JP7712941B2

JP7712941B2 - トール様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストとしての１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン化合物

Info

Publication number: JP7712941B2
Application number: JP2022545789A
Authority: JP
Inventors: チェン，ホン; エムタービー，クリスティン; ギャングウォー，サンジーブ; ブイガバイ，アシュビニクマール; エルジョンソン，ウォルター; ビーポウデル，ヤム; シヴァプラカサム，プラサンナ; エフドネル，アンドリュー; ジル，パトリス; ムルガイアスッバイア，ムルガイアアンダッパン
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2020-01-27
Filing date: 2021-01-26
Publication date: 2025-07-24
Anticipated expiration: 2041-01-26
Also published as: CN115210236A; KR20220132589A; US20230118688A1; EP4097102A1; WO2021154661A1; JP2023512205A

Description

本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０２０年７月２８日に提出された米国仮出願シリアル番号第６３／０５７，６４４号および２０２０年１月２７日に提出された米国仮出願シリアル番号第６２／９６６，０８５号の利益を主張し、それらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、トール様受容体７（「ＴＬＲ７」）アゴニストおよびその複合体、ならびに調製方法、並びにそのようなアゴニストおよびその複合体の使用に関する。

トール様受容体（「ＴＬＲｓ」）は、特定の種類の病原体に保存される小分子モチーフである病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰｓ」）を認識する受容体である。ＴＬＲは、細胞の表面上または細胞内のいずれかに存在し得る。同種のＰＡＭＰの結合によるＴＬＲの活性化は、宿主内の関連病原体の存在－すなわち感染を伝え、宿主の免疫系を刺激して感染と闘わせる。ヒトには１０のＴＬＲｓがあり、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３などと名付けられている。

アゴニストによるＴＬＲの活性化－ＴＬＲ７のものが最も研究されている－は、実際の病原体感染以外の様々な病態の治療において、免疫応答を全体的に刺激することにより、ワクチンおよび免疫療法剤の作用に対して良い効果を及ぼし得る。それゆえ、ワクチンアジュバントとしての、またはがん免疫療法におけるエンハンサーとしてのＴＬＲ７アゴニストの使用に大きな関心がある。例えば、ＶａｓｉｌａｋｏｓａｎｄＴｏｍａｉ２０１３，Ｓａｔｏ－Ｋａｎｅｋｏｅｔａｌ．２０１７，Ｓｍｉｔｓｅｔａｌ．２００８，およびＯｔａｅｔａｌ．２０１９を参照されたい。

ＴＬＲ７は、エンドソームの膜上に位置する細胞内受容体であり、一本鎖ＲＮＡウイルスと関連するＰＡＭＰsを認識する。その活性化は、ＩＦＮαおよびＩＦＮβなどのＩ型インターフェロンの分泌を誘導する（Ｌｕｎｄｅｔａｌ．２００４）。ＴＬＲ７には２つの結合部位があり、一つは一本鎖ＲＮＡリガンド（Ｂｅｒｇｈｏｅｆｅｒｅｔａｌ．２００７）との、一つはグアノシンなどの小分子（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．２０１６）との結合部位である。

ＴＬＲ７は、グアノシン様合成アゴニスト、例えば１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン骨格を基にしているイミキモド、レシキモド、およびガーディキモド（gardiquimod）などに結合し、活性化されることがある。小分子ＴＬＲ７アゴニストのレビューについてはＣｏｒｔｅｚａｎｄＶａ２０１８を参照されたい。

ベサトリモドが挙げられるように、プテリジノン分子骨格を基にする合成ＴＬＲ７アゴニストもまた既知である（Ｄｅｓａｉｅｔａｌ．２０１５）。

プリン様骨格を基にする他の合成ＴＬＲ７アゴニストは開示されており、しばしば下記の一般式（Ａ）：
［式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、構造的な可変要素であり、Ｒ”は一般に非置換または置換された芳香またはヘテロ芳香環を含む］で示される。

プリン様骨格を有する生物活性分子および線維症、炎症性疾患、がん、または病原性感染などの病態の治療におけるその使用の開示には：Ａｋｉｎｂｏｂｕｙｉｅｔａｌ．２０１５および２０１６；Ｂａｒｂｅｒｉｓｅｔａｌ．２０１２；Ｃａｒｓｏｎｅｔａｌ．２０１４；Ｄｉｎｇｅｔａｌ．２０１６、２０１７ａ、および２０１７ｂ；Ｇｒａｕｐｅｅｔａｌ．２０１５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏｅｔａｌ．２００９；Ｈｅｅｔａｌ．２０１９ａおよび２０１９ｂ；Ｈｏｌｌｄａｃｋｅｔａｌ．２０１２；Ｉｓｏｂｅｅｔａｌ．２００９ａおよび２０１２；Ｐｏｕｄｅｌｅｔａｌ．２０１９ａおよび２０１９ｂ；Ｐｒｙｄｅ２０１０；ならびにＹｏｕｎｇｅｔａｌ．２０１９が挙げられる。

基Ｒ”は、ピリジルであり得る：Ｂｏｎｆａｎｔｉｅｔａｌ．２０１５ａおよび２０１５ｂ；Ｈａｌｃｏｍｂｅｔａｌ．２０１５；Ｈｉｒｏｔａｅｔａｌ．２０００；Ｉｓｏｂｅｅｔａｌ．２００２、２００４、２００６、２００９ａ、２００９ｂ、２０１１、および２０１２；Ｋａｓｉｂｈａｔｌａｅｔａｌ．２００７；Ｋｏｇａ－Ｙａｍａｋａｗａｅｔａｌ．２０１３；Ｍｕｓｍｕｃａｅｔａｌ．２００９；Ｎａｋａｍｕｒａ２０１２；Ｏｇｉｔａｅｔａｌ．２００７；ならびにＹｕｅｔａｌ．２０１３。

式（Ａ）の６，５縮合環系－ピリミジン６員環とイミダゾール５員環が縮合した－が改変された関連分子の開示がある。（ａ）Ｄｅｌｌａｒｉａｅｔａｌ．２００７、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．２０１０および２０１２、ならびにＰｉｌａｔｔｅｅｔａｌ．２０１７は、ピリミジン環がピリジン環に置換された化合物を開示する。（ｂ）Ｃｈｅｎｅｔａｌ．２０１１、Ｃｏｅｅｔａｌ．２０１７、Ｐｏｕｄｅｌｅｔａｌ．２０２０ａおよび２０２０ｂ、ならびにＺｈａｎｇｅｔａｌ．２０１８は、イミダゾール環がピラゾール環に置換された化合物を開示する。（ｃ）Ｃｏｒｔｅｚｅｔａｌ．２０１７および２０１８；Ｌｉｅｔａｌ．２０１８；ならびにＭｃＧｏｗａｎｅｔａｌ．２０１６ａ、２０１６ｂ、および２０１７は、イミダゾール環がピロール環に置換された化合物を開示する。

Ｂｏｎｆａｎｔｉｅｔａｌ．２０１５ｂおよび２０１６ならびにＰｕｒａｎｄａｒｅｅｔａｌ．２０１９は、プリン部分の２つの環が大環状分子により架橋されたＴＬＲ７モジュレーターを開示する。

ＴＬＲ７アゴニストは、パートナー分子に結合されることがあり、それは、例えば、リン脂質、ポリ（エチレングリコール）（「ＰＥＧ」）、抗体、または別のＴＬＲ（一般にＴＬＲ２）であり得る。代表的な開示には：Ｃａｒｓｏｎｅｔａｌ．２０１３、２０１５、および２０１６、Ｃｈａｎｅｔａｌ．２００９および２０１１、Ｃｏｒｔｅｚｅｔａｌ．２０１７，Ｇａｄｄｅｔａｌ．２０１５、Ｌｉｏｕｘｅｔａｌ．２０１６，Ｍａｊｅｔａｌ．２０１５、Ｖｅｒｎｅｊｏｕｌｅｔａｌ．２０１４、ならびにＺｕｒａｗｓｋｉｅｔａｌ．２０１２が挙げられる。主な結合部位は、式（Ａ）のＲ”基である。

Ｊｅｎｓｅｎｅｔａｌ．２０１５は、ＴＬＲ７アゴニストの送達のためのカチオン性脂質ビークルの使用を開示する。

レシキモドなどのいくつかのＴＬＲ７アゴニストは、ＴＬＲ７/ＴＬＲ８デュアルアゴニストである。例えば、Ｂｅｅｓｕｅｔａｌ．２０１７、Ｅｍｂｒｅｃｈｔｓｅｔａｌ．２０１８、Ｌｉｏｕｘｅｔａｌ．２０１６、およびＶｅｒｎｅｊｏｕｌｅｔａｌ．２０１４を参照されたい。

筆頭著者または発明者および発行年により本明細書に引用される文書についての完全な引用が、本明細書の末尾に記載される。

本明細書は、１Ｈ－ピラゾロ［４，３ｄ］ピリミジン芳香族系を有する、ＴＬＲ７アゴニストとしての活性がある化合物に関する。

一つの態様において、下記の式（Ｉ）：
［式中、
Ｗは、Ｈ、ハロ、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＣＮ、（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）ＯＨ、
であり；
各Ｘは、独立してＮまたはＣＲ^２であり；
Ｘ^１は、Ｏ、ＣＨ_２、ＮＨ、Ｓ、またはＮ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）であり；
Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
（Ｃ_２－Ｃ_５アルケニル）、
（Ｃ_１－Ｃ_８アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、
（Ｃ_１－Ｃ_８アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
（Ｃ_２－Ｃ_８アルカンジイル）ＯＨ、
（Ｃ_２－Ｃ_８アルカンジイル）Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、
（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（５－６員ヘテロアリール）、
（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１フェニル、
（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）ＣＦ_３、
（Ｃ_２－Ｃ_８アルカンジイル）Ｎ［Ｃ（＝Ｏ）］（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、
または
（Ｃ_２－Ｃ_８アルカンジイル）ＮＲ^ｘＲ^ｙであり；
各Ｒ^２は、独立してＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｓ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、
ＳＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、Ｏ（Ｃ_３－Ｃ_４シクロアルキル）、
Ｓ（Ｃ_３－Ｃ_４シクロアルキル）、ＳＯ_２（Ｃ_３－Ｃ_４シクロアルキル）、
Ｃ_３－Ｃ_４シクロアルキル、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、または［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１ＮＲ^ｘＲ^ｙであり；
Ｒ^３は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、
ＮＨ_２、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）_２、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｎ（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）_２、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_８ビシクロアルキル）、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、
Ｎ［Ｃ_１－Ｃ_３アルキル］Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、
ＮＨ（ＳＯ_２）（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
ＮＨ（ＳＯ_２）（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ（ＳＯ_２）（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
ＮＨ（ＳＯ_２）（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
６員の芳香族もしくはヘテロ芳香族部分、
５員のヘテロ芳香族部分、または
下記の構造：
を有する部分であり；
Ｒ^４は、ＮＨ_２、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）_２、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｎ（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）_２、
または
下記の構造：
を有する部分であり；
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_５アルキル、Ｃ_２－Ｃ_５アルケニル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、
ハロ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）ＯＨ、
（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、フェニル、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、５もしくは６員のヘテロアリール、
であり；
Ｒ^６は、ＮＨ_２、
（ＮＨ）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）_２、
（ＮＨ）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
（ＮＨ）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
（ＮＨ）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｎ（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）_２、
または
下記の構造：
を有する部分であり；
Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、独立してＨまたはＣ_１－Ｃ_３アルキルであるか、あるいはＲ^ｘおよびＲ^ｙは、それらに結合している窒素と結合して３から７員のヘテロ環を形成し；
ｍは、０または１であり；
ｎは、１、２、または３であり；
ｐは、０、１、２、または３であり；
ここでＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６において、
アルキル、シクロアルキル、アルカンジイル、ビシクロアルキル、スピロアルキル、環状アミン、６員の芳香族もしくはヘテロ芳香族部分、５員のヘテロ芳香族部分または下記の式：
で示される部分は、
ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、
Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＳＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＮＲ^ｘＲ^ｙ、
（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）
から選択される一つ以上の置換基で適宜置換されてもよく；
アルキル、アルカンジイル、シクロアルキル、ビシクロアルキル、スピロアルキル、または下記の式：
で示される部分は、
Ｏ、ＳＯ_２、ＣＦ_２、Ｃ（＝Ｏ）、ＮＨ、
Ｎ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、
Ｎ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１ＣＦ_３、
または
Ｎ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_５シクロアルキル）
に置換されるＣＨ_２基を有してもよい］
で示される構造を有する化合物が提供される。

本明細書に開示される化合物は、ＴＬＲ７アゴニストとしての活性を有し、いくつかは、目的とする作用の標的組織または臓器への標的化送達のための抗体に結合されることがある。それらはＰＥＧ化され、その医薬特性が調節されることもある。

本明細書に開示される化合物、またはその複合体あるいはそのＰＥＧ化誘導体は、免疫系の活性化による治療に適している病態を患う患者に対して、治療的有効量の、そのような化合物またはその複合体あるいはそのＰＥＧ化誘導体を、特にワクチンまたはがん免疫療法剤と併用して投与することによって、そのような患者を治療するのに使用され得る。

化合物
式（Ｉ）の一つの実施形態において、ｍは０である。

一つの態様において、式（Ｉ）中、下記の部分：
で、１つのＸはＮであり、残りのＸはＣＲ^２である。

もう一つの態様において、式（Ｉ）中、下記の部分：
は、
である。

もう一つの態様において、式（Ｉ）中、下記の部分：
は、
であって、式中、１つのＸはＮであり、残りの２つはＣＨである。

一つの態様において、Ｗは、
または
である。

一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉ’）で示され、式中、Ｒ^１、Ｒ^５、Ｘ、およびＷは、式（Ｉ）について定義される通りである：

一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉａ）で示され、式中、Ｒ^１、Ｒ^５、およびＷは、式（Ｉ）について定義される通りである：

もう一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉｂ）で示され、式中、Ｒ^１、Ｒ^５、およびＲ^３は、式（Ｉ）について定義される通りである：

代表的なＲ^２の実施形態には、Ｈ、ＯＭｅ、ＯＣＨＦ_２、およびＯＣＦ_３が挙げられ、ＯＭｅが好ましい実施形態である。

式（Ｉｂ）で示される化合物の一つの実施形態において、Ｒ^３は、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）_２、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｎ（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）_２、
Ｎ［Ｃ_１－Ｃ_３アルキル］（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、
または
下記の構造：
を有する環状アミン部分である。

式（Ｉｂ）で示される化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ^３は、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
または
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）
である。

代表的なＲ^５の実施形態には、Ｈ、Ｍｅ、ＯＭｅ、ＣＨ_２ＯＨ、シクロプロピル、Ｆ、Ｃｌ、およびＣＦ_３が挙げられ、Ｈが好ましい実施形態である。

式（Ｉｂ）で示される化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ^３は、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_８ビシクロアルキル）、
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
または
Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）
である。

もう一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉｃ）で示され、式中、Ｒ^３およびＲ^５は、式（Ｉ）について定義される通りである：

もう一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉｄ）で示され、式中、Ｒ^３およびＲ^５は、式（Ｉ）について定義される通りである：

もう一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉｅ）で示され、式中、Ｒ^１、Ｒ^４およびＲ^５は、式（Ｉ）について定義される通りである：

もう一つの態様において、本開示は、下記の式（Ｉｆ）：
［式中、
Ｒ^１は、
であり；
Ｗは、
である］
で示される構造を有する化合物を提供する。

もう一つの態様において、本開示は、下記の式（Ｉｇ）：
［式中、Ｒ^１およびＲ^３は、式（Ｉ）について定義される通りである］
で示される構造を有する化合物を提供する。

もう一つの態様において、本開示は、下記の式（Ｉｈ）：
［式中、１つのＸはＮであり、残りの２つはＣＨであり、Ｒ^１およびＲ^３は、式（Ｉ）について定義される通りである］
で示される構造を有する化合物を提供する。

基Ｒ^１の例は、
である。

好ましくは、Ｒ^１は、
からなる上記の群（「好ましいＲ^１基」)から選択される。

代表的な基Ｒ^３には、
が挙げられる。

もう一つの態様において、
Ｒ^３は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、
ＮＨ_２、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）、
Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_５アルキル）_２、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_４－Ｃ_１０ビシクロアルキル）、
ＮＨ［Ｃ（＝Ｏ）］_０－１（Ｃ_１－Ｃ_４アルカンジイル）_０－１（Ｃ_５－Ｃ_１０スピロアルキル）、
Ｎ（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）_２、
Ｎ［Ｃ_１－Ｃ_３アルキル］Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、
６員の芳香族もしくはヘテロ芳香族部分、
５員のヘテロ芳香族部分、または
下記の構造：
を有する部分である。

好ましい基Ｒ^３は、
である。

代表的な基Ｒ^４には：
が挙げられる。

好ましいＲ^４は、
である。

代表的な基Ｒ^５は、Ｈ、
である。

好ましくは、Ｒ^５は、ＨまたはＭｅである。

例示であって限定ではないが、下記の式：
で示される部分には、
が挙げられる。

例示であって限定ではないが、スピロアルキル基には、
が挙げられる。

例示であって限定ではないが、ビシクロアルキル基には、
が挙げられる。

一つの態様において、Ｗは、好ましくは式（Ｉ’）、（Ｉａ）、（Ｉｆ）、または（Ｉｇ）と組み合わせて、
、特に
であり、具体的な代表的実施形態は、
である。

一つの態様において、Ｗは、好ましくは式（Ｉ’）、（Ｉａ）、（Ｉｆ）、または（Ｉｇ）と組み合わせて、
であり、具体的な代表的実施形態は、
である。

一つの態様において、本開示の化合物は、下記の式（Ｉｆ）：
［式中、
Ｒ^１は、
であり、
Ｗは、
である］
で示される。

上記の代表的なアルキル、シクロアルキル、スピロアルキル、ビシクロアルキルなどの基および下記の式：
で示される部分のいくつかは、任意の置換基を有する、および／または上記の「発明の概要」に記載されるように、Ｏ、ＳＯ_２などに置換される一つ以上のＣＨ_２基を適宜有してもよい。

式（Ｉａ）によって本明細書に開示される化合物の具体例を以下の表Ａ１に示す。表は、以下に提供される手順を通じて割り出された、生物学的活性：ヒトＴＬＲ７アゴニズムレポーターアッセイおよび／またはヒト全血におけるＣＤ６９遺伝子の誘導に関するデータも提供する。最も右の列に解析データ（マススペクトル、ＬＣ／ＭＳ保持時間、およびＮＭＲ）を記載する。一つの実施形態において、本開示の化合物は、（ａ）１，０００ｎＭ未満のヒトＴＬＲ７（ｈＴＬＲ７）レポーターアッセイＥＣ_５０値および（ｂ）１，０００ｎＭ未満のヒト全血（ｈＷＢ）ＣＤ６９誘導ＥＣ_５０値を有する。（アッセイが複数回行われた場合、報告される値は平均値である。）

本開示のさらなる化合物をその生物学的特性および解析データとともに表Ａ２に示す。

医薬組成物および投与
もう一つの態様において、薬学的に許容される担体または添加剤とともに製剤化される、本明細書に開示されるような化合物、またはその複合体を含む医薬組成物が提供される。医薬組成物は、一つ以上の追加の薬学的活性成分、例えば生物学的製剤または小分子薬剤などを適宜含んでもよい。医薬組成物は、別の治療剤、特に抗がん剤との併用療法で投与され得る。

医薬組成物は、一つ以上の添加剤を含むことがある。使用されることがある添加剤には、担体、界面活性剤、増粘または乳化剤、固体結合剤、分散または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、風味剤、コーティング、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、防腐剤、等張化剤、およびそれらの組み合わせが挙げられる。適当な添加剤の選択および使用は、Gennaro編，Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第２０版（Lippincott Williams ＆ Wilkins 2003）に記載されている。

好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適する。投与経路に応じて、活性化合物は、物質でコーティングされ、化合物を不活化することがある酸および他の自然条件の作用から保護されることがある。「非経口投与」という語句は、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与方法を意味し、例として、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射ならびに注入が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、医薬組成物は、局所、上皮または粘膜投与経路などの非非経口経路（non-parenteral route）で、例えば、鼻腔内、経口的、経膣的、経直腸的、舌下または局所的に投与され得る。

医薬組成物は、滅菌水溶液または滅菌水分散液の形であり得る。それらは、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度を達成するのに適当な他の秩序構造中で製剤化されることもある。組成物は、投与前に水で再調製する凍結乾燥物の形でも提供され得る。

担体物質と結合して単一剤形を生成し得る活性成分の量は、治療を受ける患者および特定の投与方法によって異なり、一般的には治療効果をもたらす組成物の量であろう。一般的に、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の約０．０１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約０．１パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは、薬学的に許容される担体との併用で活性成分の約１パーセントから約３０パーセントに及ぶであろう。

投与計画は、治療反応を提供するように調整される。例えば、単回のボーラス投与を行ってもよく、用量をいくつかに分けて時間をかけて投与してもよく、状況の緊急性に応じて比例的に用量を増減させてもよい。投与の簡便性および用量の均一性にとって、用量単位形態で非経口組成物を製剤化することは特に有利である。「用量単位形態」は、治療を受ける患者に対する単一の用量として適当な、物理的に別々の単位を指し；各単位には、望ましい治療反応をもたらすように計算された、予め決められた量の活性化合物が、必要な医薬担体とともに含まれる。

用量は、宿主の体重に対して、約０.０００１から１００ｍｇ/ｋｇ、より一般的には０．０１から５ｍｇ/ｋｇに及ぶ。例えば、用量は、０．３ｍｇ/ｋｇ体重、１ｍｇ/ｋｇ体重、３ｍｇ/ｋｇ体重、５ｍｇ/ｋｇ体重または１０ｍｇ/ｋｇ体重であってもよく、１－１０ｍｇ/ｋｇ、あるいは０．１から５ｍｇ/ｋｇの範囲内であってもよい。代表的な治療レジメンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１か月に１回、３か月に１回、または３から６か月に１回の投与である。好ましい投与計画には、以下の投薬スケジュール：（ｉ）４週間ごとに６用量を投与し、次に３か月ごとに投与；（ｉｉ）３週間ごとに投与；（ｉｉｉ）３ｍｇ/ｋｇ体重で１回投与し、続いて１ｍｇ/ｋｇ体重で３週間ごとに投与のうちの一つを用いて、１ｍｇ/ｋｇ体重または３ｍｇ/ｋｇ体重で静脈内投与する方法が挙げられる。いくつかの方法において、用量は、約１－１０００μｇ/ｍＬの、いくつかの方法においては約２５－３００μｇ/ｍＬの血漿中抗体濃度を達成するように調整される。

本発明の化合物の「治療有効量」は、好ましくは、疾患の症状の重症度の減少、疾患の無症状期間の回数および持続期間の上昇、または疾患の苦痛に起因する機能障害もしくは身体障害の予防をもたらす。例えば、がんを有する患者の治療については、「治療有効量」は、治療を受けていない患者と比較して、好ましくは少なくとも約20%、より好ましくは少なくとも約40%、さらに好ましくは少なくとも約60%、さらに好ましくは少なくとも約80%、腫瘍増殖を阻害する。治療有効量の治療化合物は、腫瘍の大きさを減少させるか、そうでなければ、患者における症状を寛解させることがあり、患者は、一般にはヒトであるが、別の哺乳動物であってもよい。２つ以上の治療剤が併用療法で投与される場合、「治療有効量」は、個々の薬剤としてではなく、全体としての組み合わせの有効性をいう。

医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムなどの放出制御または徐放性製剤であり得る。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などが使用され得る。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R. Robinson編，Marcel Dekker社，ニューヨーク，1978を参照されたい。

治療組成物は、（１）無針皮下注射器具；（２）マイクロ注入ポンプ；（３）経皮デバイス；（４）注入デバイス；および（５）浸透圧装置などの医療機器を用いて投与され得る。

ある実施形態において、医薬組成物は、インビボにおいて適切な分布を確保するように製剤化されることがある。例えば、本発明の治療化合物が血液脳関門を通過することを確実にするために、それらはリポソーム中で製剤化されることがあり、リポソームは、標的化部分をさらに含み、特定の細胞または臓器への選択的輸送を増強することがある。

産業上の利用可能性および用途
本明細書に開示されるＴＬＲ７アゴニスト化合物は、ＴＬＲ７の活性化により寛解し得る疾患または病態の治療のために使用され得る。

一つの実施形態において、ＴＬＲ７アゴニストは、抗がん免疫療法剤－別名を免疫抗がん剤という－と組み合わせて使用される。抗がん免疫療法剤は、がん細胞を攻撃し、破壊する体の免疫系を刺激することにより、特にＴ細胞の活性化を介して効果を発揮する。免疫系には、それによる正当な標的細胞への攻撃、およびそれによる健康で正常な細胞への攻撃の抑止のバランスの維持を助ける、多数のチェックポイント（調節）分子がある。いくつかは刺激因子（上方調節因子）であり、それらの関与はＴ細胞活性化を促進し、免疫応答を増強するということを意味する。他は阻害因子（下方制御因子またはブレーキ）であり、それらの関与はＴ細胞活性化を阻害し、免疫応答を弱めるということを意味する。アゴニスト免疫療法剤の、刺激性チェックポイント分子への結合は、後者の活性化およびがん細胞に対する免疫応答の増強をもたらし得る。交換的に、アンタゴニスト免疫療法剤の、抑制性チェックポイント分子への結合は、後者による免疫系の下方制御を防ぎ、がん細胞に対する活発な応答の維持を助け得る。刺激性チェックポイント分子の例は、B7－1、B7－2、CD28、4－1BB （CD137）、4－1BBL、ICOS、CD40、ICOS－L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、ＤＲ３およびCD28Hである。抑制性チェックポイント分子の例は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、PD－L2、LAG－3、TIM－3、ガレクチン９、CEACAM－1、BTLA、CD69、ガレクチン－1、CD113、ＧＰＲ５６、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、ＬＡＩＲ１、TIM－1、CD96およびTIM－4である。

どちらの抗がん免疫療法剤の作用機序においても、その有効性は、ＴＬＲ７の活性化などの全身的な免疫系の上方制御により上昇し得る。それゆえ、一つの実施形態において、本明細書は、がんを患う患者に、抗がん免疫療法剤および本明細書に開示されるようなＴＬＲ７アゴニストの治療的に有効な組み合わせを投与することを特徴とする、がんの治療方法を提供する。投与のタイミングは、同時でも、連続的でも、交互であってもよい。投与方法は、全身的であっても、局所的であってもよい。ＴＬＲ７アゴニストは、対象を絞った方法で、複合体を用いて送達されることがある。

上記のような併用療法により治療され得るがんには、急性骨髄白血病、副腎皮質癌、カポジ肉腫、リンパ腫、肛門癌、虫垂癌、奇形／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、子宮頸癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄増殖性腫瘍、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、胆管癌、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、感覚神経芽腫、ユーイング肉腫、眼癌、卵管癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、へアリー細胞白血病、頭頸部癌、心臓癌、肝臓癌、下咽頭癌、膵臓癌、腎臓癌、喉頭癌、慢性骨髄性白血病、口唇および口腔癌（lip and oral cavity cancer）、肺癌、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌（mouth cancer）、口腔癌（oral cancer）、骨肉腫、卵巣癌、陰茎癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、唾液腺癌、皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、精巣癌、咽喉癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、膣癌、および外陰癌が挙げられる。

本明細書に開示されるような併用療法に使用され得る抗がん免疫療法剤には、AMG 557、AMP－224、アテゾリズマブ、アベルマブ、BMS 936559、セミプリマブ、CP－870893、ダセツズマブ、デュルバルマブ、エノブリツズマブ、ガリキシマブ、IMP321、イピリムマブ、ルカツムマブ、MEDI－570、MEDI－6383、MEDI－6469、ムロモナブ－CD3、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、スパルタリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ウトミルマブ、バルリルマブ、ボンレロリズマブが挙げられる。それらの代替名（商標名、旧名、研究コード、または同義語）およびそれぞれの標的チェックポイント分子を以下の表Ｂに示す。

ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法の一つの実施形態において、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。がんは、肺癌（非小細胞肺癌を含む）、膵臓癌、腎臓癌、頭頸部癌、リンパ腫（ホジキンリンパ腫を含む）、皮膚癌（黒色腫およびメルケル皮膚癌を含む）、尿路上皮癌（膀胱癌を含む）、胃癌、肝細胞癌、または結腸直腸癌であり得る。

ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法のもう一つの実施形態において、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、好ましくはイピリムマブである。

ＴＬＲ７アゴニストとの併用療法のもう一つの実施形態において、抗がん免疫療法剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、好ましくはニボルマブまたはペムブロリズマブである。

本明細書に開示されるＴＬＲ７アゴニストは、ワクチンアジュバントとしても有用である。

本発明の実施は、限定ではなく実例として提供される以下の実施例を参照することによりさらに理解され得る。

解析手順
ＮＭＲ
プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを得るために以下の条件を用いた：溶媒および内部標準としてＤＭＳＯ－ｄ６またはＣＤＣｌ_３のいずれかを用いて、４００Ｍｚまたは５００ＭｈｚのＢｒｕｋｅｒ装置のいずれかでＮＭＲスペクトルを得た。ＡＤＣＬａｂｓのＡＣＤＳｐｅｃｔｒｕｓバージョン２０１５－０１またはＭｅｓｔＲｅＮｏｖａソフトウェアのいずれかを用いることにより、生のＮＭＲデータを解析した。

化学シフトは、内部のテトラメチルシラン（ＴＭＳ）から、または重水素化ＮＭＲ溶媒により推測されるＴＭＳの位置を基準に、低磁場側が百万分率（ｐｐｍ）で報告される。明らかな多重度は：一重線－ｓ、二重線－ｄ、三重線－ｔ、四重線－ｑ、または多重線－ｍとして報告する。広幅化を示すピークをｂｒとしてさらに表す。積分値は近似値である。積分強度、ピーク形状、化学シフトおよび結合定数は、溶媒、濃度、温度、ｐＨ、および他の因子に依存し得るということに注意すべきである。さらに、ＮＭＲスペクトルにおいて水または溶媒ピークと重複するか、または交換が起こるピークは、信頼できる積分強度を提供しないことがある。場合によっては、ＮＭＲスペクトルは、水ピーク抑制を用いて得られることがあるが、重複するピークが目に見えなくなるか、またはその形状および／もしくは積分値が変化することがある。

液体クロマトグラフィー
以下のプレパラティブおよび／または分析（ＬＣ／ＭＳ）液体クロマトグラフィー法を用いた。

ＬＣ／ＭＳ条件Ａ：カラム：Waters XBridge C18、2.1 mm x 50 mm、1.7 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；温度：５０℃；グラジエント：３分かけて０％Ｂから１００％Ｂ、次いで１００％Ｂで０．５０分保持；流速：１ｍＬ/分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）

ＬＣ／ＭＳ条件Ｂ：カラム：Waters XBridge C18、2.1 mm x 50 mm、1.7 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；温度：５０℃；グラジエント：３分かけて０％Ｂから１００％Ｂ、次いで１００％Ｂで０．５０分保持；流速：１ｍＬ/分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）

ＬＣ／ＭＳ条件Ｃ：カラム：Waters XBridge C18、2.1 mm x 50 mm、1.7 μｍ粒子；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル；移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有水；温度：３７℃；グラジエント：３分かけて０％Ｂから１００％Ｂ、次いで１００％Ｂで０．５０分保持；流速：１ｍＬ/分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２４０ｎｍ）

ＬＣ／ＭＳ条件Ｄ：カラム：Waters XBridge C18、2.1 mm x 50 mm、1.7 μｍ粒子；移動相Ａ：０．１％ギ酸含有アセトニトリル；移動相Ｂ：０．１％ギ酸含有水；温度：３７℃；グラジエント：２．５分かけて０％Ｂから１００％Ｂ、次いで１００％Ｂで０．５０分保持；流速：１ｍＬ/分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２４０ｎｍ）

ＬＣ／ＭＳ条件Ｅ：カラム：Waters X-Bridge BEH C18 XP（50x2.1 mm）2.5 μｍ；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；温度：５０℃；グラジエント：３分かけて０－１００％Ｂ；流速：１.１ｍＬ/分）

合成－一般的な手順
一般的に、本明細書に開示される手順は、ピラゾロピリミジン環系の１Ｈまたは２Ｈ位置でアルキル化された位置異性体の混合物をもたらす（それぞれＮ１およびＮ２位置異性体とも呼ばれ、アルキル化された窒素に言及している）。簡略化のために、Ｎ２位置異性体は便宜上示されないが、初期に生成される混合物中に存在し、例えばプレパラティブＨＰＬＣにより、後で分離されるということが理解されるべきである。

位置異性体の混合物を合成の初期段階に分離し、１Ｈ位置異性体を用いて残りの合成段階を実行してもよく、あるいは、必要に応じて、位置異性体の混合物を用いて合成を進め、後期に分離を実行してもよい。

本開示の化合物は、有機合成化学の当業者に周知の多数の方法により調製され得る。これらの方法は、以下に記載される方法、またはそのバリエーションを含む。好ましい方法には、下記のスキームに記載される方法が挙げられるが、これらに限らない。スキームは、一般的であるように意図されているが、場合によっては、特定の基（例えば、メチルエステルまたはメトキシ）が便宜上描かれる。
スキーム１

Ｒ^ａは、スキーム１およびそれが登場する他の事例において、例えば、
、または他の適当な部分であり得る。
Ｒ^ｂＮＨＲ^ｃは、スキーム１およびそれが登場する他の事例において、第一級または第二級アミンである。Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、および／またはＲ^ｃは、合成過程の間の適切な時点で取り除かれる保護基により覆われた官能基を有してもよい。

化合物８は、上記のスキーム１に図示されるような合成順序により調製され得る。ＮＢＳとの反応により、ピラゾロピリミジン１を臭化物２に変換する。メチル 3－ブロモメチル－4－メトキシベンゾエートでアルキル化すると、化合物３が得られる。化合物３をＨ_２下で水素化すると化合物４が得られる。ＬｉＡｌＨ_４で化合物４をアルコール５に還元する。アルコール５をＮａＯＨで処理するとアミン６が得られる。アミン６の、ＳＯＣｌ_２との反応により、塩化物７が得られる。スキーム１の最後のステップにおいて、化合物８は、Ｒ^ｂＮＨＲ^ｃで塩化物７をアルキル化することにより調製される。
スキーム２

上記のスキーム２は、中間体５を調製する別法を示し、メチル 4－アミノ－1H－ピラゾール－5－カルボキシレート（ＣＡＳ登録番号９２３２８３－５４－９）および1,3－ビス（メトキシカルボニル）－2－メチル－2－チオシュードウレア（ＣＡＳ登録番号３４８４０－２３－８）をカップリングすることにより、化合物１０が形成される。ＮＢＳ（N－ブロモスクシンイミド）で化合物１０を臭素化することにより化合物１１が得られる。メチル 3－ブロモメチル－4－メトキシベンゾエートでアルキル化すると、化合物１２が得られる。化合物１２をＨ_２下で水素化すると化合物１３が得られる。ＬｉＡｌＨ_４との反応により、化合物１３はアルコール１４に還元される。ＢＯＰおよびＤＢＵ存在下で化合物１４がＲ^ａＮＨ_２と反応することにより、中間体５が合成される。
スキーム３

上記のスキーム３は、中間体４を調製する別法を示し、メチル 4－ニトロ－1H－ピラゾール－5－カルボキシレート１５（ＣＡＳ登録番号１３４５５１３－９５－２）をメチル 3－ブロモメチル－4－メトキシベンゾエートでアルキル化することにより、化合物１６が形成される。化合物１６をＨ_２下で水素化すると化合物１７が得られる。化合物１７の、1,3－ビス（メトキシカルボニル）－2－メチル－2－チオシュードウレアとの反応により化合物１８が得られる。ＢＯＰおよびＤＢＵ存在下で化合物１８がＲ^ａＮＨ_２と反応することにより、中間体４が合成される。
スキーム４

化合物１は、メチル 3－ブロモメチル－4－メトキシベンゾエートで直接アルキル化され、中間体４を形成することがある。しかしながら、この方法では、Ｎ１異性体対Ｎ２異性体の比は、一般的にあまり好ましくない。
スキーム５

上記のスキーム５は、中間体４を調製する別法を示す。ＮＩＳ（N－ヨードスクシンイミド）またはＮＣＳ（N－クロロスクシンイミド）で、ピラゾロピリミジン１をヨウ化物または塩化物１９に変換する。メチル 3－ブロモメチル－4－メトキシベンゾエートでアルキル化すると、化合物２０が得られる。化合物２０をＨ_２下で水素化すると化合物４が得られる。
スキーム６

上記のスキーム６は、生成物８を調製する別法を示す。化合物５の、ＳＯＣｌ_２との反応により、塩化物２１が得られる。塩化物７をＲ^ｂＮＨＲ^ｃで処理すると化合物２２が得られる。化合物２２をＮａＯＨで脱保護することにより生成物８が得られる。
スキーム７

上記のスキーム７は、生成物８を調製する別法を示す。化合物１４の、ＳＯＣｌ_２との反応により、塩化物２３が得られる。塩化物７をＲ^ｂＮＨＲ^ｃで処理すると化合物２４が得られる。化合物２４をＮａＯＨで脱保護することにより化合物２５が得られる。ＢＯＰおよびＤＢＵ存在下で化合物２５がＲ^ａＮＨ_２と反応することにより、生成物８が合成される。
スキーム８

化合物２６は、上記のスキーム８に図示されるように、Ｒ^ｃがＨである場合において、化合物８を酸Ｒ^ｄＣＯＯＨとカップリングさせることにより調製され得る。
スキーム９

化合物２８は、上記のスキーム９に図示される合成順序により調製され得る。ＮａＯＨを用いて化合物４を加水分解し、酸２７を得た。化合物２７をＲ^ｂＮＨＲ^ｃとカップリングすることで生成物２８が得られる。
スキーム１０

化合物２９は、上記のスキーム１０に図示されるように、塩化物７の、アルコールＲ^ｇＯＨとの反応により得られる。
スキーム１１

化合物３２は、上記のスキーム１１に図示される合成順序により調製され得る。化合物３０は、化合物２のアルキル化により得られる。化合物３０の脱保護により化合物３１が得られる。化合物３１をＮａＯＨで加水分解することにより、生成物３２が得られる。
スキーム１２

化合物３６は、上記のスキーム１２に図示される合成順序により調製され得る。化合物２のアルキル化により、化合物３３が得られる。化合物３３をＨ_２下で水素化すると化合物３４が得られる。化合物３４は、Ｒ^ｉが例えば低級アルキルであるグリニャール試薬Ｒ^ｉＭｇＢｒと反応することで、化合物３５に変換される。ＮａＯＨを用いて化合物３５を脱保護することにより、生成物３６が得られる。

当業者は、上記の一般的な手順を参照し、当技術分野で既知の試薬、溶媒および条件を利用するか、または変更すべきところは変更して下記の具体例の手順を改変することにより、本開示の化合物を作成することができるであろう。

合成－具体例
上記の内容をさらに説明するために、以下の限定されない代表的な合成スキームが含まれる。請求項の範囲内にあるこれらの実施例のバリエーションは、当業者の範囲内であり、本開示の範囲内にあると見なされる。読者は、本開示を提供された、関連技術に熟練した当業者であれば、網羅的な実施例がなくとも、本明細書に開示される化合物を調製し、使用することができるであろうということを認識するであろう。

１０１以上の番号がつけられた化合物についての解析データは、表Ａ１または表Ａ２で見つけることができる。
実施例Ａ－化合物１０５

ステップ１．メチル（7－（ブチルアミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（4 g、15.13 mmol）のＤＭＦ（7 mL）懸濁液に、ＮＢＳ（2.96 g、16.65 mmol）のアセトニトリル（14 mL）溶液を添加した。反応混合物をＲＴで１時間攪拌した。水（33 mL）を添加した。沈殿物を濾過により回収した。固体を水（3 x 20 mL）で洗浄し、終夜風乾し、メチル（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３４３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 12.89（s，1H），9.79（s，1H），7.58（s，1H），3.62（s，3H），3.54（q，J = 6.8 Hz，2H），1.68－1.56（m，2H），1.47－1.33（m，2H），0.94（t，J = 7.4 Hz，3H）

ステップ２．Ｃｓ_２ＣＯ_３（5.73 g、17.59 mmol）を、ＤＭＦ（21.72 ml）中、メチル（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（3.32 g、9.67 mmol）およびメチル 3－（ブロモメチル）－4－メトキシベンゾエート（2.279 g、8.79 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をヘキサン中、０－２０％ＥｔＯＡｃで、シリカゲルカラムで精製し、メチル 3－（（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ５２１．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 9.87（s，1H），7.98－7.90（m，1H），7.50（d，J = 2.2 Hz，1H），7.40（t，J = 5.6 Hz，1H），7.16（d，J = 8.7 Hz，1H），5.75（s，2H），3.83（s，3H），3.78（s，3H），3.63（s，3H），3.55（q，J = 6.6 Hz，2H），1.65－1.53（m，2H），1.31－1.23（m，2H），0.87（t，J = 7.4 Hz，3H）

ステップ３．Ｐｄ/Ｃ（10 wt %、30 mg、0.403 mmol）を、メチル 3－（（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.21 g、0.403 mmol）のＭｅＯＨ（5 mL）溶液に、ＲＴで添加した。反応混合物をＨ_２下で終夜攪拌した。触媒を濾過し、濾液を濃縮して、メチル 3－（（7－（ブチルアミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４４３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ 8.77（t，J = 5.8 Hz，1H），8.09（s，1H），7.96（dd、J = 8.8、2.2 Hz，1H），7.77（d，J = 2.1 Hz，1H），6.90（d，J = 8.7 Hz，1H），6.03（s，2H），3.93－3.75（m，11H），1.73－1.63（m，2H），1.31（h，J = 7.6 Hz，2H），0.89（t，J = 7.4 Hz，3H）

ステップ４．ＴＨＦ（1M）（1.549 mL、1.549 mmol）中、ＬｉＡｌＨ_４を、ＴＨＦ（8 mL）中、メチル 3－（（7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（60 mg、0.155 mmol）の混合物に、０℃で添加した。反応混合物をＲＴで３時間攪拌し、メタノールをゆっくりと添加することでクエンチし、ロッシェル塩（1M、3 mL）とともに１時間攪拌した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥さえ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＤＣＭ中、０－２０％ＭｅＯＨで、シリカゲルカラムで精製し、メチル（7－（ブチルアミノ）－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４４３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ 8.08（s，1H），7.78（s，1H），7.33－7.26（m，1H），6.96（d，J = 2.1 Hz，1H），6.89（d，J = 8.5 Hz，1H），5.70（t，J = 5.4 Hz，1H），5.57（s，2H），5.29（s，2H），4.47（s，2H），3.90（s，3H），3.73（s，3H），3.44（td，J = 7.0，5.3 Hz，3H），1.52－1.39（m，2H），1.29－1.15（m，2H），0.87（t，J = 7.4 Hz，3H）

ステップ５．ＮａＯＨ（10M、5.02 mL、50.2 mmol）を、ジオキサン（25 mL）中、メチル（7－（ブチルアミノ）－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（1.04 g、2.509 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物を５４℃で終夜加熱し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＤＣＭ中、０－３０％ＭｅＯＨで、シリカゲルカラムで精製し、化合物１４０を白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３５７．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ６．ＳＯＣｌ_２（0.410 ml、5.61 mmol）を、（3－（（5－アミノ－7－（ブチルアミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノール（0.1 g、0.281 mmol）のＴＨＦ（4.60 ml）溶液に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、N^７－ブチル－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミンを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３７５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ７．ＤＭＦ（0.5 mL）中、N^７－ブチル－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（10 mg、0.027 mmol）および3－メトキシアゼチジン（13.94 mg、0.160 mmol）の混合物を、ＲＴで終夜攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１０５を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

以下の化合物を類似的に調製した：化合物１０１、化合物１０２、化合物１０３、化合物１０４、化合物１０６、化合物１０７、化合物１０８、化合物１０９、化合物１１０、化合物１１１、化合物１１２、化合物１１３、化合物１１４、化合物１１５、化合物１１６、化合物１１７、化合物１１８、化合物１１９、化合物１２０、化合物１２１、化合物１２２、化合物１２３、化合物１２４、化合物１２５、化合物１２６、化合物１２７、化合物１２９、化合物１３０、化合物１３１、化合物１３２、化合物１３３、化合物１３４、化合物１３５、化合物１３７、化合物１３８、化合物１４２、および化合物１５１。
実施例Ｂ－化合物１２８

ＤＩＥＡ（6.07 μl、0.035 mmol）を、ＤＭＦ（1 mL）中、N7－ブチル－1－（2－メトキシ－5－（（メチルアミノ）メチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（化合物132、9.9 mg、0.027 mmol）、3－（ジメチルアミノ）プロパン酸（3.45 mg、0.029 mmol）およびＨＡＴＵ（12.22 mg、0.032 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで終夜攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１２８を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

以下の化合物を類似的に調製した：化合物１３６、化合物１４６、化合物１４７、および化合物１４８。
実施例Ｃ－化合物１３９

ＮａＨ（60%）（6.40 mg、0.160 mmol）を、オキセタン－3－オール（11.86 mg、0.160 mmol）のＤＭＦ（0.5 mL）溶液に、ＲＴで添加した。混合物をＲＴで１０分間攪拌し、N^７－ブチル－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（10 mg、0.027 mmol）のＤＭＦ（0.5 mL）溶液に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。化合物１３９を含むフラクション（収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた）を混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

以下の化合物を類似的に調製した：化合物１４１、化合物１４３、および化合物１４４。
実施例Ｄ－化合物１４５

ステップ１．Ｃｓ_２ＣＯ_３（0.380 g、1.166 mmol）を、ＤＭＦ（2 mL）中、メチル（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.2 g、0.583 mmol）および3－（ブロモメチル）－4－メトキシベンゾニトリル（0.132 g、0.583 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物を週末にかけてＲＴで攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をヘキサン中、０－７０％ＥｔＯＡｃで、シリカゲルカラムで精製し、メチル（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－1－（4－シアノ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４８８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ２．メタノール（2 mL）中、メチル（3－ブロモ－7－（ブチルアミノ）－1－（5－シアノ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（81 mg、0.166 mmol）およびＰｄ/Ｃ１０ｗｔ％（20 mg、0.166 mmol）の混合物を、Ｈ_２下で終夜攪拌した。触媒を濾過した後、濾液を濃縮し、メチル（7－（ブチルアミノ）－1－（4－シアノ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ３．ジオキサン（1.5 mL）中、メチル（7－（ブチルアミノ）－1－（5－シアノ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（42.6 mg、0.104 mmol）および１０ＮＮａＯＨ（0.208 mL、2.081 mmol）の混合物を、５４℃で終夜攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１４５を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。
実施例Ｅ－化合物１４９

ステップ１．ＤＭＦ（30 mL）中、メチル 3－（ブロモメチル）－4－メトキシベンゾエート（3.6 g、13.89 mmol）、メチル 4－ニトロ－1H－ピラゾール－5－カルボキシレート（2.377 g、13.89 mmol）およびＫ_２ＣＯ_３（2.496 g、18.06 mmol）の混合物をＲＴで３時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をヘキサン中、０－５０％ＥｔＯＡｃで、シリカゲルカラムで精製し、メチル 1－（2－メトキシ－5－（メトキシカルボニル）ベンジル）－4－ニトロ－1H－ピラゾール－5－カルボキシレートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３５０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 8.38（s，1H），7.98（dd，J = 8.6，2.2 Hz，1H），7.89（d，J = 2.2 Hz，1H），7.15（d，J = 8.7 Hz，1H），5.52（s，2H），3.98（s，3H），3.82（d，J = 5.1 Hz，6H）

ステップ２．ＴＨＦ（9 mL）およびＭｅＯＨ（9 mL）中、メチル 1－（2－メトキシ－5－（メトキシカルボニル）ベンジル）－4－ニトロ－1H－ピラゾール－5－カルボキシレート（1 g、2.86 mmol）およびギ酸アンモニウム（0.903 g、14.31 mmol）の混合物に、Ｚｎ（0.599 g、9.16 mmol）をＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで１時間攪拌した。固体を濾過した。濾液を濃縮し、メチル 4－アミノ－1－（2－メトキシ－5－（メトキシカルボニル）ベンジル）－1H－ピラゾール－5－カルボキシレートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３２０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ３．1,3－ビス（メトキシカルボニル）－2－メチル－2－チオシュードウレア（0.452 g、2.192 mmol）およびメチル 4－アミノ－1－（2－メトキシ－5－（メトキシカルボニル）ベンジル）－1H－ピラゾール－5－カルボキシレート（0.7 g、2.192 mmol）の混合物をＭｅＯＨ（18 mL）中に入れ、酢酸（0.627 mL、10.96 mmol）で、ＲＴで処理した。反応混合物を終夜攪拌した。次にメタノール（4.37M）（5.02 mL、21.92 mmol）中、ナトリウムメトキシドを反応混合物に添加し、その後ＲＴで終夜攪拌した。酢酸をゆっくりと添加することでｐＨを５に調整した。沈殿物を濾過により回収し、水およびアセトニトリルで洗浄し、乾燥させ、メチル 3－（（7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３８８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ４．スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメタンアミン（0.201 g、1.808 mmol）、メチル 3－（（7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.35 g、0.904 mmol）のＤＭＳＯ（5 mL）溶液を、ＤＢＵ（0.545 mL、3.61 mmol）およびＢＯＰ（0.799 g、1.807 mmol）で処理した。反応混合物を４０℃で１時間加熱した。水を添加し、反応物をクエンチした。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＤＣＭ中、０－２０％ＭｅＯＨで、シリカゲルカラムで精製し、メチル 4－メトキシ－3－（（5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）ベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４８１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 9.65（s，1H），7.96－7.87（m，2H），7.25（d，J = 2.2 Hz，1H），7.23－7.03（m，2H），5.76（s，2H），3.88（d，J = 6.6 Hz，3H），3.74（s，3H），3.69－3.52（m，5H），2.84－2.68（m，1H），2.08－1.90（m，2H），1.86－1.77（m，2H），0.34（s，4H）

ステップ５．メチル 4－メトキシ－3－（（5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）ベンゾエート（0.122 g、0.254 mmol）のＴＨＦ（3 mL）溶液を０℃に冷却し、ＬｉＡｌＨ_４（0.127 mL、0.254 mmol）を滴下して処理した。２０分後、メタノールをゆっくりと添加することで反応物をクエンチし、ロッシェル塩（1M、3 mL）とともに１時間攪拌した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＤＣＭ中、０－３０％ＭｅＯＨで、シリカゲルカラムで精製し、メチル（1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４５３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ６．ＮａＯＨ（10N、0.350 mL、3.50 mmol）を、ジオキサン（2 mL）およびＤＭＳＯ（1 mL）中、メチル（1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（79.1 mg、0.175 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物を５４℃で終夜加熱した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＤＣＭ中、０－３０％ＭｅＯＨで、シリカゲルカラムで精製し、（3－（（5－アミノ－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノールを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３９５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ７．ＳＯＣｌ_２（0.221 mL、3.04 mmol）を、（3－（（5－アミノ－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノール（60 mg、0.152 mmol）のＴＨＦ（1.5 mL）溶液に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－N7－（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミンを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４１３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ８．ＤＭＦ（0.5 mL）中、1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－N7－（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（10 mg、0.024 mmol）および3－メトキシアゼチジン（2.110 mg、0.024 mmol）の混合物をＲＴで２時間攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１４９を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

この実施例に従って、化合物１５０を類似的に調製した。
実施例Ｆ－化合物１５２

ステップ１．ＮａＯＨ（10N、0.237 mL、2.372 mmol）を、ＤＭＳＯ（1 mL）中、メチル 4－メトキシ－3－（（5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）ベンゾエート（57 mg、0.119 mmol）に、ＲＴで添加した。反応混合物を５４℃で終夜加熱し、６ＮＨＣｌを添加して中和した。溶媒を蒸発させ、3－（（5－アミノ－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシ安息香酸を白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４０９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ２．ＤＩＥＡ（8.53 μl、0.049 mmol）を、ＤＭＦ（0.5 mL）中、1－メチルピペリジン－4－アミン（16.77 mg、0.147 mmol）、3－（（5－アミノ－7－（（スピロ［2.3］ヘキサン－5－イルメチル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシ安息香酸（10 mg、0.024 mmol）およびＨＡＴＵ（12.10 mg、0.032 mmol）の混合物に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１５２を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

この実施例に従って、化合物１５３を類似的に調製した。
実施例Ｇ－化合物１５４

ステップ１．ＤＭＳＯ（5 mL）中、メチル 3－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.5 g、1.072 mmol）の混合物を、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（0.763 g、2.145 mmol）、2,3,4,6,7,8,9,10－オクタヒドロピリミド［1,2－a］アゼピン（0.5 mL、3.32 mmol）、続いて（（1H－ベンゾ［d］［1,2,3］トリアゾール－1－イル）オキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（0.949 g、2.145 mmol）で処理した。反応混合物を７０℃で２時間加熱し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。溶媒混合物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を除去した。残留物をＭｅＯＨで希釈し、濾過して出発物質を除去した。溶媒を除去し、物質をシリカゲル（ドライロード）ヘキサン－ＥｔＯＡｃ０－１００％で精製し、メチル（S）－3－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.59 g、0.734 mmol、収率68.4％）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ８０３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 9.84（s，1H），7.98－7.81（m，1H），7.66－7.31（m，10H），7.30－7.19（m，2H），7.14－7.06（m，1H），6.71－6.58（m，1H），5.87－5.59（m，2H），4.77－4.53（m，1H），3.80－3.75（m，3H），3.75－3.71（m，3H），3.67－3.61（m，2H），3.60－3.56（m，3H），1.95－1.77（m，2H），1.64－1.42（m，2H），1.29－1.10（m，2H），0.92（s，9H），0.78（br t，J=7.3 Hz，3H）

ステップ２．Ｐａｒｒ瓶に、メチル（S）－3－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.59 g、0.734 mmol）、メタノール（10 mL）、およびＰｄ/Ｃ（20 mg、0.188 mmol）を添加した。水素化反応を２時間、２５℃で、５０ｐｓｉ下で進行させた。物質を濾過し、溶媒を除去して、メチル（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（.466 g、0.624 mmol、収率８５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７２５．４［Ｍ＋Ｈ］＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 7.76－7.66（m，3H），7.62（s，5H），7.55－7.42（m，8H），7.42－7.33（m，2H），7.31－7.06（m，1H），5.93－5.68（m，1H），3.85－3.68（m，5H），1.98－1.80（m，2H），1.79－1.68（m，1H），1.62－1.39（m，3H），1.38－1.23（m，2H），1.01（s，9H），0.92（s，3H），0.87（t，J=7.3 Hz，3H），0.83－0.77（m，1H）

ステップ３．２０ｍＬシンチレーションバイアルに、メチル（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（460 mg、0.635 mmol）、ジオキサン（4 mL）およびトリエチルアミントリヒドロフルオライド（ＴＲＥＡＴ－ＨＦ(商標)、1.3 mL、7.98 mmol）を入れた。反応混合物を５０℃で２時間攪拌した。ＮａＯＨ（6 mL、30.0 mmol）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。冷却後、反応混合物を５ＮＨＣｌで中和し、Ｖ１０エバポレーターで蒸発乾固させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＥＺＰｒｅｐ.、50 g カラム、ＤＭＳＯ/水充填、１４分かけて０．０５％ＴＦＡ含有水中、０から６０％ＭｅＣＮ）により、（S）－3－（（5－アミノ－7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシ安息香酸（100 mg、0.241 mmol、収率38.0％）を白色凍結乾燥固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４５１．２［Ｍ＋Ｈ］＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 12.74－12.22（m，2H），7.81－7.62（m，3H），7.57（s，1H），7.47－7.35（m，1H），7.16－7.06（m，1H），6.96－6.84（m，1H），5.56（br d，J=14.7 Hz，2H），4.53－4.17（m，2H），3.61（s，3H），1.51（br d，J=6.4 Hz，2H），1.36－1.17（m，2H），1.01－0.80（m，2H），0.56（t，J=7.4 Hz，3H）

ステップ４．２０ｍＬシンチレーションバイアルに、（S）－3－（（5－アミノ－7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシ安息香酸（30 mg、0.072 mmol）、ＨＡＴＵ（33.0 mg、0.087 mmol）、（R）－1－メチルピロリジン－3－アミン（14.50 mg、0.145 mmol）およびＤＭＦ（1.5 mL）を入れた。ＤＩＰＥＡ（0.038 mL、0.217 mmol）を添加し、反応物をＲＴで１時間攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで３０１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１５４を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。
実施例Ｈ－化合物１５７

ステップ１ａ．ＤＭＳＯ（30 mL）およびＥｔＯＨ（10 mL）中、メチル 3－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（1.1 g、2.359 mmol）およびＰｄ/Ｃ（0.500 g、2.359 mmol、先行特許で調製される）の混合物を、Ｈ_２下で、８０℃で３日間攪拌した。触媒を濾過し、濾液を濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－１０％ＭｅＯＨで精製し、メチル 3－（（5－アミノ－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３３０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋ ^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 10.99（s，1H），7.90（dd，J = 8.6，2.2 Hz，1H），7.61（s，1H），7.21－7.12（m，2H），6.10（s，2H），5.65（s，2H），3.91（s，3H），3.75（s，3H）

ステップ１ｂ．ＤＭＳＯ（2 mL）中、メチル 3－（（7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.1 g、0.258 mmol、ＢＢＲＣにより調製）およびＫ_２ＣＯ_３（0.107 g、0.774 mmol）の混合物を、８０℃で９０分間攪拌した。冷却後、水を添加して反応混合物をクエンチした。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－１０％ＭｅＯＨで精製し、メチル 3－（（5－アミノ－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３３０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ２．メチル 3－（（5－アミノ－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.274 g、0.832 mmol）のＴＨＦ（20 mL）溶液を０℃に冷却し、次にＬｉＡｌＨ_４（ＴＨＦ中、２Ｍ）（0.416 mL、0.832 mmol）を滴下して処理した。ＬＣＭＳは、１時間後に反応の完了を示した。ゆっくりとメタノールを添加して反応物をクエンチし、次にロッシェル塩（1M、10 mL）とともに１時間攪拌した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－１０％ＭｅＯＨで精製し、5－アミノ－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－オールを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３０２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 7.55（s，1H），7.17（dd，J = 8.3，2.1 Hz，1H），6.96（d，J = 8.4 Hz，1H），6.51（d，J = 2.1 Hz，1H），6.10（s，2H），5.62（s，2H），4.96（t，J = 5.8 Hz，1H），4.28（d，J = 5.4 Hz，2H），3.81（s，3H）

ステップ３．5－アミノ－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－オール（0.13 g、0.431 mmol）、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（0.307 g、0.863 mmol）のＤＭＳＯ（5 mL）溶液を、ＢＯＰ（0.382 g、0.863 mmol）およびＤＢＵ（0.260 mL、1.726 mmol）で処理した。反応混合物を６０℃で終夜加熱した。水を添加し、反応物をクエンチした。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－１０％ＭｅＯＨで精製し、（S）－（3－（（5－アミノ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノールを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６３９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ４．ＴＨＦ（2 mL）中、（S）－（3－（（5－アミノ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノール（0.24 g、0.376 mmol）およびＳＯＣｌ_２（0.545 mL、7.51 mmol）の混合物を、ＲＴで３０分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、（S）－N7－（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミンを白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６５７．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ５．（S）－3－（（5－アミノ－1－（2－メトキシ－5－（（4－メチルピペラジン－1－イル）メチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－イル）アミノ）ヘキサン－1－オール（化合物１５７）．ＤＭＦ（0.5 mL）中、（S）－N7－（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（15 mg、0.023 mmol）および1－メチルピペラジン（13.71 mg、0.137 mmol）の混合物を、ＲＴで２時間攪拌した。トリエチルアミントリヒドロフルオライド（0.022 mL、0.137 mmol）およびＤＭＳＯ（0.5 mL）を添加した。反応混合物をＲＴで終夜攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：５％Ｂで０分保持、２０分かけて５－４５％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳシグナルによりトリガーされた。化合物１５７を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

この実施例に従って、以下の化合物を類似的に調製した：化合物１５５、化合物１５６、および化合物１５８。
実施例Ｉ－化合物１６４

ステップ１．メチル 3－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.6 g、1.287 mmol、先行特許で調製される）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）_２Ｃｌ_２（0.094 g、0.129 mmol）、Ｋ_２ＣＯ_３（0.534 g、3.86 mmol）およびトリメチルボロキシン（0.899 mL、6.43 mmol）の混合物を、１２０℃で終夜攪拌した。冷却後、水を添加して反応物をクエンチした。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－１０％ＭｅＯＨで精製し、メチル 3－（（5－アミノ－7－ヒドロキシ－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエートを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３４４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 10.91（s，1H），7.87（dd，J = 8.5，2.0 Hz，1H），7.19－7.12（m，2H），6.08（s，2H），5.55（s，2H），3.88（s，3H），3.73（s，3H），2.21（s，3H）

ステップ２．メチル 3－（（5－アミノ－7－ヒドロキシ－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.12 g、0.350 mmol）のＴＨＦ（20 mL）溶液を０℃に冷却し、次にＬｉＡｌＨ_４（ＴＨＦ中、２Ｍ）（0.175 mL、0.350 mmol）を滴下して処理した。ＬＣＭＳは、２時間後に反応の完了を示した。ゆっくりとメタノールを添加して反応物をクエンチし、次にロッシェル塩（1M、10 mL）とともに１時間攪拌した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－２０％ＭｅＯＨで精製し、5－アミノ－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－オールを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ３１６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ 7.16（d，J = 8.3 Hz，1H），6.96（d，J = 8.3 Hz，1H），6.54（s，1H），6.09（s，2H），5.54（s，2H），4.96（t，J = 5.7 Hz，1H），4.28（d，J = 5.5 Hz，2H），3.80（s，3H），2.22（s，3H）

ステップ３．5－アミノ－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－オール（74.8 mg、0.237 mmol）およびＢＯＰ（210 mg、0.474 mmol）のＤＭＳＯ（2 mL）溶液に、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（506 mg、1.423 mmol）およびＤＢＵ（0.143 mL、0.949 mmol）のＤＭＳＯ（2 mL）溶液を添加した。反応混合物を６０℃で６時間加熱した。水を添加し、反応物をクエンチした。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ＣＨ_２Ｃｌ_２中、０－２０％ＭｅＯＨで精製し、（S）－（3－（（5－アミノ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノールを淡黄色油として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６５３．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ４．ＳＯＣｌ_２（0.333 mL、4.59 mmol）を、（S）－（3－（（5－アミノ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシフェニル）メタノール（0.15 g、0.230 mmol）のＴＨＦ（2 mL）溶液に、ＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで２０分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、（S）－N7－（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミンを白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６７１．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ５．1－メチルピペラジン（17.90 mg、0.179 mmol）を、（S）－N7－（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－3－メチル－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5,7－ジアミン（20 mg、0.030 mmol）のＤＭＦ（0.5 mL）溶液に添加した。反応混合物をＲＴで３時間攪拌した。ＤＭＳＯ（0.5 mL）中、トリエチルアミントリヒドロフルオライド（0.029 mL、0.179 mmol）を添加した。反応混合物をＲＴで終夜攪拌した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：１０％Ｂで０分保持、２０分かけて１０－５０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳシグナルによりトリガーされた。目的物を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させ、化合物１６４を得た。

この実施例に従って、以下の化合物を類似的に調製した：化合物１５９、化合物１６１、および化合物１６２。
実施例Ｊ－化合物１６９

ステップ１．1,4－ジオキサン（38.3 ml）およびＨ_２Ｏ（4.26 ml）中、メチル 5－ブロモ－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（2.239 g、8.51 mmol、ＵＳ２０１５/０２９９１０４に従って調製される）および三塩基性リン酸カリウム（5.42 g、25.5 mmol）の、ＲＴの混合物をＮ_２で３０分間スパージした。メチルボロン酸（0.764 g、12.77 mmol）およびＸＰｈｏｓＰｄＧ２（0.167 g、0.213 mmol）を添加した。混合物をＮ_２で２分間スパージし、８０℃で２２時間攪拌した。反応物をＲＴに冷まし、ＥｔＯＡｃ（200 mL）で希釈し、Ｈ_２Ｏ（200 mL）および飽和ＮａＣｌ水溶液（200 mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－２５％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）により精製した。混合したフラクションを濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－２５％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）により、さらに精製した。両方のカラムからの生成物を混ぜ合わせ、メチル 2－フルオロ－4－メトキシ－5－メチルベンゾエート（1.563 g、93%）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ１９９［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 7.67（dd，J=8.6，0.7 Hz，1H），6.95（d，J=13.2 Hz，1H），3.87（s，3H），3.80（s，3H），2.13（s，3H）

ステップ２．メチル 2－フルオロ－4－メトキシ－5－メチルベンゾエート（1.563 g、7.89 mmol）の、ＲＴのＣＣｌ_４（19.72 ml）溶液に、N－ブロモスクシンイミド（1.474 g、8.28 mmol）および2,2'－アゾビス（2－メチルプロピオニトリル）（0.130 g、0.789 mmol）を添加した。懸濁液を７５℃で２０時間攪拌した。反応物をＲＴに冷まし、濾過した。固体をＣＣｌ_４（2 x 2 mL）で洗浄した。合わせた濾液を減圧濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－２５％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）により精製した。混合したフラクションを濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－１５％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）により、さらに精製した。両方のカラムからの生成物を混ぜ合わせ、メチル 5－（ブロモメチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（1.73 g、79%）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ２７７/２７９［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 8.00（d，J=8.5 Hz，1H），7.09（d，J=13.2 Hz，1H），4.67（s，2H），3.95（s，3H），3.82（s，3H）

ステップ３．メチル（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（1.60 g、5.55 mmol）（上記、スキーム２、化合物１１）の、ＲＴのＤＭＦ（27.8 ml）溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（5.43 g、16.66 mmol）を添加した。反応物を０℃で１０分間攪拌し、次にメチル 5－（ブロモメチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（1.539 g、5.55 mmol）を添加した。反応物を０℃で３０分間攪拌し、次に冷却槽を取り除き、ＲＴで１時間攪拌した。反応物をＨ_２Ｏ（150 mL）に添加し、固体を真空濾過により回収し、Ｈ_２Ｏ（3 x 10 mL）、ＭｅＯＨ（3 x 10 mL）、およびＥｔ_２Ｏ（3 x 10 mL）で洗浄し、メチル 5－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（1.191 g、44%）をオフホワイト固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４８４/４８６［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 11.82－11.58（m，1H），11.51－11.31（m，1H），7.59（d，J=8.3 Hz，1H），7.07（d，J=13.1 Hz，1H），5.68（s，2H），3.84（s，3H），3.79（s，3H），3.75（s，3H）

ステップ４．メチル 5－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（569 mg、1.175 mmol）の、ＲＴのＤＭＳＯ（7834 μl）懸濁液に、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン，ＨＣｌ（691 mg、1.763 mmol）（US 2020/0038403 A1、図８、化合物７１ａ）および（ベンゾトリアゾール－1－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（780 mg、1.763 mmol）、続いて1,8－ジアザビシクロ［5.4.0］ウンデカ－7－エン（879 μl、5.88 mmol）を添加した。反応物をＲＴで４時間攪拌した。追加量の（ベンゾトリアゾール－1－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（52 mg、0.12 mmol）を添加し、反応物をＲＴで１９時間攪拌した。反応物をＨ_２Ｏ（80 mL）の入った攪拌フラスコに添加し、不溶性物質を真空濾過により回収し、Ｈ_２Ｏ（2 x 5 mL）で洗浄し、次にＥｔＯＡｃ（100 mL）中に溶解した。得られた溶液を飽和ＮａＣｌ水溶液（100 mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（80 g シリカゲル；リニアグラジエント０－４０％ＥｔＯＡｃ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製した。この物質をフラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－５０％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）によりさらに精製し、メチル（S）－5－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（455 mg、47%）を褐色泡沫として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ８２１/８２３［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 9.80（s，1H），7.55（dd，J=7.9，1.5 Hz，2H），7.50－7.46（m，2H），7.46－7.32（m，5H），7.27－7.21（m，2H），7.03（d，J=13.1 Hz，1H），6.68（br d，J=8.5 Hz，1H），5.77－5.69（m，1H），5.67－5.59（m，1H），4.70－4.60（m，1H），3.74（s，6H），3.65（t，J=6.5 Hz，2H），3.58（s，3H），1.91－1.83（m，2H），1.61－1.43（m，2H），1.27－1.13（m，2H），0.91（s，9H），0.80（t，J=7.4 Hz，3H）

ステップ５．メチル（S）－5－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（0.455 g、0.554 mmol）の、ＲＴのＥｔＯＨ（22.15 ml）溶液を真空にし、次にＮ_２（3x）で満たし、その後パラジウム炭素（１０ｗｔ％(無水ベース)、湿潤担体）（0.088 g）を添加した。混合物を真空にし、次にＨ_２で満たし、Ｈ_２（バルーン）の雰囲気下で２時間攪拌した。反応混合物をＮ_２で３０分間パージし、次にＮ_２のブランケット下で、ＣＥＬＩＴＥ（商標）に通して濾過し、ＥｔＯＨ（2 x 15 mL）で洗浄した。合わせた濾液を減圧濃縮し、メチル（S）－5－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（423 mg、quant.）を白色泡沫として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７４３［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 8.03（s，1H），7.56－7.49（m，3H），7.50－7.46（m，2H），7.43－7.32（m，4H），7.29－7.24（m，2H），7.04（d，J=13.1 Hz，1H），5.85－5.78（m，1H），5.73－5.66（m，1H），4.68－4.58（m，1H），3.76（s，3H），3.77（br s，3H），3.73（s，3H），3.70－3.62（m，2H），1.92（br dd，J=5.3、3.2 Hz，2H），1.67－1.51（m，2H），1.29－1.14（m，2H），0.91（s，9H），0.82（t，J=7.3 Hz，3H）

ステップ６．ＴＨＦ（5112 μl）およびＭｅＯＨ（568 μl）の混合物中、メチル（S）－5－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－2－フルオロ－4－メトキシベンゾエート（422 mg、0.568 mmol）の、０℃の溶液に、リチウムボロハイドライド（２ＭＴＨＦ溶液）（2840 μl、5.68 mmol）を滴下した。反応物をＲＴで１７時間攪拌した。追加量のリチウムボロハイドライド（284 μL、0.568 mmol）を添加し、反応物をＲＴで３０分間攪拌した。追加量のリチウムボロハイドライド（1.14 mL、2.28 mmol）を添加し、反応物をＲＴで３０分間、次に４０℃で５時間攪拌した。反応物を０℃に冷却し、ゆっくりとＭｅＯＨ（2 mL）を添加することでクエンチした。混合物をＲＴで１５分間攪拌し、次にＨ_２Ｏ（50 mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（2 x 50 mL）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（50 mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－１００％ＥｔＯＡｃ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（4－フルオロ－5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（197.6 mg、49%）を白色泡沫として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ 715 ［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 9.50（s，1H），7.88（s，1H），7.57－7.54（m，2H），7.50－7.46（m，2H），7.44－7.33（m，4H），7.27－7.22（m，2H），6.89（d，J=12.1 Hz，1H），6.78（d，J=8.5 Hz，1H），6.07（d，J=8.5 Hz，1H），5.70－5.64（m，1H），5.61－5.55（m，1H），5.03（t，J=5.6 Hz，1H），4.61－4.51（m，1H），4.32－4.22（m，2H），3.74（s，3H），3.65－3.59（m，2H），3.58（s，3H），1.89－1.72（m，2H），1.52－1.41（m，2H），1.21－1.05（m，2H），0.92（s，9H），0.78（t，J=7.3 Hz，3H）

ステップ７．塩化チオニル（104 μl、1.427 mmol）の、０℃のＴＨＦ（2853 μl）溶液に、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（4－フルオロ－5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（204 mg、0.285 mmol）のＴＨＦ（2853 μl）溶液を滴下した。反応物をＲＴで２０分間攪拌し、次に減圧濃縮した。粗製物質をＴＨＦと混合し、減圧濃縮（2x）して、粗製メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（クロロメチル）－4－フルオロ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを得た。それ以上は精製せずに、この物質を使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７３３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ８．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（クロロメチル）－4－フルオロ－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.042 g、0.057 mmol）の、ＲＴのＭｅＣＮ（1.140 ml）溶液を、メチルアミン（２ＭＴＨＦ溶液）（0.086 ml、0.171 mmol）に添加し、次にN,N－ジイソプロピルエチルアミン（0.060 ml、0.342 mmol）を添加した。反応物を６０℃で２時間、次に７０℃で１時間攪拌した。反応物をＲＴに冷まし、濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（2 mL）中に入れ、飽和ＮａＨＣＯ_３（2 mL）水溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（2 x 2 mL）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（2 mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗製メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（4－フルオロ－2－メトキシ－5－（（メチルアミノ）メチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを得た。それ以上は精製せずに、この物質を使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７２８［Ｍ＋Ｈ］^＋
ステップ９．ステップ８で得た粗製物質の、ＲＴの1,4－ジオキサン（570 μl）溶液に、1,4－ジオキサン（570 μl）中、４ＮＨＣｌを添加した。反応物をＲＴで５時間攪拌し、濃縮した。残留物を1,4－ジオキサン（0.3 mL）と混合し、濃縮して、粗製メチル（S）－（1－（4－フルオロ－2－メトキシ－5－（（メチルアミノ）メチル）ベンジル）－7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートを得た。それ以上は精製せずに、この物質を使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４９０［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ１０．1,4－ジオキサン（570 μl）およびＭｅＯＨ（0.285 mL）の混合物中、ステップ９で得た粗製物質の、ＲＴの溶液に、１０ＭＮａＯＨ水溶液（57.0 μl、0.570 mmol）を添加した。反応物を７０℃で３時間攪拌した。反応物をＲＴに冷まし、酢酸（32.6 μl、0.570 mmol）の添加により中和した。混合物を濃縮し、次にこれをＨ_２Ｏ（0.3 mL）およびＤＭＦ（1.7 mL）の混合物中に溶解し、濾過し（0.45 μm ナイロンシリンジフィルター）、以下の条件を用いて、プレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：４％Ｂで０分保持、２０分かけて４－４４％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１６９を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた（10.4 mg、41%）。

これらの化合物を類似的に調製した：化合物１６５、化合物１６６、化合物１６７、化合物１６８、化合物１７１、化合物１７２、化合物１７３、化合物１７５、および化合物１７６（一部の例で、ステップ８に以下の変更を加えた：出発アミンが塩である場合、追加当量のｉ－Ｐｒ_２ＮＥｔを添加した；反応物の温度は６０℃から８０℃の範囲であった）。
実施例Ｋ－化合物１７０

ステップ１．四塩化炭素（20 mL）中、メチル 6－メトキシ－5－メチルニコチネート（491 mg、2.71 mmol）、ＮＢＳ（627 mg、3.52 mmol）、およびＡＩＢＮ（111 mg、0.677 mmol）の混合物を１６時間、８０℃に加熱した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、シリカゲルカラムで、ヘキサン中、０％から５０％の酢酸エチルのグラジエントで精製し、5－（ブロモメチル）－6－メトキシニコチネート（493 mg）を得た。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ 8.84－8.74（m，1H），8.28－8.18（m，1H），4.54－4.46（m，2H），4.15－4.07（m，3H），3.98－3.89（m，3H）

ステップ２．ＤＭＦ（5 mL）中、メチル 5－（ブロモメチル）－6－メトキシニコチネート（233 mg、0.896 mmol）およびメチル（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（215 mg、0.747 mmol）の混合物に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（730 mg、2.240 mmol）を添加した。１６時間後、反応物を酢酸エチル（50 mL）/ＬｉＣｌ（１０％水溶液、50 mL）の間で分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。メタノールでトリチュレートすることにより生成物を単離し、メチル 5－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（133mg）を得た。それ以上は精製せずに、この物質を使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ 469.1 ［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ 11.69（br s，1H），11.45（br s，1H），8.72（d，J=2.2 Hz，1H），7.85（d，J=2.2 Hz，1H），5.73（s，2H），3.99－3.92（m，3H），3.83（s，3H），3.76（s，3H）

ステップ３．メチル 5－（（3－ブロモ－7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（215 mg、0.460 mmol）、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（245 mg、0.690 mmol）、ＢＯＰ（305 mg、0.690 mmol）、およびＤＢＵ（0.312 mL、2.071 mmol）のＤＭＳＯ（5 mL）溶液を、１６時間、ＲＴで攪拌した。ＢＯＰ（305 mg、0.690 mmol）およびＤＢＵ（0.312 mL、2.071 mmol）を添加した。反応混合物を３時間、ＲＴで攪拌し、ＤＣＭ（50 mL）および水（50 mL）の間で分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ヘキサン中、０％から１００％の酢酸エチルのグラジエントで精製し、メチル（S）－5－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（191 mg）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ８０４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ４．メチル（S）－5－（（3－ブロモ－7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（191 mg、0.237 mmol）およびＰｄ－Ｃ（200 mg、0.094 mmol）のＭｅＯＨ（10 mL）懸濁液を、Ｎ_２で３回パージし（合間に真空にする）、次にＨ_２で３回パージした（合間に真空にする）。混合物を水素下で１時間攪拌した。反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（商標）に通して濾過し、減圧化で蒸発させ、メチル（S）－5－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（172 mg）を得て、それ以上は精製せずに使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７２６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ５．ＴＨＦ（3 mL）およびメタノール（0.600 mL）の混合物中、メチル（S）－5－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－6－メトキシニコチネート（172 mg、0.237 mmol）の溶液に、ＬｉＢＨ_４（2M THF）（0.592 mL、1.185 mmol）を添加した。１時間後、追加量のＬｉＢＨ_４（2M THF）（0.592 mL、1.185 mmol）を添加した。１６時間後、反応物を酢酸エチル（50 mL）および１％酒石酸Ｋ/Ｎａ水溶液（10 mL）の間で分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をシリカゲルカラムで、ヘキサン中、０％から１００％の酢酸エチルのグラジエントで精製し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（165 mg）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６９８．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ６．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（165 mg、0.236 mmol）のＤＣＭ（10 mL）溶液に、デス－マーチンペルヨージナン（201 mg、0.473 mmol）を添加した。３０分後、反応物を減圧下で蒸発させ、高真空下で乾燥させた。粗製物質をシリカゲルカラムで、ヘキサン中、０％から１００％のＥｔＯＡｃのグラジエントで精製し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－ホルミル－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（66 mg）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６９６．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ７．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－ホルミル－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（33 mg、0.047 mmol）およびN1,N1,N2－トリメチルエタン－1,2－ジアミン（24.23 mg、0.237 mmol）のＤＣＭ（3 mL）溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド（70.4 mg、0.332 mmol）を添加した溶液を得た。２時間後、２ｍＬの飽和炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物を２０ｍＬのメタノールで希釈した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－（（（2－（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）メチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（37 mg）を得た。それ以上は精製せずに、この物質を使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７８２．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ８．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（5－（（（2－（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）メチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.037 g、0.047 mmol）の溶液に、ＨＣｌ（４Ｎジオキサン）（3 ml、12.00 mmol）を添加した。１６時間後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を高真空下で乾燥させ、メチル（S）－（1－（（5－（（（2－（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）メチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートヒドロクロライド（26 mg）を得て、それ以上は精製せずに使用した。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ５４４．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ９．メチル（S）－（1－（（5－（（（2－（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）メチル）－2－メトキシピリジン－3－イル）メチル）－7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（25.6 mg、0.047 mmol）およびＮａＯＨ（10N）（50 μl、0.500 mmol）のジオキサン（3 mL）溶液を５０℃に加熱した。２４時間後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を高真空下で乾燥させ、２ｍＬのＤＭＦ：ＨＯＡｃ（1:1）で希釈した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：７％Ｂで０分保持、２０分かけて７－４７％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１７０を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた（11 mg）。
実施例Ｌ－化合物１６０

ステップ１．ＤＭＦ（3 mL）中、メチル（1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－7－ヒドロキシ－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（化合物２３、130 mg、0.344 mmol）に、3－メトキシアゼチジン（90 mg、1.032 mmol）およびＤＩＰＥＡ（0.240 mL、1.376 mmol）を添加した。反応物を終夜、２５℃で攪拌した。溶媒をＶ－１０で除去し、物質をシリカゲル（ドライロード）０－２０％ＤＣＭ－ＭｅＯＨで精製し、メチル（7－ヒドロキシ－1－（2－メトキシ－5－（（3－メトキシアゼチジン－1－イル）メチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（130 mg、0.303 mmol、収率88％）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４２９．４［Ｍ＋Ｈ］＋

ステップ２．ＤＭＳＯ（1.5 mL）中、メチル（7－ヒドロキシ－1－（2－メトキシ－5－（（3－メトキシアゼチジン－1－イル）メチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（65 mg、0.152 mmol）に、（S）－3－アミノ－1－シクロプロピルプロパン－1－オール（34.9 mg、0.303 mmol）、ＤＢＵ（0.091 mL、0.607 mmol）およびＢＯＰ（134 mg、0.303 mmol）を添加した。混合物を７０℃で１時間攪拌した。混合物を５ＭＮａＯＨ（1 mL、5.00 mmol）で処理し、７０度で１時間加熱した。以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．１％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで３０１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１６０を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。
実施例Ｍ－化合物１６３

ステップ１．ＤＭＳＯ（8 mL）中、メチル 3－（（7－ヒドロキシ－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.53 g、1.368 mmol）の混合物を、（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ペンタン－3－アミン（1.402 g、4.10 mmol）、2,3,4,6,7,8,9,10－オクタヒドロピリミド［1,2－a］アゼピン（0.619 mL、4.10 mmol）、続いて（（1H－ベンゾ［d］［1,2,3］トリアゾール－1－イル）オキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（1.210 g、2.74 mmol）で処理し、ＲＴで終夜攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。溶媒混合物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を除去し、物質を４０ｇＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨシリカゲルカラムで精製した。８０％ＥｔＯＡｃ/ヘキサンフラクションを濃縮し、メチル（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ペンタン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（0.32 g、0.450 mmol、収率32.9％）を白色固体として得た。
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７１１．５

ステップ２．メチル（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ペンタン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（590 mg、0.830 mmol）のＴＨＦ（7469 μl）およびＭｅＯＨ（830 μl）溶液に、リチウムボロハイドライド（２ＭＴＨＦ溶液）（4150 μl、8.30 mmol）を滴下した（添加中ガスが発生）。反応物をＲＴで３０分間攪拌した。反応物を０℃に冷却し、Ｈ_２Ｏの添加によりクエンチすると、固体の沈殿物を生じた。混合物をＨ_２Ｏ（50 mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（2 x 50 mL）で抽出した（すべての固体が溶解するまで層を振盪させた）。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（50 mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液として充填；40 g シリカゲル；リニアグラジエント０－１００％ＥｔＯＡｃ－ＣＨ_２Ｃｌ_２、次いで０－１０％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製した。不純物をＥｔＯＡｃグラジエント中に溶出し、生成物をＭｅＯＨグラジエント中に溶出した。生成物フラクションを濃縮し、生成物を白色固体として得た。これをＴＨＦ（2 mL）中に入れ、塩化チオニル（0.062 mL、0.843 mmol）で処理した。溶媒を蒸発させ、ＤＭＦ（2 mL）中に再溶解した。トリエチルアミントリヒドロフルオライド（0.343 mL、2.109 mmol）を添加し、ＬＣＭＳが反応の完了を示すまでＲＴで終夜攪拌した。ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ２４ｇカラムで精製した。５％ＭｅＯＨ/ＤＣＭフラクションから、メチル（S）－（1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－7－（（1－ヒドロキシペンタン－3－イル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（140 mg、0.302 mmol、収率36％）を濃厚油として得た。１５％ＭｅＯＨ/ＤＣＭフラクションから、（S）－3－（（5－アミノ－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－イル）アミノ）ペンタン－1－オール（40 mg、0.099 mmol、収率12％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４０５．３

ステップ３．（S）－3－（（5－アミノ－1－（5－（クロロメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－7－イル）アミノ）ペンタン－1－オール（0.099 mmol、40 mg）のＤＭＳＯ（1 mL）溶液に、1－メチルピペラジン（0.494 mmol、49.5 mg）を添加した。反応混合物を８０℃で１時間加熱し、以下の条件を用いて、プレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．０５％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．０５％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２０分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳおよびＵＶシグナルによりトリガーされた。化合物１６３を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた（白色固体、6.7 mg、収率９％）。
実施例Ｎ－化合物１７８

ステップ１．2－クロロ－5－メチルピリジン－4－オール（5.00 g、34.8 mmol）のＤＭＦ（50 mL）攪拌溶液を０℃で冷却した。ＮａＨ（1.39 g、34.8 mmol）を添加した。１０分後、ヨウ化メチル（2.61 mL、41.8 mmol）を添加した。反応混合物をＲＴで１６時間攪拌し、水および酢酸エチルの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質を淡黄色油として得て、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤として石油エーテル中、１５％酢酸エチル）を用いて精製した。５０℃で高真空を用いてフラクションを濃縮し、2－クロロ－4－メトキシ－5－メチルピリジン（5.2 g、32.7 mmol、収率94％）を黄色液体として得た。
ＬＣ－ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋１５８．２
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 8.00（s，1H），7.33（s，1H），3.89（s，3H），2.17（s，3H）

ステップ２．2－クロロ－4－メトキシ－5－メチルピリジン（5.750 g、36.5 mmol）のＤＭＦ（100 mL）およびメタノール（100 mL）攪拌溶液に、ＴＥＡ（15.26 mL、109 mmol）を添加した。窒素で５分間パージした後、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）－ＣＨ_２Ｃｌ_２付加物（5.96 g、7.30 mmol）を添加した。反応混合物を１００℃で１２時間、ＣＯガス下（圧力１０ｋｇ）で攪拌した。反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（商標）ベッドに通して濾過した。濾液をメタノールで洗浄し、真空濃縮して、粗製物質を淡黄色油として得た。これをＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤として石油エーテル中、２５％酢酸エチル）を用いて精製した。５０℃で高真空を用いて、生成物含有フラクションを濃縮し、メチル 4－メトキシ－5－メチルピコリネート（5.00 g、27.6 mmol、収率76％）を褐色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋１８２．２
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 8.36（s，1H），7.90（s，1H），3.99（s，3H），3.84（s，3H），2.22（s，3H）

ステップ３．メチル 5－メトキシ－4－メチルピコリネート（5.00 g、27.6 mmol）の四塩化炭素（100 mL）溶液に、ＡＩＢＮ（0.906 g、5.52 mmol）およびＮＢＳ（5.89 g、33.1 mmol）を添加した。反応混合物を６５℃で１６時間攪拌し、真空濃縮した。残留物を酢酸エチル中に溶解し、水および酢酸エチルの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質を淡黄色油として得て、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤として石油エーテル中、２５％酢酸エチル）を用いてこれを精製した。５０℃で高真空を用いて、生成物含有フラクションを濃縮し、メチル 4－（ブロモメチル）－5－メトキシピコリネート（5.1 g、14.51 mmol、収率52.6％）を淡黄色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋：２６０．１
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 8.59（s，1H），8.13（s，1H），4.66（s，2H），4.03（s，3H），3.86（s，3H）

ステップ４．メチル（7－ヒドロキシ－3－ヨード－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（1.600 g、4.78 mmol）のＤＭＦ（20 mL）攪拌溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（3.11 g、9.55 mmol）およびメチル 4－（ブロモメチル）－5－メトキシピコリネート（1.242 g、4.78 mmol）を添加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。反応混合物を水および酢酸エチルの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質を淡黄色固体として得て、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤としてクロロホルム中、１０％酢酸エチル）を用いてこれを精製した。５０℃で高真空を用いて、生成物含有フラクションを濃縮し、メチル 4－（（7－ヒドロキシ－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.100 g、1.968 mmol、収率41.2％）をオフホワイト固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ５１５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 11.71（s，1H），11.40（s，1H） 8.51（s，1H），7.43（s，1H），5.73（s，2H），4.04（s，3H），3.80（s，3H），3.73（s，3H）

ステップ５．メチル 4－（（7－ヒドロキシ－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.100 g、2.139 mmol）のＤＭＳＯ（10 mL）攪拌溶液に、ＤＢＵ（0.967 mL、6.42 mmol）、ＢＯＰ（1.419 g、3.21 mmol）および（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（0.761 g、2.139 mmol）を連続的に添加した。反応混合物を４５℃で４時間攪拌し、次に水および酢酸エチルの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質を淡黄色油として得て、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤としてクロロホルム中、２５％酢酸エチル）を用いてこれを精製した。５０℃で高真空を用いてフラクションを濃縮し、メチル（S）－4－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.10 g、1.188 mmol、収率55.5％）を黄色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ８５２．８［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ６．メチル（S）－4－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.30 g、1.526 mmol）のメタノール（15 mL）攪拌溶液に、１０％パラジウム炭素（0.812 g、0.763 mmol）を添加した。反応混合物をＲＴで、Ｈ_２下で１４時間攪拌した。混合物をＣＥＬＩＴＥ（商標）ベッドに通して濾過した。濾液をメタノールおよびＤＣＭ（400 mL）で洗浄し、５０℃で真空濃縮して、メチル（S）－4－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.050 g、1.418 mmol、収率93％）を褐色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７２６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ７．メチル（S）－4－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.00 g、1.378 mmol）のＴＨＦ（10 mL）:メタノール（3 mL）攪拌溶液に、０℃で、ＬｉＢＨ_４（10.33 mL、20.66 mmol）を添加した。反応混合物を４５℃で１６時間攪拌し、塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質をオフホワイト固体として得た。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（シリカゲル６０－１２０メッシュ；溶離剤としてクロロホルム中、５％メタノール）を用いて、粗製物質を精製した。５０℃で高真空を用いてフラクションを濃縮し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（2－（ヒドロキシメチル）－5－メトキシピリジン－4－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.170 g、0.173 mmol、収率12.55％）をオフホワイト固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６９８．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ８．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（2－（ヒドロキシメチル）－5－メトキシピリジン－4－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.200 g、0.287 mmol）のＴＨＦ（3 mL）攪拌溶液に、塩化チオニル（0.105 mL、1.433 mmol）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（2－（クロロメチル）－5－メトキシピリジン－4－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.226 g、0.271 mmol、収率95％）を黄色油として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７１８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ９．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（2－（クロロメチル）－5－メトキシピリジン－4－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.112 g、0.156 mmol）のＤＭＦ（2 mL）攪拌溶液に、メチルアミンＨＣｌ（0.021 g、0.313 mmol）およびＫ_２ＣＯ_３（0.065 g、0.469 mmol）を添加した。反応混合物を５０℃で１４時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮した。残留物をメタノール（2 mL）中に溶解した。水（1 mL）中、ＨＣｌ（5.21 μl、0.172 mmol）を添加した。反応混合物をＲＴで攪拌し、減圧濃縮した。粗製物を1,4－ジオキサン（1 mL）中に入れ、そこに水（1 mL）中、ＮａＯＨ（0.044 g、1.100 mmol）を添加した。反応混合物を７０℃で３時間攪拌した。反応混合物を水および酢酸エチルの間で分配した。有機層をブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、粗製物質を薄茶色油として得た。粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳ（カラム：Waters XBridge C18、150 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：１０％Ｂで０分保持、２５分かけて１０－４５％Ｂ、次いで１００％Ｂで５分保持；流速：１５ｍＬ/分；カラム温度：２５℃）により精製し、化合物１７８（0.04 g、収率2.4％）を得た。

化合物１７７を類似的に調製した。
実施例Ｏ－化合物１７４

ステップ１．2－メチルピリジン－3－オール（10.0 g、92 mmol）のアセトニトリル（150.0 mL）攪拌溶液に、ＮＢＳ（33.4 g、188 mmol）のアセトニトリル（350.0 mL）溶液を、１時間かけてゆっくりと添加した。反応混合物を８５℃で２時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、粗製物質を得て、シリカゲルに吸収させ、ＩＳＣＯＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（商標）クロマトグラフィーにより、クロロホルム中、０－１００％酢酸エチルで溶出させて精製し、4,6－ジブロモ－2－メチルピリジン－3－オール（11.0 g、39.6 mmol、収率43.2％）を淡黄色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ２６８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 9.98（s，1H），7.70（s，1H），2.41（s，3H）

ステップ２．4,6－ジブロモ－2－メチルピリジン－3－オール（10.0 g、37.5 mmol）のＴＨＦ（150.0 mL）攪拌溶液に、ｎ－ＢｕＬｉ（31.5 mL、79 mmol）を、－７８℃で添加した。反応混合物を同じ温度で３時間攪拌した。この混合物に、Ｈ_２Ｏ（30.0 mL、1665 mmol）、続いて１．５ＮＨＣｌ溶液（30.0 mL）を同じ温度で添加した。反応混合物を同じ温度で１０分間攪拌し、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、6－ブロモ－2－メチルピリジン－3－オール（5.1 g、25.5 mmol、収率68.1％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ１８８．１［Ｍ］^＋
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）d = 10.10（br s，1H），7.24（d，J=8.7 Hz，1H），7.08（d，J=8.3 Hz，1H），2.34－2.23（m，3H）

ステップ３．6－ブロモ－2－メチルピリジン－3－オール（4.0 g、21.27 mmol）のアセトニトリル（40.0 mL）攪拌溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（20.79 g、63.8 mmol）を添加した。この混合物に、ＭｅＩ（1.995 mL、31.9 mmol）を添加した。反応混合物を５０℃で１６時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび水の間で分配した。有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗製化合物を得た。粗製化合物を石油エーテルでリンスし、濾液を減圧濃縮して、6－ブロモ－3－メトキシ－2－メチルピリジン（4.0 g、18.81 mmol、収率88％）を褐色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ２０２．０［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ = 7.23－7.14（m，1H），6.90（d，J=8.7 Hz，1H），3.75（s，3H），2.37（s，3H）

ステップ４．6－ブロモ－3－メトキシ－2－メチルピリジン（4.0 g、19.80 mmol）のＤＭＦ（40.0 mL）：ＭｅＯＨ（40.0 mL）攪拌溶液に、ＴＥＡ（8.28 mL、59.4 mmol）、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）－ＣＨ_２Ｃｌ_２（3.23 g、3.96 mmol）を、窒素パージ下で添加した。反応混合物を１００℃で、ＣＯガス（圧力１０ｂａｒ）下で、オートクレーブ内で１６時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残留物を得た。残留物をＤＣＭで希釈し、次にＣＥＬＩＴＥ（商標）ベッドに通して濾過し、過剰量のＤＣＭで洗浄した。濾液を減圧濃縮し、粗製化合物を得た。粗製化合物をＩＳＣＯＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーにより、石油エーテル中、０－１００％酢酸エチルで溶出させて精製し、メチル 5－メトキシ－6－メチルピコリネート（2.62 g、14.32 mmol、収率72.3％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ１８２．０［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 7.98－7.91（m，1H），7.49－7.40（m，1H），3.92－3.87（m，3H），3.86－3.80（m，3H），2.42－2.36（m，3H）

ステップ５．メチル 5－メトキシ－6－メチルピコリネート（2.5 g、13.80 mmol）のクロロホルム（25.0 mL）攪拌溶液に、ＮＢＳ（2.95 g、16.56 mmol）およびＡＩＢＮ（0.453 g、2.76 mmol）を添加した。反応混合物を６５℃で１６時間攪拌した。反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（商標）ベッドに通して濾過し、過剰量のＤＣＭで洗浄し、濾液を減圧濃縮して、粗製化合物を得た。粗製化合物をＩＳＣＯＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーにより、石油エーテル中、０－１００％酢酸エチルで溶出させて精製し、薄茶色固体を得て、それを水中で１５分間攪拌し、続いて固体を濾過し、真空下で乾燥させ、メチル 6－（ブロモメチル）－5－メトキシピコリネート（1.6 g、5.84 mmol、収率42.4％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ２６２．０［Ｍ＋Ｈ］^＋
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ = 11.17－10.94（m，1H），8.08（d，J=8.7 Hz，1H），7.66－7.57（m，1H），4.73－4.58（m，2H），3.99－3.97（m，3H），3.87－3.84（m，3H），2.57－2.56（m，1H），2.57（s，5H）

ステップ６．メチル（7－ヒドロキシ－3－ヨード－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（2.0 g、5.97 mmol）のＤＭＦ（20.0 mL）攪拌溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（3.89 g、11.94 mmol）を添加した。この混合物に、メチル 6－（ブロモメチル）－5－メトキシピコリネート（1.552 g、5.97 mmol）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび水の間で分配した。有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗製化合物を得た。粗製化合物をＩＳＣＯコンビフラッシュクロマトグラフィーにより、クロロホルム中、０－１００％酢酸エチルで溶出させて精製し、メチル 6－（（7－ヒドロキシ－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（1.08 g、1.764 mmol、収率29.6％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ５１５．０［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ７．メチル 6－（（7－ヒドロキシ－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（0.32 g、0.622 mmol）のＤＭＳＯ（3.0 mL）攪拌溶液に、ＤＢＵ（0.281 mL、1.867 mmol）、ＢＯＰ（0.413 g、0.933 mmol）および（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－アミン（0.266 g、0.747 mmol）を添加した。反応混合物を４５℃で３時間攪拌した。反応混合物を水で処理した。沈殿物を回収し、真空下で乾燥させ、粗製化合物を得た。粗製化合物をＩＳＣＯコンビフラッシュクロマトグラフィーにより、石油エーテル中、０－１００％酢酸エチルで溶出させて精製し、メチル（S）－6－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（0.189 g、0.220 mmol、収率35.3％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ８５２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ８．メチル（S）－6－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－3－ヨード－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（0.16 g、0.188 mmol）のＭｅＯＨ（5.0 mL）攪拌溶液に、Ｐｄ－Ｃ（0.100 g、0.094 mmol）を添加した。反応混合物をＲＴで、水素ガス（ブラダー）下で４時間攪拌した。反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（商標）ベッドに通して濾過し、過剰量のメタノール：ＤＣＭ（1:1）で洗浄し、濾液を減圧濃縮して、粗製化合物を得た。粗製化合物をジエチルエーテルおよび石油エーテルでトリチュレートし、固体を真空下で乾燥させ、メチル（S）－6－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（0.118 g、0.135 mmol、収率71.8％）を薄茶色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ７２６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ９．メチル（S）－6－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－5－メトキシピコリネート（0.1 g、0.138 mmol）のＴＨＦ（3.5 mL）：ＭｅＯＨ（1.5 mL）攪拌溶液に、ＬｉＢＨ_４（ＴＨＦ中、２Ｍ）（0.344 mL、0.689 mmol）を添加した。反応混合物を４５℃で１６時間攪拌した。この混合物に、ＬｉＢＨ_４（ＴＨＦ中、２Ｍ）（0.689 mL、1.378 mmol）を添加した。反応混合物を４５℃で１８時間攪拌し、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液でクエンチした。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（6－（ヒドロキシメチル）－3－メトキシピリジン－2－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.11 g、0.128 mmol、収率93％）をオフホワイト半固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６９８．３［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ１０．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（6－（ヒドロキシメチル）－3－メトキシピリジン－2－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.1 g,0.143 mmol）のＭｅＯＨ（1.5 mL）攪拌溶液に、ＨＣｌ水溶液（0.1 mL、1.152 mmol）を０℃で添加した。反応混合物をＲＴで２時間攪拌した。反応混合物を完全に減圧濃縮し、ＤＣＭとともに蒸留して、粗製化合物を得た。粗製化合物をジエチルエーテルおよび石油エーテルでトリチュレートし、固体を真空下で乾燥させ、メチル（S）－（7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（6－（ヒドロキシメチル）－3－メトキシピリジン－2－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート，ＨＣｌ（85 mg、0.141 mmol、収率98％）を薄緑色半固体として得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ４６０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

ステップ１１．メチル（S）－（7－（（1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（（6－（ヒドロキシメチル）－3－メトキシピリジン－2－イル）メチル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート，ＨＣｌ（80 mg、0.161 mmol）のジオキサン（1.0 mL）：水（1.0 mL）攪拌溶液に、ＮａＯＨ（32.3 mg、0.807 mmol）を添加した。反応混合物を７０℃で９０分間攪拌した。有機層を分離し、減圧濃縮して、粗製化合物を得た。粗製物質を逆相プレパラティブＨＰＬＣ（カラム：Waters XBridge C18、150 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：７％Ｂで０分保持、２０分かけて７－２５％Ｂ、次いで１００％Ｂで５分保持；流速：１５ｍＬ/分；カラム温度：２５℃）により精製し、化合物１７４（26.4 mg、0.064 mmol、収率40.0％）を得た。
実施例Ｐ－化合物１７９

ステップ１．ＴＨＦ/ヘキサン（50 mL、12.50 mmol）中、０．２５Ｍリチウムジイソブチル－tert－ブトキシアルミニウムハイドライド溶液を、メチル（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンゾエート（1.87 g、2.58 mmol）のＴＨＦ（25.8 mL）溶液に、０℃で、５分かけて添加した。反応物を２５℃で終夜攪拌した（３時間、９８％転化）。溶液を冷水で希釈し、ＡｃＯＥｔで３回抽出した。最後に、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で蒸発させた。物質をシリカゲル（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ０－１００％）で精製し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（1.56 g、2.238 mmol、収率87％）を得た。
ＬＣ－ＭＳｍ/ｚ６９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋

ステップ２．メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（ヒドロキシメチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.51 g、0.732 mmol）を、２５ｍＬ丸底フラスコ内の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（5 mL）中に溶解し、透明な溶液を２５℃で得た。溶液を０℃に冷却した後、Ｅｔ_３Ｎ（0.306 ml、2.195 mmol）およびＭｓ－Ｃｌ（0.114 ml、1.464 mmol）を添加した。１５分後に反応が完了し、氷水およびＤＣＭでクエンチした。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶液を濃縮し、メチル（S）－（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（2－メトキシ－5－（メトキシメチル）ベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメート（0.35 g、収率67.3％）を得た。物質を精製せずに使用した。

ステップ３．（3S,4S）－4－アミノテトラヒドロ－2H－ピラン－3－オールヒドロクロライド（70 mg、0.456 mmol）およびＤＩＰＥＡ（0.073 mL、0.418 mmol）を、ＤＭＦ（1 mL）中、（S）－3－（（7－（（1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－5－（（メトキシカルボニル）アミノ）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－1－イル）メチル）－4－メトキシベンジルメタンスルホネート（108 mg、0.139 mmol）に添加した。反応物を１２時間、２５℃で攪拌した。ＬＣ／ＭＳで、第１中間体メチル（7－（（（S）－1－（（tert－ブチルジフェニルシリル）オキシ）ヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（（（（3S,4S）－3－ヒドロキシテトラヒドロ－2H－ピラン－4－イル）アミノ）メチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートの形成を確認した。1,4－ジオキサン（3 mL、12.00 mmol）中、ＨＣｌを反応混合物に添加し、続いて２時間、２５℃で攪拌した。溶媒を除去し、ＬＣ／ＭＳで、第２中間体メチル（7－（（（S）－1－ヒドロキシヘキサン－3－イル）アミノ）－1－（5－（（（（3S,4S）－3－ヒドロキシテトラヒドロ－2H－ピラン－4－イル）アミノ）メチル）－2－メトキシベンジル）－1H－ピラゾロ［4,3－d］ピリミジン－5－イル）カルバメートの形成を確認した。溶媒を除去し、残留物をＭｅＯＨ中、５ＭＮａＯＨで希釈し、続いて８０℃で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳで目的物を確認し、溶媒を除去した。

以下の条件を用いて、粗製物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳで精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：３％Ｂで０分保持、３０分かけて３－４３％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳシグナルによりトリガーされた。目的物を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

以下の条件を用いて、物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳでさらに精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:０．０５％ＴＦＡ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:０．０５％ＴＦＡ含有水；グラジエント：０％Ｂで０分保持、２５分かけて０－４０％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳシグナルによりトリガーされた。目的物を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させた。

以下の条件を用いて、物質をプレパラティブＬＣ／ＭＳでさらに精製した：カラム：XBridge C18、200 mm x 19 mm、5 μｍ粒子；移動相Ａ：5:95 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；移動相Ｂ：95:5 アセトニトリル:ＮＨ_４ＯＡｃ含有水；グラジエント：１％Ｂで０分保持、２５分かけて１－４１％Ｂ、次いで１００％Ｂで０分保持；流速：２０ｍＬ/分；カラム温度：２５℃。フラクション収集はＭＳシグナルによりトリガーされた。目的物を含むフラクションを混ぜ合わせ、遠心蒸発で乾燥させ、化合物１７９（15.9 mg、0.031 mmol、収率22.38％）を得た。

以下の化合物を類似的に調製した：化合物１８０、化合物１８１、化合物１８２、化合物１８３、および化合物１８４。
実施例Ｑ－出発物質および中間体

下記のチャートは、本明細書に開示されるＴＬＲ７アゴニストの調製用の出発物質または中間体として有用なことがある化合物を作成するためのスキームを示す。スキームは、出発物質または中間体として使用されることがある他の類似化合物の作成に適用され得る。使用される試薬は当技術分野において周知であり、多くの場合、その使用は前述の実施例に示されている。
チャート１
チャート２
チャート３

生物学的活性
ＴＬＲ７アゴニストとして本明細書に開示される化合物の生物学的活性は、以下の手順により定量されることがある。

ヒトＴＬＲ７アゴニスト活性アッセイ
この手順は、本明細書に開示される化合物のヒトＴＬＲ７（ｈＴＬＲ７）アゴニスト活性を定量する方法を説明する。

ヒトＴＬＲ７分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポータートランスジーンを有する改変ヒト胚性腎臓ブルー細胞（ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＴＬＲ細胞；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、非選択培地（１０％ウシ胎児血清（Sigma）を添加したＤＭＥＭ高グルコース（Invitrogen））中に懸濁した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＴＬＲ７細胞を３８４ウェル組織培養プレートの各ウェルに添加し（１ウェルあたり１５，０００細胞）、１６－１８時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＴＬＲ細胞が入ったウェルに化合物（100 nl）を添加し、処置した細胞を３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。処理から１８時間後、１０マイクロリットルの新たに調製したＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ（商標）試薬（Invivogen）を各ウェルに添加し、３０分間インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ_２）、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＯＤ＝６２０ｎｍ）を用いてＳＥＡＰレベルを測定した。半数効果濃度値（ＥＣ_５０；アッセイ基準値および最大値の中間の応答を引き起こす化合物濃度）を算出した。

ヒト血液におけるＩ型インターフェロン遺伝子（ＭＸ－１）およびＣＤ６９の誘導
Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）ＭＸ－１遺伝子およびＢ細胞活性化マーカーＣＤ６９の誘導は、ＴＬＲ７経路の活性化で起こる下流のイベントである。以下は、ＴＬＲ７アゴニストに対する応答におけるそれらの誘導を測定するヒト全血アッセイである。

ヘパリン処置したヒト全血をヒト患者から回収し、１ｍＭで、ＴＬＲ７アゴニスト試験化合物で処置した。血液をＲＰＭＩ１６４０培地で希釈し、Ｅｃｈｏを使用して１ウェルあたり１０ｎＬプレドット（predot）し、最終濃度を１μＭとした（１０μＬの血液中に１０ｎＬ）。３０秒間振盪機で混合した後、プレートを覆い、３７℃のチャンバー内に終夜＝１７時間置いた。固定／溶解バッファーを調製し（Ｈ_２０中５ｘ→１ｘ、３７℃で温める；Ｃａｔ＃ＢＤ５５８０４９）、後で使用するためにパームバッファーを（氷上で）維持した。

表面マーカー染色（ＣＤ６９）のために表面抗体を調製した：０．０４５μｌｈＣＤ１４－ＦＩＴＣ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＣａｔ＃ＭＨＣＤ１４０１）＋０．６μｌｈＣＤ１９－ｅｆ４５０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＣａｔ＃４８－０１９８－４２）＋１．５μｌｈＣＤ６９－ＰＥ（ｃａｔ＃ＢＤ５５５５３１）＋０．８５５μｌＦＡＣＳバッファー。３μｌ/ウェルで添加し、１０００ｒｐｍで１分間遠心し、振盪機で３０秒間混合し、氷上に３０分間置いた。３０分後、７０μＬの予め温めた１ｘ固定／溶解バッファーで刺激を停止させ、Feliex mateを用いて再懸濁し（１５回、プレートごとにチップを変えた）、３７℃で１０分間インキュベートした。

２０００ｒｐｍで５分間遠心し、ＨＣＳプレートウォッシャーで吸引し、振盪機で３０秒間混合し、次いで７０μＬのｄＰＢＳで洗浄し、ペレット状にすること２回（２０００ｒｐｍ、５分間）、５０μＬのＦＡＣＳバッファーで洗浄し、ペレット状にすること１回（２０００ｒｐｍ、５分間）を行った。振盪機で３０秒間混合した。細胞内マーカー染色（ＭＸ－１）については：５０μｌのＢＤＰｅｒｍバッファーＩＩＩを添加し、振盪機で３０秒間混合した。氷上で３０分間インキュベートした（遮光）。５０μＬのＦＡＣＳバッファーで２回洗浄し（透過処理後２３００ｒｐｍで５分間遠心）、続いて振盪機で３０秒間混合した。ＭＸ１抗体（(4812)－Ａｌｅｘａ６４７：ＮｏｖｕｓＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ＃ＮＢＰ２－４３７０４ＡＦ６４７）を含む２０μＬのＦＡＣＳバッファーで再懸濁した（２０μｌＦＡＣＳバッファー＋０．８ｕｌｈＩｇＧ＋０．０４μｌＭＸ－１）。１０００ｒｐｍで１分間遠心し、振盪機で３０秒間混合し、サンプルをＲＴで、暗所で４５分間インキュベートし、続いて２ｘＦＡＣＳバッファーで洗浄した（透過処理後２３００ｒｐｍで５分間遠心）。２０μｌのＦＡＣＳバッファーで再懸濁し（１ウェルあたり合計３５μＬ）、ホイルで覆い、４℃に置き、翌日に読み取った。プレートをｉＱｕｅＰｌｕｓで読み取った。結果をツールセットにロードし、カーブマスターでＩＣ５０曲線を作成した。ｙ軸の１００％は１μＭのレシキモドに設定されている。

マウス血液におけるＴＮＦ－アルファおよびＩ型ＩＦＮ応答遺伝子の誘導
ＴＮＦ－アルファおよびＩ型ＩＦＮ応答遺伝子の誘導は、ＴＬＲ７経路の活性化で起こる下流のイベントである。以下は、ＴＬＲ７アゴニストに対する応答における、マウス全血中のそれらの誘導を測定するアッセイである。

ヘパリン処置したマウス全血を、Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ１６４０培地で、５：４の比率で希釈した（５０μＬの全血および４０μＬの培地）。体積９０μＬの希釈血液をＦａｌｃｏｎ平底９６ウェル組織培養プレートのウェルに移し、プレートを４℃で１時間インキュべートした。１００％ＤＭＳＯストック中の試験化合物を、濃度応答アッセイのために同じ培地で２０倍希釈し、次いで１０μＬの希釈した試験化合物をウェルに添加し、最終ＤＭＳＯ濃度が０．５％となるようにした。コントールウェルに、５％ＤＭＳＯを含む１０μＬの培地を添加した。次にプレートを３７℃で、５％ＣＯ_２インキュベーター内で１７時間インキュベートした。インキュベート後、１００μＬの培地を各ウェルに添加した。プレートを遠心し、１３０μＬの上清を除去し、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα産生のアッセイに使用した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号８８－７３２４Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃより）。ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎｍＲＮＡＣａｔｃｈｅｒＰｌｕｓキット（Ｃａｔ＃Ｋ１５７０－０２）に由来する、ＤＴＴを含む体積７０μＬのｍＲＮＡキャッチャー溶解バッファー（１ｘ）を、ウェル中の残りの７０μＬサンプルに添加し、ピペッティングにより５回混合した。次にプレートをＲＴで５－１０分間振盪し、続いて２μＬのプロテイナーゼＫ（20 mg/mL）を各ウェルに添加した。次にプレートを１５－２０分間、ＲＴで振盪した。次に、さらに処理するまでの間、プレートを－８０℃で保存した。

冷凍サンプルを解凍し、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎｍＲＮＡＣａｔｃｈｅｒＰｌｕｓキット（Ｃａｔ＃Ｋ１５７０－０２）を用いて、製造業者の説明書に従ってｍＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ抽出から得られたｍＲＮＡの半量を用いて、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＶＶＩＬＯＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｃａｔ＃１１７５６５００）を使用して、２０μＬの逆転写酵素反応でｃＤＮＡを合成した。ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲシステムを用いて、ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲを行った。全てのリアルタイムＰＣＲ反応を、市販のマウスＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＭＸ１およびＰＰＩＡ遺伝子発現用プレデザインＴａｑＭａｎアッセイ並びにＴａｑＭａｎＭａｓｔｅｒＭｉｘを用いて、２回繰り返して行った。ＰＰＩＡは、ハウスキーピング遺伝子として利用した。製造業者からの勧告に従った。全ての生データ（Ｃｔ）を平均ハウスキーピング遺伝子（Ｃｔ）で正規化し、次に比較Ｃｔ（ΔΔＣｔ）法を利用して、実験解析のために、相対的な遺伝子発現量（ＲＱ）を定量化した。

定義
「脂肪族」は、特定の数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和非芳香族炭化水素部分を意味し（例えば、「Ｃ_３脂肪族」、「Ｃ_１－５脂肪族」、「Ｃ_１－Ｃ_５脂肪族」、または「Ｃ_１からＣ_５脂肪族」のように。後者３つの表現は１から５個の炭素原子を有する脂肪族部分と同義である）、炭素原子の数が明確に特定されない場合は、１から４個の炭素原子（不飽和脂肪族部分の場合は２から４個の炭素）である。同様の理解が、他の種類における炭素の数、つまりＣ_２－４アルケン、Ｃ_４－Ｃ_７シクロ脂肪族などに適用される。同様に、「（ＣＨ_２）_１－３」などの用語は、下付き文字が１、２、または３であることの省略表現として理解されるべきであり、そのため、かかる用語は、ＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２、およびＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２を表すことになる。

「アルキル」は、適用可能な炭素原子の数を指定するための同じ慣習に従う飽和脂肪族部分を意味する。実例として、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル部分には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、t－ブチル、1－ブチル、2－ブチル、および同類のものが挙げられるが、これらに限らない。「アルカンジイル」（時として「アルキレン」とも呼ばれる）は、アルキル基の２価の対応物を意味し、例えば、
などがある。

「アルケニル」は、適用可能な炭素原子の数を指定するための同じ慣習に従う、少なくとも一つの炭素－炭素二重結合を有する脂肪族部分を意味する。実例として、Ｃ_２－Ｃ_４アルケニル部分には、エテニル（ビニル）、2－プロペニル（アリルまたはプロプ－2－エニル）、シス－1－プロペニル、トランス－1－プロペニル、Ｅ－（またはＺ－）2－ブテニル、3－ブテニル、1,3－ブタジエニル（ブト－1,3－ジエニル）、および同類のものが挙げられるが、これらに限らない。

「アルキニル」は、適用可能な炭素原子の数を指定するための同じ慣習に従う、少なくとも一つの炭素－炭素三重結合を有する脂肪族部分を意味する。実例として、Ｃ_２－Ｃ_４アルキニル基には、エチニル（アセチレニル）、プロパルギル（プロプ－2－イニル）、1－プロピニル、ブト－2－イニル、および同類のものが挙げられる。

「シクロ脂肪族」は、１から３個の環を有し、各環が、３から８個（好ましくは３から６個）の炭素原子を有する、飽和または不飽和非芳香族炭化水素部分を意味する。「シクロアルキル」は、各環が飽和であるシクロ脂肪族部分を意味する。「シクロアルケニル」は、少なくとも一つの環が少なくとも一つの炭素－炭素二重結合を有する、シクロ脂肪族部分を意味する。「シクロアルキニル」は、少なくとも一つの環が少なくとも一つの炭素－炭素三重結合を有する、シクロ脂肪族部分を意味する。実例として、シクロ脂肪族部分には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびアダマンチルが挙げられるが、これらに限らない。好ましいシクロ脂肪族部分は、シクロアルキル部分、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルである。「シクロアルカンジイル」（時として「シクロアルキレン」とも呼ばれる）は、シクロアルキル基の２価の対応物を意味する。同様に、「ビシクロアルカンジイル」（または「ビシクロアルキレン」）および「スピロアルカンジイル」（または「スピロアルキレン」）は、ビシクロアルキルおよびスピロアルキル（または「スピロシクロアルキル」）基の２価の対応物を指す。実例として、
部分の例は、
であり、
部分の例は、
である。

「ヘテロシクロ脂肪族」は、少なくとも一つのその環において、最大３個（好ましくは１から２個）の炭素が、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選択されるヘテロ原子で置換されており、ここでＮおよびＳは、適宜酸化されてもよく、Ｎは、適宜四級化されてもよい、シクロ脂肪族部分を意味する。好ましいシクロ脂肪族部分は、５から６員の大きさの１つの環からなる。同様に、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」、および「ヘテロシクロアルキニル」は、少なくとも一つのその環が、そのように修飾されている、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはシクロアルキニル部分をそれぞれ意味する。代表的なヘテロシクロ脂肪族部分には、アジリジニル、アゼチジニル、1,3－ジオキサニル、オキセタニル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、1,3－ジオキソラニル、テトラヒドロ－1,1－ジオキソチエニル、1,4－ジオキサニル、チエタニル、および同類のものが挙げられる。「ヘテロシクロアルキレン」は、ヘテロシクロアルキル基の２価の対応物を意味する。

「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「アルキルチオ」、および「アリールチオ」は、それぞれ、－Ｏ（アルキル）、－Ｏ（アリール）、－Ｓ（アルキル）、および－Ｓ（アリール）を意味する。例は、それぞれ、メトキシ、フェノキシ、メチルチオ、およびフェニルチオである。

「ハロゲン」または「ハロ」は、より狭い意味が指示されない限り、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。

「アリール」は、各環が３から７個の炭素原子を有し、少なくとも一つの環が芳香族である、単、二、または三環式環系（好ましくは単環式）を有する、炭化水素部分を意味する。環系中の環は、（ナフチルのように）互いに縮合していてもよく、（ビフェニルのように）互いに結合していてもよく、（インダニルまたはシクロヘキシルフェニルのように）非芳香環と縮合または結合していてもよい。さらなる実例として、アリール部分には、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントラセニル、およびアセナフチルが挙げられるが、これらに限らない。「アリーレン」は、アリール基の２価の対応物、例えば1,2－フェニレン、1,3－フェニレン、または1,4－フェニレンを意味する。

「ヘテロアリール」は、各環が３から７個の炭素原子を有し、少なくとも一つの環が、Ｎ、Ｏ、またはＳから独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含む芳香環であり、ここでＮおよびＳは、適宜酸化されてもよく、Ｎは、適宜四級化されてもよい、単、二、または三環式環系（好ましくは５から７員の単環式）を有する部分を意味する。そのような少なくとも一つのヘテロ原子を含む芳香環は、（ベンゾフラニルまたはテトラヒドロイソキノリルのように）他の種類の環と縮合してもよく、（フェニルピリジルまたは2－シクロペンチルピリジルのように）他の種類の環と直接結合してもよい。さらなる実例として、ヘテロアリール部分には、ピロリル、フラニル、チオフェニル（チエニル）、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、N－オキソピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、キノザリニル、ナフチリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フェノチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、ジベンゾチオフェニル、アクリジニル、および同類のものが挙げられる。「ヘテロアリーレン」は、ヘテロアリール基の２価の対応物を意味する。

例えば「非置換の、または置換された」あるいは「適宜置換されてもよい」を用いる、つまり「非置換の、または置換されたＣ_１－Ｃ_５アルキル」あるいは「適宜置換されてもよいヘテロアリール」と表現するなどして、部分が置換されてもよいということが示される場合、かかる部分は、一つ以上の独立して選択される置換基、好ましくは数にして１から５個、より好ましくは数にして１から２個の置換基を有してもよい。置換基および置換パターンは、置換基が結合する部分を考慮して当業者により選択されることがあり、化学的に安定で、当技術分野で既知の技術、ならびに本明細書に記載される方法により合成され得る化合物を提供する。部分が、「非置換の、または置換された」あるいは「適宜置換されてもよい」ものとして特定される場合、好ましい実施形態において、かかる部分は非置換である。

「アリールアルキル」、「（ヘテロシクロ脂肪族）アルキル」、「アリールアルケニル」、「アリールアルキニル」、「ビアリールアルキル」、および同類のものは、場合によっては、アリール、ヘテロシクロ脂肪族、ビアリールなどで置換されたアルキル、アルケニル、またはアルキニル部分を、場合によっては、例えば、ベンジル、フェネチル、N－イミダゾイルエチル、N－モルホリノエチル、および同類のもののように、アルキル、アルケニル、またはアルキニル部分で開いた（不満足な）原子価を有する部分を意味する。反対に、「アルキルアリール」、「アルケニルシクロアルキル」、および同類のものは、場合によっては、アルキル、アルケニルなどで置換されたアリール、シクロアルキル、その他の部分、場合によっては、例えば、メチルフェニル（トリル）またはアリルシクロヘキシルのような部分を意味する。「ヒドロキシアルキル」、「ハロアルキル」、「アルキルアリール」、「シアノアリール」、および同類のものは、場合によっては、一つ以上の特定の置換基（場合によっては、ヒドロキシル、ハロなど）で置換されたアルキル、アリール、その他の部分を意味する。

例えば、許容される置換基には、アルキル（特にメチルまたはエチル）、アルケニル（特にアリル）、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロ脂肪族、ヘテロシクロ脂肪族、ハロ（特にフルオロ）、ハロアルキル（特にトリフルオロメチル）、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル（特にヒドロキシエチル）、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）（特に－ＯＣＦ_３）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、－Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（シクロアルキル）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２、および同類のものが挙げられるが、これらに限らない。

置換される部分が脂肪族部分の場合、好ましい置換基は、アリール、ヘテロアリール、シクロ脂肪族、ヘテロシクロ脂肪族、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、－Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－Ｓ（シクロアルキル）、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（アリール）、＝Ｏ、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。特に好ましい置換基は、フェニル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｃ_１－Ｃ_４アルコキシ、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルカンジイル）ＯＨ、およびＯ（Ｃ_２－Ｃ_４アルカンジイル）ハロである。

置換される部分がシクロ脂肪族、ヘテロシクロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリール部分の場合、好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）、－Ｏ（アリール）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、アルキルチオ、アリールチオ、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（シクロアルキル）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。特に好ましい置換基は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、シアノ、ニトロ、ハロ、およびＣ_１－Ｃ_４アルコキシである。

「Ｃ_１－Ｃ_５アルキル」または「５から１０％」のように範囲が述べられる場合、かかる範囲は、範囲の終点、つまり第一の例においてはＣ_１およびＣ_５、並びに第二の例においては５％および１０％を含む。

（例えば、構造式中の関連する立体中心における価標を太線にするか、または破線にすることにより、構造式中で、二重結合をＥまたはＺ配置を有するものとして描くことにより、あるいは立体化学を指定する命名法または記号を用いることにより）特定の立体異性体が明確に指示されない限り、全ての立体異性体が、純粋化合物ならびにその混合物として本発明の範囲内に含まれる。特に断らない限り、ラセミ体、個々のエナンチオマー（光学的に純粋であろうと部分的に分割されていようと）、ジアステレオマー、幾何異性体、およびそれらの組み合わせ、並びにそれらの混合物は、本発明により全て包含される。

当業者は、化合物が、本明細書で使用される構造式に描かれるものと同等の互変異性体（例えば、ケトおよびエノール形）、共鳴構造、および双性イオン型を有することがあり、構造式は、そのような互変異性体、共鳴構造、双性イオン型を包含するということを認識するであろう。

「薬学的に許容されるエステル」は、インビボで（例えば人体内で）加水分解し、親化合物またはその塩を生成するか、あるいはそれ自体が親化合物の活性と類似のそれを有するエステルを意味する。適当なエステルには、Ｃ_１－Ｃ_５アルキル、Ｃ_２－Ｃ_５アルケニルまたはＣ_２－Ｃ_５アルキニルエステル、特にメチル、エチルまたはｎ－プロピルエステルが挙げられる。

「薬学的に許容される塩」は、医薬製剤に適する化合物の塩を意味する。化合物が一つ以上の塩基性基を有する場合、塩は、酸付加塩、例えば、硫酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、塩酸塩、乳酸塩、メチル硫酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、メシル酸塩、ラクトビオン酸塩、スベリン酸塩、トシル酸塩、および同類のものなどであり得る。化合物が一つ以上の酸性基を有する場合、塩は、カルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニウム塩、亜鉛塩、ピペラジン塩、トロメタミン塩、リチウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、4－フェニルシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、ナトリウム塩、テトラメチルアンモニウム塩、および同類のものなどの塩であり得る。多形結晶性形態および溶媒和物も本発明の範囲内に包含される。

「患者（subject）」は動物を指し、霊長類（例えば、ヒト）、サル、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、またはマウスを含むが、これらに限らない。「患者（subject）」および「患者（patient）」という用語は、例えば、ヒトなどの哺乳動物の患者に関して、本明細書で互換的に使用される。

「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、および「治療（treatment）」という用語は、疾患または障害の治療の文脈において、障害、疾患、または病態、あるいは障害、疾患、もしくは病態に関連する症状のうちの一つ以上を軽減するか、または抑制すること；あるいは疾患、障害、または病態の、あるいは一つ以上のそれらの症状の進行、拡大または悪化を遅らせることを含むように意図される。「がんの治療」は、以下の効果のうちの一つ以上を指す：（１）（ｉ）遅延および（ｉｉ）完全な増殖停止を含む、ある程度の腫瘍増殖の阻害；（２）腫瘍細胞数の減少；（３）腫瘍の大きさの維持；（４）腫瘍の大きさの減少；（５）末梢臓器への腫瘍細胞浸潤の（ｉ）減少、（ｉｉ）遅延または（ｉｉｉ）完全な予防を含む阻害；（６）転移の（ｉ）減少、（ｉｉ）遅延または（ｉｉｉ）完全な予防を含む阻害；（７）（ｉ）腫瘍の大きさの維持、（ｉｉ）腫瘍の大きさの減少、（ｉｉｉ）腫瘍の増殖の遅延、（ｉｖ）浸潤の減少、遅延または予防をもたらすことがある、抗腫瘍免疫応答の増強および／または（８）ある程度の、障害に関連する一つ以上の症状の重症度または数の軽減。

本明細書の式において、価標に対して横方向の波線（
）または価標の末端にあるアスタリスク（＊）は、共有結合部位を意味する。例えば、式
において、Ｒは
である、またはＲは
であるという記述は、
を意味する。

本明細書の式において、その２つの炭素の間で芳香環を横切る価標は、その価標に結合する基が、黙示的にそこにある（または、完全に書かれている場合、明示的にそこにある）水素の除去によって空きができる芳香環の位置のうちのどこにあってもよいということを意味する。実例として、下記の式：
は、
を表す。

他の実例において、
は、
を表し、
は、
を表す。

本開示は、本明細書に記載される化合物で生じる原子の全ての同位体を含む。同位体は、原子番号は同じだが異なる質量数を有する原子を含む。一般的な例であり、限定ではないが、水素の同位体には重水素およびトリチウムが挙げられる。炭素の同位体には、^１３Ｃおよび^１４Ｃが挙げられる。同位体標識した本発明の化合物は、一般的に、他の場合に使用される非標識試薬の代わりに、同位体標識した適切な試薬を用いて、当業者に既知の従来の技術により、または本明細書に記載されるものと類似の工程により調製され得る。例として、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基は、重水素化されていなくても、部分的に重水素化されていても、完全に重水素化されていてもよく、「ＣＨ_３」には、ＣＨ_３、^１３ＣＨ_３、^１４ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｔ、ＣＨ_２Ｄ、ＣＨＤ_２、ＣＤ_３などが含まれる。一つの実施形態において、化合物中の様々な元素は、それらの天然の同位体存在度で存在する。

当業者は、特定の構造はどちらの互変異性体－例えば、ケトかエノールか－で描かれてもよく、その２つの形態は等価であるということを認識するであろう。

アクロニムおよび略語
これは、本明細書で使用されるアクロニムおよび略語にその意味を添えた表である。

参考文献
本明細書の初めの方で、筆頭著者（または発明者）および日付により省略された形で引用される以下の参考文献に対する完全な引用を以下に提供する。これらの参考文献のそれぞれは、あらゆる目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。

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前述の本発明の詳細な説明は、本発明の特定の部分または態様に、主にまたは排他的に関係する節を含む。これは、明確化のため、および便宜のためであり、特定の特徴は、それが開示される節だけでなくその他の節においても関連していることがあり、本明細書における開示は、異なる節に記載される情報の、全ての適切な組み合わせを含むことが理解されるべきである。同様に、本明細書における様々な図および説明は、本発明の特定の実施形態に関するが、具体的な特徴が、特定の図または実施形態の文脈で開示される場合、かかる特徴は、適切な範囲で、別の図または実施形態の文脈で、別の特徴と組み合わせて、または本発明一般においても使用され得るということが理解されるべきである。

さらに、本発明は、特定の好ましい実施形態について特に記載されているが、本発明は、かかる好ましい実施形態に限定されない。それどころか、本発明の範囲は、添付の請求項により定義される。

Claims

下記の式（Ｉｅ）：
［式中：Ｒ ^１は、
であり；
Ｒ ^４は、
であり；
Ｒ ^５は、ＨまたはＭｅである］
で示される構造を有する化合物。
下記の式（Ｉｆ）：
［式中、
Ｒ^１は、
であり；
Ｗは、
である］
で示される構造を有する化合物。
抗がん免疫療法剤および請求項１または２に記載の化合物を含む、がんを治療するための医薬組成物。
前記抗がん免疫療法剤が、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項３に記載の医薬組成物。
前記抗がん免疫療法剤が、イピリムマブ、ニボルマブ、またはペムブロリズマブである、請求項３に記載の医薬組成物。
前記がんが、肺癌（非小細胞肺癌を含む）、膵臓癌、腎臓癌、頭頸部癌、リンパ腫（ホジキンリンパ腫を含む）、皮膚癌（黒色腫およびメルケル皮膚癌を含む）、尿路上皮癌（膀胱癌を含む）、胃癌、肝細胞癌、または結腸直腸癌である、請求項
３～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。