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JP7636350B2 - 切断可能なリンカーを有する抗体薬物複合体 - Google Patents

切断可能なリンカーを有する抗体薬物複合体 Download PDF

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Description

本発明は、５員または６員環アセタールおよび隣接する特異的切断部位を含むリンカーを含むプロドラッグ、ならびに該プロドラッグの合成のための前駆体化合物に関する。本発明は１つの態様において、前記リンカーを含む抗体標的アマトキシン複合体、それらの合成方法、および、前記抗体標的アマトキシン複合体の使用に関する。さらなる態様において、本発明は、前記複合体を含む医薬組成物、および治療目的、特に腫瘍治療および腫瘍学のための前記複合体または組成物の使用に関する。
プロドラッグは、加水分解またはリン酸化のような生化学的または化学的反応によって活性型に変換されなければならない薬理学的に不活性な薬物である。癌治療におけるプロドラッグのアイデアは、特定の標的と相互作用する化合物を設計することによって、意図しない副作用を減少させることである。これらのプロドラッグは、しばしばリンカー成分を介して、治療または毒性成分に連結される標的結合部分を含む。
治療または毒性成分の放出のための酸不安定成分を含むプロドラッグは、医薬研究および適用においてしばしば使用される。抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の分野では、酸不安定リンカーが標的特異的抗体によって構築物を腫瘍細胞に標的化した後に毒性ペイロードの放出を可能にする。この概念には、受容体を介したＡＤＣのエンドサイトーシス（細胞への取り込み）と、それに続くリソソームへの細胞内輸送が含まれる。ＡＤＣがその表面の腫瘍抗原に結合すると、エンドソームに取り込まれ、その後成熟してリソソームと融合する。リソソームでは、カテプシンＢなどの特異的プロテアーゼによるリンカーの切断、またはＡＤＣの分解を介して薬物が放出される。リソソームは、４～５の酸性ｐＨを特徴とし(Chalouni and Doll, ２０１８）、酸不安定結合の加水分解に十分な酸性であると考えられる。アシル－ヒドラゾンのような酸不安定リンカーは、販売承認を受けたＡＤＣにおいて首尾よく使用された(Chalouni and Doll, ２０１８）。
アセタールのような他の酸に不安定な基は、ＡＤＣのためのリンカーの成分と考えられてきた。脂肪族アルデヒドまたはケトンに基づく非環状アセタールを含む分子はｐＨ５で開裂可能であることが示されているが、脂肪族カルボニル化合物の環状アセタールはこの点に関してまだ研究されていない；これらの構造は高すぎる安定性を有し得、酸性細胞内環境による放出は疑わしいようである。
ＷＯ２０１４／１３５２８２はＡＤＣとして使用するための改善された特性を有する環状カーボネートおよび環状アセタールを含むアマトキシンの調製方法を開示しているが、制御可能な放出メカニズムを有する化合物は教示していない。
Ｇｉｌｌｉｅｓら（２００４）は、低分子量プロドラッグに含まれるベンズアルデヒド誘導体に基づく５員または６員環アセタールを記載している。脂肪族アセタール以外に、芳香族置換基をアセタール炭素原子に導入することにより、さらなる置換基による酸性安定性の調節が可能になる。ハメットの法則は、芳香環の置換パターンに関連するベンジルアセタールの反応性の予測を可能にする。この原理に従うことにより、ｐＨ５．０で１７．６時間およびｐＨ７．４で数週間の範囲の半減期を有する環状アセタールを合成することができた。
ＷＯ２０１５／１５２１８２(NOF Corporation)は、生体内の弱酸性環境のｐＨでの加水分解速度がベンジル構造での置換基の位置および性質を介して制御され得る、環状ベンジリデンアセタールリンカーを有する親水性ポリマー誘導体を記載し;特に、ベンズアルデヒド誘導体由来の５員または６員環アセタールに基づくポリマー薬物複合体のための可能な酸不安定リンカーが開示される。この文献は、細胞毒性ペイロードおよび生物学的データのいかなる特定の例も開示していない。さらに、ＷＯ２０１５／１５２１８２の教示は、薬物化合物への環状アセタールの共有結合のためのさらなる部分を必要とする。これらのリンカー構造は酸性切断に関与せず、放出されたペイロードに結合したままであり、おそらく、その薬力学的活性に負の影響を及ぼす。
先行技術に開示された環状アセタールの開裂は酸性環境を必要とするので、構築物が細胞に取り込まれ、適切な酸性条件のみが見出されるリソソームに輸送されることが必須である。したがって、先行技術に開示された環状アセタールは、受容体結合後の効率的な取り込みをもたらす標的結合部分に限定される。
しかし、他の有望な標的構造は標的結合部分の結合の際に細胞表面上に残存し、および/または取り込み後に後期エンドソームおよびリソソームに輸送されず、したがって、この技術に従わないかもしれない。
ＡＤＣの標的結合抗体と薬物との間の切断可能なペプチド構造および自己崩壊型スペーサーの組み合わせは、第一級または第二級アミンを担持するペイロードに適用可能であることが記載されている。Ｊｅｆｆｒｅｙら（２００５）およびＷＯ２０１６／１４２０４９は、フェノール部分に適用できるパラアミノベンジルエーテルリンカーを開示している。ペイロードのカルボン酸は、類似のパラアミノベンジルアミド（ＷＯ２０１７／１４９０７７）によって対処することができる。
小分子プロドラッグのために頻繁に使用される別のタイプの関連自己免疫部分がＴｒａｎｏｙ－Ｏｐａｌｉｎｓｋｉら（２０１４）に開示されており、ここで、特異的側鎖はβ－グルクロニドを含み、β－グルクロニダーゼによる酵素的切断の後、末端フェノール部分で開始し、自発的断片化を受けている。この型のリンカーはまた、ＡＤＣ分野において使用され、そして例えば、Ｊｅｆｆｒｅｙら（２００６）に記載されている。
したがって、従来技術に鑑みて、本発明の１つの課題は薬物の無休止放出を可能にし、したがって治療効率を増加させ、放出された治療薬上に残存する化学残基による薬物活性の喪失を回避する、制御された条件下でのプロドラッグからの薬物の非常に効率的な放出機構を提供することである。
本発明の１つの課題は、高度に活性なアマトキシンの無休止放出のための効率的なｐＨ非依存性放出メカニズムを含む標的結合部分アマトキシン複合体を提供することである。
本発明の別の課題は、前記複合体の合成のための修飾されたアマトキシンを提供することである。
本発明のさらに別の課題は、治療的使用のための、特に腫瘍治療および腫瘍学のための、改善された標的結合部分アマトキシン複合体を提供することである。
これらの課題は、本発明の独立請求項による方法および手段によって達成される。従属請求項は、好ましい実施形態に関連する。
本発明のリンカー系における薬物放出機構の概略図。三角形は、酵素的に切断可能な構造、好ましくはペプチド構造を表す。ＡはＯ、ＮＨまたはＳから選択することができる電子供与基であるが、これらに限定されない。 ９６時間のインキュベーション後のＢｒｄＵアッセイにおけるＳＫＢＲ－３細胞に対する細胞毒性試験結果。 ９６時間のインキュベーション後のＢｒｄＵアッセイにおけるＮＣＩ-Ｎ８７細胞に対する細胞毒性試験結果。 ９６時間のインキュベーション後のＢｒｄＵアッセイにおけるＪＩＭＴ－１細胞に対する細胞毒性試験結果。 インビボでのＳＫＯＶ－３異種移植腫瘍マウスモデルにおけるアセタールリンカー複合体の効力研究の結果。 ＮＯＤ/ＳＣＩＤマウスにおける複合体T-D265C-30.2669およびT-D265C-30.2684のインビボ忍容性試験の結果。
本発明の課題のさらなる詳細、特徴、特性、および利点は、従属請求項、ならびに例示的な様式で本発明の好ましい実施形態を示すそれぞれの図面および実施例の以下の説明に開示される。しかしながら、これらの図面は、決して本発明の範囲を限定するものとして理解されるべきではない。
発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、デバイスおよび方法は変化し得るので、本発明は、説明されたデバイスの特定の構成要素部分、または説明された方法のプロセス工程に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していないことを理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は文脈が明白に別段の規定をしない限り、単数形および/または複数の対象を含むことに留意しなければならない。さらに、数値で区切られたパラメータ範囲が与えられた場合、その範囲はこれらの制限値を含むものとみなされることも理解されるべきである。
さらに、本明細書に開示される実施形態は、互いに関連しない個々の実施形態として理解されることを意味しないことを理解されたい。一実施形態で論じられた特徴は、本明細書に示された他の実施形態に関連しても開示されることが意図される。１つの場合において、特定の特徴が１つの実施形態で開示されず、別の実施形態で開示される場合、当業者は、前記特徴が前記他の実施形態で開示されることを意図しないことを必ずしも意味しないことを理解するであろう。当業者は他の実施形態についても前記特徴を開示することが本出願の要旨であるが、明確性の目的のために、および明細書を管理可能なボリュームに保つために、これは行われていないことを理解するであろう。
さらに、本明細書で参照される先行技術文献の内容は、参照により組み込まれる。これは、特に、標準的または慣用的な方法を開示する先行技術文献を指す。その場合、参照による組み込みは、主に、十分な可能な開示を提供し、長時間の繰り返しを回避する目的を有する。
本発明は、プロドラッグ、特に抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）からの薬物の制御可能な無休止放出に関して上述したような制限に対する解決策を提供する。
本発明は、抗体－薬物複合体またはペプチド薬物複合体のような標的治療に適用されるプロドラッグ系の改善のための特異的薬物放出機構に関する。本発明によるプロドラッグは、電子供与基と結合したベンジル５員または６員環アセタールと、特異的切断側を含むおよび／または表す側鎖とを含む。前記切断部位の切断はアセタールの補助放出を誘発し、その結果、無休止薬物が遊離する（図１）。
アマトキシン、アフィジコリン、アポトリジン、カリケアマイシン、ジギトキシン、ジゴキシン、エトポシド、グルコピリシジンＡ、ヒポテマイシン、イサトロポロン（isatropolone）Ａ、ラクタシスチン、ムスコトキシン（muscotoxin）Ａ、パンクラチスタチン、ファロイジン、フェンパンスタチン、フィトスフィンゴシン、プロスシラリジン（poscillaridin）Ａ、プセウロチンＡ、レベッカマイシン、シネフンギン、Ｇ-ストロファンチン、スワインソニン、ツルボスタチン１－４などの種々の細胞毒性薬は、環状アセタールの生成に使用できる１,２－および１,３－ジオールからなる。この少なくとも１つの１,２－または１,３－ジオール部分は、薬物が本発明の化合物から放出される場合に回復する。
本発明は、強い正のメソメリー効果を有するアセタール炭素の１－２（オルト－）または１－４（パラ－）位の部分をもたらす、特定の側鎖の切断後の加水分解が増強されたベンジル環状アセタールを含む化合物およびその導入方法に関する。特定の切断側（例えば、ペプチド）を含むおよび/または表す側鎖の酵素的切断は強い電子供与特性を有する電子供与基（例えば、２－または４－アミノ基）を放出し、その結果、オルトまたはパラキノン中間体を介してベンジリデンリンカーおよびジオールが自発的に断片化され、遊離ペイロードが遊離される。
酵素的切断は特定のプロテアーゼ、例えば、カテプシン、好ましくはカテプシンＢ、エラスターゼまたはマトリックスメタロプロテアーゼによって行われる。いくつかの実施形態では、前記プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼまたはβ－グルクロニダーゼのような、細胞外マトリックス中の腫瘍特異的酵素である。
驚くべきことに、本発明者らは切断可能なリンカーエレメントおよび自己崩壊型部分の組み合わせが、プロドラッグ中の環状アセタール、特にＡＤＣを含むアマトキシンにうまく適用され得ることを見出した。本発明の化合物および方法は、放出された薬物部分が薬物活性および治療効率を低下させる危険性を課し得るスペーサー、リンカーまたは標的結合部分から残っている残基または構造要素を含まない様式で、環状アセタールで、プロドラッグ、特にアマトキシン含有ＡＤＣからの薬物の効率的な、制御可能な、ｐＨ非依存性放出を可能にする。
一態様によれば、本発明は細胞毒性薬部分を含む式ＩまたはＩＩに関する
式中
Ｄは、前記化合物からの切断で１，２－または１，３－ジオールとなる部分を少なくとも１つ含む細胞毒性薬部分であり；
ＺはＣＨ2、ＣＨ2－ＣＨ2、またはＣＨＲ３－ＣＨＲ３であり、Ｒ３は独立してＨまたは任意にヘテロ原子で置換されていてもよいアルキル基であり；
Ｒ１はＨまたはＣ1－Ｃ6アルキル基であり；
Ａは電子供与基であり；
Ｅは切断部位であり；
Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基である。
本発明による細胞傷害性薬物は例えば、アマトキシン、アフィジコリン、アポトリジン、カリケアマイシン、ジギトキシン、ジゴキシン、エトポシド、グルコピリシジンＡ、ヒポテマイシン、イサトロポロン（isatropolone）Ａ、ラクタシスチン、ムスコトキシン（muscotoxin）Ａ、パンクラチスタチン、ファロイジン、フェンパンスタチン、フィトスフィンゴシン、プロスシラリジン（poscillaridin）Ａ、プセウロチンＡ、レベッカマイシン、シネフンギン、Ｇ-ストロファンチン、スワインソニン、およびツルボスタチン１－４から選択され得るが、これらに限定されない。
アマトキシンは、８アミノ酸から構成される環状ペプチドである。それらは、例えば、タマゴテングタケ（Amanita phalloides mushrooms）から単離され得るか、または合成的に調製され得る。アマトキシンは哺乳動物細胞のＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＩＩを特異的に阻害し、それによって、影響を受けた細胞の転写およびタンパク質生合成も阻害する。細胞内での転写の阻害は、成長と増殖の停止を引き起こす。共有結合ではないが、アマニチンとＲＮＡポリメラーゼＩＩとの間の複合体は非常に緊密である（ＫＤ＝３ｎＭ）。酵素からのアマニチンの解離は非常に遅いプロセスであり、したがって、影響を受けた細胞の回復は起こりそうにない。転写の阻害が長すぎると、細胞はプログラムされた細胞死（アポトーシス）を起こすことになる。
本明細書中で使用される場合、用語「アマトキシン」はＡｍａｎｉｔａ属から単離され、そしてWieland, T.およびFaulstich H.(Wieland T, Faulstich H., CRC Crit Rev Bioc19781978 Dec;5（185-260）に記載されるような８個のアミノ酸から構成されるすべての環状ペプチドを含み；さらに、そのすべての化学誘導体;さらに、天然化合物（環状、８個のアミノ酸）の主構造体に従った構成単位から構築されるそのすべての合成類似体、さらに、ヒドロキシル化されていないアミノ酸を含むすべての合成または半合成類似体、さらに、チオエーテルスルホキシド部分がスルフィド、スルホン、または、例えばアマニチンのカルバ類似体におけるような炭素原子のような、硫黄とは異なる原子によって置換されたすべての合成または半合成類似体を含み、いずれの場合も、そのような誘導体または類似体は哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害することによって機能的に活性である。
本明細書中で使用される場合、ある化合物の「誘導体」は上記化合物に類似する化学構造を有するが、上記化合物中に存在しない少なくとも１つの化学基を含むか、および／または上記化合物中に存在する少なくとも１つの化学基を欠損している種を指す。誘導体が比較される化合物は、「親」化合物として知られている。典型的には、「誘導体」が１つ以上の化学反応工程において親化合物から生成され得る。
本明細書中で使用される場合、ある化合物の「類似体」は構造的に関連するが、上記化合物と同一ではなく、上記化合物の少なくとも１つの活性を示す。類似体が比較される化合物は、「親」化合物として知られている。前述の活性には別の化合物への結合活性;阻害活性（例えば、酵素阻害活性）;毒性効果;活性化活性（例えば、酵素活性化活性）が含まれるが、これらに限定されない。類似体が親化合物と同程度にそのような活性を示す必要はない。化合物は親化合物の活性の少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％）の程度まで関連する活性を示す場合、本出願の文脈内で類似体とみなされる。したがって、「アマトキシンの類似体」とは、本明細書で使用される場合、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、およびアマヌリン酸のいずれか１つに構造的に関連し、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、およびアマヌリン酸の少なくとも１つと比較して、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性の少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％）を示す化合物を指す。本発明での使用に適した「アマトキシンの類似体」は、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、またはアマヌリン酸のいずれか１つよりも、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対してより大きな阻害活性さえも示し得る。阻害活性は、５０％の阻害が起こる濃度（ＩＣ50）を測定することによって測定することができる。哺乳類ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性は、細胞増殖に対する阻害活性を測定することにより間接的に測定することができる。
「半合成類似体」は出発材料として天然源（例えば、植物材料、細菌培養物、真菌培養物または細胞培養物）からの化合物を使用する化学合成によって得られた類似体を指す。典型的には、本発明の「半合成類似体」がＡｍａｎｉｔａｃｅａ科のキノコから単離された化合物から出発して合成された。対照的に、「合成アナログ」とは、小さい（典型的には石油化学）構成単位からいわゆる全合成によって合成されるアナログをいう。通常、この全合成は、生物学的プロセスの助けを借りずに行われる。
機能的には、アマトキシンは哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害するペプチドまたはデプシペプチドとして定義される。好ましいアマトキシンは上記で定義したリンカー分子または標的結合部分と反応させることができる官能基（例えば、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、チオールまたはチオール捕捉基）を有するものである。本発明の複合体に特に適したアマトキシンは、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、およびアマヌリン酸、ならびにそれらの塩、化学誘導体、半合成類似体、および合成類似体である。本発明で使用するのに特に好ましいアマトキシンは、α－アマニチン、β－アマニチン、およびアマニンアミドである。
本発明の一態様によれば、アマトキシンは、α－アマニチン、β－アマニチン、アマニン、アマニンアミドおよびそれらの類似体、誘導体および塩からなる群から選択することができる。
本明細書中で使用される場合、用語「電子供与基」は、窒素、酸素、硫黄、またはアミン（ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２）、フェノール（ＯＨ）およびその共役塩基Ｏ－、アルコキシ基（ＯＲ）、フェニルエステル（ＯＣＯＲ）またはチオールのような芳香族π－電子系に供与され得る孤立電子対を有する置換基、ならびに正の誘起効果を有するアルキル基をいう。
用語「電子求引基」は、ハロゲン、ニトロ－、カルボニル－、シアノ－およびスルホニル基のような芳香族π－系に対して負のメソマー効果を示す置換基、またはトリフルオロメチルまたはトリアルキルアンモニウム基のような負の誘導効果を有する基を指すものとする。
本発明の一態様によれば、電子供与基Ａは、Ｏ、ＮＨおよびＳから選択される。
本明細書中で使用される場合、用語「切断部位」は、特定の条件下で規定された位置で特異的切断に感受性である部分をいう。前記条件は例えば、特定の身体または細胞区画における特定の酵素または還元的環境である。
本発明の一態様によれば、切断可能部位Ｅは、２つ以上のアミノ酸を含む酵素的に切断可能な部分である。好ましくは、前記の酵素的に切断可能な部分がバリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、バリン－リジン（Ｖａｌ－Ｌｙｓ）、バリンアルギニン（Ｖａｌ－Ａｒｇ）ジペプチド、フェニルアラニン－リジン－グリシン－プロリン－ロイシン－グリシン(Phe Lys Gly Pro Leu Gly)またはアラニン－アラニン－プロリン－バリン(Ala Ala Pro Val)ペプチド、またはβ－グルクロニドまたはβ－ガラクトシドを含む。
一実施形態によれば、前記切断部位は、システインプロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤によって切断可能である。
チオールプロテアーゼとしても知られるシステインプロテアーゼは、触媒トリアドまたはダイアド中の求核システインチオールを含む共通の触媒機構を共有するプロテアーゼである。
メタロプロテアーゼは、触媒機構が金属を含むプロテアーゼである。ほとんどのメタロプロテアーゼは亜鉛を必要とするが、コバルトを使用するものもある。金属イオンは、３つのリガンドを介してタンパク質に配位する。金属イオンを配位するリガンドは、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、およびアルギニンによって変化し得る。第４の配位位置は、不安定な水分子によって取り込まれる。
セリンプロテアーゼはタンパク質中のペプチド結合を切断する酵素であり、セリンは酵素の活性部位で求核アミノ酸として働く。セリンプロテアーゼはその構造に基づいて大きく２つのカテゴリーに分類される:キモトリプシン様（トリプシン様）またはスブチリシン様。
トレオニンプロテアーゼは、活性部位内にトレオニン（Ｔｈｒ）残基を有するタンパク質分解酵素のファミリーである。このクラスの酵素の原型メンバーはプロテアソームの触媒サブユニットであるが、アシルトランスフェラーゼは同じ活性部位の幾何学と機構を収束的に発展させた。
アスパラギン酸プロテアーゼは、それらのペプチド基質の触媒作用のために１つ以上のアスパラギン酸残基に結合した活性化水分子を使用する触媒型のプロテアーゼ酵素である。一般に、それらは、活性部位に２つの高度に保存されたアスパラギン酸塩を有し、酸性ｐＨで最適に活性である。ほとんど全ての既知のアスパルチルプロテアーゼは、ペプスタチンによって阻害される。
特定の実施形態では、切断可能部位は、カテプシンＡまたはＢ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、エラスターゼ、β－グルクロニダーゼおよびβ－ガラクトシダーゼからなる群より選択される少なくとも１つの薬剤によって切断可能である。
本発明の別の態様では、切断部位Ｅはジスルフィド結合であり、特異的切断は還元環境、例えば細胞内還元環境によって行われる。
別の態様において、本発明は本発明の化合物およびＴ－Ｌ部分を含む複合体に関し、ここで、前記Ｔ－Ｌ部分は、式ＩまたはＩＩにおける残基Ｒ２の少なくとも１つを置換しており、
Ｌはリンカーであり、
Ｔは標的結合部分である。
本明細書中で使用される場合、用語「リンカー」は、標的結合部分を、細胞傷害性薬物部分を含む本発明の化合物に共有結合し得る二官能基をいう。
本発明によるリンカーＬはアルキレン、ヘテロアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、またはヘテロアラルキレン基を含むか、またはそれからなり、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～４個のヘテロ原子を含み、前記リンカーは任意に置換されていてもよい。リンカーはまた、共有結合のみであり得る。
本発明の１つの態様において、リンカーＬは、以下の部分:ジスルフィド、エーテル、チオエーテル、アミン、エステル、カルボキサミド、ウレタン、および尿素部分のうちの少なくとも１つから選択される部分を含む。
本出願の文脈における「リンカー」は、例えば、標的結合部分と本発明による化合物（例えば、アマトキシンまたはアマトキシン誘導体）との間の立体干渉を軽減するために、（そうでなければ、アマトキシンがＲＮＡポリメラーゼＩＩと相互作用する能力を減少させ得るため）、２つの成分間の距離を増加させる分子をいう。リンカーは、標的結合部分によって標的化される細胞において特異的にアマトキシンの放出を促進し得るので、別の目的に役立ち得る。リンカー、ならびに好ましくは、一方の側でリンカーと本発明の化合物、好ましくはアマトキシンとの間の結合、および他方の側でリンカーと抗体との間の結合は、細胞、例えば血液の外側の生理学的条件下で安定であるが、細胞の内側、特に標的細胞、例えば癌細胞または免疫細胞の内側で切断することができることが好ましい。この選択的安定性を提供するために、リンカーは、好ましくはｐＨ感受性またはプロテアーゼ感受性である官能基を含み得る。あるいは、リンカーを標的結合部分に連結する結合が選択的安定性を提供し得る。好ましくは、リンカーが少なくとも１、好ましくは１～３０原子長（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０原子）の長さを有し、ここで、リンカーの一方の側はアマトキシンと反応され、他方の側は標的結合部分と反応されている。本発明の文脈において、リンカーは、好ましくは、任意に置換された、Ｃ１－３０－アルキル、Ｃ１－３０－ヘテロアルキル、Ｃ２－３０－アルケニル、Ｃ２－３０－ヘテロアルケニル、Ｃ２－３０－アルキニル、Ｃ２－３０－ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキル基である。リンカーは、アミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、炭化水素部分などのような１つ以上の構造要素を含み得る。リンカーはまた、これらの構造要素の２つ以上の組み合わせを含み得る。これらの構造要素の各々はリンカー中に１回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、または６回存在し得る。いくつかの実施形態では、リンカーはジスルフィド結合を含んでもよい。リンカーはアマトキシンおよび標的結合部分に、単一工程または２つ以上の後続工程のいずれかで結合されなければならないことが理解される。その目的のために、リンカーは、好ましくは近位および遠位末端において、（ｉ）基、好ましくはアマトキシンまたは標的結合ペプチド上の活性化基への共有結合を形成し得るか、または（ｉｉ）活性化されてアマトキシン上の基と共有結合を形成し得る２つの基を有する。従って、リンカーが存在する場合、化学基はリンカーの遠位末端および近位末端にあることが好ましく、これは、例えば、エステル、エーテル、ウレタン、ペプチド結合などのカップリング反応の結果である。
本明細書中で使用される場合、用語「標的結合部分」は、標的分子または標的エピトープに特異的に結合し得る任意の分子または分子の一部をいう。本発明での使用に適した標的結合部分は、典型的には４万Ｄａ(４０ｋＤａ）以上の分子量を有する。
本明細書中で使用される場合、用語「標的分子」および「標的エピトープ」は、それぞれ、標的結合部分によって特異的に結合される抗原および抗原のエピトープをいう。好ましくは、標的分子が腫瘍関連抗原、特に、非腫瘍細胞の表面と比較して増加した濃度および/または異なる立体配置で１つ以上の腫瘍細胞型または腫瘍関連細胞の表面上に存在する抗原またはエピトープである。好ましくは前記抗原またはエピトープが１つ以上の腫瘍または腫瘍間質細胞型の表面上に存在するが、非腫瘍細胞の表面上には存在しない。他の実施形態では、前記抗原またはエピトープが自己免疫疾患に関与する細胞上で優先的に発現される。他の実施形態では、前記抗原またはエピトープが炎症性疾患に関与する細胞上で優先的に発現される。
本発明の一態様では、標的結合部分Ｔが以下の群から選択される
(i)抗体またはその抗原結合断片;
(ii)抗体様タンパク質、および
(iii)核酸アプタマー。
用語「抗体またはその抗原結合断片」は本明細書中で使用される場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）をいう。また、例えば、標的分子、例えば、標的タンパク質Ｈｅｒ－２/ｎｅｕまたはＥｐＣＡＭに特異的に結合するファージディスプレイを含む技術によって選択される免疫グロブリン（Ｉｇ）様タンパク質も含まれる。本発明の免疫グロブリン分子は任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。本発明における使用に適した抗体およびその抗原結合断片にはポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロコンジュゲート、多重特異性、ヒト、ヒト化（特にＣＤＲ移植）、脱免疫、またはキメラ抗体、単鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ'）2フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、ダイアボディまたはテトラボディ(Poljak R.J.,1994）、ナノボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合断片が含まれるが、これらに限定されない。
本発明の一態様では、抗体またはその抗原結合断片がダイアボディ、テトラボディ、ナノボディ、キメラ抗体、脱免疫抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体から選択される。
本発明の１つの態様において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、および少なくとも１つのＶＬおよび/またはＶＨドメインを含む断片からなる群より選択される。
本明細書中で使用される場合、用語「抗体様タンパク質」は標的分子に特異的に結合するように（例えば、Ｉｇループの突然変異誘発によって）設計されたタンパク質をいう。典型的には、このような抗体様タンパク質は、両端がタンパク質足場に付着した少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重構造的拘束は、抗体様タンパク質の結合親和性を、抗体の結合親和性に匹敵するレベルまで大幅に増加させる。可変ペプチドループの長さは、典型的には１０～２０アミノ酸からなる。足場タンパク質は、良好な溶解特性を有する任意のタンパク質であり得る。好ましくは、足場タンパク質は小球状タンパク質である。抗体様タンパク質としてはアフィボディ、アンチカリン、および設計されたアンキリン反復タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない（Ｂｉｎｚら、２００５）。抗体様タンパク質は例えば、大きなファージディスプレイライブラリーからのパニングによって、突然変異体の大きなライブラリーから誘導することができ、通常の抗体と同様に単離することができる。また、抗体様結合タンパク質は、球状タンパク質中の表面露出残基のコンビナトリアル突然変異誘発によって得ることができる。
本明細書中で使用される場合、用語「核酸アプタマー」は標的分子に結合するために、インビトロ選択またはＳＥＬＥＸ(指数的濃縮によるリガンドの系統的進化）の反復ラウンドを通して操作された核酸分子をいう（Ｗａｎｇら、２０１９）。核酸アプタマーは、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり得る。アプタマーは改変、例えば、２'－フッ素置換ピリミジンなどの改変ヌクレオチドを含むことができる。
一態様では、本発明は式ＩＩＩまたはＩＶの複合体に関する。
式中、
ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；
Ｒ１はＨまたはＣ1－Ｃ6アルキル基であり;
Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり;
Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ1－Ｃ8－アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり；
Ｒ５はＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨＯＨであり；
Ｒ６、Ｒ７は天然または非天然アミノ酸の側鎖であり;
Ｌはリンカーであり、そして
Ｔは標的結合部分である。
式ＩＩＩまたはＩＶの複合体は、限定されないが、カテプシン、エラスターゼまたはマトリックスメタロプロテアーゼのようなペプチダーゼによるアニリド部位でのペプチド切断の後にそのペイロード（細胞毒性薬）を放出する。
別の態様では、本発明は式Ｖの複合体に関する。
式中、
ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；
ＹはＣＨ２またはＣＯであり;
Ｒ１はＨまたはＣ1－Ｃ6アルキル基であり;
Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり; 少なくとも１つのＲ２基は前記Ｔ－Ｌ部分に置換されており
Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ1－Ｃ8－アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり;
Ｒ５はＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨＯＨであり;
Ｌはリンカーであり、そして
Ｔは標的結合部分である。
式Ｖの複合体は、限定されないが、β－グルクロニダーゼまたはβ－ガラクトシダーゼのような酵素によるグリコシド切断の後にそのペイロード（細胞毒性薬）を放出する。
別の態様では、本発明は式ＶＩの複合体に関する。
式中、
ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；
Ｒ１はＨまたはＣ1－Ｃ6アルキル基であり;
Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり、ただし、Ｒ８がＴ－Ｌ部分でない場合、１つのＲ２は前記Ｔ－Ｌ部分に置換されており；
Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ1－Ｃ8－アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり;
Ｒ５はＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨＯＨであり;
Ｒ８は直鎖または分岐鎖のアルキル基であり、または、いずれのＲ２もＴ－Ｌ部分でない場合、Ｔ－Ｌ部分であり；
Ｌはリンカーであり、そして
Ｔは標的結合部分である。
式ＶＩの複合体は、還元環境、例えば細胞内還元環境によるジスルフィド切断の後にそのペイロード（細胞毒性薬）を放出する。
別の態様では、本発明は式ＶIIの複合体に関する。
式中、
ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；
Ｒ１はＨまたはＣ1－Ｃ6アルキル基であり;
Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり、ただし、Ｒ９がＴ－Ｌ部分でない場合、１つのＲ２は前記Ｔ－Ｌ部分に置換されており；
Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ1－Ｃ8－アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり;
Ｒ５はＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨＯＨであり;
Ｒ９はＨまたは直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、または、いずれのＲ２もＴ－Ｌ部分でない場合、Ｔ－Ｌ部分であり；
Ｌはリンカーであり、そして
Ｔは標的結合部分である。.
式ＶＩＩの複合体は、そのリン酸エステルの酵素的切断の後にそのペイロード（細胞毒性薬）を放出する。
別の態様では、本発明は式ＶＩＩＩの複合体に関する。
さらなる態様では、本発明は式ＩＸまたはＸの複合体に関する。
別の態様において、本発明は、薬剤として使用するための本発明の複合体に関する。
別の態様において、本発明は、１,２－または１,３－ジオールを、非プロトン性溶媒中、酸性条件下でジメチルベンジリデンアセタールと反応させることによって、本発明の複合体を合成するための方法に関する。
本発明は、好ましくは、酸性条件下、非プロトン性溶媒中で、アマトキシンとジメチルベンジリデンアセタールとを反応させることによって、本発明の複合体を合成するための方法に関する。前記アマトキシンは、好ましくはアルファ－アマニチン、ベータ－アマニチン、アマニン、アマニンアミドおよびそれらのそれぞれのチオエーテルからなる群から選択される。
好ましい実施形態では、本発明による前記方法は、非プロトン性溶媒がＤＭＦであり、および/または酸がトリフルオロ酢酸である方法に関する。
本明細書で使用される「酸性条件下」という用語は、５．０以下のｐＨを指すものとする。特に好ましい方法は、約５．０、４．５、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、１．５、または１．０のｐＨで行われる。
環状アセタールは、アルデヒドまたはケトンとジオール化合物とを酸性条件下で反応させることによって形成することができる。典型的には、これらの反応は、上昇した温度と、共沸蒸留または硫酸カルシウムまたはモレキュラーシーブのような水結合剤による副生成物として形成された水の除去とを必要とする。このような方法は、高感度で貴重な出発物質を使用する場合にはしばしば非実用的である。このような場合、アシルアセタールとして、より感度が低く、より安価な成分を予備活性化することが有利である。次いで、環状アセタールの形成は、非環状化合物からの環状の形成におけるエントロピー効果によって好ましい触媒量の酸によって達成され得る。
本発明の環状アセタールについては、ジオールが通常、より価値があり、より安定性の低い化合物である。したがって、芳香族カルボニル基は、好ましくは水結合剤の存在下で、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはトリフルオロエタノールのような低沸点アルコールで非環状アセタールに変換される。より好ましくは、水結合剤はオルトエステルであり、溶媒は低沸点アルコールである。好ましいオルトエステルは、オルトギ酸トリメチル、オルト酢酸トリエチル、オルトギ酸トリエチル、オルト酢酸トリエチルまたはオルトギ酸トリプロピルである。最も好ましいのは、オルトギ酸トリメチルの使用である。
酸性触媒は、好ましくは濃硫酸のような無水酸、有機溶剤中の塩化水素、例えばＨＣｌ／ＥｔＯＨ、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ、ＨＣｌ／１，４－ジオキサンなど、４－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、またはプロトン化形態の強陽イオン交換体のようなポリマースルホン酸、例えばＤｏｗｅｘ（登録商標）５０Ｗ Ｘ８、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＩＲ－１２０などである。最も好ましいのは、１,４－ジオキサンおよび４－トルエンスルホン酸中の塩化水素の使用である。
非環状アセタールとジオール化合物との反応は、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰ、１,４-ジオキサンキシレンまたはトルエンのような高沸点非プロトン性溶媒中で行うことが好ましい。ＤＭＦの使用が好ましい。この反応における酸性触媒は、上記のリストから選択することができる。ＨＣｌ／１,４－ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸のような低沸点の酸が好ましい。トリフルオロ酢酸の使用が最も好ましい。
別の態様において、本発明は患者における癌の処置において使用するための本発明の複合体に関し、特に、癌は、乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎臓癌、悪性黒色腫、白血病、および悪性リンパ腫からなる群より選択される。
さらに別の態様では、本発明は、本発明の複合体を含む医薬組成物に関し、任意選択で、１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、充填剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、吸着剤、および／または防腐剤をさらに含む。
特定の実施形態において、医薬組成物は、全身投与される医薬の形態で使用される。これには、とりわけ注射剤および注入剤を含む非経口剤が含まれる。注射剤はアンプルの形態で、またはいわゆるすぐに使用可能な注射剤、例えばすぐに使用可能な注射器または使い捨て注射器として製剤化され、これとは別に、複数回引き抜くための穿刺可能なフラスコとして製剤化される。注射剤の投与は、皮下（ｓ.ｃ.）、筋肉内（ｉ.ｍ.）、静脈内（ｉ.ｖ.）または皮内（ｉ.ｅ.）適用の形態であり得る。特に、結晶、溶液、ナノ粒子またはコロイド分散系（例えば、ヒドロゾル）の懸濁液として、それぞれ適切な注射製剤を製造することが可能である。
上記の詳細な実施形態における要素および特徴の特定の組み合わせは、例示的なものにすぎず、これらの教示と、本明細書および参照により組み込まれる特許／出願における他の教示との交換および置換もまた、明確に企図される。当業者には理解されるように、本明細書で説明されるもの変形、改変、および他の実装は、特許請求される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、当業者に想起され得る。したがって、前述の説明は単なる例であり、限定することを意図しない。本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲およびそれと同等のものにおいて定義される。さらに、明細書および特許請求の範囲で使用される参照符号は、特許請求の範囲に記載された本発明の範囲を限定するものではない。
本発明は図面および前述の説明において詳細に図示および説明されてきたが、そのような図示および説明は例示的または例示的であり、限定的ではないと考えられるべきであり、本発明は開示された実施形態に限定されない。開示された実施形態に対する他の変形は図面、開示、および添付の特許請求の技術の検討から、特許請求された発明を実施する際に当業者によって理解され、実施されることができる。特許請求の範囲において、単語「含む」は他の要素または工程を排除するものではなく、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は複数を排除するものではない。特定の手段が相互に異なる従属請求項に記載されているという単なる事実は、これらの手段の組み合わせが有利に使用されることができないことを示すものではない。特許請求の範囲におけるいかなる参照符号も、範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１：４－ジメトキシメチル－フェノール（HDP 30.2628）
４－ヒドロキシベンズアルデヒド（１．２２１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０ｍｌのメタノールに溶解し、１０．９ｍｌ（１００ｍｍｏｌ）のオルトギ酸トリメチルおよび２５０μｌ（１ｍｍｏｌ）の塩化水素ジオキサン溶液４Ｍを加え、溶液を還流下１時間加熱した。ＴＬＣ－コントロール（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル １：１）がアルデヒド（Ｒｆ＝０．３６）からジメチルアセタール（Ｒｆ＝０．４５）への完全な変換を示した。ロータリーエバポレーションで１０ｍｌにしたあと、反応を５０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、混合物を５０ｍｌの酢酸エチルで抽出した。有機層を５０ｍｌの食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させて、留去して１．７３９ｍｇの４－ジメトキシメチル－フェノールを油状物として得た。生成物はＴＬＣおよびＨＰＬＣで均一であり、さらなる精製なしに次の工程に用いた。
実施例２：３－ジメトキシメチル－フェノール（HDP 30.2629）
実施例１の手順を３－ヒドロキシベンズアルデヒドに適用し、３－ジメトキシメチル－フェノールを定量的収率で得た。
実施例３：４－ジメトキシメチル－２－フルオロ－フェノール（HDP 30.2630）
実施例１の手順を１ｇ（７．１４ｍｍｏｌ）の３－フルオロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒドに適用し、４－ジメトキシメチル－２－フルオロ－フェノールを定量的収率で得た。
実施例４：４－ブロモ－３－ジメトキシメチル－フェノール（HDP 30.2631）
実施例１の手順を２－ブロモ－３－ヒドロキシベンズアルデヒドに適用し、４－ブロモ－３－ジメトキシメチル－フェノールを定量的収率で得た。
実施例５：１－［１１－ブロモ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－４－ジメトキシ－メチル－ベンゼン（HDP 30.2637）
実施例１の粗４－ジメトキシメチル－フェノール（１，７３９ｇ、ｍａｘ．１０ｍｍｏｌ）および６．４００ｇ（２０ｍｍｏｌ）の１，１１－ジブロモ－３，６，６－トリオキサウンデカンを４０ｍｌの乾燥ＤＭＦに溶解し、３．９１０ｇ（１２ｍｍｏｌ）の炭酸セシウムを加え、混合物を５０°Ｃで１時間加熱した。次にＤＭＦを留去して、残渣を５０ｍｌのジクロロメタン中で撹拌し、その後、濾過した。濾過物を留去して、ｎ－ヘキサンの酢酸エチルに対する勾配のシリカゲルで精製し、１．８６２ｇ（４６％）の生成物１－［１１－ブロモ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－４－ジメトキシ－メチル－ベンゼンを油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) d 7.39-7.32 (m, 2H), 6.94-6.87 (m, 2H), 5.35 (s, 1H), 4.17-4.11 (m, 2H), 3.91-3.84 (m, 2H), 3.80 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.76-3.71 (m, 2H), 3.71-3.66 (m, 6H), 3.46 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.31 (s, 6H).

13C NMR (126 MHz, CDCl3) d 158.85, 130.53, 127.88, 114.21, 102.99, 71.19, 70.84, 70.70, 70.64, 70.53, 69.73, 67.42, 52.59, 30.33.

MS (ESI+) 実測値:429.17; 計算値 [M+Na]+:429.09 (C17H27BrNaO6)
実施例６：１－［１１－ブロモ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－３－ジメトキシ－メチル－ベンゼン (HDP 30.2641)
実施例５の手順を実施例２の粗生成物に適用し、２．０７９ｇ（５１％）の標題化合物（HDP 30.2641）を油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) d 7.30-7.23 (m, 1H), 7.06-7.00 (m, 2H), 6.88 (ddd, J = 8.3, 2.5, 1.1 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.17-4.12 (m, 2H), 3.88-3.84 (m, 2H), 3.81 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.77-3.71 (m, 2H), 3.71-3.66 (m, 6H), 3.46 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.32 (s, 6H).
13C NMR (126 MHz, CDCl3) d 158.92, 139.76, 129.32, 119.38, 115.01, 112.74, 103.06, 71.31, 70.95, 70.82, 70.76, 70.65, 69.87, 67.54, 52.84, 30.44.

MS (ESI+) 実測値:375.17/377.17;計算値 [MH-OMe]+:375.08/377.08 (C16H24BrO5)
実施例７：１－（１１－ブロモ－３，６，６－トリオキサウンデシル）－４－ジメトキシメチル－２－フルオロ－ベンゼン(HDP 30.2642)
実施例５の手順を実施例３の粗生成物に適用し、２．０３２ｇ（６７％）の標題化合物（HDP 30.2642）を油状物として得た。
MS (ESI+) 実測値:393.17/395.17; 計算値 [MH-OMe]+:393.07/395.07 (C16H23BrFO5)

1H NMR (500 MHz, CDCl3) d 7.18 (dd, J = 12.0, 2.1 Hz, 1H), 7.13 (ddt, J = 8.4, 1.9, 0.8 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.33 (s, 1H), 4.23-4.17 (m, 2H), 3.90-3.86 (m, 2H), 3.81 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.68 (d, J = 9.6 Hz, 6H), 3.46 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.30 (s, 6H).
13C NMR (126 MHz, , CDCl3) d 152.60 (d, J = 246.1 Hz), 146.92 (d, J = 10.9 Hz), 131.90 (d, J = 5.7 Hz), 122.61 (d, J = 3.6 Hz), 114.93 (d, J = 4.0 Hz), 114.79, 102.20 (d, J = 1.6 Hz), 71.31, 71.06, 70.80, 70.74, 70.65, 69.71, 69.21, 52.67, 30.44.
実施例８：１－ブロモ－４－［１１－ブロモ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－２－ジメトキシ－メチル－ベンゼン(HDP 30.2643)
実施例５の手順を実施例４の粗生成物に適用し、２．７５７ｇ（５７％）の標題化合物（HDP 30.2643）を油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) d 7.42 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 8.7, 3.1 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.16-4.09 (m, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.81 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.70-3.66 (m, 6H), 3.47 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.38 (s, 6H).
13C NMR (126 MHz, CDCL3) d 158.22, 137.89, 133.57, 117.11, 114.31, 113.52, 102.99, 71.34, 70.99, 70.83, 70.77, 70.67, 69.77, 67.89, 54.08, 30.44.

MS (ESI+)
実測値:502.00/504.00/506.00;
計算値[M+NH4]+:502.04/504.04/506.04 (C17H30Br2NO6)
実測値:453.08/455.08/457.08;
計算値 [MH-OMe]+: 452.99/454.99/456.99 (C16H23Br2O5)
実施例９：１－［１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－４－ジメトキシ－メチル－ベンゼン (HDP 30.2640)
実施例５の生成物、HDP 30.2637（１．７２５ｇ，４．２４ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの乾燥ＤＭＦに溶解し、アジ化ナトリウム９７５ｍｇ（１２．７ｍｍｏｌ，３当量）を加え、その懸濁液を一晩環境温度で撹拌した。その後溶剤を留去し、残渣を５０ｍｌのｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）に取り、重炭酸ナトリウムおよび食塩水（それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、留去して、中間体１－［１１－アジド－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－４－ジメトキシ－メチル－ベンゼンを含む透明な油状物（１．４３５ｇ，収率９２％）を得た。
MS (ESI+)
実測値:392.25;計算値[M+Na]+: 392.18(C17H27N3NaO6)
実測値:338.25;計算値 [MH-OMe]+:338.17(C16H24N3O5)
上記のアジド中間体をＴＨＦに溶解し、２．０３８ｍｇ（２当量）のトリフェニルホスフィン、次に２ｍｌの水を加えた。混合物を室温で一晩、ガスの発生が止まるまで撹拌した。２１時間後、揮発性物質を留去し、残ったホスフィンと中間体１－［１１－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－４－ジメトキシ－メチル－ベンゼンとの混合物を２０ｍｌのＤＭＦに溶解した。
Ｆｍｏｃ－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル１．５７ｇ（１．２当量）およびＮ－エチルジイソプロピルアミン（１３２０μｌ；２当量）を加えた。室温で１７時間撹拌後、さらに７８５ｍｇのＦｍｏｃ－ＯＳｕを加えた。中間体アミノを完全に変換した後、溶媒を留去し、残渣を１００ｍｌのジクロロメタンに溶解し、水（２ｘ１００ｍｌ）および食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、乾燥するまで減らした。粗生成物をｎ－ヘキサン中の０～１００％ＭＴＢＥの勾配でシリカゲルで精製し、標題化合物６１７ｍｇ（２８％）を粘着性の油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) d 7.75 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.39 (tt, J = 7.4, 0.9 Hz, 2H), 7.35-7.28 (m, 4H), 6.90-6.84 (m, 2H), 5.42 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.33 (s, 1H), 4.40 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.72-3.58 (m, 8H), 3.55 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.37 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 3.29 (s, 6H).

13C NMR (126 MHz, CDCl3) d 158.77, 156.47, 143.97, 141.26, 127.84, 127.69, 127.60, 126.98, 125.02, 119.90, 114.14, 102.95, 70.79, 70.55, 70.30, 69.99, 69.85, 69.67, 67.32, 66.44, 52.55, 47.24, 40.90.

MS (ESI+)
実測値:588.33;計算値 [M+Na]+:588.26 (C32H39NNaO8)
実測値:534.33;計算値 [MH-OMe]+:534.25 (C31H36NO7)
実施例１０：１－［１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－３－ジメトキシ－メチル－ベンゼン(HDP 30.2650)
実施例９の手順を実施例６の粗生成物１．０８２ｇに適用し、１０６ｍｇ（７％）の標題化合物（HDP 30.2650）を油状物として得た。
MS (ESI+) 実測値:588.33;計算値[M+Na]+:588.26 (C32H39NNaO8)
実施例１１：１－（１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，６－トリオキサウンデシル）－４－ジメトキシメチル－２－フルオロ－ベンゼン(HDP 30.2651)
実施例９の手順を実施例７の粗生成物１．９００ｇに適用し、１１２ｍｇ（４％）の標題化合物（HDP 30.2651）を油状物として得た。

MS (ESI+)
実測値: 606.33;計算値[M+Na]+:606.25 (C32H38FNNaO8)
実測値:552.33;計算値[MH-OMe]+:552.24 (C31H35FNO7)
実施例１２：１－ブロモ－４－［１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ］－２－ジメトキシ－メチル－ベンゼン(HDP 30.2652)
実施例９の手順を実施例８の粗生成物２．６２５ｇに適用し、１９３ｍｇ（６％）の標題化合物（HDP 30.2652）を油状物として得た。

MS (ESI+)実測値:666.17/668.17
計算値[M+Na]+:666.17/668.17 (C32H38BrNNaO8)
実施例１３：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＰ－ＣＨＯ(HDP 30.2623)
温度計、滴下漏斗およびゴム隔膜を備えた三ツ口フラスコ中で、２０ｍｌの乾燥ジクロロメタンを（４４６μｌ，５．２ｍｍｏｌ）塩化オキサリルで処理し、溶液をアルゴン雰囲気下で－８０℃まで冷却した。
温度を－７０°Ｃ未満に維持しながらＤＭＳＯ（７３９μｌ，１０．４ｍｍｏｌ）をゴム隔膜を介してシリンジで滴下した。１５分撹拌後、２０ｍｌのジクロロメタンに溶解したＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＯＨ（ＨＤＰ ３０．１４１９，２．０６２ｇ，４．０ｍｍｏｌ）を、滴下漏斗により３０分かけて滴下し、混合物をさらに３０分撹拌した。
次に、トリエチルアミン（２．６３４ｍｌ，１９．０ｍｍｏｌ）をシリンジで添加し、５分後、冷却槽を除き、反応液を室温まで戻した。その後２５ｍｌの水と２５ｍｌのジクロロメタンを加え、層を分離した。水層を２０ｍｌのジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせて２０ｍｌの０．２Ｍクエン酸，３ｘ２０ｍｌ水および２０ｍｌの食塩水で洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ4）後、溶媒を留去し、粗生成物（９６５ｍｇ）をジクロロメタン中０～２０％酢酸エチルの勾配でシリカゲルで精製し、６３１ｍｇ（３１％）の生成物をアモルファス固体で得た。
1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 10.36 (s, 1H), 9.89 (s, 1H), 8.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.91-7.79 (m, 6H), 7.74 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.45-7.29 (m, 5H), 4.47 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37-4.28 (m, 1H), 4.28-4.19 (m, 2H), 3.95 (dd, J = 8.9, 7.0 Hz, 1H), 2.02 (h, J = 6.7 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 191.35, 171.75, 171.03, 156.05, 144.40, 143.79, 143.69, 140.61, 131.30, 130.68, 127.52, 127.50, 126.93, 125.22, 119.96, 119.95, 118.76, 65.63, 59.86, 49.20, 46.64, 30.32, 19.06, 18.12, 17.70.

MS (ESI+)実測値: 536.25 計算値 [M+Na]+:536.22 (C30H31N3NaO5)
実施例１４：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）2(HDP 30.2677)
工程１３生成物HDP 30.2623（５１４ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのメタノールに溶解した。オルトギ酸トリメチル（５．４７ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）および４－トルエンスルホン酸一水和物（２１ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）および２０ｍｌジクロロメタンを加え、混合物をアルゴン雰囲気下で還流した。５時間超後、オルトギ酸トリメチル（５．４７ｍｌ）および４－トルエンスルホン酸（２１０ｍｇ）を添加し、さらに２時間撹拌を継続した。反応混合物を冷却し、５０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムに激しく撹拌しながら注いだ。ガスの発生が収まったあと。１００ｍｌのジクロロメタンを添加し、濁った混合物を４０００×ｇで４０ｍｌの部分で遠心分離した。透明な上層を除き、有機層を１５ｍｌの水で洗浄し、遠心分離した。有機層を合わせて留去し、残渣を２×２０ｍｌメタノールと共に水の痕跡を除くために蒸留した。残渣を１００ｍｌのジクロロメタンにとり不溶成分を濾過で除いた。濾過物を留去し、残渣を５０ｍｌＭＴＢＥで４０°Ｃで１時間粉砕し、その後室温に冷却し、吸引濾過した。析出物を２０ｍｌＭＴＢＥで洗浄し、真空乾燥し、４４５ｍｇ（７９％）の標題生成物をアモルファス固体で得た。
実施例１５：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＡＢ－ＯＨ(HDP 30.2761)
ジペプチドＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＨ（４．１０５ｇ，１０．０ｍｏｌ）および４－アミノベンジルアルコール（１．２９３ｇ，１．０５当量）を６０ｍｌの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解した。２－エトキシ－Ｎ－（エトキシカルボニル）－１，２－ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、２．５９７ｇ、１．０５当量）を加え、混合物を、光から保護して、室温で撹拌した。
３日後、ゼラチン状物質を形成した反応混合物を１４０ｍｌのＭＴＢＥで希釈し、微細な沈殿物が形成されるまで撹拌し、これを吸引濾過し、５０ｍｌのＭＴＢＥで洗浄し、乾燥させて４．４８０ｇ（８７％）の標題生成物HDP 30.2761を無色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 9.40 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.74 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46-7.36 (m, 4H), 7.32 (tt, J = 7.5, 1.3 Hz, 2H), 7.23 (td, J = 7.6, 1.7 Hz, 1H), 7.15 (td, J = 7.4, 1.3 Hz, 1H), 5.24 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.56-4.42 (m, 3H), 4.36-4.28 (m, 1H), 4.28-4.20 (m, 2H), 3.96 (dd, J = 9.1, 6.8 Hz, 1H), 2.04 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 171.09, 170.90, 156.09, 143.83, 143.72, 140.65, 140.63, 135.08, 134.74, 127.55, 127.54, 127.23, 126.97, 126.87, 125.27, 124.64, 123.66, 120.00, 119.98, 65.65, 60.03, 59.86, 48.90, 46.65, 40.01, 39.84, 39.67, 39.50, 39.34, 39.17, 39.00, 31.23, 30.33, 19.15, 18.04, 17.89.

MS (ESI+) 実測値:538.25 計算値 [M+Na]+:538.23 (C30H33N3NaO5)
実施例１６：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）２(HDP 30.2769)
工程１５からのベンジルアルコールHDP 30.2761（４．４８ｇ，８．６９ｍｍｏｌ）に１８ｍｌのＤＭＳＯおよび３６ｍｌの無水ジクロロメタン続いて３．６６ｇ、１．０当量）デス－マーチンペルヨージナン、２時間撹拌した後、得られた茶色がかった溶液を９０ｍｌのクロロホルムで希釈し、９０ｍｌの水で洗浄した。水相を２×４０ｍｌのクロロホルムで逆抽出し、合わせた有機物を、ｐＨが７～８に達するまで９０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムで振とうして洗浄した。次に、３０ｍｌの２０％チオ硫酸ナトリウム溶液を加え、振とうを２分間続けた。分離後、有機層をさらに９０ｍｌの水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）させて、揮発性物質を除去した。残った４．８７５ｇを１５０ｍｌＭＴＢＥと撹拌し、微細な沈殿物を形成させ、それを吸引で濾別し、５０ｍｌのＭＴＢＥで洗浄し、乾燥させ、４．３０７ｇ（９７％）の無色の固体の中間アルデヒドとした。

MS (ESI+) 実測値:536.25 計算値[M+Na]+:536.22 (C30H31N3NaO5)
次に、４．１８７ｇ（８．１５２ｍｍｏｌ）のアルデヒドＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＡＰ－ＣＨＯを８０ｍｌのメタノールに懸濁し、オルトギ酸トリメチル（４５ｍｌ、５０当量）および４－トルエンスルホン酸一価物（１．５５１ｇ、１当量）を加え、混合物をアルゴン雰囲気下で１時間還流した。室温まで冷却した後、激しく撹拌しながら、反応混合物を１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムに入れた。
ゼラチン状物質を溶解するために１００ｍｌのクロロホルムを加え、相分離した。水相を２ｘ５０ｍｌのクロロホルムで逆抽出し、合わせた有機層を５０ｍｌの半飽和食塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル上でジクロロメタン中０～２０％酢酸エチルの勾配で精製して、アモルファス固体として３．２７９ｇ（７２％）の標題生成物HDP 30.2769を得た。
1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 9.27 (s, 1H), 8.30 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.75 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.48-7.38 (m, 4H), 7.32 (ddd, J = 8.7, 6.7, 1.4 Hz, 3H), 7.18 (td, J = 7.6, 1.3 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 4.46 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37-4.29 (m, 1H), 4.28-4.20 (m, 2H), 3.99 (dd, J = 9.2, 6.8 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.05 (h, J = 6.7 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 176.52, 176.05, 161.32, 149.06, 148.95, 145.89, 145.87, 140.68, 134.89, 133.97, 132.82, 132.80, 132.38, 132.23, 130.56, 130.55, 129.58, 129.11, 125.27, 106.40, 70.84, 65.01, 58.68, 58.37, 54.27, 51.85, 35.65, 24.41, 23.26, 22.69.

MS (ESI+) 実測値:582.33 計算値 [M+Na]+：582.26 (C32H37N3NaO6)
実施例１７：ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）2(HDP 30.2776)
実施例１６の生成物、HDP 30.2769（３．２３６ｇ、５．７８２ｍｍｏｌ）を３０ｍｌのＤＭＦに懸濁した。ジエチルアミン（８ｍｌ）を加え、室温で３０分間撹拌して、透明な溶液を形成した。揮発性物質を留去し、残留物を３０ｍｌの新鮮なＤＭＦと共蒸発させ、その後高真空で乾燥させた。粗生成物は中間体アミンＨ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）2を含み、さらに精製することなく使用した。
MS (ESI+) 実測値: 360.25 計算値[M+Na]+：360.19 (C17H27N3NaO4)
中間体遊離アミンを３０ｍｌのＤＭＦに溶解し、１．５３９ｇ（１当量）の３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）および１．９６７ｍｌ（２当量）のＮ－エチルジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加え、溶液を１時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣を１００ｍｌのＭＴＢＥと撹拌した。形成された微細な沈殿物を濾別し、ＭＴＢＥ（２０ｍｌ）で洗浄し、そして真空中で乾燥させた。粗生成物をシリカゲル上でジクロロメタン中０～１０％メタノールの勾配で精製して、無色アモルファス固体として２．１６４ｇ（７７％）の純粋な標題生成物を得た。
1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 9.20 (s, 1H), 8.27 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.43 (dd, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.33 (td, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.16 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.44 (s, 1H), 4.41 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 8.8, 6.6 Hz, 1H), 3.61 (dq, J = 17.1, 6.6 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.48-2.40 (m, 2H), 2.01 (dh, J = 20.3, 6.8 Hz, 1H), 1.33 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 171.03, 170.78, 170.63, 169.50, 135.51, 134.47, 129.50, 128.70, 127.15, 124.23, 123.70, 101.33, 57.27, 53.46, 53.18, 49.08, 33.99, 33.64, 30.32, 19.10, 17.91, 17.28.1

MS (ESI+) 実測値:511.25 計算値 [M+Na]+：511.22 (C24H32N4NaO7)
実施例１８：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＭＡＢ－ＯＨ(HDP 30.2767)
３－アミノベンジルアルコールについて実施例１５の手順を行なうことにより、４．６９８ｇ（９１％）の標題生成物HDP 30.2767をアモルファス固体として得た。

1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 9.95 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.50-7.37 (m, 4H), 7.32 (tt, J = 7.5, 1.6 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.19 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 14.7, 6.5 Hz, 3H), 4.36-4.28 (m, 1H), 4.28-4.19 (m, 2H), 3.93 (dd, J = 9.0, 7.1 Hz, 1H), 2.01 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 1.32 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 170.93, 156.08, 143.80, 143.72, 143.16, 140.63, 140.62, 138.78, 128.29, 127.57, 127.54, 126.98, 125.29, 121.21, 120.02, 120.00, 117.41, 117.11, 65.63, 62.77, 59.92, 48.95, 46.61, 30.32, 19.13, 18.19, 18.07, 3.26.

MS (ESI+) 実測値:538.33 計算値[M+Na]+:538.23(C30H33N3NaO5)
実施例１９：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＭＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）２ (HDP 30.2778)
実施例１８の化合物（ＨＤＰ ３０．２７６７）について最後のシリカゲルクロマトグラフィーを除いて実施例１６の手順を行なうことにより、次の工程に用いるには十分に純粋な６．２８ｇの標題生成物HDP 30.2778の粗生成物をアモルファス固体として得た。
実施例２０：ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＭＡＰ－ＣＨ（ＯＭｅ）2(HDP 30.2776)
実施例１９の化合物（HDP 30.2778）について実施例１７の手順を行なうことにより、HDP 30.2767に基づき９５％の収率での標題生成物HDP 30.2781をアモルファス固体として得た。
1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) d 9.89 (s, 1H), 8.16 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.64-7.54 (m, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.06 (dt, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.00 (s, 2H), 5.35 (s, 1H), 4.38 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 8.4, 6.8 Hz, 1H), 3.68-3.57 (m, 2H), 3.24 (s, 6H), 2.50-2.40 (m, 2H), 2.00-1.90 (m, J = 6.8 Hz, 1H), 1.32 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

13C NMR (126 MHz, D6-DMSO) d 171.09, 170.77, 170.71, 169.76, 138.90, 138.79, 134.52, 128.46, 121.42, 118.99, 117.25, 102.42, 57.71, 52.44, 52.42, 49.08, 34.02, 33.70, 30.26, 19.11, 18.17, 17.83.

MS (ESI+) 実測値:511.25 計算値[M+Na]+：511.22 (C24H32N4NaO7)
環状アセタールの一般的手順Ａ
乾燥ＤＭＦ（１００μｌ／ｍｇ）中のジオール化合物の溶液に、ジメチルアセタール化合物（１０当量）を加えた。混合物をトリフルオロ酢酸（１０μｌ／ｍｇ）で酸性化し、透明な溶液が形成されるまでアルゴン雰囲気下で周囲温度で撹拌した。続いて、高真空で溶媒を留去し残りは新しいＤＭＦに再溶解した。サンプルをメタノール中の１％トリエチルアミンでクエンチし、ＨＰＬＣで分析して、出発物質の完全な変換を示した。
ＤＭＦ溶液を、１０倍量のｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）中の０．１％トリエチルアミンの氷冷溶液に滴下し、得られた沈殿物を遠心分離によって単離した。上澄みを排出し、ペレットを同量の０．１％トリエチルアミンＭＴＢＥに再懸濁し、再度遠心分離した。真空乾燥した粗生成物を分取ＨＰＬＣによりさらに精製した。
環状アセタールの一般的手順Ｂ
ジオール化合物（１当量）とジメチルアセタール化合物（８当量）を遠心チューブに入れ、ＤＭＦ／ＴＦＡ４：１（ｖ／ｖ、２０μｌ／μｍｏｌジオール化合物）に溶解した。ＨＰＬＣ制御がジオール化合物の完全な変換を示すまで（１～１８時間）、チューブを室温で振とうした。次に、２０倍量の氷冷ＭＴＢＥを添加し、遠心分離によって沈殿物を単離した。最初のペレットを２ｖｏｌ－％トリエチルアミンを含む同量のＭＴＢＥに再懸濁し、再度遠心分離した。乾燥したペレットをさらに精製することなく次の反応に使用した。
実施例２１：α－アマニチン－（Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－４－アミノ－ベンジリデンアセタール） HDP 30.2681
アルファ－アマニチン（３０．９８ｍｇ）およびHDP 30.2677を一般的手順Ａにしたがって反応させた。粗生成物をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ－Ｃ１８（２）、１０μｍ、２５０ｘ２１．２ｍｍで、水中の５～１００％アセトニトリルの勾配で１５分間精製した。１０．４０～１１．０８分の画分を含む生成物を凍結乾燥して、３７．０７ｍｇ（７８％）の凍結乾燥物を得た。
MS (ESI+) 実測値:1414.67; 計算値[MH]+:1414.58 (C69H84N13O18S)
実施例２２：α－アマニチン－［４－（１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］ HDP 30.2665
一般的手順Ａにしたがって、α－アマニチン（２０．５１ｍｇ）および実施例９のHDP 30.2640を反応させ、２０．９６ｍｇ（６５％）の標題生成物を凍結乾燥粉末として得た。
実施例２３：α－アマニチン－［３－（１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］ HDP 30.2666
一般的手順Ｂにしたがって、α－アマニチン（２０．５１ｍｇ）および実施例１０のHDP 30.2650を反応させ、標題生成物の粗生成物をさらなる精製なしに使用した。
実施例２４：α－アマニチン－［４－（１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－３－フルオロ－ベンジリデンアセタール］HDP 30.2667
一般的手順Ｂにしたがって、α－アマニチン（２０．５１ｍｇ）および実施例１１のHDP 30.2651を反応させ、標題生成物の粗生成物をさらなる精製なしに使用した。
実施例２５：α－アマニチン－［２－ブロモ－３－（１１－Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］HDP 30.2668
一般的手順Ｂにしたがって、α－アマニチン（２０．５１ｍｇ）および実施例１１のHDP 30.2652を反応させ、標題生成物の粗生成物をさらなる精製なしに使用した。
実施例２６：α－アマニチン－（ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－４－アミノ－ベンジリデンアセタール） HDP 30.2684
環状アセタールHDP30.2681（３７．０７ｍｇ、２６．２１μｍｏｌ）を２ｍｌの乾燥ＤＭＦに溶解した。ジエチルアミン（９２μｌ、８９１μｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で１５分間撹拌した。揮発性物質を真空留去し、残留物を乾燥ＤＭＦに再溶解した。ＨＰＬＣおよびＭＳ分析は、遊離アミンへの完全な脱保護を示した。
(MS-ESI+) 実測値:1192.67; 計算値[MH]+:1192.51 (C54H74N13O16S)
５００μｌの乾燥ＤＭＦに溶解した３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ、１４ｍｇ、５２．４２μｍｏｌ＝２当量）を加え、続いて８．９２μｌ（５２．４２μｍｏｌ＝２当量）のＮ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を１０ｍｌの氷冷されたＭＴＢＥに滴下し、そして沈殿物を遠心分離によって単離した。粗ペレットを、１５分で水中の５～５０％アセトニトリルの勾配を用いたＬｕｎａ－Ｃ１８（２）での分取ＨＰＬＣによって精製した。１１．９－１２．８分の生成物画分を凍結乾燥して、２０．８５ｍｇ（５９％）の無色の凍結乾燥物を得た。
MS (ESI+) 実測値:1343.58; 計算値[MH]+:1343.54 (C61H79N14O19S)
実施例２７：α－アマニチン－［４－（１１－（３－マレイミドプロピル－アミド）－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］HDP 30.2669
実施例２６の手順を実施例２２のHDP 30.2665の２０．９６ｍｇに適用して、標題生成物HDP 30.2669（１３．００ｍｇ，６５％）を凍結乾燥粉末として得た。
MS (ESI+) 実測値:1371.58; 計算値 [MH]+:1371.52 (C61H80N12NaO21S))
実施例２８：α－アマニチン－［３－（１１－（３－マレイミドプロピル－アミド）－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］ HDP 30.2670
実施例２６の手順を実施例２３のHDP 30.2666の粗生成物に適用して、標題生成物HDP 30.2670（４．３９ｍｇ，α－アマニチンに基づき１５％）を凍結乾燥粉末として得た。
MS (ESI+) 実測値:1371.50; 計算値[MH]+:1371.52 (C61H80N12NaO21S))
実施例２９：α－アマニチン－［４－（１１－（３－マレイミドプロピル－アミド）－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－３－フルオロ－ベンジリデンアセタール］HDP 30.2671
実施例２６の手順を実施例２４のHDP 30.2667の粗生成物に適用して、標題生成物HDP 30.2671（５．８２ｍｇ，α－アマニチンに基づき１９％）を凍結乾燥粉末として得た。
MS (ESI+) 実測値:1389.50; 計算値[MH]+:1389.51 (C61H79FN12NaO21S)
実施例３０：α－アマニチン－［２－ブロモ－３－（１１－（３－マレイミドプロピル－アミド）－３，６，９－トリオキサウンデシロキシ）－ベンジリデンアセタール］HDP 30.2672
実施例２６の手順を実施例２４のHDP 30.2668の粗生成物に適用して、標題生成物HDP 30.2672（２．４３ｍｇ，α－アマニチンに基づき８％）を凍結乾燥粉末として得た。
MS (ESI+)
実測値:1449.42/1451.42;
計算値 [MH]+:1449.43/1451.43 (C61H79BrN12NaO21S)
実施例３１：α－アマニチン－（ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－２－アミノ－ベンジリデンアセタール）HDP 30.2792
α－アマニチンを実施例１７の化合物HDP 30.2776と反応させて標題化合物を得ることができた。
実施例３２：α－アマニチン－（ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－３－アミノ－ベンジリデンアセタール） HDP 30.2793
α－アマニチンを実施例２０の化合物HDP 30.2781と反応させて標題化合物を得ることができた。
実施例３３:アマトキシン抗体複合体の合成
Ｄ２６５Ｃ突然変異（「チオマブ」、Ｉｇ重鎖のアミノ酸位置２６５におけるアスパラギン酸からシステインへの突然変異）を有する抗Ｈｅｒ２ｎｅｕ特異的抗体であるトラスツズマブの誘導体を、アマトキシンリンカー誘導体HDP 30.2669、HDP 30.2670、HDP 30.2671、HDP 30.2672およびHDP 30.2684に結合させた。
各コンジュゲーション反応について、１ｍＭ ＥＤＴＡに調整したＰＢＳ緩衝液中の１０ｍｇのチオマブを使用した。システインは、抗体と４０当量との反応によって除去された。振盪機上で３７℃で３時間のＴＣＥＰおよびＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット中での１×ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中、４℃での２回の連続透析。酸化は、振盪機上、室温で３時間の、２０当量のデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）との抗体のインキュベーションによって行った。
ＤＭＳＯに溶解した４当量のHDP 30.2669、HDP 30.2670、HDP 30.2671、HDP 30.2672およびHDP 30.2684を、それぞれ用いた、室温で１時間のインキュベーション、２５当量のＮーアセチルーＬーシステインの添加によるクエンチング、および室温で１５分間、または４℃で一晩のインキュベーションにより、アマトキシン－リンカー誘導体との複合体形成を行なった。各反応混合物を、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で平衡化したSephadex G－２５ゲル濾過（ＰＤ－１０カラム、GE Healthcare Life Sciences)によって精製した。タンパク質含有画分をパラフィルム上のＢｒａｄｆｏｒｄ試薬で同定し、プールした。複合体溶液を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して、スライドＡ－ライザー透析カセット(Thermo Scientific、２０．０００ ＭＷＣＯ）中、４℃で一晩透析した。タンパク質濃度は、RotiQuant-Assay(Carl Roth、ドイツ)を用いて測定した。複合体溶液を５ｍｇ/ｍｌ(～３．４４×１０-5Ｍ）のタンパク質濃度に調整し、滅菌フィルター処理し、４℃で保存した。複合体を「T-D265C-30.2669」、「T-D265C-30.2670」、「T-D265C 30.2671」、「T-D265C-30.2672」、および「T-D265C-30.2684」と命名した。
還元条件下でのクーマシー染色において、アマトキシン抗体複合体およびNaked抗体の軽鎖および重鎖は、約２５および５０ｋＤａの予想される見かけの質量を有していた。アマトキシン抗体複合体の場合、Naked抗体と比較して、重鎖のタンパク質シグナルのアップシフトが観察され、重鎖への毒素の結合が示された。還元条件下での抗アマニチンウエスタンブロットにおいて、チオマブ複合体は約５５ｋＤａの重鎖のシグナルを示し、軽鎖のシグナルは示さなかった。これは、もっぱら重鎖に毒素が結合していることを示した。
実施例３４:ＨＥＲ２陽性腫瘍細胞株に対するインビトロ細胞毒性試験
トラスツズマブ (抗HER２ｎｅｕ特異的抗体）－アマトキシン複合体の細胞毒性活性を、ＨＥＲ２陽性腫瘍細胞株ＳＫＢＲ－３（乳癌）、ＮＣＩ-Ｎ８７（胃癌）およびＪＩＭＴ－１（乳癌）について、化学発光ＢｒｄＵーＥＬＩＳＡ取込みアッセイ（Roche）を用いてインビトロで評価した。試験した複合体は、アマトキシンのａａ３（T-D265C-30.2684）に連結された本発明によるジペプチジン切断部位を有する芳香族環状アセタールとの１つの複合体、アマトキシンのａａ４に連結されたジペプチジン切断部位を有するパラアミノベンジルエーテルリンカーとの１つの複合体（T-D265C-30.1699）、およびアマトキシンのａａ３に連結されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーを有する芳香族環状アセタールとの４つの複合体（ｐ-ＰＥＧ3リンカーを有するＴ-Ｄ２６５Ｃ－３０．２６６９、ｍ-ＰＥＧ3 リンカーを有する－３０．２６７０、ｐ-ＰＥＧ3 リンカーおよびフッ化アリール部分を有する－３０．２６７１、ｏ－ＰＥＧ3 リンカーおよび臭化アリール部分を有する－３０．２６７２）を含んでいた。
ＳＫＢＲ－３細胞に対する細胞毒性試験の結果を図２に、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対する細胞毒性試験の結果を図３に、ＪＩＭＴ－１細胞に対する結果を図４に示す。

種々のＨｅｒ２陽性細胞株上の種々のトラスツズマブ－アマトキシン複合体のＥＣ50値を表１に示す:
本発明の複合体T-D265C-30.2684の細胞毒性は、複合体T-D265C-30.1699の細胞毒性に匹敵した。本発明の複合体T-D265C-30.2684の細胞毒性はＰＥＧリンカーを有する芳香族環状アセタールを含む複合体T-D265C-30.2669と比較した場合、ＳＫＢＲ－３細胞ではわずかに高かったが、ＮＣＩ-Ｎ８７細胞およびＪＩＭＴ－１細胞ではかなり高かった。
切断可能なＶａｌ－Ａｌａリンカーを共に有するＡＤＣである T-D265C-30.2684およびT-D265C-30.1699は、試験した細胞株に対して完全な細胞傷害能を示した。酸に不安定なＡＤＣである T‐D265C‐30.2670, T‐D265C‐30.2671およびT‐D265C‐30.2672は、ＳＫＢＲ－３細胞に対し、それぞれ約６５％、５０％および６０％の残存細胞生存率と共に増殖阻害のみを示し、ＪＩＭＴ－１細胞に対する細胞毒性は全く示さなかった。
アマトキシン誘導体HDP 30.2684はインビトロでHDP 30.1699と同程度に有効であるが、はるかに速く合成される。HDP 30.1699の合成の間、３回のＨＰＬＣ精製が必要であるが、HDP 30.2684の合成は１回のみを要する。
実施例３５:インビボでのＳＫＯＶ－３異種移植腫瘍マウスモデルにおけるアセタールリンカー複合体の有効性
本研究は、皮下Ｈｅｒ２陽性ＳＫＯＶ‐３（ヒト卵巣）腫瘍をそれぞれ有する１０匹の雌ＮＯＤ Ｓｃｉｄマウスによる７つの実験群から構成された。アマトキシンａ３結合を有する２つの芳香族環状アセタール複合体（T‐D265C‐30.2684、T‐D265C‐30.2669）の漸増用量における有効性を、アマトキシンのａａ４に結合したジペプチジン切断部位を有するパラ‐アミノ‐ベンジルリンカーを有するT‐D265C‐30.1699および未処理対照と比較した。マウスに単回静脈内投与した。
実験のセットアップを表２に示す。
この研究の結果を図５に示す。
環状アセタールアマトキシン薬物複合体で処理した群では、すべての動物に腫瘍が認められなかった。１ｍｇ/ｋｇのT-D265C-30.1699で処置した動物群では、腫瘍のない動物は得られなかった。２ｍｇ/ｋｇのT-D265C-30.1699で処置した動物群で１０匹中４匹の動物は腫瘍がなかった。
実施例３６:インビボマウスモデルにおけるアセタールリンカー複合体の忍容性
アマトキシンＡＤＣ T‐D265C‐30.2669およびT‐D265C‐30.2684の許容性を、それぞれ、１回の静注適用後のＮＯＤ/ＳＣＩＤマウスで評価した。全２１匹の動物を使用した。T‐D265C‐30.2669およびT‐D265C‐30.2684は６ｍｇ/ｋｇまでの有効量で良好な忍容性を示した。結果を図６に示す。
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Claims (18)

  1. 式ＩＩＩまたはＩＶを有する、アマトキシンおよびＴ－Ｌ部分を含む複合体；
    Figure 0007636350000044
     式中、
    ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
    Ｒ１はＨまたはＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
    Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり；
    Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ１－Ｃ８－アルキル、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり；
    Ｒ５はＯＨ、ＮＨ２、またはＮＨＯＨであり；
    Ｒ６、Ｒ７は天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
    Ｌはリンカーであり、そして
    Ｔは標的結合部分である。
  2. 式Ｖを有する、アマトキシンおよびＴ－Ｌ部分を含む複合体；
    Figure 0007636350000045
     式中、
    ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
    ＹはＣＨ２またはＣＯであり；
    Ｒ１はＨまたはＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
    Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり；少なくとも１つのＲ２基は前記Ｔ－Ｌ部分で置換されており
    Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ１－Ｃ８－アルキル、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり；
    Ｒ５はＯＨ、ＮＨ２、またはＮＨＯＨであり；
    Ｌはリンカーであり、そして
    Ｔは標的結合部分である。
  3. 式ＶＩを有する、アマトキシンおよびＴ－Ｌ部分を含む複合体；
    Figure 0007636350000046
     式中、
    ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
    Ｒ１はＨまたはＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
    Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり、ただし、Ｒ８がＴ－Ｌ部分でない場合、１つのＲ２は前記Ｔ－Ｌ部分で置換されており；
    Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ１－Ｃ８－アルキル、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり；
    Ｒ５はＯＨ、ＮＨ２、またはＮＨＯＨであり；
    Ｒ８は直鎖または分岐鎖のアルキル基であり、または、いずれのＲ２もＴ－Ｌ部分でない場合、Ｔ－Ｌ部分であり；
    Ｌはリンカーであり、そして
    Ｔは標的結合部分である。
  4. 式ＶＩＩを有する、アマトキシンおよびＴ－Ｌ部分を含む複合体；
    Figure 0007636350000047
     式中、
    ＸはＳ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
    Ｒ１はＨまたはＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
    Ｒ２は独立してＨまたは電子求引もしくは供与基であり、ただし、Ｒ９がＴ－Ｌ部分でない場合、１つのＲ２は前記Ｔ－Ｌ部分で置換されており；
    Ｒ４はＨ、ＯＨ、Ｏ－Ｃ１－Ｃ８－アルキル、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＳＨであり；
    Ｒ５はＯＨ、ＮＨ２、またはＮＨＯＨであり；
    Ｒ９はＨまたは直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、または、いずれのＲ２もＴ－Ｌ部分でない場合、Ｔ－Ｌ部分であり；
    Ｌはリンカーであり、そして
    Ｔは標的結合部分である。
  5. 式ＶＩＩＩまたはＩＸで表される、アマトキシンおよび標的結合部分（ｔａｒｇｅｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）を含む複合体。
    Figure 0007636350000048
  6. 前記アマトキシンが、α－アマニチン、β－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、それらのそれぞれのチオエーテル、および塩からなる群より選択される、
    請求項１～４のいずれかに記載の複合体。
  7. リンカーＬがアルキレン、ヘテロアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、またはヘテロアラルキレン基であり、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～４個のヘテロ原子を含み、任意に前記リンカーが置換されている、請求項１～４、６のいずれかに記載の複合体。
  8. リンカーＬが、以下の部分：ジスルフィド、エーテル、チオエーテル、アミン、エステル、カルボキサミド、ウレタン、および尿素部分のうちの少なくとも１つから選択される部分を含む、請求項７に記載の複合体。
  9. 標的結合部分が、以下からなる群より選択される、請求項１～８のいずれかに記載の複合体；
    （ｉ）抗体またはその抗原結合断片、および
    （ｉｉ）核酸アプタマー。
  10. 抗体またはその抗原結合断片が、ダイアボディ、テトラボディ、ナノボディ、キメラ抗体、脱免疫抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体から選択される、請求項９に記載の複合体。
  11. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、およびジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）からなる群より選択される、請求項１０に記載の複合体。
  12. 酸性条件下で非プロトン性溶媒中でアマトキシンの１，２－ジオールをジメチルベンジリデンアセタールと反応させることによる、請求項１～１１のいずれかに記載の複合体の合成方法。
  13. 前記アマトキシンが、アルファ－アマニチン、ベータ－アマニチン、アマニン、アマニンアミドおよびそれらのそれぞれのチオエーテルから選択される、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記非プロトン性溶媒がＤＭＦであり、および／または前記酸性条件がトリフルオロ酢酸による、請求項１２または１３のいずれかに記載の方法。
  15. 請求項１～１１のいずれかに記載の複合体を含む医薬。
  16. 患者における癌の治療における使用のための請求項１５に記載の医薬。
  17. 前記癌が乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎臓癌、悪性黒色腫、白血病、および悪性リンパ腫からなる群より選択される、請求項１６に記載の医薬。
  18. １つ以上の薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、充填剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、吸着剤、および／または防腐剤をさらに含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の複合体を含む医薬組成物。
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