヘキサペ プチドアグルコテイコプラニンからの全収率５０％）が得られた。この場合、精 製するべき生成物の水溶液をカラムに装填する前にｐ　Ｈ５に調節し、純粋なヘ キシペプチドアグルコテイコブラニンを遊離の塩基（分子内塩）として得る。

ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析は、Ｌｉ−Ｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−８（１０μｍ）を子 端充填したカラムＨｉｂａｒ　（２５０ｘ４ｍｍ；Ｍｅｒｃｋ）にて、２０ｕ　 ｌ−ループインジェターＲｈｅｏｄｙｎｅ　Ｍｏｄｅｌ　７１２５及びＵＶ可変 検出器を備えたＶａｒｊａｎ　Ｍｏｄｅｌ　５５００ＬＣポンプを用いて行った 。クロマトグラムは２５４ｎｍで記録した。

溶離は、以下の通りにプログラムされた線状段階−勾配に従って溶離剤Ａ、０． ２％蟻酸アンモニウム水溶液と溶離剤Ｂ、アセトニトリルを混合することにより ２ｍ１／分の流量で行った：時間（分）・　０　１０　２０　３０　３５　４５ Ａ中のＢの％・　５　２３　２６　３５　７５　５これらの条件下で実施例１の へキサペプチド、すなわち式（１）　（Ｒ＝水素）は１２．６分の保持時間（１ ＊）を示した。その不活性エピマーのｔ、値は１２．９分であった。

アグルコテイコブラニンのｔｐ値は１２．６であり、すなわちヘキサペプチド誘 導体と同一であるが、ＨＰ　Ｌ　Ｃ分析は主に粗反応生成物について行われ、そ れからは出発アグルコテイコブラニンはほとんど完全に除去されているのでこの 事実は大きな問題を起こさない。

２）　酸塩基滴定 以下の条件下で酸塩基滴定を行う：試料をメチルセルロース：水４：１の混合物 に溶解し、その後同一溶媒中のＯ，ＯＩＭ　ｔｌｃｌを過剰に加え、得られた溶 液をＯ，ＯＩＮ　Ｎａ０４１で滴定する。

表２は実施例１の化合物の当量を示す。

３）　電Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲ ’Ｔ（ＮＭＲスペクトルは、Ｑ、５ｍｌのＤＭＳＯｄｏ中の正しい生成物の溶液 ２７１　ｍ　ｇを用い、Ａｓｐｅｃｔ　３０００．コンピューターを輛えたＢｒ ｕｋｅｒ　ＡＭ　５００　ＮＭＲ−スペクトロメーターにて（Ｃ）（３）　４Ｓ 　！　（δ０．００ｐｐｍ）を内部標準として３０３°にで記録する。特に実施 例１の特性の部分に関連する重要なδ値のみを表３に報告する。１３Ｃスペクト ルの場合、スペクトロメーターの周波数は１２５　１７ＭＩＩｚである。

ＦＡＢ−ＭＳ陽イオンスペクトルを、３０００ダルトン質量範囲のＫｒａｔｏｓ 　ＭＳ−５０ダブルマススペクトロメーターにて８ｋＶ加速電圧を用いて得る。

装置はコンピューター制御下で運転する。高品質のデータを得るために“生デー タ”取得（“ｒａｗｄａｔａ″ａｃｑｕｉｓｔｔｉｏｎ）においてＤＳ−９０デ ータシステムを用いる。ＦＡＢのために、電圧６ｋＶ及び電流１ｍＡにてＸｅガ ス（供給源イオンゲージにおける指示が２ｘ１０−８トール）を用いたサドルフ ィールド原子銃（ｓａｄｄｌｅ　ｆ　１ｅｌｄ　ａｔｏｍ　ｇｕｎ）を用いる。

試料を０゜２ＮＨＣＩを含むメタノール：水１・Ｈｆｆ１合物、あるいは代わり にジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解する。その後この溶液１マイクロリ ツトルを場合により１Ｎ酢酸をターゲットＦに含む１マイクロリツトルのチオグ リセロールマトリックスと混合する。

表２は実施例１の化合物の分子量を示す。

表２ 当量、分子量及び元素分析 化合物　酸−塩基滴定　ＦＡＢ−ＭＡＳＳ　元素分析１測定値％（Ｅ、Ｗ、）　 （Ｍ＋１１）４ＣＴ（Ｎ　ＣＩ実施例１　４１９（Ｘ３）　１２０２　５７．５ ３　４．２７　７，９５　５．７１嘗１　理論式：　Ｃｓ５Ｈ＜ｖＮｙｃＩ□０ ＋ｓ　；　Ｍ、　Ｗ、　、１２０３．　０゜計算値（％）：Ｃ，５７，９０；比 　４．　１．０；Ｎ、８．　１５；Ｃ１，５，８９゜ 元素分析はＮ、雰囲気中１４０℃にてあらかじめ乾燥した試料につきＤＭＳＯｄ ｓ中の１ト１及び１３Ｃ−ＮＭＲデータ；　（ＣＨｉ）４Ｓ　ｉ内部標準、６０ ．００ｐｐｍ 化合物　δｐｐｍ 実施例 １　１Ｈ：　３．　５８．　３．　６２　（新しく導入されたＣＩ、）。

４、　１０−５．　９６　（ペプチド性ＣＩＯ：６、　２６−８．　５２　（芳 香族プロトン及びペプチドＮＩＤｌ３Ｃ：　６３．　７６　（ＣＨ２０Ｈ）国際 調査揺牛 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＮＬ、ＳＥ）、　ＣＡ、ＪＰ、　 ＫＲ，ＵＳ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．次の一般式（Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、 Ｒは水素又はアミノ部分の保護基である］のヘキサペプチド誘導体及び酸又は塩 基とのその塩ならびにその分子内塩。
2. ２．Ｒが水素である請求の範囲１に記載の化合物。
3. ３．Ｒが水素又はアミノ部分の保護基である式（ＩＩ）のアグルコテイコプラニ ン誘導体を大過剰モル量のアルカリ金属ボロハイドライド、好ましくはナリトウ ムボロハイドライド又はカリウムボロハイドライドと、アルカノール：水混合物 中で０−４０℃の温度にて接触させることを特徴とする、Ｒが上記と同義である 一般式（Ｉ）のヘキサペプチド誘導体及び酸又は塩基とのその塩ならびにその分 子内塩の製造法。
4. ４．Ｒがアミノ部分の保護基であり、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアルコール：水の 混合物の比率が４：６（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の範囲に含まれる請求の範 囲３に記載の方法。
5. ５．Ｒがｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルであり、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルア ルコール：水の混合物が９：４（ｖ／ｖ）の比率のエタノール：水の混合物であ る請求の範囲３及び４のいずれかに記載の方法。
6. ６．反応温度が１０〜２５℃である請求の範囲３〜５のいずれかに記載の方法。
7. ７．ヘキサペプチドを、その不活性エピマーの溶解度が低い溶媒を反応混合物に 加え、次いでホウ素塩を除いた濾過された溶液をシラン化シリカゲル上のクロマ トグラフィーにかけ、最初に水そして次いで水：アセトニトリル混合物を用いて 溶離し、それによってヘキサペプチドをアグルコテイコプラニンペンタペプチド 副生成物から分離することにより、反応混合物に含まれる他の副生成物から単離 する請求の範囲３〜６のいずれかに記載の方法。
8. ８．不活性エピマーの分離のために加えられる溶媒を低級アルカノール又はその 混合物、好ましくはメタノール：エタノール混合物から選ぶ請求の範囲６に記載 の方法。
9. ９．溶離混合物が水：アセトニトリル１：１である請求の範囲７及び８のいずれ かに記載の方法。
10. １０．ヘキサペプチドの水溶液をシリカゲルカラムを用いたカラムクロマトグラ フィーで、水中のアセトニトリルの線状勾配を用いて展開することにより精製す る段階をさらに含む請求の範囲３〜９のいずれかに記載の方法。