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JP7766583B2 - 強化された薬剤送達のための組成物及び方法 - Google Patents

強化された薬剤送達のための組成物及び方法

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JP7766583B2 JP2022507621A JP2022507621A JP7766583B2 JP 7766583 B2 JP7766583 B2 JP 7766583B2 JP 2022507621 A JP2022507621 A JP 2022507621A JP 2022507621 A JP2022507621 A JP 2022507621A JP 7766583 B2 JP7766583 B2 JP 7766583B2
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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年８月７日に出願された米国仮出願第６２／８８４，１３３号の優先権を主張するものであり、参照によりその全内容が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年７月２１日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｍ２１８０－７０００ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、１２，６１２バイトのサイズである。
小分子薬物、タンパク質、及び核酸などの生物活性物質の有効な標的化送達は、継続中の医療上の課題である。特に、核酸の細胞への送達は、そのような種が比較的不安定で細胞への透過性が低いために困難となる。よって、核酸などの治療薬及び／または予防薬を細胞へ送達しやすくする方法及び組成物を開発する必要性が存在する。
脂質含有ナノ粒子組成物、リポソーム、及びリポプレックスは、小分子薬物、タンパク質、及び核酸などの生物活性物質を細胞及び／または細胞内区画内へ輸送するビヒクルとして有効であることが判明している。そのような組成物は一般に、１つ以上の、（１）「カチオン性」及び／またはアミノ（イオン性）脂質、（２）リン脂質及び／または多価不飽和脂質（ヘルパー脂質）、（３）構造脂質（例えば、ステロール）、及び／または（４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ脂質）、を含有する脂質を含む。最適には、脂質ナノ粒子組成物は、１）アミノ（イオン性）脂質、２）リン脂質、３）構造脂質またはそのブレンド、４）ＰＥＧ脂質、及び５）薬剤、の各々を含有する。カチオン性及び／またはイオン性脂質には、例えば、容易にプロトン化することができるアミン含有脂質が含まれる。そのような種々の脂質含有ナノ粒子組成物が明示されてきたが、安全性及び有効性を維持しながら所望の細胞集団に到達させるために有効な送達ビヒクルはいまだに不足している。
幾つかの態様では、標的細胞送達ＬＮＰを使用することによって、標的細胞への送達がｉｎ ｖｉｔｒｏで強化され、一方他の態様では、標的細胞への送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される。ｉｎ ｖｉｖｏで投与されるとき、一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較して肝臓及び脾臓への強化された薬剤送達を明示する。幾つかの態様では、標的細胞、例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞）または脾細胞にＬＮＰをｉｎ ｖｉｔｒｏで接触させる。幾つかの態様では、ＬＮＰを対象、例えばヒト対象に投与することによって、標的細胞にＬＮＰをｉｎ ｖｉｖｏで接触させる。一実施形態では、対象は、例えば標的細胞における、標的タンパク質のタンパク質発現の調節から利益を得ると思われる者である。幾つかの態様では、ＬＮＰは、静脈内に投与される。幾つかの態様では、ＬＮＰは、筋肉内に投与される。幾つかの態様では、ＬＮＰは、皮下、結節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
一実施形態では、薬剤は、核酸分子を含んでもよいし、または核酸分子からなっていてもよい。幾つかの態様では、核酸分子は、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される。幾つかの態様では、核酸分子は、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択されるＲＮＡである。幾つかの実施形態では、核酸分子は、ｓｉＲＮＡ分子である。幾つかの実施形態では、核酸分子は、ｍｉＲである。幾つかの実施形態では、核酸分子は、アンタゴｍｉｒである。幾つかの態様では、核酸分子は、ＤＮＡである。幾つかの態様では、核酸分子は、ｍＲＮＡである。
したがって、一態様では、本発明は、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を特徴とする。
ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。
ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、例えば、実施例６のアッセイによって測定したときに、約３０～７５％、４０～７５％、５０～７５％、５５～７５％、６０～７５％、６５～７５％、７０～７５％、３０～７０％、３０～６５％、３０～６０％、３０～５５％、３０～５０％、または３０～４０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、総肝細胞の約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、または７０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、約６０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。
ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現の、例えば、肝実質細胞の発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍の増大をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現の、例えば、肝実質細胞の発現の約３倍の増大をもたらす。
ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、例えば、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する。
一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、以下：
ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす。
ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏで有し、前記向上したパラメータは、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される。
別の態様では、本発明は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）を強化する方法であって、
本明細書に記載の送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、対象におけるペイロードレベルを強化するのに十分な量で対象に投与すること
を含む方法を特徴とする。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
ある態様では、本発明は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）を強化する方法を特徴とする。該方法は、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を対象に投与することを含み、該標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与される。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
ある態様では、本発明は、対象における障害もしくは疾患、例えば奇病を治療するまたはその症状を改善する方法を特徴とする。該方法は、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を対象に投与することを含み、該標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与され、
それによって、障害もしくは疾患を治療するまたはその症状を改善する。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
本明細書に開示の方法のいずれかの実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、例えば、実施例６のアッセイによって測定したときに、約３０～７５％、４０～７５％、５０～７５％、５５～７５％、６０～７５％、６５～７５％、７０～７５％、３０～７０％、３０～６５％、３０～６０％、３０～５５％、３０～５０％、または３０～４０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、総肝細胞の約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、または７０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、約６０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす。
本明細書に開示の方法のいずれかの実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現の、例えば、肝実質細胞の発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍の増大をもたらす。ある実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現の、例えば、肝実質細胞の発現の約３倍の増大をもたらす。
本明細書に開示の方法のいずれかの実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、例えば、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する。
本明細書に開示の方法のいずれかの実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、以下：
ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす量で投与される。
本明細書に開示の方法のいずれかの実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏでもたらす量で投与され、前記向上したパラメータは、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される。
幾つかの態様では、該方法は、同じまたは異なる核酸分子をカプセル化した第２のＬＮＰを同時にまたは連続して投与することをさらに含み、第２のＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まず、例えば、異なるイオン性脂質を含む。他の態様では、該方法は、異なる核酸分子をカプセル化した第２のＬＮＰを同時にまたは連続して投与することをさらに含み、第２のＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含み、例えば、同じイオン性脂質を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、強化された送達は、参照ＬＮＰ、例えば、異なるイオン性脂質を含むＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比べたものである。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、強化された送達は、適切な対照と比べたものである。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、薬剤は、標的細胞、例えば、本明細書に記載されるようなもの、例えば、肝細胞または脾細胞におけるタンパク質発現を刺激する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞、例えば、本明細書に記載されるようなもの、例えば、肝細胞または脾細胞におけるタンパク質発現を阻害する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞活性、例えば、肝細胞または脾細胞活性を調節する可溶性タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞活性、例えば、肝細胞または脾細胞活性を調節する細胞内タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞活性、例えば、肝細胞または脾細胞活性を調節する膜貫通タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞の機能、例えば、肝細胞または脾細胞の機能を強化する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、標的細胞の機能、例えば、肝細胞または脾細胞の機能を阻害する。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせである。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、非免疫細胞である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロール、またはフィトステロールとコレステロールとの組み合わせを含む。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、化合物Ｓ－１４１、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１４３、及び化合物Ｓ－１４８の組み合わせである。一実施形態では、フィトステロールは、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一実施形態では、フィトステロールは、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一実施形態では、フィトステロールは、ベータ－シトステロール
またはその塩もしくはエステルを含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロールまたはその塩もしくはエステル、及びコレステロールまたはその塩を含む。
幾つかの実施形態では、標的細胞は、本明細書に記載の細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）であり、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、及びブラシカステロール、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトスタノールである。一実施形態では、フィトステロールは、カンペステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、ブラシカステロールである。
幾つかの実施形態では、標的細胞は、本明細書に記載の細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）であり、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β－シトステロール及びスチグマステロール、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、スチグマステロールである。
本開示のＬＮＰまたは方法の幾つかの実施形態では、ＬＮＰは、ステロールまたはその塩もしくはエステル及びコレステロールまたはその塩を含み、標的細胞は本明細書に記載の細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）であり、ステロールまたはその塩もしくはエステルは、β－シトステロール－ｄ７、ブラシカステロール、化合物Ｓ－３０、化合物Ｓ－３１、及び化合物Ｓ－３２からなる群から選択される。
一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％～５０％の間である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％～４０％の間である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％～３０％の間である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、イオン性脂質は、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、もしくは（Ｉ ＸＩ－ｂ）のいずれかの化合物を含み、及び／または化合物Ｉ－１８、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－１８４、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、及び化合物Ｉ－３５２からなる群から選択される化合物を含む。
一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－１８４、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、及び化合物Ｉ－３５２からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、及び化合物Ｉ－３５２からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－５０、及び化合物Ｉ－１８４からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－１８４、化合物Ｉ－３０１、及び化合物Ｉ－３２１からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－４９を含む。
幾つかの実施形態では、標的細胞は、本明細書に記載の細胞であり、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む。他の実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞または脾実質細胞であり、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１を含む。一実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－４９を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、鏡像異性体、例えば、アミノ脂質の（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｒ）鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な（Ｒ）鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｓ）鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な（Ｓ）鏡像異性体を含む。
一実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質のラセミ混合物、例えば、アミノ脂質の（Ｒ）鏡像異性体及び（Ｓ）鏡像異性体を含む混合物を含む。一実施形態では、ラセミ混合物は、約１～９９％、５～９９％、１０～９９％、１５～９９％、２０～９９％、２５～９９％、３０～９９％、３５～９９％、４０～９９％、４５～９９％、５０～９９％、５５～９９％、６０～９９％、６５～９９％、７０～９９％、７５～９９％、８０～９９％、８５～９９％、９０～９９％、９５～９９％、１～９５％、１～９０％、１～８５％、１～８０％、１～７５％、１～７０％、１～６５％、１～６０％、１～５５％、１～５０％、１～４５％、１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～１０％、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０５、８０～９０％、または９０～９９％の（Ｒ）鏡像異性体を含む。一実施形態では、ラセミ混合物は、約１～９９％、５～９９％、１０～９９％、１５～９９％、２０～９９％、２５～９９％、３０～９９％、３５～９９％、４０～９９％、４５～９９％、５０～９９％、５５～９９％、６０～９９％、６５～９９％、７０～９９％、７５～９９％、８０～９９％、８５～９９％、９０～９９％、９５～９９％、１～９５％、１～９０％、１～８５％、１～８０％、１～７５％、１～７０％、１～６５％、１～６０％、１～５５％、１～５０％、１～４５％、１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～１０％、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０５、８０～９０％、または９０～９９％の（Ｓ）鏡像異性体を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、化合物Ｈ－４０９、化合物Ｈ－４１８、化合物Ｈ－４２０、化合物Ｈ－４２１、及び化合物Ｈ－４２２からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、化合物Ｈ－４１８、化合物Ｈ－４２０、化合物Ｈ－４２１、及び化合物Ｈ－４２２からなる群から選択される化合物を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、本明細書に記載の細胞であり、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。一実施形態では、リン脂質はＤＭＰＥである。一実施形態では、リン脂質は、化合物Ｈ－４０９である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、標的細胞は、本明細書に記載の細胞であり、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質はＤＳＰＣである。一実施形態では、リン脂質は、ＤＭＰＥである。一実施形態では、リン脂質は、化合物Ｈ－４０９である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、及び化合物Ｐ－Ｌ２３からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物４２８、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ１、及び化合物Ｐ－Ｌ２からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、及び化合物Ｐ－Ｌ２３からなる群から選択される。化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３、及び化合物Ｐ－Ｌ２５。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％は、フィトステロール１８．５％であり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。一実施形態では、ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％は、フィトステロール２８．５％であり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約４１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％～約１９ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－３０１、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－３０１、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－３０１、及び１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－３０１、及び１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－４９、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－４９、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－４９、及び１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、５０ｍｏｌ％の化合物Ｉ－４９、及び１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、
（ｉ）化合物Ｉ－３０１、及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物である、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質；
（ｉｉ）ＤＳＰＣである、約１０ｍｏｌ％のリン脂質；
（ｉｉｉ）β－シトステロール及びコレステロールから選択される、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質；ならびに
（ｉｖ）化合物Ｐ－４２８である、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質；
を含む。
幾つかの態様では、本開示は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロード発現）を強化する方法に使用するための標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、該ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉ）イオン性脂質；及び
（ｉｉｉ）対象における標的細胞に送達するための薬剤；
を含み、（ｉ）ステロールもしくは他の構造脂質及び／または（ｉｉ）イオン性脂質の１つ以上は、対象におけるペイロードレベルを強化するか、または標的細胞対象へのＬＮＰの送達を強化するのに有効な量で標的細胞送達増強脂質を含む。
ある実施形態では、強化された送達は、参照ＬＮＰと比べた前記ＬＮＰの性質である。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まない。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、式ＩーＸＩＩを有するイオン性脂質を含む。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
幾つかの態様では、本開示は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロード発現）を強化する方法に使用するための標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、該ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉ）イオン性脂質；及び
（ｉｉｉ）対象における標的細胞に送達するための薬剤；
を含み、ステロールもしくは他の構造脂質は、対象におけるペイロードレベルを強化するか、または標的細胞対象へのＬＮＰの送達を強化するのに有効な量で標的細胞送達増強脂質を含み、
強化された送達は、参照ＬＮＰと比べた前記ＬＮＰの性質である。
ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まない。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、式ＩーＸＩＩを有するイオン性脂質を含む。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
幾つかの態様では、本開示は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロード発現）を強化する方法に使用するための標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
該ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉ）イオン性脂質；及び
（ｉｉｉ）対象における標的細胞に送達するための薬剤；
を含み、イオン性脂質は、標的細胞（例えば、本明細書に記載されるようなもの、例えば、肝細胞または脾細胞）へのＬＮＰの送達を強化するのに有効な量で標的細胞送達増強脂質を含み、
強化された送達は、参照ＬＮＰと比べた前記ＬＮＰの性質である。
ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まない。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、式ＩーＸＩＩを有するイオン性脂質を含む。
ある実施形態では、標的細胞は、肝細胞、例えば肝実質細胞である。ある実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、ステロールまたは他の構造脂質は、フィトステロールまたはコレステロールである。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞送達増強脂質は、参照ＬＮＰと比較して、肝細胞（例えば、肝実質細胞）、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞によって優先的に取り込まれる。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まず、及び／または肝細胞（例えば、肝実質細胞）、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞によって優先的に取り込まれない。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本明細書に記載の標的細胞に送達するための薬剤は、核酸分子である。幾つかの態様では、薬剤は、標的細胞における目的のタンパク質の発現を刺激する。幾つかの態様では、標的細胞へ送達するための薬剤は、目的のタンパク質をコードする核酸分子である。幾つかの態様では、標的細胞へ送達するための薬剤は、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡである。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞における目的のタンパク質の発現は、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比べて強化される。幾つかの態様では、薬剤は、標的細胞活性を調節するタンパク質をコードする。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞は、肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、または肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせである。幾つかの態様では、肝細胞は、肝実質細胞である。幾つかの態様では、肝実質細胞は、肝星細胞である。幾つかの態様では、肝実質細胞は、クッパー細胞である。幾つかの態様では、肝実質細胞は、肝類洞細胞である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞は、脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞は、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞は、免疫細胞ではない。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、（ｉｖ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び／または（ｖ）ＰＥＧ脂質をさらに含む。
幾つかの態様では、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質をさらに含む。幾つかの態様では、標的細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質をさらに含む。幾つかの態様では、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及びＰＥＧ脂質をさらに含む。
幾つかの態様では、本開示は、薬剤を標的細胞（例えば、本明細書に記載されるようなもの、例えば、肝細胞、例えば、肝実質細胞）に送達するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法を提供し、該方法は、標的細胞送達増強脂質を含む標的細胞送達ＬＮＰに標的細胞を接触させることを含む。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法の幾つかの態様では、該方法は、標的細胞の活性化または活性の調節をもたらす。
前記ＬＮＰ組成物または前記ＬＮＰ組成物を使用する方法のいずれかの追加の特徴には、以下に列挙する実施形態のうちの１つ以上が含まれる。当業者であれば、慣用的な実験方法のみを使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような等価物は、以下に列挙する実施形態に包含されることが意図される。
本開示の他の実施形態
本開示は、以下の実施形態に関する。このセクションを通して、実施形態という用語は「Ｅ」として略記され、そのあとに序数が続く。例えば、Ｅ１は、実施形態１と等しい。
Ｅ１．一態様では、本発明は、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、前記標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を特徴とする。
Ｅ２．前記標的細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞である、Ｅ１に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３．３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、Ｅ１またはＥ２に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４．例えば実施例６のアッセイによって測定したときに、約３０～７５％、４０～７５％、５０～７５％、５５～７５％、６０～７５％、６５～７５％、７０～７５％、３０～７０％、３０～６５％、３０～６０％、３０～５５％、３０～５０％、または３０～４０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ５．総肝細胞の約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、または７０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ６．総肝細胞の約６０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ７．参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ８．参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または６倍の増大をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ９．参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の１．５～６倍、１．５～５倍、１．５～４倍、１．５～３倍、１．５～２倍、２～６倍、３～６倍、４～６倍、または５～６倍の増大をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１０．参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約３倍の増大をもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１１．例えば、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１２．ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１３．参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏで有し、前記向上したパラメータが、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％超、またはそれ以上の総肝細胞における、強化されたペイロードの発現及び／または活性；あるいは
８）強化されたエンドソーム脱出；
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１４．９）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
１０）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
１１）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
１２）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１５．全身送達のために製剤化される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１６．全身的に、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）、または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１７．タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１８．前記ペイロードを肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせに送達する、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ１９．前記ペイロードを肝実質細胞に送達する、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２０．前記ペイロードを非免疫細胞に送達する、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２１．前記ペイロードを脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）に送達する、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２２．前記ペイロードを卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される細胞に送達する、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２３．前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２４．前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２５．前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２６．前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２７．前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２８．前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ２９．送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３０．前記ペイロードが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３１．前記ペイロードが、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡから選択される核酸分子である、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３２．前記ペイロードが、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３３．前記ペイロードが、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、またはＣＲＩＳＰＲである、先行する実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３４．前記ペイロードが、ｍＲＮＡである、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３５．前記ペイロードが、免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡである、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３６．前記ペイロードが、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、抗体分子、または酵素をコードするｍＲＮＡから選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３７．前記ペイロードが、抗体分子をコードするｍＲＮＡである、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３８．前記ペイロードが、酵素をコードするｍＲＮＡである、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ３９．前記酵素が、奇病（例えば、リソソーム蓄積症）に関連している、Ｅ３８に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４０．前記酵素が、代謝障害（例えば、本明細書に記載されるようなもの）に関連している、Ｅ３８に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４１．前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、Ｅ３８またはＥ３９に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４２．参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低い用量で投与することができる、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４３．参照ＬＮＰの用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で投与される、Ｅ４２に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４４．より低い用量で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、Ｅ４２またはＥ４３に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４５．参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低減された回数で投与することができる、先行実施形態のいずれか１つに記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４６．前記標的細胞送達ＬＮＰの投与回数が、参照ＬＮＰの投与回数より少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％少ない、Ｅ４５に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４７．より少ない回数で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、Ｅ４５またはＥ４６に記載の標的細胞送達ＬＮＰ。
Ｅ４８．ある態様では、本発明は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）を強化する方法であって、
Ｅ１～Ｅ４７のいずれか１つに記載の前記送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、前記対象におけるペイロードレベルを強化するのに十分な量で前記対象に投与すること
を含む、前記方法を特徴とする。
Ｅ４９．ある態様では、本発明は、対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）を強化する方法であって、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を前記対象に投与することを含み、前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与される、
前記方法を特徴とする。
Ｅ５０．ある態様では、本発明は、対象における障害もしくは疾患、例えば奇病を治療するまたはその症状を改善する方法であって、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を前記対象に投与することを含み、前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与され、それによって障害もしくは疾患を治療するまたはその症状を改善する、
前記方法を特徴とする。
Ｅ５１．前記標的細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞である、Ｅ４９またはＥ５０に記載の方法。ある実施形態では、前記標的細胞は、肝実質細胞である。
Ｅ５２．前記標的細胞送達ＬＮＰが、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５１のいずれか１つに記載方法。
Ｅ５３．標的細胞送達ＬＮＰが、例えば実施例６のアッセイによって測定したときに、約３０～７５％、４０～７５％、５０～７５％、５５～７５％、６０～７５％、６５～７５％、７０～７５％、３０～７０％、３０～６５％、３０～６０％、３０～５５％、３０～５０％、または３０～４０％の総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５４．前記標的細胞送達ＬＮＰが、総肝細胞の約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、または７０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５５．前記標的細胞送達ＬＮＰが、総肝細胞の約６０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５６．前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５７．前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍の増大をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５８．前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約３倍の増大をもたらす、Ｅ４９～Ｅ５７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５９．前記標的細胞送達ＬＮＰが、例えば、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する、Ｅ４９～Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６０．前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす量で投与される、Ｅ４９～Ｅ５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６１．前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏでもたらす量で投与され、前記向上したパラメータが、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％超、またはそれ以上の総肝細胞における、強化されたペイロードの発現及び／または活性；あるいは
８）強化されたエンドソーム脱出；
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、
Ｅ４９～Ｅ６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６２．前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
１）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
２）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
３）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
４）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす量で投与される、Ｅ４９～Ｅ６１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６３．前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身送達のために製剤化される、Ｅ４９～Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６４．前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身的に、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与される、Ｅ４９～Ｅ６３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６５．前記標的細胞送達ＬＮＰが、タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、Ｅ４９～６４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６６．前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせに送達する、Ｅ４９～Ｅ６５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６７．前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを肝実質細胞に送達する、Ｅ４９～Ｅ６６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６８．前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）に送達する、Ｅ４９～Ｅ６７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６９．前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される細胞に送達する、Ｅ４９～Ｅ６８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７０．前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを非免疫細胞に送達する、Ｅ４９～Ｅ６９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７１．前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、Ｅ４９～Ｅ６９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７２．前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、Ｅ４９～Ｅ７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７３．前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、Ｅ４９～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７４．前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、Ｅ４９～Ｅ７３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７５．前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、Ｅ４９～Ｅ７４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７６．前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、Ｅ４９～Ｅ７５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７７．送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、Ｅ４９～Ｅ７６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７８．前記ペイロードがペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、Ｅ４９～Ｅ７６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７９．前記ペイロードが、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡから選択される核酸分子である、Ｅ４９～Ｅ７８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８０．前記ペイロードが、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、Ｅ４９～Ｅ７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８１．前記ペイロードが、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、またはＣＲＩＳＰＲである、Ｅ４９～Ｅ８０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８２．前記ペイロードが、免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡである、Ｅ４９～Ｅ８１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８３．前記ペイロードが、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、または酵素をコードするｍＲＮＡから選択される、Ｅ４９～Ｅ８２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８４．前記ペイロードが、抗体分子をコードするｍＲＮＡである、Ｅ４９～Ｅ８３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８５．前記ペイロードが、酵素をコードするｍＲＮＡである、Ｅ４９～Ｅ８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８６．前記酵素が、奇病（例えば、（リソソーム蓄積症）または代謝障害（例えば、本明細書に記載されるようなもの）に関連している、Ｅ４９～Ｅ８５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８７．前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、Ｅ８６に記載の方法。
Ｅ８８．前記疾患が、代謝障害である、Ｅ８６に記載の方法。
Ｅ８９．前記標的細胞送達ＬＮＰを、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低い用量で投与することができる、Ｅ４９～Ｅ８８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９０．前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰの用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で投与される、Ｅ４９～Ｅ８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９１．より低い用量で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、Ｅ９０に記載の方法。
Ｅ９２．前記標的細胞送達ＬＮＰを、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低減された回数で投与することができる、Ｅ９０またはＥ９１に記載の方法。
Ｅ９３．前記標的細胞送達ＬＮＰの投与回数が、参照ＬＮＰの投与回数より少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％少ない、Ｅ９２に記載の方法。
Ｅ９４．より少ない回数で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ９５．前記イオン性脂質が、アミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ９６．前記イオン性脂質が、式（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ ＶＩＩＩｄ）のいずれかの化合物を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ９７．前記イオン性脂質が、スクアラミド頭部基を有するアミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ９８．前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１、化合物（Ｒ）Ｉ－３０１、化合物（Ｓ）Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４９、化合物（Ｒ）Ｉ－４９、化合物（Ｓ）Ｉ－４９、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、及び化合物Ｉ－３５２からなる群から選択される化合物を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ９９．前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９から選択される化合物を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１００．前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０１．前記イオン性脂質が化合物Ｉ－４９を含む、Ｅ１～Ｅ９９のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０２．前記細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞であり、前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む、Ｅ１～Ｅ９９のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０３．前記細胞が、脾細胞、例えば脾実質細胞であり、前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む、Ｅ１～Ｅ９９のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０４．前記イオン性脂質が、前記アミノ脂質のラセミ混合物、例えば、アミノ脂質の（Ｒ）鏡像異性体及び（Ｓ）鏡像異性体を含む混合物を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０５．前記イオン性脂質が、鏡像異性体、例えば、アミノ脂質の（Ｒ）鏡像異性体または（Ｓ）鏡像異性体を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０６．前記イオン性脂質が、前記アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｒ）鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な鏡像異性体を含む、Ｅ１０５に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０７．前記イオン性脂質が、前記アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｓ）鏡像異性体、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋な鏡像異性体を含む、Ｅ１０５に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０８．前記参照ＬＮＰが、式Ｉ－ＸＩＩを有するイオン性脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１０９．前記参照ＬＮＰが、キラル中心を有するイオン性脂質を含まない、Ｅ１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１０．前記参照ＬＮＰが、複数の分岐アルキル鎖を含むイオン性脂質を含まない、Ｅ１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１１．前記参照ＬＮＰが、環置換アミノ脂質を含まない、Ｅ１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１２．前記参照ＬＮＰが、炭素環置換イオン性脂質を含まない、Ｅ１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１３．前記参照ＬＮＰが、シクロアルケニル置換アミノ脂質を含まない、Ｅ１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１４．前記標的細胞送達ＬＮＰが、キラル中心を有するアミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１５．前記標的細胞送達ＬＮＰが、複数の分岐アルキル鎖を含むイオン性脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１６．前記標的細胞送達ＬＮＰが、環置換アミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１７．前記標的細胞送達ＬＮＰが、炭素環置換アミノ脂質を含む、Ｅ１～Ｅ１１４またはＥ１１６のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１８．前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロアルケニル置換アミノ脂質を含む、Ｅ１～Ｅ１１４またはＥ１１６～Ｅ１１７のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１１９．前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロブテニル置換アミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２０．前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロブテン－１，２－ジオン置換アミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２１．前記標的細胞送達ＬＮＰが、スクアラミド置換アミノ脂質、例えば、スクアラミド基を含むアミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２２．前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、化合物Ｈ－４０９、化合物Ｈ－４１８、化合物Ｈ－４２０、化合物Ｈ－４２１、及び化合物Ｈ－４２２からなる群から選択される化合物を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２３．前記細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞であり、前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む、Ｅ１２２に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２４．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ１２２に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２５．前記リン脂質が、ＤＭＰＥである、Ｅ１２２に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２６．前記リン脂質が、化合物Ｈ－４０９である、Ｅ１２２に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２７．ＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２８．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ１２７に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１２９．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、Ｅ１２７に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３０．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ－ＤＭＧである、Ｅ１２７に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３１．前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３、及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む、Ｅ１２７～Ｅ１３０のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３２．前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４２８、ＰＬ－１６、化合物ＰＬ－１７、化合物ＰＬ－１８、化合物ＰＬ－１９、化合物ＰＬ－１、及び化合物ＰＬ－２からなる群から選択される化合物を含む、Ｅ１２７～Ｅ１３０のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３３．前記ＬＮＰが、約５０：１０、４９：１１、４８：１２、４７：１３、４６：１４、４５：１５、４４：１６、４３：１７、４２：１８、または４１：１９の（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３４．前記ＬＮＰが、約４１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％～約１９ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３５．前記ＬＮＰが、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３６．前記（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比が約５０：１０である、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３７．約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３８．約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１３９．約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４０．前記ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％が、フィトステロール１８．５％であり、前記構造脂質の総ｍｏｌ％が３８．５％である、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４１．前記ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％が、フィトステロール２８．５％であり、前記構造脂質の総ｍｏｌ％が３８．５％である、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４２．前記脂質ナノ粒子が、前記イオン性脂質としての化合物Ｉ－３０１、前記リン脂質としてのＤＳＰＣ、前記構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及び前記ＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４３．前記イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質が、（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；または（ｉｖ）４０：３０：２８：２から選択される比率にある、先行実施形態のいずれかに記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４４．前記構造脂質が、完全にコレステロールであり、３８％または２８％である、Ｅ１４３に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４５．前記構造脂質が、総百分率３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、前記ブレンドが、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含む、Ｅ１４３に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４６．前記ＬＮＰが、
ｉ）化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－１８２、または化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物である、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質；
（ｉｉ）ＤＳＰＣである、約１０ｍｏｌ％のリン脂質；
（ｉｉｉ）β－シトステロール及びコレステロールから選択される、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質；ならびに
（ｉｖ）化合物Ｐ－４２８である、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質；
を含む、Ｅ１４３～Ｅ１４５に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
Ｅ１４７．先行する実施形態のいずれかに記載の送達脂質ナノ粒子と医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
Ｅ１４８．先行する実施形態のいずれかに記載の送達脂質ナノ粒子と医薬的に許容される担体とを含む、ＧＭＰグレードの医薬組成物。
Ｅ１４９．９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超の純度を有する、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、またはそれ以上の混入物が除去されている、Ｅ１４７またはＥ１４８に記載のいずれかの医薬組成物。
Ｅ１５０．ラージスケールである、例えば、少なくとも２０ｇ、３０ｇ、４０ｇ、５０ｇ、１００ｇ、２００ｇ、３００ｇ、４００ｇ、またはそれ以上である、Ｅ１４７～Ｅ１４９に記載の医薬組成物。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
（項目２）
前記標的細胞が、肝細胞、例えば、肝実質細胞である、項目１に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３）
３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、項目１または２に記載の送達ＬＮＰ。
（項目４）
総肝細胞の約６０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、項目３に記載の送達ＬＮＰ。
（項目５）
参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰ。
（項目６）
参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または６倍の増大をもたらす、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰ。
（項目７）
例えば、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰ。
（項目８）
ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰ。
（項目９）
参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏで有し、前記向上したパラメータが、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰ。
（項目１０）
１３）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
１４）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
１５）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
１６）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
のうちの１つ、２つ、３つ、またはすべてをもたらす、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１１）
全身送達のために製剤化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１２）
全身的に、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１３）
タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１４）
前記ペイロードを肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせに送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１５）
前記ペイロードを肝実質細胞に送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１６）
前記ペイロードを非免疫細胞に送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１７）
前記ペイロードを脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）に送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１８）
前記ペイロードを卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される細胞に送達する、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目１９）
前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２０）
前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２１）
前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２２）
前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２３）
前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２４）
前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２５）
送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２６）
前記ペイロードがペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２７）
前記ペイロードが、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡから選択される核酸分子である、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２８）
前記ペイロードが、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目２９）
前記ペイロードが、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、またはＣＲＩＳＰＲである、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３０）
前記ペイロードが、ｍＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３１）
前記ペイロードが、免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３２）
前記ペイロードが、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、抗体分子、または酵素をコードするｍＲＮＡから選択される、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３３）
前記ペイロードが、抗体分子をコードするｍＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３４）
前記ペイロードが、酵素をコードするｍＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３５）
前記酵素が、奇病（例えば、リソソーム蓄積症）に関連している、項目３４に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３６）
前記酵素が、代謝障害（例えば、本明細書に記載されるようなもの）に関連している、項目３４に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３７）
前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、項目３４に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３８）
参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低い用量で投与することができる、先行項目のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰ。
（項目３９）
参照ＬＮＰの前記用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で投与される、項目３８に記載の送達ＬＮＰ。
（項目４０）
対象におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）を強化する方法であって、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を前記対象に投与することを含み、前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；のうちのうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与される、方法。
（項目４１）
対象における障害もしくは疾患、例えば奇病を治療するまたはその症状を改善する方法であって、
（ｉ）イオン性脂質、例えば、アミノ脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）ペイロード；及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含む送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を前記対象に投与することを含み、前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
（ａ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）（例えば、増大されたペイロードの分布、送達、及び／または発現）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化されたペイロードレベル；
（ｂ）標的細胞、臓器、細胞区画、または体液区画、例えば、肝臓または血漿において強化された脂質レベル（例えば、増大された脂質の分布、送達、または曝露）、例えば、異なる標的細胞、臓器、もしくは細胞区画と比べて、または参照ＬＮＰと比べて強化された脂質レベル；
（ｃ）３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％より多い、またはそれ以上より多い総肝細胞における、例えば、総肝細胞の約６０％における、ペイロードの発現及び／または活性；あるいは
（ｄ）強化されたペイロードレベル（例えば、発現）及び／または脂質レベル、例えば、参照ＬＮＰと比べて、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍（例えば、約３倍）の肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらすのに十分な量で投与され、それによって、前記障害もしくは疾患を治療するまたはその症状を改善する、
方法。
（項目４２）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ １／２ ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ １／２ ；または
ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす量で投与される、項目４０または４１に記載の方法。
（項目４３）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏでもたらす量で投与され、前記向上したパラメータが、以下：
１）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、項目４０～４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
１）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
２）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
３）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
４）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
のうち１つ、２つ、３つ、またはすべてをもたらす、項目４０～４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身送達のために製剤化される、項目４０～４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身的に、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与される、項目４０～４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、項目４０～４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを肝細胞、例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせに送達する、項目４０～４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを肝実質細胞に送達する、項目４０～４８のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを脾細胞、例えば、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）に送達する、項目４０～４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞から選択される細胞に送達する、項目４０～５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、前記ペイロードを非免疫細胞に送達する、項目４０～５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、項目４０～５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目５４）
前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、項目４０～５３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、項目４０～５４のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、項目４０～５５のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、項目４０～５６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、項目４０～５７のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、項目４０～５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
前記ペイロードがペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、項目４０～５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
前記ペイロードが、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡから選択される核酸分子である、項目４０～６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
前記ペイロードが、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、項目４０～６１のいずれかに１項記載の方法。
（項目６３）
前記ペイロードが、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、またはＣＲＩＳＰＲである、項目４０～６２のいずれか１項に記載の方法。
（項目６４）
前記ペイロードが、免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡである、項目４０～６３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記ペイロードが、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、または酵素をコードするｍＲＮＡから選択される、項目４０～６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記ペイロードが抗体分子をコードするｍＲＮＡである、項目４０～６５のいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
前記ペイロードが酵素をコードするｍＲＮＡである、項目４０～６６のいずれか１項に記載の方法。
（項目６８）
前記酵素が、奇病（例えば、（リソソーム蓄積症）または代謝障害（例えば、本明細書に記載されるようなもの）に関連している、項目４０～６７のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記疾患が、代謝障害である、項目６８に記載の方法。
（項目７１）
前記標的細胞送達ＬＮＰを、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低い用量で投与することができる、項目４０～７０のいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰの前記用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で投与される、項目４０～７１のいずれか１項に記載の方法。
（項目７３）
より低い用量で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記標的細胞送達ＬＮＰを、参照ＬＮＰ、例えば、本明細書に記載されるようなものと比較して低減された回数で投与することができる、項目７１または７２に記載の方法。
（項目７５）
前記イオン性脂質がアミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目７６）
前記イオン性脂質が、式（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ ＶＩＩＩｄ）のいずれかの化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目７７）
前記イオン性脂質が、スクアラミド頭部基を有するアミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目７８）
前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１、化合物（Ｒ）Ｉ－３０１、化合物（Ｓ）Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４９、化合物（Ｒ）Ｉ－４９、化合物（Ｓ）Ｉ－４９、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、及び化合物Ｉ－３５２からなる群から選択される化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目７９）
前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９から選択される化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８０）
前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８１）
前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－４９を含む、項目１～７９のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８２）
前記細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞であり、前記イオン性脂質が、化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８３）
前記細胞が脾細胞、例えば脾実質細胞であり、前記イオン性脂質が化合物Ｉ－３０１及び化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８４）
前記イオン性脂質が、前記アミノ脂質のラセミ混合物、例えば、アミノ脂質の（Ｒ）鏡像異性体及び（Ｓ）鏡像異性体を含む混合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８５）
前記参照ＬＮＰが、式Ｉ－ＸＩＩを有するイオン性脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８６）
前記参照ＬＮＰが、キラル中心を有するイオン性脂質を含まない、項目８５に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８７）
前記参照ＬＮＰが、複数の分岐アルキル鎖を含むイオン性脂質を含まない、項目８５に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８８）
前記参照ＬＮＰが、環置換アミノ脂質を含まない、項目８５に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目８９）
前記参照ＬＮＰが、炭素環置換イオン性脂質を含まない、項目８５に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９０）
前記参照ＬＮＰが、シクロアルケニル置換アミノ脂質を含まない、項目８５に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９１）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、キラル中心を有するアミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９２）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、複数の分岐アルキル鎖を含むイオン性脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９３）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、環置換アミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９４）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、炭素環置換アミノ脂質を含む、項目１～９２のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９５）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロアルケニル置換アミノ脂質を含む、項目１～９２のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９６）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロブテニル置換アミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９７）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、シクロブテン－１，２－ジオン置換アミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９８）
前記標的細胞送達ＬＮＰが、スクアラミド置換アミノ脂質、例えば、スクアラミド基を含むアミノ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目９９）
前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、化合物Ｈ－４０９、化合物Ｈ－４１８、化合物Ｈ－４２０、化合物Ｈ－４２１、及び化合物Ｈ－４２２からなる群から選択される化合物を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１００）
前記細胞が、肝細胞、例えば肝実質細胞であり、前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む、項目９９に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０１）
前記リン脂質がＤＳＰＣである、項目９９に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０２）
前記リン脂質がＤＭＰＥである、項目９９に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０３）
前記リン脂質が化合物Ｈ－４０９である、項目９９に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０４）
ＰＥＧ脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０５）
前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、項目１０４に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０６）
前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、項目１０４に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０７）
前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ－ＤＭＧである、項目１０４～１０６のいずれか１項に送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０８）
前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３、及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む、項目１０４に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１０９）
前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４２８、ＰＬ－１６、化合物ＰＬ－１７、化合物ＰＬ－１８、化合物ＰＬ－１９、化合物ＰＬ－１、及び化合物ＰＬ－２からなる群から選択される化合物を含む、項目１０４または１０８に記載の標的細胞送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１０）
前記ＬＮＰが、約５０：１０、４９：１１、４８：１２、４７：１３、４６：１４、４５：１５、４４：１６、４３：１７、４２：１８、または４１：１９の（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１１）
前記ＬＮＰが、約４１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％～約１９ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１２）
前記ＬＮＰが、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１３）
前記（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比が約５０：１０である、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１４）
前記脂質ナノ粒子が、前記イオン性脂質としての化合物Ｉ－３０１、前記リン脂質としてのＤＳＰＣ、前記構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及び前記ＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１５）
前記イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質が、（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；または（ｉｖ）４０：３０：２８：２から選択される比率にある、先行項目のいずれかに記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１６）
前記ＬＮＰが、以下：
ｉ）化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－１８２、または化合物Ｉ－４９からなる群から選択される化合物である、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質；
（ｉｉ）ＤＳＰＣである、約１０ｍｏｌ％のリン脂質；
（ｉｉｉ）β－シトステロール及びコレステロールから選択される、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質；ならびに
（ｉｖ）化合物Ｐ－４２８である、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質；
を含む、項目１１５に記載の送達ＬＮＰまたは方法。
（項目１１７）
項目１～４０または７５～１１６のいずれかに記載の送達脂質ナノ粒子と医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
（項目１１８）
項目１～４０または７５～１１６のいずれかに記載の送達脂質ナノ粒子と医薬的に許容される担体とを含む、ＧＭＰグレードの医薬組成物。
（項目１１９）
９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超の純度を有する、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、またはそれ以上の混入物が除去されている、項目１１７または１１８に記載の医薬組成物。
１日目（左）または１５日目（右）の肝臓、脾臓、または血漿における化合物３０１含有ＬＮＰの濃度を示す一連のグラフである。ラットに、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを２ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、示した時点で脂質レベルを評価した。 １日目（左）または１５日目（右）の肝臓、脾臓、または血漿におけるＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡ発現を示す一連のグラフである。ラットに、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを２ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、示した時点でｍＲＮＡレベルを評価した。 マウスの肝臓及び脾臓における化合物３０１、化合物１８、または化合物５０含有ＬＮＰの脂質代謝を示すグラフである。 ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物３０１ＬＮＰを投与した、またはＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物１８ＬＮＰを投与した動物におけるＮＰＩ－Ｌｕｃ発現を示す図である。肝臓における全肝細胞に対するＮＰＩ－Ｌｕｃ発現を示している。 ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物３０１ＬＮＰを投与した、またはＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物１８ＬＮＰを投与した動物におけるＮＰＩ－Ｌｕｃ発現を示す図である。脾臓における全脾実質細胞に対するＮＰＩ－Ｌｕｃ発現を示している。 ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物３０１ＬＮＰを投与した、またはＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物１８ＬＮＰを投与した動物からの肝臓試料におけるＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質発現の免疫組織化学的検査の分析結果を示す図である。 ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物３０１ＬＮＰを投与した、またはＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物１８ＬＮＰを投与した動物からの肝臓試料におけるＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質レベルを表すグラフである。Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）のＥＬＩＳＡを使用して、ＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質発現を定量化した。 ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを投与した動物の血漿中のヒトＥＰＯタンパク質濃度を示す図である。Ａは、ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡをカプセル化した化合物１８含有ＬＮＰを投与した動物におけるヒトＥＰＯタンパク質レベルを示している。Ｂは、化合物３０１含有ＬＮＰを投与した動物におけるヒトＥＰＯタンパク質レベルを示している。 示した通りの様々なＬＮＰ製剤を投与した動物の血漿におけるヒトＥＰＯレベルを示す図である。Ａは、投与後３時間での血漿におけるヒトＥＰＯレベルを示している。Ｂは、投与後６時間での血漿におけるヒトＥＰＯレベルを示している。Ｃは、投与後２４時間での血漿におけるヒトＥＰＯレベルを示している。 示した通りの様々なＬＮＰ製剤を投与した動物の血漿における経時的なヒトＥＰＯレベルの発現を示す図である。 示した化合物３０１含有ＬＮＰ製剤の物理的特性を示す図である。Ａは、ＬＮＰの直径を示している。ＢはＬＮＰの表面極性を示している。 ｉｎ ｖｉｖｏでの発現に最適なイオン性脂質：ＤＳＰＣ：コレステロールの組成比を示す図である。
本開示は、向上した脂質ベースの組成物、具体的には送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供するものであり、該ＬＮＰは、脂質を含み、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較したときに、標的細胞、例えば、肝細胞または脾細胞への薬剤（複数可）の増大された送達を呈する。様々な態様では、本開示は、標的細胞送達増強脂質を含む向上したＬＮＰであって、標的細胞または標的細胞の集団に送達するための薬剤（複数可）を含むＬＮＰ、標的細胞または標的細胞の集団への薬剤（例えば、核酸分子）の送達を強化するための方法、標的細胞活性の調節から利益を得るであろう対象にそのようなＬＮＰを送達する方法、及びそのような対象を治療する方法を提供する。本開示は、ＬＮＰのある特定の脂質成分がＬＮＰに存在するとき、例えば、標的細胞による核酸分子の発現によって実証されるように、該脂質成分がＬＮＰの標的細胞との会合及び標的細胞内への薬剤の送達を強化するという発見に少なくとも部分的に基づいている。本開示のＬＮＰは、前記標的細胞における増大されたｍＲＮＡの発現を測定することによって標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）への強化された送達が実証されたが、送達される核酸分子に応じて、既存の発現のノックダウン（すなわち、その減少）を使用して同じアプローチを実証することができる。
加えて、当業者であれば、ｍＲＮＡを使用するこのモデル系で肝細胞及び／または脾細胞などの標的細胞への強化された送達が実証されたことによって、今や主題の標的細胞への標的細胞送達ＬＮＰを使用して他の薬剤を標的細胞に送達することができることを認識するであろう。そのような薬剤は当技術分野で公知であり、一実施形態では、薬剤は核酸分子を含むか、または核酸分子からなる。特に、ある特定の潜在的な治療用核酸分子が公知であり、ある場合には、そのような核酸分子によってコードされたタンパク質または核酸分子それ自体が現在治療的に使用されている。対象標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）を強化するＬＮＰによってもたらされる進歩を考慮すると、向上した療法が可能である。幾つかの態様では、薬剤は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、アンタゴｍｉｒ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される核酸分子である。
特定の実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質、例えば、式Ｉ－ＸＩＩのアミノ脂質を含むＬＮＰを含まないＬＮＰと比べて、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞）などの標的細胞への薬剤（例えば、核酸分子）の送達を強化する。一実施形態では、ｍＲＮＡが標的細胞送達増強脂質を含む標的細胞送達ＬＮＰによって送達されるとき、標的細胞送達増強脂質、例えば、式Ｉ－ＸＩＩのアミノ脂質を含むＬＮＰを含まないＬＮＰと比べて、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡの発現が標的細胞において強化されることが実証された。標的細胞送達を強化するＬＮＰに会合された（例えば、その中にカプセル化された）薬剤の標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）への送達は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで実証された。
本明細書で実証されたように、標的細胞送達を強化するＬＮＰは、標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）においてタンパク質の発現を少なくとも約２倍増大させることが示された。標的細胞への送達は、ｉｎ ｖｉｖｏでも実証された。カプセル化されたｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏでの送達は、本開示のＬＮＰの単回静脈注射の後に少なくとも約３０％の肝細胞へ送達されることが実証された。カプセル化されたｍＲＮＡが脾細胞の２０％超へ送達されることも実証されている。標的細胞送達増強脂質を含むＬＮＰを使用して本明細書で実証された送達のレベルによって、ｉｎ ｖｉｖｏ療法が可能になる。本開示は、がん、感染性疾患、ワクチン接種、及び自己免疫疾患を含めた多種多様な臨床的状況において、種々のタンパク質を調節する（タンパク質の発現及び／または活性の上方制御及び下方制御が含まれる）ための方法を提供する。
本開示のＬＮＰは、肝細胞または脾細胞を標的とするのに特に有用である。ＬＮＰは、細胞内または分泌タンパク質であるタンパク質をコードする核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）を含むことができる。
何らかの特定の機序または理論に拘束されることを意図するものではないが、本開示のＬＮＰによる標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）への核酸分子の送達の強化は、有効量の標的細胞送達増強脂質、例えば、コレステロール類似体もしくはアミノ脂質またはそれらの組み合わせが存在することに起因すると考えられる。該標的細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比べて、細胞会合及び／または取り込み、内部移行、細胞内輸送及び／またはプロセシング、及び／またはエンドソーム脱出を強化することによって機能することができ、及び／または標的細胞による認識及び／または標的細胞との結合を強化することができる。
したがって、何らかの特定の機序または理論に拘束されることを意図するものではないが、一実施形態では、本開示の標的細胞送達増強脂質は、参照ＬＮＰと比較して、肝細胞、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞によって優先的に取り込まれる。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まず、及び／または肝細胞、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞によって優先的に取り込まれない。
薬剤（例えば、ｍＲＮＡを含めた核酸分子）を標的細胞に効率的に送達する能力は、標的細胞におけるタンパク質発現及び／または活性を調節するのに有用である。さらに、ＬＮＰが送達された細胞において、またはそのような細胞と相互作用する及び／またはそのような細胞によって影響を受ける細胞において（例えば、自己分泌または傍分泌様式で）、細胞の活性及び／または機能を改変することができる。
標的細胞送達ＬＮＰは、例えば、天然に存在するまたは操作された分子の発現を調節する核酸分子の送達に有用である。一実施形態では、可溶性／分泌タンパク質（例えば、天然に存在する可溶性分子、または機能／半減期／及び／または安定性の向上を促進するように修飾もしくは操作されたもの）の発現が調節される。別の実施形態では、細胞内タンパク質の発現（例えば、天然に存在する細胞内タンパク質、または改変された機能を持つ操作もしくは修飾された細胞内タンパク質）が調節される。別の実施形態では、膜貫通タンパク質の発現（例えば、天然に存在する可溶性分子、または改変された機能を持つように修飾または操作されたもの）が調節される。
一実施形態では、核酸分子は、標的細胞において天然に発現されないタンパク質（例えば、異種タンパク質または修飾タンパク質）をコードすることができる。一実施形態では、核酸分子は、標的細胞において天然に発現されるタンパク質をコードまたはノックダウンすることができる。
例えば、幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、可溶性／分泌タンパク質、膜貫通タンパク質、または細胞内タンパク質をコードするｍＲＮＡの標的細胞内への送達及び標的細胞における発現を強化するのに有用である。例示的な膜貫通タンパク質は、標的細胞に新たな結合特異性を付与することができる。例示的な細胞内分子は、細胞シグナル伝達または細胞運命を調節することができる。
本開示はまた、同じ（例えば、異なるＬＮＰ内での）薬剤または異なる（例えば、核酸分子を標的細胞または異なる細胞集団に送達するための同じＬＮＰ内でのまたは異なるＬＮＰ（例えば、標的細胞送達を強化するＬＮＰであるもの及びそうでないもの）内での）薬剤、例えば、核酸分子を送達するために、複数のＬＮＰを組み合わせて使用するための方法を提供する。
標的細胞送達ＬＮＰ
標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰ（例えば、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ）と比較したときに、標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）への薬剤の送達の増大をもたらすことを特徴とすることができる。特に、一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰ（例えば、式Ｉ ＸＩＩのアミノ脂質を含むＬＮＰ）と比較したときに、標的細胞に会合したＬＮＰの百分率の増大（例えば、２倍以上の増大）をもたらす。別の実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰ（例えば、式Ｉ ＸＩＩのアミノ脂質を含むＬＮＰ）と比較したときに、ＬＮＰによって運搬される薬剤を発現する（例えば、ＬＮＰに会合された／カプセル化されたｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する）標的細胞の百分率の増大（例えば、２倍以上の増大）をもたらす。別の実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較して、肝細胞、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞による優先的な取り込みをもたらす。ある実施形態では、参照ＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まず、及び／または肝細胞、脾細胞、卵巣細胞、肺細胞、腸細胞、心臓細胞、皮膚細胞、眼細胞もしくは脳細胞、または骨格筋細胞によって優先的に取り込まれない。
別の実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰ（例えば、式Ｉ ＸＩＩのアミノ脂質を含むＬＮＰ）と比較したときに、標的細胞への薬剤（例えば、核酸分子）の送達の増大をもたらす。一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較したときに、肝細胞への核酸分子剤の送達の増大をもたらす。一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較したときに、肝実質細胞への核酸分子剤の送達の増大をもたらす。一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較したときに、肝星細胞への核酸分子剤の送達の増大をもたらす。一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較したときに、クッパー細胞への核酸分子剤の送達の増大をもたらす。一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較したときに、肝類洞細胞への核酸分子剤の送達の増大をもたらす。
一実施形態では、核酸分子がｍＲＮＡであるとき、標的細胞への核酸剤の送達の増大は、参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）においてｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子の少なくとも約２倍多い発現をもたらすＬＮＰの能力によって測定することができる。
標的細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質；（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び（ｖ）該ＬＮＰにカプセル化された及び／または会合された薬剤（例えば、核酸分子）を含み、標的細胞送達ＬＮＰにおける（ｉ）イオン性脂質または（ｉｉ）構造脂質もしくはステロールの１つ以上は、有効量の標的細胞送達増強脂質を含む。
別の実施形態では、本開示の標的細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン性脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）標的細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質の１つ以上は、標的細胞への該脂質ナノ粒子の送達を強化するのに有効な量で標的細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、強化された送達は、標的細胞送達増強脂質を含まない脂質ナノ粒子と比べたものである。別の実施形態では、強化された送達は、適切な対照、例えば、参照ＬＮＰと比べたものである。
別の実施形態では、本開示の標的細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン性脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）標的細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン性脂質、または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、または（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質もしくはリン脂質、または（ｖ）ＰＥＧ脂質の１つ以上は、参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）によって優先的に取り込まれる。
別の実施形態では、本開示の標的細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン性脂質；
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
（ｉｖ）標的細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン性脂質、または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質の１つ以上は、参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）によって優先的に取り込まれる。
ＬＮＰの脂質内容物
上述のように、脂質に関して、標的細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質；（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；（ｉｖ）ＰＥＧ脂質を含み、標的細胞送達ＬＮＰにおける（ｉ）イオン性脂質または（ｉｉ）構造脂質もしくはステロールの１つ以上は、有効量の標的細胞送達増強脂質を含む。これらのカテゴリーの脂質を、以降により詳細に述べる。
（ｉ）イオン性脂質
本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上のイオン性脂質を含む。ある特定の実施形態では、本開示のイオン性脂質は、中心のアミン部分と、少なくとも１つの生分解性の基とを含む。本明細書に記載のイオン性脂質は、哺乳動物の細胞または臓器へ核酸分子を送達するために、本開示の脂質ナノ粒子に有利に使用することができる。後述するイオン性脂質の構造は、それらを本発明の他の脂質から区別するために接頭語Ｉを含む。
本発明の第１の態様では、本明細書に記載の化合物は、式（Ｉ Ｉ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中：
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、ヘテロ環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、
－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１－６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ３－６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、ここで、Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、もしくは－ＣＱ（Ｒ）２ならば、（ｉ）ｎが１、２、３、４、もしくは５であるとき、Ｑは－Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２であるとき、Ｑは５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではない。
本開示の別の態様は、式（ＩＩＩ）の化合物：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、ヘテロ環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｒｘは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、－（ＣＨ２）ｖＯＨ、及び－（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２からなる群から選択され、
ここで、ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アルキル基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１－６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ３－６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＡ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１－３アルキル、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＢ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、ここで、すべての変数は本明細書で定義される通りである。例えば、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＩ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１－３アルキル、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、
ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
本開示の別の態様は、式（Ｉ ＶＩ）の化合物：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アルキル基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
ＲＮは、Ｈ、またはＣ１－３アルキルであり、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘａ及びＸｂは、各々独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、－ＯＨ、Ｒ、－Ｎ（Ｒ）２、－ＣＮ、－Ｎ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、－ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、炭素環、ヘテロ環、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは、０または１であり、
ｔ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｓ１は、１、２、３、４、及び５から選択される。
一実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩ－ａ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成する。
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩＩ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒａ’及びＲｂ’は、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、または（Ｉ ＶＩＩＩ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
幾つかの実施形態では、Ｍ１はＭ’である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
ある特定の実施形態では、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－である。ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、他方は－Ｓ－Ｓ－である。例えば、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－でＭ’は－Ｓ－Ｓ－であるか、またはＭ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－でＭは－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルである。他の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－４アルキルまたはＣ２－４アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ４アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ２アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ３アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ４アルケニルである。
幾つかの実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は水素である。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は水素ではない。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、非置換メチルまたは－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
幾つかの実施形態では、ＱはＯＨである。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲである。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｒ８である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
幾つかの実施形態では、ｎは２である。
幾つかの実施形態では、ｎは３である。
幾つかの実施形態では、ｎは４である。
幾つかの実施形態では、Ｍ１は存在しない。
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＲ５はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＲ６はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の一方はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルであり、各Ｒ６は水素である。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルであり、各Ｒ５は水素である。
幾つかの実施形態では、ＲｘはＣ１－６アルキルである。幾つかの実施形態では、ＲｘはＣ１－３アルキルである。例えば、Ｒｘはメチルである。例えば、Ｒｘはエチルである。例えば、Ｒｘはプロピルである。
幾つかの実施形態では、Ｒｘは－（ＣＨ２）ｖＯＨであり、ｖは１、２、または３である。例えば、Ｒｘはメタノイルである。例えば、Ｒｘはエタノイルである。例えば、Ｒｘはプロパノイルである。
幾つかの実施形態では、Ｒｘは－（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２であり、ｖは１、２、または３であり、各ＲはＨまたはメチルである。例えば、Ｒｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、または－ＹＲ”である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３－１４アルキルまたはＣ３－１４アルケニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ２－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ３－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１－８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１－５アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１－３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ４アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂはＣ５アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
幾つかの実施形態では、－ＣＨＲ１ａＲ１ｂ－は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
幾つかの実施形態では、Ｒ７はＨである。幾つかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１－３アルキルから選択される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ２－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ３－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－５アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ４アルキルである。
本開示の別の態様は、式（Ｉ ＸＩ）の化合物：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｑは、－ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、または－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２から選択され、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アルキル基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＸＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＸＩ－ａ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
Ｑは－ＯＲであり、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、
ｎは、１、２、及び３から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＸＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＸＩ－ｂ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒａ’及びＲｂ’は、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
式（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、または（Ｉ ＸＩ－ｂ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
幾つかの実施形態では、Ｍ１はＭ’である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－である。ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも一方は、－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、他方は－Ｓ－Ｓ－である。例えば、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－でＭ’は－Ｓ－Ｓ－であるか、またはＭ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－でＭは－Ｓ－Ｓ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキル、またはＣ２－１３アルケニルである。他の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－４アルキルまたはＣ２－４アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ４アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ２アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ３アルケニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｍ”はＣ４アルケニルである。
幾つかの実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
幾つかの実施形態では、Ｑは－ＯＲである。
幾つかの実施形態では、ｎは２である。
幾つかの実施形態では、ｎは３である。
幾つかの実施形態では、ｎは４である。
幾つかの実施形態では、Ｍ１は存在しない。
幾つかの実施形態では、ＲはＨである。
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＲ５はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＲ６はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の一方はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルであり、各Ｒ６は水素である。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルであり、各Ｒ５は水素である。幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の各々は水素である。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、または－ＹＲ”である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３－１４アルキルまたはＣ３－１４アルケニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ７はＨである。幾つかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１－３アルキルから選択される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ７はＣ３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ２－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ３－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－５アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ４アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｍ１はＭ’である。幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、ｌは５である。幾つかの実施形態では、Ｑは－ＯＨである。幾つかの実施形態では、ｎは２である。幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の各々は水素である。幾つかの実施形態では、Ｒ’はＣ１－１８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ’はＣ１１アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ７はＨである。幾つかの実施形態では、Ｒａ’はＣ１－１４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒａ’はＣ８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ１－３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂ’はＣ２アルキルである。
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）もしくは（ＩＩｅ）のもの：
またはそれらのＮ－オキシド、あるいはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｈ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｊ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｋ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｆ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。
さらなる実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｄ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２～Ｒ６は、本明細書に記載される通りである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択されてもよい。
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｇ）のもの：
もしくはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキル（例えば、Ｃ１－４アルキル）またはＣ２－６アルケニル（例えば、Ｃ２－４アルケニル）である。例えば、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩａ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ－１）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ－２）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ－３）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｃ）のもの：
が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩＩｄ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）のもの：
が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ－４）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ－５）のもの：
もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、または（Ｉ ＸＩ－ｂ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員の芳香族または非芳香族ヘテロ環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員のヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員のヘテロシクロアルキルであって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１－３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換された５～１４員のヘテロシクロアルキルから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員のヘテロ環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｑが５～１４員のヘテロ環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ（式中、ｎは１または２）であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ（式中、ｎは１）であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が－ＣＨＱＲ及び－ＣＱ（Ｒ）２であるならば、Ｑは、５～１４員のヘテロ環であるか、または８～１４員のヘテロシクロアルキルのいずれかである。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員のヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ここで、Ｒ８はＣ３－６炭素環、例えばＣ３－６シクロアルキルであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。例えば、Ｒ４は－（ＣＨ２）３ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ８であり、Ｒ８はシクロプロピルである。
別の実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ここで、ＲはＣ１－Ｃ３アルキルであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。別の実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ここで、ＲはＣ１－Ｃ３アルキルであり、ｎは３であり、ｏは１である。幾つかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、またはＣ２－３アルケニルである。例えば、Ｒ４は３－アセトアミド－２，２－ジメチルプロピルである。
幾つかの実施形態では、１つのＲ１０はＨであり、１つのＲ１０はＣ１－３アルキルまたはＣ２－３アルケニルである。別の実施形態では、各Ｒ１０は、Ｃ１－３アルキルまたはＣ２－３アルケニルである。別の実施形態では、各Ｒ１０は、Ｃ１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、またはプロピルである）。例えば、１つのＲ１０はメチルであり、１つのＲ１０はエチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０はエチルであり、１つのＲ１０はメチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０はプロピルであり、１つのＲ１０はメチルまたはエチルである。例えば、各Ｒ１０はメチルである。例えば、各Ｒ１０はエチルである。例えば、各Ｒ１０はプロピルである。
幾つかの実施形態では、１つのＲ１０はＨであり、１つのＲ１０はＯＨである。別の実施形態では、各Ｒ１０はＯＨである。
別の実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは－ＯＲであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは－ＯＲであり、ここで、ＲはＨであり、ｎは１、２、及び３から選択される。例えば、Ｒ４は－（ＣＨ２）２ＯＨである。
別の実施形態では、Ｒ４は、非置換Ｃ１－４アルキル、例えば、非置換メチルである。
別の実施形態では、Ｒ４は水素である。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱまたは－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱまたは－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑは－Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成する。
幾つかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５－２０アルキル及びＣ５－２０アルケニルからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたＣ５－２０である。
他の実施形態では、Ｒ１は、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、－Ｒ＊ＹＲ”及び－ＹＲ”から選択される。幾つかの実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。幾つかの実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ８アルキルまたはＣ８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ”はＣ３－１２アルキルである。例えば、Ｒ”は、Ｃ３アルキルであってもよい。例えば、Ｒ”は、Ｃ４－８アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、またはＣ８アルキル）であってもよい。
幾つかの実施形態では、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、アミノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ、及びＣ１－Ｃ６ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１－１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１－Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１－１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１－Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、ジメチルアミノ（例えば、ジメチルアミノエタニル）で置換されたＣ１－３アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ５－２０アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ６アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１はＣ９アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１はＣ１４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１はＣ１８アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ２１－３０アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ２６アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ２８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１はＣ５－２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１はＣ１８アルケニルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１はリノレイルである。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、分岐している（例えば、デカン－２－イル、ウンデカン－３－イル、ドデカン－４－イル、トリデカン－５－イル、テトラデカン－６－イル、２－メチルウンデカン－３－イル、２－メチルデカン－２－イル、３－メチルウンデカン－３－イル、４－メチルドデカン－４－イル、またはヘプタデカ－９－イル）である。ある特定の実施形態では、Ｒ１は
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、非置換のＣ５－２０アルキルまたはＣ５－２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されたＣ５－２０アルキルまたはＣ５－２０アルケニル（例えば、Ｃ３－６炭素環で置換されたもの、例えば、１－シクロプロピルノニル、またはＯＨもしくはアルコキシで置換されたもの）である。例えば、Ｒ１は
である。
他の実施形態では、Ｒ１は－Ｒ”Ｍ’Ｒ’である。ある特定の実施形態では、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。例えば、Ｒ１は
であり、式中、ｘ１は、１～１３の間の整数であり（例えば、３、４、５、及び６から選択され）、ｘ２は、１～１３の間の整数であり（例えば、１、２、及び３から選択され）、ｘ３は、２～１４の間の整数である（例えば、４、５、及び６から選択される）。例えば、ｘ１は、３、４、５、及び６から選択され、ｘ２は、１、２、及びび３から選択され、ｘ３は、４、５、及び６から選択される。
他の実施形態では、Ｒ１は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は、－Ｒ＊ＹＲ”及び－ＹＲ”から選択される。幾つかの実施形態では、ＹはＣ３－８シクロアルキルである。幾つかの実施形態では、ＹはＣ６－１０アリールである。幾つかの実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。幾つかの実施形態では、Ｙはシクロヘキシル基である。ある特定の実施形態では、Ｒ＊はＣ１アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３－１２アルキル及びＣ３－１２アルケニルからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ”はＣ８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”はＣ１アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ４－９アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、もしくはＣ８、またはＣ９アルキル）である。
幾つかの実施形態では、Ｒ”は、置換されたＣ３－１２（例えば、例えば、ヒドロキシルで置換されたＣ３－１２アルキル）である。例えば、Ｒ”は
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル及びＣ４アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ５アルキル及びＣ５アルケニルから選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ６アルキル及びＣ６アルケニルから選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ７アルキル及びＣ７アルケニルから選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ９アルキル及びＣ９アルケニルから選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択され、それらの各々は線状または分岐している。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は線状である。幾つかの実施形態では、Ｒ’は分岐している。
幾つかの実施形態では、Ｒ’は
である。幾つかの実施形態では、Ｒ’は
であり、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－である。他の実施形態では、Ｒ’は
であり、Ｍ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１１アルキル及びＣ１１アルケニルから選択される。他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、線状Ｃ４－１８アルキルまたはＣ４－１８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分岐している（例えば、デカン－２－イル、ウンデカン－３－イル、ドデカン－４－イル、トリデカン－５－イル、テトラデカン－６－イル、２－メチルウンデカン－３－イル、２－メチルデカン－２－イル、３－メチルウンデカン－３－イル、４－メチルドデカン－４－イル、またはヘプタデカ－９－イル）である。ある特定の実施形態では、Ｒ’は
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ１－１８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されたＣ１－１８アルキル（例えば、置換されたＣ１－１５アルキルであって、例えば、アルコキシ、例えばメトキシ、またはＣ３－６炭素環、例えば、１－シクロプロピルノニル、またはＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルもしくはＯＣ（Ｏ）－アルキル、例えば、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３もしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ３で置換されたもの）である。例えば、Ｒ’は、
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分岐しているＣ１－１８アルキルである。例えば、Ｒ’は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、またはＣ１５アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｍ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、または－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。Ｍ’が－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である幾つかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－４アルキルまたはＣ２－４アルケニルである。
他の実施形態では、Ｍ’は、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。
幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）である。幾つかの実施形態では、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。幾つかの実施形態では、Ｍは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－ＯＣ（Ｏ）－である。幾つかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
他の実施形態では、Ｍは、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。
幾つかの実施形態では、ＭはＭ’と同じである。他の実施形態では、ＭはＭ’とは異なる。
幾つかの実施形態では、Ｍ”は結合である。幾つかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルである。幾つかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、線状アルキルまたはアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は分岐しており、例えば、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－である。
幾つかの実施形態では、各Ｒ５はＨである。幾つかの実施形態では、各Ｒ６はＨである。ある特定のそのような実施形態では、各Ｒ５及び各Ｒ６はＨである。
幾つかの実施形態では、Ｒ７はＨである。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはＩ－プロピル）である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキルまたはＣ５－１４アルケニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ２とＲ３は同じである。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ４アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ６アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ７アルキルである。
他の実施形態では、Ｒ２とＲ３は異なる。ある特定の実施形態では、Ｒ２はＣ８アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１－７（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、またはＣ７アルキル）またはＣ９アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ１アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ２アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ３アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ５アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ６アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ７アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ３はＣ９アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ７及びＲ３はＨである。
ある特定の実施形態では、Ｒ２はＨである。
幾つかの実施形態では、ｍは、５、６、７、８、または９である。幾つかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。例えば、幾つかの実施形態では、ｍは５である。例えば、幾つかの実施形態では、ｍは７である。例えば、幾つかの実施形態では、ｍは９である。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ及び－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
幾つかの実施形態では、Ｑは、－ＯＲ、－ＯＨ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、または－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、チオ尿素またはそのアイソスター、例えば、
または－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑが－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であるとき、ｎは４または５である。例えば、Ｒ９は－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒまたは－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲであり、例えば、－ＣＨ（＝Ｎ－ＯＣＨ３）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）－ＯＨ、または－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）－ＯＣＨ３である。
ある特定の実施形態では、Ｑは－ＯＨである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、置換または非置換の５～１０員のヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、トリアゾール、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２－アミノ－１，９－ジヒドロ－６Ｈ－プリン－６－オン－９－イル（またはグアニン－９－イル）、アデニン－９－イル、シトシン－１－イル、またはウラシル－１－イルであり、それらの各々は、任意選択で、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、－アルキル－ＯＨ、－アルキル－Ｏ－アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されており、該置換基は、さらに置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、Ｑは、５～１４員のヘテロシクロアルキルで置換されており、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノ－またはジ－アルキルアミノ、及びＣ１－３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されている。例えば、Ｑは、４－メチルピペラジニル、４－（４－メトキシベンジル）ピペラジニル、イソインドリン－２－イル－１，３－ジオン、ピロリジン－１－イル－２，５－ジオン、またはイミダゾリジン－３－イル－２，４－ジオンである。
ある特定の実施形態では、Ｑは－ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択で置換されたＣ３－６シクロアルキルである。例えば、Ｒ８は、シクロブテニル、例えば、３－（ジメチルアミノ）－シクロブタ－３－エン－４－イル－１，２－ジオンである。さらなる実施形態では、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、チオ（＝Ｓ）、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、ヘテロシクロアルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択で置換されたＣ３－６シクロアルキルであり、ここで、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、及びヘテロシクロアルキルはさらに置換されている。例えば、Ｒ８は、オキソ、アミノ、及びアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ここで、アルキルアミノは、例えば、Ｃ１－３アルコキシ、アミノ、モノまたはジ－アルキルアミノ、及びハロの１つ以上でさらに置換されている。例えば、Ｒ８は、３－（（（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）シクロブタ－３－エニル－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンまたは２－（エチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びジアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（ジエチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びジアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、２－（ジエチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンまたは３－（ジエチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びジアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（ジエチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びアルキルアミノまたはジアルキルアミノの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ここで、アルキルアミノまたはジアルキルアミノは、例えば１つ以上のアルコキシでさらに置換されている。例えば、Ｒ８は、３－（ビス（２－メトキシエチル）アミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、例えば１つ以上のＣ１－３アルキルでさらに置換されている。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ここで、ヘテロシクロアルキル（例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニル）は、メチルでさらに置換されている。
ある特定の実施形態では、Ｑは－ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８は、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択で置換されたヘテロアリールである。例えば、Ｒ８は、チアゾールまたはイミダゾールである。
ある特定の実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル、ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨ２である。幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９はＣＮであり、Ｒは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。幾つかの実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、Ｃ１－６アルキル、ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨであり、Ｒは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
ある特定の実施形態では、Ｑは－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨＣＨ３、または－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨ２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、例えば、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、－Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３である。
ある特定の実施形態では、Ｑは－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ここで、Ｒは、Ｃ１－３アルコキシまたはＳ（Ｏ）ｚＣ１－３アルキルで任意選択で置換されたアルキルであり、ここで、ｚは、０、１、または２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、非置換または置換されたＣ６－１０アリール（フェニルなど）またはＣ３－６シクロアルキルである。
幾つかの実施形態では、ｎは１である。他の実施形態では、ｎは２である。さらなる実施形態では、ｎは３である。ある特定の実施形態では、ｎは４である。例えば、Ｒ４は－（ＣＨ２）２ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は－（ＣＨ２）３ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は－（ＣＨ２）４ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４はベンジルであってもよい。例えば、Ｒ４は４－メトキシベンジルであってもよい。
幾つかの実施形態では、Ｒ４はＣ３－６炭素環である。幾つかの実施形態では、Ｒ４はＣ３－６シクロアルキルである。例えば、Ｒ４は、例えば、ＯＨ、ハロ、Ｃ１－６アルキルなどで任意選択で置換されたシクロヘキシルであってもよい。例えば、Ｒ４は２－ヒドロキシシクロヘキシルであってもよい。
幾つかの実施形態では、ＲはＨである。
幾つかの実施形態では、Ｒは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
幾つかの実施形態では、Ｒは、Ｃ１－３アルコキシ、アミノ、及びＣ１－Ｃ３ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１－６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒは、非置換のＣ１－３アルキルまたは非置換のＣ２－３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ、または－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３であってもよい。
幾つかの実施形態では、Ｒは、置換されたＣ１－３アルキル、例えば、ＣＨ２ＯＨである。例えば、Ｒ４は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＢｎ、－（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ３、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＳＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または－ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２であってもよい。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、以下の基のいずれかから選択される：
幾つかの実施形態では、
は、以下の基のいずれかから選択される：
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、以下の基のいずれかから選択される：
幾つかの実施形態では、
は、以下の基のいずれかから選択される：
幾つかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、陰イオンをさらに含む。本明細書に記載されるように、陰イオンは、アミンと反応してアンモニウム塩を形成することが可能な任意の陰イオンであり得る。例として、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、フッ化物イオン、酢酸イオン、ギ酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、ジフルオロ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、及びリン酸イオンが挙げられるが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式のいずれかの化合物は、筋肉内投与用のナノ粒子組成物を作製するのに適している。
幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員の芳香族または非芳香族ヘテロ環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、芳香族または非芳香族のいずれかの、任意選択で置換されたＣ３－２０炭素環（例えば、Ｃ３－１８炭素環、Ｃ３－１５炭素環、Ｃ３－１２炭素環、またはＣ３－１０炭素環）を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、Ｃ３－６炭素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはフェニル基などのＣ６炭素環を形成する。ある特定の実施形態では、ヘテロ環またはＣ３－６炭素環は、（例えば、同じ環原子で、または隣接したもしくは隣接していない環原子で）１つ以上のアルキル基で置換されている。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、１つ以上のＣ５アルキル置換を有するシクロヘキシルまたはフェニル基を形成してもよい。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３によって形成されたヘテロ環またはＣ３－６炭素環は、炭素環基で置換されている。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、シクロヘキシルで置換されたシクロヘキシルまたはフェニル基を形成してもよい。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、シクロへプチル、シクロペンタデカニル、またはナフチル基などのＣ７－１５炭素環を形成する。
幾つかの実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ及び－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。幾つかの実施形態では、Ｑは、－ＯＲ、－ＯＨ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及びヘテロ環からなる群から選択される。他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、Ｃ３－６炭素環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、Ｃ６炭素環を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、フェニル基を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、シクロヘキシル基を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環を形成する。ある特定の実施形態では、ヘテロ環またはＣ３－６炭素環は、（例えば、同じ環原子で、または隣接したもしくは隣接していない環原子で）１つ以上のアルキル基で置換されている。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、１つ以上のＣ５アルキル置換を有するフェニル基を形成してもよい。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１回の出現は、Ｃ１－３アルキル、例えばメチルである。幾つかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方はＣ１－３アルキル、例えばメチルであり、他方はＨである。幾つかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方はＣ１－３アルキル、例えばメチルであり、他方はＨであり、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の多くとも１回の出現は、Ｃ１－３アルキル、例えばメチルである。幾つかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方はＣ１－３アルキル、例えばメチルであり、他方はＨである。幾つかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方はＣ１－３アルキル、例えばメチルであり、他方はＨであり、Ｍは－ＯＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１回の出現は、メチルである。
式（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）、または（ＶＩＩＩｄ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
幾つかの実施形態では、ｒは０である。幾つかの実施形態では、ｒは１である。
幾つかの実施形態では、ｎは、２、３、または４である。幾つかの実施形態では、ｎは２である。幾つかの実施形態では、ｎは４である。幾つかの実施形態では、ｎは３ではない。
幾つかの実施形態では、ＲＮはＨである。幾つかの実施形態では、ＲＮはＣ１－３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲＮはＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲＮはＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲＮはＣ２アルキルである。
幾つかの実施形態では、ＸａはＯである。幾つかの実施形態では、ＸａはＳである。幾つかの実施形態では、ＸｂはＯである。幾つかの実施形態では、ＸｂはＳである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及びヘテロ環からなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒ１０は、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及びヘテロ環からなる群から選択される。
Ｒ１０が－ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２である幾つかの実施形態では、ｏは、２、３、または４である。
－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２である幾つかの実施形態では、ｐ１は２である。－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２である幾つかの実施形態では、ｑ１は２である。
Ｒ１０が－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２である幾つかの実施形態では、ｓ１は２である。
Ｒ１０が－ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓＯＲ、または－Ｎ（（ＣＨ２）ｓＯＲ）２である幾つかの実施形態では、ＲはＨまたはＣ１－Ｃ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＣ２アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＨである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ１－Ｃ３アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ１アルキルである。例えば、幾つかの実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ２アルキルである。Ｒ１０が－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、または－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２である幾つかの実施形態では、各ＲはＣ２－Ｃ４アルキルである。
例えば、幾つかの実施形態では、１つのＲはＨであり、１つのＲはＣ２－Ｃ４アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１０はヘテロ環である。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１０はモルホリニルである。例えば、幾つかの実施形態では、Ｒ１０はメチルピペラジニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の各出現はＨである。幾つかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
さらなる実施形態では、式（Ｉ Ｉ） の化合物は、以下からなる群から選択される：
幾つかの実施形態では、式（Ｉ Ｉ） または式（Ｉ ＩＶ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
幾つかの実施形態では、本開示の脂質は、Ｉ－３４０Ａを含む：
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、Ｉ （ＩＢ）、Ｉ （ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、または（Ｉ ＸＩ－ｂ）による脂質の中心のアミン部分は、生理学的ｐＨでプロトン化され得る。よって、脂質は、生理学的ｐＨで正のまたは部分的に正の電荷を有し得る。そのような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ぶことができる。脂質は、双性イオン、すなわち、正電荷も負電荷も有する中性分子でもあり得る。
イオン性脂質は、単一の鏡像異性体、または特定の比率での鏡像異性体の混合物を含み得る。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、実質的に純粋な鏡像異性体は、化合物の他の鏡像異性体または立体異性体を実質的に含まない（すなわち、鏡像異性的過剰である）。幾つかの実施形態では、イオン性脂質の「Ｓ」型は、イオン性脂質の「Ｒ」型を実質的に含まず、よって、「Ｒ」型に対して鏡像異性的過剰である。幾つかの実施形態では、イオン性脂質の「Ｒ」型は、イオン性脂質の「Ｓ」型を実質的に含まず、よって、「Ｓ」型に対して鏡像異性的過剰である。幾つかの実施形態では、「実質的に含まない」とは、（ｉ）２％未満の「Ｓ」型を含有する一定分量の「Ｒ」型化合物、または（ｉｉ）２％未満の「Ｒ」型を含有する一定分量の「Ｓ」型化合物を指す。幾つかの実施形態では、実質的に純粋な鏡像異性体は、９０重量％超、９１重量％超、９２重量％超、９３重量％超、９４重量％超、９５重量％超、９６重量％超、９７重量％超、９８重量％超、９９重量％超、９９．５重量％超、または９９．９重量％超の単一の鏡像異性体を含む。ある特定の実施形態では、重量は、化合物のすべての鏡像異性体または立体異性体の総重量に基づく。一実施形態では、イオン性脂質は、「Ｓ」型と「Ｒ」型とのラセミ混合物を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質のラセミ混合物を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｒ）鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、アミノ脂質の実質的に純粋な（Ｓ）鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、もしくは（Ｉ ＸＩ－ｂ）のいずれかの化合物及び／または化合物Ｉ－４９及び化合物Ｉ－３０１からなる群から選択される化合物の実質的に純粋な鏡像異性体を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－４９の実質的に純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な化合物（Ｓ）Ｉ－４９を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な化合物（Ｒ）Ｉ－４９を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、化合物Ｉ－３０１の実質的に純粋な鏡像異性体を含む。幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な化合物（Ｓ）Ｉ－３０１を含む。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、実質的に純粋な化合物（Ｒ）Ｉ－３０１を含む。
幾つかの態様では、本開示のイオン性脂質は、式（Ｉ ＸＩＩ）の化合物の１つ以上
またはそのＮ－オキシド、あるいはその塩または異性体であってもよく、式中、
Ｒ４０は、スクアラミドで置換された基ではなく、水素、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、ここで、ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル、及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ９は、独立して、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１－６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、またはＣ２－６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、Ｒ４０は、スクアラミドで置換された基ではない。幾つかの実施形態では、Ｒ４０は、水素、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
幾つかの態様では、本開示のイオン性脂質は、式（Ｉ ＩＸ）の化合物の１つ以上
またはその塩もしくは異性体であってもよく、式中、
Ｗは、
であり、
環Ａは、
であり、
ｔは、１または２であり、
Ａ１及びＡ２は、各々独立して、ＣＨまたはＮから選択され、
Ｚは、ＣＨ２であるか、または存在せず、ここで、ＺがＣＨ２のとき、破線（１）及び（２）は、各々単結合を表し、Ｚが存在しないとき、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、独立して、Ｃ５－２０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択され、
ＲＸ１及びＲＸ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり、
各Ｍは、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
Ｍ＊は、Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２は、各々独立して、－Ｏ－及び－Ｎ（Ｒ６）－からなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１－５アルキルからなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル及びＣ３－６炭素環からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１２アルキル、Ｃ２－１２アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１２アルキル、Ｃ３－１２アルケニル、及び－Ｒ＊ＭＲ’からなる群から選択され、
ｎは、１～６の整数であり、
ここで、環Ａが
であるとき、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３の少なくとも１つは－ＣＨ２－ではなく、及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の少なくとも１つは－Ｒ”ＭＲ’である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ ＩＸａ１）～（Ｉ ＩＸａ８）のいずれかである：
である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／２７１，１４６号、第６２／３３８，４７４号、第６２／４１３，３４５号、及び第６２／５１９，８２６号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００号に記載される化合物の１つ以上である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載される化合物１～１５６から選択される。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載される化合物１～１６、４２～６６、６８～７６、及び７８～１５６から選択される。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は
（化合物Ｉ－３５６（本明細書では化合物Ｍとも呼ばれる）、またはその塩である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は
［化合物Ｉ－Ｎ］、またはその塩である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は
［化合物Ｉ－Ｏ］、またはその塩である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は
［化合物Ｉ－Ｐ］、またはその塩である。
幾つかの実施形態では、イオン性脂質は
［化合物Ｉ－Ｑ］、またはその塩である。
本明細書の式のいずれかによる脂質、例えば、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の中心のアミン部分は、生理学的ｐＨでプロトン化され得る。よって、脂質は、生理学的ｐＨで正のまたは部分的に正の電荷を有し得る。そのような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ぶことができる。脂質は、双性イオン、すなわち、正電荷も負電荷も有する中性分子でもあり得る。
幾つかの実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約１ｍｏｌ％～９９ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約３０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％～約６５ｍｏｌ％、約４０モル％～約６０ｍｏｌ％、及び約４５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質化合物中で約４５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質化合物中で約４０ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物の量は、脂質化合物中で約５０ｍｏｌ％である。
本明細書に開示するイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する化合物に加えて、本明細書に開示する脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、コレステロール及び／またはコレステロール類似体、非カチオン性ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、ならびにそれらの任意の組み合わせなどの追加成分を含むことができる。
本発明の追加のイオン性脂質は、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、へプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニドコサ－１３－１６－ジエン－１－アミン（Ｌ６０８）、２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（Ｏｃｔｙｌ－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（Ｏｃｔｙｌ－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）－２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（Ｏｃｔｙｌ－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定的な群から選択することができる。これらに加えて、イオン性アミノ脂質は、環状アミン基を含む脂質でもあり得る。
本発明のイオン性アミノ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１７／０７５５３１Ａ１号に開示される化合物でもあり得、該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、イオン性アミノ脂質には以下が含まれるが、これらに限定されない：
及びそれらの任意の組み合わせ。
本発明のイオン性アミノ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１７／１９９９５２Ａ１号に開示される化合物でもあり得、該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、イオン性アミノ脂質には以下が含まれるが、これらに限定されない：
及びそれらの任意の組み合わせ。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｂ－４）、（ＶＩＩｂ－５）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＸＩ）、（ＸＩ－ａ）、または（ＸＩ－ｂ）（明確にするためにこれらの各々の前にＩという文字が付く）のいずれかを有する任意の化合物に含まれる。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質には、化合物番号Ｉ １－３５６のいずれかを含む化合物が含まれる。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ４９、Ｉ ５０、Ｉ １８２、Ｉ １８４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３０９、Ｉ ３１７、Ｉ ３２１、Ｉ ３２６、Ｉ ３４７、Ｉ ３４８、Ｉ ３４９、Ｉ ３５０、及びＩ ３５２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ４９、Ｉ １８２、Ｉ １８４、Ｉ ３０１、及びＩ ３２１からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ ４９及びＩ ３０１からなる群から選択される化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本発明の化合物、例えば、化合物番号１～３５６のいずれかを含む化合物の合成は、２０１８年９月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／７３３，３１５号の合成の説明に従う。幾つかの実施形態では、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、または（Ｉ ＸＩ－ｂ）（例えば、化合物Ｉ－４９または化合物Ｉ－３０１）のいずれかの化合物の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２２７１７の１８１、１９０、及び１９１ページに記載されている一般的な手順に従って調製されてもよく、該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
代表的な合成経路：
化合物Ｉ－１８２：ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン
３，４－ジメトキシ－３－シクロブテン－１，２－ジオン（１ｇ、７ｍｍｏｌ）を含む１００ｍＬのジエチルエーテル溶液に、ＴＨＦ中２Ｍメチルアミン溶液（３．８ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）を添加すると、ほぼ瞬時に沈殿物が形成された。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いでろ過し、フィルターの固体をジエチルエーテルで洗浄し、風乾した。フィルターの固体を温ＥｔＯＡｃに溶解し、ろ過し、ろ液を室温まで放冷し、次いで０ｏＣまで冷却して沈殿物を得た。これをろ過によって単離し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄し、風乾し、次いで真空下で乾燥させて、３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン（０．７０ｇ、５ｍｍｏｌ、７３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ｐｐｍ ８．５０ （ｂｒ． ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６９ Ｈｚ）；４．２７ （ｓ， ３Ｈ）；３．０２ （ｓｄｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４２ Ｈｚ， ４．５ Ｈｚ）。
ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
ヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのエタノール溶液に、３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた無色溶液を室温で２０時間撹拌した。その後ＬＣ／ＭＳによると出発アミンは残留していなかった。溶液を真空で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０－１００％（ジクロロメタン中１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合物））によって精製して、ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０％）を粘着性の白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ： ＲＴ＝３分。ＭＳ （ＥＳ）： Ｃ５１Ｈ９５Ｎ３Ｏ６に対するｍ／ｚ （ＭＨ＋） ８３３．４。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．８６ （ｂｒ． ｓ．， １Ｈ）；４．８６ （五重線， １Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；４．０５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；３．９２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ３ Ｈｚ）；３．２０ （ｓ， ６Ｈ）；２．６３ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；２．４２ （ｂｒ． ｓ， ３Ｈ）；２．２８ （ｍ， ４Ｈ）；１．７４ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；１．６１ （ｍ， ８Ｈ）；１．５０ （ｍ， ５Ｈ）；１．４１ （ｍ， ３Ｈ）；１．２５ （ｂｒ． ｍ， ４７Ｈ）；０．８８ （ｔ， ９Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）。
化合物Ｉ－３０１：へプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート
ヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（５００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエートの代わりに使用したことを除いて、化合物Ｉ－３０１を化合物１８２と同様に調製した。水性後処理後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０－５０％（ジクロロメタン中１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合物））によって精製して、ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブト－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（１８０ｍｇ、３２％）をワックス状の白色固体として得た。ＨＰＬＣ／ＵＶ （２５４ ｎｍ）： ＲＴ ＝ ６．７７分。ＭＳ （ＣＩ）： Ｃ５２Ｈ９７Ｎ３Ｏ６に対してｍ／ｚ （ＭＨ＋） ８６０．７。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ｐｐｍ ４．８６－４．７９ （ｍ， ２Ｈ）；３．６６ （ｂｓ， ２Ｈ）；３．２５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；２．５６－２．５２ （ｍ， ２Ｈ）；２．４２－２．３７ （ｍ， ４Ｈ）；２．２８ （ｄｄ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， ７．４ Ｈｚ）；１．７８－１．６８ （ｍ， ３Ｈ）；１．６４－１．５０ （ｍ， １６Ｈ）；１．４８－１．３８ （ｍ， ６Ｈ）；１．３２－１．１８ （ｍ， ４３Ｈ）；０．８８－０．８４ （ｍ， １２Ｈ）。
化合物Ｉ－４９：ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート
化合物Ｉ－４９は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２２７１７の１８１、１９０、及び１９１ページに記載されている一般的な手順に従って調製されてもよく、該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ： ＲＴ ＝ ３．６８分。ＭＳ （ＥＳ）： Ｃ４６Ｈ９１ＮＯ５に対してｍ／ｚ （ＭＨ＋） ７３９．２１。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ｐｐｍ ４．８９ （ｍ， ２Ｈ）；３．５６ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；２．６８－２．３９ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）；２．３０ （ｍ， ４Ｈ）；１．７１－１．１９ （ｍ， ６６Ｈ）；０．９０ （ｍ， １２Ｈ）。
（ｉｉ）コレステロール／構造脂質
本明細書に記載の標的細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用される場合、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、そしてステロール部分を含有する脂質も指す。脂質ナノ粒子に構造脂質を組み込むと、粒子内の他の脂質の凝集の軽減を支援することができる。構造脂質として、コレステロール、フェコステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物を挙げることができるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質には、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせが含まれる。
幾つかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ－トコフェロールである。構造脂質の例として、これらに限定するものではないが、以下が挙げられる：
本明細書に記載の標的細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用される場合、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、そしてステロール部分を含有する脂質も指す。脂質ナノ粒子に構造脂質を組み込むと、粒子内の他の脂質の凝集の軽減を支援することができる。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせを含む。
幾つかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。構造脂質として、ステロール（例えば、フィトステロールまたはズーステロール）を挙げることができるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。例えば、ステロールとして、コレステロール、β－シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、または本明細書の表１－１６中の化合物Ｓ１～１４８のいずれか１つを挙げることができるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ－トコフェロールである。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または
であり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２及びＲｂ３の各々は、独立して、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
各
は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｌ１ａは、存在しないか、
であるか、または
であり、
Ｌ１ｂは、存在しないか、
であるか、または
であり、
ｍは、１、２、または３であり、
Ｌ１ｃは、存在しないか、
であるか、または
であり、
Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルケニル、任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリール、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロシクリル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロアリールである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｃ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｄ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｌ１ａは、存在しない。幾つかの実施形態では、Ｌ１ａは、
である。幾つかの実施形態では、Ｌ１ａは、
である。
幾つかの実施形態では、Ｌ１ｂは、存在しない。幾つかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
である。幾つかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
である。
幾つかの実施形態では、ｍは、１または２である。幾つかの実施形態では、ｍは１である。幾つかの実施形態では、ｍは２である。
幾つかの実施形態では、Ｌ１ｃは、存在しない。幾つかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
である。幾つかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
であり、ここで、
ｎ１は、０、１、２、３、４、または５であり、
各々のＲ７は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、各々のＲ７は、独立して、
である。
幾つかの実施形態では、ｎ１は、０、１、または２である。幾つかの実施形態では、ｎは、０である。幾つかの実施形態では、ｎ１は、１である。幾つかの実施形態では、ｎ１は、２である。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０モノシクロアルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
であり、ここで、
ｎ２は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ３は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ４は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ５は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
ｎ６は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３であり、
各々のＲ８は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、各々のＲ８は、独立して、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０ポリシクロアルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルケニルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
であり、ここで、
ｎ７は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ８は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ９は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
各々のＲ９は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
である。
幾つかの実施形態では、各々のＲ９は、独立して、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロシクリルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
であり、ここで、
ｎ１０は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１１は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１２は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ１３は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
各々のＲ１０は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｙ１及びＹ２の各々は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲＢ、またはＣＲ１１ａＲ１１ｂであり、
ここで、ＲＢは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｙ２がＣＲ１１ａＲ１１ｂであるならば、Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＢである。
幾つかの実施形態では、Ｙ１は、Ｏである。
幾つかの実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。幾つかの実施形態では、Ｙ２は、ＣＲ１１ａＲ１１ｂである。
幾つかの実施形態では、各々のＲ１０は、独立して、
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロアリールである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
であり、ここで、
Ｙ３は、ＮＲＣ、Ｏ、またはＳであり、
ｎ１４は、０、１、２、３、または４であり、
ＲＣは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
各々のＲ１２は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
である。幾つかの実施形態では、Ｒ６は、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｌ１は、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキレンであり、
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃの各々は、独立して、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｌ１は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃの各々は、独立して、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈ、または
であり、
各
は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒ４ｃであり、ここで、Ｒ４ｃは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ１４は、Ｈ、またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１５は、
であり、ここで、
Ｒ１６は、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｂは、Ｈ、ＯＲ１７ｃ、任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリール、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｃは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｏ１は、０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
ｐ１は、０、１、または２であり、
ｐ２は、０、１、または２であり、
Ｚは、ＣＨ２Ｏ、Ｓ、またはＮＲＤであり、ここで、ＲＤは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
各々のＲ１８は、独立して、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１４は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１４は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１５は、
である。幾つかの実施形態では、Ｒ１５は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１６は、Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒ１６は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１７ａは、Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒ１７ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、ＯＲ１７ｃである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈ、
または
である。幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１５は、
である。
幾つかの実施形態では、各々のＲ１８は、独立して、
である。
幾つかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。幾つかの実施形態では、Ｚは、Ｏである。幾つかの実施形態では、Ｚは、ＮＲＤである。
幾つかの実施形態では、ｏ１は、０、１、２、３、４、５、または６である。
幾つかの実施形態では、ｏ１は、０である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、１である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、２である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、３である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、４である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、５である。幾つかの実施形態では、ｏ１は、６である。
幾つかの実施形態では、ｐ１は、０または１である。幾つかの実施形態では、ｐ１は、０である。幾つかの実施形態では、ｐ１は、１である。
幾つかの実施形態では、ｐ２は、０または１である。幾つかの実施形態では、ｐ２は、０である。幾つかの実施形態では、ｐ２は、１である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＶ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
ｓは、０または１であり、
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２０は、Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２１は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１９は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１９は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２０は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２１は、Ｈ、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ２２は、Ｈ、またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２３は、ハロ、ヒドロキシル、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２２は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２２は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２３は、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ２４は、Ｈ、またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２４は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２４は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２５ａ 及びＲ２５ｂの各々は、独立して、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニル、または
であり、ここで、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ、及びＲ１ｅの各々は、独立して、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
ｑは、０または１であり、
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの各々は、独立して、Ｈもしくは任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであるか、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、ここで、Ｒ２６ｃ及びＲ２６の各々は、独立して、Ｈまたは任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、独立して、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成する。
幾つかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成する。幾つかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成する。
幾つかの実施形態では、Ｒ２６ｃ及びＲ２６は、独立して、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ３アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、独立して、Ｈ、ヒドロキシル、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ２８は、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｒは、１、２、または３であり、
各々のＲ２９は、独立して、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２８は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ２８は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃの各々は、独立して、
である。
幾つかの実施形態では、ｒは、１である。幾つかの実施形態では、ｒは、２である。幾つかの実施形態では、ｒは、３である。
幾つかの実施形態では、各々のＲ２９は、独立して、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、各々のＲ２９は、独立して、Ｈまたは
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＸ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ３１は、Ｈ、またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３１は、Ｈ、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３１は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂの各々は、独立して、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ３３ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または
であり、ここで、Ｒ３５は、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ３３ｂは、Ｈ、もしくは任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであるか、または
Ｒ３５及びＲ３３ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３－Ｃ９ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ３４は、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３３ａは、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３５は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３５は、
であり、ここで、
ｔは、０、１、２、３、４、または５であり、
Ｒ３６は、独立して、ハロ、ヒドロキシル、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ３４は、
であり、ここで、ｕは、０、１、２、３、または４である。
幾つかの実施形態では、ｕは、３または４である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｒ３７ａ及びＲ３７ｂの各々は、独立して、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、またはヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３７ａは、ヒドロキシルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ３７ｂは、
である。
ある態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩＩ：
の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択で置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
であり、
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、Ｗと隣接する炭素との間に二重結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接する炭素との間に単結合が存在するならば、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合している原子と一緒になって、合わせて
を形成し、
Ｑは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＥであり、ここで、ＲＥは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３８は、任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩａ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩｂ：
の構造を有するか、またはその医薬的に許容される塩である。
幾つかの実施形態では、Ｑは、ＮＲＥである。
幾つかの実施形態では、ＲＥは、Ｈ、または
である。
幾つかの実施形態では、ＲＥは、Ｈである。幾つかの実施形態では、ＲＥは、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ３８は、
であり、ここで、ｕは、０、１、２、３、または４である。
幾つかの実施形態では、Ｘは、Ｏである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈ、または任意選択で置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈである。
幾つかの実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
幾つかの実施形態では、Ｒ４ａは、Ｈである。
幾つかの実施形態では、Ｒ４ｂは、Ｈである。
幾つかの実施形態では、
は、二重結合を表す。
幾つかの実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒ３は、
である。
幾つかの実施形態では、Ｒ５ａは、Ｈである。
幾つかの実施形態では、Ｒ５ｂは、Ｈである。
一態様では、本発明は、表１中の化合物Ｓ－１～４２、Ｓ－１５０、Ｓ－１５４、Ｓ－１６２～１６５、Ｓ－１６９～１７２及びＳ－１８４のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。本明細書で使用される場合、「ＣＭＰＤ」は「化合物」を指す。
一態様では、本発明は、表２中の化合物Ｓ－４３～５０及びＳ－１７５～１７８のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表３中の化合物Ｓ－５１～６７、Ｓ－１４９、及びＳ－１５３のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表４中の化合物Ｓ－６８～７３のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表５中の化合物Ｓ－７４～７８のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表６中の化合物Ｓ－７９またはＳ－８０のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表７中の化合物Ｓ－８１～８７、Ｓ－１５２、及びＳ－１５７のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表８中の化合物Ｓ－８８～９７のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表９中の化合物Ｓ－９８～１０５及びＳ－１８０～１８２のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１０中の化合物Ｓ－１０６の構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１１中の化合物Ｓ－１０７またはＳ－１０８の構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１２中の化合物Ｓ－１０９の構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１３中の化合物Ｓ－１１０～１３０、Ｓ－１５５、Ｓ－１５６、Ｓ－１５８、Ｓ－１６０、Ｓ－１６１、Ｓ－１６６～１６８、Ｓ－１７３、Ｓ－１７４、及びＳ－１７９のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１４中の化合物Ｓ－１３１～１３３のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
一態様では、本発明は、表１５中の化合物Ｓ－１３４～１４８、Ｓ－１５１、及びＳ－１５９のいずれか１つの構造を有する化合物、または任意のその医薬的に許容される塩を特徴とする。
本発明の脂質ナノ粒子の１つ以上の構造脂質は、構造脂質の組成物（例えば、２つ以上の構造脂質の混合物、３つ以上の構造脂質の混合物、４つ以上の構造脂質の混合物、または５つ以上の構造脂質の混合物）であり得る。構造脂質の組成物として、ステロール（例えば、コレステロール、β－シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、または表１５中の化合物１３４～１４８、１５１、及び１５９のいずれか１つ）の任意の組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。例えば、本発明の脂質ナノ粒子の１つ以上の構造脂質は、表１６中の組成物１８３であり得る。
組成物Ｓ－１８３は、化合物Ｓ－１４１、Ｓ－１４０、Ｓ－１４３、及びＳ－１４８の混合物である。幾つかの実施形態では、組成物Ｓ－１８３は、約３５％～約４５％の化合物Ｓ－１４１、約２０％～約３０％の化合物Ｓ－１４０、約２０％～約３０％の化合物Ｓ－１４３、及び約５％～約１５％の化合物Ｓ－１４８を含む。幾つかの実施形態では、組成物Ｓ－１８３は、約４０％の化合物Ｓ－１４１、約２５％の化合物Ｓ－１４０、約２５％の化合物Ｓ－１４３、及び約１０％の化合物Ｓ－１４８を含む。
幾つかの実施形態では、構造脂質は、フィトステロールである。幾つかの実施形態では、フィトステロールは、単独のまたは組み合わせた、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、ベータ－シトステロール、スチグマスタノール、ベータ－シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５－アベナステロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、Δ７－アベナステロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、またはΔ７－スチグマステロール（それらの類似体、塩、またはエステルを含む）である。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、単一のフィトステロールである。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロールと、１つ以上のズーステロールとのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロールなどのシトステロール）とコレステロールとのブレンドである。
化合物の比率
本発明の脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される通りの構造成分を含むことができる。脂質ナノ粒子の構造成分は、化合物Ｓ－１～１４８のいずれか１つ、本発明の１つ以上の構造化合物の混合物、及び／または化合物Ｓ－１～１４８のいずれか１つをコレステロール及び／またはフィトステロールと組み合わせたものであり得る。
例えば、脂質ナノ粒子の構造成分は、本発明の１つ以上の構造化合物（例えば、化合物Ｓ－１～１４８のいずれか）のコレステロールとの混合物であり得る。脂質ナノ粒子に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、コレステロールに対して０～９９ｍｏｌ％であり得る。脂質ナノ粒子に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、コレステロールに対して約１０ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、６０ｍｏｌ％、７０ｍｏｌ％、８０ｍｏｌ％、または９０ｍｏｌ％であり得る。
一態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール、シトスタノール、カンペステロール（ｃａｍｅｓｔｅｒｏｌ）、スチグマステロール、及びブラシカステロールの少なくとも２つを含む。組成物は、コレステロールを追加的に含んでもよい。一実施形態では、β－シトステロールは、組成物中に非コレステロールであるステロールを約３５～９９％、例えば、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上より多く含む。
別の態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びカンペステロールを含み、β－シトステロールは、組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中のステロールの０．１～５％を含む。
幾つかの実施形態では、組成物は、シトスタノールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは０．０５～４．９５％を含み、シトスタノールは０．０５～４．９５％を含む。
別の態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びシトスタノールを含み、β－シトステロールは、組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中のステロールの０．１～５％を含む。
幾つかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは０．０５～４．９５％を含み、シトスタノールは０．０５～４．９５％を含む。
幾つかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの７５～８０％を含み、カンペステロールは５～１０％を含み、シトスタノールは１０～１５％を含む。
幾つかの実施形態では、組成物は、追加のステロールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの３５～４５％を含み、スチグマステロールは２０～３０％を含み、カンペスタノールは２０～３０％を含み、ブラシカステロールは１～５％を含む。
別の態様では、本発明は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン性脂質及び２つ以上のステロールを含み、ここで、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びカンペステロールを含み、β－シトステロールは、組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中のステロールの０．１～５％を含む。
幾つかの実施形態では、２つ以上のステロールは、シトスタノールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは０．０５～４．９５％を含み、シトスタノールは０．０５～４．９５％を含む。
別の態様では、本発明は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン性脂質及び２つ以上のステロールを含み、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びシトスタノールを含み、β－シトステロールは、組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中のステロールの０．１～５％を含む。
幾つかの実施形態では、２つ以上のステロールは、カンペステロールをさらに含む。幾つかの実施形態では、β－シトステロールは組成物中のステロールの９５～９９．９％を含み、カンペステロールは０．０５～４．９５％を含み、シトスタノールは０．０５～４．９５％を含む。
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質／リン脂質
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。ある特定の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質である。幾つかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質の代用物または代替物である。
本明細書で使用される場合、「非カチオン性ヘルパー脂質」という用語は、少なくとも８炭素長の少なくとも１つの脂肪酸鎖と少なくとも１つの極性頭部基部分とを含む脂質を指す。一実施形態では、ヘルパー脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質代用物である。幾つかの実施形態では、リン脂質またはリン脂質代用物は、例えば、１つ以上の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質、またはリン脂質代用物、あるいはそれらの組み合わせであり得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分と１つ以上の脂肪酸部分とを含む。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
リン脂質として、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸が挙げられるが、これらに限定されない。リン脂質として、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も挙げられる。
幾つかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ代用物、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。
幾つかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、非ホスファチジルコリン（ＰＣ）双性イオン脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２－ジステアロイル－ｉ７７－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代用物である。
リン脂質
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含み得る。幾つかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、例えば、１つ以上の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質、またはリン脂質代用物、あるいはそれらの組み合わせである。一般に、リン脂質は、リン脂質部分と１つ以上の脂肪酸部分とを含む。本明細書で使用される場合、「リン脂質」とは、リン酸部分と、不飽和脂肪酸鎖などの１つ以上の炭素鎖とを含む脂質である。リン脂質は、１つ以上の多重（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つ以上の不飽和）を含んでもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体は、コリンを含んでもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体は、コリンを含まなくてもよい。特定のリン脂質は、膜に融合しやすくすることができる。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質が膜に融合すると、脂質含有組成物の１つ以上の要素を膜通過させることができ、それによって、例えば、１つ以上の要素を細胞へ送達することが可能になる。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
特定のリン脂質は、膜に融合しやすくすることができる。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用することができる。リン脂質が膜に融合すると、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１つ以上の要素（例えば、治療剤）を膜通過させることができ、それによって、例えば、１つ以上の要素を標的組織へ送達することが可能になる。
本開示の脂質ナノ粒子の脂質成分は、１つ以上のリン脂質、例えば、１つ以上の（ポリ）不飽和脂質を含み得る。リン脂質は、１つ以上の脂質二重層内に集合し得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分と１つ以上の脂肪酸部分とを含み得る。例えば、リン脂質は、（Ｈ ＩＩＩ）：
による脂質であってもよく、式中、Ｒｐはリン脂質部分を表し、Ｒ１及びＲ２は、同じでも異なっていてもよい不飽和を有するまたは有さない脂肪酸部分を表す。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含めた修飾及び置換を有する天然種を含めた、非天然種も企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられているアルケニル基）で官能化または架橋され得る。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドへの曝露時に銅触媒による付加環化を起こすことができる。そのような反応は、ＬＮＰの脂質二重層を機能化して膜透過または細胞認識しやすくするのに、またはＬＮＰを標的化もしくは画像化部分（例えば、色素）などの有用な成分にコンジュゲートさせるのに有用であり得る。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
本明細書に記載の組成物及び方法に有用なリン脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：３（ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：６（ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ（１８：２／１８：２）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＡＰＥ １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２２：６（ｃｉｓ）ＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
幾つかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＯＰＥを含む。幾つかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＰＥを含む。幾つかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣとＤＯＰＥを両方とも含む。
一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰに使用するための非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＤＯＰＣ、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。
リン脂質として、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸が挙げられるが、これらに限定されない。リン脂質として、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も挙げられる。
構造脂質の例として、限定するものではないが、以下が挙げられる：
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ（１，２－ジオクタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）の類似体またはバリアントである。ある特定の実施形態では、本発明において有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）の化合物：
またはその塩であり、式中、
各Ｒ１は、独立して、任意選択で置換されたアルキルであるか、または任意選択で２つのＲ１が介在原子と一緒に結合して、任意選択で置換された単環式カルボシクリルもしくは任意選択で置換された単環式ヘテロシクリルを形成するか、または、任意選択で３つのＲ１が介在原子と一緒に結合して、任意選択で置換された二環式カルボシクリルもしくは任意選択で置換された二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意選択で置換されたＣ１－６アルキレンであり、ここで、任意選択で置換されたＣ１－６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択で、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられており、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されたＣ１－３０アルキル、任意選択で置換されたＣ１－３０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ１－３０アルキニルであり、ここで、任意選択で、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意選択で置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択で置換されたカルボシクリル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２であり、
但し、該化合物は、以下の式：
のものではないことを条件とし、式中、Ｒ２の各場合は、独立して、非置換のアルキル、非置換のアルケニル、または非置換のアルキニルである。
ｉ）リン脂質頭部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾されたリン脂質頭部（例えば、修飾されたコリン基）を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭部を有するリン脂質は、修飾された第四級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ１の少なくとも１つは、メチルではない。ある特定の実施形態では、Ｒ１の少なくとも１つは、水素またはメチルではない。ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩であり、式中、
各ｔは、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｖは、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下：
の１つまたはその塩である。
一実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質として化合物Ｈ－４０９を含む。
（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣ（１，２－ジオクタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）またはその類似体である。本明細書に記載される場合、「修飾された尾部」は、より短いもしくはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基によって置き換えられた脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ａ）のものまたはその塩であり、ここで、Ｒ２の各場合は、任意選択で置換されたＣ１－３０アルキルであり、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられている。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）：
のものまたはその塩であり、式中、
各ｘは、独立して、０～３０の間（両端値を含む）の整数であり、
Ｇの各場合は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意に置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－１）：
のものまたはその塩であり、式中、
ｖの各場合は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－２）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－３）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾されたホスホコリン部分を含み、ここで、第四級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。したがって、ある特定の実施形態において、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）の化合物であり、ここで、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明のリン脂質の代わりに代替脂質が使用される。そのような代替脂質の非限定的な例として、以下が挙げられる：
リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明に有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明に有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載される場合、「修飾された尾部」は、より短いもしくはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基によって置き換えられた脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ Ｉ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ａ）のものまたはその塩であり、ここで、Ｒ２の各場合は、任意選択で置換されたＣ１－３０アルキルであり、ここで、Ｒ２のメチレン単位の１つ以上は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられている。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ａ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ）：
のものまたはその塩であり、式中、
各ｘは、独立して、０～３０の間（両端値を含む）の整数であり、
Ｇの各場合は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意に置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－１）：
のものまたはその塩であり、式中、
ｖの各場合は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－２）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－３）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ホスホコリンリンカーの修飾
ある特定の実施形態では、本発明に有用なリン脂質は、修飾されたホスホコリン部分を含み、第四級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。したがって、ある特定の実施形態において、本発明に有用なリン脂質は、式（Ｈ Ｉ）の化合物であり、式中、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、以下：
の１つのものまたはその塩である。
以降の実施例で実証するように、ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多数のＬＮＰ製剤を調製し、活性について試験した。
リン脂質代用物または代替物
幾つかの実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりにオレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。幾つかの実施形態では、オレイン酸類似体は、修飾されたオレイン酸尾部、修飾されたカルボン酸部分、またはこれらの両方を含む。幾つかの実施形態では、オレイン酸類似体は、オレイン酸のカルボン酸部分が異なる基によって置き換えられている化合物である。
幾つかの実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに異なる双性イオン基を含む。
例示的なリン脂質代用物及び／または代替物は、公開ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１７／０９９８２３号に提供されており、該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
例示的なリン脂質代用物及び／または代替物は、公開ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１７／０９９８２３号に提供されており、該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
（ｉｖ）ＰＥＧ脂質
ＰＥＧ脂質の非限定的な例として、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ならびにＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。そのような脂質は、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
幾つかの実施形態では、ＰＥＧ脂質として、限定するものではないが、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ－ジステリルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ＰＥＧ－ジパルメトレイル、ＰＥＧ－ジオレイル、ＰＥＧ－ジステアリル、ＰＥＧ－ジアシルグリカミド（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ－１，２－ジミリスチルオキシルプロピル（ｄｉｍｙｒｉｓｔｙｌｏｘｌｐｒｏｐｙｌ）－３－アミン（ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ）が挙げられる。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分には、約Ｃ１４～約Ｃ２２、好ましくは約Ｃ１４～約Ｃ１６の長さを有するものが含まれる。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ－ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである。
一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含むことができる。非拡散性ＰＥＧの非限定的な例として、ＰＥＧ－ＤＳＧ及びＰＥＧ－ＤＳＰＥが挙げられる。
ＰＥＧ脂質は、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４Ａ２号に記載されるものなど、当技術分野で公知であり、該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
概して、本明細書に記載の様々な式の他の脂質成分（例えば、ＰＥＧ脂質）の幾つかは、２０１６年１２月１０日に出願された「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ」と題される国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号に記載されるように合成されてもよく、該文献は、参照によりその全体が組み込まれる。
脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つ以上の分子を含んでもよい。そのような種は、代替的にＰＥＧ化脂質と呼ばれることがある。ＰＥＧ脂質とは、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物を含む非限定的な群から選択され得る。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であってもよい。
幾つかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ－ＤＭＧは、以下の構造を有する：
一実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号に記載されるＰＥＧ化脂質であり得、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載のこれらの例示的なＰＥＧ脂質のいずれかは、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含むように修飾されてもよい。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義されるように、「ＰＥＧ－ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質」とも呼ばれる）は、脂質上に１つ以上のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖上に１つ以上のヒドロキシル基を含む。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨまたはヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に－ＯＨ基を含む。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
幾つかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ）の化合物：
またはその塩もしくは異性体であり、式中、
ｒは、１～１００の間の整数であり、
Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、任意選択で、Ｒ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員のヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－， －ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
例えば、Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１７アルキルである。例えば、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ－ａ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｒは、１～１００の間の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式：
の化合物またはその塩もしくは異性体である。
ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であってもよく、式中、
ｓは、１～１００の間の整数であり、
Ｒ”は、水素、Ｃ１－１０アルキル、または酸素保護基であり、
Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、任意選択で、Ｒ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員のヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－， －ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
幾つかの実施形態では、Ｒ７ＰＥＧはＣ１０－６０アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基の１つ以上は－Ｃ（Ｏ）－で置き換えられている。例えば、Ｒ７ＰＥＧはＣ３１アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基の２つは－Ｃ（Ｏ）－で置き換えられている。
幾つかの実施形態では、Ｒ”は、メチルである。
幾つかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ－ａ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１～１００の間の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式：
の化合物またはその塩もしくは異性体である。
ある特定の実施形態では、本発明に有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩＩ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＰＩＩＩ）の化合物：
またはそれらの塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の間（両端値を含む）の整数であり、
Ｌ１は、任意選択で置換されたＣ１－１０アルキレンであり、ここで、任意選択で置換されたＣ１－１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられており、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られた部分、または生理的条件下で切断可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意選択で置換されたＣ１－６アルキレンであり、ここで、任意選択で置換されたＣ１－６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択で、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられており、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意選択で置換されたＣ１－３０アルキル、任意選択で置換されたＣ１－３０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ１－３０アルキニルであり、任意選択で、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意選択で置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択で置換されたカルボシクリル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である（すなわち、Ｒ３は－ＯＲＯであり、ＲＯは水素である）。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ＯＨ）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分（例えば、トリアゾール）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ａ－１）もしくは（ＰＩＩＩ－ａ－２）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩であり、式中、
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理的条件下で切断可能な部分（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、尿素）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ｂ－１）もしくは（ＰＩＩＩ－ｂ－２）：
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ｂ－１－ＯＨ）もしくは（ＰＩＩＩ－ｂ－２－ＯＨ）：
のものまたはその塩を有する。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明に有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本発明に有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＶ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＰＩＶ）：
の化合物またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の間（両端値を含む）の整数であり、
Ｒ５は、任意選択で置換されたＣ１０－４０アルキル、任意選択で置換されたＣ１０－４０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ１０－４０アルキニルであり、任意選択で、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意選択で置換されたアルキル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、式（ＰＩＶ－ＯＨ）：
のものまたはその塩である。幾つかの実施形態では、ｒは４０～５０である。幾つかの実施形態では、ｒは４５である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、以下の式：
の１つのものまたはその塩である。幾つかの実施形態では、ｒは４０～５０である。幾つかの実施形態では、ｒは４５である。
さらに他の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
またはその塩である。
一実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、以下である：
一態様では、本明細書で提供されるのは、式（ＰＶ）：
のＰＥＧ脂質またはその医薬的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、式中、
Ｌ１は、結合、任意選択で置換されたＣ１－３アルキレン、任意選択で置換されたＣ１－３ヘテロアルキレン、任意選択で置換されたＣ２－３アルケニレン、任意選択で置換されたＣ２－３アルキニレンであり、
Ｒ１は、任意選択で置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択で置換されたＣ５－３０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２～１００の間（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
のものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｙ１は、結合、－ＣＲ２－、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒの各場合は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択で置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各場合は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択で置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ｓは、５～２５（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下：
ならびにその医薬的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、式（ＰＶＩ）：
のＰＥＧ脂質またはその医薬的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、式中、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２～１００（両端値を含む）の整数である。
ｍは、５～１５（両端値を含む）の整数、または１９～３０（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、式（ＰＶＩＩ）：
のＰＥＧ脂質またはその医薬的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、式中、
Ｙ２は、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒ１の各場合は、独立して、任意選択で置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択で置換されたＣ５－３０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ＲＮは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または窒素保護基であり、
ｒは、２～１００の間（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ｓの各場合は、５～２５（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下：
ならびにその医薬的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、式（ＰＶＩＩＩ）：
のＰＥＧ脂質またはその医薬的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、式中、
Ｌ１は、結合、任意選択で置換されたＣ１－３アルキレン、任意選択で置換されたＣ１－３ヘテロアルキレン、任意選択で置換されたＣ２－３アルケニレン、任意選択で置換されたＣ２－３アルキニレンであり、
Ｒ１の各場合は、独立して、任意選択で置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択で置換されたＣ３－３０アルケニル、または任意選択で置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２～１００（両端値を含む）の整数であり、
但し、Ｌ１が－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－であるとき、ＲＯはメチルではないことを条件とする。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が任意選択で置換されたＣ２またはＣ３アルキレンであるとき、ＲＯは任意選択で置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が任意選択で置換されたＣ２またはＣ３アルキレンであるとき、ＲＯは水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－であるとき、ＲＯは任意選択で置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－であるとき、ＲＯは水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
のものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｙ１は、結合、－ＣＲ２－、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒの各場合は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択で置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアシル、または窒素保護基であり、
但し、Ｙ１が結合または－ＣＨ２－であるとき、ＲＯはメチルではないことを条件とする。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＲ２－であるとき、ＲＯは任意選択で置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＲ２－であるとき、ＲＯは水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＨ２－であるとき、ＲＯは任意選択で置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が－ＣＨ２－であるとき、ＲＯは水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各場合は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択で置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各場合は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択で置換されたアルキルであり、
各ｓは、独立して、５～２５（両端値を含む）の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
の１つのものまたはその医薬的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下：
及びその医薬的に許容される塩からなる群から選択される。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本発明のＰＥＧ脂質は、ｒが４０～５０であることを特徴とする。
本明細書で提供されるＬＮＰは、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質を含む既存のＬＮＰ製剤と比較して、増大されたＰＥＧ放出を呈する。「ＰＥＧ放出」とは、本明細書で使用される場合、ＰＥＧ脂質からＰＥＧ基が切断されることを指す。多くの場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の切断は、血清によって駆動されるエステラーゼ切断または加水分解によって起こる。本明細書で提供されるＰＥＧ脂質は、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ放出の速度を制御するように設計されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％超のＰＥＧ放出を呈する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５０％超のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に６０％超のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に７０％超のＰＥＧ放出を示す。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に８０％超のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に９０％超のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に９０％超のＰＥＧ放出を呈する。
他の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％未満のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に６０％未満のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に７０％未満のＰＥＧ放出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に８０％未満のＰＥＧ放出を呈する。
本明細書で提供されるＰＥＧ脂質に加えて、ＬＮＰは、１つ以上の追加の脂質成分を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５～１５％のモル比でＬＮＰ中に存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５～５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して１～５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５～２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して１～２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対しておよそ１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、または２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対しておよそ１．５％のモル比で存在する。
一実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約０．１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約２ｍｏｌ％である。一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約１．５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５ｍｏｌ％である。
合成例
化合物：ＨＯ－ＰＥＧ２０００－エステル－Ｃ１８
パラジウム炭素（１０ｗｔ．％、７４ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を含有する窒素充填フラスコに、ベンジル－ＰＥＧ２０００－エステル－Ｃ１８（８２２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した。フラスコの排気及びＨ２での再充填を３回行い、室温及び１気圧のＨ２下で１２時間撹拌した。この混合物をセライトでろ過し、ＤＣＭですすぎ、ろ液を真空で濃縮して、所望の生成物（６９２ｍｇ、８８％）を得た。この方法論を使用すると、ｎ＝４０～５０となる。一実施形態では、得られた多分散混合物のｎは、平均である４５で表される。
例えば、ｒの値は、ＰＥＧ脂質中のＰＥＧ部分の分子量に基づいて決定することができる。たとえば、分子量２，０００（たとえば、ＰＥＧ２０００）のｎの値は、およそ４５に相当する。ポリマーは、異なるポリマー鎖長の分布として見出されることが多いため、所与の組成物について、ｎの値は当技術分野で許容される範囲内の値の分布を意味し得る。例えば、そのようなポリマー組成物の多分散性を理解する当業者であれば、４５というｎの値（例えば、構造式における）が、実際のＰＥＧ含有組成物、例えば、ＤＭＧ ＰＥＧ２００ペグ脂質組成物において、４０～５０の間の値の分布を表し得ることを理解するであろう。
幾つかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物の標的細胞送達脂質は、ＰＥＧ脂質を含まない。
一実施形態では、本開示の標的細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧではない。幾つかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。幾つかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される。他の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧである。
一実施形態では、本開示の標的細胞送達ＬＮＰは、約１４、または分岐している場合、約１０より長い鎖長を有するＰＥＧ脂質を含む。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ ４１９、Ｐ ４２０、Ｐ ４２３、Ｐ ４２４、Ｐ ４２８、Ｐ Ｌ１、Ｐ Ｌ２、Ｐ Ｌ１６、Ｐ Ｌ１７、Ｐ Ｌ１８、Ｐ Ｌ１９、Ｐ Ｌ２２、及びＰ Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１７、Ｐ ４２０、Ｐ ４２３、Ｐ ４２４、Ｐ ４２８、Ｐ Ｌ１、Ｐ Ｌ２、Ｐ Ｌ１６、Ｐ Ｌ１７、Ｐ Ｌ１８、Ｐ Ｌ１９、Ｐ Ｌ２２、及びＰ Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ １８、ＰＬ１９、ＰＬ １、及びＰＬ ２からなる群から選択される。
標的細胞送達増強脂質
ＬＮＰに有効量の標的細胞送達増強脂質があると、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比べて標的細胞（例えば、ヒトまたは霊長類の標的細胞、例えば、肝細胞または脾細胞）への薬剤の送達が強化され、それによって標的細胞送達ＬＮＰが作出される。標的細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに存在すると、送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、ＬＮＰに存在する薬剤の標的細胞への送達を促進することを特徴とすることができる。
一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞に会合するＬＮＰの百分率が増大する。別の実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞への核酸分子剤の送達が増大する。一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、肝細胞への核酸分子剤の送達が増大する。特に、一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、肝実質細胞への核酸分子剤の送達が増大する。一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、クッパー細胞への核酸分子剤の送達が増大する。一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、肝類洞細胞への核酸分子剤の送達が増大する。一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、肝星細胞への核酸分子剤の送達が増大する。
一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞内への優先的な取り込みが増大する。一実施形態では、ＬＮＰに少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞によって取り込まれる（例えば、標的細胞によってオプソニン化される）ＬＮＰの百分率が増大する。
一実施形態では、核酸分子がｍＲＮＡであるとき、少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質が存在すると、標的細胞送達増強脂質を含まない参照ＬＮＰと比較したときに、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、または肝類洞細胞）または脾実質細胞））において該ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子が少なくとも約２倍多く発現する。
一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、イオン性脂質である。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質（Ｉで示される）は、任意の、例えば、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ－４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、もしくは（Ｉ ＸＩ－ｂ）、（Ｉ ＩＸ）、（Ｉ ＩＸａ１）、（Ｉ ＩＸａ２）、（Ｉ ＩＸａ３）、（Ｉ ＩＸａ４）、（Ｉ ＩＸａ５）、（Ｉ ＩＸａ６）、（Ｉ ＩＸａ７）、もしくは（Ｉ ＩＸａ８）のいずれかを有する化合物、及び／または化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ ４８、Ｉ ４９、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １１３、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２４４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２２、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、Ｉ ３３０、Ｉ ３３１、Ｉ ３３２、もしくはＩ Ｍのいずれかに含まれる化合物を含む。
一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、イオン性脂質である。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物Ｙ、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、または化合物Ｉ－１８１として本明細書に記載の化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ４９、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １１３、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２４４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３０９、Ｉ ３１７、Ｉ ３２１、Ｉ ３２２、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、Ｉ ３３０、Ｉ ３３１、Ｉ ３３２、Ｉ ３４７、Ｉ ３４８、Ｉ ３４９、Ｉ ３５０、Ｉ ３５１、及びＩ ３５２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ４９、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、及びＩ ３３０からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号 Ｉ ４９、Ｉ １８２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、及びＩ ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
標的細胞送達増強脂質がイオン性脂質を含む実施形態では、該イオン性脂質は、ＬＮＰに存在する唯一のイオン性脂質であってもよく、または少なくとも１つの追加のイオン性脂質とのブレンドとして存在してもよいことが理解されよう。すなわち、イオン性脂質のブレンド（例えば、複数の標的細胞送達強化効果を有するもの、または１つの標的細胞送達強化効果を有するもの及び少なくとも１つの標的細胞送達強化効果を有さないもの）を用いてもよい。
一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、ステロールを含む。別の実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、天然に存在するステロールを含む。別の実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、修飾されたステロールを含む。一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、１つ以上のフィトステロールを含む。一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、フィトステロール／コレステロールのブレンドを含む。
一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、有効量のフィトステロールを含む。
「フィトステロール」という用語は、フィトステロイド（それらの塩またはエステルを含む）である植物ベースのステロール及びスタノールの群を指す。
「ステロール」という用語は、ステロイドアルコールとしても公知であるステロイドの部分群を指す。ステロールは、通常、（１）「フィトステロール」としても公知である植物ステロール、及び（２）「ズーステロール」としても公知である動物ステロール（コレステロールなど）の２つのクラスに分けられる。「スタノール」という用語は、ステロール環構造に二重結合を持たない飽和ステロールのクラスを指す。
「有効量のフィトステロール」という用語は、所望の活性（例えば、強化された送達、強化された標的細胞取り込み、強化された核酸活性）を誘発することとなる、ＬＮＰを含めた脂質ベースの組成物中の１つ以上のフィトステロールの量を意味することが意図される。幾つかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールのすべてまたは実質的にすべてである（すなわち、約９９～１００％）。幾つかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールのすべてまたは実質的にすべてより少ないが（約９９～１００％未満）、脂質ナノ粒子中の非フィトステロールのステロールの量より多い。幾つかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの総量の５０％超、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超である。幾つかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの総量の９５～１００％、７５～１００％、または５０～１００％である。
幾つかの実施形態では、フィトステロールは、単独のまたは組み合わせた、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、ベータ－シトステロール、スチグマスタノール、ベータ－シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５－アベナステロール、Δ７－アベナステロール、またはΔ７－スチグマステロール（それらの類似体、塩、またはエステルを含む）である。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、単一のフィトステロールである。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロールと、１つ以上のズーステロールとのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロールなどのシトステロール）とコレステロールとのブレンドである。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、ベータ－シトステロールである。
幾つかの実施形態では、ベータ－シトステロールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、スチグマステロールである。
幾つかの実施形態では、スチグマステロールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、カンペステロールである。
幾つかの実施形態では、カンペステロールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、シトスタノールである。
幾つかの実施形態では、シトスタノールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、カンペスタノールである。
幾つかの実施形態では、カンペスタノールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、ブラシカステロールである。
幾つかの実施形態では、ブラシカステロールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、シトステロールは、フコステロールである。
幾つかの実施形態では、フコステロールは、式：
を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
幾つかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）は、７０％超の純度を有する。幾つかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）は、８０％超の純度を有する。幾つかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）は、９０％超の純度を有する。幾つかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）は、９５％超の純度を有する。幾つかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）は、９７％、９８％、または９９％超の純度を有する。
一実施形態では、標的細胞送達を強化するＬＮＰは、複数のタイプの構造脂質を含む。
例えば、一実施形態では、標的細胞送達を強化するＬＮＰは、フィトステロールである少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、フィトステロールは、ＬＮＰに存在する唯一の構造脂質である。別の実施形態では、標的細胞送達ＬＮＰは、構造脂質のブレンドを含む。
一実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物中のフィトステロールと構造脂質（例えば、ベータ－シトステロールとコレステロール）とを合わせた量は、約２０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％～約４５ｍｏｌ％範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のフィトステロールと構造脂質（例えば、ベータ－シトステロールとコレステロール）とを合わせた量は、約２５ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％～約３５ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のフィトステロール及び構造脂質（例えば、ベータ－シトステロール及びコレステロール）の量は、約２４ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、または約３９ｍｏｌ％である。
幾つかの実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物中のフィトステロールと構造脂質（例えば、ベータ－シトステロールとコレステロール）とを合わせた量は、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０ｍｏｌ％である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と１つ以上の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子中に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％～５０％の間である。幾つかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）中に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％～４０％の間である。幾つかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）中に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％～３０％の間である。幾つかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）中に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１５～４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）を含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロールと構造脂質との総ｍｏｌ％が３０～４０ｍｏｌ％の間になるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とをそれぞれ含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロールと構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。
ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。
一態様では、標的細胞送達を強化するＬＮＰはフィトステロールを含み、該ＬＮＰは追加の構造脂質を含まない。したがって、ＬＮＰの構造脂質（ステロール）成分は、フィトステロールからなる。一態様では、標的細胞送達を強化するＬＮＰは、フィトステロール及び追加の構造脂質を含む。したがって、ＬＮＰのステロール成分は、フィトステロール及び１つ以上の追加のステロールまたは構造脂質を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロールコレステロールのブレンド）は、コレステロール、β－シトステロール（本明細書では化合物Ｓ １４１とも呼ばれる）、カンペステロール（本明細書では化合物Ｓ １４３とも呼ばれる）、β－シトスタノール（本明細書では化合物Ｓ １４４とも呼ばれる）、ブラシカステロール、もしくはスチグマステロール、またはそれらの組み合わせもしくはブレンドとして本明細書に記載の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロールコレステロールのブレンド）は、コレステロール、β－シトステロール、カンペステロール、β－シトスタノール、ブラシカステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール－ｄ７、化合物Ｓ－３０、化合物Ｓ－３１、化合物Ｓ－３２、またはそれらの組み合わせもしくはブレンドから選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロールコレステロールのブレンド）は、コレステロール、β－シトステロール（本明細書では化合物Ｓ １４１とも呼ばれる）、カンペステロール（本明細書では化合物Ｓ １４３とも呼ばれる）、β－シトスタノール（本明細書では化合物Ｓ １４４とも呼ばれる）、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１４４、ブラシカステロール（本明細書では化合物Ｓ １４８とも呼ばれる）、または化合物Ｓ－１８３（約４０％の化合物Ｓ－１４１、約２５％の化合物Ｓ－１４０、約２５％の化合物Ｓ－１４３、及び約１０％のブラシカステロール）として本明細書に記載の化合物を含む。幾つかの実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質は、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１６７、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、または化合物Ｓ－１７５として本明細書に記載の化合物を含む。
一実施形態では、標的細胞送達を強化するＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質を含む。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣまたはＨ－４０９として本明細書に記載の化合物を含む。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質は、ＤＳＰＣである。他の実施形態では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＭＰＣ、Ｈ－４０９、Ｈ－４１８、Ｈ－４２０、Ｈ－４２１、またはＨ－４２２として本明細書に記載の化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのＰＥＧ脂質は、本明細書に記載の化合物を含み、該化合物は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択することができる。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ ４１９、Ｐ ４２０、Ｐ ４２３、Ｐ ４２４、Ｐ ４２８、Ｐ Ｌ５、Ｐ Ｌ１、Ｐ Ｌ２、Ｐ Ｌ１６、Ｐ Ｌ１７、Ｐ Ｌ１８、Ｐ Ｌ１９、Ｐ Ｌ２２、Ｐ Ｌ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、及びＤＳＧからなる群から選択される。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ １８、ＰＬ１９、Ｐ Ｌ５、ＰＬ １、及びＰＬ ２からなる群から選択される。
一実施形態では、標的細胞送達増強脂質は、イオン性脂質とフィトステロールとの有効量の組み合わせを含む。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｙ、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｙ含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－１８２、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－１８２含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－３２１、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－３２１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－２９２、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－２９２含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－３２６、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－３２６含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－３０１、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－３０１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－４８、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－４８含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－４９、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－４９含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－５０、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－５０含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－３２８、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－３２８含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－３３０、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－３３０含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－１０９、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－１０９含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－１１１、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－１１１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－１８１、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物Ｉ－１８１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分に関して、一実施形態では、構造脂質は完全にコレステロールであり、３８％または２８％である。別の実施形態では、構造脂質は、総百分率が３８％または２８％であるコレステロール／β－シトステロールであり、該ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含むことができる。
他の実施形態において、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ－３２１、Ｉ－２９２、Ｉ－３２６、Ｉ－１８２、Ｉ－３０１、Ｉ－４８、Ｉ－４９、Ｉ－５０、Ｉ－３２８、Ｉ－３３０、Ｉ－１０９、Ｉ－１１１、またはＩ－１８１；リン脂質としてのＤＳＰＣ；構造脂質としてのコレステロール、コレステロール／β－シトステロールのブレンド、β－シトステロール／β－シトスタノールのブレンド、β－シトステロール／カンペステロールのブレンド、β－シトステロール／β－シトスタノール／カンペステロールブレンド、コレステロール／カンペステロールブレンド、コレステロール／β－シトスタノールのブレンド、コレステロール／β－シトスタノール／カンペステロールのブレンド、またはコレステロール／β－シトステロール／β－シトスタノール／カンペステロールのブレンド；及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。これらの化合物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、次の通りであり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；（ｉｖ）４０：３０：２８：２；（ｖ）４０：１８．５：４０：１．５；または（ｖｉ）４５：２０：３３．５：１．５。一実施形態では、構造脂質成分に関して、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ－シトステロール；（ｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のカンペステロール；（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ－シトスタノール；（ｉｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ－シトステロール及び１０％のカンペステロール；（ｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ－シトステロール、及び１０％のβ－シトスタノール；（ｖｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール、及び２０％のカンペステロール；（ｖｉｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール、及び２０％のカンペステロール；（ｖｉｉｉ）１０％のコレステロール、２０％のカンペステロール、及び１０％のβ－シトスタノール；（ｉｘ）１０％のコレステロール、１０％のカンペステロール、及び２０％のβ－シトスタノール；または（ｘ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール、１０％のカンペステロール、及び１０％のβ－シトスタノール、からなる４０％の構造脂質を含む。別の実施形態では、構造脂質成分に関して、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）３３．５％のコレステロール；（ｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のβ－シトステロール；（ｉｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロール；または（ｉｖ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロール、からなる３３．５％の構造脂質を含む。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン性脂質としての化合物Ｉ－４９、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１、または化合物Ｉ－３２６、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質としての化合物４２８を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、標的細胞、例えば、肝細胞または脾細胞への送達を強化する。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２、または化合物Ｉ－２４４を含み、ＬＮＰは単球への送達を促進強化する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択することができ、例えば、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を選択することができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、構造脂質としてカンペステロール、β－シトスタノール、またはスチグマステロールを含み、ＬＮＰは単球への送達を強化する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択することができ、例えば、イオン化性脂質として、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２または化合物Ｉ－２４４、リン脂質としてＤＳＰＣ、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を選択することができる。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の標的細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）としてＤＯＰＣ、ＤＭＰＥまたはＨ－４０９を含み、ＬＮＰは単球への送達を強化する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択することができ、例えば、イオン性脂質として、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２、または化合物Ｉ－２４４、構造脂質として、コレステロール、コレステロール／β－シトステロールのブレンド、カンペステロール、β－シトスタノール、またはスチグマステロール、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を選択することができる。
例示的な追加のＬＮＰ成分
界面活性剤
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子は、任意選択で１つ以上の界面活性剤を含む。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。本明細書で使用される場合、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。例えば、両親媒性ポリマーは、２つ以上のＰＥＧモノマー単位などのオリゴマーフラグメントを含むことができる。例えば、本明細書に記載の両親媒性ポリマーは、ＰＳ２０であり得る。
例えば、両親媒性ポリマーは、ブロックコポリマーである。
例えば、両親媒性ポリマーは、凍結乾燥保護剤である。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧で、水中で２×１０－４Ｍの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧で、水中で約０．１×１０－４Ｍ～約１．３×１０－４Ｍの間の範囲の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、両親媒性ポリマーの濃度は、製剤中で、例えば凍結または凍結乾燥前に、そのＣＭＣ～ＣＭＣの約３０倍（例えば、そのＣＭＣの最大約２５倍、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、または約３倍）の間の範囲である。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポロキサミン（Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選択される。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマーである。例えば、両親媒性ポリマーは、以下の構造：
であり、式中、ａは、１０～１５０の間の整数であり、ｂは、２０～６０の間の整数である。例えば、ａは約１２かつｂは約２０であり、またはａは約８０かつｂは約２７、またはａは約６４かつｂは約３７、またはａは約１４１かつｂは約４４、またはａは約１０１かつｂは約５６である。
例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１２４、Ｐ１８８、Ｐ２３７、Ｐ３３８、またはＰ４０７である。
例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１８８である（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ １８８、ＣＡＳ番号９００３－１１－６、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ Ｐ１８８としても公知である）。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサミン、例えば、テトロニック３０４またはテトロニック９０４である。
例えば、両親媒性ポリマーは、分子量が３ｋＤａ、１０ｋＤａ、または２９ｋＤａのＰＶＰなどの、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。
例えば、両親媒性ポリマーは、ＰＳ２０などのポリソルベートである。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、両親媒性ポリマーである。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。
例えば、非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールエーテル（Ｂｒｉｊ）、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。
例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中、
ｔは、１～１００の間の整数であり、
Ｒ１ＢＲＩＪは、独立して、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、任意選択で、Ｒ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員のヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルキルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ－ａ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体である。
幾つかの実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルケニルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ－ｂ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体である。
幾つかの実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、及びポロキサマー４０７からなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、ポリソルベートは、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、６０、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０である。
幾つかの実施形態では、ソルビタンの誘導体は、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、またはＳｐａｎ（登録商標）８５である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．００００１％ｗ／ｖ～約１％ｗ／ｖ、例えば、約０．００００５％ｗ／ｖ～約０．５％ｗ／ｖ、または約０．０００１％ｗ／ｖ～約０．１％ｗ／ｖの範囲である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．０００００１ｗｔ％～約１ｗｔ％、例えば、約０．０００００２ｗｔ％～約０．８ｗｔ％、または約０．０００００５ｗｔ％～約０．５ｗｔ％の範囲である。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子中のＰＥＧ脂質の濃度は、約０．０１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、例えば、約０．０５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％、約０．０７ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約８ｍｏｌ％、約０．２ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、または約０．２５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％の範囲である。
アジュバント
幾つかの実施形態では、本発明のＬＮＰは、任意選択で、１つ以上のアジュバント、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４を含む。
他の成分
本発明のＬＮＰは、先行するセクションで説明したものに加えて、１つ以上の成分を任意選択で含んでもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、ビタミン（例えば、ビタミンＡまたはビタミンＥ）またはステロールなどの１つ以上の疎水性小分子を含んでもよい。
脂質ナノ粒子は、１つ以上の透過性強化剤分子、炭水化物、ポリマー、表面改変剤（例えば、界面活性剤）、または他の成分を含んでもよい。透過性強化剤分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載される分子であってもよい。炭水化物には、単糖（例えば、グルコース）及び多糖（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）が含まれてもよい。
ポリマーは、脂質ナノ粒子をカプセル化するまたは部分的にカプセル化するために含まれても及び／または使用されてもよい。ポリマーは生分解性及び／または生体適合性であってもよい。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートからなる群から選択されてもよいが、これらに限定されない。例えば、ポリマーとして、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＥＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＰＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ－Ｌ－グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（酢酸ビニル）、ポリハロゲン化ビニル、例えば、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ならびにそれらのコポリマー及び混合物、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、トリメチレンカーボネート、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、ならびにポリグリセロールを挙げることができる。
表面改変剤として、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、カチオン性界面活性剤、例えば、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解薬（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドラム、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、及びＤＮアーゼ（例えば、ｒｈＤＮアーゼ）を挙げることができるが、これらに限定されない。表面改変剤は、ナノ粒子内に配置されても、及び／またはＬＮＰの表面上に配置されてもよい（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによる）。
脂質ナノ粒子はまた、１つ以上の機能化脂質を含んでもよい。例えば、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露されると付加環化反応を起こすことができるアルキン基で機能化されてもよい。特に、脂質二重層は、膜透過、細胞認識、または画像化しやすくするのに有用な１つ以上の基を用いてこのように機能化されてもよい。ＬＮＰの表面はまた、１つ以上の有用な抗体にコンジュゲートされてもよい。標的細胞送達、画像化、及び膜透過に有用な官能基及びコンジュゲートは、当技術分野で周知である。
これらの成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含んでもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤または副成分、例えば、１つ以上の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体ビヒクル、結合剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、緩衝剤、潤滑剤、油、保存剤、及び他の種（これらに限定されない）を含んでもよい。賦形剤、例えば、ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味剤、及び芳香剤も含まれてもよい。医薬的に許容される不経済は当技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照されたい）。
希釈剤の例として、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖、及び／またはそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。造粒剤及び分散剤は、ジャガイモテンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木製品、海綿、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル－ピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミウニムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物、及び／またはそれらの組み合わせからなる非限定的なリストから選択されてもよい。
界面活性剤及び／または乳化剤として、天然乳化剤（例えば、アラビアガム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイドクレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミウニムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、及びモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン、及びＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル－ピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム、及び／またはそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。
結合剤は、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプン糊）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成ガム（例えば、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、トチャカの抽出物、パンワーガム、ガッチガム、イサポール殻の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル－ピロリドン）、ケイ酸アルミウニムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、及びカラマツのアラビノガラクタン（ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））；アルギネート；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水；アルコール；ならびにそれらの組み合わせ、または任意の他の適切な結合剤であってもよい。
保存剤の例として、酸化防止剤、キレート剤、抗菌性保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、及び／または他の保存剤を挙げることができるが、これらに限定されない。抗酸化剤の例として、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。キレート剤の例として、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸ジナトリウム、エデト酸ジカリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸トリナトリウムが挙げられる。抗菌性保存剤の例として、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられるが、これらに限定されない。抗真菌性保存剤の例として、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。アルコール保存剤の例として、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。酸性保存剤の例として、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ－カロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられるが、これらに限定されない。他の保存剤として、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。
緩衝剤の例として、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ－グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロピオン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノ－スルホネート緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去蒸留水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、水添植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせからなる非限定的群から選択されてもよい。
油の例として、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロフサスグリ（ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ）種子、ルリジサ、カデ、カミツレ、キャノーラ、キャラウェイ、カルナウバ、ヒマシ、シナモン、カカオバター、ココナツ、タラ肝、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、月見草、魚、アマニ、ゲラニオール、ゴード、グレープシード、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンディン、ラベンダー、レモン、リツェアクベバ、マカデミアナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォームシード、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラッフィー、パーム、パーム核、桃仁、ピーナッツ、ケシの実、パンプキンシード、菜種、米ぬか、ローズマリー、ベニバナ、サンダルウッド、サザンカ、セイボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ、及び小麦胚種油、ならびにステアリン酸ブチル、トリカプリル酸グリセリル、トリカプリン酸グリセリル、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
ＬＮＰ組成物
本明細書に記載の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、１つ以上の特定の用途または標的のために設計することができる。脂質ナノ粒子の要素及びそれらの相対量は、特定の用途または標的に基づいて選択されても、及び／または１つ以上の要素の有効性、毒性、費用、使いやすさ、可用性、またはその他の特徴に基づいて選択されてもよい。同様に、脂質ナノ粒子の特定の製剤は、例えば、要素の特定の組み合わせの有効性及び毒性に従って、特定の用途または標的のために選択されてもよい。脂質ナノ粒子製剤の有効性及び忍容性は、製剤の安定性によって影響される場合がある。
本発明のＬＮＰは、少なくとも１つの標的細胞送達増強脂質を含む。主題のＬＮＰは、ＬＮＰの成分として有効量の標的細胞送達増強脂質を含み、該ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質、（ｉｉ）コレステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び（ｖ）ＬＮＰにカプセル化された及び／または会合された薬剤（例えば、核酸分子）を含み、有効量の標的細胞送達増強脂質は、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比べて、標的細胞（例えば、ヒトまたは霊長類の標的細胞、例えば、肝細胞または脾細胞）への薬剤の送達を強化する。
様々な成分の要素は、特定の分率、例えば、モル百分率で提供することができる。
例えば、前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、構造脂質またはその塩を含む。幾つかの態様では、構造脂質は、コレステロールまたはその塩である。さらなる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％～５０％の間である。他の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％～４０％の間である。幾つかの態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％～３０％の間である。さらなる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質成分は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、任意選択で１つ以上の構造脂質を含めて約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含むが、但し、総ｍｏｌ％が１００％を超えないことを条件とする。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質成分は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、任意選択で１つ以上の構造脂質を含めて約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、脂質成分は、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、任意選択で１つ以上の構造脂質を含めて約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。別の実施形態では、脂質成分は、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、任意選択で１つ以上の構造脂質を含めて約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの実施形態では、フィトステロールはベータ－シトステロールであってもよく、非カチオン性ヘルパー脂質はリン脂質、例えば、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、またはリン脂質代用物、例えばオレイン酸であってもよい。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ－ＤＭＧであってもよく、及び／または構造脂質はコレステロールであってもよい。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。幾つかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
本明細書における実施形態に関する幾つかの態様では、本開示のＬＮＰのフィトステロール及び構造脂質成分は、フィトステロールを構造脂質に対して約１０：１～１：１０の間で含み、例えば、フィトステロールを構造脂質に対して（例えば、ベータ－シトステロールをコレステロールに対して）約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、及び１：１０で含む。
幾つかの実施形態では、ＬＮＰのフィトステロール成分は、フィトステロールとコレステロールなどの構造脂質とのブレンドであり、ここで、フィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）及び構造脂質（例えば、コレステロール）は、各々特定のｍｏｌ％で存在する。例えば、幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１５～４０ｍｏｌ％の間のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）を含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロールと構造脂質との総ｍｏｌ％が３０～４０ｍｏｌ％の間になるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とをそれぞれ含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロールと構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、ベータ－シトステロール）と、２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）とを含む。
本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的のために設計することができる。例えば、主題の脂質ナノ粒子は、任意選択で、哺乳動物の、例えば、ヒトの体内の特定の標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）、組織、臓器、またはその系もしくは群への核酸分子、例えばＲＮＡの送達をさらに強化するように設計されてもよい。脂質ナノ粒子の生理化学的特性は、特定の身体標的に対する選択性を上げるために改変されてもよい。例えば、粒径は、標的細胞の取り込みを促進するように調整されてもよい。上述のように、脂質ナノ粒子に含まれる核酸分子はまた、標的細胞への所望の送達に基づいて選択されてもよい。例えば、核酸分子は、特定の適応症、状態、疾患、もしくは障害に対して、及び／または特定の細胞、組織、臓器、またはその系もしくは群への送達（例えば、局所または特異的送達）に対して選択されてもよい。
ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、細胞内で翻訳されて目的のポリペプチドを産生することができる、目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含んでもよい。他の実施形態では、脂質ナノ粒子は、他のタイプの薬剤、例えば他の核酸剤を含むことができ、それには、本明細書に記載されるようなＤＮＡ及び／またはＲＮＡ剤、例えば、後でさらに詳しく記載されるようなｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンス核酸などが含まれる。
脂質ナノ粒子中の核酸分子の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的、及び／または用途、あるいは他の特性、ならびに治療薬及び／または予防薬の性質に依存し得る。例えば、脂質ナノ粒子に有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及び他の特性に依存し得る。脂質ナノ粒子中の核酸分子及び他の要素（例えば、脂質）の相対量も変動し得る。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子中のイオン性脂質成分の核酸分子に対するｗｔ／ｗｔ比は、約５：１～約６０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１であってもよい。例えば、イオン性脂質成分の核酸分子に対するｗｔ／ｗｔ比は、約１０：１～約４０：１であってもよい。ある特定の実施形態では、ｗｔ／ｗｔ比率は、約２０：１である。ＬＮＰ中の核酸分子の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外可視分光法）を使用して測定されてもよい。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のＲＮＡ、及び１つ以上のイオン性脂質を含み、それらの量は、特定のＮ：Ｐ比をもたらすように選択され得る。組成物のＮ：Ｐ比とは、１つ以上の脂質中の窒素原子の、ＲＮＡ中のリン酸基の数に対するモル比を指す。一般的に、Ｎ：Ｐ比率が低い方が好ましい。１つ以上のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量は、約２：１～約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１のＮ：Ｐ比をもたらすように選択されてもよい。ある特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約２：１～約８：１であってもよい。他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１～約８：１である。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約５．７：１、約５．８：１、約５．９：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であってもよい。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．６７：１であってもよい。別の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．８：１であってもよい。
ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約４：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約６：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約７：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約８：１であってもよい。
ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３～８：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３～７：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３～６：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３～５：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約３～４：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約４～８：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５～８：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約６～８：１であってもよい。ある実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約７～８：１であってもよい。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、塩化物塩などの塩をさらに含んでもよい。
幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、二糖などの糖をさらに含んでもよい。幾つかの実施形態では、製剤は、糖をさらに含むが、塩化物塩などの塩は含まない。
物理的特性
脂質ナノ粒子の性質は、その成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含む脂質ナノ粒子は、異なる構造脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる性質を有し得る。同様に、脂質ナノ粒子の特性は、その成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、高いリン脂質モル分率を含む脂質ナノ粒子は、それより低いリン脂質モル分率を含む脂質ナノ粒子とは異なる性質を有し得る。性質は、脂質ナノ粒子を調製する方法及び条件によっても変動し得る。
ナノ粒子組成物は、様々な方法で特徴付けることができる。例えば、顕微鏡法（例えば、透過型電子顕微鏡法または走査型電子顕微鏡法）を使用して、脂質ナノ粒子の形態及び粒度分布を調べることができる。動的光散乱法または電位差測定（例えば、電位差滴定）を使用して、ゼータ電位を測定することができる。動的光散乱法は、粒径を決定するために利用することもできる。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）などの機器を使用して、粒径、多分散性指数、及びゼータ電位などの脂質ナノ粒子の複数の性質を測定することもできる。
脂質ナノ粒子の平均サイズは、例えば、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定される、数十ｎｍ～数百ｎｍの間であってもよい。例えば、平均サイズは、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであってもよい。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍ～約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約６０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ～約１００ｎｍであってもよい。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約７０ｎｍ～約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、平均サイズは、約８０ｎｍであってもよい。他の実施形態では、平均サイズは、約１００ｎｍであってもよい。
ナノ粒子組成物は、比較的均一であってもよい。多分散性指数を使用して、ＬＮＰの均一性、例えば、該脂質ナノ粒子組成物の粒度分布を示してもよい。本明細書で使用される場合、「多分散性指数」は、系の粒度分布の均一性を表す比率である。小さい（例えば、０．３未満の）値は、狭い粒度分布を示す。小さい（例えば、０．３未満の）多分散性指数は、一般に、狭い粒度分布を示す。脂質ナノ粒子は、約０～約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５の多分散性指数を有してもよい。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子の多分散性指数は、約０．１０～約０．２０であってもよい。
脂質ナノ粒子のゼータ電位を使用して、該組成物の界面動電位を示すことができる。本明細書で使用される場合、「ゼータ電位」は、脂質の、例えば粒子組成物中の脂質の界面動電位である。
例えば、ゼータ電位は、脂質ナノ粒子の表面電荷を表すことができる。より高い電荷を有する種は、細胞、組織、及び体内の他の要素と望ましくない相互作用するおそれがあるため、比較的低い正または負の電荷を有する脂質ナノ粒子が一般に望ましい。幾つかの実施形態では、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約－１０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約－５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－５ｍＶ～約０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ～約＋１０ｍＶであってもよい。
核酸分子のカプセル化効率は、調製後に脂質ナノ粒子にカプセル化されたまたはこれに会合された核酸分子の量を、最初に提供された量と比較して表す。カプセル化効率は、高い（例えば、１００％に近い）ことが望ましい。カプセル化効率は、例えば、脂質ナノ粒子を含有する溶液中の核酸分子の量を、１つ以上の有機溶媒または界面活性剤で該脂質ナノ粒子を破壊する前後で比較することによって測定することができる。蛍光を使用して、溶液中の遊離核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の量を測定することができる。本明細書に記載の脂質ナノ粒子の場合、核酸分子のカプセル化効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であってもよい。幾つかの実施形態では、カプセル化効率は、少なくとも８０％であってもよい。ある特定の実施形態では、カプセル化効率は、少なくとも９０％であってもよい。
脂質ナノ粒子は、任意選択で、１つ以上のコーティングを含んでもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、コーティングを有するカプセル、フィルム、または錠剤に製剤化されてもよい。本明細書に記載の組成物を含むカプセル、フィルム、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引張強度、硬度、または密度を有してもよい。
例示的な薬剤
送達される薬剤
本開示の標的細胞送達脂質及びそれを含有するＬＮＰは、薬剤との会合、例えば薬剤のカプセル化を通して、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））に多種多様な異なる薬剤を送達するために使用することができる。典型的には、ＬＮＰによって送達される薬剤は核酸であるが、小分子、化学療法薬、ペプチド、タンパク質、及び他の生物学的分子などの非核酸薬剤もまた、本開示に包含される。送達することができる核酸には、ＤＮＡベースの分子（すなわち、デオキシリボヌクレオチドを含む）及びＲＮＡベースの分子（すなわち、リボヌレオチドを含む）が含まれる。さらに、核酸は、分子の天然に存在する形態であるか、または分子の化学的に修飾された形態（すなわち、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む）であり得る。
タンパク質発現を強化するための薬剤
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、タンパク質発現を強化する（すなわち、増大させる、刺激する、上方制御する）薬剤である。一実施形態では、薬剤は、脂肪ベースの組成物が送達される標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））におけるタンパク質発現を増大させる。追加的または代替的に、別の実施形態では、薬剤は、脂質ベースの組成物が送達される標的細胞以外の他の細胞、例えば、バイスタンダー細胞におけるタンパク質発現の増大をもたらす。タンパク質発現を強化するために使用することができる薬剤のタイプの非限定的な例として、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡ（例えば、発現ベクター）が挙げられる。
ＤＮＡ剤
一実施形態では、ＬＮＰに会合される／カプセル化される薬剤は、ＤＮＡ剤である。ＤＮＡ分子は、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、または部分的に二本鎖ＤＮＡである分子、すなわち、二本鎖である部分と一本鎖である部分とを有する分子であり得る。ある場合には、ＤＮＡ分子は、三本鎖であるか、または部分的に三本鎖である、すなわち、三本鎖である部分と二本鎖である部分とを有する。ＤＮＡ分子は、環状ＤＮＡ分子または線状ＤＮＡ分子であり得る。
ＬＮＰに会合される／カプセル化されるＤＮＡ剤は、遺伝子を細胞に導入することができる、例えば、転写物をコードし、発現することができるＤＮＡ分子であり得る。例えば、ＤＮＡ剤は、目的のタンパク質をコードすることができ、それにより、ＬＮＰによって標的細胞に送達されたときに、標的細胞における目的のタンパク質の発現を増大させる。幾つかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、天然由来のものであり得、例えば、天然源から単離されたものであり得る。他の実施形態では、ＤＮＡ分子は、合成分子であり、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された合成ＤＮＡ分子である。幾つかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、組換え分子である。非限定的な例示的なＤＮＡ剤として、プラスミド発現ベクター及びウイルス発現ベクターが挙げられる。
本明細書に記載のＤＮＡ剤、例えば、ＤＮＡベクターは、種々の異なる特徴を含むことができる。本明細書に記載のＤＮＡ剤、例えば、ＤＮＡベクターは、非コードＤＮＡ配列を含むことができる。例えば、ＤＮＡ配列は、遺伝子の少なくとも１つの調節エレメント、例えば、プロモーター、エンハンサー、終結エレメント、ポリアデニル化シグナルエレメント、スプライシングシグナルエレメントなどを含むことができる。幾つかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列はイントロンである。幾つかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列はトランスポゾンである。幾つかの実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、転写的に活性である遺伝子に作動可能に連結されている非コードＤＮＡ配列を有することができる。他の実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、遺伝子に連結されていない非コードＤＮＡ配列を有することができ、すなわち、非コードＤＮＡは、ＤＮＡ配列上の遺伝子を調節しない。
ＲＮＡ剤
一実施形態では、ＬＮＰに会合される／カプセル化される薬剤は、ＲＮＡ剤である。ＲＮＡ分子は、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、または部分的に二本鎖ＲＮＡである分子、すなわち、二本鎖である部分と一本鎖である部分とを有する分子であり得る。ＲＮＡ分子は、環状ＲＮＡ分子または線状ＲＮＡ分子であり得る。
ＬＮＰに会合される／カプセル化されるＲＮＡ剤は、遺伝子を細胞に導入することができるＲＮＡ剤であって、例えば、目的のタンパク質をコードすることができ、それにより、ＬＮＰによって標的細胞に送達されたときに、標的細胞における目的のタンパク質の発現を増大させるものであり得る。幾つかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、天然由来のものであり得、例えば、天然源から単離されたものであり得る。他の実施形態では、ＲＮＡ分子は、合成分子であり、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された合成ＲＮＡ分子である。
ＲＮＡ剤の非限定的な例として、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）（例えば、目的のタンパク質をコードするもの）、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位（複数可））を組み込んだｍＲＮＡ、機能性ＲＮＡエレメントを含む修飾ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴｍｉｒ、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡが含まれる）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術が挙げられ、これらの各々は、以降のサブセクションにさらに記載される。
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）
幾つかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法で使用するための、少なくとも１つのｍＲＮＡを含む脂質組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。
ｍＲＮＡは、天然に存在するｍＲＮＡであっても、または天然に存在しないｍＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡは、以降に記載されるように、１つ以上の修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含んでもよく、その場合、それは「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれることがある。本明細書に記載される場合、「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせて含む化合物として定義される。本明細書に記載される場合、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドとして定義される。
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）、及び／またはコーディング領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含んでもよい。構築物で使用するための例示的な５’ＵＴＲは、配列番号６０に示されている。構築物で使用するための例示的な３’ＵＴＲは、配列番号６１に示されている。構築物で使用するための、ｍｉＲ－１２２及び／またｍｉＲ－１４２－３ｐ結合部位を含む例示的な３’ＵＴＲは、配列番号６２に示されている。一実施形態では、肝実質細胞での発現は、ｍｉＲ１２２結合部位を含むことによって減少する。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００）、または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含めた、任意の適切な数の塩基対を含んでもよい。任意の数（例えば、すべて、一部、またはなし）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、置換されているか、修飾されているか、またはその他の方法で天然に存在しない、古典的な種の類似体であってもよい。ある特定の実施形態では、特定の核酸塩基タイプのすべてが修飾されていてもよい。
配列番号６０（５’ＵＴＲ）
ＴＣＡＡＧＣＴＴＴＴＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ
配列番号６１（３’ＵＴＲ）
ＴＧＡＴＡＡＴＡＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＧＣＣＡＴＧＣＴＴＣＴＴＧＣＣＣＣＴＴＧＧＧＣＣＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＣＧＴＡＣＣＣＣＣＧＴＧＧＴＣＴＴＴＧＡＡＴＡＡＡＧＴＣＴＧＡＧＴＧＧＧＣＧＧＣ
配列番号６２（ｍｉＲ－１２２及びｍｉＲ－１４２－３ｐ部位を有する３’ＵＴＲ）
ＴＧＡＴＡＡＴＡＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＧＣＣＡＴＧＣＴＴＣＴＴＧＣＣＣＣＴＴＧＧＧＣＣＣＡＡＡＣＡＣＣＡＴＴＧＴＣＡＣＡＣＴＣＣＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＴＣＣＡＴＡＡＡＧＴＡＧＧＡＡＡＣＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＣＣＧＴＡＣＣＣＣＣＧＴＧＧＴＣＴＴＴＧＡＡＴＡＡＡＧＴＣＴＧＡＧＴＧＧＧＣＧＧＣ
幾つかの実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、任意選択でコザック配列（コザックコンセンサス配列としても公知である）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。
５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって結合された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然に存在するキャップ、天然に存在しないキャップもしくはキャップ類似体、または抗リバースキャップ類似体（ＡＲＣＡ）（ａｎｔＩ－ｒｅｖｅｒｓｅ ｃａｐ ａｎａｌｏｇ）から選択されてもよい。キャップ種は、１つ以上の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含んでもよい。例えば、天然のｍＲＮＡキャップは、グアニンヌクレオチドと７位でメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチドとがそれらの５’位で三リン酸結合によって結合されたもの（例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、通常、ｍ７ＧｐｐｐＧと書かれる）を含んでもよい。キャップ種はまた、抗リバースキャップ類似体であってもよい。可能なキャップ種の非限定的なリストには、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが含まれる。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加的に、鎖終結ヌクレオシドを含んでもよい。例えば、鎖終結ヌクレオシドには、それらの糖基の２’位及び／または３’位で脱酸素化されたヌクレオシドが含まれてもよい。そのような種には、３’－デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’－デオキシウリジン、３’－デオキシシトシン、３’－デオキシグアノシン、３’－デオキシチミン、ならびに２’、３’－ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’－ジデオキシアデノシン、２’，３’－ジデオキシウリジン、２’，３’－ジデオキシシトシン、２’，３’－ジデオキシグアノシン、及び２’，３’－ジデオキシチミンが含まれてもよい。幾つかの実施形態では、例えば国際特許公開第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されるように、ｍＲＮＡに鎖終結ヌクレオチドを組み込むと、例えば３’末端で組み込むと、ｍＲＮＡを安定化することができる。
別の例示的なキャップはｍＣＡＰであり、これはＡＲＣＡに類似しているが、グアノシン上に２’－Ｏ－メチル基を有する（すなわち、Ｎ７，２’－Ｏ－ジメチル－グアノシン－５’－三リン酸－５’－グアノシン、ｍ７Ｇｍ－ｐｐｐ－Ｇ）。
幾つかの実施形態では、キャップは、ジヌクレオチドキャップ類似体である。非限定的な例として、ジヌクレオチドキャップ類似体は、米国特許第ＵＳ８，５１９，１１０号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているジヌクレオチドキャップ類似体のように、異なるリン酸位でボラノホスフェート基またはホスホロセレノエート基で修飾されていてもよい。
別の実施形態では、キャップは、当技術分野で公知の及び／または本明細書に記載のＮ７－（４－クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチドの形態のキャップ類似体である。Ｎ７－（４－クロロフェノキシエチル）置換ジクヌレオチドの形態のキャップ類似体の非限定的な例として、Ｎ７－（４－クロロフェノキシエチル）－Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ及びＮ７－（４－クロロフェノキシエチル）－ｍ３’－ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇキャップ類似体が挙げられる（例えば、Ｋｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１３ ２１：４５７０－４５７４（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている様々なキャップ類似体及びキャップ類似体を合成する方法を参照されたい）。別の実施形態では、本開示のキャップ類似体は、４－クロロ／ブロモフェノキシエチル類似体である。
キャップ類似体は、ポリヌクレオチドまたはその領域のキャッピングを同時に行うことができるが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応では、転写物の最大２０％がキャップされないまま残ることがある。これによって、キャップ類似体が内因性の細胞転写機構によって産生される核酸の内因性５’キャップ構造とは構造的に異なるだけでなく、翻訳能力の低減、細胞の安定性の低減に至ることがある。
本発明のポリヌクレオチド（例えば、治療用ペイロードもしくは予防用ペイロード、エフェクター分子、及び／またはテザー分子をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド）は、酵素を使用して、製造後（ＩＶＴであるか化学合成であるかに関係なく）にキャップしてより真正な５’キャップ構造を生成することもできる。本明細書で使用される場合、「より真正な」という語句は、構造的または機能的に、内因性または野生型の特徴を厳密に反映または模倣する特徴を指す。すなわち、「より真正な」特徴は、先行技術の合成の特徴または類似体などと比較したときに、内因性、野生型、天然、または生理的細胞機能及び／または構造をより良好に表しているか、あるいは１つ以上の点において対応する内因性、野生型、天然、または生理的特徴よりも性能が優れている。本開示のより真正な５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当技術分野で公知の合成５’キャップ構造（または野生型、天然、もしくは生理的な５’キャップ構造）と比較したときに、キャップ結合タンパク質の結合が強化され、半減期が増大され、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性が低減され、及び／または５’キャップ除去が低減されたものである。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素及び組換え２’－Ｏ－メチルトランスフェラーゼ酵素は、ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチドとの間に古典的な５’－５’－三リン酸結合を作出することができ、ここで、該キャップグアニンは、Ｎ７メチル化を含有し、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチルを含有する。そのような構造は、キャップ１構造と呼ばれる。このキャップは、例えば当技術分野で公知の他の５’キャップ類似体構造と比較したときに、高い翻訳能力及び細胞の安定性、ならびに細胞の炎症誘発性サイトカインの活性化の低減をもたらす。キャップ構造として、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ，ｐＮ２ｐ（キャップ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、及び７ｍＧ（５’）－ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）が挙げられるが、これらに限定されない。
非限定的な例として、製造後のキメラポリヌクレオチドをキャッピングすると、キメラポリヌクレオチドのほぼ１００％をキャッピングすることができるので、より効率的であり得る。これは、キャップ類似体をｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応中にキメラポリヌクレオチドに連結させたときに約８０％の効率であるのとは対照的である。
本発明によれば、５’末端キャップは、内因性キャップまたはキャップ類似体を含むことができる。本発明によれば、５’末端キャップは、グアニン類似体を含むことができる。有用なグアニン類似体として、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、及び２－アジド－グアノシンが挙げられるが、これらに限定されない。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加的に、ヒストンステムループなどのステムループを含んでもよい。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８個、またはそれ以上のヌクレオチド塩基対を含んでもよい。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８個のヌクレオチド塩基対を含んでもよい。ステムループは、ｍＲＮＡのいかなる領域に位置してもよい。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域または３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくはテールの中、前、または後に位置してもよい。幾つかの実施形態では、ステムループは、翻訳の開始、翻訳効率、及び／または転写終結などの、ｍＲＮＡの１つ以上の機能（複数可）に影響を与え得る。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加的に、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ポリＡ配列は、全体または大部分がアデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体から構成されてもよい。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置するテールであってもよい。幾つかの実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外輸送、翻訳、及び／または安定性に影響を与え得る。さらなる実施形態では、ポリＡテール上の末端基は、安定化のために組み込まれてもよい。他の実施形態では、ポリＡテールは、デス－３’ヒドロキシルテールを含む。
ＲＮＡプロセシングの間に、アデニンヌクレオチドの長鎖（ポリ－Ａテール）をｍＲＮＡ分子などのポリヌクレオチドに付加して安定性を増大させることができる。転写直後に、転写物の３’末端を切断して３’ヒドロキシルを遊離させることができる。次いで、ポリ－Ａポリメラーゼが、ＲＮＡにアデニンヌクレオチドの鎖を付加する。ポリアデニル化と呼ばれるこのプロセスは、例えば、およそ８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、または２５０の残基長を含めた、およそ８０～およそ２５０の間の残基長であり得るポリ－Ａテールを付加する。一実施形態では、ポリ－Ａテールは、１００ヌクレオチド長である。
ポリＡテールは、構築物が核から輸送された後に付加することもできる。
本発明によれば、ポリＡテール上の末端基は、安定化のために組み込まれてもよい。本発明のポリヌクレオチドは、デス－３’ヒドロキシルテールを含むことができる。これらは、Ｊｕｎｊｉｅ Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１５，１５０１－１５０７，Ａｕｇｕｓｔ ２３，２００５、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって教示されるような構造的部分または２’－Ｏメチル修飾も含むことができる。
本発明のポリヌクレオチドは、ヒストンｍＲＮＡを含む代替のポリＡテール構造を有する転写物をコードするように設計することができる。Ｎｏｒｂｕｒｙによれば、「末端ウリジル化は、ヒト複製依存性ヒストンｍＲＮＡでも検出されている。これらのｍＲＮＡの代謝回転は、染色体ＤＮＡ複製の完了または阻害後の潜在的に毒性であるヒストン蓄積の防止に重要であると考えられる。これらのｍＲＮＡは、３’ポリ（Ａ）テールがないことで区別され、その機能は、安定したステムループ構造及びその同族ステムループ結合タンパク質（ＳＬＢＰ）が代わりに引き継ぎ、後者は、ポリアデニル化ｍＲＮＡのＰＡＢＰのものと同じ機能を行う」（Ｎｏｒｂｕｒｙ，“Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ＲＮＡ：ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｉｌ ｗａｇｇｉｎｇ ｔｈｅ ｄｏｇ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ；ＡＯＰ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ２９ Ａｕｇｕｓｔ ２０１３；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｍ３６４５（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。
固有のポリ－Ａテール長は、本発明のポリヌクレオチドにある特定の利点を提供する。一般に、ポリ－Ａテールの長さは、存在する場合、３０ヌクレオチド長より大きい。別の実施形態では、ポリ－Ａテールは、３５ヌクレオチド長より大きい（例えば、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、または３，０００ヌクレオチド、またはそれらより大きい）。
幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドまたはその領域は、約３０～約３，０００ヌクレオチド（例えば、３０～５０、３０～１００、３０～２５０、３０～５００、３０～７５０、３０～１，０００、３０～１，５００、３０～２，０００、３０～２，５００、５０～１００、５０～２５０、５０～５００、５０～７５０、５０～１，０００、５０～１，５００、５０～２，０００、５０～２，５００、５０～３，０００、１００～５００、１００～７５０、１００～１，０００、１００～１，５００、１００～２，０００、１００～２，５００、１００～３，０００、５００～７５０、５００～１，０００、５００～１，５００、５００～２，０００、５００～２，５００、５００～３，０００、１，０００～１，５００、１，０００～２，０００、１，０００～２，５００、１，０００～３，０００、１，５００～２，０００、１，５００～２，５００、１，５００～３，０００、２，０００～３，０００、２，０００～２，５００、及び２，５００～３，０００）である。
幾つかの実施形態では、ポリ－Ａテールは、ポリヌクレオチド全体の長さまたはポリヌクレオチドの特定の領域の長さに対して設計される。この設計は、コード領域の長さ、特定の特徴物または領域の長さ、またはそのポリヌクレオチドから発現される最終産物の長さに基づくことができる。
これに関連して、ポリ－Ａテールは、ヌクレオチドまたはその特徴物よりも長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％大きくてもよい。ポリ－Ａテールは、それが属するポリヌクレオチドの一部分として設計することもできる。これに関連して、ポリ－Ａテールは、構築物の全長、構築物の領域、または構築物の全長からポリ－Ａテールを差し引いたものの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％またはそれ以上であってもよい。さらに、ポリ－Ａ結合タンパク質のために結合部位を操作し、ポリヌクレオチドをコンジュゲートすると、発現を強化することができる。
加えて、ポリ－Ａテールの３’末端において修飾ヌクレオチドを使用して、複数の別個のポリヌクレオチドを、ＰＡＢＰ（ポリ－Ａ結合タンパク質）を介して３’末端を通して一緒に連結することができる。トランスフェクション実験を関連する細胞株で行うことができ、タンパク質産生を、トランスフェクションの１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、及び７日後にＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ポリＡ－Ｇカルテット領域を含むように設計される。Ｇカルテットは、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方でＧリッチな配列によって形成され得る、４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイである。この実施形態では、Ｇカルテットは、ポリＡテールの端部に組み込まれる。得られたポリヌクレオチドは、様々な時点で、安定性、タンパク質産生、及び半減期を含めた他のパラメータについてアッセイされる。ポリＡ－Ｇカルテットは、１２０ヌクレオチドのポリ－Ａテールを単独で使用した場合に見られるタンパク質産生の少なくとも７５％に相当するｍＲＮＡからのタンパク質産生をもたらすことが見出されている。
開始コドン領域
本発明はまた、開始コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、治療用ペイロードもしくは予防用ペイロード、エフェクター分子、及び／またはテザー分子をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド）の両方を含むポリヌクレオチドもまた含む。幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、開始コドン領域に類似しているか、またはそれと同様に機能する領域を有することができる。
幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドの翻訳は、開始コドンＡＵＧではないコドンで開始することができる。ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドン、例えば、限定するものではないが、ＡＣＧ、ＡＧＧ、ＡＡＧ、ＣＴＧ／ＣＵＧ、ＧＴＧ／ＧＵＧ、ＡＴＡ／ＡＵＡ、ＡＴＴ／ＡＵＵ、ＴＴＧ／ＵＵＧで開始することができる（Ｔｏｕｒｉｏｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ９５（２００３）１６９－１７８ならびにＭａｔｓｕｄａ ａｎｄ Ｍａｕｒｏ ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１（その各々の内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＡＣＧで始まる。別の非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＣＴＧまたはＣＵＧで始まる。別の非限定的な例として、核酸翻訳は、代替の開始コドンＣＴＧまたはＣＵＧで始まる。
翻訳を開始するコドン、例えば、限定するものではないが、開始コドンまたは代替の開始コドン、に隣接するヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの翻訳効率、長さ、及び／または構造に影響を与えることが公知である。（例えば、Ｍａｔｓｕｄａ ａｎｄ Ｍａｕｒｏ ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。翻訳を開始するコドンに隣接するヌクレオチドのいずれかのマスキングを使用して、ポリヌクレオチドの翻訳開始位置、翻訳効率、長さ、及び／または構造を改変することができる。
幾つかの実施形態では、開始コドンまたは代替の開始コドンの付近でマスキング剤を使用してコドンをマスクまたは遮蔽して、マスクされた開始コドンまたは代替の開始コドンでの翻訳開始の確率を低減することができる。マスキング剤の非限定的な例として、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）ポリヌクレオチド及びエクソン－ジャンクション複合体（ＥＪＣ）が挙げられる（例えばマスキング剤ＬＮＡポリヌクレオチド及びＥＪＣについて記載しているＭａｔｓｕｄａ ａｎｄ Ｍａｕｒｏ（ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１）（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
別の実施形態では、マスキング剤を使用してポリヌクレオチドの開始コドンをマスクして、翻訳が代替の開始コドンで開始する可能性を増大させることができる。幾つかの実施形態では、マスキング剤を使用して最初の開始コドンまたは代替の開始コドンをマスクして、マスクされた開始コドンまたは代替の開始コドンの下流の開始コドンまたは代替の開始コドンで翻訳が開始される機会を増大させることができる。
幾つかの実施形態では、開始コドンまたは代替の開始コドンは、ｍｉＲ結合部位の完全な相補体の中に位置することができる。ｍｉＲ結合部位の完全な相補体は、マスキング剤と同様に、ポリヌクレオチドの翻訳、長さ、及び／または構造の制御を助けることができる。非限定的な例として、開始コドンまたは代替の開始コドンは、ｍｉＲＮＡ結合部位の完全な相補体の中央に位置することができる。開始コドンまたは代替の開始コドンは、１番目のヌクレオチド、２番目のヌクレオチド、３番目のヌクレオチド、４番目のヌクレオチド、５番目のヌクレオチド、６番目のヌクレオチド、７番目のヌクレオチド、８番目のヌクレオチド、９番目のヌクレオチド、１０番目のヌクレオチド、１１番目のヌクレオチド、１２番目のヌクレオチド、１３番目のヌクレオチド、１４番目のヌクレオチド、１５番目のヌクレオチド、１６番目のヌクレオチド、１７番目のヌクレオチド、１８番目のヌクレオチド、１９番目のヌクレオチド、２０番目のヌクレオチド、または２１番目のヌクレオチドの後に位置することができる。
別の実施形態では、ポリヌクレオチドの翻訳を、開始コドンではないコドンで始めるために、ポリヌクレオチドの開始コドンをポリヌクレオチド配列から除去することができる。ポリヌクレオチドの翻訳は、除去された開始コドンに続くコドン、または下流の開始コドンもしくは代替の開始コドンで始めることができる。非限定的な例では、下流の開始コドンまたは代替の開始コドンで翻訳を開始させるために、開始コドンＡＴＧまたはＡＵＧがポリヌクレオチド配列の最初の３つのヌクレオチドとして除去される。開始コドンが除去されたポリヌクレオチド配列は、下流の開始コドン及び／または代替の開始コドンのための少なくとも１つのマスキング剤をさらに含んで、翻訳の開始、ポリヌクレオチドの長さ、及び／またはポリヌクレオチドの構造を制御するまたは制御を試みることができる。
終止コドン領域
本発明はまた、終止コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、治療用ペイロードもしくは予防用ペイロード、エフェクター分子、及び／またはテザー分子をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド）の両方を含むポリヌクレオチドもまた含む。幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の前に少なくとも２つの終止コドンを含むことができる。終止コドンは、ＤＮＡの場合はＴＧＡ、ＴＡＡ、及びＴＡＧから、またはＲＮＡの場合はＵＧＡ、ＵＡＡ、及びＵＡＧから選択することができる。幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡの場合は終止コドンＴＧＡ、またはＲＮＡの場合は終止コドンＵＧＡと、１つの追加の終止コドンとを含む。さらなる実施形態では、追加の終止コドンは、ＴＡＡまたはＵＡＡであり得る。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、３つの連続する終止コドン、４つの終止コドン、またはそれ以上の終止コドンを含む。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加的に、マイクロＲＮＡ結合部位を含んでもよい。
幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域と第２のコード領域とを含むバイシストロン性ｍＲＮＡであり、該ｍＲＮＡは、第１の第１のコード領域と第２のコード領域の間に内部翻訳の開始を可能にする配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有するか、または２Ａペプチドなどの自己切断ペプチドをコードする介在配列を有する。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは、通常、同じベクターからの複数のタンパク質の発現を強化するために使用される。例えば、脳心筋炎ウイルスのＩＲＥＳを含めて、種々のＩＲＥＳ配列が当技術分野で公知かつ利用可能であり、それらを使用することができる。
一実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、自己切断ペプチドをコードする配列を含んでもよい。自己切断ペプチドは、限定するものではないが、２Ａペプチドであってもよい。口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）の２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルスの２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルスの２Ａペプチド、及びブタテスコウイルス－１の２Ａペプチドを含めて、種々の２Ａペプチドが当技術分野で公知かつ利用可能であり、それらを使用することができる。２Ａペプチドは、幾つかのウイルスによって使用されて、リボソームスキッピングによって１つの転写産物から２つのタンパク質を生成する。リボソームスキッピングは、正常なペプチド結合が２Ａペプチドで損なわれるように行われ、それによって１つの翻訳イベントから２つの不連続なタンパク質が産生される。非限定的な例として、２Ａペプチドは、タンパク質配列：ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６３）、そのフラグメントまたはバリアントを有してもよい。一実施形態では、２Ａペプチドは、最後のグリシンと最後のプロリンの間で切断する。別の非限定的な例として、本開示のポリヌクレオチドは、タンパク質配列ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６３）、そのフラグメントまたはバリアントを有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよい。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の一例は、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号６４）である。例示的な一実施形態では、２Ａペプチドは、以下の配列によってコードされる：５’－ＴＣＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＣＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＣＡＡＴＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＣ－３’（配列番号６５）。２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の方法及び／または当技術分野で公知の方法によって修飾またはコドン最適化されてもよい。
一実施形態では、この配列を使用して、目的の２つ以上のポリペプチドのコード領域を分離してもよい。非限定的な例として、Ｆ２Ａペプチドをコードする配列は、第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂの間にあってもよい（Ａ－Ｆ２ＡｐｅＰ－Ｂ）。Ｆ２Ａペプチドが存在すると、Ｆ２Ａペプチド配列の末端のグリシンとプロリンの間で１つの長いタンパク質が切断され（ＮＰＧＰ（配列番号１７９）は切断されてＮＰＧ及びＰとなる）、それによって分離タンパク質Ａ（Ｆ２Ａペプチドの２１個のアミノ酸が結合されており、ＮＰＧで終わる）及び分離プタンパク質Ｂ（Ｆ２Ａペプチドの１個のアミノ酸Ｐが結合されている）が作出される。同様に、他の２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びＥ２Ａ）についても、長いタンパク質に該ペプチドが存在すると、２Ａペプチド配列の末端のグリシンとプロリンの間で切断される（ＮＰＧＰは切断されてＮＰＧ及びＰになる）。タンパク質Ａ及びタンパク質Ｂは、同じ目的のペプチドもしくはポリペプチドであっても、または異なる目的のペプチドもしくはポリペプチドであってもよい。
修飾ｍＲＮＡ
幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチド（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）を含む。幾つかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照の非修飾ｍＲＮＡと比較したときに、強化された安定性、細胞内保持、強化された翻訳、及び／または該ｍＲＮＡが導入された細胞の自然免疫応答が実質的に誘導されないことを含めた、有用な特性を有することができる。したがって、修飾ｍＲＮＡを使用すると、タンパク質産生の効率、核酸の細胞内保持を強化することができるだけでなく、免疫原性が低減する。
幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３または４つ）の異なる修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個、またはそれ以上）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する非修飾ｍＲＮＡと比べて、該ｍＲＮＡが導入された細胞での分解が低減し得る。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとして、プソイドウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－ａｒａ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、ならびに５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとして、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、プソイドイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－プソイドイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジンが挙げられる。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとして、α－チオ－アデノシン、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンが挙げられる。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとして、ａ－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、非修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシンが挙げられる。
幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、４－チオ－プソイドウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、または２’－Ｏ－メチルウリジンである。幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。一実施形態では、修飾核酸塩基はＮ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）であり、本開示のｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）で完全に修飾されている。幾つかの実施形態では、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの７５～１００％を占める。幾つかの実施形態では、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの１００％を占める。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例として、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジンが挙げられる。幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例として、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例として、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンが挙げられる。幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施形態では、修飾核酸塩基は、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、プソイドウリジン（ψ）、α－チオ－グアノシン、またはα－チオ－アデノシンである。幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、プソイドウリジン（ψ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、プソイドウリジン（ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾のために均一に修飾される（すなわち、完全に修飾され、配列全体を通して修飾される）。例えば、ｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾することができ、これは、ｍＲＮＡ配列におけるすべてのウリジンまたはすべてのシトシンヌクレオシドがＮ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で置き換えられることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、配列に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基に関して、上述のものなどの修飾残基で置き換えることによって均一に修飾することができる。
幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）において修飾されてもよい。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、コード領域以外の領域において修飾されてもよい。例えば、幾つかの実施形態では、５’－ＵＴＲ及び／または３’－ＵＴＲが提供され、ここで、一方または両方が、独立して、１つ以上の異なるヌクレオシド修飾を含有してもよい。そのような実施形態では、ヌクレオシド修飾は、コード領域にも存在してもよい。
本開示のｍｍＲＮＡに存在し得るヌクレオシド修飾及びそれらの組み合わせの例として、ＰＣＴ特許出願公開：第ＷＯ２０１２０４５０７５号、第ＷＯ２０１４０８１５０７号、第ＷＯ２０１４０９３９２４号、第ＷＯ２０１４１６４２５３号、及び第ＷＯ２０１４１５９８１３号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合への修飾の組み合わせを含むことができる。これらの組み合わせは、本明細書に記載の任意の１つ以上の修飾を含むことができる。
修飾ヌクレオシド及び修飾ヌクレオシドの組み合わせの例を以下の表１７及び表１８に示す。修飾ヌクレオチドのこれらの組み合わせを使用して、本開示のｍｍＲＮＡを形成することができる。ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドによって、本開示のｍＲＮＡの天然ヌクレオチドが部分的にまたは完全に置換されてもよい。非限定的な例として、天然のヌクレオチドウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドで置換されてもよい。別の非限定的な例では、天然のヌクレオシドウリジンは、本明細書に開示のヌクレオシドの少なくとも１つで部分的に置換されてもよい（例えば、天然のウリジンの約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９．９％）。
本開示によれば、本開示のポリヌクレオチドは、表１７または表１８の組み合わせまたは単一の修飾を含むように合成することができる。
単一の修飾が記載されている場合、記載されたヌクレオシドまたはヌクレオチドは、修飾されているそのＡ、Ｕ、ＧまたはＣヌクレオチドまたはヌクレオシドの１００パーセントを占める。百分率が記載されている場合、これらは、存在するＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ三リン酸の総量に対するその特定のＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ核酸塩基三リン酸の百分率を表す。例えば、２５％５－アミノアリル－ＣＴＰ＋７５％ＣＴＰ／２５％５－メトキシ－ＵＴＰ＋７５％ＵＴＰという組み合わせは、シトシン三リン酸の２５％が５－アミノアリル－ＣＴＰであり、かつシトシンの７５％がＣＴＰであり、その一方で、ウラシルの２５％が５－メトキシＵＴＰであり、かつウラシルの７５％がＵＴＰであるポリヌクレオチドを指す。修飾されるＵＴＰが記載されていない場合は、ポリヌクレオチドに見出されるヌクレオチドの部位の１００％に天然に存在するＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、及び／またはＣＴＰが使用される。この例では、ＧＴＰ及びＡＴＰヌクレオチドはすべて修飾されないままである。
本開示のｍＲＮＡまたはその領域は、コドン最適化されてもよい。コドン最適化法は、当技術分野で公知であり、以下の種々の目的に有用であり得る：宿主生物におけるコドン頻度を一致させて適切な折り畳みを確保すること、ＧＣ含量を偏らせてｍＲＮＡの安定性を増大させるか、もしくは二次構造を低減させること、遺伝子構築もしくは発現を損なうおそれがあるタンデムリピートコドンもしくは塩基ランを最小化すること、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去すること、コードされたタンパク質中の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加すること、タンパク質ドメインを付加、除去もしくはシャッフルすること、制限部位を挿入するかもしくは欠失させること、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、翻訳速度を調整してタンパク質の様々なドメインの適切な折り畳みを可能にすること、またはポリヌクレオチド内の問題の二次構造を低減するかもしくは排除すること。コドン最適化ツール、アルゴリズム、及びサービスは、当技術分野で公知であり、非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）からのサービス、及び／または独自方法が挙げられる。一実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、例えば、哺乳動物細胞における発現を最適化するため、またはｍＲＮＡの安定性を強化するために、最適化アルゴリズムを使用して最適化される。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。
本開示のｍＲＮＡは、当技術分野で利用可能な手段によって生成されてもよく、こうしたものとして、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）及び合成法が挙げられるが、これらに限定されない。酵素（ＩＶＴ）合成法、固相合成法、液相合成法、組み合わせた合成法、小領域合成法、及びライゲーション法が利用されてもよい。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＶＴ酵素合成法を使用して作製される。ＩＶＴによってポリヌクレオチドを作製する方法は当技術分野で公知であり、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。したがって、本開示はまた、本明細書に記載のｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏで転写するのに使用することができるポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、構築物、及びベクターを含む。
非天然の修飾核酸塩基は、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡに、合成中または合成後に導入されてもよい。ある種の実施形態では、修飾は、ヌクレオチド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖に存在してもよい。特定の実施形態では、修飾は、またはポリヌクレオチド鎖の末端または鎖の他のいずれかの場所で、化学合成またはポリメラーゼ酵素で導入されてもよい。修飾核酸及びそれらの合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成は、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９－１３４（１９９８）にも記載されている。
酵素的ライゲーション法または化学的ライゲーション法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはその領域を、標的化剤または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子などの異なる機能部分にコンジュゲートさせてもよい。ポリヌクレオチド及び修飾ポリヌクレオチドのコンジュゲートは、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５－１８７（１９９０）に概説されている。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、調節エレメント、例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化ｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内因性核酸結合分子の疑似受容体として作用するように操作された人工結合部位、ならびにそれらの組み合わせを含むことができる。幾つかの実施形態では、そのような調節エレメントを含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、「センサー配列」を含むと呼ばれる。センサー配列の非限定的な例は、米国公開第２０１４／０２００２６１号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）をさらに含む。ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含むまたは組み込むと、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）が、結果的にはそれらからコードされるポリペプチドが、天然に存在するｍｉＲＮＡの組織特異的及び／または細胞型特異的な発現に基づいて調節される。
ｍｉＲＮＡ、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に結合し、ポリヌクレオチドの安定性を低減させるか、またその翻訳を阻害することによって遺伝子発現を下方制御する、１９～２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位の領域内の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位または２～７位を含むことができる。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～８）を含むことができ、対応するｍｉＲＮＡ結合部位におけるシード相補的部位は、ｍｉＲＮＡの１位に対向するアデノシン（Ａ）に隣接する。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～７）を含むことができ、対応するｍｉＲＮＡ結合部位におけるシード相補的部位は、ｍｉＲＮＡの１位に対向するアデノシン（Ａ）に隣接する。例えば、Ｇｒｉｍｓｏｎ Ａ，Ｆａｒｈ ＫＫ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ－Ｅｎｇｅｌｅ Ｐ，Ｌｉｍ ＬＰ，Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ；ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．２００７ Ｊｕｌ ６；２７（１）：９１－１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングを行って、細胞または組織中のｍｉＲＮＡの存在または非存在を判断することができる。幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上のマイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ相補的配列、またはマイクロＲＮＡシード相補的配列を含む。そのような配列は、例えば、米国特許公開第ＵＳ２００５／０２６１２１８号及び米国特許公開第ＵＳ２００５／００５９００５号（それらの各々の内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に教示されているものなどの任意の公知のマイクロＲＮＡに対応することができ、例えば、それらに対する相補性を有することができる。
本明細書中で使用される場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」という用語は、核酸分子内、例えば、ＤＮＡ内あるいは５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含めたＲＮＡ転写物内の配列であって、ｍｉＲＮＡのすべてのまたはある領域に対して、ｍｉＲＮＡと相互作用する、会合する、または結合するのに十分な相補性を有する配列を指す。幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的のポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）をさらに含む。例示的な実施形態では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含む。
ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介性調節、例えば、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介性の翻訳抑制または分解を容易にするのに十分な程度の相補性を指す。本開示の例示的な態様では、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介性分解、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ誘導性ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介性の切断を容易にするのに十分な程度の相補性を指す。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９～２５ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、１９～２３ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列に対して相補性を有することができる。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部分のみ、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の全長の１、２、３、または４ヌクレオチド未満の部分に対して相補的であり得る。所望される調節がｍＲＮＡの分解である場合、十分なまたは完全な相補性（例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡの長さのすべてまたは相当な部分にわたる十分な相補性または完全な相補性）が好ましい。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列と相補性（例えば、部分的または完全な相補性）を有する配列を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列と完全な相補性を有する配列を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列と相補性（例えば、部分的または完全な相補性）を有する配列を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有する配列を含む。幾つかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ結合部位は、１、２、または３つのヌクレオチド置換、末端付加、及び／または切断を別にすれば、ｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有する。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同じ長さである。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方で、対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２ヌクレオチド短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方で、対応するマイクロＲＮＡより２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、それでも、１つ以上の該ｍｉＲＮＡ結合部位を組み込んだｍＲＮＡを分解したり、またはｍＲＮＡの翻訳を妨げたりすることが可能である。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ダイサーを含有する活性ＲＩＳＣの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の実施形態では、ＲＩＳＣ内の対応するｍｉＲＮＡへ該ｍｉＲＮＡ結合部位が結合すると、該ｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡが分解され、または該ｍＲＮＡの翻訳が妨げられる。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するので、該ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体は、該ｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を切断する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有するので、該ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体は、該ｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に不安定性を誘導する。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡに対して不十分な相補性を有するので、該ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体は、該ｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の転写を抑制する。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個の、対応するｍｉＲＮＡからのミスマッチを有する。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１個の連続したヌクレオチドに対して相補的な、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１個の連続したヌクレオチドをそれぞれ有する。
１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することによって、問題のｍｉＲＮＡが利用可能であれば、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、分解のための、または翻訳の低減のための標的とすることができる。これによって、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を送達したときのオフターゲット作用を低減させることができる。例えば、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）が組織または細胞に送達されるように意図されていないが、最終的には前記組織または細胞に行き着く場合、その組織または細胞内で豊富に存在するｍｉＲＮＡは、該ｍｉＲＮＡの１つ以上の結合部位が該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作導入されているならば、目的の遺伝子の発現を阻害することができる。
例えば、当業者であれば、１つ以上のｍｉＲを核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に含めることで、リンパ系細胞以外の細胞型での発現を最小化できることを理解するであろう。一実施形態では、ｍｉＲ１２２を使用することができる。別の実施形態では、ｍｉＲ１２６を使用することができる。さらに別の実施形態では、これらのｍｉＲまたは組み合わせの複数のコピーを使用することができる。
逆に、特定の組織でのタンパク質発現を増大させるために、ｍｉＲＮＡ結合部位を、それらが天然に存在する核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）配列から除去することができる。例えば、特定のｍｉＲＮＡの結合部位を核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）から除去して、該ｍｉＲＮＡを含有する組織または細胞におけるタンパク質発現を向上させることができる。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、特定の細胞、例えば、限定するものではないが、正常細胞及び／またはがん細胞に対して細胞障害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、特定の細胞、例えば、限定するものではないが、正常細胞及び／またはがん細胞に対して細胞障害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。
複数の組織における発現の調節は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、１つ以上の別個のｍｉＲＮＡ結合部位の導入または除去によって達成することができる。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去するか挿入するかの判断は、発生及び／または疾患における組織及び／または細胞におけるｍｉＲＮＡの発現パターン及び／またはそれらのプロファイリングに基づいて行うことができる。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ならびにそれらの発現パターン及び生物学における役割の特定が報告されている（例えば、Ｂｏｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２０１０ １１：９４３－９４９；Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１－１７６；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ａｎｄ Ｒａｏ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１２ ２６：４０４－４１３（２０１１ Ｄｅｃ ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；Ｂａｒｔｅｌ Ｃｅｌｌ ２００９ １３６：２１５－２３３；Ｌａｎｄｇｒａｆ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，２００７ １２９：１４０１－１４１４；Ｇｅｎｔｎｅｒ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２ ８０：３９３－４０３、及びそれらの中のすべての参考文献（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。
ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、米国公開第２０１４／０２００２６１号、第２００５／０２６１２１８号、及び第２００５／００５９００５号（それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている非限定的な例を含めて、任意の公知の配列に対応することができる。ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを調節し、それによってタンパク質発現を調節することが公知である組織の例として、肝臓（ｍｉＲ－１２２）、筋肉（ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２７）、脂肪組織（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ－１ｄ、ｍｉＲ－１４９）、腎臓（ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１２６）が挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、ｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、または肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ））または脾細胞（例えば、脾実質細胞）において差次的に発現されることが公知である。標的細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染に対する免疫応答、炎症、ならびに遺伝子療法及び組織／臓器移植後の望ましくない免疫応答に関与している。標的細胞特異的ｍｉＲＮＡは、造血細胞（標的細胞）の発生、増殖、分化、及びアポトーシスの多くの側面も調節する。
一実施形態では、特に、標的細胞で発現することが公知であるｍｉＲＮＡの結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入して、ｍｉＲＮＡ媒介性のＲＮＡ分解を通して標的細胞における核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を抑制することができる。核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現は、標的細胞特異的ｍｉＲＮＡが発現されない非標的細胞において維持される。例えば、幾つかの実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性反応を防ぐために、任意のｍｉＲ－１２２結合部位を除去することができ、ｍｉＲ－１４２（及び／またはｍｉｒＲ－１４６）結合部位を本開示の核酸分子の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作導入することができる。
標的細胞における選択的分解ならびに抑制をさらに促進するために、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにさらなる負の調節エレメントを単独でまたはｍｉＲ結合部位と組み合わせて含むことができる。非限定的な例として、さらなる負の調節エレメントは、Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ｄｅｃａｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ（ＣＤＥ）である。
肝臓で発現することが公知である肝臓標的細胞特異的ｍｉＲＮＡとして、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１２２－３ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２２８－５ｐ、ｍｉＲ－１２４９、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１３０３、ｍｉＲ－１５１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１９４－３ｐ、ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－５５７、ｍｉＲ－５８１、ｍｉＲ－９３９－３ｐ、及びｍｉＲ－９３９－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。任意の肝臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、肝臓での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。一実施形態では、肝実質細胞によるｍＲＮＡの分解を促進するｍｉＲＮＡ結合部位がｍＲＮＡ分子剤に存在する。
肺で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－１２７－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３４、ｍｉＲ－１８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１８ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２４－１－５ｐ、ｍｉＲ－２４－２－５ｐ、ｍｉＲ－２４－３ｐ、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－３２－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－５ｐ、ｍｉＲ－３８１－３ｐ、及びｍｉＲ－３８１－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。任意の肺特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、肺での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。肺特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
心臓で発現することが公知であるｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１４９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－５ｐ、ｍｉＲ－１８６－３ｐ、ｍｉＲ－１８６－５ｐ、ｍｉＲ－２０８ａ、ｍｉＲ－２０８ｂ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－３２０、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－４５１ｂ、ｍｉＲ－４９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－７４４－３ｐ、ｍｉＲ－７４４－５ｐ、ｍｉＲ－９２ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９２ｂ－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。任意の心臓特異的マイクロＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、心臓での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。心臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
神経系で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｍｉＲ－１２４－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２７１－３ｐ、ｍｉＲ－１２７１－５ｐ、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－１３２－５ｐ、ｍｉＲ－１３５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１３５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｍｉＲ－１３９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－５ｐ、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１８１ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－１８１ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１８３－３ｐ、ｍｉＲ－１８３－５ｐ、ｍｉＲ－１９０ａ、ｍｉＲ－１９０ｂ、ｍｉＲ－２１２－３ｐ、ｍｉＲ－２１２－５ｐ、ｍｉＲ－２１９－１－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－２－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－１－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－２－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３２９、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－３６６５、ｍｉＲ－３６６６、ｍｉＲ－３８０－３ｐ、ｍｉＲ－３８０－５ｐ、ｍｉＲ－３８３、ｍｉＲ－４１０、ｍｉＲ－４２５－３ｐ、ｍｉＲ－４２５－５ｐ、ｍｉＲ－４５４－３ｐ、ｍｉＲ－４５４－５ｐ、ｍｉＲ－４８３、ｍｉＲ－５１０、ｍｉＲ－５１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５７１、ｍｉＲ－７－１－３ｐ、ｍｉＲ－７－２－３ｐ、ｍｉＲ－７－５ｐ、ｍｉＲ－８０２、ｍｉＲ－９２２、ｍｉＲ－９－３ｐ、及びｍｉＲ－９－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。神経系に豊富なｍｉＲＮＡには、ニューロンに特異的に発現するもの（ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１４８ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１２－３ｐ、ｍｉＲ－２１２－５ｐ、ｍｉＲ－３２０ｂ、ｍｉＲ－３２０ｅ、ｍｉＲ－３２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３２４－５ｐ、ｍｉＲ－３２５、ｍｉＲ－３２６、ｍｉＲ－３２８、ｍｉＲ－９２２が挙げられるが、これらに限定されない）、及びグリア細胞に特異的に発現するもの（ｍｉＲ－１２５０、ｍｉＲ－２１９－１－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－２－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－５ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０６５－３ｐ、ｍｉＲ－３０６５－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－３２－５ｐ、ｍｉＲ－３３８－５ｐ、及びｍｉＲ－６５７が挙げられるが、これらに限定されない）がさらに含まれる。任意のＣＮＳ特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、神経系での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。神経系特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
膵臓で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｍｉＲ－１０５－３ｐ、ｍｉＲ－１０５－５ｐ、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－１９５－３ｐ、ｍｉＲ－１９５－５ｐ、ｍｉＲ－１９６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－５ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－７－１－３ｐ、ｍｉＲ－７－２－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－５ｐ、及びｍｉＲ－９４４が挙げられるが、これらに限定されない。任意の脾臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、脾臓での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。脾臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
腎臓で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｍｉＲ－１２２－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１９２－３ｐ、ｍｉＲ－１９２－５ｐ、ｍｉＲ－１９４－３ｐ、ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２０４－３ｐ、ｍｉＲ－２０４－５ｐ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－１－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－２－３ｐ、ｍｉＲ３０ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３２４－３ｐ、ｍｉＲ－３３５－３ｐ、ｍｉＲ－３３５－５ｐ、ｍｉＲ－３６３－３ｐ、ｍｉＲ－３６３－５ｐ、及びｍｉＲ－５６２が挙げられるが、これらに限定されない。任意の腎臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、腎臓での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。腎臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
筋肉で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｌｅｔ－７ｇ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１２８６、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１８８－３ｐ、ｍｉＲ－１８８－５ｐ、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８ａ、ｍｉＲ－２０８ｂ、ｍｉＲ－２５－３ｐ、及びｍｉＲ－２５－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。任意の筋肉特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、筋肉での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。筋肉特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独でまたは標的細胞（例えば、肝細胞または脾細胞）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作導入することができる。
ｍｉＲＮＡは、限定するものではないが、内皮細胞、上皮細胞、及び脂肪細胞などの、異なる型の細胞でも差次的に発現する。
内皮細胞で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｌｅｔ－７ｂ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１００－３ｐ、ｍｉＲ－１００－５ｐ、ｍｉＲ－１０１－３ｐ、ｍｉＲ－１０１－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｍｉＲ－１２３６－３ｐ、ｍｉＲ－１２３６－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１７－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－１－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－２－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－２２１－３ｐ、ｍｉＲ－２２１－５ｐ、ｍｉＲ－２２２－３ｐ、ｍｉＲ－２２２－５ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－３６１－３ｐ、ｍｉＲ－３６１－５ｐ、ｍｉＲ－４２１、ｍｉＲ－４２４－３ｐ、ｍｉＲ－４２４－５ｐ、ｍｉＲ－５１３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－１－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－２－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－９２ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９２ｂ－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。内皮細胞では多くの新規なｍｉＲＮＡがディープシーケンシング分析から発見されている（例えば、Ｖｏｅｌｌｅｎｋｌｅ Ｃ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２０１２，１８，４７２－４８４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。任意の内皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、内皮細胞での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。
上皮細胞で発現することが公知であるｍｉＲＮＡとして、ｌ呼吸器線毛上皮細胞に特異的なｌｅｔ－７ｂ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４６、ｍｉＲ－２００ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－４５１ｂ、ｍｉＲ－４９４、ｍｉＲ－８０２、及びｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４４９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４４９ｂ－５ｐ、肺上皮細胞に特異的なｌｅｔ－７ファミリー、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１２６、腎上皮細胞に特異的なｍｉＲ－３８２－３ｐ、ｍｉＲ－３８２－５ｐ、ならびに角膜上皮細胞に特異的なｍｉＲ－７６２が挙げられるが、これらに限定されない。任意の上皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に導入してまたはそこから除去して、上皮細胞での核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。
加えて、大きな群のｍｉＲＮＡが胚性幹細胞に豊富であり、幹細胞の自己再生ならびに様々な細胞系統、例えば、神経細胞、心臓、造血細胞、皮膚細胞、骨形成細胞、及び筋細胞の発生及び／または分化を制御している（例えば、Ｋｕｐｐｕｓａｍｙ ＫＴ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．ｍｏｌ Ｍｅｄ，２０１３，１３（５），７５７－７６４；Ｖｉｄｉｇａｌ ＪＡ ａｎｄ Ｖｅｎｔｕｒａ Ａ，Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．２０１２，２２（５－６），４２８－４３６；Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９， ４：ｅ７１９２；Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８，６１０－６２１；Ｙｏｏ ＪＫ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ．２０１２， ２１（１１），２０４９－２０５７（それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。胚性幹細胞に豊富に存在するｍｉＲＮＡとして、ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｌｅｔ－ａ－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－５ｐ、ｌｅｔ７ｄ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－１０３ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１０３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１０６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４６、ｍｉＲ－１２７５、ｍｉＲ－１３８－１－３ｐ、ｍｉＲ－１３８－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３８－５ｐ、ｍｉＲ－１５４－３ｐ、ｍｉＲ－１５４－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９０、ｍｉＲ－３０１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｅ、ｍｉＲ－３６７－３ｐ、ｍｉＲ－３６７－５ｐ、ｍｉＲ－３６９－３ｐ、ｍｉＲ－３６９－５ｐ、ｍｉＲ－３７０、ｍｉＲ－３７１、ｍｉＲ－３７３、ｍｉＲ－３８０－５ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐ、ｍｉＲ－４２３－５ｐ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－５２０ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｅ、ｍｉＲ－５４８ｆ、ｍｉＲ－５４８ｇ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｉ、ｍｉＲ－５４８ｋ、ｍｉＲ－５４８ｌ、ｍｉＲ－５４８ｍ、ｍｉＲ－５４８ｎ、ｍｉＲ－５４８ｏ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｏ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｐ、ｍｉＲ－６６４ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６６４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６６４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－６６４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－７６６－３ｐ、ｍｉＲ－７６６－５ｐ、ｍｉＲ－８８５－３ｐ、ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｍｉＲ－９３－３ｐ、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－９４１，ｍｉＲ－９６－３ｐ、ｍｉＲ－９６－５ｐ、ｍｉＲ－９９ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９９ｂ－５ｐが挙げられるが、これらに限定されない。多くの予測される新規なｍｉＲＮＡは、ヒト胚性幹細胞のディープシーケンシングによって発見されている（例えば、Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８，６１０－６２１；Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９，４：ｅ７１９２；Ｂａｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，２００８，２６，２４９６－２５０５（それらの各々の内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。
幾つかの実施形態では、胚性幹細胞特異的ｍｉＲＮＡの結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに含めてまたはそこから除去して、胚性幹細胞の発生及び／または分化を調節するか、変性状態（例えば、変性疾患）での幹細胞の老化を阻害するか、あるいは疾患状態（例えば、がん幹細胞）での幹細胞の老化及びアポトーシスを刺激することができる。
様々ながん細胞／組織及び他の疾患におけるｍｉＲＮＡの差次的発現をプロファイルするために、多くのｍｉＲＮＡ発現研究が行われている。あるｍｉＲＮＡはある特定のがん細胞で異常に過剰発現されており、他のものは過少発現されている。例えば、ｍｉＲＮＡは、がん細胞（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＵＳ２０１３／００５９０１５、ＵＳ２０１３／００４２３３３、ＷＯ２０１１／１５７２９４）；がん幹細胞（ＵＳ２０１２／００５３２２４）；膵臓のがん及び疾患（ＵＳ２００９／０１３１３４８、ＵＳ２０１１／０１７１６４６、ＵＳ２０１０／０２８６２３２、ＵＳ８３８９２１０）；喘息及び炎症（ＵＳ８４１５０９６）；前立腺癌（ＵＳ２０１３／００５３２６４）；肝細胞癌（ＷＯ２０１２／１５１２１２、ＵＳ２０１２／０３２９６７２、ＷＯ２００８／０５４８２８、ＵＳ８２５２５３８）；肺癌細胞（ＷＯ２０１１／０７６１４３、ＷＯ２０１３／０３３６４０、ＷＯ２００９／０７０６５３、ＵＳ２０１０／０３２３３５７）；皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＷＯ２０１３／０１１３７８）；結腸直腸癌細胞（ＷＯ２０１１／０２８１７５６、ＷＯ２０１１／０７６１４２）；がん陽性リンパ節（ＷＯ２００９／１００４３０、ＵＳ２００９／０２６３８０３）；上咽頭癌（ＥＰ２１１２２３５）；慢性閉塞性肺疾患（ＵＳ２０１２／０２６４６２６、ＵＳ２０１３／００５３２６３）；甲状腺癌（ＷＯ２０１３／０６６６７８）；卵巣癌細胞（ＵＳ２０１２／０３０９６４５、ＷＯ２０１１／０９５６２３）；乳癌細胞（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＷＯ２００７／０８１７４０、ＵＳ２０１２／０２１４６９９）、白血病及びリンパ腫（ＷＯ２００８／０７３９１５、ＵＳ２００９／００９２９７４、ＵＳ２０１２／０３１６０８１、ＵＳ２０１２／０２８３３１０、ＷＯ２０１０／０１８５６３）（それらの各々の内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）において差次的に発現される。
非限定的な例として、特定のがん及び／または腫瘍細胞において過剰発現されるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲから除去して、がん細胞において過剰発現されたｍｉＲＮＡによって抑制された発現を回復させ、これによって、対応する生物学的機能、例えば、転写刺激及び／または抑制、細胞周期停止、アポトーシスならびに細胞死を改善する。ｍｉＲＮＡの発現が上方制御されていない正常な細胞及び組織は影響を受けないままである。
ｍｉＲＮＡは、血管新生などの複雑な生物学的プロセスを制御することもできる（例えば、ｍｉＲ－１３２）（Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１－１７６）。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）において、そのようなプロセスに関与するｍｉＲＮＡ結合部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を生物学的に関連する細胞型または関連する生物学的プロセスに合わせるために除去されても、または導入されてもよい。これに関連して、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、栄養要求性ポリヌクレオチドとして定義される。
幾つかの実施形態では、本開示のポリペプチドの治療ウィンドウ及び／または差次的発現（例えば、組織特異的発現）は、該ポリペプチドをコードするｍＲＮＡにｍｉＲＮＡ結合部位を組み込むことによって改変されてもよい。一例では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ある組織型において別の組織型と比較したときに高く発現するｍｉＲＮＡによって結合される１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでもよい。別の例では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、がん細胞において、同じ組織を起源とする非がん性細胞と比較したときに低く発現するｍｉＲＮＡによって結合される１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでもよい。そのような低レベルのｍｉＲＮＡを発現するがん細胞に存在する場合、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）によってコードされるポリペプチドは、典型的には、増大された発現を示すこととなる。
肝癌細胞（例えば、肝細胞癌細胞）は、典型的には、正常な肝細胞と比較したときに、低レベルのｍｉＲ－１２２を発現する。したがって、少なくとも１つのｍｉＲ－１２２結合部位を含むポリペプチド（例えば、ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲ内）をコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、典型的には、正常な肝細胞では比較的低レベルのポリペプチドを発現し、肝癌細胞では比較的高レベルのポリペプチドを発現することとなる。ポリペプチドが免疫原性細胞死を誘導することが可能であるならば、これは、正常な肝細胞と比較したときに、肝臓癌細胞（例えば、肝細胞癌細胞）の優先的な免疫原性細胞死滅を誘導することができる。
幾つかの実施形態では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、少なくとも１つのｍｉＲ－１２２結合部位、少なくとも２つのｍｉＲ－１２２結合部位、少なくとも３つのｍｉＲ－１２２結合部位、少なくとも４つのｍｉＲ－１２２結合部位、または少なくとも５つのｍｉＲ－１２２結合部位を含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１２２に結合するか、またはｍｉＲ－１２２に相補的である。別の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１２２－３ｐまたはｍｉＲ－１２２－５ｐに結合する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号７５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１２２に結合する。別の特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号７３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１２２に結合する。これらの配列は、以降の表１９に示す。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、表１９から選択される１つ以上のヌクレオチド配列を含み、これには、該ｍｉＲＮＡ結合部位配列の任意の１つ以上の１つ以上のコピーが含まれる。幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、表１９から選択される同じまたは異なるｍｉＲＮＡ結合部位の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上を、それらの任意の組み合わせを含めてさらに含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１４２に結合するか、またはｍｉＲ－１４２に相補的である。幾つかの実施形態では、ｍｉＲ－１４２は、配列番号６６を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１４２－３ｐまたはｍｉＲ－１４２－５ｐに結合する。幾つかの実施形態では、ｍｉＲ－１４２－３ｐは、配列番号６８を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲ－１４２－５ｐは、配列番号７０を含む。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号６８または配列番号７０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の任意の位置（例えば、５’及び／または３’ＵＴＲ）に挿入される。幾つかの実施形態では、５’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。幾つかの実施形態では、３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。幾つかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の挿入部位は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入が、対応するｍｉＲＮＡの非存在下で機能的ポリペプチドの翻訳を妨害しない限り、また、ｍｉＲＮＡの存在下では、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入及び対応するｍｉＲＮＡへｍｉＲＮＡ結合部位の結合が、ポリヌクレオチドを分解することまたは該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の翻訳を妨げることが可能な限り、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）内のどこであってもよい。
幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ＯＲＦを含む本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）における該ＯＲＦの終止コドンから少なくとも約３０ヌクレオチド下流に挿入される。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のポリヌクレオチドにおけるＯＲＦの終止コドンから少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約３５ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約４５ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約５５ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約６５ヌクレオチド、少なくとも約７０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流に挿入される。幾つかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）におけるＯＲＦの終止コドンから約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド～約９０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド～約８０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド～約７０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド～約６０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド～約６５ヌクレオチド下流に挿入される。
ｍｉＲＮＡ遺伝子の調節は、ｍｉＲＮＡの周囲の配列によって影響を受けることがあり、そうしたものには、限定するものではないが、周囲の配列の種、配列の型（例えば、異種、同種、外因性、内因性、または人工）、周囲の配列における調節エレメント及び／または該周囲の配列における構造エレメントなどがある。ｍｉＲＮＡは、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲの影響を受けることがある。非限定的な例として、非ヒト３’ＵＴＲは、同じ配列型のヒト３’ＵＴＲと比較して、目的のポリペプチドの発現に及ぼすｍｉＲＮＡ配列の調節効果を増大させることができる。
一実施形態では、５’ＵＴＲの他の調節エレメント及び／または構造エレメントは、ｍｉＲＮＡ媒介性の遺伝子調節に影響を与えることがある。調節エレメント及び／または構造エレメントの一例は、５’ＵＴＲ内の構造化ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）であり、これは、翻訳伸長因子が結合してタンパク質翻訳を開始するのに必要である。５’ＵＴＲ内のこの二次的構造化エレメントにＥＩＦ４Ａ２が結合することがｍｉＲＮＡ媒介性の遺伝子発現に必要である（Ｍｅｉｊｅｒ ＨＡ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４０，８２－８５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、マイクロＲＮＡ媒介性の遺伝子調節を強化するために、この構造化５’ＵＴＲをさらに含むことができる。
少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のポリヌクレオチドの３’ＵＴＲに操作導入されてもよい。これに関して、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０個、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに操作導入することができる。例えば、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、２、または１個のｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに操作導入することができる。一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、同じｍｉＲＮＡ部位であっても、または異なるｍｉＲＮＡ部位であってもよい。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれる異なるｍｉＲＮＡ結合部位の組み合わせは、異なるｍｉＲＮＡ部位のいずれかの複数のコピーが組み込まれる組み合わせを含むことができる。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、体内の同じ組織を標的にしても、または異なる組織を標的にしてもよい。非限定的な例として、組織特異的、細胞型特異的、または疾患特異的なｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を３’ＵＴＲに導入することを通して、特定の細胞型（例えば、肝実質細胞、骨髄細胞、内皮細胞、がん細胞など）での発現の程度を低減させることができる。
一実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲの５’末端付近、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間、及び／または３’ＵＴＲの３’末端付近に操作導入することができる。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの５’末端付近、及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間に操作導入することができる。別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの３’末端付近、及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間に操作導入することができる。さらに別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの５’末端付近、及び３’ＵＴＲの３’末端付近に操作導入することができる。
別の実施形態では、３’ＵＴＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡのシード配列、及び／または該シード配列に隣接するｍｉＲＮＡ配列に相補的であり得る。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、対象の異なる組織または異なる細胞型で発現される複数のｍｉＲＮＡ部位を含むように操作することができる。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｍｉＲ－１９２及びｍｉＲ－１２２を含むように操作して、対象の肝臓及び腎臓における該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を調節することができる。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、同じ組織に対する複数のｍｉＲＮＡ部位を含むように操作することができる。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）によってコードされるポリペプチドに関連する治療ウィンドウ及び／または差次的発現を、ｍｉＲＮＡ結合部位で改変することができる。例えば、死のシグナルを提供するポリペプチドをコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、それらの細胞のｍｉＲＮＡ調節（ｍｉＲＮＡ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ）によって、がん細胞においてより高度に発現されるように設計することができる。がん細胞が特定のｍｉＲＮＡをより低いレベルで発現する場合、そのｍｉＲＮＡ（または複数のｍｉＲＮＡ）の結合部位をコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、より高度に発現されることになる。したがって、死のシグナルを提供するポリペプチドは、がん細胞の細胞死を誘因または誘導する。同じｍｉＲＮＡをより多く発現している近隣の非がん細胞は、３’ＵＴＲにコードされた結合部位へのｍｉＲＮＡの結合または「センサー」の効果によってポリヌクレオチドがより低いレベルで発現することになるために、コードされた死のシグナルの影響が少なくなることとなる。逆に、がん細胞の方がｍｉＲＮＡを高く発現している場合、がん細胞及び非がん細胞を含有する組織に細胞生存または細胞保護シグナルを送達することができ、結果的に、がん細胞への生存シグナルは低くなり、正常細胞への生存シグナルは大きくなる。本明細書に記載されるようなｍｉＲＮＡ結合部位の使用に基づいて、異なるシグナルを有するように複数の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を設計し、投与してもよい。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現は、該ポリヌクレオチドに少なくとも１つのセンサー配列を組み込み、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を投与用に製剤化することによって制御することができる。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ｍｉＲＮＡ結合部位を組み込み、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、本明細書に記載の脂質のいずれかを含めたカチオン性脂質を含む脂質ナノ粒子中に製剤化することによって、組織または細胞を標的とすることができる。
本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、異なる組織、細胞型、または生物学的条件におけるｍｉＲＮＡの発現パターンに基づいて、特定の組織、細胞型、または生物学的条件における、より標的化された発現のために操作することができる。組織特異的なｍｉＲＮＡ結合部位の導入を通して、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、組織または細胞において、または生物学的条件に関連して最適なタンパク質発現のために設計することができる。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、公知のｍｉＲＮＡのシード配列に対して１００％の同一性を有するか、またはｍｉＲＮＡのシード配列に対して１００％未満の同一性を有するｍｉＲＮＡ結合部位を組み込むように設計することができる。幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、公知のｍｉＲＮＡのシード配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するｍｉＲＮＡ結合部位を組み込むように設計することができる。ｍｉＲＮＡシード配列は、ｍｉＲＮＡ結合親和性を減少させるように、したがって核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の抑制的調節の低減をもたらすように部分的に変異させることができる。本質的に、ｍｉＲＮＡ結合部位とｍｉＲＮＡのシードとの間のマッチまたはミスマッチの程度は、ｍｉＲＮＡがタンパク質発現を調節する能力をより細かく調整するためのレオスタットとしての機能を果たすことができる。加えて、ｍｉＲＮＡ結合部位の非シード領域の変異も、タンパク質発現を調節するｍｉＲＮＡの能力に影響を与え得る。
一実施形態では、ｍｉＲＮＡ配列をステムループのループに組み込むことができる。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡシード配列をステムループのループに組み込むことができ、ｍｉＲＮＡ結合部位を該ステムループの５’または３’ステムに組み込むことができる。
一実施形態では、翻訳エンハンサーエレメント（ＴＥＥ）をステムループのステムの５’末端に組み込むことができ、ｍｉＲＮＡシードをステムループのステムに組み込むことができる。別の実施形態では、ＴＥＥをステムループのステムの５’末端に組み込むことができ、ｍｉＲＮＡシードをステムループのステムに組み込むことができ、ｍｉＲＮＡ結合部位をステムの３’末端またはステムループの後の配列に組み込むことができる。ｍｉＲＮＡシード及びｍｉＲＮＡ結合部位は、同じ及び／または異なるｍｉＲＮＡ配列に対するものであり得る。
一実施形態では、ｍｉＲＮＡ配列及び／またはＴＥＥ配列を組み込むと、ステムループ領域の形状が変化し、それによって翻訳が増大及び／または減少し得る。（例えば、Ｋｅｄｄｅ ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｐｕｍｉｌｉｏ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＲＮＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｓｗｉｔｃｈ ｉｎ ｐ２７－３’ＵＴＲ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｍｉＲ－２２１ ａｎｄ ｍｉＲ－２２ ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’－ＵＴＲは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ配列を含むことができる。ｍｉＲＮＡ配列は、限定するものではないが、１９または２２ヌクレオチド配列及び／またはシードを含まないｍｉＲＮＡ配列であり得る。
一実施形態では、５’ＵＴＲ内のｍｉＲＮＡ配列を使用して、本明細書に記載の本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を安定化することができる。
別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のｍｉＲＮＡ配列を使用して、開始翻訳部位、例えば、限定するものではないが、開始コドンのアクセシビリティを減少させることができる。例えば、Ｍａｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． ２０１０ １１（５）：ｅ１５０５７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。これは、最初の開始コドン（ＡＵＧ）へのアクセシビリティを減少させるために、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチド及びエキソン接合複合体（ＥＪＣ）を開始コドン（－４～＋３７、ここでは、ＡＵＧコドンのＡが＋１）の周りに使用した。Ｍａｔｓｕｄａは、開始コドンの周りの配列をＬＮＡまたはＥＪＣで改変すると、ポリヌクレオチドの効率、長さ、及び構造安定性が影響を受けることを示した。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、翻訳開始部位へのアクセシビリティを減少させるために、Ｍａｔｓｕｄａらによって記載されたＬＮＡまたはＥＪＣ配列の代わりに、翻訳開始部位付近にｍｉＲＮＡ配列を含むことができる。翻訳開始部位は、ｍｉＲＮＡ配列の前、後、または中にあり得る。非限定的な例として、翻訳開始部位は、ｍｉＲＮＡ配列内、例えば、シード配列または結合部位に位置し得る。別の非限定的な例として、翻訳開始部位は、ｍｉＲ－１２２配列内、例えば、シード配列またはｍｉｒ－１２２結合部位に位置し得る。幾つかの実施形態において、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、抗原提示細胞による抗原提示を減弱させるために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含むことができる。ｍｉＲＮＡは、完全なｍｉＲＮＡ配列、ｍｉＲＮＡシード配列、シードを含まないｍｉＲＮＡ配列、またはそれらの組み合わせであり得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡは、造血系に特異的であり得る。別の非限定的な例として、抗原提示を減弱させるために本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１４２－３ｐである。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的の組織または細胞におけるコードされたポリペプチドの発現を減弱させるために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含むことができる。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、肝臓における目的のコードされたポリペプチドの発現を減弱させるために、少なくとも１つのｍｉＲ－１２２結合部位を含むことができる。別の非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、少なくとも１つのｍｉＲ－１４２－３ｐ結合部位、ｍｉＲ－１４２－３ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ－１４２－３ｐ結合部位、ｍｉＲ－１４２－５ｐ結合部位、ｍｉＲ－１４２－５ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ－１４２－５ｐ結合部位、ｍｉＲ－１４６結合部位、ｍｉＲ－１４６シード配列、及び／またはシード配列を含まないｍｉＲ－１４６結合部位を含むことができる。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、標的細胞におけるｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解して治療的送達によって引き起こされる望ましくない免疫原性反応を抑えるために、３’ＵＴＲに少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を、抗原提示細胞においてより不安定にすることができる。これらのｍｉＲＮＡの非限定的な例として、ｍｉｒ－１４２－５ｐ、ｍｉｒ－１４２－３ｐ、ｍｉｒ－１４６ａ－５ｐ、及びｍｉｒ－１４６－３ｐが挙げられる。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、ＲＮＡ結合タンパク質と相互作用することができる該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の領域内の少なくとも１つのｍｉＲＮＡ配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、（ｉ）配列最適化ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）及び（ｉｉ）ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ－１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位）を含む。
幾つかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、本明細書に開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列、及び本明細書に開示のｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ－１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位を含む。幾つかの実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列は、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、例えば、５－メトキシウラシルを含む。幾つかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列におけるある型の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。幾つかの実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列中のウラシルの少なくとも９５％は、５－メトキシウリジンである。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のポリペプチド及びｍｉＲＮＡ結合部位をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、送達剤、例えば、式（Ｉ）を有する化合物、例えば、化合物１～１４７のいずれかと共に製剤化される。
機能性ＲＮＡエレメントを含む修飾ＲＮＡ分子
本開示は、修飾（例えば、ＲＮＡエレメント）を含む合成核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、修飾は、所望の翻訳調節活性を与える。幾つかの実施形態では、本開示は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、開始コドン、ポリペプチドをコードする完全なオープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの修飾を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、所望の翻訳調節活性を与え、例えば、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または強化する修飾を与える。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、シス作用性調節活性である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンでの、または開始コドンの近位での、４３Ｓ前開始複合体（ＰＩＣ）またはリボソームの滞留時間の延長である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンでの、または開始コドンからのポリペプチド合成の開始の増大である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、完全なオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の増大である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドン解読の忠実度の増大である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる読み漏らしの阻害または低減である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドンの解読速度の減少である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドン以外のｍＲＮＡ内の任意のコドンでのポリペプチド合成の開始の阻害または低減である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、完全なオープンリーディングフレーム以外の、ｍＲＮＡ内の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の阻害または低減である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、異常な翻訳産物の産生の阻害または低減である。幾つかの実施形態では、所望の翻訳調節活性は、前述の翻訳調節活性の１つ以上の組み合わせである。
したがって、本開示は、本明細書に記載されるような所望の翻訳調節活性を与える配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。幾つかの態様では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または強化する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む、幾つかの態様では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、読み漏らしの阻害及び／または低減などの所望の翻訳調節活性を与える配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。幾つかの態様では、本開示は、読み漏らしを阻害及び／または低減し、それによって核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の翻訳忠実度を促進する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。
幾つかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、天然及び／または修飾ヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、本明細書に記載されるような所望の翻訳調節活性を与える、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体からなる。幾つかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、安定なＲＮＡ二次構造を形成するかまたは折り畳まれて安定なＲＮＡ二次構造となる、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該ＲＮＡ二次構造は、本明細書に記載されるような所望の翻訳調節活性を与える。ＲＮＡエレメントは、該エレメントの一次配列（例えば、ＧＣリッチなエレメント）に基づいて、該エレメントによって形成されるＲＮＡ二次構造（例えば、ステムループ）によって、ＲＮＡ分子内の該エレメントの位置（例えば、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に位置する）によって、該エレメントの生物学的機能及び／または活性（例えば、「翻訳エンハンサーエレメント」）によって、ならびにそれらの任意の組み合わせによって、特定及び／または特徴付けることができる。
幾つかの態様では、本開示は、開始コドンの読み漏らしを阻害する及び／または翻訳の翻訳忠実度を促進する１つ以上の構造的修飾を有する核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、該構造的修飾の少なくとも１つは、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。幾つかの態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。一実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の１５～３０、１５～２０、１５～２５、１０～１５、または５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置する。
幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、任意の順序で連結された３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該配列組成は、７０～８０％のシトシン、６０～７０％のシトシン、５０％～６０％のシトシン、４０～５０％のシトシン、３０～４０％のシトシン塩基である。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、任意の順序で連結された３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該配列組成は、約８０％のシトシン、約７０％のシトシン、約６０％のシトシン、約５０％のシトシン、約４０％のシトシン、または約３０％のシトシンである。
幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、任意の順序で連結された２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該配列組成は、７０～８０％のシトシン、６０～７０％のシトシン、５０％～６０％のシトシン、４０～５０％のシトシン、３０～４０％のシトシン塩基である。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、任意の順序で連結された２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該配列組成は、約８０％のシトシン、約７０％のシトシン、約６０％のシトシン、約５０％のシトシン、約４０％のシトシン、または約３０％のシトシンである。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントであり、該ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置し、該ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、任意の順序で連結された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、該配列組成は、＞５０％のシトシンである。幾つかの実施形態では、配列組成は、＞５５％のシトシン、＞６０％のシトシン、＞６５％のシトシン、＞７０％のシトシン、＞７５％のシトシン、＞８０％のシトシン、＞８５％のシトシン、または＞９０％のシトシンである。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントであり、該ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置し、該ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、約３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０、または約２０、約１５、約１２、約１０、約６、または約３個のヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、反復するＧＣモチーフは［ＣＣＧ］ｎであり、式中、ｎ＝１～１０、ｎ＝２～８、ｎ＝３～６、またはｎ＝４～５（配列番号１８０）である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、３、４または５（配列番号１８１）である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、または３である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝２である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝３である。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝４である（配列番号１７７）。幾つかの実施形態では、配列は、反復するＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝５である（配列番号１７８）。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントであり、該ＧＣリッチなエレメントは、表２０に記載の配列のいずれか１つを含む。一実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５～３０、１５～２０、１５～２５、１０～１５、または５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、表２０に記載の配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ］（配列番号８０）またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する、表２０に記載の配列Ｖ１を含む。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、表５に記載の配列Ｖ１を含む。他の実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する、表２０に記載の配列Ｖ１を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、表２０に記載の配列Ｖ２［ＣＣＣＣＧＧＣ］（配列番号８０）またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する、表２０に記載の配列Ｖ２を含む。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、表２０に記載の配列Ｖ２を含む。他の実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する、表２０に記載の配列Ｖ２を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、表２０に記載の配列ＥＫ［ＧＣＣＧＣＣ］またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する、表２０に記載の配列ＥＫを含む。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、表２０に記載の配列ＥＫを含む。他の実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する、表２０に記載の配列ＥＫを含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、該核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、表２０に記載の配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ］（配列番号８０）またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチなＲＮＡエレメントであり、該５’ＵＴＲは、表２０に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、表２０に示す５’ＵＴＲ配列内のコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する、表２０に記載の配列Ｖ１を含む。幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、表２０に記載の配列Ｖ１を含み、該５’ＵＴＲは、表２０に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
他の実施形態では、ＧＣリッチなエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する、表２０に記載の配列Ｖ１を含み、該５’ＵＴＲは、表２０に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
幾つかの実施形態では、５’ＵＴＲは、表２０に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号７８）
幾つかの実施形態では、５’ＵＴＲは、表２０に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７９）
幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヘアピンまたはステムループを形成する順序で連結されたヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含む安定なＲＮＡ二次構造を含む、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントである。幾つかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の上流にある。幾つかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置する。幾つかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置する。幾つかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約５、約４、約３、約２、約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約１５～３０、約１５～２０、約１５～２５、約１０～１５、または約５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の１２～１５ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、約－３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－２０～－３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－１０～－２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－５～１０ｋｃａｌ／ｍｏｌのデルタＧを有する。
幾つかの実施形態では、修飾は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームに作動可能に連結されており、修飾とオープンリーディングフレームは異種である。
幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなＲＮＡエレメントの配列は、グアニン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）核酸塩基のみからなる。
本明細書に記載されるような所望の翻訳調節活性を与えるＲＮＡエレメントは、リボソームプロファイリングなどの公知の技術を使用して同定し、特徴付けることができる。リボソームプロファイリングは、ｍＲＮＡに結合したＰＩＣ及び／またはリボソームの位置を決定することができる技術である（例えば、Ｉｎｇｏｌｉａ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２４（５９２４）：２１８－２３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。この技術は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の領域またはセグメントが、ＰＩＣ及び／またはリボソームによってヌクレアーゼ消化から保護されることに基づいている。保護により、「フットプリント」と呼ばれる３０ｂｐのＲＮＡフラグメントが生じる。ＲＮＡフットプリントの配列及び頻度は、当技術分野で公知の方法（例えば、ＲＮＡ－ｓｅｑ）によって分析することができる。フットプリントは、大体、リボソームのＡサイトの中央に位置する。ＰＩＣまたはリボソームが核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に沿った特定の位置または位置で留まるならば、これらの位置で生じるフットプリントは比較的一般的であろう。研究によって、ＰＩＣ及び／またはリボソームが処理能力の減少を呈する位置でより多くのフットプリントが生じ、ＰＩＣ及び／またはリボソームが処理能力の増大を呈する場所でより少ないフットプリントが生じることが示されている（Ｇａｒｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ｅＬｉｆｅ ３：ｅ０３７３５）。幾つかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡエレメントのいずれか１つ以上を含むポリヌクレオチドに沿った別個の位置または場所でのＰＩＣまたはリボソームの滞留時間または占有時間は、リボソームプロファイリングによって決定される。
タンパク質発現を低減させるための薬剤
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、タンパク質発現を低減させる（すなわち、減少させる、阻害する、下方制御する）薬剤である。一実施形態では、薬剤は、脂肪ベースの組成物が送達される標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））におけるタンパク質発現を低減させる。追加的または代替的に、別の実施形態では、薬剤は、脂質ベースの組成物が送達される標的細胞以外の他の細胞、例えば、バイスタンダー細胞におけるタンパク質発現の低減をもたらす。タンパク質発現を低減させるために使用することができる薬剤のタイプの非限定的な例として、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位）を組み込んだｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴｍｉｒ、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡが含まれる）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術が挙げられる。
ＲＮＡ干渉分子
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）とは、ＲＮＡ分子が標的ｍＲＮＡ分子を中和することによって遺伝子発現または翻訳を阻害する生物学的プロセスを指す。ＲＮＡｉは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって制御され、細胞の細胞質内の短い二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）によって開始される遺伝子サイレンシングプロセスである。２つのタイプの低分子リボ核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）がＲＮＡ干渉の中心となる。ＲＮＡｉは天然の細胞プロセスであるが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの目的の標的遺伝子／ｍＲＮＡの発現を阻害するためにＲＮＡｉの成分を合成し、利用することもなされている。
天然のプロセスとして、ｄｓＲＮＡは、リボヌクレアーゼタンパク質であるダイサーを活性化することによってＲＮＡｉを開始する。ダイサーは、ｄｓＲＮＡ及び低分子ヘアピン型ＲＮＡに結合し、切断して、２０～２５塩基対の二本鎖フラグメントを産生する。これらの短い二本鎖フラグメントは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる。次に、これらのｓｉＲＮＡは、ＲＩＳＣローディング複合体（ＲＬＣ）によって一本鎖に分離され、活性なＲＩＳＣに統合される。ＲＩＳＣに統合された後、ｓｉＲＮＡはその標的ｍＲＮＡと塩基対を形成してそれを切断することによって、標的ｍＲＮＡを翻訳テンプレートとして使用させないようにする。
ＲＮＡｉの現象は、広義には、ｍｉＲＮＡの遺伝子サイレンシング効果も含む。マイクロＲＮＡは、遺伝子的にコードされる非コードＲＮＡであり、例えば発生の途中で遺伝子発現の調節を支援する。天然に存在する成熟ｍｉＲＮＡは、外因性ｄｓＲＮＡから産生されるｓｉＲＮＡと構造的に類似しているが、成熟に至る前にｍｉＲＮＡは広範な転写後修飾を受け、そうした転写後修飾には、プレｍｉＲＮＡのｄｓＲＮＡ部分がダイサーによって切断されてＲＩＳＣ複合体に統合することができる成熟ｍｉＲＮＡ分子を産生することが含まれる。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡを含めたＲＮＡｉ分子（すなわち、ＲＮＡ干渉を媒介するか、またはＲＮＡ干渉に関与する分子）であり、それらの各々については以降でさらに詳細に説明する。
低分子干渉ＲＮＡ
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、短鎖干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとも呼ばれ、ＲＮＡｉ経路内で機能して相補的なヌクレオチド配列を有する特定の標的配列の発現に干渉する、典型的には２０～２５塩基対の長さの二本鎖ＲＮＡ分子の一群である。ｓｉＲＮＡは、転写後にｍＲＮＡを分解することにより遺伝子発現を阻害し、それによって翻訳を妨げる。本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」という用語は、限定するものではないが、ショートマー、ロングマー、２’５’－異性体、及びダイサー基質ＲＮＡを含めた、当技術分野で公知のすべての形態のｓｉＲＮＡを包含する。天然に存在するｓｉＲＮＡ及び人工的に合成されたｓｉＲＮＡ、ならびに療法におけるそれらの使用（例えば、ナノ粒子によって送達される）は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ａｎｄ Ｂａｌｃｏｍｂｅ（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０－９５２；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４－４９８；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐ．１９：３６７－３７３；Ｗｉｔｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔ．１６：５４３－５５２を参照されたい）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、ｓｉＲＮＡである。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞で発現される標的配列の発現を阻害する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）で発現される標的配列の発現を阻害する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、脾細胞（例えば、脾実質細胞）で発現される標的配列の発現を阻害する。
別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での転写因子の発現を阻害する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞質タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での膜貫通タンパク質（例えば、細胞表面受容体）の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での分泌タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、またはＣＡＭＫＫ２）の発現を阻害する。
マイクロＲＮＡ
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、遺伝子発現のＲＮＡサイレンシング及び転写後調節で機能する非コードＲＮＡ低分子（典型的には約２２ヌクレオチドを含有する）である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ分子内の相補的配列と塩基対を形成して、ｍＲＮＡの切断、ポリＡテールの短縮によるｍＲＮＡの不安定化、及び／またはリボソームによるｍＲＮＡのタンパク質への翻訳効率の低下を引き起こすことによって、遺伝子発現を阻害する。ｍＲＮＡの切断に関しては、ｍｉＲＮＡと標的ｍＲＮＡ配列との間に完全な相補性がもたらされると、タンパク質Ａｇｏ２がｍＲＮＡを切断し、直接的なｍＲＮＡ分解を引き起こすことができることが実証されている。ｍｉＲＮＡ及びその機能は、当技術分野で説明されている（例えば、Ａｍｂｒｏｓ（２００４）Ｎａｔｕｒｅ ４３１：３５０－３５５；Ｂａｒｔｅｌ（２００４）Ｃｅｌｌ １１６：２８１－２９７；Ｂａｒｔｅｌ（２００９）Ｃｅｌｌ １３６：２１５－２３３；Ｆａｂｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７９：３５１－３７９を参照されたい）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、ｍｉＲＮＡである。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、標的細胞で発現される標的配列の発現を阻害する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）で発現される標的配列の発現を阻害する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、脾細胞（例えば、脾実質細胞）で発現される標的配列の発現を阻害する。
別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での転写因子の発現を阻害する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞質タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での膜貫通タンパク質（例えば、細胞表面受容体）の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での分泌タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、またはＣＡＭＫＫ２）の発現を阻害する。
標的細胞活性の調節及び／または標的細胞応答の調節に適切なｍｉＲＮＡの非限定的な例として、Ｌｅｔ－７ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－１０ａ、ｍｉＲ－１０ｂ、ｍｉＲ－１５、ｍｉＲ－１８ａ、ｍｉＲ－２０ａ、ｍｉＲ－２０ｂ、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－９９ａ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５ａ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４６、ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１８１ａ、及びｍｉＲ－２１０が挙げられる。
アンタゴｍｉｒ
アンタゴｍｉｒは、抗ｍｉｒまたはブロックｍｉｒとしても当技術分野で公知であり、他の分子がｍＲＮＡ分子の所望の部位に結合するのを妨げる化学的に操作されたオリゴヌクレオチドの一群である。アンタゴｍｉｒは、内因性ｍｉＲＮＡをサイレンシングするために使用される。アンタゴｍｉｒは、Ａｇｏ２の切断部位での誤対合またはＡｇｏ２切断を阻害するようなある種の塩基修飾を有する、特定のｍｉＲＮＡ標的に完全に相補的な低分子合成ＲＮＡである。典型的には、アンタゴｍｉｒは、分解されにくくなるように、２’－メトキシ基及び／またはホスホロチオエートなどの１つ以上の修飾を有する。アンタゴｍｉｒ及びその機能は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｋｒｕｔｚｆｅｌｄｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ ４３８：６８５－６８９；Ｃｚｅｃｈ（２００６）Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４：１１９４－１１９５を参照されたい）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、アンタゴｍｉｒである。アンタゴｍｉｒは、遺伝子発現を下方制御する内因性ｍｉＲＮＡの活性をブロック（阻害）するため、アンタゴｍｉｒの効果は、目的の遺伝子の発現を強化する（すなわち、増大させる、刺激する、上方制御する）ことであり得る。したがって、一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、標的細胞で発現される標的配列の発現を強化する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）で発現される標的配列の発現を強化する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、脾細胞（例えば、脾実質細胞）で発現される標的配列の発現を強化する。
別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での転写因子の発現を強化する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞質タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での膜貫通タンパク質（例えば、細胞表面受容体）の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での分泌タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を阻害する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））での酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、またはＣＡＭＫＫ２）の発現を阻害する。
標的細胞活性の調節及び／または標的細胞応答の調節に適切なアンタゴｍｉｒの非限定的な例として、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１７、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２５、ｍｉＲ－２７、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－９２、ｍｉＲ－１０６ｂ、ｍｉＲ－１４６ｂ、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１５５、及びｍｉＲ－２１０から選択されるｍｉＲＮＡを特異的に標的とするものが挙げられる。
アンチセンスＲＮＡ
アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）は、当技術分野ではアンチセンス転写物とも呼ばれ、タンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と相補的であり、それとハイブリダイズすることによってｍＲＮＡがタンパク質へ翻訳されるのをブロックする、天然に存在するかまたは合成的に生成された一本鎖ＲＮＡ分子である。アンチセンス転写物は、短鎖（２００ヌクレオチド未満）及び長鎖（２００ヌクレオチド超）非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）に分類される。ａｓＲＮＡの主な天然の機能は遺伝子発現の調節にあり、合成バージョンは遺伝子ノックダウン及び治療用途の研究ツールとして広く使用されている。アンチセンスＲＮＡ及びその機能は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｅｌｌ．ｍｏｌｅｃ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５５：３３４－３５８；Ｗａｈｌｓｔｅｄｔ（２０１３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．１２：４３３－４４６；Ｐｅｌｅｃｈａｎｏ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ（２０１３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１４：８８０－８９３を参照されたい）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、アンチセンスＲＮＡをコードするか、またはアンチセンスＲＮＡである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
リボザイム
リボザイム（リボ核酸酵素）は、タンパク質酵素の作用と同様に生化学反応を触媒することが可能なＲＮＡ分子である。天然またはｉｎ ｖｉｔｒｏで進化させたリボザイムの最も一般的な活性は、ＲＮＡ及びＤＮＡの切断またはライゲーションならびにペプチド結合の形成である。さらに、良好な酵素活性を有する自己切断ＲＮＡが当技術分野において説明されている。リボザイムの治療的使用、特に、ＲＮＡベースのウイルスの切断のための治療的使用は、開発が進められている。リボザイム及びその機能は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｋｒｕｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｃｅｌｌ ３１：１４７－１５７；Ｔａｎｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８４－８９；Ｆｅｄｏｒ ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：３９９－４１２を参照されたい）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、リボザイムをコードするか、またはリボザイムである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
低分子ヘアピン型ＲＮＡ
低分子（または短鎖）ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉を介して標的遺伝子発現のサイレンシングに使用することができる、急なヘアピンカーブを有する合成ＲＮＡ分子の一種である。ｓｈＲＮＡは、分解及び代謝回転の速度が比較的遅いという点において有利なＲＮＡ干渉媒介物である。細胞でのｓｈＲＮＡの発現は、典型的には、ｓｈＲＮＡをコードするプラスミドを送達することによって達成されるか、あるいはｓｈＲＮＡをコードするウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター）または細菌ベクターを通して達成される。ｓｈＲＮＡ及び遺伝子療法におけるその使用は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１６：９４８－９５８；Ｘｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：６９７－７０２；Ｂｕｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｊｏｕｒｎａｌ ６：１１３０－１１４６を参照されたい）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、ｓｈＲＮＡをコードするか、またはｓｈＲＮＡである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
ロックド核酸
ロックド核酸は、インアクセシブル（ｉｎａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）ＲＮＡとも呼ばれ、２’位の酸素と４’位の炭素とを連結する追加の架橋でそのリボース部分が修飾された修飾ＲＮＡヌクレオチド分子である。この架橋によって、リボースが３’－ｅｎｄｏ（Ｎｏｒｔｈ）立体配座に「ロック」される。ＬＮＡヌクレオチドは、必要に応じてオリゴヌクレオチドのＤＮＡまたはＲＮＡ残基と混合し、Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋの塩基対合則に従ってＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズさせることができる。ロックされたリボース立体配座は、塩基のスタッキング及び骨格の事前形成を強化する。これにより、ＬＮＡヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション特性（例えば、融解温度）が有意に増大する。ＬＮＡ分子及びその特性は、当技術分野において説明されている（例えば、Ｏｂｉｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３８：８７３５－８７３８；Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４：３６０７－３６３０；Ｅｌｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：４３９－４４７を参照されたい）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、１つ以上のロックド（ＬＮＡ）核酸を含む核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９剤
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、ＣＲＩＳＰＲ（規則的な間隔でクラスター化した短鎖反復回文配列）－Ｃａｓ９系が関与する方法に有用である。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、ゲノムの編集に使用されており、Ｃａｓ９酵素がＤＮＡを切断し、新たな遺伝子配列を挿入できるようにする。切断が所望される特定のＤＮＡ箇所へのＣａｓ９の誘導には一本鎖ガイドＲＮＡが使用される。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をｉｎ ｖｉｖｏで標的細胞（例えば、肝細胞及び／または脾細胞）に導入する必要性は依然として存在している。したがって、本開示は、本明細書に記載の送達脂質を含む脂質ベースの組成物を使用することによって、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系で標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））のゲノムを編集する方法を提供する。したがって、幾つかの実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤（複数可）は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系の１つ以上の成分である。例えば、Ｃａｓ９酵素及び一本鎖ガイドガイドＲＮＡを、本明細書に記載の脂質ベースの組成物に会合させる／カプセル化することができる。任意選択で、修飾しようとする目的の遺伝物質（例えば、ＤＮＡ）も脂質ベースの組成物にカプセル化することができ、または代替的に、脂質ベースの組成物によって送達されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系が、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））内の内在性の目的の遺伝物質に作用することもできる。
例示的な標的タンパク質
標的とされる分子（例えば、ＬＮＰ内の核酸によってコードされるか、またはノックダウンの標的とされるもの）は、所望のアウトカムに基づいて選択することができる。本発明のＬＮＰが標的細胞によって優先的に取り込まれることが今回見出されたことを考慮すると、当業者は、当技術分野で認知されている数多くのタンパク質を標的細胞に送達することができる。送達することができる例示的なタンパク質（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉなどの核酸分子）は当技術分野で周知であり、そのような分子の例示的な標的も当技術分野で周知であり、例示的なそのような分子は本明細書に開示される。タンパク質を（例えばｍＲＮＡを使用して）発現させる場合、そのようなタンパク質は、完全長タンパク質であるか、または代替的には、その機能性フラグメント（例えば、完全長タンパク質の機能活性が保持されるように１つ以上の機能性ドメインを含む、該完全長タンパク質のフラグメント）であり得る。さらに、ある特定の実施形態では、ＬＮＰ内の核酸によってコードされるタンパク質は、修飾タンパク質であってもよく、例えば、１つ以上の異種ドメインを含んでもよく、例えば、該タンパク質は、該タンパク質の機能が改変されるように、該タンパク質に天然に存在しない１つ以上のドメインを含有する融合タンパク質であってもよい。異種ドメインを含むタンパク質の例は、キメラ抗原受容体である（以降でさらに説明する）。
標的細胞内へのまたは標的細胞での目的のタンパク質の誘導または低減は、免疫蛍光、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的検査、またはフローサイトメトリーなどの当技術分野で公知の標準的な方法によって測定することができる。
天然に存在する標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の天然に存在する標的を調節する（例えば、天然に存在する標的の活性を上方または下方制御する）。薬剤は、それ自体が天然に存在する標的をコードしてもよく、または天然に存在する標的を調節するように機能してもよい（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞内で、例えば、対象における細胞内で）。天然に存在する標的は、完全長タンパク質などの完全長標的であり得るか、またはタンパク質のフラグメントまたは部分などの天然に存在する標的のフラグメントまたは一部分であり得る。天然に存在する標的を調節する（例えば、標的自体をコードすることによって調節するか、または標的の活性を調節するように機能することによって調節する）薬剤は、オートクリン様式で作用することができ、すなわち、薬剤は、該薬剤が送達された細胞に直接的に効果を発揮する。追加的または代替的に、天然に存在する標的を調節する薬剤は、パラクリン様式で機能することができ、すなわち、薬剤は、該薬剤が送達された細胞以外の細胞に間接的に効果を発揮する（例えば、ある型の細胞に薬剤が送達されると、バイスタンダー細胞などの別の型の細胞に効果を発揮する分子が分泌される）。天然に存在する標的を調節する薬剤には、タンパク質発現を誘導する（例えば、強化する、刺激する、上方制御する）核酸分子、例えば、ｍＲＮＡ及びＤＮＡが含まれる。天然に存在する標的を調節する薬剤には、タンパク質発現を低減させる（例えば、阻害する、減少させる、下方制御する）核酸分子、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びアンタゴｍｉｒも含まれる。天然に存在する標的の非限定的な例として、可溶性タンパク質（例えば、分泌タンパク質）、細胞内タンパク質（例えば、細胞内シグナル伝達タンパク質、転写因子）、及び膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質（例えば、受容体）が挙げられる。
可溶性標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、例えば、可溶性標的自体をコードすることによって、または標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））における可溶性標的の発現（例えば、転写または翻訳）を調節することによって、天然に存在する可溶性標的の活性を調節する。一実施形態では、該細胞は、肝実質細胞である。天然に存在する可溶性標的の非限定的な例として、分泌タンパク質が挙げられる。実施例６で実証されるように、本開示の脂質ベースの組成物は、可溶性標的が標的細胞によって発現されるように、可溶性標的をコードするｍＲＮＡを標的細胞に送達するのに有効である。一実施形態では、可溶性標的は、標的細胞によって分泌され、血漿中で検出することができる。
可溶性標的の追加の例として、抗体分子、例えば、天然に存在する抗体、操作された抗体、及びそれらの抗原結合部分が挙げられる。抗体分子として、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線形抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨ）、ナノボディ、またはラクダＶＨＨドメイン）、抗原結合フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）足場、例えば、フィブロネクチンポリペプチドミニボディ、リガンド、サイトカイン、ケモカイン、またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が挙げられる。例示的な抗体分子として、ヒト化抗体分子、インタクトなＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体；二重もしくは多重特異的抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）；抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離されたＣＤＲ、またはそれらのセット；一本鎖Ｆｖｓ；ポリペプチド－Ｆｃ融合物；単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体、例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメント）；ラクダ科抗体；マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ（登録商標））；Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（「ＳＭＩＰ（商標）」）；一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）；ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリン反復タンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎ（登録商標）；ＴｒａｎＳ－ｂｏｄｙ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ；Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本明細書に開示の標的細胞送達ＬＮＰは、抗体分子が標的細胞によって発現されるように、抗体分子をコードするｍＲＮＡを標的細胞に送達するのに有効である。一実施形態では、抗体分子は、標的細胞によって分泌され、血漿中で検出することができる。
ある実施形態では、本明細書に開示の標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較して約１０～９０倍の抗体分子産生の増大をもたらす。ある実施形態では、本明細書に開示の標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較して約１０～８０倍、１０～７０倍、１０～６０倍、１０～５０倍、１０～４０倍、１０～３０倍、１０～２０倍、２０～８０倍、２０～７０倍、２０～６０倍、２０～５０倍、２０～４０倍、または２０～３０倍多くの抗体分子産生をもたらす。ある実施形態では、本明細書に開示の標的細胞送達ＬＮＰは、参照ＬＮＰと比較して約３０～５０倍多くの抗体分子産生をもたらす。
一実施形態では、脂質ベースの組成物、例えばＬＮＰを使用する方法は、標的細胞の活性化または活性を刺激する（上方制御する、強化する）ために使用される。別の実施形態では、脂質ベースの組成物、例えば、ＬＮＰを使用する方法は、標的細胞の活性化または活性を阻害する（下方制御する、低減させる）ために使用される。
標的細胞を活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質は、動員因子である。本明細書で使用される場合、「動員因子」は、所望の位置（例えば、腫瘍部位または炎症部位）への標的細胞の動員を促進する任意のタンパク質を指す。例えば、ある特定のケモカイン、ケモカイン受容体、及びサイトカインは、リンパ球の動員に関与することが示されている（例えば、Ｏｅｌｋｒｕｇ，Ｃ． ａｎｄ Ｒａｍａｇｅ，Ｊ．Ｍ．（２０１４）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：１－８を参照されたい）。動員因子の非限定的な例として、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＲ５、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、及びＣＸＣＬ１６が挙げられる。
細胞内標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、例えば、細胞内標的自体をコードすることによって、または標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））における細胞内標的の発現（例えば、転写または翻訳）を調節することによって、天然に存在する細胞内標的の活性を調節する。一実施形態では、該細胞は、肝実質細胞である。天然に存在する細胞内標的の非限定的な例として、転写因子、及び酵素を含めた細胞シグナル伝達カスケード分子が挙げられる。
標的細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、転写因子である。本明細書で使用される場合、「転写因子」は、遺伝子の転写を調節するＤＮＡ結合タンパク質を指す。
膜結合／膜貫通標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、例えば、膜結合／膜貫通標的自体をコードすることによって、または標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））における膜結合／膜貫通標的の発現（例えば、転写または翻訳）を調節することによって、天然に存在する膜結合／膜貫通標的の活性を調節する。
修飾標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の修飾標的を調節する（例えば、天然に存在しない標的の活性を上方または下方制御する）。典型的には、薬剤は、それ自体が修飾標的であるか、または修飾標的をコードする。あるいは、細胞が修飾標的を発現するならば、薬剤は、細胞内のこの修飾標的の活性を調節するように機能することができる。天然に存在しない標的は、完全長修飾タンパク質などの完全長標的であり得るか、または修飾タンパク質のフラグメントまたは部分などの天然に存在しない標的のフラグメントまたは一部分であり得る。修飾標的を調節する薬剤は、オートクリン様式で作用することができ、すなわち、薬剤は、該薬剤が送達された細胞に直接的に効果を発揮する。追加的または代替的に、修飾標的を調節する薬剤は、パラクリン様式で機能することができ、すなわち、薬剤は、該薬剤が送達された細胞以外の細胞に間接的に効果を発揮する（例えば、ある型の細胞に薬剤が送達されると、バイスタンダー細胞などの別の型の細胞に効果を発揮する分子が分泌される）。それ自体が修飾標的である薬剤として、修飾タンパク質をコードする、ｍＲＮＡまたはＤＮＡなどの核酸分子が挙げられる。修飾標的の非限定的な例として、修飾可溶性タンパク質（例えば、分泌タンパク質）、修飾細胞内タンパク質（例えば、細胞内シグナル伝達タンパク質、転写因子）、及び修飾膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質（例えば、受容体）が挙げられる。
修飾可溶性標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の修飾可溶性標的を調節する（例えば、天然に存在しない可溶性標的の活性を上方または下方制御する）。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾可溶性標的をコードする。一実施形態では、修飾可溶性標的は、タンパク質の半減期（例えば、血清半減期）を改変する（例えば、増大させるまたは減少させる）ように修飾された可溶性タンパク質である。改変された半減期を有する修飾可溶性タンパク質として、修飾サイトカイン及びケモカインが挙げられる。別の実施形態では、修飾可溶性標的は、可溶性タンパク質が細胞表面に繋留された状態になるように、テザーを組み込むように修飾された可溶性タンパク質である。テザーを組み込んだ修飾可溶性タンパク質として、繋留されたサイトカイン及びケモカインが挙げられる。
一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾可溶性標的、例えば、本明細書に記載されるような抗体分子をコードする。ある実施形態では、抗体分子は、天然に存在する抗体分子、操作された抗体分子、またはそれらの抗原結合部分であり得る。
修飾細胞内標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の修飾細胞内標的を調節する（例えば、天然に存在しない細胞内標的の活性を上方または下方制御する）。一実施形態では、細胞は、リンパ系細胞である。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾細胞内標的をコードする。一実施形態では、修飾細胞内標的は、細胞内タンパク質の構成的に活性な変異体、例えば、構成的に活性な転写因子または細胞内シグナル伝達分子である。別の実施形態では、修飾細胞内標的は、細胞内タンパク質のドミナントネガティブ変異体、例えば、転写因子または細胞内シグナル伝達分子のドミナントネガティブ変異体である。別の実施形態では、修飾細胞内標的は、修飾（例えば、変異）酵素、例えば、細胞内シグナル伝達カスケード内の活性が増大または減少された変異酵素である。
修飾膜結合／膜貫通標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合される／カプセル化される薬剤は、標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の修飾膜結合／膜貫通標的を調節する（例えば、天然に存在しない膜結合／膜貫通標的の活性を上方または下方制御する）。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾膜結合／膜貫通標的をコードする。一実施形態では、修飾膜結合／膜貫通標的は、膜結合／膜貫通タンパク質の構成的に活性な変異体、例えば、構成的に活性な細胞表面受容体（すなわち、リガンド結合を必要とせずに受容体を通して細胞内シグナル伝達を活性化する）である。別の実施形態では、修飾膜結合／膜貫通標的は、膜結合／膜貫通タンパク質のドミナントネガティブ変異体、例えば、細胞表面受容体のドミナントネガティブ変異体である。
脂質ベースの組成物の使用
本開示は、標的細胞への核酸の送達が強化された、向上した脂質ベースの組成物、特にＬＮＰ組成物を提供する。本開示は、ＬＮＰの成分が、カプセル化された核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の標的細胞、例えば、肝細胞及び脾細胞への送達を強化する標的細胞送達増強脂質として作用するという発見に少なくとも部分的に基づいている。
本開示の向上した脂質ベースの組成物、特にＬＮＰは、標的細胞への核酸送達、標的細胞内もしくは標的細胞上でのタンパク質発現、及び／または標的細胞（例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞））の活性化または活性の調節など、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で種々の目的に有用である。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのタンパク質発現については、ＬＮＰ及び標的細胞をｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートすることによって、標的細胞をＬＮＰと接触させる。そのような標的細胞は、その後ｉｎ ｖｉｖｏで導入されてもよい。
ｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質発現については、ＬＮＰを対象に投与することによって標的細胞をＬＮＰと接触させ、それにより対象内の標的細胞内または標的細胞上でタンパク質発現を増大させるかまたは誘導する。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、結節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの送達については、一実施形態では、ＬＮＰ及び標的細胞をｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートすることによって、標的細胞をＬＮＰと接触させる。幾つかの実施形態では、標的細胞は、ヒトの標的細胞である。別の実施形態では、標的細胞は、霊長類の標的細胞である。別の実施形態では、標的細胞は、ヒトまたは非ヒト霊長類の標的細胞である。ＬＮＰによって様々な型の標的細胞へトランスフェクトできることが実証されている。
一実施形態では、標的細胞は、肝細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝実質細胞である。一実施形態では、標的細胞は、クッパー細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝星細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝類洞細胞である。
一実施形態では、標的細胞は、脾細胞である。一実施形態では、標的細胞は、脾実質細胞である。
別の実施形態では、標的細胞を、例えば、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間、ＬＮＰと接触させる。
一実施形態では、単回の処置／トランスフェクションのために標的細胞をＬＮＰと接触させる。別の実施形態では、多回の処置／トランスフェクション（例えば、同じ細胞の２回、３回、４回、またはそれ以上の処置／トランスフェクション）のために標的細胞をＬＮＰと接触させる。
別の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで送達する場合、ＬＮＰを対象に投与することによって標的細胞をＬＮＰと接触させ、それによって対象内の標的細胞に核酸を送達する。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、結節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
一実施形態では、標的細胞における核酸分子の細胞内濃度が強化される。一実施形態では、標的細胞における核酸分子の活性が強化される。一実施形態では、標的細胞における核酸分子の発現が強化される。一実施形態では、核酸分子は、標的細胞の活性化または活性を調節する。一実施形態では、核酸分子は、標的細胞の活性化または活性を増大させる。一実施形態では、核酸分子は、標的細胞の活性化または活性を減少させる。
ある特定の実施形態では、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによって標的細胞へ核酸を送達すると、例えばｉｎ ｖｉｖｏで対象へ投与した後に、検出可能な量が標的細胞へ送達される（例えば、ある特定の百分率の標的細胞へ送達される）。幾つかの実施形態では、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰは、標的細胞に対する標的化部分を含まない（例えば、標的細胞マーカーに対する特異性を有する抗体、またはＬＮＰを標的細胞に標的化する受容体リガンドを含まない）。例えば、一実施形態では、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に、ｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも約３０％の肝細胞へ核酸が送達される（例えば、実施例５に記載されるように非ヒト霊長類において）。別の実施形態では、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に、ｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも約２０％の脾細胞へ核酸が送達される（例えば、実施例５に記載されるように非ヒト霊長類において）。ここで実証された送達のレベルによって、ｉｎ ｖｉｖｏでの療法が可能となる。
一実施形態では、標的細胞による核酸分子の取り込みが強化される。取り込みは、当業者に公知の方法によって決定することができる。例えば、会合／結合、及び／または取り込み／内部移行は、蛍光標識など検出可能に標識されたＬＮＰを使用し、様々なインキュベーション期間後に標的細胞内または標的細胞上のそのようなＬＮＰの位置を追跡することによって評価することができる。加えて、Ｒａｄｕ Ｍｉｈａｉｌａらによって記載される常微分方程式（ＯＤＥ）ベースのモデルなどの数学的モデル（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｖｏｌ．７：２４６－２５５，２０１７（参照により本明細書に組み込まれる））によって、送達及び取り込みの定量化が可能となる。
別の実施形態では、核酸分子の機能または活性を、核酸分子の送達の指標として使用することができる。例えば、ｓｉＲＮＡの場合、ある特定の割合の標的細胞におけるタンパク質発現の低減を測定して、その割合の細胞へのｓｉＲＮＡの送達を示すことができる。同様に、ｍＲＮＡの場合、ある特定の割合の標的細胞におけるタンパク質発現の増大を測定して、その割合の細胞へのｓｉＲＮＡの送達を示すことができる。当業者であれば、標的細胞への他の核酸分子の送達を測定するための様々な方法がわかるであろう。
ある特定の実施形態では、標的細胞に送達される核酸は、目的のタンパク質をコードする。したがって、一実施形態では、標的細胞における核酸分子によってコードされる目的のタンパク質の活性が強化される。一実施形態では、標的細胞における核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される。一実施形態では、タンパク質は、標的細胞の活性化または活性を調節する。一実施形態では、タンパク質は、標的細胞の活性化または活性を増大させる。一実施形態では、タンパク質は、標的細胞の活性化または活性を減少させる。
一実施形態では、様々な薬剤を使用して細胞を標識して、その特定の標的細胞集団への送達を測定することができる。例えば、ＬＮＰは、レポーター核酸（例えば、検出可能なレポータータンパク質をコードするｍＲＮＡ）をカプセル化することができ、レポーター核酸が発現すると、レポーター核酸が送達された細胞集団が標識される。検出可能なレポータータンパク質の非限定的な例として、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）、及びルシフェラーゼが挙げられる。
標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる標的細胞への核酸の送達は、例えば、ＬＮＰに会合された／カプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現を検出することによって、またはＬＮＰに会合された／カプセル化された核酸によって媒介される効果（例えば、生物学的効果）を検出することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。タンパク質検出の場合、タンパク質は、例えば、細胞表面タンパク質であり得、こうした細胞表面タンパク質は、例えば、細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体を使用する免疫蛍光法またはフローサイトメトリーによって検出可能である。あるいは、検出可能なレポータータンパク質をコードするレポーター核酸を使用することができ、レポータータンパク質の発現を、当技術分野で公知の標準的な方法によって測定することができる。
本開示の方法は、正常な標的細胞及び悪性の標的細胞を含めた種々の標的細胞型に核酸分子を送達するのに有用である。
この方法を使用して、例えば肝臓または脾臓に位置する標的細胞に核酸を送達することができる。
一実施形態では、標的細胞は、悪性細胞、がん細胞であり、例えば、Ｇ１期の進行の制御が解除されていることによって実証されるものである。一実施形態では、標的細胞は、悪性、がん性であるか、またはＧ１期の進行の制御が解除されていることを呈する肝細胞である。一実施形態では、標的細胞は、白血病細胞またはリンパ腫細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝癌細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝細胞癌細胞である。一実施形態では、標的細胞は、胆管癌細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝血管肉腫細胞である。一実施形態では、標的細胞は、肝芽腫細胞である。
本開示のＬＮＰを含めた向上した脂質ベースの組成物は、例えば、複数の異なるＬＮＰの投与によって、標的細胞または標的細胞の異なる集団に２つ以上の核酸分子を送達するのに有用である。一実施形態では、本開示の方法は、標的細胞を第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰに同時にまたは連続して接触させる（または対象に投与する）ことを含み、該第１及び第２のＬＮＰは、同じまたは異なる核酸分子をカプセル化し、該第１及び第２のＬＮＰは、フィトステロールを成分として含む。他の実施形態では、本開示の方法は、標的細胞を第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰに同時にまたは連続して接触させる（または対象に投与する）ことを含み、該第１及び第２のＬＮＰは、同じまたは異なる核酸分子をカプセル化し、該第１のＬＮＰはフィトステロールを成分として含み、該第２のＬＮＰはフィトステロールを含まない。
（ｉ）酵素補充療法
別の実施形態では、本開示のＬＮＰは、疾患または障害に関連する酵素をコードする核酸を提供する。一実施形態では、疾患または障害に関連する酵素は、疾患または障害を有する対象において十分なレベルで発現されていない。ある実施形態では、疾患または障害に関連する酵素をコードする本開示のＬＮＰは、対象に投与して、例えば、酵素補充療法として、対象における酵素の発現及び／または活性を増大させる（例えば、強化する）及び／または回復させることができる。ある実施形態では、疾患または障害に関連する酵素をコードする本開示のＬＮＰは、例えば、対象において、酵素の発現及び／または活性の増大をもたらす。ある実施形態では、疾患または障害に関連する酵素をコードするＬＮＰを投与すると、疾患または障害に関連する１つ以上の症状が改善する。
ある実施形態では、疾患または障害は、奇病（例えば、リソソーム蓄積症）、又は代謝障害（例えば、本明細書に記載されるようなもの）である。
ある実施形態では、疾患は、代謝障害である。ある実施形態では、酵素は、尿素回路酵素である。
医薬組成物
本発明の脂質ナノ粒子を含む製剤は、全体的または部分的に医薬組成物として製剤化されてもよい。医薬組成物は、１つ以上の脂質ナノ粒子を含んでもよい。例えば、医薬組成物は、１つ以上の異なる治療薬及び／または予防薬を含む１つ以上の脂質ナノ粒子を含んでもよい。医薬組成物は、本明細書に記載されるものなどの１つ以上の医薬的に許容される賦形剤または副成分をさらに含んでもよい。医薬組成物及び薬剤の製剤及び製造のための一般的なガイドラインは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６におけるものが利用可能である。任意の従来の賦形剤または副成分が本開示の製剤中のＬＮＰの１つ以上の成分と適合しない場合を除いて、従来の賦形剤及び副成分を任意の医薬組成物に使用することができる。賦形剤または副成分は、成分またはＬＮＰとの組み合わせにより、望ましくない生物学的効果またはさもなくば有害な効果が生じるおそれがあるならば、製剤のＬＮＰの成分と不適合であり得る。
医薬組成物に製剤化された本開示の脂質ナノ粒子は、単一の核酸または複数の核酸をカプセル化することができる。複数の核酸をカプセル化するとき、核酸は同じタイプ（例えば、すべてｍＲＮＡ）であってもよく、または異なるタイプ（例えば、ｍＲＮＡ及びＤＮＡ）であってもよい。さらに、複数のＬＮＰが同じまたは別々の医薬組成物に製剤化されてもよい。例えば、同じまたは別々の医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含むことができ、第１及び第２のＬＮＰは、同じまたは異なる核酸分子をカプセル化し、第１及び第２のＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を成分として含む。他の実施形態では、同じまたは別々の医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含むことができ、第１及び第２のＬＮＰは、同じまたは異なる核酸分子をカプセル化し、第１のＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を成分として含み、第２のＬＮＰは、標的細胞送達増強脂質を含まない。
幾つかの実施形態では、１つ以上の賦形剤または副成分は、ＬＮＰを含む医薬組成物の総質量または体積の５０％超を構成してもよい。例えば、１つ以上の賦形剤または副成分は、医薬組成物の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上を構成してもよい。幾つかの実施形態では、医薬的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋である。幾つかの実施形態において、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学での使用が認可されている。幾つかの実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬品局によって認可されている。幾つかの実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードである。幾つかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たしている。
本発明による医薬組成物における１つ以上の脂質ナノ粒子、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤、及び／または追加成分の相対量は、治療される対象の個性、大きさ、及び／または状態に応じて、ならびに該組成物を投与しようとする経路に応じて変動することとなる。例として、医薬組成物は、０．１％～１００％（ｗｔ／ｗｔ）の間の１つ以上の脂質ナノ粒子を含んでもよい。別の例として、医薬組成物は、０．１％～１５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の１つ以上の両親媒性ポリマー（例えば、０．５％、１％、２．５％、５％、１０％、または１２．５％ｗ／ｖ）を含んでもよい。
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子及び／または医薬組成物は、保管及び／または運送のために冷蔵または冷凍される貯蔵のために冷蔵または冷凍される（例えば、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃～約０℃の間、または約－８０℃～約－２０℃の間の温度（例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃、または－１５０℃）で保管される）。例えば、１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、例えば約－２０°Ｃ、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、または－８０℃での保管及び／または運送のために冷蔵される溶液または固体（例えば、凍結乾燥によるもの）である。ある特定の実施形態では、本開示はまた、脂質ナノ粒子の安定性を増大させる方法であって、脂質ナノ粒子及び／またはその医薬組成物を、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃～約０℃、または約－８０℃～約－２０℃、例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃、または－１５０℃で保管することによる方法に関する。
脂質ナノ粒子及び／または１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、１つ以上の特定の細胞、組織、臓器、またそれらの系もしくは群、例えば腎臓系への治療薬及び／または予防薬の送達によってもたらされる治療効果から利益を得る可能性がある患者または対象を含めた、任意の患者または対象に投与されてもよい。脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子を含む医薬組成物についての本明細書で提供される説明は、ヒトへの投与に適した組成物を主に対象としているが、このような組成物は一般に任意の他の哺乳動物への投与に適していることを、当業者であれば理解するであろう。ヒトへの投与に適した組成物を様々な動物への投与に適したものにするために修正することはよく理解されており、獣医薬理学の当業者であれば、必要に応じて通常の実験を行うだけで、そのような修正を設計及び／または実施することができる。組成物の投与が企図される対象として、ヒト、他の霊長類、ならびに、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどの商業的に関連する哺乳動物を含めた他の哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。
１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、薬理学の分野で公知の、または今後開発される任意の方法によって調製されてもよい。一般に、そのような調製方法には、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の副成分と合わせ、その後、所望であればまたは必要であれば、製品を所望の単回用量単位または複数回用量単位に分割、成形、及び／または包装することが含まれる。
本開示による医薬組成物は、単回単位用量として、及び／または複数の単回単位用量として、大量に調製、包装、及び／または販売されてもよい。本明細書で使用される場合、「単位用量」とは、所定量の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子）を含む医薬組成物の個別量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与されることとなる活性成分の投与量、及び／または例えばそのような投与量の半分もしくは３分の１などのそのような投与量の好都合な部分量に等しい。
医薬組成物は、種々の投与経路及び投与方法に適した種々の形態で調製されてもよい。一実施形態では、そのような組成物は、液体形態で調製されるか、または凍結乾燥される（例えば、４℃未満で凍結して保管される）。例えば、医薬組成物は、液体剤形（例えば、乳剤、マイクロ乳剤、ナノ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤）、注射用形態、固体剤形（例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤）、局所及び／または経皮投与用の剤形（例えば、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤、及び貼付剤）、懸濁剤、散剤、ならびに他の形態で調製されてもよい。
経口投与及び非経口投与用の液体剤形として、医薬的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、ナノ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及び／またはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒など、可溶化剤、ならびに乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステルなどの乳化剤、ならびにこれらの混合物を含んでもよい。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、追加の治療薬及び／または予防薬、追加の薬剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤、及び／または芳香剤を含むことができる。非経口投与のためのある特定の実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／またはそれらの組み合わせと混合される。
注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁剤は、適切な分散剤または湿潤剤、及び／または懸濁化剤を使用して公知の技術に従って製剤化されてもよい。滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤及び／または溶媒中の、例えば１，３－ブタンジオール中の液剤としての、滅菌注射用液剤、懸濁剤、及び／または乳剤であってもよい。使用可能な許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として慣習的に用いられる。この目的のために、合成モノ－またはジグリセリドを含めた任意の無刺激性の不揮発性油を用いることができる。オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製に使用することができる。
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通してろ過することによって、及び／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。
活性成分の効果を長引かせるために、皮下または筋肉内注射からの活性成分の吸収を遅延させることが往々にして望ましい。これは、難水溶性を有する結晶質または非晶質材料の懸濁液の使用によって達成することができる。その場合の薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、溶解速度は結晶サイズ及び結晶形に依存し得る。代替的に、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁させることにより達成される。注射用デポー形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中にマイクロカプセル化された薬物のマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比率及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射用製剤は、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロ乳剤に薬物を閉じ込めることによって調製される。
直腸または膣投与用の組成物は、典型的には、周囲温度では固体であるが体温では液体であり、したがって直腸または膣腔内で溶解して活性成分を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコール、または坐薬ワックスなどの適切な非刺激性賦形剤と組成物を混合することによって調製することができる坐薬である。
本発明の化合物の局所及び／または経皮投与用の剤形として、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤、及び／または貼付剤を挙げることができる。一般に、活性成分は、医薬に許容される担体、及び必要に応じて任意の必要とされる保存剤及び／または緩衝剤と滅菌条件下で混合される。加えて、本開示は、経皮貼付剤の使用を企図しており、これは、多くの場合、身体への化合物の制御送達をもたらすという追加の利点を有する。そのような剤形は、適切な媒体中に化合物を溶解させるまたは分配することによって調製されてもよい。代替的にまたは追加的に、速度制御膜を提供することによって、及び／または化合物をポリマーマトリックス及び／またはゲル中に分散させることによって、速度を制御してもよい。
本明細書に記載の皮内医薬組成物の送達に使用するのに適したデバイスとして、短針デバイス、例えば、米国特許第４，８８６，４９９号、第５，１９０，５２１号、第５，３２８，４８３号、第５，５２７，２８８号、第４，２７０，５３７号、第５，０１５，２３５号、第５，１４１，４９６号、及び第５，４１７，６６２号に記載されるものが挙げられる。皮内組成物は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３４８５０号に記載されるもの及びこれらと機能的同等物などの、針の皮膚への有効な貫通長さを限定するデバイスによって投与されてもよい。角質層を突き通し、真皮に達するジェットを生成する液体ジェット式注射器及び／または針を介して液体組成物を真皮に送達するジェット式注射デバイスが適切である。ジェット式注射デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号、第５，５９９，３０２号、第５，３３４，１４４号、第５，９９３，４１２号、第５，６４９，９１２号、第５，５６９，１８９号、第５，７０４，９１１号、第５，３８３，８５１号、第５，８９３，３９７号、第５，４６６，２２０号、第５，３３９，１６３号、第５，３１２，３３５号、第５，５０３，６２７号、第５，０６４，４１３号、第５，５２０，６３９号、第４，５９６，５５６号、第４，７９０，８２４号、第４，９４１，８８０号、第４，９４０，４６０号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９７／３７７０５号及び第ＷＯ９７／１３５３７号に記載されている。圧縮ガスを使用して粉末形態のワクチンを皮膚の外層から真皮まで加速する弾道粉末／粒子送達デバイスは適切である。代替的にまたは追加的に、従来の注射器を皮内投与の古典的なマントー法で使用してもよい。
局所投与に適した製剤として、液体及び／または半液体製剤、例えば、リニメント剤、ローション剤、水中油型及び／または油中水型乳剤、例えば、クリーム剤、軟膏剤、及び／またはペースト剤、及び／または液剤、及び／または懸濁剤が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％～約１０％（ｗｔ／ｗｔ）の活性成分を含んでもよいが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度と同程度に高くてもよい。局所投与用製剤は、本明細書に記載の追加成分の１つ以上をさらに含んでもよい。
医薬組成物は、口腔を介した肺投与に適した製剤で調製、包装、及び／または販売されてもよい。そのような製剤は、活性成分を含む乾燥粒子を含んでもよい。そのような組成物は、好都合には、散剤を分散するように噴射剤の流れを向けることができる乾燥粉末リザーバーを含むデバイスを使用するか、及び／または密封容器内の低沸点噴射剤に溶解及び／または懸濁された活性成分を含むデバイスなどの自己噴射性溶媒／粉末分配容器を使用する投与用の乾燥粉末の形態である。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉末希釈剤を含んでもよく、好都合には単位用量形態で提供される。
低沸点噴射剤には、一般に、大気圧で６５°Ｆ未満の沸点を有する液体推進剤が含まれる。一般に、噴射剤は組成物の５０％～９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよく、活性成分は組成物の０．１％～２０％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよい。噴射剤は、液体非イオン性及び／または固体アニオン性界面活性剤及び／または固体希釈剤（活性成分を含む粒子と同程度の粒径を有し得る）などの追加成分をさらに含んでもよい。
肺送達用に製剤化された医薬組成物は、液剤及び／または懸濁剤の液滴の形態で活性成分を提供してもよい。そのような製剤は、活性成分を含む、任意選択で滅菌された水性及び／または希釈アルコール液剤及び／または懸濁剤として調製、包装、及び／または販売されてもよく、任意の噴霧化及び／または微粒化デバイスを使用して好都合に投与されてもよい。そのような製剤は、限定するものではないが、サッカリンナトリウムなどの香味剤、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、及び／またはメチルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤を含めた１つ以上の追加成分をさらに含んでもよい。この投与経路によってもたらされる液滴は、約１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲内の平均直径を有してもよい。
肺送達に有用であると本明細書に記載される製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み、平均粒子が約０．２μｍ～５００μｍの平均粒子を有する粗い散剤である。そのような製剤は、嗅ぎタバコを摂取する方法で、すなわち鼻の近くに保持された散剤の容器から鼻道を介して急速に吸入することにより投与される。
経鼻投与に適した製剤は、例えば、約０．１％（ｗｔ／ｗｔ）という少量から１００％（ｗｔ／ｗｔ）という多量まで活性成分を含んでもよく、本明細書に記載の追加成分の１つ以上を含んでもよい。医薬組成物は、口腔投与に適した製剤で調製、包装、及び／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、従来の方法を使用して作製された錠剤及び／または舐剤の形態であってよく、例えば、活性成分は０．１％～２０％（ｗｔ／ｗｔ）であり、残部は経口溶解性及び／または分解性組成物、ならびに任意選択で本明細書に記載の追加成分の１つ以上を含んでもよい。あるいは、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む散剤及び／またはエアロゾル化及び／または微粒化された液剤及び／または懸濁剤を含んでもよい。そのような粉末化、エアロゾル化、及び／またはエアロゾル化製剤は、分散されたときに、約０．１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲内の平均粒子及び／または液滴サイズを有してもよく、さらに本明細書に記載の任意の追加成分の１つ以上を含んでもよい。
医薬組成物は、眼への投与に適した製剤で調製、包装、及び／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、水性または油性液体賦形剤中に活性成分が０．１／１．０％（ｗｔ／ｗｔ）の液剤及び／または懸濁剤を含めた点眼薬の形態であってもよい。そのような液滴は、緩衝剤、塩、及び／または本明細書に記載の他の任意の追加成分の１つ以上をさらに含んでもよい。有用である眼に投与可能な他の製剤として、微結晶形態及び／またはリポソーム製剤中に活性成分を含むものが挙げられる。点耳薬及び／または点眼薬は、本開示の範囲内であることが企図される。
定義
投与すること：本明細書で使用される場合、「投与すること」は、対象または患者に組成物を送達する方法を指す。投与方法は、身体の特定の領域または系への送達を標的とする（例えば、特異的に送達する）ように選択することができる。例えば、投与は、非経口のもの（例えば、皮下、皮内（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、髄腔内、病巣内、または頭蓋内注射、ならびに任意の適切な注入技術）、経口、経皮、もしくは皮内（ｉｎｔｒａ－ｄｅｒｍａｌ）、皮内（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、直腸内、膣内、局所（例えば、散剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤、及び／または液滴剤による）、粘膜、鼻腔、口腔、経腸、硝子体、腫瘍内、舌下、鼻腔内のもの；気管内注入、気管支注入、及び／または吸入によるもの；経口スプレー剤及び／または散剤、鼻腔スプレー、及び／またはエアロゾルとしてのもの、及び／または門脈カテーテルを通したものであってもよい。
およそ、約：本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の値に適用される場合、用語「およそ」または「約」は、述べられた参照値と類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、述べられた参照値のいずれかの方向（それを超えるまたはそれ未満）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満に含まれる値の範囲を指す。例えば、ＬＮＰの脂質成分中の所与の化合物の量の文脈で使用されるとき、「約」は、記載された値の＋／－５％を意味し得る。例えば、約４０％の所与の化合物を有する脂質成分を含むＬＮＰは、３０～５０％の化合物を含み得る。別の例では、少なくとも約３０％の肝細胞への送達は、２５～３５％の肝細胞への送達を含み得る。
がん：本明細書で使用される場合、「がん」は、異常な及び／または制御されていない細胞増殖を伴う状態であり、例えば、細胞のＧ１期の進行の制御が解除されている状態である。例示的な非限定的ながんとして、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌及び下咽頭癌、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄異形成症候群（難治性貧血及び難治性血球減少が含まれる）、骨髄増殖性の新生物または疾患（真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、及び原発性骨髄線維症が含まれる）、肝癌（例えば、肝細胞癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔癌及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織における肉腫、皮膚の基底細胞癌及び扁平上皮細胞癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウイルムス腫瘍、ならびにがん治療によって生じる二次がんが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、がんは、肝癌（例えば、肝細胞癌）または結腸直腸癌である。他の実施形態では、がんは、血液ベースのがんまたは造血と関連するがんである。
コンジュゲートされた：本明細書で使用される場合、「コンジュゲートされた」という用語は、２つ以上の部分に関して使用されるとき、それらの部分が、直接、または連結作用物質として働く１つ以上の追加部分を介して互いに物理的に会合または連結されて十分に安定な構造が形成され、その結果、それらの部分が、該構造が使用される条件（例えば、生理学的条件）下で物理的に会合された状態を保持することを意味する。幾つかの実施形態では、２つ以上の部分は、直接共有化学結合によってコンジュゲートされてもよい。他の実施形態では、２つ以上の部分は、イオン結合または水素結合によってコンジュゲートされてもよい。
接触させること：本明細書で使用される場合、「接触させる」という用語は、２つ以上の実体の間で物理的な連結が確立されることを意味する。例えば、細胞をｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子組成物と接触させることは、細胞とｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子とが物理的な連結を共有するようにされること意味する。ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、及びｅｘ ｖｉｖｏのいずれにおいても、細胞を外部の実体と接触させる方法は、生物学的分野で周知である。本開示の例示的な実施形態では、哺乳動物細胞を組成物（例えば、本開示のナノ粒子または医薬組成物）と接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｖｏで実施される。例えば、脂質ナノ粒子組成物と、（生物（例えば、哺乳動物）内に配置され得る細胞（例えば、哺乳動物細胞）とを接触させることは、任意の適切な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下投与を含めた、生物への非経口投与）によって実施されてもよい。ｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する細胞については、組成物（例えば、脂質ナノ粒子）及び細胞は、例えば、細胞の培養培地に組成物を添加することによって接触させてもよく、トランスフェクションを伴うか、またはトランスフェクションをもたらしてもよい。さらに、複数の細胞をナノ粒子組成物に接触させてもよい。
送達すること：本明細書で使用される場合、「送達すること」という用語は、実体を目的地に提供することを意味する。例えば、治療薬及び／または予防薬を対象に送達することは、治療薬及び／または予防薬を含むＬＮＰを対象に投与すること（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路による）を含んでもよい。哺乳動物または哺乳動物細胞へのＬＮＰの投与は、１つ以上の細胞を脂質ナノ粒子と接触させることを含んでもよい。
カプセル化する：本明細書で使用される場合、「カプセル化する」という用語は、封入する、囲い込む、または包み込むことを意味する。幾つかの実施形態では、化合物、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または他の組成物は、完全にカプセル化されても、部分的にカプセル化されても、または実質的にカプセル化されてもよい。例えば、幾つかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子、例えば、リポソームにカプセル化されてもよい。
カプセル化効率：本明細書で使用される場合、「カプセル化効率」は、ＬＮＰの調製に使用される治療薬及び／または予防薬の初期総量に対する、ＬＮＰの一部となる治療薬及び／または予防薬の量を指す。例えば、組成物に最初に提供された合計１００ｍｇの治療薬及び／または予防薬のうち９７ｍｇの治療薬及び／または予防薬がＬＮＰにカプセル化されるならば、カプセル化効率は９７％として得ることができる。本明細書で使用される場合、「カプセル化」は、完全な、実質的な、または部分的な封入、閉じ込め、囲い込み、または包み込みを指すことができる。
強化された送達：本明細書で使用される場合、「強化された送達」という用語は、対照ナノ粒子による目的の標的細胞（例えば、標的細胞）への核酸（例えば、治療薬用及び／または予防用ｍＲＮＡ）の送達レベルと比較して、より多く（例えば、少なくとも１０％多く、少なくとも２０％多く、少なくとも３０％多く、少なくとも４０％多く、少なくとも５０％多く、少なくとも１．５倍多く、少なくとも２倍多く、少なくとも３倍多く、少なくとも４倍多く、少なくとも５倍多く、少なくとも６倍多く、少なくとも７倍多く、少なくとも８倍多く、少なくとも９倍多く、少なくとも１０倍多く）の核酸（例えば、治療薬用及び／または予防用ｍＲＮＡ）がナノ粒子によって目的の標的細胞へ送達されることを意味する。例えば、本開示の標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる「強化された送達」は、標的細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰと比較することによって評価することができる。標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの特定の細胞（例えば、標的細胞）への送達のレベルは、フィトセロール含有ＬＮＰを使用して標的細胞で産生されるタンパク質の量を、標的細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰに対して比較することによって（例えば、フローサイトメトリーを使用した平均蛍光強度によって）、標的細胞送達増強脂質を使用してトランスフェクトされた標的細胞の百分率（％）を標的細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰに対して比較することによって（例えば、定量的フローサイトメトリーによって）、あるいは標的細胞送達増強脂質を使用したときのｉｎ ｖｉｖｏでの標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量を標的細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰに対して比較することによって、測定することができる。標的細胞へのナノ粒子の強化された送達は、治療されている対象において決定される必要はなく、動物モデルなどの代用物（例えば、マウスモデルまたは非ヒト霊長類モデル）において決定されてもよいことが理解されよう。例えば、標的細胞への強化された送達を決定する場合、マウスまたはＮＨＰモデル（例えば、実施例に記載されるようなもの）を使用することができ、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡの送達は、標的細胞（例えば、肝臓及び／または脾臓からのもの）において、標的細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰと比較して評価することができる（例えば、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡法など）。
有効量：本明細書で使用される場合、薬剤の「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用される文脈に依存する。例えば、本開示の脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）中の標的細胞送達増強脂質の量の文脈において、標的細胞送達増強脂質の有効量は、標的細胞送達増強脂質を含まない脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）と比較したときに、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）によって有益なまたは所望の結果がもたらされる非限定的な例として、トランスフェクトされた細胞の百分率が増大すること、及び／または脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）に会合された／カプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現のレベルが増大することが挙げられる。有効量の脂質ナノ粒子が対象における標的細胞によって取り込まれるように、標的細胞送達増強脂質を含有する脂質ナノ粒子を投与する文脈において、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの有効量は、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較したときに、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。対象における有益なまたは所望の結果の非限定的な例として、標的細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較したときに、トランスフェクトされた細胞の百分率が増大すること、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰに会合された／カプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現のレベルが増大すること、及び／または標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰに会合された／カプセル化された核酸、またはそのコードされたタンパク質のｉｎ ｖｉｖｏでの予防または治療効果が増大することが挙げられる。幾つかの実施形態では、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの治療的有効量は、感染症、疾患、障害、及び／または状態を患うかまたはそれに罹患しやすい対象に投与されたときに、そうした感染症、疾患、障害、及び／または状態を治療する、それらの症状を改善する、診断する、予防する、及び／またはそれらの発症を遅延させるのに十分である。別の実施形態では、脂質ナノ粒子の有効量は、標的細胞の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上において所望のタンパク質の発現をもたらすのに十分である。例えば、標的細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの有効量は、単回の静脈内注射後に、肝細胞の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、または３５％にトランスフェクションをもたらす量であり得る（例えば、実施例５に記載される通り）。
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、以下の事象の１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップの形成、及び／または３’末端プロセシングによる）、（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
ｅｘ ｖｉｖｏ：本明細書で使用される場合、「ｅｘ ｖｉｖｏ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはそれらの細胞もしくは組織）の外で起こる事象を指す。ｅｘ ｖｉｖｏ事象は、天然（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）環境から最小限に改変された環境で起こり得る。
フラグメント：「フラグメント」は、本明細書で使用される場合、一部分を指す。例えば、タンパク質のフラグメントとして、培養細胞から単離された完全長タンパク質を消化することによって得られるポリペプチド、または組換えＤＮＡ技術を通して得られるポリペプチドが挙げられてもよい。タンパク質のフラグメントは、例えば、タンパク質のフラグメントがタンパク質の機能活性を保持するように１つ以上の機能性ドメインを含む、タンパク質の一部分であり得る。
ＧＣリッチ：本明細書で使用される場合、「ＧＣリッチ」という用語は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基、あるいはその誘導体または類似体を含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはその任意の部分（例えば、ＲＮＡエレメント）の核酸塩基組成物であって、ＧＣ含量が約５０％超であるものを指す。「ＧＣリッチ」という用語は、限定するものではないが、遺伝子、非コード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡエレメント、配列モチーフ、またはその任意の個別の配列、フラグメント、もしくはセグメントを含めたポリヌクレオチドのすべてまたは一部分であって、約５０％のＧＣ含量を含むものを指す。本開示の幾つかの実施形態では、ＧＣリッチなポリヌクレオチドまたはその任意の一部分は、グアニン（Ｇ）及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基のみから構成される。
ＧＣ含量：本明細書で使用される場合、「ＧＣ含量」という用語は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはその一部分（例えば、ＲＮＡエレメント）における、グアニン（Ｇ）核酸塩基及びシトシン（Ｃ）核酸塩基またはその誘導体もしくは類似体である核酸塩基の（ＤＮＡ及びＲＮＡにおける、アデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）ならびにその誘導体または類似体を含めた、可能な核酸塩基の総数からの）百分率を指す。「ＧＣ含量」という用語は、限定するものではないが、遺伝子、非コード領域、５’もしくは３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡエレメント、配列モチーフ、またはその任意の個別の配列、フラグメント、もしくはセグメントを含めたポリヌクレオチドのすべてまたは一部分を指す。
異種：本明細書で使用される場合、「異種」は、配列（例えば、アミノ酸配列またはアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）が、所与のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに通常は存在しないことを示す。例えば、あるタンパク質のドメインまたはモチーフに対応するアミノ酸配列は、第２のタンパク質に対して異種であり得る。
単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、会合していた成分の少なくとも幾つかから分離された（天然または実験的状況であるかにかかわらず）、物質または実体を指す。分離された物質は、それらが会合していた物質に対して様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質及び／または実体は、それらが最初に会合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上から分離されてもよい。幾つかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、または約９９％超純粋である。本明細書で使用される場合、物質が実質的に他の成分を含まない場合、それは「純粋」である。
コザック配列：「コザック配列」（「コザックコンセンサス配列」とも呼ばれる）という用語は、遺伝子またはオープンリーディングフレームの発現を強化するための翻訳開始エンハンサーエレメントを指し、真核生物では５’ＵＴＲに位置する。コザックコンセンサス配列は、開始コドン（ＡＵＧ）周囲の単一変異がプレプロインスリン遺伝子の翻訳に及ぼす影響が解析された後、元々は配列ＧＣＣＲＣＣ（式中、Ｒ＝プリン）として定義されていた（Ｋｏｚａｋ（１９８６）Ｃｅｌｌ ４４：２８３－２９２）。本明細書に開示のポリヌクレオチドは、コザックコンセンサス配列、またはその誘導体もしくは修飾を含む。（翻訳エンハンサーの組成及びその使用方法の例については、Ａｎｄｒｅｗｓ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，８０７，７０７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙの米国特許第５，７２３，３３２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、Ｗｉｌｓｏｎの米国特許第５，８９１，６６５号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
読み漏らし：「読み漏らし」として公知の現象は、ＰＩＣが開始コドンを読み飛ばし、代わりに、代替のまたは代わりの開始コドンが認識されるまで下流へとスキャニングを継続することによって起こり得る。発生頻度によっては、ＰＩＣによる開始コドンの読み飛ばしによって翻訳効率が減少することがある。さらに、この下流ＡＵＧコドンからの翻訳が起こる可能性があり、これによって、所望の治療応答を誘発できない可能性がある望ましくない異常な翻訳産物が産生されることとなる。場合によっては、異常な翻訳産物が実際に有害な応答を引き起こす可能性がある（Ｋｒａｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２３（４）：５０１－５０７）。
リポソーム：本明細書で使用される場合、「リポソーム」とは、水性内部を封入する脂質含有膜を含む構造を意味する。リポソームは、１つ以上の脂質膜を有してもよい。リポソームには、単層リポソーム（当技術分野では単層膜リポソームとしても公知である）及び多層リポソーム（当技術分野では多重膜リポソームとしても公知である）が含まれる。
転移：本明細書で使用される場合、「転移」という用語は、がんが原発腫瘍として最初に発生した場所から体内の離れた場所に広がるプロセスを意味する。このプロセスの結果として発生した二次腫瘍は、「転移物」と呼ばれることがある。
修飾された：本明細書で使用される場合、「修飾された」または「修飾」は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の変化した状態、または組成もしくは構造の変化を指す。ポリヌクレオチドは、化学的、構造的、及び／または機能的な方法を含めた様々な方法で修飾されてもよい。例えば、ポリヌクレオチドは、１つ以上のＲＮＡエレメントの組み込みによって構造的に改変されてもよく、ここで、ＲＮＡエレメントは、１つ以上の機能（例えば、翻訳調節活性）をもたらす配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含む。したがって、本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上の修飾から構成されてもよい（例えば、１つ以上の化学的、構造的、または機能的修飾を、それらの任意の組み合わせを含めて、含んでもよい。）
修飾された：本明細書で使用される場合、「修飾された」は、本開示の分子の変化した状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的な方法を含めた多くの方法で修飾されてもよい。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡ分子は、例えば、天然のリボヌクレオチドであるＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関する場合、非天然ヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。キャップ構造などの非古典的なヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるが、「修飾された」とは見なされない。
ｍＲＮＡ：本明細書で使用される場合、「ｍＲＮＡ」は、メッセンジャーリボ核酸を指す。ｍＲＮＡは、天然に存在するものであっても、または天然に存在しないものであってもよい。例えば、ｍＲＮＡは、修飾された及び／または天然に存在しない成分、例えば、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーを含んでもよい。ｍＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ｍＲＮＡは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有してもよい。ｍＲＮＡが翻訳されると、例えば、哺乳動物細胞内でｍＲＮＡがｉｎ ｖｉｖｏで翻訳されると、ポリペプチドが産生され得る。従来より、ｍＲＮＡ分子の基本成分には、少なくとも１つのコード領域、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ、及びポリＡ配列が含まれる。
ナノ粒子：本明細書で使用される場合、「ナノ粒子」は、約１０００ｎｍ未満のスケールで、同じ材料のバルク試料と比較したときに新規な特性を示す、任意の１つの構造的特徴を有する粒子を指す。通常、ナノ粒子は、約５００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満、または約１００ｎｍのスケールで、任意の１つの構造的特徴を有する。また、通常、ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍから約２００ｎｍ、または約７０～約１２０ｎｍのスケールで任意の１つの構造的特徴を有する。例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１～１０００ｎｍのオーダーの１つ以上の寸法を有する粒子である。例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１０～５００ｎｍのオーダーの１つ以上の寸法を有する粒子である。例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約５０～２００ｎｍのオーダーの１つ以上の寸法を有する粒子である。球状ナノ粒子であれば、例えば、約５０～１００または７０～１２０ナノメートルの直径を有するであろう。ナノ粒子は、ほとんどの場合、その輸送及び特性に関して、一単位としての挙動を示す。ナノ粒子を対応するバルク材料と差別化する新規な特性は、典型的には、１０００ｎｍ未満のサイズ尺度または約１００ｎｍのサイズで生じるものであるが、ナノ粒子のサイズは、例えば、楕円形、管状などでは、より大きいものであってもよいことに留意されたい。ほとんどの分子のサイズが上記の概要に当てはまることになるが、通常、個々の分子はナノ粒子とは呼ばれない。
核酸：本明細書で使用する場合、「核酸」という用語は、その最も広い意味で使用され、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質を包含する。これらのポリマーは、ポリヌクレオチドと呼ばれることが多い。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとして、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ（β－Ｄ－リボ立体配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ立体配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ官能基を有する２’－アミノ－ＬＮＡ、及び２’－アミノ官能基を有する２’－アミノ－α－ＬＮＡが挙げられる））、またはそれらのハイブリッドが挙げられるが、これらに限定されない。
核酸構造：本明細書で使用される場合、「核酸構造」という用語（「ポリヌクレオチド構造」と互換的に使用される）は、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を構成する原子、化学的成分、エレメント、モチーフ、及び／または連結されたヌクレオチドの配列もしくはその誘導体もしくは類似体が、配置または構造化されたものを指す。この用語はまた、核酸の二次元または三次元状態を指す。したがって、「ＲＮＡ構造」という用語は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）を構成する原子、化学的成分、エレメント、モチーフ、及び／または連結されたヌクレオチドの配列もしくはその誘導体もしくは類似体が配置または構造化されたもの、及び／またはＲＮＡ分子の二次元及び／または三次元の状態を指す。核酸構造は、構造化の複雑さの増大に基づいて、「分子構造」、「一次構造」、「二次構造」、及び「三次構造」と本明細書で呼ばれる４つの構造化カテゴリーにさらに区別することができる。
核酸塩基：本明細書で使用される場合、「核酸塩基」（あるいは「ヌクレオチド塩基」または「窒素塩基」）という用語は、核酸に見られるプリンまたはピリミジン複素環式化合物を指し、それらには、核酸またはその一部分もしくはセグメントに向上した特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性）を付与する、天然に存在するプリン及びピリミジンの任意の誘導体または類似体が含まれる。アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルは、主に天然の核酸に見られる核酸塩基である。当該技術分野で公知であるような及び／または本明細書に記載されるような、他の天然、非天然、及び／または合成の核酸塩基を核酸に組み込むことができる。
ヌクレオシド／ヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」という用語は、核酸塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体もしくは類似体（これらも本明細書では「核酸塩基」と呼ばれる）に共有結合した糖分子（例えば、ＲＮＡ中のリボースまたはＤＮＡ中のデオキシリボース）またはその誘導体もしくは類似体を含有するが、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）を含まない化合物を指す。本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）に共有結合されたヌクレオシド、または核酸またはその一部分もしくはセグメントに向上した化学的及び／または機能的特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性）を付与するそれらの任意の誘導体、類似体、または修飾体を指す。
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用される場合、「ＯＲＦ」と略される「オープンリーディングフレーム」という用語は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子のセグメントまたは領域を指す。ＯＲＦは、開始コドンで始まって終止コドンで終了する連続した一続きの非重複インフレームコドンを含み、リボソームによって翻訳される。
患者：本明細書で使用される場合、「患者」は、治療を求めるかもしくは治療を必要としている対象、治療を要求する対象、治療を受けている対象、治療を受けようとする対象、または訓練を受けた専門家によって特定の疾患もしくは状態について治療を受けている対象を指す。特定の実施形態では、患者は、ヒトの患者である。幾つかの実施形態では、患者は、がん（例えば、肝癌または結腸直腸癌）を患う患者である。
医薬的に許容される：「医薬的に許容される」という語句は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を有することなくヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適した、安全な医学的判断の範囲内にあり、妥当な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物及び／または剤形を指すために本明細書で用いられる。
医薬的に許容される賦形剤：「医薬的に容認可能な賦形剤」という語句は、本明細書で使用される場合、患者において実質的に非毒性かつ非炎症性であるという特性を有する、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることが可能なビヒクル）を指す。賦形剤として、例えば、付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング、圧縮補助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤またはコーティング剤、香味剤、香料、流動促進剤（流動向上剤）、潤滑剤、保存剤、印刷インク、吸着剤、懸濁化剤または分散剤、甘味料、及び水和水が挙げられてもよい。例示的な賦形剤として、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファデンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるが、それらに限定されない。
医薬的に許容される塩：本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される塩」は、開示される化合物の誘導体であって、既存の酸または塩基部分がその塩形態に変換されることによって（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって）親化合物が修飾されたものを指す。医薬的に許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸性塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩；などが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な酸付加塩として、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ性土類金属塩として、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオン、例えば、限定するものではないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられる。本開示の医薬的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の従来の非毒性の塩が含まれる。本開示の医薬的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中または２つの混合物中で化学量論的な量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ． Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）に見出され、それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ポリペプチド：本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」または「目的のポリペプチド」という用語は、天然に（例えば、単離または精製されて）または合成的に生成することができる、典型的にはペプチド結合によって結合されたアミノ酸残基のポリマーを指す。
前開始複合体（ＰＩＣ）：本明細書で使用される場合、「前開始複合体」（あるいは「４３Ｓ前開始複合体」；「ＰＩＣ」と略される）という用語は、４０Ｓリボソームサブユニット、真核生物開始因子（ｅＩＦ１、ｅＩＦ１Ａ、ｅＩＦ３、ｅＩＦ５）、及びｅＩＦ２－ＧＴＰ－Ｍｅｔ－ｔＲＮＡｉ Ｍｅｔ三元複合体を含み、ｍＲＮＡ分子の５’キャップに結合し、結合後に５’ＵＴＲのリボソームスキャニングを実施するという固有の能力を有するリボ核タンパク質複合体を指す。
ＲＮＡ：本明細書で使用される場合、「ＲＮＡ」は、天然に存在しても、または天然に存在しなくてもよいリボ核酸を指す。例えば、ＲＮＡは、修飾された及び／または天然に存在しない成分、例えば、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーを含んでもよい。ＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有してもよい。例えば、ＲＮＡはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であってもよい。特定のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞内のｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏでの翻訳は、コードされたポリペプチドを産生し得る。ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる非制限的な群から選択されてもよい。
ＲＮＡエレメント：本明細書で使用される場合、「ＲＮＡエレメント」という用語は、生物学的機能をもたらし、及び／または生物学的活性（例えば、翻訳調節活性）を有する、ＲＮＡ分子の一部分、フラグメント、またはセグメントを指す。本明細書に記載されるものなどの１つ以上のＲＮＡエレメントを組み込むことによってポリヌクレオチドを修飾すると、１つ以上の望ましい機能的特性が修飾されたポリヌクレオチドにもたらされる。本明細書に記載されるようなＲＮＡエレメントは、天然に存在するものであっても、天然に存在しないものであっても、合成されたものであっても、操作されたものであっても、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。例えば、調節活性をもたらす天然に存在するＲＮＡエレメントには、ウイルス、原核生物、及び真核生物（例えば、ヒト）のトランスクリプトーム全体に見られるエレメントが含まれる。特定の真核生物のｍＲＮＡ及び翻訳されたウイルスＲＮＡにおけるＲＮＡエレメントは、細胞における多くの機能の媒介に関与していることが示されている。例示的な天然のＲＮＡエレメントとして、翻訳開始エレメント（例えば、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）Ｋｉｅｆｔ ｅｔ ａｌ．，（２００１）ＲＮＡ ７（２）：１９４－２０６を参照されたい）、翻訳エンハンサーエレメント（例えば、ＡＰＰ ｍＲＮＡ翻訳エンハンサーエレメント、Ｒｏｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７４（１０）：６４２１－６４３１を参照されたい）、ｍＲＮＡ安定性エレメント（例えば、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）、Ｇａｒｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８（２）：１１３－１２６を参照されたい）、翻訳抑制エレメント（例えば、Ｂｌｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｍｅｃｈ Ｄｅｖ １１０（１－２）：９７－１１２を参照されたい）、タンパク質結合ＲＮＡエレメント（例えば、鉄応答性エレメント、Ｓｅｌｅｚｎｅｖａ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４２５（１８）：３３０１－３３１０を参照されたい）、細胞質ポリアデニル化エレメント（Ｖｉｌｌａｌｂａ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ ２１（４）：４５２－４５７）、及び触媒ＲＮＡエレメント（例えば、リボザイム、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７８９（９－１０）：６３４－６４１を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
滞留時間：本明細書で使用される場合、「滞留時間」という用語は、前開始複合体（ＰＩＣ）またはリボソームが、ｍＲＮＡ分子に沿って個別の位置または場所を占有する時間を指す。
特異的送達：本明細書で使用される場合、「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、オフターゲット細胞（例えば、非標的細胞）と比較して、より多く（例えば、少なくとも１０％多く、少なくとも２０％多く、少なくとも３０％多く、少なくとも４０％多く、少なくとも５０％多く、少なくとも１．５倍多く、少なくとも２倍多く、少なくとも３倍多く、少なくとも４倍多く、少なくとも５倍多く、少なくとも６倍多く、少なくとも７倍多く、少なくとも８倍多く、少なくとも９倍多く、少なくとも１０倍多く）の治療薬及び／または予防薬がナノ粒子によって目的の標的細胞（例えば、哺乳動物の標的細胞、例えば、肝細胞または脾細胞）へ送達されることを意味する。特定の細胞へのナノ粒子の送達のレベルは、標的細胞で産生されるタンパク質の量を非標的細胞に対して比較することによって（例えば、フローサイトメトリーを使用した平均蛍光強度によって）、タンパク質を産生する標的細胞の百分率（％）を非標的細胞に対して比較することによって（例えば、定量的フローサイトメトリーによって）、
非標的細胞で産生されたタンパク質の量に対する標的細胞で産生されたタンパク質の量を、非標的細胞で産生された総タンパク質の量に対する前記標的細胞で産生された総タンパク質の量と比較することによって、
あるいは非標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量に対する標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量を、非標的細胞における治療薬及び／または予防薬全体の量に対する前記標的細胞における治療薬及び／または予防薬全体の量と比較することによって測定することができる。標的細胞へ特異的に送達するナノ粒子の能力は、治療されている対象において決定される必要はなく、動物モデルなどの代用物（例えば、マウスモデルまたはＮＨＰモデル）において決定されてもよいことが理解されよう。例えば、標的細胞への特異的送達を決定するために、マウスまたはＮＨＰモデル（例えば、実施例に記載されるようなもの）を使用することができ、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡの送達は、標的細胞（例えば、肝臓及び／または脾臓からのもの）において、標準的な方法（例えば、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡法など）によって非標的細胞と比較して評価することができる。
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的の性質または特性を完全またはほぼ完全な程度または度合いに呈する定性的な状態を指す。生物学分野の当業者であれば、生物学的及び化学的現象が、皆無ではないにせよ、完了に至り、及び／または完全な状態まで進行するか、あるいは絶対的な結果を達成または回避することは稀であることを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的現象に内在する完全性の潜在的な欠如を捕捉するために本明細書で使用される。
患う：疾患、障害、及び／または状態を「患う」個人は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状があると診断されているか、またはそれを示している。
標的細胞：本明細書で使用される場合、「標的細胞」は、目的の任意の１つ以上の細胞を指す。細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、または生物の組織もしくは臓器に見出すことができる。生物は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であり得る。標的細胞として、例えば、肝細胞（例えば、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせ）または脾細胞（例えば、脾実質細胞）が挙げられる。
標的化部分：本明細書で使用される場合、「標的化部分」は、特定の細胞型、組織型、及び／または臓器型へとナノ粒子を標的化し得る化合物または薬剤である。
治療剤：「治療剤」は、対象に投与されたときに、治療的、診断的、及び／または予防的効果を有し、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。
トランスフェクション：本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」という用語は、種（例えば、ｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド）を細胞に導入する方法を指す。
翻訳調節活性：本明細書で使用される場合、「翻訳調節活性」（「翻訳調節機能」と互換的に使用される）という用語は、翻訳装置の活性を調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）（例えば、調節する（ｒｅｇｕｌａｔｅ）、影響を与える、制御する、変える）生物学的な機能、機構、またはプロセスを指し、それらには、ＰＩＣ及び／またはリボソームの活性が含まれる。幾つかの態様では、所望の翻訳調節活性は、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進する及び／または強化する。幾つかの態様では、所望の翻訳調節活性は、読み漏らしを低減させる及び／または阻害する。対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、実験、診断、予防、及び／または治療目的で、本開示による組成物を投与し得る任意の生物を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなどの哺乳動物）、及び／または植物が含まれる。幾つかの実施形態では、対象は、患者であり得る。
治療すること：本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状または特徴を、部分的もしくは完全に軽減させる、改善する、好転させる、緩和する、その発症を遅延させる、その進行を阻害する、その重症度を低減させる、及び／またはその発生率を低減させることを指す。例えば、がんを「治療すること」は、腫瘍の生存、増殖、及び／または広がりを阻害することを指してもよい。治療は、疾患、障害、及び／または状態に関連する病態の発生のリスクを減少させる目的で、疾患、障害、及び／または状態の兆候を呈さない対象に、及び／または疾患、障害、及び／または状態の初期兆候のみを呈する対象に投与されてもよい。
予防すること：本明細書で使用される場合、「予防すること」という用語は、特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上症状または特徴の発症を部分的または完全に阻害することを指す。
腫瘍：本明細書で使用される場合、「腫瘍」は、良性または悪性を問わず、組織の異常な増殖である。
非修飾：本明細書で使用される場合、「非修飾」は、何らかの方法で修飾される前の任意の物質、化合物、または分子を指す。非修飾は、常にとは限らないが、野生型または天然型の生体分子を指し得る。分子は、各々の修飾分子が後続の修飾のための「非修飾」出発分子として働き得る一連の修飾を受け得る。
ウリジン含量：「ウリジン含量」または「ウラシル含量」という用語は互換的であり、ある特定の核酸配列に存在するウラシルまたはウリジンの量を指す。ウリジン含量またはウラシル含量は、絶対値（配列中のウリジンまたはウラシルの総数）として表すことも、または相対値（核酸配列中の核酸塩基の総数に対するウリジンまたはウラシルの百分率）として表すこともできる。
ウリジン修飾配列：「ウリジン修飾配列」という用語は、ウリジン含量が全体的または局所的に異なる（ウリジン含量を高くするか、または低くする）ように配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）を指すか、あるいは候補核酸配列のウリジン含量及び／またはウリジンパターンに対して異なるウリジンパターン（例えば、傾斜分布またはクラスター化）を有するように配列が最適化された核酸を指す。本開示の文脈では、「ウリジン修飾配列」及び「ウラシル修飾配列」という用語は、同義かつ互換的であると見なされる。
「高ウリジンコドン」は２つまたは３つのウリジンを含むコドンとして定義され、「低ウリジンコドン」は１つのウリジンを含むコドンとして定義され、「無ウリジンコドン」はウリジンを含まないコドンである。幾つか実施形態では、ウリジン修飾配列は、高ウリジンコドンの低ウリジンコドンでの置換、高ウリジンコドンの無ウリジンコドンでの置換、低ウリジンコドンの高ウリジンコドンでの置換、低ウリジンコドンの無ウリジンコドンでの置換、無ウリジンコドンの低ウリジンコドンでの置換、無ウリジンコドンの高ウリジンコドンでの置換、及びそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、高ウリジンコドンは、別の高ウリジンコドンで置き換えることができる。幾つかの実施形態では、低ウリジンコドンは、別の低ウリジンコドンで置き換えることができる。幾つかの実施形態では、無ウリジンコドンは、別の無ウリジンコドンで置き換えることができる。ウリジン修飾配列は、ウリジン富化またはウリジン希薄化されたものであり得る。
ウリジン富化：本明細書で使用される場合、「ウリジン富化」及び文法上の変形は、配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）のウリジン含量（絶対値で表現されるか、または百分率の値として表現される）の、対応する候補核酸配列のウリジン含量に対する増大を指す。ウリジン富化は、候補核酸配列のコドンを、より少ないウリジン核酸塩基を含有する同義コドンで置換することによって実施することができる。ウリジン富化は、全体的に（すなわち、候補核酸配列の全長に対して）または局所的に（すなわち、候補核酸配列の部分配列または領域に対して）行うことができる。
ウリジン希薄化：本明細書で使用される場合、「ウリジン希薄化」及び文法上の変形は、配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）のウリジン含量（絶対値で表現されるか、または百分率の値として表現される）の、対応する候補核酸配列のウリジン含量に対する減少を指す。ウリジン希薄化は、候補核酸配列のコドンを、より少ないウリジン核酸塩基を含有する同義コドンで置換することによって実施することができる。ウリジン希薄化は、全体的に（すなわち、候補核酸配列の全長に対して）または局所的に（すなわち、候補核酸配列の部分配列または領域に対して）行うことができる。
均等物及び範囲
当業者であれば、通常の実験のみを用いて、本明細書に記載の本開示による特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認することができるであろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される通りである。
特許請求の範囲では、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの冠詞は、それとは反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、１つまたは複数を意味し得る。群の１つ以上の成員間に「または」を含む請求項または説明は、それとは反対の指示がない限り、または文脈が明らかでない限り、該群の成員の１つ、複数、またはすべてが、所与の生成物もしくはプロセスに存在し、用いられ、または関連する場合、満たされていると見なされる。本開示は、該群の正確に１つの成員が所与の生成物もしくはプロセスに存在し、使用され、または関連する実施形態を含む。本開示は、該群の複数の、またはすべての成員が所与の生成物もしくはプロセスに存在し、使用され、または関連する実施形態を含む。
「含む」という用語は、オープンであることが意図され、追加の要素またはステップの包含を許容するが必要とはされないことが意図されることを留意されたい。「含む」という用語が本明細書で使用されるとき、「からなる」という用語もまた、包含され、開示される。
範囲が与えられている場合、端点が含まれる。さらに、特に明記しない限り、または文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、本開示の異なる実施形態で述べられた範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、文脈が明らかにそうではないことを示さない限り、該範囲の下限の単位の１０分の１までと見なすことができることを理解されたい。
引用されたすべての情報源、例えば、本明細書で引用された参考文献、出版物、データベース、データベースエントリ、及び技術は、引用に明示的に述べられていない場合でも、参照により本出願に組み込まれる。引用された出典と本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が優先するものとする。
本開示は、以下の実施例を参照することによって十分に理解されるであろう。しかしながら、これらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施形態が例証のみを目的とするものであり、それを考慮すれば様々な修正または変更が当業者に示唆され、そうした様々な修正または変更が本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。
本実施例は、標的細胞送達ＬＮＰの生理学的効果を実証するものであり、標的細胞による対象ＬＮＰの取り込みをさらに試験するように設計された。これらの実験は、ｉｎ ｖｉｖｏでの患者における標的細胞またはｅｘ ｖｉｖｏでの患者からの標的細胞で発現させるための治療分子を送達するためのＬＮＰの開発を支援するものである。
実施例
目次
実施例１：化合物の合成
本発明の代表的なイオン性脂質、例えば、式（ＩＩ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（ Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩｈ）、（Ｉ ＩＩｊ）、（Ｉ ＩＩｋ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ） 、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｂ －４）、（Ｉ ＶＩＩｂ－５）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＸＩ）、（Ｉ ＸＩ－ａ）、または（Ｉ ＸＩ－ｂ）の合成は、同時係属中の出願、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２３５２及びＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２２７１７（それらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
実施例２：ナノ粒子組成物の生成
Ａ．ナノ粒子組成物の生成
細胞への治療薬及び／または予防薬の送達に使用するための安全で有効なナノ粒子組成物を調べるために、一連の薬剤を調製し、試験した。具体的には、ナノ粒子組成物の脂質成分中の特定の要素及びその比率を最適化する。
ナノ粒子は、マイクロフルイディクス及び２つの流体流れ（そのうち一方は治療薬及び／または予防薬を含有し、他方が脂質成分を含有する）を混合するＴジャンクション合流などの混合プロセス用いて作製することができる。
脂質組成物は、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩＩ）、及び（ＩＩＩａ１～８）による脂質、及び／または化合物Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｑ、もしくはＭのいずれか、または非カチオン性ヘルパー脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬから入手可能なＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、またはオレイン酸など）、ＰＥＧ脂質（例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール、ＰＥＧ－ＤＭＧとしても公知であり、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬから入手可能である）、ならびにフィトステロール（任意選択でコレステロールなどの構造脂質を含む）を、溶媒中、例えばエタノール中、約、例えば、５０ｍＭの濃度で合わせることによって調製する。溶液は、保管する場合、例えば、－２０℃で冷蔵するべきである。脂質は、所望のモル比（例えば、以降の表２１を参照されたい）が得られるように合わせ、水及びエタノールで希釈して、最終脂質濃度が、例えば、約５．５ｍＭ～約２５ｍＭの間になるようにする。表２１のフィトステロール＊は、フィトステロール、または任意選択でフィトステロールをベータ－フィトステロール及びコレステロールなどの構造脂質と組み合わせたものを指す。
治療薬及び／または予防薬と脂質成分とを含むナノ粒子組成物は、脂質溶液と治療薬及び／または予防薬を含む溶液とを、脂質成分と治療薬及び／または予防薬との比（ｗｔ：ｗｔ）が約５：１～約５０：１の間となるように合わせることによって調製する。マイクロ流体ベースのシステムであるＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒを使用して、約１０ｍｌ／分～約１８ｍｌ／分の間の流速で脂質溶液を治療薬及び／または予防薬溶液に迅速に注入して、水とエタノールとの比が約１：１～約４：１の懸濁液を生成する。
ＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のＲＮＡの脱イオン水中溶液をｐＨ３～４の緩衝液（例えば、５０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液）で希釈して、ストック溶液を形成する。
ナノ粒子は、透析によって処理して、エタノールを除去し、緩衝液交換を達成することができる。カットオフ分子量が１０ｋＤａのＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒカセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用して、製剤を、一次生成物の体積の２００倍の体積のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）に対して２回透析する。最初の透析は、室温で３時間行う。次いで、製剤を４℃で一晩透析する。得られたナノ粒子懸濁液を０．２μｍ滅菌フィルター（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でろ過してガラスバイアルに入れ、クリンプクロージャーで密封する。０．０１ｍｇ／ｍｌ～０．１０ｍｇ／ｍｌのナノ粒子組成溶液が概ね得られる。
上記の方法によって、ナノ沈殿及び粒子形成が誘導される。限定するものではないが、Ｔジャンクション及び直接注入を含めた代替プロセスを使用して、同じナノ沈殿を達成してもよい。
Ｂ．ナノ粒子組成物の性質評価
Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用して、ナノ粒子組成物の粒径、多分散性指数（ＰＤＩ）、及びゼータ電位を決定することができる（粒径の決定は１×ＰＢＳ中で行われ、ゼータ電位の決定は１５ｍＭのＰＢＳ中で行われる）。
ナノ粒子組成物中の治療薬及び／または予防薬（例えば、ＲＮＡ）の濃度を決定するには、紫外・可視分光法を使用することができる。１×ＰＢＳで希釈した１００μＬの製剤を、メタノールとクロロホルムとの４：１（ｖ／ｖ）混合物９００μＬに添加する。混合後、溶液の吸光度スペクトルを、例えば、２３０ｎｍ～３３０ｎｍの間で、ＤＵ８００分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｅａ，ＣＡ）で記録する。ナノ粒子組成物中の治療薬及び／または予防薬の濃度は、組成物に使用される治療薬及び／または予防薬の吸光係数、ならびにある波長（例えば、２６０ｎｍ）での吸光度とある波長（例えば、３３０ｎｍ）でのベースライン値との差に基づいて算出することができる。
ＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、ＱＵＡＮＴ－ＩＴ（商標）ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して、ナノ粒子組成物によるＲＮＡのカプセル化を評価することができる。試料を、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）で約５μｇ／ｍＬ濃度に希釈する。５０μＬの希釈試料をポリスチレンの９６ウェルプレートに移し、５０μＬのＴＥバッファーまたは５０μＬの２％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶液をウェルに添加する。プレートを３７℃の温度で１５分間インキュベートする。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）試薬をＴＥ緩衝液で１：１００に希釈し、この溶液１００μＬを各ウェルに添加する。蛍光強度は、蛍光プレートリーダ（Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０ Ｍｕｌｔｉｌａｂｌｅｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、励起波長（例えば約４８０ｎｍ）及び発光波長（例えば約５２０ｎｍ）で測定することができる。試料の各々の蛍光値から試料ブランクの蛍光値を差し引き、インタクトな試料（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を添加しないもの）の蛍光強度を破壊された試料（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００の添加によって引き起こされたもの）の蛍光値で割ることによって遊離ＲＮＡの百分率を決定する。
Ｃ．ｉｎ ｖｉｖｏでの製剤試験
様々なナノ粒子組成物が治療薬及び／または予防薬をどのくらい効率的に標的細胞に送達するかを監視するために、特定の治療薬及び／または予防薬（例えば、修飾ＲＮＡ、または天然に存在するＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ）を含む異なるナノ粒子組成物を調製し、げっ歯類集団に投与する。マウスに、ナノ粒子組成物を含む単回用量を、脂質ナノ粒子製剤で静脈内、筋肉内、動脈内、または腫瘍内に投与する。場合によっては、マウスに用量を吸入させてもよい。用量サイズは、０．００１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよく、１０ｍｇ／ｋｇは、マウスの体重１ｋｇにつき１０ｍｇの治療薬及び／または予防薬がナノ粒子組成物に含まれる用量であることを表す。ＰＢＳを含む対照組成物も用いてもよい。
ナノ粒子組成物をマウスに投与すると、特定の製剤及びその用量の用量送達プロファイル、用量応答、及び毒性を、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、生物発光イメージング、または他の方法によって測定することができる。ｍＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、タンパク質発現の時間経過を評価することもできる。評価用にげっ歯動物から採取される試料には、血液、血清、及び組織（例えば、筋肉内注射部位からの筋肉組織及び内部組織）が含まれ得る。試料採取は、動物の屠殺を伴うことがある。
ｍＲＮＡを含むナノ粒子組成物は、治療薬及び／または予防薬を送達するための様々な製剤の有効性及び有用性の評価に有用である。ｍＲＮＡを含む組成物の投与によって誘導されるよりタンパク質発現のレベルの上昇は、ｍＲＮＡ翻訳及び／またはナノ粒子組成物のｍＲＮＡ送達効率の上昇の指標となるであろう。非ＲＮＡ成分は翻訳機構自体には影響を与えないと考えられるため、タンパク質発現のレベルの上昇は、所与のナノ粒子組成物による治療薬及び／または予防薬の送達効率が他のナノ粒子組成物または当該ナノ粒子組成物が非存在の場合と比べて上昇していることの指標であり得ると思われる。
実施例３：化合物３０１含有ＬＮＰの生体内分布及び薬理学的プロファイル
この実施例では、化合物３０１含有ＬＮＰを使用して、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ＮＰＩ－Ｌｕｃ）をラットへｉｎ ｖｉｖｏで送達し、血漿中及び様々な組織における様々な時点でのＬＮＰの生体内分布及び薬理学的プロファイルを評価した。
ラットに、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを１日目（群２～８）、または１日目、８日目、及び１５日目（群９～１６）に２ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、群１は非処置のままとした。表２２に、処置及び投与パラメータを要約する。
血漿試料及び組織は、投与された動物から０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１４４時間、及び１６８時間目に採取した。血漿中及び様々な組織中のＬＮＰレベルは、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。血漿中のｍＲＮＡレベルはＡｔｌａｓによって決定し、様々な組織中のｍＲＮＡレベルは当技術分野で公知の方法によって決定した。
ＬＮＰレベルの分析結果を図１に示す。図１は、１日目及び１５日目の示した時点での様々な組織及び血漿中の化合物３０１含有脂質の濃度を示している。投与されたラットの肝臓及び卵巣から得られた試料は、化合物３０１含有脂質の最高濃度を示した。ｍＲＮＡレベルの分析結果を図２に示す。図２は、１日目及び１５日目の示した時点での様々な組織及び血漿中のＮＰＩ Ｌｕｃ ｍＲＮＡ濃度を示している。最高のＮＰＩ Ｌｕｃ ｍＲＮＡ濃度は、１日目に血漿で観察され、脾臓、肝臓、及び卵巣が続いた。１５日目に、ＮＰＩ Ｌｕｃ ｍＲＮＡの発現は血漿で最も高く、脾臓、肝臓、及び肺が続いた。
ＬＮＰの薬物動態特性も、血漿及び様々な組織で評価した。その結果を表２３に示す。Ｃｍａｘ及び曲線下面積（ＡＵＣ）は、血漿から得られた試料で最も高かった。
実施例４：化合物３０１含有ＬＮＰの追加の薬理学的プロファイル
この実施例では、化合物３０１、化合物１８、または化合物５０含有ＬＮＰを使用して、ヒトＥＰＯならびにマイクロＲＮＡ １２６（ｍｉＲ １２６）及びｍｉＲ １４２をコードするｍＲＮＡをマウスに送達し、脂質代謝を評価した。
マウスに、ヒトＥＰＯ及びｍｉＲ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを０．５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。肝臓及び脾臓におけるヒトＥＰＯの代謝を、２時間目、６時間目、２４時間目、４８時間目、７２時間目、及び９６時間目、及び１９２時間目に評価した。
その結果を図３に示す。図３は、化合物３０１含有ＬＮＰが、化合物５０含有ＬＮＰ及び化合物１８含有ＬＮＰと比較して、より遅い肝臓代謝を示すことを実証している。化合物１８含有ＬＮＰは、投与後数時間以内で検出できなくなった。
実施例５：肝臓における化合物３０１含有ＬＮＰの送達の強化
この実施例では、化合物３０１含有ＬＮＰまたは化合物１８含有ＬＮＰを使用して、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ＮＰＩ－Ｌｕｃ）を非ヒト霊長類（ＮＨＰ）に送達し、血漿及び様々な組織におけるＬＮＰの細胞生体内分布を評価した。
ＮＨＰには、いずれかのＬＮＰを２ｍｇ／ｋｇで１回静脈内投与した。表２４に、処置及び投与パラメータ及びＬＮＰ製剤を要約する。この実施例に使用されるＰＥＧ脂質は、化合物４２８（ＰＥＧ１とも呼ばれる）に相当する。
投与された動物から肝臓試料を採取し、ＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質の定量及びＮＰＩ－Ｌｕｃ免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）のために処理した。ＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質定量は、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ （ＭＳＤ）からのＥＬＩＳＡを製造業者のプロトコルに従って使用して実施した。簡単に説明すると、ＭＳＤプレートを捕捉抗体で一晩プレコートした。次いで残留抗体を除去し、プレートをＳｕｐｅｒ Ｂｌｏｃｋ試薬でブロックした。次いでホモジナイズした試料をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、二次抗体を添加した。洗浄ステップを繰り返し、次いで抗ウサギＳｕｌｆｏｔａｇ抗体を試料に添加した。最後の洗浄ステップの後、ＭＳＤ読み取り緩衝液を添加し、試料をＭＳＤリーダで分析した。
その結果を図４Ａ～４Ｂ及び図５に示す。図４Ａは、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物３０１ＬＮＰを投与された動物において、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物１８ＬＮＰを投与された動物と比較したときに、平均約３倍の肝細胞（例えば、肝実質細胞）発現の増大を示している。図４Ｂは、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物３０１ＬＮＰを投与された動物の脾実質細胞において、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物１８ＬＮＰを投与された動物と比較したときに、平均約２倍のＮＰＩ－Ｌｕｃ発現の増大を示している。ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡの非肝実質細胞発現は、１０％未満であると推定した。投与された動物の肝臓試料からの例示的なＩＨＣ染色を図５に示す。
肝臓試料中のＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質レベルを図６に示す。図６は、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物３０１ＬＮＰを投与された動物からの試料において、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡカプセル化化合物１８ＬＮＰを投与された動物と比較したときにおよそ６．５倍高いＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質が発現されたことを示している。
実施例６：非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるヒトＥＰＯタンパク質の血漿中薬物動態
この実施例では、化合物３０１または化合物Ｉ－１８含有ＬＮＰを使用して、ヒトＥＰＯならびにマイクロＲＮＡ１２６（ｍｉＲ１２６）及びｍｉＲ１４２をコードするｍＲＮＡをＮＨＰに送達した。様々なＬＮＰによって送達されるヒトＥＰＯの薬物動態を評価した。
ＮＨＰに、示したＬＮＰを０．１ｍｇ／ｋｇで１日目、１５日目、及び２９日目に静脈内投与した。表２５に、処置及び投与パラメータを要約する。示した時点で、ＥＬＩＳＡベースのタンパク質分析のために試料を採取した。この実施例に使用されるＰＥＧ脂質は、化合物４２８（ＰＥＧ１とも呼ばれる）に相当する。
その結果を図７Ａ～７Ｂに示す。図７Ａ～７Ｂは、１日目、１５日目、及び２９日目に、化合物３０１含有ＬＮＰを投与されたＮＨＰの血漿中で化合物１８含有ＬＮＰを投与されたＮＨＰと比較して高いヒトＥＰＯタンパク質レベルを示している。表２６に示すように、Ｃｍａｘ及び曲線下面積（ＡＵＣ）は、化合物１８含有ＬＮＰと比較して、化合物３０１含有ＬＮＰの方が高かった。ヒトＥＰＯの半減期は、すべての群で同等であった。この実施例に使用されるＰＥＧ脂質は、化合物４２８（ＰＥＧ１とも呼ばれる）に相当する。
化合物３０１含有ＬＮＰを投与した１５日目及び２９日目からの結果は、１日目の投与と比較して、血漿中のヒトＥＰＯのレベルが同様であることを示している。これは、化合物３０１含有ＬＮＰの反復投与がペイロードの血漿レベル（発現）の低減をもたらさないことを示しており、化合物３０１含有ＬＮＰが血中クリアランスの加速を促進しないことを示唆している。
実施例７：化合物３０１含有ＬＮＰのモル組成が肝実質細胞におけるｍＲＮＡ発現に及ぼす効果
この実施例では、化合物３０１含有ＬＮＰを使用して、ヒトＥＰＯならびにマイクロＲＮＡ１２６（ｍｉＲ１２６）及びｍｉＲ１４２をコードするｍＲＮＡを送達し、血漿中のヒトＥＰＯレベルを測定した。
化合物３０１含有ＬＮＰは、以下のイオン性脂質とリン脂質（ＤＳＰＣ）との比、５０：１０、４０：２０、または３０：３０で製剤化した。その結果を図８Ａ～８Ｃに示す。図８Ａ～８Ｃは、５０：１０のイオン性脂質：ＤＳＰＣ比で製剤化された化合物３０１含有ＬＮＰからのヒトＥＰＯの肝実質細胞送達の増大を示している。化合物１４１含有ＬＮＰを添加しても、肝実質細胞にトランスフェクションする能力は元に戻らなかった。
図９は、示したイオン性脂質：ＤＳＰＣ比を有する化合物３０１含有ＬＮＰを投与されたマウスにおける、ヒトＥＰＯの経時的な発現を示している。５０：１０のイオン性脂質：ＤＳＰＣ比で製剤化された化合物３０１含有ＬＮＰは、他の製剤及び化合物１４１含有ＬＮＰの共投与と比較したときにＡＵＣ比の増大を示した。表２７に、様々なＬＮＰ製剤で観察されたＡＵＣ比を要約する。
実施例８：化合物３０１含有ＬＮＰのモル組成がＬＮＰの物理的特性に及ぼす効果
この実施例では、化合物３０１含有ＬＮＰを使用して、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ＮＰＩ－Ｌｕｃ）をラットにｉｎ ｖｉｖｏで送達し、ＬＮＰの生体内分布及び安定性を評価した。
ラットに、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを０．５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。ＬＮＰは、表２８及び２９に示す通りの異なるイオン性脂質：ＤＳＰＣ比で製剤化した。この実施例に使用されるＰＥＧ脂質は、化合物４２８（ＰＥＧ１とも呼ばれる）に相当する。
その結果を図１０Ａ～１０Ｂに示す。図１０Ａ～１０Ｂは、５０：１０：３７のイオン性脂質：ＤＳＰＣ：コレステロールモル比が、ＬＮＰの粒子径及び表面極性に効果を及ぼすことを示している。試験したＬＮＰ製剤は、加工性に影響を与えなかった。表３０に、ＬＮＰ製剤の物理的性質の要約を示す。化合物３０１のｍｏｌ％が高くなると、典型的には粒径が大きくなった。ＤＳＰＣのｍｏｌ％が低くなり、コレステロールのｍｏｌ％が高くなると、典型的には粒径が大きくなった。
実施例９：化合物３０１含有ＬＮＰのモル組成がｍＲＮＡ発現に及ぼす効果
この実施例では、化合物３０１含有ＬＮＰを使用して、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ＮＰＩ－Ｌｕｃ）をｉｎ ｖｉｖｏでラットに送達し、動物におけるＮＰＩ－Ｌｕｃの発現を評価した。
ラットに、ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡをカプセル化したＬＮＰを０．５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。ＬＮＰは、表２８及び２９に示すような異なるイオン性脂質：ＤＳＰＣ比で製剤化した。動物の全身画像化は、化合物の投与の６時間後に実施した。
その結果の概要を図１１に示す。図１１は、ｉｎ ｖｉｖｏでの発現に最適なイオン性脂質：ＤＳＰＣ：コレステロールの組成比を示している。
他の実施形態
本開示をその詳細な説明と併せて説明してきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を説明することを意図しており、限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び改変は、添付の特許請求の範囲内である。本明細書に記載されるすべての参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

Claims (38)

  1. 肝臓細胞または脾臓細胞へのペイロードの送達を強化することにおける使用のための組成物であって、前記組成物は、標的細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含み、前記ＬＮＰは、以下：
    （ｉ）化合物Ｉ－３０１を含むイオン性脂質；
    （ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
    （ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
    （ｉｖ）前記ペイロード；及び
    （ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
    を含む、組成物。
  2. 前記肝細胞が、肝実質細胞である、請求項１に記載の使用のための組成物。
  3. （ａ）総肝細胞の約６０％においてペイロードの発現及び／または活性をもたらす、
    （ｂ）参照ＬＮＰと比べて、肝細胞、例えば、肝実質細胞において強化されたペイロードレベル（例えば、発現）をもたらす、
    （ｃ）参照ＬＮＰと比べて、肝細胞発現、例えば、肝実質細胞発現の約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または６倍の増大をもたらす、
    （ｄ）例えば、参照ＬＮＰと比較したときに、増大された細胞質ゾル送達効率を有する、ならびに／あるいは
    （ｅ）ｉ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
    ｉｉ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
    ｉｉｉ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
    のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす、
    請求項１または２に記載の使用のための組成物。
  4. 参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏで有し、前記向上したパラメータが、以下：
    １）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
    ２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
    ３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
    ４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
    ５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
    ６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
    ７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
    ８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
    の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  5. １）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
    ２）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
    ３）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
    ４）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
    のうちの１つ、２つ、３つ、またはすべてをもたらす、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  6. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身送達のために製剤化される、または全身的に、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与される、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  7. タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  8. 前記ペイロードを
    （ａ）肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせから選択される肝細胞、あるいは
    （ｂ）非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）である脾細胞
    に送達する、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  9. （ａ）前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、
    （ｂ）前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、
    （ｃ）前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、
    （ｄ）前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、
    （ｅ）前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、
    （ｆ）前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、および／または
    （ｇ）送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、
    請求項１～８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  10. 前記ペイロードが、
    （ａ）ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、
    （ｂ）ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、またはＤＮＡから選択される核酸分子である、あるいは
    （ｃ）ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、
    請求項１～９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  11. 前記ペイロードが、
    （ａ）免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質、
    （ｂ）分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、抗体分子、または酵素、
    （ｃ）抗体分子、あるいは
    （ｄ）酵素
    をコードするｍＲＮＡである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  12. （ａ）前記酵素が、リソソーム蓄積症に関連している、
    （ｂ）前記酵素が、代謝障害に関連している、および／または
    （ｃ）前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、
    請求項１１に記載の使用のための組成物。
  13. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、
    （ａ）参照ＬＮＰと比較して低い用量で投与することができる、および／または
    （ｂ）参照ＬＮＰの前記用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で投与される、
    請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
  14. 送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む、肝臓細胞または脾臓細胞におけるペイロードレベル（例えば、ペイロードの発現）の強化における使用のための医薬組成物であって、前記送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、以下：
    （ｉ）化合物Ｉ－３０１を含むイオン性脂質；
    （ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質；
    （ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質；
    （ｉｖ）前記ペイロード；及び
    （ｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質
    を含む、使用のための医薬組成物。
  15. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
    ａ）血漿と比べて大きい肝臓における最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるＣｍａｘ；
    ｂ）血漿と比べて大きい肝臓における半減期（ｔ１／２）、例えば、血漿と比べて少なくとも１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍、もしくはそれ以上である肝臓におけるｔ１／２；または
    ｃ）血漿と比べて大きい肝臓における濃度時間曲線下の外挿面積（％）（ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ）、例えば、血漿と比べて少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０倍もしくはそれ以上である肝臓におけるＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ；
    のうちの１つ、２つ、またはすべてをもたらす量における投与のために製剤化されている、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。
  16. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰと比べて向上したパラメータをｉｎ ｖｉｖｏでもたらす量における投与のために製剤化されており、前記向上したパラメータが、以下：
    １）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８倍、もしくはそれ以上肝臓において強化されたペイロードレベル、例えば、肝臓において増大されたペイロードｍＲＮＡまたはペイロードタンパク質レベル、例えば、増大された送達、トランスフェクション、及び／または発現；
    ２）対象、例えばマウスへの投与後、例えばＩＶ投与後２４時間残存する少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくはそれ以上の脂質によって強化された血清安定性；
    ３）低減された免疫原性、例えば、ＬＮＰを認識するＩｇＭもしくはＩｇＧの低減されたレベル、例えば、少なくとも１．２～５倍低減されたＩｇＭクリアランス；
    ４）対象への投与後、例えば、非ヒト霊長類へのＩＶ投与後に増大された生物学的利用能、例えば、対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に増大されたＡＵＣによって観察されるような、例えば、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、もしくはそれ以上増大された生物学的利用能；
    ５）対象への投与後、例えば非ヒト霊長類への投与後に、参照ＬＮＰと比べて、例えば、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくはそれ以上強化された肝臓分布、例えば、強化された肝細胞陽性率；
    ６）対象への投与後、例えば、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間強化された肝臓における脂質及び／またはペイロードの組織濃度；
    ７）強化されたエンドソーム脱出；あるいは
    ８）脾臓と比べて遅い肝臓における脂質代謝、例えば、投与後２４時間肝臓に残存する少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれ以上の脂質；
    のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくはそれ以上（例えば、すべて）、または任意の組み合わせから選択される、請求項１４または１５に記載の使用のための医薬組成物。
  17. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、以下：
    １）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；
    ２）少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、もしくはそれ以上の肝細胞トランスフェクション；
    ３）増大された応答率、例えば肝細胞トランスフェクションの特定の閾値によって定義されるもの；または
    ４）参照ＬＮＰより大きい増大された応答率、例えば、少なくとも１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、もしくは３倍、もしくはそれより大きい応答率；
    のうち１つ、２つ、３つ、またはすべてをもたらす量における投与のために製剤化されている、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  18. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、全身投与のために製剤化されている、例えば、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、または皮内に）または経腸的に（例えば、経口的、直腸、または舌下に）投与するために製剤化されている、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  19. 前記標的細胞送達ＬＮＰが、
    （ａ）タンパク質を合成する能力がある細胞及び／または高い飲み込み能力を有する細胞に前記ペイロードを送達する、
    （ｂ）前記ペイロードを、肝実質細胞、肝星細胞、クッパー細胞、もしくは肝類洞細胞、またはそれらの組み合わせから選択される肝細胞に送達する、
    （ｃ）前記ペイロードを肝実質細胞に送達する、あるいは、
    （ｄ）前記ペイロードを、非免疫脾細胞（例えば、脾実質細胞）である脾細胞に送達する、
    請求項１４～１８のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  20. （ａ）前記標的細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が強化される、
    （ｂ）前記標的細胞による前記核酸分子の取り込みが強化される、
    （ｃ）前記標的細胞における前記核酸分子の活性が強化される、
    （ｄ）前記標的細胞における前記核酸分子の発現が強化される、
    （ｅ）前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が強化される、
    （ｆ）前記標的細胞における前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が強化される、および／または
    （ｇ）送達がｉｎ ｖｉｖｏで強化される、
    請求項１４～１９のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  21. 前記ペイロードが、
    （ａ）ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または核酸である、
    （ｂ）ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、またはＤＮＡから選択される核酸分子である、
    （ｃ）ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせから選択される、あるいは
    （ｄ）ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ、またはＣＲＩＳＰＲである、
    請求項１４～２０のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  22. 前記ペイロードが、
    （ａ）免疫細胞ペイロード以外の目的のタンパク質、
    （ｂ）分泌タンパク質、膜結合タンパク質、細胞内タンパク質、または酵素、
    （ｃ）抗体分子、あるいは
    （ｄ）酵素
    をコードするｍＲＮＡである、請求項１４～２１のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  23. （ａ）前記酵素が、リソソーム蓄積症または代謝障害に関連している、
    （ｂ）前記ペイロードが、尿素回路酵素をコードするｍＲＮＡである、および／または
    （ｃ）前記疾患が、代謝障害である、
    請求項１４～２２のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  24. 前記標的細胞送達ＬＮＰを、
    （ａ）参照ＬＮＰと比較して低い用量で、
    （ｂ）前記標的細胞送達ＬＮＰが、参照ＬＮＰの前記用量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い用量で、および／または
    （ｃ）参照ＬＮＰと比較して低減された頻度で
    投与することができる、請求項１４～２３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  25. より低い用量で送達される前記標的細胞送達ＬＮＰが、標的細胞、臓器、または細胞区画において同様のまたは強化された脂質及び／またはペイロードレベルをもたらす、請求項２４に記載の使用のための医薬組成物。
  26. 前記化合物Ｉ－３０１を含むイオン性脂質が、
    （ａ）化合物（Ｒ）Ｉ－３０１、または化合物（Ｓ）Ｉ－３０１、あるいは
    （ｂ）化合物（Ｒ）Ｉ－３０１および化合物（Ｓ）Ｉ－３０１を含むラセミ混合物を含む、
    請求項１～１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～２５のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  27. 前記参照ＬＮＰが、
    （ａ）式Ｉ－ＸＩＩを有するイオン性脂質を含む、
    （ｂ）キラル中心を有するイオン性脂質を含まない、
    （ｃ）複数の分岐アルキル鎖を含むイオン性脂質を含まない、
    （ｄ）環置換アミノ脂質を含まない、
    （ｅ）炭素環置換アミノ脂質を含まない、および／または
    （ｆ）シクロアルケニル置換アミノ脂質を含まない、
    請求項３～５または１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、あるいは、請求項１６、１７、または２４のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  28. 前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、化合物Ｈ－４０９、化合物Ｈ－４１８、化合物Ｈ－４２０、化合物Ｈ－４２１、及び化合物Ｈ－４２２からなる群から選択される化合物を含む、請求項１～１３、２６、または、２７のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～２７のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  29. 前記肝細胞が、肝実質細胞であり、前記非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む、請求項１～１３または２６～２８のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～２８のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  30. ＰＥＧ脂質を含む、請求項１～１３または２６～２９のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～２９のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  31. 前記ＰＥＧ脂質が、
    （ａ）ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、
    （ｂ）ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、
    （ｃ）化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３、及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む、あるいは
    （ｄ）化合物Ｐ－４２８、ＰＬ－１６、化合物ＰＬ－１７、化合物ＰＬ－１８、化合物ＰＬ－１９、化合物ＰＬ－１、及び化合物ＰＬ－２からなる群から選択される化合物を含む、
    請求項３０に記載の使用のための組成物または使用のための医薬組成物。
  32. 前記ＬＮＰが、
    （ａ）約５０：１０、４９：１１、４８：１２、４７：１３、４６：１４、４５：１５、４４：１６、４３：１７、４２：１８、または４１：１９の（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比、
    （ｂ）約４１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％～約１９ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、あるいは
    （ｃ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、及び約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質
    を含む、請求項１～１３または２６～３１のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～３１のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  33. （ａ）前記（ｉ）イオン性脂質：（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質のモル比が約５０：１０である、あるいは
    （ｂ）前記イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質が、（ｉ）５０：１０：３８：２；（ｉｉ）５０：２０：２８：２；（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２；または（ｉｖ）４０：３０：２８：２から選択される比率にある、
    請求項１～１３または２６～３２のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～３２のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  34. 前記脂質ナノ粒子が、前記リン脂質としてのＤＳＰＣ、前記構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールのブレンド、及び前記ＰＥＧ脂質としての化合物Ｐ－４２８を含む、請求項１～１３または２６～３３のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～３３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  35. 前記ＬＮＰが、以下：
    （ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質；
    （ｉｉ）ＤＳＰＣである、約１０ｍｏｌ％のリン脂質；
    （ｉｉｉ）β－シトステロール及びコレステロールから選択される、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質；ならびに
    （ｉｖ）化合物Ｐ－４２８である、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質；
    を含む、請求項１～１３または２６～３３のいずれか１項に記載の使用のための組成物または請求項１４～３３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
  36. 請求項１～１３または２６～３５のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰと医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  37. 請求項１～１３または２６～３５のいずれか１項に記載の送達ＬＮＰと医薬的に許容される担体とを含む、ＧＭＰグレードの医薬組成物。
  38. ９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超の純度を有する、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、またはそれ以上の混入物が除去されている、請求項３６または３７に記載の医薬組成物。
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