JP7662625B2

JP7662625B2 - 血液がんの治療方法ならびに２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１，３－ジオンに対するコンパニオンバイオマーカーの使用

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Publication number: JP7662625B2
Application number: JP2022523522A
Authority: JP
Inventors: ソラジャカランシオアントン，マリア; フォンタニロフォンタニロ，セリア; カシバトラ，シャイラジャ; ロペス－ヒロナ，アントニア; ルー，ガン; ワン，カイ
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2019-10-21
Filing date: 2020-10-20
Publication date: 2025-04-15
Anticipated expiration: 2040-10-20
Also published as: EP4048668A4; WO2021080950A1; IL292305A; CA3154890A1; JP2022552883A; US20210116454A1; AU2020372333A1; KR20220103949A; CN115175903A; MX2022004688A; BR112022007386A2; EP4048668A1

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１９年１０月２１日付け出願の米国仮特許出願番号６２／９２４,０４４の利益を主張し、その内容をすべて出典明示によって本明細書に組み込むものとする。

１．発明の分野
本明細書では、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）などの血液がんの患者を同定かつ診断する方法が提供される。特に、本明細書では、式（Ｉ）の化合物あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩での治療に対して奏功的である可能性のある、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの患者を同定するための、特定のバイオマーカーの発現レベルを測定する方法が提供される。また、本明細書では、式（Ｉ）の化合物あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩を用いて、上記の方法を組み込んだ、かかる患者を治療する方法も提供される。さらには、本明細書では、ここに記載の方法を実施するためのキットが提供される。

２．発明の背景
がんは、主として、所定の正常な組織から由来する異常な細胞の数が増加すること、これらの異常な細胞が隣接する組織に浸潤すること、または悪性細胞がリンパ液または血液を介して局所リンパ節に広がること、および転移することで特徴付けられる。臨床データおよび分子生物学的研究によれば、がんの増殖は、軽微な前生物学的変化で始まり、それが特定の条件下で新生物に成長する可能性のある、多段階のプロセスであることが示される。その新生物の病変は、クローン的に進化し、特に新生物の細胞が宿主の免疫監視から逃れるような条件下で、浸潤、増殖、転移、異質性の能力を増大させるように成長する可能性がある。現在のがん療法には、患者にある新生物細胞を根絶するための手術、化学療法、ホルモン療法、および／または放射線治療が含まれる。最近のがん療法の進歩が、Rajkumarらにより、Nature Reviews Clinical Oncology 11, 628-630 (2014) にて解説されている。

ＮＨＬは、米国にて男女共に５番目に多いがんである。２０１２年には世界中で推定３８５,７００人の患者がＮＨＬと診断され、その疾患の結果として約１９９,７００人の患者が死亡している（Torre, L.A.ら、Global cancer statistics, 2012；CA Cancer J. Clin. 65, 87-108（2015））。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の約３分の一を占め、Ｂ細胞ＮＨＬの最も一般的な形態であり、２０１６年にてアメリカ合衆国で新たに推定２７,６５０件がＤＬＢＣＬであると診断され、診断されたすべての成熟型Ｂ細胞ＮＨＬ新生物の約２６％を占める（Teras, L. R.ら、2016 US lymphoid malignancy statistics by World Health Organization subtypes; CA Cancer J. Clin. 66, 443-459 (2016））。伝統的な化学療法で治癒されるＤＬＢＣＬ患者もいるが、残りはこの疾患で死亡する。

ＤＬＢＣＬを現在の療法で治療する際の最大の障害は、特定のリンパ腫が、標準的な第一線の治療薬であるＲ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）、またはベネトクラクスおよびイブルチニブなどの新しい薬剤に対して耐性を獲得する能力を有すること、またはそれらの薬剤に対して難治性であることである。患者の約３０～４０％が、治療法の選択肢が制限されることに起因して、依然として高い罹患率および死亡率の主な原因である、再発／難治性疾患を発症する（Camiciaら、Mol. Cancer 14, 207（2015））。その結果、再発／難治性ＤＬＢＣＬの患者は予後が不良である。

最近の遺伝子発現プロファイリングの進歩により、ＤＬＢＣＬの少なくとも３種の異なる分子の亜型：胚中心Ｂ細胞様亜型、活性化Ｂ細胞様亜型、および縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫亜型が同定されるに至った。ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ亜型は、ＣＨＯＰだけの治療を受けた場合、予後が極めて不良であることと関連付けられ、ＣＨＯＰ単独での治療を受けたＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ患者の大半はその疾患に屈することとなろう。ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬの患者をＲ－ＣＨＯＰで治療した場合の３年間の無進行生存（ＰＦＳ）率および全生存（ＯＳ）率は、各々、約４０％および４５％であり、その一方でＧＣＢ－ＤＬＢＣＬの患者をＲ－ＣＨＯＰで治療した患者では、その対応するＰＦＳおよびＯＳ率は、各々、約７４％および８０％であった。これらの患者群では、臨床経過が極めて侵襲的であり、化学不応性が高く、Ｒ－ＣＨＯＰで治療した場合に全生存率が劣るため、特に緊急の臨床的要求がある。

加えて、リンパ腫の患者の疾患の進行は免疫系機能の低下と関連付けられる。例えば、Ｔ細胞疲弊がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）患者にて観察された（Yang、2014；Yang、2015）。Ｔ細胞の疲弊は、分化、増殖およびサイトカインを産生する機能の低下を示す。従って、免疫系の免疫系機能の活性化を改善することは、ＤＬＢＣＬなどの血液がんの治療に役立つ可能性がある。

細胞傷害性による化学療法は、予測通りに、造血系を抑制し、宿主の防御機構を損ない、がん化学療法に付随する傷害性は重度である。好中球減少症の程度と期間は感染のリスクを決定する（Crawford、2004）。結果として、骨髄傷害性を前臨床にて評価することは、血液がん患者の新たな療法剤の選択肢を開発するために依然として重要なままである。好中球は、炎症反応の最初の細胞成分として、かつ自然免疫の重要な構成要素として、感染に対して第一線の防御を示す。その上、好中球減少症は、初期の感染症に対して炎症反応を鈍らせ、細菌を増殖かつ浸潤させる。従って、好中球減少症の評価は、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬでの治療方法などの血液がんの治療をモニター観察する手助けとなり得る。

慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）は、形態的には成熟しているが、機能的には十分でないＢリンパ球が、血液、骨髄、およびリンパ系組織中に、独特な分化集団（ＣＤ）ＣＤ１９＋、ＣＤ５＋、およびＣＤ２３＋表現型と共に、進行的に蓄積することで特徴付けられるリンパ増殖性悪性腫瘍である。それは北アメリカおよびヨーロッパで発症率が年間１００,０００人当たり４.０人と最も一般的な白血病であり、発症年齢の中央値が７２歳と主に高齢の患者が罹患している。ＣＬＬの臨床経過は、生存期間が１２年以上の長期に及ぶ進行の遅い疾患から、生存期間が中央値で２年の悪性の疾患までの範囲に及び、発症時の段階および細胞遺伝学的異常などの特定の疾患特異的特徴による影響を受ける。現在の臨床経過および予後は、ＣＬＬの治療に利用可能となる新しい薬剤の出現を含め、治療状況の進化を反映している。最近の極めて効果的な数種の薬剤の導入にもかかわらず、ＣＬＬは、同種幹細胞移植を受けない患者にとって依然として不治の病であり、したがって、代替かつ付加的な治療の選択肢を開発することが必要となる。

ＣＬＬ／ＳＬＬの分子論的病原機構は、特定の遺伝学的異常によって特徴付けられる複雑で多面的なプロセスであり、Ｂ細胞受容体およびアポトーシス経路を含む細胞シグナル伝達経路の変化、および腫瘍－免疫微小環境の影響が集約されていることを示す。ＣＬＬなる語は、疾患が主に血液中に現れる場合に使用されるのに対して、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）なる語は主にリンパ節に転移している場合に使用される。具体的には、慢性リンパ性白血病に関する国際ワークショップ（the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia）（ｉｗＣＬＬ）の基準で定義されるようなＳＬＬは、その他の点ではＣＬＬと診断されるが、末梢リンパ球の数が相対的に正常であり、リンパ節腫脹および／または脾腫の存在を必要とする、患者での疾患である。ＣＬＬが血液および骨髄、ならびにリンパ節、脾臓およびリンパ節外の部位などの他の疾患の部位で多く見受けられるのとは対照的に、ＳＬＬの患者は末梢血においてあまり顕著な徴候がない。

イブルチニブおよびベネトクラクスなどの数種の新規な標的薬剤が最近になって承認されたことからも明らかなように、ＣＬＬ治療の状況は進化している。しかしながら、これらの新しい薬剤が利用可能であるにもかかわらず、患者は再発を繰り返すか、または患者にとって治療は難治性である。その上、細胞遺伝学的特性のリスクの低い患者は、これらの特徴のない患者と比べて、より悪い転帰を示し続ける。ＣＬＬについて改善された新規な併用療法は今後も引き続き重要な医療ニーズであろう。加えて、標的治療薬の使用が増加したことで、治療に対する耐性が付与されたことを示す、新しい変異の出現が引き起こされた。例えば、ＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブに対する耐性は、ＢＴＫ結合部位での変異、またはＢ細胞受容体活性の自律化をもたらす変異のいずれかと関連付けられる。従って、新規な機構を有する薬剤を探索することは、標的とする薬剤の出現に対して耐性を展開する患者のために、独特な作用機序（ＭＯＡ）のある治療の選択肢を提供するのに重要である。

ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんを治療、予防および管理する安全で効果的な方法であって、従来の治療薬に付随する毒性および／または副作用を軽減または回避しながら、特に標準的な治療に対して難治性であるＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬに対する方法にて有意なニーズが依然として存在する。本発明は、このニーズを満たし、同様に関連する利点を提供する。

本願のこのセクションにおける任意の参考文献の引用または特定は、該参考文献が本願の先行技術であることを認めるものとして解釈されるべきではない。

３．発明の要約
１の態様において、本明細書では、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある、血液がんの対象を同定するか、あるいは血液がんであるか、またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、
（ａ）該対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；
（ｃ）仮に、
（ｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または
（ｉｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、レベルの改変があるならば、
該対象を、その治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断することを含み；
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

もう一つ別の態様において、本明細書では、血液がんの対象にて、血液がんを選択的に治療する方法であって、
（ａ）血液がんの対象からサンプルを採取し；
（ｂ）サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；
（ｃ）仮に、
（ｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または
（ｉｉ）バイオマーカーのレベルが、バイオマーカーの参照となるレベルと比べて、レベルの改変があるならば、
該対象を、その治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断し；および
（ｄ）治療的に効果的な量の治療用化合物を、該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断された対象に投与する、ことを含み；
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーはセレブロン（ＣＲＢＮ）であり、該方法は、ＣＲＢＮがサンプル中の対照レベルよりも検出可能であるか、高い場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断することを含む。

本明細書で提供される方法の他の実施態様において、バイオマーカーはイカロス（Ikaros）、アイオロス（Aiolos）、ＺＦＰ９１、またはその組み合わせであり、該方法は、サンプル中のバイオマーカーのレベルが対照レベルよりも低い場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断することを含む。いくつかの実施態様において、バイオマーカーはイカロスとアイオロスの組み合わせであり、該方法は、イカロスとアイオロスの両方のレベルがそれぞれの対照レベルよりも低い場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断することを含む。

もう一つ別の態様において、本明細書では、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある、血液がんの対象を同定するか、あるいは血液がんであるか、またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、
（ａ）該対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該治療用化合物を該サンプルに加え；
（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および
（ｄ）仮に、該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、レベルの改変があるならば、該対象を、その治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断することを含み；
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

さらにもう一つ別の態様において、本明細書では、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある、血液がんの対象を同定するか、あるいは血液がんであるか、またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、
（ａ）治療用化合物を対象に投与し；
（ｂ）該対象からサンプルを採取し；
（ｃ）サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および
（ｄ）仮に、該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、レベルの改変があるならば、該対象を、その治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断することを含み；
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

もう一つ別の態様において、本明細書では、対象において血液がんを治療する際の治療用化合物の効能をモニター観察する方法であって、
（ａ）治療用化合物を対象に投与し；
（ｂ）サンプルを該対象から採取し；
（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および
（ｄ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを、参照となるバイオマーカーのレベルと比較し、ここでバイオマーカーのレベルの改変は、対象において血液がんを治療する際の治療用化合物の効能を示すことを含み、
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

もう一つ別の態様において、本明細書では、血液がんの対象を治療用化合物を用いて治療するための投与量または頻度を調整する方法であって、
（ａ）投与量の治療用化合物を対象に投与し；
（ｂ）該対象から異なる時点で１または複数のサンプルを採取し；
（ｃ）１または複数のサンプル中のバイオマーカーのレベルをモニター観察し；および
（ｄ）参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルの改変に基づいて、該治療用化合物を該対象に後続して投与するための投与量を調整することを含み、
ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

いくつかの実施態様において、本明細書にて提供される方法は、治療的に効果的な量の治療用化合物を、該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断された対象に投与することをさらに含む。

特定の実施態様において、サンプル中のバイオマーカーの改変レベルはバイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、サンプル中のバイオマーカーの改変レベルはバイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

いくつかの実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルに対してバイオマーカーのレベルが増加することは、対象での血液がんの治療における治療用化合物の有効性を示す。他の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルに対してバイオマーカーのレベルが減少することは、対象での血液がんの治療における治療用化合物の有効性を示す。

本明細書にて提供される方法のいずれか１つの任意の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは、治療用化合物を対象に投与する前に該対象から得られた参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、ここで参照となるサンプルは、サンプルとして同じ供給源からのものである。他の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは、血液がんでない健康な対象から得られる参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、参照となるサンプルは、サンプルとして同じ供給源からのものである。特定の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは所定のバイオマーカーのレベルである。

本明細書にて提供される方法の特定の実施態様において、バイオマーカーはアポトーシスのマーカーを含み、該バイオマーカーのレベルの改変がアポトーシスの誘導の指標である。具体的な実施態様において、バイオマーカーは、切断型カスパーゼ３、切断型カスパーゼ７、切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ＢＣＬ２、サバイビン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびＤＮＡ、Ｂｃｌ－２－様タンパク質１１（ＢＩＭ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－２７（ＩＬ２７）、またはそれらの組み合わせより選択される。特定の実施態様において、アポトーシスのマーカーを含むバイオマーカーは、アネキシン－Ｖ、７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）、およびディープ・レッド・アントラキノン７（ＤＲＡＱ７）、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは、ＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、ＰＡＩ－１、ＣＤ６９、またはｓＩＬ－１０、あるいはそれらの組み合わせより選択される。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書にて提供される方法の特定の実施態様において、バイオマーカーはインターフェロン・シグナル伝達と関連付けられる。具体的な実施態様において、インターフェロン・シグナル伝達と関連付けられるバイオマーカーは、インターロイキン－６シグナルトランスデューサー（ＩＬ６ＳＴ）、インターフェロン誘発性膜貫通型タンパク質３（ＩＦＩＴＭ３）、インターフェロンアルファ－誘導性タンパク質６（ＩＦＩ６）、２’－５’－オリゴアデニレート合成酵素３（ＯＡＳ３）、インターフェロンα（ＩＦＮα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、またはそれらの組み合わせを包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーはサイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられる。具体的な実施態様において、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられるバイオマーカーは、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン１（ＣＣＬ１）、またはそれらの組み合わせを包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

特定の実施態様において、バイオマーカーは細胞接着と関連付けられる。具体的な実施態様において、細胞接着と関連付けられるバイオマーカーは、Ｅ－セレクチン（ＳＥＬＥ）、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＳＥＬＰＬＧ）、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）、またはそれらの組み合わせを包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは細胞－細胞間結合と関連付けられる。具体的な実施態様において、細胞－細胞間結合と関連付けられるバイオマーカーは、クラウジン７（ＣＬＤＮ７）、クラウジン１２（ＣＬＤＮ１２）、またはそれらの組み合わせを包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

特定の実施態様において、バイオマーカーはＧ－タンパク質結合受容体である。具体的な実施態様において、Ｇ－タンパク質結合受容体は、遊離脂肪酸受容体２（ＦＦＡＲ２）を包含する。いくつかの実施態様において、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは細胞外マトリックスと関連付けられる。具体的な実施態様において、細胞外マトリックスと関連付けられるバイオマーカーは、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

特定の実施態様において、バイオマーカーは細胞周期と関連付けられる。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは転写と関連付けられる。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは、アイオロス（Aiolos）（ＩＫＺＦ３）、イカロス（Ikaros）（ＩＫＺＦ１）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１）、タンパク質Ｃ－ｅｔｓ－１（ＥＴＳ１）、マックス結合タンパク質ＭＮＴ（ＭＮＴ）、筋細胞特異的エンハンサー因子２Ｂ（ＭＥＦ２Ｂ）、ｓｎＲＮＡ活性化タンパク質複合体サブユニット１（ＳＮＡＰＣ１）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ｂ（ＫＤＭ４Ｂ）、転写因子ＡＰ－４（ＴＦＡＰ４）、核極転写因子１（ＵＢＴＦ）、ブロモ隣接ホモロジードメイン含有１タンパク質（ＢＡＨＤ１）、メチル－ＣｐＧ－結合ドメインタンパク質４（ＭＢＤ４）、クロモボックスタンパク質ホモログ２（ＣＢＸ２）、腫瘍タンパク質６３（ＴＰ６３）、トランスデュシン様エンハンサータンパク質３（ＴＬＥ３）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｐ１（ＦＯＸＰ１）、ジンクフィンガーおよびＢＴＢドメイン含有タンパク質１１（ＺＢＴＢ１１）、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ転写サブユニットのメディエーター２６（ＭＥＤ２６）、環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－７（ＡＴＦ７）、ジンクフィンガータンパク質６４４（ＺＮＦ６４４）、リジン特異的脱メチル化酵素５Ｂ（ＫＤＭ５Ｂ）、上流刺激因子２（ＵＳＦ２）、転写因子２５（ＴＣＦ２５）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ａ（ＫＤＭ４Ａ）、致死（３）悪性脳腫瘍様タンパク質２（Ｌ３ＭＢＴＬ２）、ｎＲＮＡ－活性化タンパク質複合体サブユニット４（ＳＮＡＰＣ４）、リジン特異的脱メチル化酵素５（ＫＤＭ５）、転写因子ＣＯＥ１（ＥＢＦ１）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｊ２（ＦＯＸＪ２）、活性化Ｔ細胞細胞質の核因子１（ＮＦＡＴＣ１）、ｍＲＮＡ低下アクチベータータンパク質ＺＦＰ３６（ＺＦＰ３６）、肝がん誘発性成長因子（ＨＤＧＦ）、ＥＴＳ関連性転写因子Ｅｌｆ－１（ＥＬＦ１）、前骨髄球性白血病タンパク質（ＰＭＬ）、Ｍｙｂ関連性タンパク質ＢＭＹＢＬ２、マザー・アゲインスト・デカペンタプレジック・ホモログ２（mothers against decapentaplegic homolog 2）（ＳＭＡＤ２）、クロモドメイン－ヘリカーゼ－ＤＮＡ－結合タンパク質２（ＣＨＤ２）、転写１のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ１）、ペアボックスタンパク質Ｐａｘ５（ＰＡＸ５）、転写２のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ２）、ピゴパスホモログ２（ＰＹＧＯ２）、インターフェロン制御因子９（ＩＲＦ９）、ポリコーム・グループ・ＲＩＮＧフィンガータンパク質２（ＰＣＧＦ２）、および環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－３（ＡＴＦ３）からなる群より選択される１または複数のタンパク質を包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、およびＳＬＩＴ－ＲＯＢＯＲｈｏＧＴＰａｓｅ－活性化タンパク質１（ＳＲＧＡＰ１）からなる群より選択される１または複数の遺伝子を包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

特定の実施態様において、バイオマーカーは、ＣＲＢＮ結合タンパク質またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的タンパク質を含む。具体的な実施態様において、ＣＲＢＮ結合タンパク質はＩＫＡＲＯＳ、ＡＩＯＬＯＳ、またはＺＦＰ９１を包含する。他の具体的な実施態様において、ＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的タンパク質は、ＢＣＬ６、ｃ－ＭＹＣ、またはＩＲＦ４を包含する。さらなる実施態様において、ＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的タンパク質は、インターフェロン誘導性遺伝子を包含する。具体的な実施態様において、インターフェロン誘導性遺伝子には、インターフェロン調節７（ＩＲＦ７）、インターフェロン誘発のテトラトリコペプチド反復単位３を有するタンパク質（ＩＦＩＴ３）、ＤＥＡＤボックスタンパク質５８（ＤＤＸ５８）、またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１（ｐ２１）からなる群より選択される。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書にて提供される方法の特定の実施態様において、バイオマーカーには、Ｔ細胞活性化マーカーが含まれる。具体的な実施態様において、該Ｔ細胞活性化マーカーはＴ細胞活性化関連サイトカインを包含する。いくつかの実施態様において、該Ｔ細胞活性化関連サイトカインはインターロイキン２（ＩＬ－２）を包含する。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、ＰＤ１およびＬＡＧ３を含む。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施態様において、バイオマーカーは、エフェクターサイトカインまたはエフェクターケモカインを包含する。具体的な実施態様において、エフェクターサイトカインまたはエフェクターケモカインには、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。

特定の実施態様において、バイオマーカーは白血球細胞で発現する。具体的な実施態様において、白血球はリンパ系細胞を包含する。さらに具体的な実施態様において、リンパ系細胞はＴ細胞を包含する。

もう一つ別の態様において、本明細書にて、血液がんを治療する方法であって、
（ａ）血液がんの対象から第１のサンプルを採取し；
（ｂ）第１のサンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；
（ｃ）治療的に効果的な量の治療用化合物を該対象に投与し；
（ｄ）治療を施した後の対象から少なくとも１つのさらなるサンプルを採取し；および
（ｅ）少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；
仮に少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルが、第１のサンプル中のバイオマーカーのレベルであるか、またはその付近であるならば、その場合にはもう一つ別の治療的に効果的な量の該治療用化合物を該対象に投与することを含み、
ここで該治療用化合物が、式（Ｉ）：
で示される化合物、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である、方法が提供される。

血液がんを治療する方法の特定の実施態様において、バイオマーカーはイカロスを含む。具体的な実施態様において、イカロスバイオマーカーは、白血球で発現する。さらに具体的な実施態様において、白血球は骨髄性細胞を包含する。いくつかの実施態様において、該骨髄性細胞は好中球を包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーは、ＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－の表現型を有する好中球を包含する。

本明細書にて提供される方法のいずれか１つの任意の実施態様において、式（Ｉ）の化合物には、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩が含まれる。本明細書にて提供されるいずれかの方法の他の実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩を包含する。本明細書にて提供されるいずれかの方法のいくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオンと、（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオンとの、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩との混合物を包含する。

本明細書にて提供されるいずれかの方法のさらなる実施態様において、該方法は、治療的に効果的な量の第２の活性剤またはサポートケア治療剤を投与することを含む。特定の実施態様において、該第２の活性剤には、ＨＤＡＣ阻害剤（例、パノビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、またはシタリノスタット）、ＢＣＬ２阻害剤（例、ベネトクラクス）、ＢＴＫ阻害剤（例、イブルチニブまたはアカラブルチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例、エベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例、イデラリシブ）、ＰＫＣβ阻害剤（例、エンザスタウリン）、ＳＹＫ阻害剤（例、フォスタマチニブ）、ＪＡＫ２阻害剤（例、フェドラチニブ、パクリチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、またはモメロチニブ）、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例、アリセルチブ）、ＥＺＨ２阻害剤（例、タゼメトスタット、ＧＳＫ１２６、ＣＰＩ－１２０５、３－デアザネプラノシンＡ、ＥＰＺ００５６８７、ＥＩ１、ＵＮＣ１９９９、またはシネファンギン）、ＢＥＴ阻害剤（例、ビラブレシブまたは４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン）、低メチル化剤（例、５－アザシチジンまたはデシタビン）、化学療法剤（例、ベンダムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、メトトレキサート、シタラビン、ビンクリスチン、イホスファミド、メルファラン、オキサリプラチン、またはデキサメタゾン）、抗－ＣＤ２０モノクローナル抗体（例、リツキシマブ、またはオビヌツズマブ）、またはエピジェネティック化合物、またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施態様において、第２の活性剤はリツキシマブを含む。特定の実施態様において、該第２の活性剤はオビヌツズマブを含む。

本明細書にて提供されるいずれか１の方法の特定の実施態様において、血液がんは、造血組織またはリンパ系組織に影響を及ぼす。いくつかの実施態様において、血液がんは、非ホジキンリンパ腫を包含する。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）が含まれる。さらに具体的な実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の治療法に対して再発性、難治性、または耐性である。他の実施態様において、血液がんは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含む。特定の実施態様において、該ＣＬＬ／ＳＬＬは再発性または難治性ＣＬＬ／ＳＬＬである。

本明細書にて提供されるいずれか１の方法の特定の実施態様において、サンプルは血液がん細胞を含む。

本明細書にて提供される方法のいずれか１つの任意の実施態様において、バイオマーカーのレベルの測定は、該バイオマーカーのタンパク質レベルの測定を包含する。

本明細書にて提供される方法のいずれか１つの任意の実施態様において、バイオマーカーのレベルの測定は、該バイオマーカーのｍＲＮＡレベルの測定を包含する。

本明細書にて提供されるいずれか１の方法の特定の実施態様において、バイオマーカーのレベルの測定は、該バイオマーカーのｃＤＮＡレベルの測定を包含する。

４．図面の簡単な説明
図１Ａ－図１Ｃは、ＤＬＢＣＬ細胞株が、ＤＬＢＣＬ関連タンパク質のＭｙｃ、ＢＣＬ２、およびＢＣＬ６（図１Ａ）；ならびにＣＲＬ４^ＣＲＢＮＥ３ユビキチンリガーゼおよびその基質アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１（図１Ｂ）を発現したことを示す。ＣＲＢＮ発現レベルの定量化は、ＤＦ１５細胞のＣＲＢＮレベルに対して正規化された（図１Ｃ）。ベータ－チューブリンをローディング対照として使用した。

化合物１が、ドキソルビシンに対して耐性を獲得したＤＬＢＣＬ細胞株において活性であったことを示す。ＡＢＣ（上部パネル）およびＧＣＢ（下部パネル）細胞株の親細胞株（四角）およびその関連するドキソ－Ｒ細胞株（丸）についての生存率、ならびにアポトーシス誘導曲線を、連続して希釈した化合物１に５日間暴露して作成した。

ドキソルビシン耐性を獲得した細胞株、およびその対応する適合親細胞での、セレブロン、および関連するセレブロン基質のアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１およびｃ－Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＢＣＬ２、ＭＣＬ１、およびＢＣＬ６タンパク質の発現プロファイルを示す代表的なイムノブロットを示す。

図４Ａおよび図４Ｂは、内皮細胞、Ｔ－およびＢ－リンパ球（図４Ａ）にて、および冠状平滑筋細胞、および線維芽細胞（図４Ｂ）にて、化合物１が選択的に抗増殖性であったことを示す。BioMAP Diversity PLUS Panelは、化合物１で処理した後に評価された。Ｘ軸は、各システムで測定された、定量的なタンパク質をベースとするバイオマーカーの読み出しを列挙する。Ｙ軸は、薬物処理サンプル（ｎ＝１）のビヒクル対照（ｎ＞６）に対する、バイオマーカーの読み出しの割合を対数変換して示す。Ｙ軸の周りの灰色の領域は、これまでに使用されたビヒクル対照から生成された９５％有意性限界を示す。バイオマーカー活性は、２またはそれ以上の連続した濃度がビヒクル対照に対して同じ方向に変化し、有意性限界の外側にあり、少なくとも１つの濃度で＞２０％（ｌｏｇ１０比＞０.１）の大きさの効果がある場合に、注釈を設けた。抗増殖効果は太い灰色の矢印で示される。

図５Ａ－図５Ｄは、化合物１の活性がＣＲＢＮ発現に依存することを示す。（図５Ａ）はアイオロス、イカロス、ＺＦＰ９１、ＩＲＦ４、およびｃ－Ｍｙｃのタンパク質発現が減少し、アポトーシスタンパク質（切断型カスパーゼ７、切断型カスパーゼ３、および切断型ＰＡＲＰ）、ならびにインターフェロン刺激遺伝子のＩＦＩＴ３が時間および濃度依存的にＣＲＢＮを発現するＳＵ－ＤＨＬ２細胞中で誘導されることを示し；（図５Ｂ）はアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の減少レベルを、ならびに切断型カスパーゼ３、および切断型カスパーゼ７、および切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の増加レベルを定量化し、それをまずβ－チューブリンに対して正規化し、次にＤＭＳＯ（丸）、化合物１の０.００１ｎＭ（四角）、０.０１ｎＭ（上向き三角）または０.１ｎＭ（下向き三角）で処理した後の０時間の時点で各タンパク質のレベルに対してさらに正規化して示し；（図５Ｃ）はＳＵ－ＤＨＬＣＲＢＮノックアウト細胞では効果が観察されなかったことを示し；（図５Ｄ）はアポトーシスが０.０１ｎＭ（丸）、０.１ｎＭ（四角）、１.０ｎＭ（上向き三角）、１０ｎＭ（下向き三角）、１００ｎＭ（ひし形）、または１０００ｎＭ（中抜き丸）の化合物１を用いた処理の後で、ＳＵ－ＤＨＬ２^{ＣＲＢＮＷＴ}細胞（上部パネル）にて蛍光カスパーゼ－３試薬を用いて経時的に増加したが、ＳＵ－ＤＨＬ２^{ＣＲＢＮ－／－}細胞（下部パネル）では増加しなかったことを示す。ＷＴ＝野生型

図６Ａ－図６Ｄは、化合物１が、ＤＬＢＣＬ細胞株において、ＣＲＢＮ基質タンパク質の発現を減少させ、アポトーシスおよびインターフェロン刺激遺伝子の発現を誘発したことを示す。（図６Ａおよび図６Ｃ）は、各々、ＣＲＢＮを発現するＴＭＤ８およびカルパス（Karpas）－４２２細胞において、時間および濃度依存的に、アイオロス、イカロス、ＺＦＰ９１、ＩＲＦ４、およびｃ－Ｍｙｃのタンパク質発現が減少し、アポトーシスタンパク質（切断型カスパーゼ７、切断型カスパーゼ３、および切断型ＰＡＲＰ）、ならびにインターフェロン刺激遺伝子、ＩＲＦ７、ＤＤＸ５８、およびＩＦＩＴ３が誘発されたことを示す。（図６Ｂ）は、化合物１で処理した２４時間後に、ＴＭＤ８細胞において、アイオロス、イカロス、ＺＦＰ９１、ＢＣＬ６、ＩＲＦ４、ｃ－Ｍｙｃ、抗アポトーシスタンパク質ＢＩＭ、およびサバイビンの発現の減少が、およびプロアポトーシスタンパク質（切断型カスパーゼ７）、ならびにインターフェロン刺激遺伝子ＩＲＦ７、ＤＤＸ５８、およびＩＦＩＴ３の誘発が観察されたことを示す；（図６Ｄ）は、カルパス－４２２細胞にて、化合物１で処理して２４時間で、アイオロス、イカロス、ＺＦＰ９１、およびＢＣＬ６の発現が減少し（左パネル）、つづいて４８時間でプロアポトーシスタンパク質の切断型カスパーゼ３、切断型カスパーゼ７、および切断型ＰＡＲＰが誘発されるのと同様に、ｐ２１、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ３、ＤＤＸ５８が誘発され（中央パネル）、７２時間で抗アポトーシスタンパク質サバイビンおよびＢＣＬ２、ならびにＭＹＣが減少する（右パネル）のが観察された。

図７Ａおよび図７Ｂは、ＤＬＢＣＬ細胞株の細胞適応性が個々のセレブロン基質に依存していたことを示す。（図７Ａ）は、目的とする遺伝子をノックアウトした際の細胞適応性における相対的変化を評価するのに、フローサイトメトリーをベースとする細胞競合アッセイの設計を示す概略図である。（図７Ｂ）は、ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９、Ｕ－２９３２－Ｃａｓ９、ＲＩＶＡ－Ｃａｓ９、ＳＵ－ＤＨＬ－１６－Ｃａｓ９、ＨＴ－Ｃａｓ９、およびＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９細胞系において、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋の割合について、ｓｇＮＴ－１（円および実線）、ｓｇＮＴ－２（円および破線）、ｓｇＮＣ－１（ひし形および実線）、ｓｇＩＫＺＦ１－１（上向き三角および実線）、ｓｇＩＫＺＦ１－２（上向き三角および破線）、ｓｇＩＫＺＦ３－１（四角および実線）、ｓｇＩＫＺＦ３－２（四角および破線）、ｓｇＺＦＰ９１－１（下向き三角および実線）、ｓｇＺＦＰ９１－３（下向き三角および破線）、およびｓｇＥＴＦ１－１（「Ｘ」および実線）の相対的細胞適応性を示す。細胞は、各時点でｓｇＮＴ－１細胞のＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋の割合に対して正規化された。ＥＴＦ１のノックアウト（ｓｇＥＴＦ１－１）をＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋の割合におけるロバストな減少の陽性対照に供する。エラーバーは３つの独立した実験の平均値の標準誤差を示す。

図８Ａおよび図８Ｂは、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の喪失が、目的とする遺伝子のノックアウトでの細胞適応性の相対的変化を評価する、フローサイトメトリーをベースとする細胞競合アッセイによって測定されるように、ＤＬＢＣＬ細胞を化合物１に対して感作させることを示す。（図８Ａ）ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９、および（図８Ｂ）ＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９細胞。ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＧＦＰ＝緑色蛍光タンパク質；ＲＦＰ＝赤色蛍光タンパク質；遺伝子ノックアウトはＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の各セットの上に示される。エラーバーは３つの独立した実験の平均値の標準誤差を示す。

ＤＬＢＣＬ細胞の化合物１での処理が、イムノブロットによって測定されるように、ＣＲＢＮ基質のイカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の遺伝的ノックアウトと同等であったことを示す。ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９（左上図）、Ｕ－２９３２－Ｃａｓ９（右上図）、およびＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９（左下図）；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド

図１０Ａおよび図１０Ｂは、ＤＬＢＣＬ細胞株において、イカロスおよびアイオロスの二重ノックアウトが、イカロスおよびアイオロスの単一のノックアウトと比べて、細胞適応性についてより大きな阻害を有したことを示す。図１０Ａは、目的とする遺伝子のノックアウトでの細胞適応性の相対的変化を評価するための、フローサイトメトリーをベースとする細胞競合アッセイを設計する模式図を示す。図１０Ｂは、ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９、Ｕ－２９３２－Ｃａｓ９、ＲＩＶＡ－Ｃａｓ９、ＳＵ－ＤＨＬ－１６－Ｃａｓ９、ＨＴ－Ｃａｓ９、およびＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９細胞株における各ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋の初日での割合に対して正規化されたｓｇＮＴ－１＋ｓｇＮＴ－２（黒丸）、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－１（上向き三角および実線）、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－２（上向き三角および破線）、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－１（黒四角および実線）、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－２（黒四角および破線）、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＩＫＺＦ３－１（実線での白円）、およびｓｇＩＫＺＦ１－２＋ｓｇＩＫＺＦ３－２（破線での白円）細胞の相対的細胞適応性を示す。エラーバーは３つの独立した実験の平均値の標準誤差を示す。

ルシフェラーゼによって測定されるように、イカロス（ＩＫＺＦ１－Ｇ１５１Ａ）（上向き三角）、アイオロス（ＩＫＺＦ３－Ｇ１５２Ａ）（四角）、およびＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１－Ｇ４０５Ａ）（下向き三角）の分解耐性変異体の異所性発現が、ＫＡＲＰＡＳ－４２２、ＲＩＶＡ、ＨＴ、およびＳＵ－ＤＨＬ－４細胞株にて化合物１からの保護をもたらすことを示す。

化合物１が、４人の健康なドナー（ＨＤ１－４）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）においてイカロスの分解を誘発したことを示す。４人のドナーにて化合物１に３、４または７日間にわたって連続的に暴露した後に、イカロス陽性細胞のパーセンテージをＤＭＳＯ対照に対して正規化した。イカロスをフローサイトメトリーで測定した。データはイカロスに対して陽性の細胞のパーセンテージの平均値を示す。エラーバーは平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。Ｎは３重重複での４人のドナーである。

健康なドナーのＰＢＭＣを化合物１に３日（丸）、４日（四角）および７日（ひし形）にわたって暴露した後に、化合物１がインターロイキン－２（ＩＬ２）分泌の絶対レベルを増加させたことを示す。上清を１：１０に希釈し、ＭＳＤ方法にてＩＬ－２分泌を測定した。データポイントはｎ＝３の三重重複の平均を示す。エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＨＤ＝健康なドナー；ＩＬ－２＝インターロイキン－２；ｍＬ＝ミリリットル；ｎＭ＝ナノモル；ｐｇ＝ピコグラム

健康なドナーのＰＢＭＣを化合物１に３日（丸）、４日（四角）および７日（ひし形）にわたって暴露した後に、化合物１が、ＤＭＳＯと比べて、インターロイキン－２（ＩＬ２）分泌の倍数の変化を増加させたことを示す。上清を１：１０に希釈し、ＭＳＤ方法にてＩＬ－２分泌を測定した。データポイントはｎ＝３の三重重複の平均を示す。エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＨＤ＝健康なドナー；ＩＬ－２＝インターロイキン－２；ｍＬ＝ミリリットル；ｎＭ＝ナノモル；ｐｇ＝ピコグラム

図１５Ａ－図１５Ｄは、化合物１がスタフィロコッカス・エンテロトキシンＢ疲弊アッセイにおいて、Ｔ細胞を再刺激したことを示す。図１５Ａおよび図１５ＣはＳＥＢ誘発性Ｔ細胞疲弊アッセイの模式図を示す。簡単に言えば、ＰＢＭＣを１００ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで７２時間処理し、Ｔ細胞疲弊表現型をＦＡＣＳによりＰＤ－１およびＬＡＧ３発現について評価した。図１５Ｂおよび図１５Ｄは、対照およびＳＥＢ処理細胞でのＰＤ－１およびＬＡＧ３の発現レベルを示す。ＦＡＣＳ＝蛍光活性化細胞ソーティング；ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞；ＳＥＢ＝スタフィロコッカス・エンテロトキシンＢ；ｓｕｐｓ＝上清

免疫ブロットで測定されるように、化合物２および３が、ビヒクル対照（０.１％ＤＭＳＯ）、化合物１（１、１０、１００ｎＭ）で処理した１、２または６時間後に、ＳＵ－ＤＨＬ－２細胞において、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の発現を減少させたことを示す。

４５分間、６０分間、９０分間、または３時間暴露した後に、化合物１（丸および実線）および化合物２（三角および破線）が、プロラベルの強化した（Enhanced ProＬabel）（ｅＰＬ）－アイオロス、ｅＰＬ－イカロス、またはｅＰＬ－ＺＦＰ９１を発現するＤＦ－１５細胞において、濃度および時間依存的方法にてイカロスを分解したことを示す。

図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＤＭＳＯ（黒丸）、０.１ｎＭ（四角）、１ｎＭ（上向き三角）、１０ｎＭ（下向き三角）、１００ｎＭ（ひし形）、または１０００ｎＭ（白丸）の化合物に１４日間（図１８Ａ）または９日目から開始して５日間（図１８Ｂ）暴露した後に、アネキシンＶおよび７－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）によって測定されるように、化合物１が好中球前駆体（ＣＤ３４^＋）細胞の生存に影響を及ぼさなかったことを示す。

図１９Ａおよび図１９Ｂは、健康なドナーの骨髄より由来のＣＤ３４^＋細胞を最初に化合物１に１４日間（図１９Ａ）または９日目から開始して５日間（図１９Ｂ）エクスビボにて暴露し、つづいて洗浄し、化合物１の不在の下でさらに７日間再度インキュベートした後に、成熟（段階ＩＶ）細胞のパーセンテージがリバウンドしたことを示す。データはＣＤ３４^－／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^＋として定義された段階ＩＶの細胞のパーセンテージを示す。

図２０Ａおよび図２０Ｂは、健康なドナーの骨髄より由来のＣＤ３４^＋細胞を、０.１ｎＭ（四角）、１ｎＭ（上向き三角）、または１０ｎＭ（下向き三角）の化合物１に１４日間（図２０Ａ）または９日目から開始して５日間（図２０Ｂ）暴露した後に、成熟（段階ＩＶ）細胞が回復したことを示す。ＤＭＳＯ（丸）を対照に供した。データはＣＤ３４^－／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^＋として定義された段階ＩＶの健康なドナーの骨髄より由来のＣＤ３４^＋細胞のパーセンテージを示す。太い黒線は、ＤＭＳＯ対照での５０％段階ＩＶ細胞を示す。

化合物１に１４日間暴露した後で、イカロスが最初に阻害され、次に化合物１を洗浄した後では、回復したことを示す。ドナー番号１、番号２、および番号３からの細胞を処理した後に、１４日間にわたって化合物１に連続して暴露し、１週間にわたって洗浄して、イカロスの阻害のパーセンテージをＤＭＳＯ対照と比較した。２または３日毎にフローサイトメトリーでイカロスを測定した。ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ｎＭ＝ナノモル

イカロス阻害のパーセンテージが、９日目に開始して連続して５日間にわたって化合物１に暴露した後に初めて阻害され、ついで１のドナーからの細胞を処理した後に１週間の洗浄を行うことで回復が始まることを示す。２または３日毎にフローサイトメトリーでイカロスを測定した。ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ｎＭ＝ナノモル

イカロスタンパク質の阻害および回復が、０.１ｎＭ（下向き白三角）、１.０ｎＭ（四角）、１０ｎＭ（上向き三角）、１００ｎＭ（ひし形）、または１０００ｎＭ（下向き黒三角）の化合物１に１４日間暴露し、処理の後に１週間洗浄した、ＣＤ３４^＋骨髄由来の細胞のエクスビボでの骨髄の分化の間の段階ＩＶの集団のパーセンテージと相関していることを示す。グラフは、１４日間処理したＤＭＳＯ（丸）対照の培養物と比較した、ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^＋として定義された段階ＩＶ細胞のパーセンテージ（実線）と、イカロスタンパク質阻害のパーセンテージ（破線）との対を示す。２または３日毎にフローサイトメトリーで両方のパラメーターを測定した。示されるデータは３人のドナーに由来する。

ＤＬＢＣＬモデルでの化合物１の効果を推論するための因果律的なフローネットワークモデルを示す。プロテオーム効果を６および１８時間で測定し、転写効果を１２、２４、および４８時間で測定し、その結果を統合して化合物１の処理で調節される経路を同定した。

インターフェロンシグナル伝達（例、ＩＬ６ＳＴ、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩ６、ＯＡＳ３、インターフェロンα／βシグナル伝達）、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達（例、ＩＬ２３Ａ、ＣＣＬ１）、アポトーシス（例、ＩＬ２７、ＴＮＦ、ＩＬ１０、カスパーゼ）、細胞接着（例、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰＬＧ、ＴＸＡ２ＰＡ）、細胞－細胞間結合（例、ＣＬＤＮ７、ＣＬＤＮ１２）、Ｇ－タンパク質結合受容体（例、ＦＦＡＲ２）、細胞外マトリックス（例、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７）、細胞周期および転写と関連付けられる遺伝子などの、化合物１の処理での応答に関与する例示的な経路および遺伝子を示す。

図２６Ａ－図２６Ｃは、１２、２４、または４８時間後の、化合物１で処理した場合の例示的な遺伝子応答を示す。ＩＬ２３Ａ（図２６Ａ）、ＣＣＬ２（図２６Ｂ）、およびＳＲＧＡＰ１（図２６Ｃ）の発現は、中間または耐性細胞株と比較して、感受性細胞株にて化合物１で処理した後に、すべて増加した。

化合物１で６または１８時間処理した後に、特異的に発現される一連の遺伝子のタンパク質発現レベルを示す。

５．発明の詳細な説明
本明細書で提供される方法は、部分的には、生物学的サンプル中にある特定の分子（例、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはタンパク質）のレベルの変化、例えば、レベルの増加および／またはレベルの減少、あるいはその検出が、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）またはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの対象を同定するか、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんである対象、またはその疑いのある対象の、治療用化合物に対する反応性を予測するか、あるいは対象での血液がんを治療するにおいて治療用化合物の効能をモニター観察するのに使用され得るとの知見であって、ここで該化合物は、例えば、化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または化合物３、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である、との知見に基づくものである。

５.１定義
本明細書で使用される場合の「がん」なる語は、充実性がんおよび血液由来がんを含むが、これらに限定されない。「がん」および「がん性」なる語は、典型的には、無秩序な細胞増殖によって特徴付けられる、哺乳動物での生理学的な状態をいうか、またはそれを説明する。がんは造血組織およびリンパ系組織のがんであり得る。血液がんは、血液、骨髄、リンパ、およびリンパ系に影響を及ぼすがんをいう。

本明細書で使用される場合の「びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）」なる語は、細胞の核が正常なマクロファージの核と同じ大きさまたはそれよりも大きいか、あるいは正常なリンパ系細胞の核の大きさの２倍以上であり、びまん性増殖パターンを有する、中型または大型Ｂリンパ系細胞の新生物をいう。ＤＬＢＣＬは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の一の型であり、少なくとも３種の既知の亜型：胚芽中心Ｂ細胞型（ＧＣＢ）、活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）、および原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）がある。ＤＬＢＣＬ細胞は、頻繁には、ＭＹＣおよび／またはＢＣＬ２および／またはＢＣＬ６の再配置を同時に有する。例えば、いくつかの変異型では、ＤＬＢＣＬは、胚芽中心形成に重要である、３ｑ２７遺伝子座でのＢＣＬ－６遺伝子の染色体の変化と、ＢＣＬ６に影響を及ぼすさらなる再配置とを伴い得る。加えて、ＤＬＢＣＬは、例えば、ＭＹＣ、ＢＣＬ２、またはＢＣＬ６に対応する、ｔ（８；１４）（ｑ２４；ｑ３２）および／またはｔ（１４；１８）（ｑ３２；ｑ２１．３）などの免疫グロブリン（ＩＧ）重鎖遺伝子座への遺伝子再配置を有し得る。ＭＹＣ、ＢＣＬ６、またはＢＣＬ２がＩＧ遺伝子座に転座されると、構成的に活性なＩＧプロモーターによって活性な転写がなされるため、通常、高レベルのｍＲＮＡおよびタンパク質がもたらされる。従って、ＤＬＢＣＬ細胞は、しばしば、高レベルのＭＹＣ、ＢＣＬ６、またはＢＣＬ２タンパク質を有する。

本明細書で使用される場合の「対象」または「患者」は動物、典型的には、ヒト患者などのヒトを含む、哺乳動物である。本明細書で使用される場合の「健康な対象」なる語は、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんでない、個体を意味するものとする。例示的な「健康な対象」には、既存の医学的症状がない。しかしながら、「健康な対象」は、例えば、糖尿病、心血管疾患、あるいはＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬ療法などの血液がんの療法の診断、治療、バイオマーカーのレベル、および／または薬力学に影響を及ぼさない他のいずれの疾患または障害などの血液がんと無関係である、医学的症状を有し得ると理解される。

本明細書で使用される場合の「可能性のある」なる語は、一般に、一の事象の確率の高いことをいう。患者の奏功性に関して使用される場合の「可能性のある」なる語は、一般に、患者が治療用化合物に対して奏功性であろう確率の高いことを意図とする。治療用化合物に対する奏功性に関して使用される場合の「可能性のある」なる語は、一般に、化合物が疾患の進行または血液がん細胞の増殖の速度を遅らせるであろう確率が高いことを意図とする。治療用化合物に対する奏功性に関して使用される場合の「可能性のある」なる語は、また、一般に、治療用化合物に対する奏功性の増加を証明し得る、ｍＲＮＡまたはタンパク質などの指標の増加を意味し得る。

本明細書で使用されるように、治療に関して使用される場合の「奏功的」または「奏功性」なる語は、治療されるべき、疾患、例えば、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬの徴候を軽減または低下させる際の治療の有効性の程度をいう。例えば、細胞または対象の治療に関して使用される場合の「奏功性の増加」なる語は、当該分野にて公知のいずれかの方法を用いて測定される測定される場合に、該疾患の徴候を減少または低下させる際の有効性の増加をいう。特定の実施態様において、有効性の増加は、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、あるいはそれ以上である。しかしながら、奏功性は疾患の進行を止めることができればよく、必ずしも疾患の徴候を軽減または減少させることを必要としないことも理解される。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「再発」なる語は、治療に応答し（例えば、完全奏功を達成し）、ついで進行した障害、疾患または症状をいう。治療は１または複数の療法ラインを含み得る。１の実施態様において、障害、疾患または症状は１または複数の療法ラインで以前に治療されている。もう一つ別の実施態様において、障害、疾患または症状は、以前に１、２、３または４つの療法ラインで治療されている。１の実施態様において、障害、疾患または症状は血液がん、例えばＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬである。

本明細書で使用される場合、特に断らない限り、「難治性」なる語は、１または複数の療法ラインを含み得る、先行治療に応答しなかった、障害、疾患、または症状をいう。１の実施態様において、障害、疾患または症状は、以前に１、２、３または４つの療法ラインで治療されている。１の実施態様において、障害、疾患または症状は２またはそれ以上の療法ラインで以前に治療されており、最近の全身性療法を含むレジメンに対して完全奏功（ＣＲ）に達していない。１の実施態様において、障害、疾患または症状は血液がん、例えば、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬである。

１の実施態様において、「再発または難治性」ＣＬＬ／ＳＬＬは、１または複数の療法ラインで以前に治療されているＣＬＬ／ＳＬＬをいうこともある。１の実施態様において、再発または難治性ＣＬＬ／ＳＬＬは、以前に１、２、３または４つの療法ラインで治療されているＣＬＬ／ＳＬＬである。１の実施態様において、再発または難治性ＣＬＬ／ＳＬＬは、以前に２またはそれ以上の療法ラインで治療されているＣＬＬ／ＳＬＬである。１の実施態様において再発または難治性ＣＬＬ／ＳＬＬは、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤で以前に治療されているＣＬＬ／ＳＬＬである。１の実施態様において、再発または難治性ＣＬＬ／ＳＬＬは、ＢＴＫ阻害剤に対して再発しているか、または難治性である。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はイブルチニブである。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はアカラブルチニブである。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はザヌブルチニブである。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はチラブルチニブである。

本明細書で使用される場合の「治療用化合物」なる語は、式（Ｉ）の化合物をいい、化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；あるいは化合物３、またはそのエナンチオマー、エナンチオマー混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩を包含する。本明細書で提供される化合物はキラル中心を含有し得ると理解されるべきである。かかるキラル中心は（Ｒ）または（Ｓ）配置のいずれであってもよく、またはその混合物であってもよい。本明細書で提供される化合物のキラル中心はインビボにおいてエピマー化を受け得ると認識されるべきである。そのため、当業者であれば、化合物のその（Ｒ）形態での投与が、インビボにてエピマー化を受ける化合物については、その（Ｓ）形態の化合物の投与と均等であることを認識するであろう。光学活性な（＋）および（－）、（Ｒ）－および（Ｓ）－、または（Ｄ）－および（Ｌ）－異性体は、キラル合成物またはキラル試薬を用いて製造されてもよく、または、キラル固定相でのクロマトグラフィーなどの従来の技法を用いて分割されてもよい。本明細書の記載において、化学名と化学構造式との間に何らかの矛盾がある場合、構造式が支配する。

本明細書で使用される場合の「互変異性体」なる語は、相互に平衡状態にある化合物の異性体の形態をいう。異性体の形態の濃度は、例えば、化合物が固体であるか、有機溶液または水溶液中にあるかどうかで、化合物が存在する環境に依存するであろうし、それに応じて異なってもよい。例えば、水溶液では、ピラゾールは、以下の異性体の形態を示す可能性があり、それらは互いの互変異性体と称される。

特記されない限り、化合物が代替の互変異性体、位置異性体および／または立体異性体の形態を取り得る場合、すべての代替となる異性体が特許請求の範囲に記載の対象の範囲内に包含されるものとする。例えば、化合物が２つのうちの１つの互変異性体の形態を有し得る場合、両方の互変異性体が本明細書に包含されているものとする。かくして、本明細書で提供される化合物は、エナンチオマー的に純粋であっても、あるいは立体異性体のまたはジアステレオマーの混合物であってもよい。本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「エナンチオマー的に純粋な」なる語は、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物を意味する。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「立体異性体」または「立体異性的に純粋な」なる語は、その化合物の他の立体異性体が実質的に含まれない、化合物の１つの立体異性体を意味する。例えば、１つのキラル中心を有する立体異性的に純粋な化合物は、該化合物の対極にあるエナンチオマーを実質的に含まないであろう。２つのキラル中心を有する立体異性的に純粋な化合物は、その化合物の他のジアステレオマーを実質的に含まないであろう。典型的な立体異性的に純粋な化合物は、約８０重量％以上の該化合物の１の立体異性体と、約２０重量％未満の該化合物の他の立体異性体とを、約９０重量％以上の該化合物の１の立体異性体と、約１０重量％未満の該化合物の他の立体異性体とを、約９５重量％以上の該化合物の１の立体異性体と、約５重量％未満の該化合物の他の立体異性体とを、または約９７重量％以上の該化合物の１の立体異性体と、約３重量％未満の該化合物の他の立体異性体とを含む。化合物はキラル中心を有することができ、ラセミ体、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマー、およびその混合物として存在し得る。かかる異性体の形態はすべて、その混合物を含め、本明細書で提供される実施態様の中に含まれる。

かかる化合物の立体異性的に純粋な形態の使用、ならびにそれらの形態の混合物の使用は、本明細書で提供される実施態様に包含される。例えば、特定の化合物の等量または不等量のエナンチオマーを含む混合物は、本明細書で提供される方法および組成物に使用されてもよい。これらの異性体は、非対称的に合成されても、またはキラルカラムまたはキラル分割剤などの標準的な技術を用いて分割されてもよい。例えば、Jacques, J.ら、Enantiomers, Racemates and Resolutions（Wiley-Interscience, New York, 1981）；Wilen, S. H.ら、Tetrahedron 33：2725（1977）；Eliel, E. L.、Stereochemistry of Carbon Compounds（McGraw-Hill, NY, 1962）；Wilen, S. H.、Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268（E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972）；Todd, M.、Separation Of Enantiomers：Synthetic Methods（Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany, 2014）；Toda, F.、Enantiomer Separation: Fundamentals and Practical Methods（Springer Science & Business Media, 2007）；Subramanian, G.、Chiral Separation Techniques: A Practical Approach（John Wiley & Sons, 2008）；Ahuja, S.、Chiral Separation Methods for Pharmaceutical and Biotechnological Products（John Wiley & Sons, 2011）を参照のこと。

本明細書で使用される場合の「アイソトポログ」または「同位体分子種」は、同位体に富む化合物をいう。「同位体に富む」なる語は、その原子または化合物の天然の同位体組成と異なる同位体組成を有する原子または化合物をいう。放射性標識され、同位体に富む化合物は、治療剤、例えば、血液がんおよび炎症の治療剤として、研究試薬、例えば、結合アッセイ試薬として、および診断剤、例えば、インビボ画像化剤として有用である。本明細書で記載される化合物のすべての同位体の変形は、放射性であるか否かにかかわらず、本明細書で提供される実施態様の範囲内に包含されるものとする。例示的なアイソトポログは、重水素、炭素－１３、または窒素－１５に富む化合物を包含する。例えば、アイソトポログは、キラル中心で重水素化が起こる、化合物１、２、または３などの重水素に富む化合物であり得る。

表示された構造と、その構造に付与された名称との間に矛盾がある場合、表示された構造がより重みがあることに留意すべきである。加えて、構造または構造の一部の立体化学が、例えば、太線または破線で示されていない場合、その構造またはその構造の一部は、それのすべての立体異性体を包含すると解釈されるものとする。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「医薬的に許容される塩」なる語は、無機酸および塩基、ならびに有機酸および塩基を含む、医薬的に許容される非毒性の酸または塩基より製造される塩をいう。本明細書で提供される化合物の適切な医薬的に許容される塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛より製造される金属塩、またはリジン、Ｎ,Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ－メチル－グルカミン）およびプロカインより製造される有機塩が含まれるが、これらに限定されない。適切な非毒性酸には、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファ－スルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、サルファニル酸、硫酸、酒石酸、およびｐ－トルエンスルホン酸などの無機酸および有機酸が含まれるが、これらに限定されない。他も当該分野において周知であり、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA（1990）またはRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th eds., Mack Publishing, Easton PA（1995）を参照のこと。

本明細書で使用される場合の「サンプル」なる語は、必然的というわけではないが、典型的には、１または複数の目的とする成分を含有する、流体の形態の材料または材料の混合物をいう。例示的なサンプルは、インビボまたはインサイチュにて、得られるか、到達するか、または収集される生体組織または流体オリジンのサンプルを含め、生体対象より得られる「生体サンプル」である。生体サンプルには、前がんまたはがん細胞または組織を含有する生体対象の領域から由来のサンプルも含まれる。かかるサンプルは、哺乳動物から単離された器官、組織、および細胞であり得るが、これらに限定されない。例示的な生体サンプルには、細胞溶解液、細胞培養物、細胞株、組織、口腔組織、消化管組織、器官、細胞小器官、生体液、血液サンプル、尿サンプル、皮膚サンプル等が含まれるが、これらに限定されない。好ましい生体サンプルには、全血液、部分精製血液、ＰＢＭＣ、骨髄核生検を含む組織生検、骨髄吸引液、単離骨髄単核細胞、循環腫瘍細胞等が含まれるが、これらに限定されない。

「生物学的マーカー」または「バイオマーカー」は、その検出が、例えば、血液がんの存在などの、特定の生物学的状態を示す物質である。いくつかの実施態様において、バイオマーカーは個別に測定され得る。他の実施態様において、数種のバイオマーカーが同時に測定され得る。

いくつかの実施態様において、「バイオマーカー」は、疾患のリスクまたは進行と、または該疾患の所定の治療に対する感受性と相関し得る、ｍＲＮＡ発現のレベルにおける変化を示す。いくつかの実施態様において、バイオマーカーはｍＲＮＡまたはｃＤＮＡなどの核酸である。

さらなる実施態様において、「バイオマーカー」は、疾患のリスクまたは進行と、あるいは患者の治療に対する感受性と相関し得るポリペプチドまたはタンパク質の発現のレベルにおける変化を示す。いくつかの実施態様において、バイオマーカーはポリペプチドまたはタンパク質、あるいはそのフラグメントであり得る。特定のタンパク質の相対レベルは当該分野にて公知の方法によって測定され得る。例えば、免疫ブロット、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの抗体に基づいた方法、または他の方法が使用され得る。

本明細書にて互換的に使用される場合の「ポリペプチド」および「タンパク質」なる語は、ペプチド結合を介して連結された、連続した配列の３個またはそれ以上のアミノ酸のポリマーをいう。「ポリペプチド」なる語は、タンパク質、タンパク質フラグメント、タンパク質アナログ、オリゴペプチド等を包含する。本明細書で使用される場合の「ポリペプチド」なる語はペプチドをいうこともできる。ポリペプチドを構成するアミノ酸は、天然に由来するものであってもよく、あるいは合成のものであってもよい。ポリペプチドは生体サンプルから精製され得る。ポリペプチド、タンパク質、またはペプチドはまた、修飾されたポリペプチド、タンパク質、およびペプチド、例えば、グリコポリペプチド、糖タンパク質、またはグリコペプチド；あるいはリポポリペプチド、リポタンパク質、またはリポペプチドを包含する。

本明細書で使用される場合の「レベル」なる語は、バイオマーカー分子の量、蓄積、または速度をいう。レベルは、例えば、遺伝子によってコードされるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の量または合成速度、遺伝子によってコードされるポリペプチドまたはタンパク質の量または合成速度、または細胞または生物学的流体中に蓄積される生体分子の量または合成速度をいう。「レベル」なる語は、定常状態または非定常状態の条件下で測定される、サンプル中の分子の絶対量、または該分子の相対量をいう。

「レベルの改変」は、特定の参照と比べて異なる、バイオマーカー分子の量、蓄積または速度をいうものとする。レベルの改変は、特定のバイオマーカーおよび／または比較のために使用される参照に応じて、増加または減少のいずれかとなり得る。例えば、タンパク質レベルなどのバイオマーカーのレベルは、未処理のサンプルと比較して、治療用化合物を投与した後に、そのレベルがサンプル中で減少した場合、それは該レベルが改変していると言える。しかしながら、その同じバイオマーカーは、例えば、その参照となるレベルが処理サンプルのより早期の時点でのレベルである場合、増加したレベルの改変を有し得る。

本明細書で使用される場合の「参照となるレベル」なる語は、個体から由来のサンプル中のバイオマーカーの試験レベルを評価するのに使用されるバイオマーカーの参照レベルを意味するものとする。参照となるレベルは、正常な対象から由来のサンプル中の正常な参照となるレベル、または疾患状態の対象から由来の疾患の参照となるレベルとすることができる。正常な参照となるレベルは、疾患でない対象（すなわち、血液がんでない対象）におけるバイオマーカーの発現量である。疾患状態の参照となるレベルは、該疾患または症状について陽性の診断を受けた対象におけるバイオマーカーの発現量である。参照となるレベルはまた、段階特異的な参照となるレベルでもあり得る。段階特異的な参照となるレベルは、疾患または症状の所定の進行段階に特徴的なバイオマーカーのレベルをいう。参照となるレベルはまた、治療前の、または治療の間の種々の時点でのバイオマーカーの発現量とすることができる。例えば、参照となるレベルは、治療前の骨髄でのバイオマーカーの発現量とすることができる。もう一つ別の例では、参照となるレベルは、治療の間またはその後のいくつかの時点での血液中のバイオマーカーの発現量であってもよい。

本明細書で使用されるように、バイオマーカーに関して使用される場合の「検出可能な」なる語は、免疫化学的または組織学的方法などの、生体分子を検出するための既知の技法を用いることで、バイオマーカーの量が認識閾値を超えていることを意味するものとする。例えば、イムノブロットを用いて検出可能なバイオマーカーのレベルは、バックグラウンドおよび／または陰性対照（例、サンプルなし）のレベルよりも上にあるレベルであり得る。あるいはまた、例えば、定量的ＲＴ－ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を用いて検出可能なバイオマーカーのレベルは、陰性対照（例、水）を用いるｑＰＣＲ反応で検出されるサイクル数よりも早いサイクル数で検出されるレベルであり得る。検出可能なレベルは、調査中の生体分子の存在または濃度を定性的または定量的に測定するということもでき、上記したアッセイは単なる例示に過ぎないことが、さらに理解される。

本明細書で使用される場合の「予測する」または「予測している」なる語は、一般に、事前に決定すること、または伝えることを意味する。例えば、治療に対する奏功性を「予測する」のに使用される場合、「予測している」なる語は、血液がんの治療に対して奏功的である、または応答しない可能性が、最初に、治療を始める前に、または治療期間が実質的に進行する前に、決定され得ることを意味し得る。

本明細書で使用される場合の「モニター観察する」または「モニター観察している」なる語は、一般に、活動を監督すること、監視すること、調整すること、観察すること、追跡すること、または調査することをいう。例えば、「化合物の有効性をモニター観察する」なる語は、患者または腫瘍細胞培養物において血液がんを治療する際の有効性を追跡することをいう。同様に、「モニター観察している」なる語は、個人的に、または臨床試験のいずれかにて、患者の順守に関して使用される場合に、患者が実際に処方通りに試験中の薬物を服用していることを追跡または確認することをいう。モニター観察は、例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質のバイオマーカーの発現を追跡ことにより実施され得る。

本明細書で使用される場合の「効能」なる語は、所望のまたは意図する結果をもたらす能力をいう。治療用化合物の効能に関して使用される場合、「効能」は、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの成長、または進行の減少または阻害を意味するものとする。それはまた、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの再燃または再発を防止することをいう。

本明細書で使用される場合の「時点」なる語は、応答が予想される場合に、時間的に十分に間隔を設けてその応答を可能とする、別個の間隔でサンプルを得る時点をいう。時点は、治療前、治療中または治療後とすることができる。治療サイクルの各段階で複数の時点を取ることも可能であると理解される。例えば、サンプルは、治療の１ケ月以上前に取得し、治療の直前に再び取得するか、または治療中に１日に２回取得するか、あるいは治療前、治療中および治療後に取得することができる。上記にて提供される例は単なる例示に過ぎず、限定を意図としないものと理解される。

本明細書で使用される場合であって、特記されない限り、化合物の「治療的に効果的な量」および「効果的な量」なる語は、疾患、例えば、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬの治療、予防および／または管理において治療上の利益をもたらすのに、あるいは治療されるべき疾患または障害に付随する１または複数の徴候を遅延または最小化するのに十分な量をいう。「治療的に効果的な量」および「効果的な量」なる語は、療法全体を改善し、疾患または障害の徴候または原因を軽減または回避し、あるいはもう一つ別の治療剤の治療効能を強化する量を包含し得る。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「治療する」、「治療している」および「治療」なる語は、障害、疾患または症状の、または障害、疾患または症状に付随する１または複数の徴候の全体または一部を軽減すること、またはそれらの徴候のさらなる進行または悪化を遅らせるか、または停止させること、あるいは障害、疾患または症状自体の病因、例えばＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんを軽減または根絶させることをいう。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「予防する」なる語は、障害、疾患または症状の全体または一部の発症、再発またはまん延を遅延および／または防止するか；対象が障害、疾患または症状を獲得することを妨げるか；あるいは対象が障害、疾患または症状を獲得するリスクを低減する方法を意味する。

本明細書で使用される場合で特に断らない限り、「管理する」なる語は、特定の疾患または障害に罹患したことがある患者においてその疾患または障害の再発を防止すること、該疾患または障害に罹患したことのある患者が、寛解状態を維持することを伸ばすこと、該患者の死亡率を下げること、および／または管理されている疾患または症状に付随する徴候の重篤度の低下または回避を維持することを包含する。

本明細書にて記載される場合の「付近」、「約」または「略」なる語は、参照となるレベルの近い範囲内にある、レベルをいう。参照となるレベルにある、またはその付近にあるバイオマーカーのレベルは、参照となるレベルの５０％以上のレベルの範囲内にあるように、参照となるレベルより低くても、高くてもよい。当業者であれば、バイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと等しい必要はなく、その範囲内にあれば参照となるバイオマーカーのレベルである、またはその付近にあると考えると理解するであろう。参照となるサンプルのバイオマーカーのレベルにあるか、またはその付近にある代表的なバイオマーカーのレベルは、参照となるレベルの７５－１２５％の範囲内とすることができる。

本明細書にて記載される場合の「好中球」なる語は、分化した骨髄系細胞をいう。好中球は、表面マーカーＣＤ１１ｂの発現、および表面マーカーＣＤ３４およびＣＤ３３の不在または不在に近いこと（すなわち、ＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－）で特徴付けることができる。当業者であれば、マーカーの発現または発現の欠如が絶対である必要のないことを理解するであろう。例えば、好中球はＣＤ３４を低レベルで発現し、ＣＤ３４^－と特徴付けられてもよい。同様に、細胞は、中程度であるが、検出可能なレベルのＣＤ１１ｂを発現し、ＣＤ１１ｂ^＋として特徴付けることができる。発現レベルは、個人と、マーカーを測定するために使用される装置の両方で経験的に決定され得る。

本明細書にて記載される場合の「第２の活性剤」なる語は、生物学的に活性である、任意のさらなる治療剤をいう。第２の活性剤は、造血成長因子、サイトカイン、抗がん剤、抗生物質、ｃｏｘ－２阻害剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、コルチコステロイド、がん抗原または薬理活性な変異体に特異的に結合する治療抗体、またはそれらの誘導体であり得ることが理解される。例示的な第２の活性剤には、限定されないが、ＨＤＡＣ阻害剤（例、パノビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、またはシタノスタット）、ＢＣＬ２阻害剤（例、ベネトクラクス）、ＢＴＫ阻害剤（例、イブルチニブまたはアカラブルチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例、エベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例、イデラリシブ）、ＰＫＣβ阻害剤（例、エンザスタウリン）、ＳＹＫ阻害剤（例、フォスタマチニブ）、ＪＡＫ２阻害剤（例、フェドラチニブ、パクリチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、またはモメロチニブ）、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例、アリセルチブ）、ＥＺＨ２阻害剤（例、タゼメトスタット、ＧＳＫ１２６、ＣＰＩ－１２０５、３－デアザネプラノシンＡ、ＥＰＺ００５６８７、ＥＩ１、ＵＮＣ１９９９、またはシネファンギン）、ＢＥＴ阻害剤（例、ビラブレシブまたは４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン）、低メチル化剤（例、５－アザシチジンまたはデシタビン）、化学療法剤（例、ベンダムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、メトトレキサート、シタラビン、ビンクリスチン、イホスファミド、メルファラン、オキサリプラチン、またはデキサメタゾン）、またはエピジェネティック化合物（例、ピノメトスタットなどのＤＯＴ１Ｌ阻害剤、Ｃ６４６などのＨＡＴ阻害剤、ＯＩＣＲ－９４２９などのＷＤＲ５阻害剤、ＧＳＫ３４８４８６２などのＤＮＭＴ１選択的阻害剤、化合物ＣまたはセクリデムスタットなどのＬＳＤ－１阻害剤、ＵＮＣ０６３１などのＧ９Ａ阻害剤、ＧＳＫ３３２６５９５などのＰＲＭＴ５阻害剤、ブロモドマイン（ＢＲＤ）阻害剤（例、ＬＰ９９などのＢＲＤ９／７阻害剤）、Ａ－１９６などのＳＵＶ４２０Ｈ１／Ｈ２阻害剤、またはＥＺＭ２３０２などのＣＡＲＭ１阻害剤）が含まれる。

本明細書で使用される場合の「対処療法」なる語は、化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマーまたはエナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩による治療による副作用を治療、防止または管理する、任意の物質をいう。「サポートケア療法」なる語が、主に患者の体力および／または快適性を維持することに向けられた、任意の治療剤をいうことが理解される。例示的なサポートケア療法には、限定されないが、等張食塩水、グルコース食塩水、または平衡晶質溶液などの疼痛制御、静脈内流体、および電解質支持のための療法が含まれる。

本明細書で使用されるように、参照となるサンプルに関して使用される場合の「供給源」なる語は、サンプルの起源をいう。例えば、血液から採取されたサンプルは、血液から採取された参照となるサンプルをも有するであろう。同様に、骨髄から採取されたサンプルは、骨髄から採取された参照となるサンプルをも有するであろう。

本明細書で使用される場合の「発現した」または「発現」なる語は、遺伝子の２つの核酸鎖の一方の領域に対して少なくとも部分的に相補的であるＲＮＡ核酸分子を付与するために遺伝子から転写されることをいう。本明細書で使用される場合の「発現した」または「発現」なる語はまた、タンパク質、ポリペプチド、またはその一部を付与するためにＲＮＡ分子から転写されることをいう。

「セレブロン」または「ＣＲＢＮ」なる語、および同様の用語は、ヒトＣＲＢＮタンパク質（例、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１、GenBank Accession No. NP_０５７３８６；またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２、GenBank Accession No. NP_００１１６６９５３、これらの各々は、出典を明示することでその全体が本明細書に組み込まれる）、およびそのＳＮＰ変異体を包含する、関連するポリペプチドなどの任意のＣＲＢＮのアミノ酸配列を含む、ポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書にて互換的に用いられる）をいう。関連するＣＲＢＮポリペプチドは、対立遺伝子変異体（例、ＳＮＰ変異体）、スプライス変異体、フラグメント、誘導体、置換変異体、欠失変異体、挿入変異体、融合ポリペプチド、および種間ホモログを包含し、それは、特定の実施態様において、ＣＲＢＮ活性を保持し、および／または抗－ＣＲＢＮ免疫応答を生成するのに十分である。

本明細書で使用される場合の「セレブロン関連タンパク質」または「ＣＡＰ」なる語は、セレブロン（ＣＲＢＮ）と直接的または間接的に相互作用するか、または結合するタンパク質をいう。例えば、該用語は、セレブロンと直接結合する任意のタンパク質、ならびにＣＲＢＮ経路における下流での間接的エフェクターである任意のタンパク質をいう。例示的なＣＡＰは、ＣＲＢＮの基質、例えば、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、またはＺＦＰ９１などのＣＲＢＮが関与するＥ３ユビキチンリガーゼ複合体のタンパク質基質である。

本明細書で使用される場合の「インターフェロン誘導性遺伝子」なる語は、Ｉ型インターフェロン介在性シグナル伝達に応答して、その発現が増加する遺伝子をいう。例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）のＩ型ＩＦＮ受容体との結合は、インターフェロン誘導性遺伝子の誘導に関与するシグナル伝達カスケードの活性化の引き金となり得る。代表的な遺伝子には、インターフェロン制御７（ＩＲＦ７）、テトラトリコペプチド反復３を有するインターフェロン誘発性タンパク質３（ＩＦＩＴ３）、およびデッドボックスタンパク質５８（ＤＤＸ５８）が含まれる。

本明細書で使用されるように、シグナル伝達経路、細胞プロセス、または細胞機能に関して用いられる場合の「関連して」なる語は、その分子が、例えば、特定のプロセスまたは機能を調整するために、一緒に作用する細胞中の一群の分子のメンバーであることを意味するものとする。分子はインターフェロンシグナル伝達またはサイトカイン／ケモカインシグナル伝達などのシグナルの伝達の推進に直接的または間接的に関与するため、それはシグナル伝達経路と関連付けられ得ると認識される。分子はまた、例えば、細胞接着、細胞－細胞間結合、Ｇ－タンパク質結合受容体、細胞外マトリックス、細胞周期、または転写などの細胞プロセスまたは機能と関連付けられ得る。というのも該分子が細胞プロセスまたは機能と直接的または間接的に関与するからである。

本明細書で使用される場合の「Ｔ細胞活性化」および「Ｔ細胞の活性化」なる語は、休止しているナイーブＴ細胞を、腫瘍細胞死を誘発する能力を有する、エフェクターＴ細胞に細胞的に活性化することを意味するものとする。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体と抗原との相互作用により開始され得る。例示的なＴ細胞の活性化は、細胞増殖、サイトカイン分泌、および／またはエフェクター機能を含むが、これらに限定されない、細胞応答を示す。本願の文脈では、Ｔ細胞活性化は、化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩による処理によって誘導されてもよい。

本明細書で使用される場合の「Ｔ細胞活性化関連サイトカイン」なる語は、Ｔ細胞の活性化によって分泌されるか、または休止しているナイーブなＴ細胞と比較して、その分泌がＴ細胞の活性化にて増加する、多数の因子のいずれかをいう。例示的なＴ細胞活性化関連サイトカインには、インターロイキン－２（ＩＬ－２）が含まれる。

本明細書にて互換的に使用される場合の「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」なる語は、完全に組み立てられた抗体および抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメントを包含する。本明細書にて提供される抗体には、限定されないが、合成抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え産生抗体、多特異性抗体（二特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラ体、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（例、一特異性、二特異性等を包含する）、キャメル化抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記した任意のエピトープ結合フラグメントが含まれる。特に、本明細書にて提供される抗体には、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、ＣＲＢＮ抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位（例えば、抗－ＣＲＢＮ抗体の１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有する抗原結合ドメインまたは分子が含まれる。免疫グロブリンは重鎖と軽鎖とから構成され得る。本明細書にて提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）または任意のサブクラス（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のものであってもよい。いくつかの実施態様において、抗ＣＲＢＮ抗体は、完全ヒトモノクローナルＣＲＢＮ抗体などの完全ヒト抗体である。特定の実施態様において、本明細書にて提供される抗体はＩｇＧ抗体、またはそのサブクラス（例、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４）である。他の実施態様において、本明細書にて提供される抗体には、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、例えば、アイオロス、イカロス、ｃ－ＭＹＣ、ＩＲＦ４、カスパーゼ－３、または本明細書にて提供される任意のバイオマーカーに免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する抗原結合ドメインまたは分子が含まれる。

本明細書で使用される場合の「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」および「特異的に認識する」なる語は、抗体の文脈において類似する用語であり、抗原／エピトープとの結合が当業者によって理解されるように結合する分子をいう。標的構造またはそのサブユニットと特異的に結合する抗体は、標的構造のファミリーの範囲外にある生体分子と交差反応しない。いくつかの実施態様において、抗体または抗体フラグメントは、選択された抗原と、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、または１０^－１１Ｍより大きい、１０^－８Ｍ－１０^－１１Ｍ、１０^－９Ｍ－１０^－１０Ｍ、および１０^－１０Ｍ－１０^－１１Ｍの間の特異的親和性で結合する。例えば、抗原に特異的に結合する分子（例えば、抗体）は、例えば、イムノアッセイ、または当該分野にて公知の他のアッセイで測定された場合に、一般に、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドと結合し得る。特定の実施態様において、抗原と特異的に結合する分子は他のタンパク質と交差反応することはない。

本明細書で使用される場合の「エピトープ」なる語は、抗体の１または複数の抗原結合領域と結合する能力を有し、哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物において抗原性または免疫原性活性を有し、免疫応答の誘発能を有する、抗原の表面上にある局在領域をいう。免疫原性活性を有するエピトープとは、動物において抗体反応を惹起するポリペプチドの部分である。抗原活性を有するエピトープとは、当該分野にて周知の任意の方法により、例えば、本明細書にて記載の免疫アッセイによって測定されるように、そこに抗体が免疫特異的に結合する、ポリペプチドの部分である。抗原性エピトープは必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの、化学的に活性な一群の分子で表面を構成し、特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する。エピトープに寄与するポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続したアミノ酸であってもよいし、またはエピトープは２個またはそれ以上のポリペプチドの非連続の領域から一緒になるものであってもよい。エピトープは、抗原の三次元の表面特性があっても、なくてもよい。

本明細書で使用される場合の「決定する」、「測定する」、「評価する」、「アセスする」および「アッセイする」なる語は、一般に、任意の形態の測定をいい、要素があるか、ないかどうかを決定することを包含する。これらの用語は定量的および／または定性的な測定を包含する。アセスするのは、相対的であっても、絶対的であってもよい。「の存在をアセスする」には、存在するものの量を測定すること、ならびにそれが存在するのか、不在であるのかどうかを測定することが含まれ得る。

本明細書にて記載される場合の「検出可能な標識」なる語は、タンパク質の検出または単離／精製にて補助するために特定のタグを抗体に付着させることをいう。標識の型の例として、限定されないが、放射性同位体、蛍光体（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリスリン（ＰＥ））、化学発光体、酵素レポーター、および元素粒子（例えば、金粒子）が挙げられる。検出は直接的または間接的とすることができる。光学的方法には、顕微鏡法（共焦点または非共焦点の両方）、画像化法および非画像化法が含まれる。電気化学的方法には、ボルトアンメトリーおよびアンペロメトリー法が含まれる。無線周波数法には、多極共鳴分光法が含まれる。

本明細書にて提供される実施態様の実施は、特記されない限り、当該分野における当業者の技術の範囲内にある、分子生物学、微生物学、および免疫学の従来技術を利用するであろう。そのような技術は文献にて十分に説明される。参照に特に適したテキストの例には、以下：Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual（2版, 1989）；Glover編、DNA Cloning、IおよびII巻（1985）；Gait編、Oligonucleotide Synthesis（1984）； Hames & Higgins編、Nucleic Acid Hybridization（1984）；Hames & Higgins編、Transcription and Translation（1984）；Freshney編、Animal Cell Culture: Immobilized Cells and Enzymes（IRL Press, 1986）；Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology（Academic Press, London）；Scopes, Protein Purification：Principles and Practice（Springer Verlag, N.Y., 2版, 1987）；およびWeir & Blackwell編、Handbook of Experimental Immunology、I-IV版（1986）が含まれる。

５.２化合物
本明細書にて提供される種々の方法のいくつかの実施態様において、化合物は、式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマーまたはエナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である。

本明細書にて提供される種々の方法の特定の実施態様において、化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）：
またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。化合物１を製造する方法は、米国特許出願番号１６／３９０,８１５（その全てを出典明示により本明細書に組み込む）に記載されている。

本明細書にて提供される種々の方法のさらに別の実施態様において、化合物は、（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）：
あるいはその互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩である。

いくつかの実施態様において、化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン、および（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）：
の混合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、またはその医薬的に許容される塩で構成される。

本明細書にて提供される種々の化合物は、キラル中心を含有してもよく、エナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ混合物）またはジアステレオマーの混合物として存在し得る。かかるキラル中心は、（Ｒ）または（Ｓ）配置のいずれであってもよく、あるいはその混合物であってもよい。本明細書にて提供される化合物のキラル中心は、インビボにてエピマー化を受ける可能性のあることを理解すべきである。そのため、当業者であれば、化合物のその（Ｒ）形態での投与が、インビボにてエピマー化を受ける化合物では、化合物のその（Ｓ）形態での投与と均等であることを認識するであろう。本明細書にて提供される方法は、そのような化合物の立体的に純粋な形態の使用、ならびにそれらの形態の混合物の使用を包含する。例えば、特定の化合物の等量または非当量のエナンチオマーを含む混合物が、本明細書にて提供される方法にて使用され得る。これらの異性体は不斉合成されてもよく、キラルカラムまたはキラル分割剤などの標準的な技法を用いて分割されてもよい。Jacquesら、Enantiomers, Racemates and Resolutions（Wiley-Interscience, New York, 1981）；Wilenら、Tetrahedron 1977, 33：2725-2736；Eliel、Stereochemistry of Carbon Compounds（McGraw-Hill, NY, 1962）；Wilen、Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, p.268（Eliel編, Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972）を参照のこと。

また、本明細書にて提供される化合物の同位体に富むアナログがここでは提供される。薬物動態学（「ＰＫ」）、薬力学（「ＰＤ」）、および毒性プロファイルを改善するための医薬品の同位体の豊富化（例えば、重水素化）は、いくつかの種類の薬物でこれまでに実証されている。例えば、Lijinskyら、Food Cosmet. Toxicol., 20：393（1982）；Lijinskyら、J. Nat. Cancer Inst., 69：1127（1982）；Mangoldら、Mutation Res. 308：33（1994）；Gordonら、Drug Metab. Dispos., 15：589（1987）；Zelloら、Metabolism, 43：487（1994）；Gatelyら、J Nucl. Med., 27：388（1986）；Wade D、Chem. Biol. Interact. 117：191（1999）を参照のこと。

特定の理論に限定されることなく、薬物の同位体の豊富化は、例えば、（１）不要な代謝物を減少または除去するか、（２）親化合物の半減期を伸ばすか、（３）所望の効果を達成するのに必要とされる投与の回数を減らすか、（４）所望の効果を達成するのに必要とされる投与量を減らすか、（５）任意の活性代謝物が形成されるならば、その形成を増やすか、および／または（６）特定の組織での有害代謝物の生成を減らし、および／または併用療法が意図的であるか否かにかかわらず、併用療法に用いるためのより効果的な薬物、および／またはより安全な薬物を作製するために使用され得る。

原子がその同位体の１つに置き換えられると、化学反応の反応速度に変化がもたらされることが多い。この現象は、運動学的同位体効果（Kinetic Isotope Effect）（「ＫＩＥ」）として知られる。例えば、Ｃ－Ｈ結合が化学反応の律速段階（遷移状態エネルギーが最も高い段階）の間に切断されると、重水素のその水素との置き換えは反応速度の低下を引き起こし、工程は遅くなるであろう。この現象は重水素運動学的同位体効果（Deuterium Kinetic Isotope Effect）（「ＤＫＩＥ」）として知られる。（例えば、Fosterら、Adv. Drug Res., 14巻, 1-36頁（1985）；Kushnerら、Can. J. Physiol. Pharmacol., 77巻, 79-88頁（1999）を参照のこと）

ＤＫＩＥの大きさは、Ｃ－Ｈ結合が切断される所定の反応の速度と、重水素が水素と置き換えられている同じ反応の速度との間の割合として表すことができる。ＤＫＩＥは約１（同位体効果なし）から５０以上の極めて大きな数値の範囲とすることができ、それは重水素が水素と置き換えられると、反応が５０倍以上遅くなり得ることを意味する。特定の理論に限定されることなく、ＤＫＩＥ値が高いのは、不確定な原理の結果である、いくらかはトンネリングとして知られる現象によるものかもしれない。トンネリングは水素原子の質量が小さいことに起因し、必要とされる活性化エネルギーの不在の下でも、プロトンを含む遷移状態が時に形成され得るために生じる。重水素は水素よりも質量が大きいため、この現象が起こる確率は統計的に非常に低い。

トリチウム（「Ｔ」）は、研究、核融合反応装置、中性子発生装置、および放射性医薬品において使用される、水素の放射性同位体である。トリチウムは原子核内に２個の中性子を有し、３に近い原子量を有する水素原子である。それは、自然の環境下にて、極めて低い濃度で存在し、最も一般的にはＴ_２Ｏとして見つかる。トリチウムはゆっくりと崩壊し（半減期＝１２.３年）、低エネルギーのベータ粒子を放出し、それはヒトの皮膚の外層を突き抜けることができない。内部被ばくがこの同位体に付随する主な危険性であるが、有意な健康リスクを引き起こすには大量に取り込まなければならない。重水素と比べると、危険なレベルに到達するまでに、トリチウムではより少ない量が消費される必要がある。トリチウム（「Ｔ」）を水素と置き換えると、重水素よりもさらに強力な結合がもたらされ、数値的にはより大きな同位体効果を付与する。

同様に、限定されないが、炭素の１３Ｃまたは１４Ｃとの、硫黄の３３Ｓ、３４Ｓまたは３６Ｓとの、窒素の１５Ｎとの、および酸素の１７Ｏまたは１８Ｏとの置き換えを含め、他の元素の同位体との置き換えは、同様の動力学的同位体効果を提供するであろう。

動物の体は、治療剤などの異物をその循環系から排除する目的で、種々の酵素が発現する。かかる酵素の例には、これらの異物と反応し、腎排泄のためにより極性の高い中間体または代謝物に変換する、チトクロムＰ４５０（「ＣＹＰ」）、エステラーゼ、プロテアーゼ、レダクターゼ、デヒドロゲナーゼ、およびモノアミンオキシダーゼが含まれる。医薬化合物の最も一般的な代謝反応のいくつかは、炭素－水素（Ｃ－Ｈ）結合の炭素－酸素（Ｃ－Ｏ）または炭素－炭素（Ｃ－Ｃ）パイ結合のいずれかへの酸化に関与する。得られた代謝物は、生理学的条件下で安定しているか、または不安定であってもよく、親化合物と比べて、実質的に異なる薬物動態学的、薬力学的、および急性で長期にわたる傷害性プロフィールを有し得る。多くの薬物では、かかる酸化は迅速である。その結果、これらの薬物は、一日に複数の、または高用量の投与を必要とすることが多い。

本明細書にて提供される化合物の特定の位置での同位体の豊富化は、天然の同位体組成を有する類似の化合物と比較して、本明細書にて提供される化合物の薬物動態学的、薬理学的、および／または傷害性プロフィールに影響を及ぼす検出可能なＫＩＥを生み出し得る。１の実施態様において、重水素の豊富化は、代謝作用の間のＣ－Ｈ結合の切断の部位で行われる。

標準的な生理学的、薬学的、および生化学的操作が、化合物を試験し、所望の抗増殖活性を有する化合物を同定するのに利用可能である。

かかるアッセイは、例えば、結合アッセイ、放射能取り込みアッセイなどの生化学、ならびに種々の細胞をベースとするアッセイを包含する。

式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、互変異性体またはラセミ混合物は、当業者に公知の方法によって、例えば、米国特許第８,５１８,９７２号Ｂ２、または米国特許出願番号１６／３９０,８１５（その全体が、各々、出典明示により本明細書に組み込まれる）に記載の操作に従って、製造され得る。本明細書にて提供される化合物を製造するための例示的な方法がセクション６の実施例１－３に記載される。

５.３バイオマーカーおよびその使用方法
本明細書にて提供される方法は、部分的には、化合物での治療で特定のバイオマーカーにて検出可能な増加または減少が、所定の治療剤、例えば、上記のセクション５.２にて記載されるような化合物１、化合物２、または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログまたは医薬的に許容される塩などの化合物に対して応答的である、例えば、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの対象にて観察されるという知見に基づく。これらのバイオマーカーのレベルは、対象の治療剤に対する奏功性を同定または測定するのに、ならびに血液がんの対象の治療を促進するのに使用され得る。いくつかの実施態様において、バイオマーカーのレベルは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩に対する応答を予測するのを可能とする。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫である。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。いくつかの実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

セクション６の実施例にて記載され、図面にて示されるように、特定のタンパク質、分子、ｍＲＮＡまたは細胞組成物のレベルは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での治療に応答して変化する。これらのバイオマーカーには、アポトーシスのマーカー、セレブロン（ＣＲＢＮ）関連タンパク質、およびインターフェロン誘導性遺伝子が含まれる。例えば、本明細書にて提供されるように、化合物１、化合物２、または化合物３などの式（Ｉ）の化合物に対して感受性であるＤＬＢＣＬ細胞の処理は、未処理の細胞および非奏功性細胞と比べて、アポトーシスを誘発し、ＣＲＢＮ結合タンパク質の発現を減らし、インターフェロン誘導性遺伝子の発現を増やした。しかしながら、特定の状況では、本明細書に記載のバイオマーカーがレベルの変化する（すなわち、増加または減少する）必要のないことが理解される。例えば、特定の実施態様において、投与量の治療用化合物を対象に投与する前のタンパク質の基底発現で、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での処理に対する感受性または奏功性を予測し得る。従って、本明細書にて提供されるバイオマーカーは、対象の治療に対する奏功性を同定するか、測定し、治療の有効性をモニター観察するのに有用とすることができ、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬなどの血液がんの対象の治療を促進することができる。

特定の態様において、本明細書にて提供される方法において有用なバイオマーカーはアポトーシスのマーカーである。本明細書にて提供されるように、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩に感受性である、ＤＬＢＣＬまたはＣＬＬ／ＳＬＬ細胞などの血液がん細胞の治療は、プロアポトーシスタンパク質の発現を増加させ、および／またはその活性を増加させ、アンチアポトーシスタンパク質の発現および／または活性を減少させることができ、アポトーシスの誘発をもたらし得る。従って、いくつかの実施態様では、バイオマーカーのレベルの変化はアポトーシスの誘導を示すものである。具体的な実施態様において、アポトーシスの誘導を示すバイオマーカーは、切断型カスパーゼ３、切断型カスパーゼ７、切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ＢＣＬ２、サバイビン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびＤＮＡ、Ｂｃｌ－２－様タンパク質１１（ＢＩＭ）、インターロイキン２７（ＩＬ２７）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン１０（ＩＬ１０）、またはそれらの組み合わせである。アポトーシスの誘導を示すバイオマーカーはまた、アポトーシス細胞において内因性タンパク質および分子（例えば、各々、ホスファチジルセリン、ＤＮＡ）に結合する、アネキシン－Ｖ、ディープ・レッド・アントラキノン７（ＤＲＡＱ７）、および／または７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）などのプローブまたは代用のマーカーを検出し、その検出が生存、アポトーシス、および後期アポトーシス／死滅細胞を区別することもできる。かくして、いくつかの実施態様において、アポトーシスの誘導を示すバイオマーカーは、アネキシン－Ｖ、ＤＲＡＱ７、７－ＡＡＤ、またはそれらの組み合わせを包含する。

いくつかの実施態様において、サンプル中にてアポトーシスの誘導を示すバイオマーカーは、該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは、化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後にアポトーシスの誘導を示すバイオマーカーのレベルが高いことは、その治療が効果的であることを示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは、該化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中にて切断型カスパーゼ３、切断型カスパーゼ７、切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ＢＣＬ２、サバイビン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびＤＮＡ、Ｂｃｌ－２－様タンパク質１１（ＢＩＭ）、インターロイキン２７（ＩＬ２７）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン１０（ＩＬ１０）、アネキシン－Ｖ、ＤＲＡＱ７、７－ＡＡＤ、またはその組み合わせのレベルが高いことは、治療の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーが該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い必要のないことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは化合物の第１の投与後のバイオマーカーのレベルであり、第２の投与の前にアポトーシスの誘導を示すバイオマーカーのレベルが低いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

いくつかの態様において、本明細書にて提供される方法において有用であるバイオマーカーは、ＣＲＢＮ結合タンパク質またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的である。本明細書にて提供されるように、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、ＣＲＢＮとの結合能を有し、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での治療の効果を媒介するにはＣＲＢＮ発現が必要とされる。従って、いくつかの実施態様において、バイオマーカーはセレブロン（ＣＲＢＮ）であり、ＣＲＢＮがサンプル中にて検出可能であるか、参照となるレベルよりも高い場合、対象は式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での治療に対して奏功的である可能性があるものと診断される。

ＣＲＢＮは、イカロス（ＩＫＺＦ１としても知られる）、アイオロス（ＩＫＺＦ３として知られる）およびＺＦＰ９１（例えば、米国特許第９,８５７,３５９号Ｂ２；米国特許出願番号１５／１０１,８６９および１５／５１８,４７２（各々、米国特許２０１７－０２４２０１４Ａ１および米国特許２０１６－０３１３３００Ａ１として公開され、その各々のすべてを出典明示により本明細書に組み込む）を参照のこと）を含む、種々の基質の分解を促進すると知られているＥ３ユビキチンリガーゼである。本明細書にて提供されるように、血液がん細胞の式（Ｉ）の化合物による治療は、ＣＲＢＮ関連タンパク質のイカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の分解をもたらし、これは式（Ｉ）の化合物の強い抗増殖効果と一致した。加えて、血液がん細胞を式（Ｉ）の化合物で治療すると、インターフェロン誘導性遺伝子（ＩＳＧ）、インターフェロン制御因子７（ＩＲＦ７）、テトラトリコペプチド反復３を含むインターフェロン誘発性タンパク質（ＩＦＩＴ３）、およびＤＥｘＤ／Ｈ－ボックスヘリカーゼ（ＤＤＸ５８）、ならびに非常に重要な転写因子ｃ－Ｍｙｃ／ＭＹＣ、ＢＣＬ６、およびＩＲＦ４の抑制解除をもたらした。かくして、いくつかの実施態様において、バイオマーカーはＣＲＢＮ結合タンパク質（ＣＡＰ）またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的である。具体的な実施態様において、ＣＲＢＮ結合タンパク質は、イカロス、アイオロス、またはＺＦＰ９１である。他の実施態様において、ＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的は、ＢＣＬ６、ｃ－ＭＹＣ、またはＩＲＦ４である。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーはＣＲＢＮ結合タンパク質（ＣＡＰ）またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的タンパク質であり、サンプル中のバイオマーカーは、該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、特定の実施態様では、参照となるレベルは、化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与後のＣＲＢＮ結合タンパク質（ＣＡＰ）またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的のレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中のイカロス、アイオロス、ＺＦＰ９１、ＢＣＬ６、ｃ－ＭＹＣ、ＩＲＦ４、またはそれらの組み合わせのレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは、化合物を第１に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、該バイオマーカーのレベルが高いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーはインターフェロン誘導性遺伝子を含む。具体的な実施態様において、インターフェロン誘導性遺伝子には、インターフェロン制御７（ＩＲＦ７）、テトラトリコペプチド反復３を有するインターフェロン誘導性タンパク質（ＩＦＩＴ３）、ＤＥＡＤボックスタンパク質５８（ＤＤＸ５８）、またはそれらの組み合わせが含まれる。特定の実施態様において、バイオマーカーはインターフェロン誘導性遺伝子であり、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のインターフェロン誘導性遺伝子のレベルが高いことは、治療の有効性を示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与後に、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ３、ＤＤＸ５８、またはそれらの組み合わせのサンプル中のレベルが高いことは、治療の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーが、該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは、化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、該バイオマーカーのレベルが低いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

本明細書にて記載されるように、血液がんの式（Ｉ）の化合物を用いての治療は、非処理の細胞と比べて、血液がんの増殖を阻害した。このことは、増殖阻害剤である、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１（ｐ２１）の発現の増加によって確認された。かくして、いくつかの実施態様において、バイオマーカーは増殖のマーカーである。具体的な実施態様において、バイオマーカーはｐ２１である。バイオマーカーは増殖の増加のマーカーであり得、増殖阻害剤である必要のないことが理解される。例として、マーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を用いる治療で減少する、増殖のマーカー（例、Ｂｒｄｕ、Ｋｉ－６７、Ｈ３ｐＳ１０または同様のマーカー）であり得る。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは増殖のマーカーであり、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後の増殖のマーカーのレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与後に、ｐ２１のサンプル中のレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーが、該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは、化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、増殖のマーカーのレベルが高いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

本発明者らは、式（Ｉ）の化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、互変異性体またはラセミ混合物が、内皮細胞、ＴおよびＢリンパ球、線維芽細胞、およびマクロファージなどの非がん細胞にも影響を及ぼし得ることを観察した。悪性細胞を取り囲む細胞（すなわち、腫瘍微小環境）は悪性細胞に影響を与え得る。例えば、抗炎症性および免疫調節性シグナルは血液がんを治療するのを支援することもできる。かくして、いくつかの実施態様において、バイオマーカーは非がん細胞内にある。いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、ＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、ＰＡＩ－１、ＣＤ６９、ｓＩＬ－１０、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーが該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、ＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、ＰＡＩ－１、ＣＤ６９、ｓＩＬ－１０またはそれらの組み合わせからなる群より選択され、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは、化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ＣＤ－６９、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、ＰＡＩ－１、またはそれらの組み合わせのレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。他の実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中のＩＬ－８、ｓＩＬ－１０、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、またはそれらの組み合わせのレベルが高いことは、治療の有効性を示すものである。

化合物１の治療が、インターフェロンシグナル伝達（例、ＩＬ６ＳＴ、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩ６、ＯＡＳ３、インターフェロンα／βシグナル伝達）、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達（例、ＩＬ２３Ａ、ＣＣＬ１）、アポトーシス（例、ＩＬ２７、ＴＮＦ、ＩＬ１０、カスパーゼ）、細胞接着（例、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰＬＧ、ＴＸＡ２ＰＡ）、細胞－細胞間接着（例、ＣＬＤＮ７、ＣＬＤＮ１２）、Ｇ－タンパク質結合受容体（例、ＦＦＡＲ２）、細胞外マトリックス（例、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７）と関連付けられる遺伝子のイカロス／アイオロス駆動のアップレギュレーションを、ならびに細胞周期および転写と関連付けられるグローバルなダウンレギュレーションを生じさせることが観察された。従って、いくつかの実施態様において、バイオマーカーはインターフェロンシグナル伝達と関連付けられる。具体的な実施態様において、インターフェロンシグナル伝達と関連付けられるバイオマーカーは、インターロイキン－６シグナルトランスデューサー（ＩＬ６ＳＴ）、インターフェロン誘導性膜貫通型タンパク質３（ＩＦＩＴＭ３）、インターフェロンアルファ誘導性タンパク質６（ＩＦＩ６）、２’－５’－オリゴアデニレート合成酵素３（ＯＡＳ３）、インターフェロンα（ＩＦＮα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、またはそれらの組み合わせを包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーはインターフェロンシグナル伝達のマーカーであり、サンプル中のバイオマーカーは式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

他の実施態様において、バイオマーカーはサイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられる。いくつかの実施態様において、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられるバイオマーカーは、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン１（ＣＣＬ１）、またはそれらの組み合わせを包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーはサイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

さらなる実施態様において、バイオマーカーは細胞接着と関連付けられる。特定の実施態様において、細胞接着と関連付けられるバイオマーカーは、Ｅ－セレクチン（ＳＥＬＥ）、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＳＥＬＰＬＧ）、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）、またはそれらの組み合わせを包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーは細胞接着と関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

他の実施態様において、バイオマーカーは細胞－細胞間結合と関連付けられる。特定の実施態様において、細胞－細胞間結合と関連付けられるバイオマーカーは、ラウジン７（ＣＬＤＮ７）、クラウジン１２（ＣＬＤＮ１２）、またはそれらの組み合わせを包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーは細胞－細胞間結合と関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーはＧ－タンパク質結合受容体である。特定の実施態様において、Ｇ－タンパク質結合受容体は遊離脂肪酸受容体２（ＦＦＡＲ２）を包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーはＧ－タンパク質結合受容体であり、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

特定の実施態様において、バイオマーカーは細胞外マトリックスと関連付けられる。いくつかの実施態様において、細胞外マトリックスと関連付けられるバイオマーカーは、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７、またはそれらの組み合わせを包含する。具体的な実施態様において、バイオマーカーは細胞外マトリックスと関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも高く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

他の実施態様において、バイオマーカーは細胞周期と関連付けられる。具体的な実施態様において、バイオマーカーは細胞周期と関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも低く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

さらなる実施態様において、バイオマーカーは転写と関連付けられる。具体的な実施態様において、バイオマーカーは転写と関連付けられ、サンプル中のバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のバイオマーカーの参照となるレベルよりも低く、ここでその参照となるレベルはＤＭＳＯ処理のサンプルである。

特定の実施態様において、バイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での処理で、発現が変化するタンパク質のタンパク質レベルである。具体的な実施態様において、バイオマーカーは、アイオロス（ＩＫＺＦ３）、イカロス（ＩＫＺＦ１）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１）、タンパク質Ｃ－ｅｔｓ－１（ＥＴＳ１）、マックス結合タンパク質ＭＮＴ（ＭＮＴ）、筋細胞特異的エンハンサー因子２Ｂ（ＭＥＦ２Ｂ）、ｓｎＲＮＡ活性化タンパク質複合体サブユニット１（ＳＮＡＰＣ１）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ｂ（ＫＤＭ４Ｂ）、転写因子ＡＰ－４（ＴＦＡＰ４）、核極転写因子１（ＵＢＴＦ）、ブロモ隣接ホモロジードメイン含有１タンパク質（ＢＡＨＤ１）、メチル－ＣｐＧ－結合ドメインタンパク質４（ＭＢＤ４）、クロモボックスタンパク質ホモログ２（ＣＢＸ２）、腫瘍タンパク質６３（ＴＰ６３）、トランスデュシン様エンハンサータンパク質３（ＴＬＥ３）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｐ１（ＦＯＸＰ１）、ジンクフィンガーおよびＢＴＢドメイン含有タンパク質１１（ＺＢＴＢ１１）、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ転写サブユニットのメディエーター２６（ＭＥＤ２６）、環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－７（ＡＴＦ７）、ジンクフィンガータンパク質６４４（ＺＮＦ６４４）、リジン特異的脱メチル化酵素５Ｂ（ＫＤＭ５Ｂ）、上流刺激因子２（ＵＳＦ２）、転写因子２５（ＴＣＦ２５）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ａ（ＫＤＭ４Ａ）、致死（３）悪性脳腫瘍様タンパク質２（Ｌ３ＭＢＴＬ２）、ｎＲＮＡ－活性化タンパク質複合体サブユニット４（ＳＮＡＰＣ４）、リジン特異的脱メチル化酵素５（ＫＤＭ５）、転写因子ＣＯＥ１（ＥＢＦ１）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｊ２（ＦＯＸＪ２）、活性化Ｔ細胞細胞質の核因子１（ＮＦＡＴＣ１）、ｍＲＮＡ低下アクチベータータンパク質ＺＦＰ３６（ＺＦＰ３６）、肝がん誘発性成長因子（ＨＤＧＦ）、ＥＴＳ関連性転写因子Ｅｌｆ－１（ＥＬＦ１）、前骨髄球性白血病タンパク質（ＰＭＬ）、Ｍｙｂ関連性タンパク質ＢＭＹＢＬ２、マザー・アゲインスト・デカペンタプレジック・ホモログ２（ＳＭＡＤ２）、クロモドメイン－ヘリカーゼ－ＤＮＡ－結合タンパク質２（ＣＨＤ２）、転写１のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ１）、ペアボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、転写２のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ２）、ピゴパスホモログ２（ＰＹＧＯ２）、インターフェロン制御因子９（ＩＲＦ９）、ポリコーム・グループ・ＲＩＮＧフィンガータンパク質２（ＰＣＧＦ２）、および環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－３（ＡＴＦ３）からなる群より選択される、１または複数のタンパク質である。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、およびＳＬＩＴ－ＲＯＢＯＲｈｏＧＴＰａｓｅ－活性化タンパク質１（ＳＲＧＡＰ１）からなる群より選択される１または複数の遺伝子を包含する。

特定の態様において、バイオマーカーはＴ細胞活性化マーカーを包含する。Ｔ細胞の活性化は血液がん細胞の細胞傷害性殺傷を促進することができ、従って、血液がんの治療において有益であり得る。特定の実施態様において、Ｔ細胞の活性化はＴ細胞活性化関連サイトカインを包含する。具体的な実施態様において、Ｔ細胞活性化関連サイトカインはインターロイキン２（ＩＬ－２）を含む。いくつかの実施態様において、バイオマーカーはＴ細胞活性化マーカーであり、サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは、化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のＴ細胞活性化マーカーのレベルが高いことは、治療の有効性を示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中のＩＬ－２のレベルが高いことは処理の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーはバイオマーカーの参照となるレベルよりも高くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、該バイオマーカーのレベルが低いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

他の実施態様において、バイオマーカーは疲弊Ｔ細胞のマーカーである。疲弊Ｔ細胞は、プログラムされた細胞死タンパク質１（ＰＤ１）およびリンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ３）を含む、阻害シグナル伝達経路の発現を獲得するため、表現型的には機能性エフェクターＴ細胞とは異なる。疲弊Ｔ細胞は、エフェクターサイトカイン／ケモカイン（例、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγ）の分化、増殖の減少、産生の減少を示す。従って、いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、ＰＤ１、ＬＡＧ３、またはそれらの組み合わせを包含する。さらなる実施態様において、バイオマーカーは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、またはそれらの組み合わせを包含する。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、疲弊Ｔ細胞のマーカーであり、サンプル中のバイオマーカーはバイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、疲弊Ｔ細胞のマーカーのレベルが低いことは、治療の有効性を示すものである。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を投与する前のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中のＰＤ１、ＬＡＧ３またはそれらの組み合わせのレベルが低いことは処理の有効性を示すものである。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーはバイオマーカーの参照となるレベルよりも低くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルと比べて、投与した後のサンプル中のＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＦＮγまたはそれらの組み合わせのレベルが高いことは治療の有効性を示すものである。

いくつかの態様において、バイオマーカーは非がん細胞での細胞傷害性のマーカーである。好中球は、炎症応答の最初の細胞成分として、および自然免疫の重要な成分として、感染に対する防御の第一線を表す。好中球減少症は、初期の感染症に対する炎症応答を鈍らせ、静菌の増殖および浸潤を可能とする。好中球減少症による合併症は、がん化学療法の主な線量制限傷害性を残したままであり、かなりの罹患率および死亡率と関連付けられる。従って、好中球のエクスビボ成熟は、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を用いて、血液がんを治療するのに、ならびに血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するのに有用であり得る。いくつかの実施態様において、バイオマーカーは好中球におけるイカロス発現である。特定の実施態様において、バイオマーカーは白血球で発現される。具体的な実施態様において、白血球細胞は骨髄細胞を含む。さらなる実施態様において、骨髄細胞は好中球を含む。さらにさらなる実施態様において、バイオマーカーはＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－の表現型を有する好中球を含む。

いくつかの実施態様において、バイオマーカーは、非がん細胞における細胞傷害性のマーカーであり、サンプル中のバイオマーカーは、該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。例えば、特定の実施態様において、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、好中球中で細胞傷害性のマーカーのレベルが低いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を調整するための情報となる。具体的な実施態様において、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、イカロスおよび／またはＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－の表現型を有する好中球のレベルが低いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を減らすための情報となる。しかしながら、サンプル中のバイオマーカーは、バイオマーカーの参照となるレベルよりも低くなくてもよいことが理解される。従って、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。例えば、いくつかの実施態様において、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、参照となるレベルは化合物を最初に投与した後のバイオマーカーのレベルであり、イカロスおよび／またはＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－の表現型を有する好中球のレベルが高いことは、血液がんの対象を治療するのに投与量または頻度を増やすための情報となる。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

様々な対象となるサンプルが試験サンプルの比較のために使用され得る。例として、非限定的な型の参照となるサンプルは、例えば、未処理のサンプル、治療計画の間のより早い時点で処理したサンプル、標準化の参照となるサンプル、または比較に適する他の任意のサンプルとすることができる。いくつかの実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは、治療用化合物を対象に投与する前に対象から得られた参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、ここで参照となるサンプルは該サンプルと同じ供給源から得られたものである。他の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは、血液がんでない、健康な対象から得られた参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、ここで参照となるサンプルは該サンプルと同じ供給源から得られたものである。さらにさらなる実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルは所定のバイオマーカーのレベルである。

当業者であれば、バイオマーカーのレベルの改変が、特定のバイオマーカー、ならびに比較のために使用される対象なるサンプルに応じて、異なる解釈を有するであろうことを理解するであろう。一例として、例えば、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のアポトーシスマーカーのバイオマーカーのレベルは、任意の治療用化合物を対象に投与する前の対象から由来の参照となるサンプルよりも高いかもしれない。バイオマーカーのレベルの増加は、治療が効果的であると示し得る。あるいはまた、例えば、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理した後のＣＲＢＮ結合タンパク質のバイオマーカーのレベルは、任意の治療用化合物を対象に投与する前の対象から由来の参照となるサンプルよりも低いかもしれない。かかる環境でのバイオマーカーのレベルの減少は、治療が効果的であると示し得る。

しかしながら、同じバイオマーカーが、異なる参照となるサンプルと比較した場合、同じサンプル中で異なるレベルを有し得る。例として、例えば、ＣＲＢＮ結合タンパク質のバイオマーカーのレベルは、参照となるサンプルが治療計画にて早期の時点で得られるが、同じ対象から由来の参照となるサンプルより高いかもしれず、バイオマーカーのレベルは任意の治療用化合物を対象に投与する前の対象から由来する参照となるサンプルよりもなお低いので、依然として治療の効能を示す。従って、バイオマーカーのレベルおよびバイオマーカーのレベルの意味は参照となるサンプルのその状況に依存するであろう。

かくして、いくつかの実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い。他の実施態様において、該サンプル中のバイオマーカーは該バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い。さらに別の実施態様において、バイオマーカーの検出は対象が応答的であることを示し得る。特定の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルに対してバイオマーカーのレベルが増加したことは、対象にて血液がんを治療するにおいて治療用化合物の効能を示すものである。他の実施態様において、参照となるバイオマーカーのレベルに対してバイオマーカーのレベルが減少したことは、対象にて血液がんを治療するにおいて治療用化合物の効能を示すものである。１の実施態様において、血液がんはＤＬＢＣＬである。もう一つ別の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。

バイオマーカーの検出は当業者の技術の範囲内である。例えば、特定の実施態様において、バイオマーカーのレベルの決定は、バイオマーカーのタンパク質レベルを決定することを含む。他の実施態様において、バイオマーカーのレベルの決定は、バイオマーカーのｍＲＮＡのレベルを決定することを含む。さらなる実施態様において、バイオマーカーのレベルの決定は、ＲＮＡレベルを決定するための代替マーカーとしてのバイオマーカーのｃＤＮＡを決定することを含む。アイオロス、イカロス、ＣＲＢＮ、ｃ－ＭＹＣ、ＩＲＦ４、ＺＦＰ９１、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＭＣＬ１、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ３、切断型カスパーゼ－３、切断型カスパーゼ－７、切断型ＰＡＲＰ、ＢＩＭ、ＤＤＸ５８、サルビビン、ＰＤ１、ＬＡＧ３、活性化Ｔ細胞関連サイトカイン、またはそれらの組み合わせなどのバイオマーカーのタンパク質レベルを検出および定量する方法について、本明細書で提供される例示的なアッセイは、ウェスタンブロット分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（例、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、および蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）などの免疫アッセイである。アイオロス、イカロス、ＺＦＰ９１、ＣＲＢＮ、ｃ－ＭＹＣ、ＩＲＦ４、活性化Ｔ細胞関連サイトカイン、ＣＤ１４２（組織因子）、ＣＤ６２Ｅ（Ｅ－セレクチン）、インターロイキン－８（ＩＬ８）、インターロイキン－２（ＩＬ２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ１７Ａ）、インターロイキン－１７Ｆ（ＩＬ１７Ｆ）、コラーゲン－Ｉ、コラーゲン－ＩＩＩ、ＰＡＩ－Ｉ、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ６９、免疫グロブリン（ＩｇＧ）腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、またはそれらの組み合わせなどのバイオマーカーのＲＮＡレベルを検出および定量する方法について、本明細書で提供される例示的なアッセイは、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、例えば、定量性ＲＴ－ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）、およびＲＮＡ－Ｓｅｑである。

バイオマーカーを検出するための上記の技法は限定されるものではなく、当業者であれば、本明細書で提供されるバイオマーカーを検出し、測定するために既知のいずれかの技法を用いることができると理解される。従って、本明細書で提供される実施態様の実施では、特記されない限り、当業者の技術範囲内にある、分子生物学、微生物学、および免疫学の従来技術を利用することとなる。かかる技法は文献にて十分に説明されている。参照に特に適したテキストの例には、以下の：Sambrookら、Molecular Cloning：A Laboratory Manual, 3版, Cold Spring Harbor Laboratory, New York（2001）；Ausubelら、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, MD（1999）；Glover編、DNA Cloning, IおよびII巻（1985）；Mullisら、Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1987, 51：263-273；PCR Technology（Stockton Press, NY, Erlich編, 1989）；Gaitら、Oligonucleotide Synthesis（1984）；Hames & Higgins編、Nucleic Acid Hybridization（1984）；Hames & Higgins編、Transcription and Translation（1984）；Freshney編、Animal Cell Culture：Immobilized Cells and Enzymes（IRL Press, 1986）；Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology（Academic Press, London）；Scopes, Protein Purification：Principles and Practice（Springer Verlag, N.Y., 2版 1987）；およびWeir & Blackwell編、Handbook of Experimental Immunology, I-IV巻（1986）が含まれる。

５.４治療および／または管理方法
本明細書では、血液がんを治療および／または管理する方法であって、治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法が提供される。

１の態様において、本明細書では、血液がんの対象において、血液がんを選択的に治療する方法であって、（ａ）血液がんの対象からサンプルを得；（ｂ）サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；（ｃ）（ｉ）サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または（ｉｉ）バイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと比べて改変されたレベルである場合に、該対象を治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断し；および（ｄ）治療的に効果的な量の治療用化合物を、該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断された対象に投与することを含み、ここで治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法が提供される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；あるいは２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは、非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

本明細書では、また、血液がんを治療する方法であって、（ａ）血液がんの対象から第１のサンプルを得；（ｂ）該第１のサンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；（ｃ）治療的に効果的な量の治療用化合物を該対象に投与し；（ｄ）治療した後に該対象から少なくとも１つのさらなるサンプルを得；および（ｅ）少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；その少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルが、第１のサンプルのバイオマーカーのレベルであるか、またはその近傍であるならば、その場合、もう一つ別の治療的に効果的な量の治療用化合物を該対象に投与することを含み、ここで、該治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法が提供される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

加えて、本明細書では、対象における血液がんの治療において、治療用化合物の有効性をモニター観察する方法であって、（ａ）治療用化合物を対象に投与し；（ｂ）該対象からサンプルを得；（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および（ｄ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを、参照となるバイオマーカーのレベルと比較し、ここでバイオマーカーのレベルの改変が対象における血液がんの治療での治療用化合物の有効性を示し；ここで治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法が提供される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

本明細書では、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定するか、または血液がんの対象またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法も提供される。いくつかの実施態様において、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定するか、または血液がんの対象またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、（ａ）該対象からサンプルを得；（ｂ）該治療用化合物を該サンプルに投与し；（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および（ｄ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと比べて改変されたレベルである場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断し；ここで治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法が提供される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

他の実施態様において、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定するか、または血液がんの対象またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、（ａ）治療用化合物を対象に投与し；（ｂ）該対象からサンプルを得；（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および（ｄ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと比べて改変されたレベルである場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断し；ここで治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩. いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む、方法が提供される。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

さらにさらなる実施態様において、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定するか、または血液がんの対象またはその疑いのある対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法であって、（ａ）該対象からサンプルを得；（ｂ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；（ｃ）（ｉ）サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または（ｉｉ）サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと比べて改変されたレベルである場合に、該対象を治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断し；該サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるバイオマーカーのレベルと比べて改変されたレベルである場合に、該対象を該治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものとして診断し；ここで治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法が提供される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はＤＬＢＣＬである。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

セクション５.３にて記載されるように、種々のバイオマーカーが本明細書にて提供される方法にて使用され得る。いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるバイオマーカーの検出またはレベルの改変は、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定する方法にて使用され得る。一例として、例えば、ＣＲＢＮの検出は、血液がんの対象は応答的である可能性が高いことを示し得る。例えば、ＣＲＢＮ結合タンパク質（例、ＩＫＡＲＯＳ、ＡＩＯＬＯＳ、ＺＦＰ９１）などのもう一つ別の例示的なバイオマーカーは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩での処理に応答して、未処理のサンプルと比べて減少し、例えば、治療用化合物に対して奏功的である可能性のある血液がんの対象を同定する方法にて、または血液がんの対象または該がんと疑われる対象の治療用化合物に対する奏功性を予測する方法にて使用され得る。他の実施態様において、本明細書で提供されるバイオマーカーの検出またはレベルの改変は、例えば、血液がんを治療する方法、または血液がんの患者にて血液がんを治療する際の治療用化合物の効能をモニター観察する方法にて使用され得る。一例として、式（Ｉ）の治療用化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、対象に投与され得、その処理された対象からのサンプル中のバイオマーカーのレベルを、任意の処理する前の同じ対象から由来の参照となるサンプルと比べることができる。例えば、アポトーシスタンパク質のバイオマーカーのレベルの増加は、該治療が対象の治療において効果的であると、顧問医を誘導することを示し得る。上記した例は例示であり、該バイオマーカーが本明細書で提供される方法で包括的に使用され得るものではないことが理解される。

５.５投与量または投与頻度を調整する方法
本明細書では、血液がんの対象を治療用化合物で治療するための投与量または投与頻度を調整する方法であって、（ａ）投与量の治療用化合物を対象に投与し；（ｂ）１または複数のサンプルを対象から異なる時点で得；（ｃ）１または複数のサンプル中のバイオマーカーのレベルをモニター観察し；および（ｄ）参照となるサンプル中のバイオマーカーの改変レベルに基づいて、その後の治療用化合物の対象への投与のための用量を調整し；ここで、治療用化合物が、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である、方法も提供される。特定の実施態様において、循環スケジュールは、バイオマーカーのレベルに基づいて決定される。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩；または２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩からなる群より選択される化合物を含む。特定の実施態様において、式（Ｉ）の治療用化合物は（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。いくつかの実施態様において、血液がんは非ホジキンリンパ腫を含む。具体的な実施態様において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。さらにさらなる実施態様において、ＤＬＢＣＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。他の実施態様において、血液がんはＣＬＬ／ＳＬＬである。さらにさらなる実施態様において、ＣＬＬ／ＳＬＬは従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である。

様々なバイオマーカーが、治療の投与の量または頻度を調整する必要があるかどうかを判断するのに使用され得る。特定の実施態様において、投与の量または頻度を調整する方法において使用されるバイオマーカーは、成熟好中球、および好中球中のイカロスタンパク質のレベルからなる群より選択され得る。例えば、好中球のエクスビボ成熟は、例えば、骨髄傷害性を評価するためのバイオマーカーとして使用され得る。特定の実施態様において、骨髄ＣＤ３４^＋細胞のエクスビボ培養物は、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩で処理する異なる投与計画に暴露することができ、例えば、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＭＳ関連のチロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３－Ｌ）、および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）を培養液に用いることで、骨髄分化が誘導され得る。式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩の有無での細胞分化は、細胞の異なる集団（例えば、造血幹細胞（ＨＳＣ、ＣＤ３４^＋／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^－）；段階Ｉ細胞（ＣＤ３４^＋／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^－）；段階ＩＩ細胞（ＣＤ１３４^－／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^－）；段階ＩＩＩ細胞（ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^＋）および段階ＩＶ細胞（ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^＋）細胞）にて、設定された時点で評価され得る。特定の実施態様において、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩に暴露した後の成熟好中球（段階ＩＶ細胞）の回復が、バイオマーカーとして機能し得る。

他の実施態様において、好中球のイカロスタンパク質のレベルは、投与計画および／または細胞傷害性を決定するためのバイオマーカーであり得る。本明細書で提供されるように、好中球中のイカロスのレベルは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩に暴露される間に減少し、薬物を除去した後に濃度依存的に回復することが判明した。後期好中球の成熟性の完全な回復は、イカロスのレベルの回復によって速やかに先行された。かくして、いくつかの実施態様において、好中球中のイカロスの分解および／またはイカロスの回復は、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩に対する応答についてのバイオマーカーであり、ならびに細胞傷害性についてのバイオマーカーでもあり得る。加えて、好中球中のイカロスタンパク質のレベルおよび／または好中球の成熟度は、サイクル計画を決定するためのバイオマーカーでもあり得る。一例として、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を投与した後のイカロスタンパク質のレベルが少なくとも約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上に回復することは、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩のその後の投与が行われる前に、バイオマーカーとして使用され得る。

血液がんの対象を治療用化合物で治療するための投与量または投与頻度を調整する方法にて用いるための上記されるバイオマーカーは限定されるものではなく、成熟好中球の量、段階、および／または生存率を示す他のバイオマーカーもバイオマーカーとして有用であり得ることが理解される。

５.６医薬組成物および投与経路
本明細書で提供されるように、セクション５.２にて記載されるいずれかの化合物などの、式（Ｉ）の化合物あるいはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、互変異性体またはラセミ混合物は、対象に、カプセル、マイクロカプセル、錠剤、顆粒、散剤、トローチ、ピル、坐剤、注射液、懸濁液、シロップ、パッチ、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、スプレー、液剤およびエマルジョンなどの従来の形態の製剤にて経口的に、局所的に、または非経口的に投与され得る。適切な製剤は、賦形剤（例、シュークロース、澱粉、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム）、結合剤（例、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アラビアガム、ポリエチレングリコール、シュークロースまたは澱粉）、崩壊剤（例、澱粉、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、重炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたはクエン酸カルシウム）、滑沢剤（例、ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルクまたはラウリル硫酸ナトリウム）、矯味矯臭剤（例、クエン酸、メントール、グリシンまたはオレンジ粉末）、保存剤（例、安息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）、安定剤（例、クエン酸、クエン酸ナトリウムまたは酢酸）、沈殿防止剤（例、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはステアリン酸アルミニウム）、分散剤（例、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、希釈剤（例、水）、およびベースワックス（例、ココアバター、白色ペトロラクタムまたはポリエチレングリコール）などの従来の有機または無機添加剤を用いて、一般的に利用される方法によって製造され得る。医薬組成物中の化合物の効果的な量は、経口および非経口投与の両方の単位投与量にて、所望の効果を発揮するであろうレベル；約０.００１ｍｇ／対象の体重ｋｇ～約１ｍｇ／対象の体重ｋｇとすることができる。

本明細書で提供される化合物は経口投与され得る。１の実施態様において、経口投与される場合、本明細書で提供される化合物は食事および水と一緒に投与される。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される化合物は水または果汁（例、リンゴ果汁またはオレンジ果汁）に分散され、溶液または懸濁液として経口投与される。

本明細書で提供される化合物はまた、皮内、筋肉内、腹腔内、皮膚を通して、静脈内、皮下、経鼻、表皮内、舌下、脳内、膣内、経皮、直腸内、粘膜、吸入により、あるいは耳、鼻、眼または皮膚に局所的に投与され得る。投与方法は医療従事者の裁量に委ねられ、病状の部位にいくらかは依存し得る。

１の実施態様において、本明細書で提供されるのは、付加的な担体、賦形剤またはビヒクルなしで本明細書で提供される化合物を含有するカプセルである。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供されるのは、効果的な量の本明細書で提供される化合物および医薬的に許容される担体またはビヒクルを含む組成物であって、ここで医薬的に許容される担体またはビヒクルは賦形剤、希釈剤またはそれらの混合物を含むことができる、組成物である。１の実施態様において、組成物は医薬組成物である。

組成物は、錠剤、咀嚼錠、カプセル、液剤、非経口溶液、トローチ、坐剤および懸濁液等の形態とすることができる。組成物は、一日量を、または一日量の都合のよい分量を、単一の錠剤またはカプセルと、あるいは都合のよい容量の液体とすることができる、投与単位にて含有するように処方され得る。１の実施態様において、液剤は水溶性の塩から製造される。一般に、すべての組成物は医薬化学における既知の方法に従って製造される。カプセルは、本明細書で提供される化合物を適切な担体または希釈剤と混合し、適量の混合物をカプセルに充填することによって製造され得る。通常の担体および希釈剤には、限定されないが、多くの種類の澱粉、粉末セルロース、特に結晶性および微結晶性セルロースなどの不活性な粉末物質、フルクトース、マンニトールおよびシュークロースなどの糖類、穀物および同様の食用粉末が含まれる。

錠剤は、直接圧縮、湿式造粒または乾式造粒によって製造され得る。それらの製剤には、通常、化合物の他に希釈剤、結合剤、滑沢剤および崩壊剤が配合される。典型的な希釈剤には、例えば、種々の型の澱粉、ラクトース、マンニトール、カオリン、リン酸または硫酸カルシウム、塩化ナトリウムなどの無機塩および粉末糖が含まれる。粉末状のセルロース誘導体も有用である。典型的な錠剤結合剤は、澱粉、ゼラチンおよびラクトース、フルクトース、グルコース等などの糖類などの物質である。アカシア、アルギン酸塩、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等を含む、天然および合成ガムも便利である。ポリエチレングリコール、エチルセルロースおよびワックスも結合剤として供することができる。

錠剤製剤では、錠剤およびパンチがダイにて粘着するのを防止するために、滑沢剤が必要とされるかもしれない。滑沢剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびカルシウム、ステアリン酸、および硬化植物油などの滑りやすい固体から選択され得る。錠剤用崩壊剤は、水に濡れると膨潤して錠剤を破壊し、化合物を放出させる物質である。それらは、澱粉、クレイ、セルロース、アルギンおよびガムを包含する。より詳細には、トウモロコシおよびイモ澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、木材セルロース、粉末天然海綿体、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グアーガム、シトラスパルプ、およびカルボキシメチルセルロースが、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムも同様に、使用され得る。錠剤は、フレーバーおよびシーラントとして糖を用いて、あるいは錠剤の溶解特性を修飾するのにフィルム形成保護剤を用いてコーティングされ得る。該組成物はまた、例えば、マンニトールなどの物質を処方に用いることにより、咀嚼錠として製剤化され得る。

本明細書で提供される化合物を坐剤として投与することが望ましい場合、典型的な基剤が使用され得る。ココアバターは伝統的な坐剤用基剤であり、これはその融点をわずかに上げるためにワックスを添加することにより修飾され得る。特に、様々な分子量のポリエチレングリコールを含む、水混和性坐剤用基剤が広く使用される。

本明細書で提供される化合物の効果は、適切に製剤化することにより遅延または延長させることができる。例えば、本明細書で提供される化合物のゆっくりと可溶化するペレットを製造し、錠剤またはカプセルに配合することができ、あるいは徐放性移植可能装置として製造され得る。この技法はまた、数種の異なる溶解速度のペレットを製造し、カプセルに該ペレットの混合物を充填することを含む。錠剤またはカプセルは予測可能な期間にわたって溶解に抗うフィルムでコーティングされ得る。非経口用製剤でさえ、本明細書で提供される化合物を血清中にゆっくりと分散させる油性または乳化ビヒクルにそれを溶解または懸濁させることにより、長期作用型とすることができる。

本明細書で提供される方法は、患者の年齢に関わりなく、患者を治療することを包含する。いくつかの実施態様において、対象は１８歳以上である。他の実施態様において、対象は１８、２５、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、または７０歳より上である。他の実施態様において、対象は６５歳未満である。他の実施態様において、対象は６５歳より上である。

治療されるべき疾患の状態および対象の状態に応じて、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、経口、非経口（例、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＣＩＶ、睾丸内注射または注入、皮下注射、または移植）、吸入、鼻、膣、直腸、舌下、または局所（例、経皮または局所）の投与経路によって投与されてもよい。本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、単独で、または各投与経路に適する、医薬的に許容される賦形剤、担体、アジュバントおよびビヒクルと一緒に、適切な投与単位にて処方され得る。

１の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、経口的に投与される。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、非経口的に投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、化合物１、化合物２または化合物３の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、静脈内に投与される。

本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、例えば、単回ボーラス注射、または経口カプセル、錠剤またはピルなどの単一用量として；例えば、経時的な連続注入または経時的に分割したボーラス投与などの経時的投与として送達され得る。本明細書にて記載される化合物は、必要に応じて、例えば、患者が安定した疾患または退行を経験するまで、あるいは患者が疾患の進行もしくは許容できない傷害性を経験するまで、繰り返して投与され得る。

本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、１日１回（ＱＤ）投与されるか、あるいは日用量を１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）および１日４回（ＱＩＤ）などの複数回に分割され得る。加えて、投与は連続的（すなわち、連日での日々または毎日）、間欠的、例えば、周期的（すなわち、薬物のない休息を数日間、数週間または数か月にわたって含む）であり得る。本明細書で使用される場合の「毎日」なる語は、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩などの治療用化合物が、一日に１回または複数回、例えば、一定期間にわたって投与されることを意味するものとする。「連続的」なる語は、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩などの治療用化合物が、少なくとも７日間～５２週間の中断のない期間にわたって毎日投与されることを意味するものとする。本明細書で使用される場合の「断続的」または「間欠的」なる語は、規則的または不規則のいずれかの間隔で停止と開始を行うことを意味するものとする。例えば、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩の間欠的投与は、週に１～６日間の投与、サイクルでの投与（例えば、２～８週間連続して毎日投与し、次に最大１週間にわたって投与しない休息期間を設ける）、または隔日での投与である。本明細書で使用される場合の「サイクル」なる語は、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩などの治療用化合物が、毎日または連続的に投与されるが、休息期間を設けて投与されることを意味するものとする。

いくつかの実施態様において、投与の頻度は、およその日用量からおよその月用量までの範囲にある。１の実施態様において、投与は１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、隔日に１回、１週間に２回、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回である。１の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、１日に１回投与される。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、１日に２回投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、１日に３回投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される化合物１、化合物２または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、１日に４回投与される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法は、治療的に効果的な量の化合物１、化合物２または化合物３を、１または複数の７日間の治療サイクルにて投与することを含む。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される方法は、治療的に効果的な量の化合物１、化合物２または化合物３を、７日間のサイクルの初日～５日目まで投与することを含む。１の実施態様において、化合物１、化合物２または化合物３は、１日１回を５日間、つづいて２日間の休息を設けて投与される。もう一つ別の実施態様において、本明細書で提供される方法は、治療的に効果的な量の化合物１、化合物２または化合物３を、２８日間のサイクルの初日～５日目、８～１２日目、１５～１９日目、および２２～２６日目まで投与することを含む。

１の実施態様において、血液がんは慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）であり、その治療は治療的に効果的な量の第２の活性剤を１または複数の治療サイクルで投与することを含む。１の実施態様において、第２の活性剤は７日毎に２回投与される。１の実施態様において、第２の活性剤は１週間毎に１回投与される。１の実施態様において、第２の活性剤は４週間毎に１回投与される。１の実施態様において、第２の活性剤は最初の２８日間のサイクルにて初日、２日目、８日目、および１５日目に投与され、２回目～６回目の２８日間のサイクルにて初日に投与される。

本明細書で提供される任意の治療サイクルは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０またはそれ以上のサイクルで繰り返され得る。特定の場合では、本明細書にて記載される場合の治療サイクルは、１～約２４回のサイクル、約２～約１６回のサイクル、または約２～約４回のサイクルを含む。特定の場合には、本明細書にて記載される治療サイクルは、１～約４回のサイクルを含む。いくつかの実施態様において、治療的に効果的な量の化合物１、化合物２または化合物３、および／または第２の活性剤を、２８日間のサイクルにて１～２４回のサイクル（例えば、約２年間）で投与する。特定の場合には、サイクル療法は、サイクルの数に限定されず、疾患の進行まで該療法は継続される。サイクルは、特定の場合には、本明細書に記載の投与期間および／または休息期間の期間を変更することを含み得る。

５.７第２の活性剤
式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、本明細書で提供される方法および組成物において、他の薬学的に活性な化合物（「第２の活性剤」）と組み合わせることができる。特定の組み合わせは、特定の型の疾患または障害、ならびにかかる疾患または障害に付随する症状および徴候の治療において相乗的に作用する可能性がある。式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩は、特定の第２の活性剤に付随する副作用を緩和するように作用することもでき、またその逆もある。

１または複数の第２の活性成分または剤は本明細書で提供される方法および組成物にて使用され得る。第２の活性剤は、大型分子（例、タンパク質）または小型分子（例、合成無機分子、有機金属分子、または有機分子）であり得る。本願と同日付けで出願された、米国特許出願番号１６／３９０,８１５、または米国仮特許出願の発明の名称「併用する置換４－アミノイソインドリン－１,３－ジオン化合物および第２の活性剤」（代理人整理番号：１４２４７－３９０－８８８）（その各々を出典明示により本明細書の一部とする）に記載される活性剤などの様々な活性剤が使用され得る。例示的な第２の活性剤には、限定されないが、ＨＤＡＣ阻害剤（例、パノビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、またはシタリノスタット）、ＢＣＬ２阻害剤（例、ベネトクラクス）、ＢＴＫ阻害剤（例、イブルチニブまたはアカラブルチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例、エベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例、イデラリシブ）、ＰＫＣβ阻害剤（例、エンザスタウリン）、ＳＹＫ阻害剤（例、フォスタマチニブ）、ＪＡＫ２阻害剤（例、フェドラチニブ、パクリチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、またはモメロチニブ）、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例、アリセルチブ）、ＥＺＨ２阻害剤（例、タゼメトスタット、ＧＳＫ１２６、ＣＰＩ－１２０５、３－デアザネプラノシンＡ、ＥＰＺ００５６８７、ＥＩ１、ＵＮＣ１９９９、またはシネファンギン）、ＢＥＴ阻害剤（例、ビラブレシブまたは４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン）、低メチル化剤（例、５－アザシチジンまたはデシタビン）、化学治療剤（例、ベンダムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、メトトレキサート、シタラビン、ビンクリスチン、イホスファミド、メルファラン、オキサリプラチン、またはデキサメタゾン）、またはエピジェネティック化合物（例、ピノメトスタットなどのＤＯＴ１Ｌ阻害剤、Ｃ６４６などのＨＡＴ阻害剤、ＯＩＣＲ－９４２９などのＷＤＲ５阻害剤、ＧＳＫ３４８４８６２などのＤＮＭＴ１選択的阻害剤、化合物ＣまたはセクリデムスタットなどのＬＳＤ－１阻害剤、ＵＮＣ０６３１などのＧ９Ａ阻害剤、ＧＳＫ３３２６５９５などのＰＲＭＴ５阻害剤、ＢＲＤ阻害剤（例、ＬＰ９９などのＢＲＤ９／７阻害剤）、Ａ－１９６などのＳＵＶ４２０Ｈ１／Ｈ２阻害剤、またはＥＺＭ２３０２などのＣＡＲＭ１阻害剤）が含まれる。

本明細書に記載の方法のいくつかの実施態様において、該方法はさらに、１または複数のリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、エトポシド、ベンダムスチン（トレアンダ）、レナリドミド、またはゲムシタビンを投与することを含む。本明細書に記載の方法のいくつかの実施態様において、該治療はさらに、１または複数の幹細胞移植、ベンダムスチン（トレアンダ）＋リツキシマブ、リツキシマブ、レナリドミド＋リツキシマブ、またはゲムシタビンをベースとする組み合わせでの治療を包含する。特定の実施態様において、第２の活性剤は、米国仮特許出願６２／８３３,４３２にて提供されるように、リツキシマブである。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤は、パノビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、またはシタリノスタット、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤は、パノビノスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はパノビノスタットである。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はパノビノスタットの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤は乳酸パノビノスタットである。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はパノビノスタット・一乳酸塩である。パノビノスタットの化学名は（２Ｅ）－Ｎ－ヒドロキシ－３－［４－（｛［２－（２－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）エチル］アミノ｝メチル）フェニル］アクリルアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ロミデプシン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はロミデプシンである。ロミデプシンの化学名は、（１Ｓ,４Ｓ,７Ｚ,１０Ｓ,１６Ｅ,２１Ｒ）－７－エチリデン－４,２１－ビス（１－メチルエチル）－２－オキサ－１２,１３－ジチア－５,８,２０,２３－テトラアザビシクロ［８.７.６］トリコス－１６－エン－３,６,９,１９,２２－ペントンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ボリノスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はボリノスタットである。ボリノスタットの化学名はＮ－ヒドロキシ－Ｎ’－フェニルオクタンジアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６阻害剤である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ６阻害剤はシタリノスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＤＡＣ６阻害剤はシタリノスタットである。シタリノスタット（ＡＣＹ－２４１としても知られている）の化学名は２－（（２－クロロフェニル）（フェニル）アミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ２）阻害剤である。１の実施態様において、ＢＣＬ２阻害剤はベネトクラクス、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＣＬ２阻害剤はベネトクラクスである。ベネトクラクスの化学名は４－（４－｛［２－（４－クロロフェニル）－４,４－ジメチルシクロヘキサ－１－エン－１－イル］メチル｝ピペラジン－１－イル）－Ｎ－（｛３－ニトロ－４－［（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）－２－（１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－５－イルオキシ）ベンズアミド）であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤である。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブ、またはアカラブルチニブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はイブルチニブである。イブルチニブの化学名は１－［（３Ｒ）－３－［４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３,４－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジニル］－２－プロペン－１－オンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、アカラブルチニブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＴＫ阻害剤はアカラブルチニブである。アカラブルチニブの化学名は（Ｓ）－４－（８－アミノ－３－（１－（ブタ－２－イノイル）ピロリジン－２－イル）イミダゾ［１,５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）ベンズアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤は哺乳動物のラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）阻害剤である。１の実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤はラパマイシンまたはそのアナログ（ラパログとも称される）.でもある。１の実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムス、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムスである。エベロリムスの化学名は４０－Ｏ－（２－ヒドロキシエチル）－ラパマイシンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤である。１の実施態様において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＰＩ３Ｋ阻害剤はイデラリシブである。イデラリシブの化学名は５－フルオロ－３－フェニル－２－［（１Ｓ）－１－（９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）プロピル］キナゾリン－４（３Ｈ）－オンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はタンパク質キナーゼＣベータ（ＰＫＣβまたはＰＫＣ－β）阻害剤である。１の実施態様において、ＰＫＣβ阻害剤はエンザスタウリン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＰＫＣβ阻害剤はエンザスタウリンである。１の実施態様において、ＰＫＣβ阻害剤はエンザスタウリンの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＰＫＣβ阻害剤はエンザスタウリンの塩酸塩である。１の実施態様において、ＰＫＣβ阻害剤はエンザスタウリンのビス塩酸塩である。エンザスタウリンの化学名は３－（１－メチルインドール－３－イル）－４－［１－［１－（ピリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル］インドール－３－イル］ピロール－２,５－ジオンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤は脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤. １の実施態様において、ＳＹＫ阻害剤はフォスタマチニブ、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＳＹＫ阻害剤はフォスタマチニブである。１の実施態様において、ＳＹＫ阻害剤はフォスタマチニブの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＳＹＫ阻害剤はフォスタマチニブ・二ナトリウム・六水和物である。フォスタマチニブの化学名はリン酸二水素（６－（（５－フルオロ－２－（（３,４,５－トリメトキシフェニル）アミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）－２,２－ジメチル－３－オキソ－２,３－ジヒドロ－４Ｈ－ピリド［３,２－ｂ］［１,４］オキサジン－４－イル）メチルであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）阻害剤である。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤は、フェドラチニブ、パクリチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、またはモメロチニブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はフェドラチニブ、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はフェドラチニブである。フェドラチニブの化学名はＮ－tert－ブチル－３－［（５－メチル－２－｛４－［２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ］アニリノ｝ピリミジン－４－イル）アミノ］ベンゼンスルホンアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤ハパクリチニブ、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤ハパクリチニブである。パクリチニブは構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はルキソリチニブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はルキソリチニブである。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はルキソリチニブの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＪＡＫ２阻害剤はリン酸ルキソリチニブである。ルキソリチニブの化学名は（Ｒ）－３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２,３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－３－シクロペンチルプロパンニトリルであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はオーロラＡキナーゼ阻害剤である。１の実施態様において、オーロラＡキナーゼ阻害剤は、アリセルチブ、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、オーロラＡキナーゼ阻害剤はアリセルチブである。アリセルチブの化学名は４－（（９－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－５Ｈ－ベンゾ［ｃ］ピリミド［４,５－ｅ］アゼピン－２－イル）アミノ）－２－メトキシ安息香酸であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）阻害剤である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤は、タゼメトスタット、ＧＳＫ１２６、ＣＰＩ－１２０５、３－デアザネプラノシンＡ（ＤＺＮｅｐ）、ＥＰＺ００５６８７、ＥＩ１、ＵＮＣ１９９９、またはシネファンギン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はタゼメトスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はタゼメトスタットである。タゼメトスタット（ＥＰＺ－６４３８としても知られている）の化学名はＮ－［（１,２－ジヒドロ－４,６－ジメチル－２－オキソ－３－ピリジニル）メチル］－５－［エチル（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）アミノ］－４－メチル－４’－（４－モルホリニルメチル）－［１,１’－ビフェニル］－３－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＧＳＫ１２６、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はＧＳＫ１２６（ＧＳＫ－２８１６１２６としても知られている）である。ＧＳＫ１２６の化学名は（Ｓ）－１－（sec－ブチル）－Ｎ－（（４,６－ジメチル－２－オキソ－１,２－ジヒドロピリジン－３－イル）メチル）－３－メチル－６－（６－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－３－イル）－１Ｈ－インドール－４－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＣＰＩ－１２０５、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はＣＰＩ－１２０５である。ＣＰＩ－１２０５の化学名は（Ｒ）－Ｎ－（（４－メトキシ－６－メチル－２－オキソ－１,２－ジヒドロピリジン－３－イル）メチル）－２－メチル－１－（１－（１－（２,２,２－トリフルオロエチル）ピペリジン－４－イル）エチル）－１Ｈ－インドール－３－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤は３－デアザネプラノシンＡである。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はＥＰＺ００５６８７である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はＥＩ１である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はＵＮＣ１９９９である。１の実施態様において、ＥＺＨ２阻害剤はシネファンギンである。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はブロモドメインおよびエクストラ末端モチーフタンパク質（ＢＥＴ）阻害剤である。１の実施態様において、ＢＥＴ阻害剤はビラブレシブまたは４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＢＥＴ阻害剤はビラブレシブ、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＥＴ阻害剤はビラブレシブである。ビラブレシブ（ＯＴＸ０１５またはＭＫ－８６２８としても知られている）の化学名は（Ｓ）－２－（４－（４－クロロフェニル）－２,３,９－トリメチル－６Ｈ－チエノ［３,２－ｆ］［１,２,４］トリアゾロ［４,３－ａ］［１,４］ジアゼピン－６－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）アセトアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＢＥＴ阻害剤は、４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オンであり、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＥＴ阻害剤は、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤は低メチル化剤である。１の実施態様において、低メチル化剤は５－アザシチジンまたはデシタビン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、低メチル化剤は５－アザシチジン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、低メチル化剤は５－アザシチジンである。５－アザシチジンの化学名は４－アミノ－ｌ－β－Ｄ－リボフラノシル－１,３,５－トリアジン－２（１Ｈ）－オンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、低メチル化剤はデシタビン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、低メチル化剤はデシタビンである。デシタビンの化学名は４－アミノ－１－（２－デオキシ－β－Ｄ－エリスロ－ペントフラノシル）－１,３,５－トリアジン－２（１Ｈ）－オンであり、構造式：
で示される。

特定の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はオビヌツズマブであり、血液がんはＣＬＬである。１の実施態様において、第２の活性剤には、治療的に効果的な量のオビヌツズマブを１または複数の治療サイクルで投与することが含まれる。１の実施態様において、オビヌツズマブは７日毎に２回投与される。１の実施態様において、オビヌツズマブは週毎に１回投与される。１の実施態様において、オビヌツズマブは４週毎に１回投与される。１の実施態様において、オビヌツズマブは、最初の２８日間のサイクルの１、２、８、および１５日目に投与され、第２～第６の２８日間のサイクルの初日に投与される。

１の実施態様において、オビヌツズマブは、最初の２８日間のサイクルの初日に約１００ｍｇの用量、最初の２８日間のサイクルの２日目に約９００ｍｇの用量、および最初の２８日間のサイクルの８日および１５日目の各々に約１０００ｍｇの用量で投与される。１の実施態様において、オビヌツズマブは最初の２８日間のサイクルの１日および２日目に合わせて約１０００ｍｇの用量で、および最初の２８日間のサイクルの８日および１５日目の各々に約１０００ｍｇの用量で投与される。１の実施態様において、オビヌツズマブは第２～第６の２８日間のサイクルの初日に約１０００ｍｇの用量で投与される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はオビヌツズマブであり、治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物を、本明細書で提供される第２の活性剤（例、ベネトクラクス）と組み合わせて、さらにはオビヌツズマブと組み合わせて、患者に投与することを含む。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＤＯＴ１Ｌ阻害剤. １の実施態様において、ＤＯＴ１Ｌ阻害剤はピノメトスタット、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＤＯＴ１Ｌ阻害剤はピノメトスタットである。ピノメトスタット（ＥＰＺ－５６７６としても知られている）の化学名は（２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ,５Ｒ）－２－（６－アミノ－９Ｈ－プリン－９－イル）－５－（（（（１ｒ,３ｓ）－３－（２－（５－（tert－ブチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）エチル）シクロブチル）（イソプロピル）アミノ）メチル）テトラヒドロフラン－３,４－ジオールであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）阻害剤である。１の実施態様において、ＨＡＴ阻害剤はＣ６４６、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＨＡＴ阻害剤はＣ６４６である。Ｃ６４６の化学名は４－（４－（（５－（４,５－ジメチル－２－ニトロフェニル）フラン－２－イル）メチレン）－３－メチル－５－オキソ－４,５－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）安息香酸であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＷＤ反復単位含有のタンパク質５（ＷＤＲ５）阻害剤である。１の実施態様において、ＷＤＲ５阻害剤はＯＩＣＲ－９４２９、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＷＤＲ５阻害剤はＯＩＣＲ－９４２９である。ＯＩＣＲ－９４２９の化学名はＮ－（４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－３’－（モルホリノメチル）－［１,１’－ビフェニル］－３－イル）－６－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－１,６－ジヒドロピリジン－３－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ１（ＤＮＭＴ１）阻害剤である。１の実施態様において、ＤＮＭＴ１阻害剤はＤＮＭＴ１選択的阻害剤である。１の実施態様において、ＤＮＭＴ１選択的阻害剤はＧＳＫ３４８４８６２、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＤＮＭＴ１選択的阻害剤はＧＳＫ３４８４８６２である。ＧＳＫ３４８４８６２（ＧＳＫＭＩ－７１４としても知られている）の化学名は（Ｒ）－２－（（３,５－ジシアノ－６－（ジメチルアミノ）－４－エチルピリジン－２－イル）チオ）－２－フェニルアセトアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はリジン特異的脱メチル化酵素１（ＬＳＤ－１）阻害剤である。１の実施態様において、ＬＤＳ－１阻害剤は化合物Ｃまたはセクリデムスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤は化合物Ｃ、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤は化合物Ｃである。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤は化合物Ｃの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤は化合物Ｃ・ベシル酸塩である。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤は化合物Ｃ・モノベシル酸塩である。化合物Ｃの化学名は４－（２－（４－アミノピペリジン－１－イル）－５－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－１－メチル－６－オキソ－１,６－ジヒドロピリミジン－４－イル）－２－フルオロベンゾニトリルであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤はセクリデムスタット、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤はセクリデムスタットである。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤はセクリデムスタットの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＬＳＤ－１阻害剤はセクリデムスタット・メシル酸塩である。セクリデムスタット（ＳＰ－２５７７としても知られている）の化学名は（Ｅ）－Ｎ’－（１－（５－クロロ－２－ヒドロキシフェニル）エチリデン）－３－（（４－メチルピペラジン－１－イル）スルホニル）ベンゾヒドラジドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＧ９Ａ（ヒストンＨ３メチルトランスフェラーゼの一つ）阻害剤である。１の実施態様において、Ｇ９Ａ阻害剤はＵＮＣ０６３１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、Ｇ９Ａ阻害剤はＵＮＣ０６３１である。ＵＮＣ０６３１の化学名はＮ－（１－（シクロヘキシルメチル）ピペリジン－４－イル）－２－（４－イソプロピル－１,４－ジアゼパン－１－イル）－６－メトキシ－７－（３－（ピペリジン－１－イル）プロポキシ）キナゾリン－４－アミンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）阻害剤である。１の実施態様において、ＰＲＭＴ５阻害剤はＧＳＫ３３２６５９５、またはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＰＲＭＴ５阻害剤はＧＳＫ３３２６５９５である。ＧＳＫ３３２６５９５（ＥＰＺ－０１５９３８としても知られている）の化学名は（Ｓ）－６－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（３－（３,４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）ピリミジン－４－カルボキシアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はブロモドメイン（ＢＲＤ）阻害剤である。１の実施態様において、ＢＲＤ阻害剤はＢＲＤ９／７阻害剤である。１の実施態様において、ＢＲＤ９／７阻害剤はＬＰ９９、またはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＢＲＤ９／７阻害剤はＬＰ９９である。ＬＰ９９の化学名はＮ－（（２Ｒ,３Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－１－（１,４－ジメチル－２－オキソ－１,２－ジヒドロキノリン－７－イル）－６－オキソピペリジン－３－イル）－２－メチルプロパン－１－スルホンアミドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤はＳＵＶ４２０Ｈ１／Ｈ２（ヒストンＨ４のリシン２０をメチル化する２つの相同酵素）阻害剤である。１の実施態様において、ＳＵＶ４２０Ｈ１／Ｈ２阻害剤はＡ－１９６、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＳＵＶ４２０Ｈ１／Ｈ２阻害剤はＡ－１９６である。Ａ－１９６の化学名は６,７－ジクロロ－Ｎ－シクロペンチル－４－（ピリジン－４－イル）フタラジン－１－アミンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤は、コアクチベーター関連アルギニンメチルトランスフェラーゼ１（ＣＡＲＭ１）阻害剤である。１の実施態様において、ＣＡＲＭ１阻害剤はＥＺＭ２３０２、またはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、ＣＡＲＭ１阻害剤はＥＺＭ２３０２である。ＥＺＭ２３０２の化学名はメチル（Ｒ）－２－（２－（２－クロロ－５－（２－ヒドロキシ－３－（メチルアミノ）プロポキシ）フェニル）－６－（３,５－ジメチルイソキサゾール－４－イル）－５－メチルピリミジン－４－イル）－２,７－ジアザスピロ［３.５］ノナン－７－カルボキシレートであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、本明細書で提供される方法にて使用される第２の活性剤は化学療法である。１の実施態様において、化学療法はベンダムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、メトトレキサート、シタラビン、ビンクリスチン、イホスファミド、メルファラン、オキサリプラチン、デキサメタゾンあるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、プロドラッグ、または医薬的に許容される塩である。

１の実施態様において、化学療法はベンダムスチン、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はベンダムスチンである。１の実施態様において、化学療法はベンダムスチンの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はベンダムスチン・塩酸塩である。１の実施態様において、化学療法はベンダムスチンの一塩酸塩である。ベンダムスチンの化学名は４－（５－（ビス（２－クロロエチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）ブタン酸であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はドキソルビシン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はドキソルビシンである。１の実施態様において、化学療法はドキソルビシンの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はドキソルビシン・塩酸塩である。１の実施態様において、化学療法はドキソルビシンの一塩酸塩である。ドキソルビシンは構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はエトポシド、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、プロドラッグ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はエトポシドである。エトポシドの化学名は４’－デメチルエピポドフィロトキシン９－［４,６－Ｏ－（Ｒ）－エチリデン－β－Ｄ－グルコピラノシド］であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はエトポシドのプロドラッグである。１の実施態様において、化学療法はエトポシドのエステルプロドラッグである。１の実施態様において、化学療法はリン酸エトポシドである。リン酸エトポシドの化学名は４’－デメチルエピポドフィロトキシン９－［４,６－Ｏ－（Ｒ）－エチリデン－β－Ｄ－グルコピラノシド］，４’－（リン酸二水素）であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はメトトレキサート、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はメトトレキサートである。１の実施態様において、化学療法はメトトレキサートの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はメトトレキサートナトリウムである。メトトレキサートの化学名は（４－（（（２,４－ジアミノプテリジン－６－イル）メチル）（メチル）アミノ）ベンゾイル）－Ｌ－グルタミン酸であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はシタラビン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はシタラビンである。シタラビンの化学名は４－アミノ－１－β－Ｄ－アラビノフラノシル－２（１Ｈ）ピリミジノンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はビンクリスチン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はビンクリスチンである。１の実施態様において、化学療法はビンクリスチンの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はビンクリスチン・硫酸塩である。１の実施態様において、化学療法はビンクリスチンの一硫酸塩である。ビンクリスチンは構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はイホスファミド、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はイホスファミドである。イホスファミドの化学名は３－（２－クロロエチル）－２－［（２－クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ－２Ｈ－１,３,２－オキシアザホスホリン２－オキシドであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はメルファラン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はメルファランである。１の実施態様において、化学療法はメルファランの医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はメルファラン・塩酸塩である。１の実施態様において、化学療法はメルファランの一塩酸塩である。メルファランの化学名は４－（ビス（２－クロロエチル）アミノ）－Ｌ－フェニルアラニンであり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はオキサリプラチン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はオキサリプラチンである。オキサリプラチンの化学名はシス－［（１Ｒ,２Ｒ）－１,２シクロヘキサンジアミン－Ｎ,Ｎ’］［オキサラト（２－）－Ｏ,Ｏ’］白金であり、構造式：
で示される。

１の実施態様において、化学療法はデキサメタゾン、あるいはその立体異性体、立体異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩である。１の実施態様において、化学療法はデキサメタゾンである。デキサメタゾンの化学名は
（１１ｂ,１６ａ）－９－フルオロ－１１,１７,２１－トリヒドロキシ－１６－メチルプレグナ－１,４－ジエン－３,２０－ジオンであり、構造式：
で示される。

特定の実施態様において、第２の治療剤は、式（Ｉ）の化合物の前に、後に、または同時に投与される。式（Ｉ）の化合物および第２の治療剤の患者への投与は、同じまたは異なる投与経路によって、同時にまたは連続して起こり得る。特定の第２の薬物または薬剤に対して採用される特定の投与経路の適合性は、第２の治療剤その物（例えば、血流に入る前に分解することなく、経口的にまたは局所的に投与され得るかどうか）および治療される対象に応じて変化するであろう。第２の薬物または薬剤または成分の特定の投与経路は当業者に公知である。例えば、The Merck Manual, 448（第17版, 1999）を参照のこと。

疾患またはその徴候の治療に適する上記の治療剤のいずれの組み合わせも投与され得る。かかる治療剤は、式（Ｉ）の化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩と、いずれの組み合わせでも、同時にまたは別個の治療コースとして投与され得る。

本明細書で使用される場合の「組み合わせて」なる語は、疾患または障害の患者に治療剤（例えば、予防剤および／または治療剤）が投与される順番を制限するものではない。１の実施態様において、第１の療法（例えば、本明細書で提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩などの予防剤または治療剤）は、第２の療法（例えば、本明細書で提供される第２の活性剤）を投与する前に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前に）投与される。１の実施態様において、第１の療法（例えば、本明細書で提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩）は、第２の療法（例えば、明細書で提供される第２の活性剤）の投与と同時に投与される。１の実施態様において、第１の療法（例えば、本明細書で提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩などの予防剤または治療剤）は、第２の療法（例えば、本明細書で提供される第２の活性剤）を投与した後に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後に）投与される。

化合物１、化合物２、または化合物３、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩、ならびに本明細書で提供される第２の活性剤の患者への投与は、同じまたは異なる投与経路によって同時にまたは連続して起こり得る。特定の活性剤に採用される特定の投与経路の適合性は、活性剤その物（例えば、血流に入る前に分解することなく、経口的に投与され得るかどうか）に応じて変化するであろう。

本発明の特定の実施態様は次の限定を意味しない実施例によって説明される。上記の詳細な記載および後記する実施例は、単なる例示であって、発明の内容の範囲を制限するものとして捉えられるものではないと理解される。開示された実施態様に対する様々な変更および修飾は当業者に明らかであろう。かかる変更および修飾（本明細書で提供される化合構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤および／または使用方法に関するものを含むが、これらに限定されない）は、その精神および範囲を逸脱することなく、行われ得る。本明細書にて引用される米国特許および刊行物は出典明示により組み込まれる。

６．実施例
以下の実施例は、特に詳細に記載される場合を除き、当業者に周知であり、慣用的である、標準的な技法を用いて実施される。実施例は単に説明的であることを意図とする。

上記の実施態様は単に例示的であることを意図とし、当業者であれば、特定の化合物、材料、および操作の多数の均等物を認識するか、あるいは慣用的な実験を用いるだけで確認するであろう。これらの均等物はすべて、発明の範囲内であると考えられ、添付した特許請求の範囲に含まれるであろう。

実施例１：２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物３）の合成
４－（（４－（クロロメチル）－２－フルオロベンジル）アミノ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドリン－１,３－ジオン（２１５ｍｇ、０.５００ミリモル）（本明細書で提供されるように製造される）および４－（アゼチジン－３－イル）モルホリン・塩酸塩（１０７ｍｇ、０.６００ミリモル）の乾燥ＤＭＳＯ（１.７ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（２６２μＬ、１.５０ミリモル）を加え、該混合物を外界温度で４８時間撹拌した。反応混合物をＤＭＳＯ中２０％ギ酸（２.５ｍＬ）で希釈し、膜シリンジフィルター（０.４５μｍナイロン）を通して濾過した。該溶液を標準的な方法を用いて精製し、２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（１７３ｍｇ、収率６４.６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３６.２［Ｍ＋Ｈ］^＋

実施例２：（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物１）の合成

（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン
（Ｓ）－４－アミノ－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドリン－１,３－ジオン（５.００ｇ、１８.３ミリモル）および２－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド（２.８２ｇ、１８.３０ミリモル）の２：１ジオキサン－ＭｅＯＨ（７５ｍＬ）中懸濁液を０℃に冷却し、Ｂ_１０Ｈ_１４（４.９２ｇ、４０.３ミリモル）を５分間にわたって少しづつ添加した。反応フラスコにセプタムおよびニードルベント（圧力）を取り付け、１０分間にわたって激しく撹拌した。該混合物を外界温度に到達させ、３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０－１０％ＭｅＯＨ－ＤＣＭ）に付して精製し、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（４.２３ｇ、５６％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１１.８［Ｍ＋Ｈ］^＋

（Ｓ）－４－（（４－（クロロメチル）－２－フルオロベンジル）アミノ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドリン－１,３－ジオン

（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（０.７２７ｇ、１.７７ミリモル）の乾燥ＮＭＰ（６ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（０.２７５ｍＬ、３.３５ミリモル）およびＤＩＥＡ（０.６１７ｍＬ、３.５３ミリモル）を連続して添加した。反応混合物を外界温度に到達させ、１８時間撹拌した。該反応混合物を、激しく混合しながら、０℃に冷却したＨ_２Ｏ（６０ｍＬ）に、ゆっくりと添加した。得られた懸濁液を濾過し、固体を集め、Ｈ_２ＯおよびＥｔ_２Ｏで洗浄した。該固体をＥｔＯＡｃに溶かし、その溶液をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して（Ｓ）－４－（（４－（クロロメチル）－２－フルオロベンジル）アミノ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドリン－１,３－ジオン（０.６００ｇ、７９％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４３０.０［Ｍ＋Ｈ］^＋

（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン

（Ｓ）－４－（（４－（クロロメチル）－２－フルオロベンジル）アミノ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドリン－１,３－ジオン（３００ｍｇ、０.６９８ミリモル）の乾燥ＤＭＳＯ（１.０ｍＬ）中溶液に、４－（アゼチジン－３－イル）モルホリン・塩酸塩（１２５ｍｇ、０.６９８ミリモル）およびＤＩＥＡ（０.１２２ｍＬ、０.６９８ミリモル）を添加した。反応混合物を外界温度で１８時間撹拌し、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）で希釈した。該溶液をキラル逆相クロマトグラフィーに付して精製し、（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（８９ｍｇ、２４％、９７％ｅｅ）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３６.２［Ｍ＋Ｈ］^＋

実施例３：（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（化合物２）の合成
加えて、実施例２に記載のキラル逆相クロマトグラフィーに付し、（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン（１６ｍｇ、９７％ｅｅ）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３５.６［Ｍ＋Ｈ］^＋

実施例４：化合物１は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の細胞株において、アポトーシスを誘発し、増殖を抑制した
化合物１の活性をＤＬＢＣＬの２３種の細胞株のパネルで評価した。該ＤＬＢＣＬパネルは、活性化Ｂ細胞（ＡＢＣ）亜型として分類される７種の細胞株と、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）亜型として分類される１３種の細胞株と、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）として分類される３種の細胞株を包含する。加えて、これらの細胞株の多くは、同様の細胞遺伝学的特徴（ＭＹＣおよび／またはＢＣＬ２または／およびＢＣＬ６の同時再構成）および高リスクのＤＬＢＣＬ患者にて観察される分子的特徴を示した。かくして、１１種の細胞株は、ＭＹＣおよびＢＣＬ２の免疫グロブリン（ＩＧ）重鎖遺伝子座への遺伝子再構成に、ならびにＢＣＬ６に影響を及ぼすさらなる再構成に相当する、
ｔ（８；１４）（ｑ２４；ｑ３２）および／またはｔ（１４；１８）（ｑ３２；ｑ２１.３）を有する（表１）。ＭＹＣ、ＢＣＬ６、またはＢＣＬ２のＩＧ遺伝子座への転座は、通常、構成的に活性なＩＧプロモーターによって活性な転写が駆動されることにより、高レベルのｍＲＮＡおよびタンパク質をもたらすに至る。従って、これらの遺伝子のタンパク質のレベルをウェスタンブロットによってモニター観察し、評価したすべての細胞株にてＢＣＬ２、ＭＹＣ、および／またはＢＣＬ６の過剰発現を確認した（図１、パネルＡ）。ＣＲＢＮタンパク質および既知の基質、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の発現も評価した（図１、パネルＢおよびＣ）。

表１：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の細胞株の特徴
ＡＢＣ＝活性化Ｂ細胞；ＤＬＢＣＬ＝びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；ＧＣＢ＝胚中心Ｂ細胞；ＰＭＢＬ＝原発縦隔Ｂ細胞リンパ腫；＋ＡＭＰ＝遺伝子増幅；ＮＤ＝染色体再構成は検出されず

表２：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の細胞株における化合物１の抗増殖活性およびアポトーシス効果
ＡＵＣ＝曲線下面積；ＩＣ_５０＝５０％阻害剤濃度；Ｅｍａｘ＝達成される最大効果；ＮＡ＝達成されず

一連の細胞株を化合物の用量を増やして５日間処理し、その時点でフローサイトメトリーを用いる７－ＡＡＤ排除およびアネキシンＶ染色によって、生存細胞の数を測定し、アポトーシスの量を決定した。表２は、評価した２３種のうち１８種の株が、処理した５日後にインビトロにて化合物１に対してＩＣ_５０値が０.００１～０.４μＭと、高い感受性があったことを示す。ＡＢＣ、ＧＣＢ、およびＰＭＢＬ亜型は化合物１に対して感受的であったため、全体として、化合物１に対する感受性は起源細胞（ＣＯＯ）とは独立するものであった（表２）。加えて、化合物１は、ＭＹＣ、ＢＣＬ２、およびＢＣＬ６の染色体転座を有する株にて、および／またはこれらの遺伝子について高いタンパク質発現レベルを有する株にて強力な抗増殖活性を示し、このことは、化合物１の、一連のＤＬＢＣＬ亜型にわたる広い活性の可能性を示唆した（図１；表２）。

化合物１によって誘発される、一連のＤＬＢＣＬ細胞株を通しての生存細胞の喪失を示す用量応答曲線は、３つの応答のカテゴリーを画定した（表２）。１０種の細胞株は、処理後に残存する生存細胞が６％未満（Ｅ_ｍａｘ）で、化合物１に対して高い感受性を示し；１０種の細胞株は１５％～５５％の細胞生存率での中程度の感受性を示し；および３種の細胞株は化合物１に対して限定的または応答がなかった（表２）。化合物１の抗増殖性作用をさらに特徴付けるために、アポトーシスの指標として、アネキシンＶおよび７－ＡＡＤ染色を測定した。細胞増殖アッセイにおいて化合物１に対して感受的であると同定されたのと同じ細胞株にて、アポトーシスの劇的な誘発が観察された（表２）。

結果は、化合物１の抗増殖性作用が基線のセレブロン発現の絶対レベルと相関しないことを、さらに示した。数種の細胞株において、セレブロンタンパク質の発現レベルがたとえ異なっていたとしても、細胞増殖の阻害は同じような大きさであった（図１、パネルＢおよびＣ）。

総合すると、これらの結果は、アネキシンＶおよび７－ＡＡＤ染色がアポトーシスの指標として測定され得ること、およびこれらのマーカーが化合物１の活性と相関することを示す。

実施例５：化合物１は薬物耐性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株において増殖を阻害し、アポトーシスを誘発した
化合物１が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療するのに臨床にて使用される治療剤に対して耐性である、その細胞株において試験された。この目的のために、化合物１に対する感受性または耐性のパターンを、ドキソルビシン、ベネトクラクス、およびイブルチニブ（ＤＬＢＣＬにおいて既知の活性を有する３種の薬物）と比較した。化合物１の活性をドキソルビシンに対する耐性を獲得した細胞株においても評価した。

始めに、化合物１の活性を、２３種の同じ一連の細胞株（表１）を、ドキソルビシン、ベネトクラクス、およびイブルチニブに暴露することにより、ＤＬＢＣＬの治療にて現在使用されている薬物の活性と比較した。ほとんどの細胞株は、化合物１、ドキソルビシン、イブルチニブ、およびベネトクラクスに対してはっきりと区別できる応答パターンを示した（表３）。すべてのＤＬＢＣＬ細胞株は、化合物１に対して非感受的である３種の細胞株を含め、ドキソルビシンに対して強い感受性を示した（表３）。化合物１感受的細胞株のうち９種はベネトクラクスに対して耐性であり、化合物１感受的細胞株のうち１０種はイブルチニブに対して耐性であり、その一方で４種の化合物１強感受的細胞株（ＳＵ－ＤＨＬ－２、Ｆａｒａｇｅ、ＲＩＶＡ、ＷＳＵ－ＤＬＢＣＬ２）はベネトクラクスおよびイブルチニブの両方に対して耐性であった（表３）。このことは、化合物１が、ベネトクラクスおよびイブルチニブなどのＤＬＢＣＬの治療にて現在使用される薬物に耐性または難治性である細胞株において有効であったことを示すものである。

表３：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株での化合物１、ドキソルビシン、ベネトクラクスおよびイブルチニブのＩＣ_５０濃度

化合物１の活性をドキソルビシンに対して耐性を獲得した細胞株でも評価した（表４）。ドキソルビシン耐性細胞株（ＤｏｘｏＲ）は、親細胞株が相対的に高濃度のドキソルビシン（１μＭ）の存在下で増殖可能となるまで、インビトロにてドキソルビシンの濃度を上げながら長期間（約９～１８ヶ月）にわたって該細胞株を培養することにより作製された。親細胞を、処理することなく、同じ期間（約９～１８ヶ月）にわたって培養を維持することにより、適合する親（Ｍ－親）細胞を作製した。ドキソルビシンの、親細胞および対応する耐性細胞での、増殖阻害効果を、フローサイトメトリーを用いる７－ＡＡＤ排除およびアネキシンＶ染色により、生存細胞の数およびアポトーシスの程度を測定することにより評価した。ドキソルビシンについてのＩＣ_５０値および細胞増殖阻害曲線を表４に示す。ＤｏｘｏＲ細胞株では、ドキソルビシンの増殖阻害効果は、適合する親細胞でのその効果と比べて、大きく減少した。ＤｏｘｏＲ株におけるドキソルビシンのＩＣ_５０値のシフトは１００倍よりも大きかった（表４）。

ドキソルビシン耐性細胞株ｖｓ親細胞株の生存率に関する化合物１の効果を測定した（図２；表５）。耐性のあるＯＣＩ－Ｌｙ１０細胞では親細胞と比べて、化合物１に対して約２０倍大きな感受性が測定され（耐性細胞ではＩＣ_５０が０.３μＭであるのと比べて親細胞ではＩＣ_５０が６μＭ）、ドキソルビシン耐性のＳＵ－ＤＨＬ－４細胞株では、化合物１に対して＞１００倍大きな感受性が観察された（ＩＣ_５０が０.１μＭであるのに対して＞１０μＭである）。

ＯＣＩ－Ｌｙ１０およびＳＵ－ＤＨＬ－４の耐性細胞にて化合物１について観察される抗増殖活性の増加は、化合物１のアポトーシス誘発能の増大を伴うものであった。ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２細胞では、Ｍ－親細胞株（ＩＣ_５０＝０.０１μＭ）と比べてＤｏｘｏＲ株（ＩＣ_５０＝０.１μＭ）にて効能が低いにもかかわらず、化合物１は、Ｍ－親株におけるよりもＤｏｘｏＲ細胞株において、特により高い濃度（０.１～１μＭ）で（高Ｅ_ｍａｘにて反映されるように）より大きなアポトーシスを誘発した。Ｕ２９３２ドキソルビシン耐性細胞では、Ｍ－親細胞株と比べて、化合物１に対して２０倍低い感受性、ならびに低いアポトーシスの誘発が観察された（図２；表５）。

ウェスタンブロット実験（図３）は、化合物１の、ＳＵ－ＤＨＬ－４ドキソルビシン耐性細胞における、アポトーシス効果の増大が、この細胞株でのＢＣＬ２発現の喪失と相関していることを示した。これらの結果は、ＢＣＬ２発現が、薬物耐性細胞株にあることを含め、化合物１に対する応答のマーカーとして供し得ることを示す。

要約すれば、化合物１は特定の薬物耐性細胞株において有効であった。化合物１は、試験したすべてのドキソルビシン耐性細胞株において、用量依存的抗増殖応答および細胞死応答を示し、ドキソルビシンに対して耐性を獲得した後の、化合物１に対する交差耐性が一般的でない可能性のあることを示した。化合物１とベネトクラクスまたはイブルチニブとの間の交差耐性の欠如も実証された。さらには、アネキシンＶおよび７－ＡＡＤ染色、Ｂｃｌ－２のタンパク質発現などのアポトーシスのマーカーは、化合物１に対する奏功性を示すことができる。

表４：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫のドキソルビシン耐性細胞株および親細胞株におけるドキソルビシンの抗増殖活性
ＤｏｘｏＲ＝ドキソルビシン耐性株；ＩＣ_５０＝５０％阻害濃度；Ｍ－親株＝適合する親株

表５：ドキソルビシンに対して感受性および耐性のあるびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株における化合物１の抗増殖活性
ＤｏｘｏＲ＝ドキソルビシン耐性株；Ｅ_ｍａｘ＝ＤＭＳＯと比較した際の最大阻害応答；ＩＣ_５０＝５０％阻害濃度；Ｍ－親株＝適合する親株

実施例６：化合物１は、初代単培養および共培養系において、選択的抗炎症、免疫調節、および線維化およびマトリックスリモデリング活性を示した
化合物１の活性を、バイオマップシステム（BioMAP System）（DiscoveRx, Fremont, CA）を用い、器官（血管、免疫系、皮膚、肺）の複雑な組織および疾病生物学ならびに一般的な組織生物学をモデル化する、一連のヒト初代細胞ベースのアッセイにてプロファイリングした。

バイオマップシステムは、刺激および非刺激の制御条件下にある、１２のヒト初代単培養または共培養系からなる（図４、パネル４）。０.０１、０.１、１および１０μＭで試験した場合、化合物１には主要なバイオマーカー活性の変化が介在した。具体的には、化合物１についてのプロファイルは、単細胞（ＬＰＳ）およびＴ細胞依存性Ｂ細胞活性化応答（ＢＴ）に対する選択的な抗炎症および免疫調節のインパクトを反映したものであった。化合物１での処理は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および内皮細胞からなるＬＰＳ系において、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１ａ（ＩＬ－１ａ）、分泌型プロスタグランジンＥ２（ｓＰＧＥ２）、および分泌型腫瘍壊死因子アルファ（ｓＴＮＦα）の減少をもたらした。さらには、Ｂ細胞およびＰＢＭＣから構成されるＢＴ系においては、分泌型ＩｇＧ（ｓＩｇＧ）、分泌型インターロイキン１７Ａ（ｓＩＬ－１７Ａ）、分泌型インターロイキン１７Ｆ（ｓＩＬ－１７Ｆ）、およびｓＴＮＦαが減少するのに対して、分泌型インターロイキン２（ｓＩＬ－２）および分泌型インターロイキン６（ｓＩＬ－６）は増加した。加えて、化合物１は、線維症およびマトリックスリモデリング関連の生物学をモデル化した肺線維芽細胞からなる、ＭｙｏＦ系において、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ発現を強制的に阻害し、ならびにプラスミノーゲンアクチベータ阻害剤－１（ＰＡＩ－１）の発現をわずかに阻害することを示した。

結論として、バイオマップ・ディバーシティ・プラス（BioMAP Diversity PLUS）パネルでの化合物１のプロファイルは、該化合物が初代単培養および共培養システムにて抗炎症、免疫調節、および線維化およびマトリックスリモデリング活性を表すことを示した。さらには、このことは、ＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、およびＰＡＩ－１の発現が化合物１の治療に対して奏功的であるバイオマーカーとして供し得ることを示した。

実施例７：化合物１の抗増殖活性はセレブロンに依存する
セレブロンはＣＲＬ４ユビキチンＥ３リガーゼの基質受容体として働き、セレブロン調節（ＣＭ）化合物の結合は、イカロス、アイオロスおよびＺＦＰ９１などの重要な標的となる基質のリクルート、ユビキチン化、および破壊を誘発し、細胞効果を媒介する。

ＤＬＢＣＬ細胞株で示される化合物１の強い抗増殖活性が、セレブロンとの結合に依存するかどうかを測定するために、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集技術を用いてセレブロンの発現を消失させた。活性化Ｂ細胞（ＡＢＣ）およびＭＹＣ／ＢＣＬ２二元発現細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－２およびＲＩＶＡ、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）およびＭＹＣ／ＢＣＬ２二元ヒット細胞株（およびＢＣＬ６発現の）カルパス－４２２、ＳＵ－ＤＨＬ－１０、ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２、および原発縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）細胞株のファラゲ（Farage）に、ＣＡＳ９発現のレンチウイルス構築物を感染させて参照となるＣＡＳ９発現細胞を生成させた。Ｃａｓ９細胞は野生型セレブロン発現（ＣＲＢＮ^ＷＴ）を有した。

セレブロンのノックアウト細胞（ＣＲＢＮ^－／－）を生成するために、個々の参照となるＣＡＳ９細胞に、サブゲノム単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を発現する構築物を感染させた。ウェスタンブロット解析により、ハウスキーピングタンパク質であるβ－チューブリンのレベルと比べて、ＣＲＢＮ^－／－細胞中にセレブロンタンパク質が存在しないことが確認された。ＣＲＢＮ^ＷＴおよびＣＲＢＮ^－／－細胞を化合物１で濃度を増大させながら５日間にわたって処理した。結果は、参照となるＣＡＳ９を発現する細胞（ＣＲＢＮ^ＷＴ）が化合物１に対して感受的であり（ＩＣ_５０は２.５と４０ｎＭとの間にある；表６）、それに対してＣＲＢＮノックアウトは化合物１の抗増殖活性を遮断し（表６）、このことは化合物１のＤＬＢＣＬ細胞に対する抗増殖作用がセレブロン依存的であることを示す。これらの結果はＣＲＢＮが化合物１での処理に関するバイオマーカーとして供し得ることを示す。

表６：化合物１の、ＣＲＢＮ^ＷＴおよびＣＲＢＮ^－／－びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株における細胞増殖の効果
ＩＣ_５０＝５０％阻害阻害濃度；Ｅ_ｍａｘ＝達成可能な最大応答

実施例８：化合物１のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の処理は、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の迅速な喪失を惹起し、インビトロにてアポトーシスを誘発した。
化合物１の既知のセレブロン基質の細胞内分解に対する効果を、遺伝子操作した細胞株にて試験した。酵素断片相補性（ＥＦＣ）アッセイを用いて、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１のｅＰＬタグを付した標的タンパク質の基質を発現するＤＦ１５細胞株を、６ｐＭ～１０μＭの濃度範囲で、１、２、６、および２４時間での分解をモニター観察した。イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１タンパク質のレベルを測定して評価した（表７）。様々な濃度の化合物１で異なる時間処理した後、細胞内に残っているｅＰＬタグ付けの基質をルミネセンスプレートリーダーを用いて測定した。これらのアッセイにおいて、化合物１は、時間および濃度依存的にアイオロスの喪失（表７）、イカロスの喪失（表７）、およびＺＦＰ９１の喪失（表７）を誘発した。化合物１は、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の分解について、化合物を培養物に添加した１、２、６および２４時間後のすべての時点で高い効力（低ナノモルまたはナノモル以下のＥＣ_５０値（表７））を示した。しかしながら、化合物１は、処理の６時間後、１５ｎＭという低濃度で、３種の基質を分解し、最大の効果（Ｅ_ｍａｘ）を達成した（基質の残存率１％～１０％）。分解の動態は２４時間の時間経過にわたって変化せず、分解に対する最大の効果は最後の時点である２４時間まで持続された（表７）。

既知のセレブロン基質のタグ付き組換えタンパク質を用いる細胞をベースとする分解アッセイの結果は、化合物１がイカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の強力かつ効率的な「分解剤」であり（表７）、これらの基質が化合物１の活性を評価するための有用なバイオマーカーとして供することを示した。

表７：化合物１誘発の様々な時点での基質の分解に関する濃度応答曲線の解析
ＥＣ_５０＝半最大応答を付与する薬物の濃度；Ｅ_ｍａｘ＝達成可能な最大応答；ＺＦＰ９１＝ジンクフィンガータンパク質９１

実施例９：化合物１は、ＤＬＢＣＬ細胞株での内因性基質の分解をセレブロン依存的に促進し、アポトーシスを誘発した
化合物１が、ＤＬＢＣＬ細胞株での内因性基質の分解をセレブロン依存的に促進するかどうかを評価し、アポトーシスの誘発の潜在的機構を実証するために、時間および濃度応答研究を、活性化Ｂ細胞（ＡＢＣ）株、ＳＵ－ＤＨＬ－２^{ＣＲＢＮＷＴ}ＣＡＳ９対照細胞、およびセレブロンノックアウトＳＵ－ＤＨＬ２^{ＣＲＢＮ－／－}細胞にて化合物１を用いて行った。

化合物１の１ｎＭという低用量での処理は、ＳＵ－ＤＨＬ－２^{ＣＲＢＮＷＴ}細胞にて時間および濃度依存的に内因性イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１タンパク質の喪失をもたらしたが、ＳＵ－ＤＨＬ２^{ＣＲＢＮ－／－}細胞では喪失されず、そのことはＤＬＢＣＬにおいて化合物１誘発の内因性基質の分解にセレブロンが必要とされることを示す（図５、パネルＡ、パネルＢ、およびパネルＣ）。時間経過解析は、化合物１への暴露が、すべての濃度で処理した後の４時間で早くもアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の迅速な分解に至り、化合物１の１０および１００ｎＭ濃度への暴露が、処理の全工程を通して、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１タンパク質発現の完全な抑制をもたらすことを明らかにした。これらの２つの濃度で、セレブロン基質の強い抑制と同時に、化合物１の処理は、インターフェロン刺激性遺伝子ＩＲＦ７およびＩＦＩＴ３を誘発し、ＭＹＣおよびＩＲＦ４の発現を減らし、処理した２４時間後に早くも、アポトーシスマーカー［切断型カスパーゼ３と７および切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）］の発現を減らした（図５、パネルＡおよびＢ）。しかしながら、化合物１は、ＳＵ－ＤＨＬ－２^{ＣＲＢＮ－／－}細胞にて活性を有さず、そのことはＤＬＢＣＬでの化合物１によるアポトーシスの誘発にはセレブロンが必要であることを示す（図５Ｃ）。

アポトーシスを誘発するタイミングと、そのセレブロン依存性を確認するために、動態、リアルタイムカスパーゼ－３活性化（アポトーシスの指標）データを提供する、生細胞イメージャーを使用した。化合物１で処理したＳＵ－ＤＨＬ－２^{ＣＲＢＮＷＴ}細胞を、１１２時間の時間経過にわたって特定のカスパーゼ－３酵素基質の細胞内での切断を追跡することにより、カスパーゼ－３活性化について解析した。化合物１依存性のカスパーゼ－３活性の誘発は処理の１２時間後に始まり、約７２時間で最大誘発に達した（図５Ｄ）。これらの結果から、セレブロン依存性、および１０ｎＭ以上の濃度の化合物１によって、ＤＬＢＣＬ細胞でアポトーシスの迅速な誘発が確認される。

化合物１による基質の迅速な分解およびアポトーシスの誘発がＳＵ－ＤＨＬ２細胞に独特でないことを確認するために、ＴＭＤ８（ＡＢＣ細胞株）およびカルパス－４２２（ＧＣＢ－細胞株）細胞をビヒクル対照（ＤＭＳＯ）または化合物１を用いて指示された時間および濃度で処理した（図６）。時間経過解析は、化合物１への暴露が、すべての濃度の化合物１で処理した４時間後に早くもイカロスおよびＺＦＰ９１の迅速な分解に至らせたことを明らかにする。１０および１００ｎＭの化合物１への暴露は、処理の全経過を通して、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１タンパク質の発現の完全な抑制をもたらした（図６、パネルＡおよびＣ）。これらの２つの濃度で、セレブロン基質の強い抑制と同時に、化合物１の処理は、インターフェロン刺激性遺伝子ＤＤＸ５８、ＩＲＦ７、およびＩＦＩＴ３を誘発し、ＭＹＣおよびＩＲＦ４（ＧＣＢ株のカルパス－４４２はＩＲＦ４を発現しないため、ＴＭＤ８においてのみ）の発現を減らし、２４時間（ＴＭＤ８）および４８時間（カルパス－４２２）で早くもアポトーシスマーカーの発現を誘発した（図６、パネルＡおよびＣ）。

第２の実験において、本発明者らは、ＴＭＤ８を化合物１（１００ｎＭ）で処理すると、２４時間の時点でアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の大きな減少がもたらされることを確認した。加えて、化合物１は、ＢＣＬ６（６５％減少）、ＭＹＣ（７５％減少）、およびＩＲＦ４（９０％減少）の存在量を劇的に減らし、切断型カスパーゼ３を強く誘発させ（図６、パネルＢ）、このことからＴＭＤ８細胞では２４時間で早くも細胞死の迅速な誘発が確認された（図６、パネルＢ）。カルパス－４２２細胞においても、化合物１は、２４時間の時点で、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１を減少させた（図６、パネルＤ）。４８時間の時点で、化合物１は増殖阻害剤ｐ２１およびインターフェロン刺激性遺伝子ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ３、およびＤＤＸ５８の存在量を増やし、ＭＹＣの発現を減らした（図６、パネルＤ）。７２時間後、化合物１処理の細胞は、ＭＹＣ（５０％減少）、抗アポトーシスＢＣＬ２、およびサバイビンタンパク質のレベルの減少、ならびにアポトーシスマーカーの切断型カスパーゼ３および７、および切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の強い誘発を示した（図６、パネルＤ）。

これらのデータを総合すると、化合物１のセレブロンとの結合は、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１の略完全な分解をもたらし、ＤＬＢＣＬ細胞にてアポトーシスの強力で迅速な誘発をもたらすことが示される。さらには、これらのデータは、セレブロン、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１、インターフェロン刺激性遺伝子ＤＤＸ５８、ＩＲＦ７、およびＩＦＩＴ３、アポトーシス関連タンパク質ＢＣＬ２、サバイビン、切断型カスパーゼ３および７、および切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ならびにＢＣＬ６、ＭＹＣおよびＩＲＦ４の発現が、化合物１の応答のマーカーとして供し得ることを示す。

実施例１０：複数のセレブロン基質が化合物１の細胞傷害性効果を媒介した
化合物１はＤＬＢＣＬ細胞での自律的細胞死活性をセレブロン依存的に誘発する。単一のセレブロン基質の喪失の影響を調べるために、セレブロン基質のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９介在性ノックアウトをフローサイトメトリーをベースとする細胞競合アッセイと組み合わせて利用し、６つのＤＬＢＣＬ細胞株：ＫＡＲＰＡＳ－４２２、Ｕ－２９３２、ＲＩＶＡ、ＳＵ－ＤＨＬ－１６、ＨＴ、およびＳＵ－ＤＨＬ－４において遺伝子をノックアウトした際の相対的な細胞適応性を評価した（図７、パネルＡ）。フローサイトメトリーをベースとする競合アッセイを行うために、安定したＣａｓ９発現ＤＬＢＣＬ細胞に、ＧＦＰレポーターを含有する対照の非標的化ｓｇＲＮＡ構築物（ｓｇＮＴ－１－ＧＦＰ）を形質導入するか、ＲＦＰレポーターを含有する目的とする遺伝子を標的とするｓｇＲＮＡ構築物（ｓｇＲＮＡ－ＲＦＰ）を形質導入した。各遺伝子の標的とされるノックアウトには、２つのｓｇＲＮＡ配列をイカロス（ｓｇＩＫＺＦ１－１、ｓｇＩＫＺＦ１－２）、アイオロス（ｓｇＩＫＺＦ３－１、ｓｇＩＫＺＦ３－２）、およびＺＦＰ９１（ｓｇＺＦＰ９１－１、ｓｇＺＦＰ９１－３）をノックアウトするのに用いた。対照には、２つの非標的化ｓｇＲＮＡ（ｓｇＮＴ－１、ｓｇＮＴ－２）、ゲノムの非コード領域を標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇＮＣ－１）、および確立した必須遺伝子ＥＴＦ１を標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇＥＴＦ１－１）が含まれた。ｓｇＲＮＡを形質導入した後、細胞を洗浄し、１：１の割合で混合し、ＧＦＰ^＋と、ＲＦＰ^＋細胞のパーセンテージを１８日間にわたって３日毎に測定した（図７、パネルＢ）。ＧＦＰ^＋／ＲＦＰ^＋割合の経時的な減少は、ＲＦＰレポーターを含有する構築物においてｓｇＲＮＡにより標的とされる遺伝子のノックアウトによる細胞適応性が減少したことを示す。予想通り、６種のすべてのＤＬＢＣＬ株において、必須遺伝子のＥＴＦ１のノックアウトは、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の強い減少をもたらした（図７、パネルＢ）。第２の非標的化対照（ｓｇＮＴ－２）は第１の非標的化対照（ｓｇＮＴ－１）と極めて類似する行動を取り、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合にて変化を示さなかった。加えて、ゲノムの非コード領域を標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇＮＣ－１）を形質導入した６種のすべてのＤＬＢＣＬ株にて、おそらくはＤＮＡにて二本鎖の切断が誘発されたことに起因し、Ｇ２細胞周期停止に至る、僅かな細胞適応性の減少が観察された。

イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１のノックアウトは、一連のＤＬＢＣＬ細胞株を通して、異なるＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の減少をもたらし、それは異なる細胞株の各遺伝子の必然度が大きく変化することを示す。加えて、イカロス、アイオロス、またはＺＦＰ９１の単一遺伝子のノックアウトは、いずれの細胞株においてもＥＴＦ１ノックアウトで観察されるのと同じ程度のＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の減少をもたらさなかった。いくつかの細胞株にて、イカロス、アイオロス、またはＺＦＰ９１のノックアウトで観察されるＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の減少は、非コードｓｇＲＮＡ（ｓｇＮＣ－１）で観察される減少と同様であり、これは遺伝子ノックアウトが細胞適応性にてＤＮＡ損傷応答の誘発と同じ程度の阻害を有することを示唆した。各株での遺伝子ノックアウトをイムノブロット解析で確認し、Ｃａｓ９を発現するＤＬＢＣＬ細胞が、ｓｇＮＴ－１、ｓｇＮＴ－２、ｓｇＮＣ－１、ｓｇＩＫＺＦ１－１、ｓｇＩＫＺＦ１－２、ｓｇＩＫＺＦ３－１、ｓｇＩＫＺＦ３－２、ｓｇＺＦＰ９１－１、ｓｇＺＦＰ９１－３、およびｓｇＥＴＦ１－１細胞のためのガイドＲＮＡを発現する、ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９、Ｕ－２９３２－Ｃａｓ９、ＲＩＶＡ－Ｃａｓ９、ＳＵ－ＤＨＬ－１６－Ｃａｓ９、ＨＴ－Ｃａｓ９、およびＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９細胞株の各々にある、示される標的遺伝子に関して特異的なノックアウトを有することを明らかにした。

全体として、これらのデータは、単一のセレブロン基質の喪失が化合物１の細胞傷害効果を完全に説明するものではなく、抗増殖効果は化合物１を標的とする複数のセレブロン基質が協調して喪失することによる可能性のあることを示す。従って、これらの結果は複数のセレブロン基質の評価が化合物１の応答として使用され得ることを示す。

実施例１１：イカロスおよびアイオロスの喪失により、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株は化合物１に対して感受性となった
化合物１を標的とする複数のセレブロン基質の喪失が、協力して細胞適応性の阻害の強化を惹起し得るかどうかを調べるために、個々の基質をノックアウト処理に付し、化合物１の濃度を上げながら同時に処理した。基質間に化合物１の抗増殖効果を媒介する協力があるならば、関与するいずれかの単一の基質を高度に喪失させることは細胞を化合物に対してより感受性とするはずである。図７、パネルＡに示されるのと同様のフローサイトメトリーをベースとする細胞競合アッセイを利用して、基質遺伝子のノックアウトでの、化合物１に対する感受性の強化を評価した。遺伝子ノックアウトを介して単一の基質の喪失が促進したことに起因する化合物１に対する感受性の増加は、ＤＭＳＯと比べて、化合物１で処理した場合の遺伝子ノックアウト細胞のＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の減少の強化により示された。

予想通り、対照としてのＫＡＲＰＡＳ－４２２（図８、パネルＡ）、およびＳＵ－ＤＨＬ－４（図８、パネルＢ）のｓｇＮＴ－１細胞（左端群）では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）処理の細胞（各下位群の左端の列）と比べて、０.１ｎＭ、１ｎＭ、および１０ｎＭの化合物１（灰色棒）を添加してもＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合にてほとんど変化がない。しかしながら、ｓｇＩＫＺＦ１（左から２番目の群；ｓｇＩＫＺＦ１－１、細い右向き角度の線；およびｓｇＩＫＺＦ１－２、太い右向き角度の線）およびｓｇＩＫＺＦ３（左から３番目；ｓｇＩＫＺＦ３－１、細い左向き角度の線；およびｓｇＩＫＺＦ３－２、太い左向き角度の線）の化合物１で処理したノックアウト細胞では、その個々のＤＭＳＯで処理した対照なる細胞（各下位群の左端の列）と比べて、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合にて用量依存的な減少があった。この効果はｓｇＺＦＰ９１細胞（右端群；ｓｇＺＦＰ９１－１、細いチェックのパターン；およびｓｇＺＦＰ９１－３、太いチェックのパターン）では観察されず、これはＺＦＰ９１の喪失が化合物１の抗増殖効果を強化するのに、他の化合物１を標的とするセレブロン基質の喪失と協力する関係にないことを示唆する。加えて、ＤＭＳＯ処理の参照となるｓｇＮＴ－１細胞（各下位群の左端の黒色の列）と比べて、ＤＭＳＯ処理のノックアウトしたすべてのｓｇＩＫＺＦ１、ｓｇＩＫＺＦ３、およびｓｇＺＦＰ９１細胞（各下位群の左端の黒色の列）では、経時的に、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合の減少が観察され、このことは個々の遺伝子をノックアウトしたことに由来する細胞適応性が減少した結果であり、図７、パネルＢで示されるデータと一致する。さらには、２４時間の化合物１の処理が基質ノックアウト細胞において基質分解を効果的に促進することが、イムノブロット解析によって確認された（図９）。
従って、これらの結果は、イカロス、アイオロス、および程度は小さいが、ＺＦＰ９１が、化合物１に対する感受性のマーカーとして供し得ることを示す。

実施例１２：イカロスおよびアイオロスの喪失を合わせることで、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の細胞適応性を阻害する上で相加的効果があった
イカロスおよびアイオロスは、ホモダイマーまたはヘテロダイマーを形成し得る、高度に相同性のある転写因子である。イカロスおよびアイオロスがＤＬＢＣＬ細胞の生存および増殖を促進するのに何らかの冗長性があるかどうかを調べるのに、イカロスおよびアイオロスの二元的ｓｇＲＮＡ介在性ノックアウトを６種のＤＬＢＣＬ細胞株：ＫＡＲＰＡＳ－４２２、Ｕ－２９３２、ＲＩＶＡ、ＳＵ－ＤＨＬ－１６、ＨＴ、およびＳＵ－ＤＨＬ－４にて行った。フローサイトメトリーをベースとする競合アッセイを利用し、細胞適応性を評価した：それでは、細胞にｓｇＮＴ－１－ＧＦＰを、またはＲＦＰレポーターを有する同じベクターから２つのｓｇＲＮＡを発現する構築物を形質導入した（図１０、パネルＡ）。二元性ｓｇＲＮＡの組み合わせは、ｓｇＮＴ－１＋ｓｇＮＴ－２、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－１、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－２、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－１、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－２、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＩＫＺＦ３－１、およびｓｇＩＫＺＦ１－２＋ｓｇＩＫＺＦ３－２であった。もう一度、形質導入した後に、細胞を洗浄し、１：１の割合で混合し、ＧＦＰ＋およびＲＦＰ^＋細胞のパーセンテージを、１５日間にわたって３日毎に測定した。

６種のすべての細胞株において、イカロスおよびアイオロスの両方のノックアウトは、イカロスまたはアイオロスのいずれかを単独でノックアウトするよりも、ＲＦＰ^＋／ＧＦＰ^＋割合においてより大きな減少を惹起した（図１０、パネルＢ）。イカロス、アイオロス、またはその両方のノックアウトに関する特異性をイムノブロット解析により確認し、Ｃａｓ９を発現するＤＬＢＣＬ細胞が、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－１、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＮＴ－２、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－１、ｓｇＩＫＺＦ３－１＋ｓｇＮＴ－２、ｓｇＩＫＺＦ１－１＋ｓｇＩＫＺＦ３－１、およびｓｇＩＫＺＦ１－２＋ｓｇＩＫＺＦ３－２についての二元性ガイドＲＮＡを発現する、ＫＡＲＰＡＳ－４２２－Ｃａｓ９、Ｕ－２９３２－Ｃａｓ９、ＲＩＶＡ－Ｃａｓ９、ＳＵ－ＤＨＬ－１６－Ｃａｓ９、ＨＴ－Ｃａｓ９、およびＳＵ－ＤＨＬ－４－Ｃａｓ９細胞株の各々において、遺伝子について関連するｇＲＮＡを含有する細胞株にて、ＩＫＺＦ１またはＩＫＺＦ３に対して特異的ノックアウトを有するのに対して、ｓｇＮＴ－１＋ｓｇＮＴ－２はＩＫＺＦ１またはＩＫＺＦ３タンパク質のレベルにて変化を示さないことを明らかにした。

これらの結果は、イカロスおよびアイオロスが、ＤＬＢＣＬ細胞株にていくつかの冗長的機能を有し、イカロスおよびアイオロスの両方の喪失または分解が化合物１に対する応答のマーカーとして供し得ることを示した。

実施例１３：イカロスまたはアイオロスの分解を阻害することで、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫細胞が化合物１から保護された
イカロスおよびアイオロスがＤＬＢＣＬ細胞株の生存および増殖を促進する上で冗長的であったかどうかを試験するために、イカロス（ＩＫＺＦ１－Ｇ１５１Ａ）、アイオロス（ＩＫＺＦ３－Ｇ１５２Ａ）、およびＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１－Ｇ４０５Ａ）の分解耐性変異体を、対照としてのＮａｎｏＬｕｃルシフェラーゼ（Ｎｌｕｃ）と一緒に、４種のＤＬＢＣＬ細胞株：ＫＡＲＰＡＳ－４２２、ＲＩＶＡ、ＨＴ、およびＳＵ－ＤＨＬ－４において異所的に、かつ安定的に発現させた。化合物１との用量応答曲線は、イカロスまたはアイオロスの分解耐性変異体の発現が４種のすべての細胞株において化合物１からの保護を提供したことを示す（図１１）。加えて、分解耐性変異体の異所的発現、ならびに化合物１誘発の分解に拮抗するその保護が、イムノブロット解析によって確認された。例えば、イムノブロット解析は、Ｎｌｕｃを異所的に発現する、ＫＡＲＰＡＳ－４２２、ＲＩＶＡ、ＨＴ、およびＳＵ－ＤＨＬ－４細胞株と比べて、イカロス（ＩＫＺＦ１－Ｇ１５１Ａ）、アイオロス（ＩＫＺＦ３－Ｇ１５２Ａ）、またはＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１－Ｇ４０５Ａ）の分解耐性変異体を異所的に発現する、その同じ細胞株において、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１タンパク質のレベルが化合物１の処理によって実質的に影響を受けないことを示した。例えば、Ｎｌｕｃ発現細胞を５ｎＭまたは５０ｎＭの化合物１で処理すると、対照またはＤＭＳＯ処理細胞と比べた場合に、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、およびＺＦＰ９１タンパク質のレベルにおいて顕著な減少がもたらされた。ベータ－アクチンレベルを対照として用いた。ＩＫＺＦ１－Ｇ１５１Ａの４種の細胞株での異所的発現により、ＩＫＺＦ１タンパク質のレベルが５ｎＭまたは５０ｎＭの化合物１を用いる２４時間の処理に応答して減少しなかったが、ＩＫＺＦ３およびＺＦＰ９１のレベルが化合物１の処理に応答して依然として減少していることが明らかとなった。ＩＫＺＦ３－Ｇ１５２Ａ、およびＺＦＰ９１－Ｇ４０５Ａでも同様のパターンが観察された。しかしながら、４種の細胞株にて観察される保護の程度は様々であった。ＫＡＲＰＡＳ－４２２、およびＳＵ－ＤＨＬ－４では、化合物１に対してほとんど完璧な保護が観察され、これはイカロスおよびアイオロスがこれらの株において真に冗長的な機能を有することを示唆する。しかしながら、ＨＴおよびＲＩＶＡでは、その保護はそれほど強固ではなかった。これらのデータを総合すると、イカロス、アイオロス、または両方の化合物１に応答してその有用性が強調される。

実施例１４：化合物１は、その生存率に有意に影響を及ぼすことなく、Ｔ細胞にてイカロスの分解を促進した
エクスビボにて刺激されたＰＢＭＣでの化合物１の免疫調節活性を評価した。リンパ腫の患者での疾患の進行は免疫系機能の低下と関連付けられる。疲弊したＴ細胞は、分化、増殖およびサイトカイン産生における機能の低下を示す。

４人の健康なドナーから由来の精製されたＰＢＭＣを、抗ＣＤ３被覆のプレートにプレーティングし、Ｔ細胞を刺激し、その後でＤＭＳＯ（対照）または化合物１のいずれかを用いて種々の濃度で処理した。化合物１のイカロスの分解を促進する能力をフローサイトメトリーで経時的に評価した（図１２）。化合物１は、ＰＢＭＣでのイカロスの濃度依存的分解を誘発し、それは経時的にイカロスについて陽性であった細胞のパーセンテージが減少することにより証明された。その上、分解は、化合物１の単一処理の直後から７日まで維持された。

このことが、化合物のイカロス分解を促進する効果によるものであり、ＣＤ－３刺激のＰＢＭＣの細胞増殖または生存率の欠如によるものでないことを確立するために、化合物１のその生存能に対する効果をフローサイトメトリーで評価した。化合物１で処理した細胞はＰＢＭＣ生存率に有意な効果を示さず、対照のＤＭＳＯ処理の細胞の生存率と経時的に同等であった。４人の健康なドナーから由来の末梢血の単核細胞を、０.１、１、１０、または１００ｎＭの濃度で、３、４、または７日間にわたって化合物１に暴露し、Viobility（登録商標）Fixable Dyeで染色することにより生存率を測定した。結果は、３日目および４日目には、ＰＢＭＣのおよそ８０％が生存しており、化合物１はいずれの濃度でも有意な効果を有しないことを示した。細胞生存率におけるその傾向は７日目まで続き、化合物１の処理はＰＢＭＣの生存率に影響を及ぼさなかった。

これらの結果は、Ｔ細胞におけるイカロスの発現レベルが化合物１によって分解され得ること、およびイカロスのレベルがＴ細胞における化合物１に対する応答のマーカーとして供し得ることを実証する。

実施例１５：化合物１のエフェクターリンパ球およびサイトカインの産生に対する効果
実施例１４からの結果は、化合物１がイカロス分解を促進し、イカロスがＩＬ－２発現および分泌の抑制因子、すなわちＴ細胞活性化マーカーとして作用することが知られていることを示す。従って、化合物１の、エフェクターＴ細胞のサイトカイン分泌に対する効果を評価した。

４人の健康なドナーから由来の精製したＰＢＭＣを、抗ＣＤ３抗体を被覆したプレートにプレーティングしてＴ細胞を刺激し、その後で、ＤＭＳＯ（対照）または様々な濃度の化合物１のいずれかで、３、４、および７日間にわたって処理した。メソスケール（ＭＳＤ）アッセイを用いることにより、ＰＢＭＣ培養からの上清液中のサイトカインの分泌を経時的に測定した。インビトロ培養の間にＰＢＭＣによるインターロイキン－２分泌は、図１３および図１４に示されるように、化合物１への暴露で増加した。化合物１は試験したすべての濃度でＩＬ－２分泌を誘発した。ＩＬ－２でのこの活性は、ＤＬＢＣＬ腫瘍細胞に対して強い抗増殖活性を産生することが分かっている濃度の化合物１（０.１～１００ｎＭ）で生じた。他のモニター観察されたサイトカイン（ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－１０、およびＩＬ－６）では、一過的な効果が観察されるか、または効果は全く観察されなかった。このことは、ＩＬ－２の分泌が化合物１に対する応答のマーカーとして、特にＴ細胞活性化に対するマーカーとして供し得ることを実証する。

実施例１６：化合物１は疲弊したＴ細胞においてサイトカイン／ケモカインの分泌を誘発した
疲弊したＴ細胞は、それらが、プログラムされた細胞死タンパク質１（ＰＤ１）およびリンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ３）を含め、阻害性シグナル伝達経路の発現を獲得するため、表現型として機能性エフェクターＴ細胞とは区別される。疲弊したＴ細胞は、分化、増殖、およびサイトカインの産生の減少を示す。

Ｔ細胞の疲弊を誘発するために、３人のドナーからのＰＢＭＣを１００ｎｇ／ｍＬのスタフィロコッカス・エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）で７２時間処理した（図１５、パネルＡおよびパネルＣ）。３日目に、ＳＥＢを洗い流し、疲弊マーカー、ＣＤ－３陽性Ｔ細胞のＰＤ１およびＬＡＧ３の発現をＦＡＣＳによってアッセイした（図１５、パネルＢ）。次に、その後で１人のドナーからの疲弊したＴ細胞を化合物１で９６時間にわたって処理し、２人のさらなるドナーの疲弊したＴ細胞を、１ｎｇ／ｍＬのＳＥＢの存在下にて化合物１で４８時間および９６時間にわたって処理し、エフェクターサイトカインの培地への放出をＭＳＤ解析によって評価した。結果は、化合物１が、４８時間または９６時間後にメソスケール（ＭＳＤ）解析によって測定されるように、顆粒マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）の分泌レベルを濃度および時間依存的に増大させること示した。例えば、約０.００１μＭの化合物１を９６時間では３０００ｐｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦがもたらされるのに対して、約０.０１μＭの化合物１を９６時間では１０,０００ｐｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳがもたらされ、分泌量は、０.１μＭの化合物１よりも高い濃度で１５,０００ｐｇ／ｍＬの真下で頭打ちするまで、増加し続けた。化合物１に９６時間にわたって暴露することは、化合物１での９６時間の処理が、４８時間の暴露と比べて、より高い量のＧＭ－ＣＳＦおよびＴＮＦαの放出、およびより少ない程度でのＩＮＦγをもたらすことを示した。

化合物１は、Ｔ細胞再刺激アッセイにおいて、エフェクターサイトカイン／ケモカインのＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγ分泌を誘発した。化合物１はまた、０.０１～１０μＭの範囲の濃度で、評価される３種のドナーＰＢＭＣにて、３種のエフェクターサイトカイン／ケモカインの分泌を誘発する活性を示した。ＧＭ－ＣＳＦレベル（ＥＣ_５０＝０.００６μＭ）、ＴＮＦα（ＥＣ_５０＝０.０１μＭ）、およびＩＦＮγ（ＥＣ_５０＝０.０１μＭ）のレベルを分泌するのに達成されたＥＣ_５０は、化合物１の免疫調節活性がインビトロにて強い抗がん作用を有する濃度で起こることを支持する。

総合すると、これらの結果は、化合物１が免疫調節活性を有することを実証した。注目すべきは、免疫調節活性が一連のＤＬＢＣＬ細胞株にて抗腫瘍作用をもたらすのと同様の濃度で生じることである。さらには、これらの結果は、エフェクターサイトカイン／ケモカインのＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのＴ細胞からの分泌が化合物１に対する応答のマーカーとして供し得ること、およびＰＤ－１およびＬＡＧ３の発現が化合物１の処理に対して応答し得る細胞を同定するマーカーとして使用され得ることを実証する。

実施例１７：化合物１およびそのＲ－エナンチオマーは、同様の抗増殖活性を示し、セレブロンと結合する
化合物１および化合物２の両方のＤＬＢＣＬ細胞での活性を評価するために、セルタイター－グロ（CellTiter-Glo）（ＣＴＧ）アッセイを行い、抗増殖活性を測定した。ＤＬＢＣＬ細胞株のＳＵ－ＤＨＬ－４にて、化合物２および３の両方で強力な抗増殖活性が観測された（表８）。

表８：エナンチオマーの、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞での、抗増殖能を５日間アッセイにて評価した
ＤＬＢＣＬ＝びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；ＩＣ_５０＝５０％阻害濃度

化合物１およびそのエナンチオマーの化合物２がセレブロンと結合し得るかどうかを調べるために、短時間（１０～２０分間）のリガンド競合アッセイを用いた。キラル純度が９９％より大きい化合物１および化合物２のサンプルを、ＴＲ－蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）アッセイにてセレブロン結合アフィニティについて評価した（表８）。その結果は、化合物１および化合物２の両方が濃度依存的にＣＲＢＮに結合することを明らかにした。具体的には、化合物１（ＩＣ_５０＝０.８６±０.１μＭ、ｎ＝５）は、化合物２（ＩＣ_５０＝１０.２５±１μＭ、ｎ＝５）と比べて、ＣＲＢＮ結合について１１倍高い結合アフィニティを有した。

総合すると、これらの結果は、化合物１および化合物２の両方がＤＬＢＣＬ細胞にて活性を示すこと、およびセレブロンが応答のマーカーとして供し得ることを示した。

実施例１８：化合物１および化合物２は、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の分解を誘発する
各エナンチオマーの純粋なサンプルを短時間の経過で測定される基質タンパク質の細胞内分解について試験した（図１６）。ＳＵ－ＤＨＬ－２細胞を１、２、および６時間にわたってビヒクル対照（０.１％ＤＭＳＯ）、化合物１（１、１０、１００ｎＭ）、または化合物２（１、１０、１００ｎＭ）で処理した。ウェスタンブロット解析を用いて、タンパク質基質のアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の分解の程度を評価した。化合物１は、１ｎＭといった少量の処理で、早くも１時間でアイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１を阻害した。１ｎＭの化合物１で２時間以内に３種のタンパク質が各々５９％以上分解され、３種のすべてのタンパク質は同程度の分解速度を示した。化合物２もまた、異なる動態ではあるが、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の発現を低下させた（図１６）。例えば、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１の発現の低下は、化合物２のより高い濃度で、および化合物２へのより長い暴露時間で観察された。

第２のアッセイにて、ｅＰＬタグ付きの標的タンパク質基質を発現するＤＦ１５細胞株をモデル系として用い、タンパク質分解を１ｐＭ～１０μＭの範囲の濃度にわたって０.７５、１、１.５、３、４、および２４時間でモニター観察した。評価されたタンパク質はイカロス（図１７）、アイオロス、およびＺＦＰ９１であった。化合物１と化合物２は共に、あらゆる時点で基質タンパク質を分解することができた（表９）。さらなるアッセイにて、化合物１および化合物２での処理の効果をモニター観察するのに、さらなる時点を含めた。その結果、化合物１および化合物２は、強化プロラベル（Enhanced ProLabel）（ｅＰＬ）－アイオロス、ｅＰＬ－イカロス、またはｅＰＬ－ＺＦＰ９１を発現するＤＦ－１５細胞において、１、２、６、または２４時間暴露した後、濃度および時間依存的に、アイオロス、イカロス、およびＺＦＰ９１を分解し、細胞が化合物２に比べて化合物１に対してより感受的であることが確認された。

Ｙ定数によって記載される基質タンパク質の分解の深さもまた、陰性対照のルシフェラーゼ阻害剤（ＣＣ１０７１２９７、Ｙ－定数＝０）に対する、このアッセイにて測定された。エナンチオマーは両方共に同様のＹ－定数値を示し（表９）、これは薬物応答曲線での同様の低Ｙ漸近線に相当する（図１７）。

表９：ＤＦ１５細胞にて化合物１とそのＲ－エナンチオマーによって誘発される基質分解の動力学の比較
ＥＣ_５０＝半最大有効濃度；ＺＦＰ９１＝ジンクフィンガータンパク質９１

総合すると、これらの結果は、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１のレベルが化合物１および化合物２の両方に対する応答のマーカーとして供し得ることを実証する。

実施例１９：化合物１の好中球の前駆体の成熟に対する効果
化合物１の、好中球に至る骨髄の前駆細胞の成熟に対する効果を、健康なドナーから由来の骨髄ＣＤ３４^＋細胞のエクスビボ培養において評価し、異なる用量スケジュールを評価してこれらの事象のスケジュール依存性に至るインサイトを得た。

幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＭＳ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３－Ｌ）および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）を培養液に添加することで骨髄分化を誘発させた。化合物１の有無での細胞分化を所定の時点でフローサイトメトリーにより５つの下位集団（１）造血幹細胞（ＨＳＣ、ＣＤ３４^＋／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^－）；（２）ステージＩ細胞（ＣＤ３４^＋／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^－）；（３）ステージＩＩ細胞（ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^－）；（４）ステージＩＩＩ細胞（ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^＋／ＣＤ１１ｂ^＋）および（５）ステージＩＶ細胞（ＣＤ３４^－／ＣＤ３３^－／ＣＤ１１ｂ^＋）細胞（未熟から成熟まで）の細胞のパーセンテージとして評価した。分化および生存率は、２日または３日毎の完全アッセイの間にモニター観察された。

化合物１の異なる暴露期間（処理が１４または５日間）の、骨髄前駆細胞の好中球に至る生存率および成熟に対する、効果を、化合物１の濃度を１、１０、および１００ｎＭで、連続的に２１日までの示される時間（図１８；図１９）でフローサイトメトリーを用いて評価した。その結果は、後期成熟の好中球の前駆細胞が化合物１により遮断され、１４日間（図１９Ａ）または５日間（図１９Ｂ）の暴露の後、高濃度で成熟好中球の数が有意に減少していることを示した。成熟停止は、ステージＩＩＩ細胞表面免疫表現型の細胞の蓄積およびステージＩＶ細胞表面免疫表現型（成熟好中球）の細胞の集団の減少によって明らかにされるように、主にステージＩＩＩ好中球前駆細胞の発生で起こるようである。しかしながら、化合物１に暴露された好中球前駆体の生存率は影響を受けなかった（図１８）。

化合物１に暴露した後の成熟好中球の回復もまた、この系にて評価された。化合物１なしで１週間経過した後、成熟好中球（ステージＩＶ細胞）の割合は、より低い濃度でさらに迅速かつ完全に回復する傾向を示しながら、その最低の状態から少なくとも約５０％回復した（図２０；表１０）

イカロスタンパク質のレベルを化合物１の暴露および回復の期間にわたってモニター観察した。イカロスのレベルは、化合物１の暴露の間は減少し、薬物の離脱後には、異なる暴露計画との関連で顕著な有意差もなく、濃度依存的に回復した（図２１；図２２）。イカロスのレベルは、洗浄した後から少なくとも３日後に正常に戻り始め、後期好中球前駆体の成熟が完全に回復するのに先行した（図２３）。これらの結果は、後期好中球前駆体のイカロス分解が、化合物１のレシピエントでの好中球減少症の重要なメディエーターであり得ることを実証する。さらには、この知見は、イカロスのレベルの復元が好中球前駆細胞の成熟の回復に先行することを示唆する。従って、好中球中のイカロスのレベルは、化合物１に対する応答についてのマーカーとして供し得る。

この研究にて利用されたインビトロアッセイ系にて、成熟好中球のレベルが未処理対照のレベルの少なくとも５０％まで回復することは、患者にて臨床的に有意な好中球減少のないことと相関している。この研究では、薬物なしで１週間経過した後、ステージＩＶ細胞の集団が、評価されたすべての試験条件下で、ＤＭＳＯ対照でのステージＩＶ細胞集団の少なくとも５０％のレベルに等しいレベルにまで、濃度依存的に回復することが可能であり（図２０）、試験したいくつかの条件下ではＤＭＳＯ対照のレベルにさえ達成した。

表１０：化合物１に連続して１４日間または５日間暴露し、治療後に１週間洗浄した後にステージＩＶ細胞が５０％にまで回復するのに必要な時間量

イカロスタンパク質のレベルを２日または３日毎にフローサイトメトリーで解析した。図２１および図２２に示されるように、イカロスタンパク質は両方の化合物１処理の計画（１４日間および５日間）の下で分解され、その発現は薬物の洗浄後に濃度依存的に回復した。１９日目には、１４日間の処理の後、すべての濃度で、イカロスの完全な回復が観察された。イカロスタンパク質の発現の回復は、１４日間処理した細胞でよりも、５日間処理した細胞での方が遅く：１９日目には、イカロスタンパク質の回復はいずれの濃度の化合物１でも完全ではなく、２１日目には、イカロスタンパク質のレベルは、１０ｎＭの化合物に暴露した培養液においてのみ完全に回復した。

本研究では、１４日間にわたって化合物１に暴露された細胞において、図２３に示されるように、好中球前駆体の分化が回復する前に、イカロスのコントロールレベルが復元された。１０～１０００ｎＭの濃度の化合物１では、好中球前駆体の成熟の回復は、イカロスタンパク質のレベルの回復よりもゆっくりと起こった。

総合すると、これらの結果は、骨髄細胞でのイカロスタンパク質のレベル、ならびにＣＤ３４^＋細胞におけるアポトーシスおよび骨髄分化が、化合物１に対する応答のマーカーとして供し得ることを実証する。

上記の実施態様は単なる例示であるものとし、当業者であれば、慣用的な実験操作を用いるだけで、特定の化合物、材料および操作の多数の均等物を認識するか、確認することができるであろう。そのような均等物はすべて、本発明の範囲内にあり、添付した特許請求の範囲によって包含される。

実施例２０：トランスクリプトームおよびプロテオームのプロファイリングの統合的解析から同定される応答マーカー
シグナル伝達および調節経路などの、ＤＬＢＣＬにおける化合物１の処理の細胞傷害的作用と関連するバイオマーカーを、トランスクリプトームおよびプロテオームのプロファイリングを用いる統合的ネットワークによって決定した。この方法は、以前に記載されたもの（Basha、Mauer、Simonovsky、Shpringer、＆Yeger-Lotem、2019；Gosline、Spencer、Ursu、＆Fraenkel、2012）と同様のタンパク質相互作用および制御関連性のある、知識駆動型骨格ネットワークを用いたネットワークフローの最適化からなる。

簡単に言えば、異なる時点での差分発現解析と差分タンパク質存在量解析とをモデルフレームワークを用いて統合した。このフレームワークは、以下の供給源よりコンパイルされる、タンパク質－タンパク質相互作用（ＰＰｉ）ネットワーク層、転写調節ネットワーク層、および経路の定義を含む、３部グラフである：
・転写調節ネットワーク（ＴＲＮ）
－社内ＩＫＺＦ３＆ＺＦＰ９１遺伝子シグネチャーおよびＲｅＭＡＰ（４９２ＴＦｓ）（Cheneby、Gheorghe、Artufel、Mathelier & Ballester、2018）
－転写開始部位（ＴＳＳ）にアノテーションされ、近接性（ＴＳＳ±２ｋｂｐ）で濾過された、ＣｈＩＰ－Ｓｅｑピーク
－４３６の転写因子と、２１,６３３の遺伝子に基づくＴＲＮ（レギュロンサイズ∈［１０,７５００］）
・タンパク質－タンパク質相互作用ネットワーク（ＰＰｉＮ）
－ＨＩＮＴ（Das & Yu、2012）、Ｈ－ＩＩ－１４（Rollandら、2014）、ヒト可溶性タンパク質複合体（Rueppら、2010） & ＢｉｏＰｌｅｘ（Huttlinら、2015）を統合し、高信頼性実験のエビデンスで濾過するもの
－１３８７２のタンパク質ｘ１４４３４４のエッジ（方向性を考慮した後）
・ＭＳＩｇＤＢ－Ｃ２ｖ６.１からの経路
－８.９０４の遺伝子ｘ１,３２９の経路（Subramanianら、2005）

エッジのキャパシティーは、相互作用のパートナーの各対についてｌｏｇ_１０ｐ値によって正規化される差次発現およびタンパク質存在量の解析からの標準化ｌｏｇ₂倍数変化として、πスコアを調和平均に付して秤量された（Xiaoら、2014）。評点を標準化し、－１と１との間にスケーリングした。

フラックス計算は、バイオコンダクター（Bioconductor）のグラフマックスフローパッケージにて実装されるように、最大フロー法を用いて行われた。ネットワークを流れるフラックスの相当量を維持しながら、最も関連性に低い相互作用をフィルタリングするのに、反復プロセスを実施した。第５分位値よりも低いフラックスを有するエッジを各反復プロセスで除去し、最適化基準を満足するまで、ソース／シンクから切断されたパスを取り除いた。

始めに、化合物１に対する細胞株の感受性を、ＤＲＡＱ７およびアネキシンＶ染色を用い、４０の細胞株モデルについてフローサイトメトリーで測定し、化合物処理の５日後の増殖の減少およびアポトーシスの誘発を定量した。各細胞株について用量依存性曲線を作成し、曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。感受性を（ＡＵＣ_{アポトーシス}／ＡＵＣ_生細胞）の割合を計算することにより算出し、ここで割合が小さいほど耐性を示し、割合が大きいほど感受性を示す。一連の１１種のＤＬＢＣＬ細胞株が、耐性から感受性までの範囲にて、化合物１処理に対して様々な感度のあることが見いだされた。

次に、化合物１に対する感受性について広範囲のスペクトルを網羅する１１種のＤＬＢＣＬ細胞株を、０.０４μＭの化合物１またはＤＭＳＯ対照に暴露し、プロテオーム（ＴＭＴ－ＭＳ）および遺伝子発現（ＲＮＡ－ｓｅｑ）のプロファイルをパネルに付き３重重複して得た。サンプルを、暴露した：プロテオームについては６および１８時間後；およびトランスクリプトームについては１２、２４および４８時間後の５つの時点でプロファイルに付した。プロテオームとトランスクリプトームの情報を動的に統合したスキームを図２４に示す。その統合された機構解析は、化合物１の処理が、インターフェロンシグナル伝達（例、ＩＬ６ＳＴ、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩ６、ＯＡＳ３、インターフェロンα／βシグナル伝達）、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達（例、ＩＬ２３Ａ、ＣＣＬ１）、アポトーシス（例、ＩＬ２７、ＴＮＦ、ＩＬ１０、カスパーゼ）、細胞接着（例、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰＬＧ、ＴＸＡ２）、細胞間結合（例、ＣＬＤＮ７、ＣＬＤＮ１２）、Ｇ－タンパク質結合受容体（例、ＦＦＡＲ２）、細胞外マトリックス（例、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７）と関連付けられる遺伝子のイカロス／アイオロス駆動のアップレギュレーション、および細胞周期と転写に関する遺伝子のグローバルなダウンレギュレーションを生成することを明らかにした。化合物１の感受性に関する異なる経路、およびその経路と関連付けられる遺伝子の概要を図２５に示す。特に数個の遺伝子が、化合物１の細胞傷害性作用と関連付けられることが見いだされ、このことはこれらの遺伝子の活性化がＤＬＢＣＬでの化合物１の応答についてのバイオマーカーとして供し得ることを実証する。このリストには、インターフェロンおよびケモカイン関連遺伝子（例、ＩＬ２３Ａ、ＣＣＬ２、ＩＦＩＴＭ３）、細胞接着遺伝子（例、ＣＬＤＮ７）、ＧＰＣＲシグナル伝達遺伝子、およびアポトーシス関連遺伝子（例、ＴＮＦ）が含まれる。例えば、異なる時点および異なる細胞株のモデルを介して、ＩＬ２３Ａ（図２６Ａ）、ＣＣＬ２（図２６Ｂ）、およびＳＲＧＡＰ１（図２６Ｃ）などの例示としての遺伝子の倍数変化を比較して表示することで、細胞傷害性作用が強い、細胞株でのこれらのマーカーの変調の増加が化合物１の処理に対する感受性と関連付けられることを見出したことを示した。加えて、６および１８時間で測定されたプロテオームの結果を比較することで、タンパク質の発現の差が、化合物１の処理に対する感受性と関連し得ることが示された（図２７）。例えば、ＩＫＺＦ３、ＩＫＺＦ１、ＺＦＰ９１、ＥＴＳ１、ＭＮＴ、ＭＥＦ２Ｂ、ＳＮＡＰＣ１、ＫＤＭ４Ｂ、ＴＦＡＰ４、ＵＢＴＦ、ＢＡＨＤ１、ＭＢＤ４、ＣＢＸ２、ＴＰ６３、ＴＬＥ３、ＦＯＸＰ１、ＺＢＴＢ１１、ＩＲＦ４、ＭＥＤ２６、ＡＴＦ７、ＺＮＦ６４４、ＫＤＭ５Ｂ、ＵＳＦ２、ＴＣＦ２５、ＫＤＭ４Ａ、Ｌ３ＭＢＴＬ２、ＳＮＡＰＣ４、ＫＤＭ５、ＥＢＦ１、ＦＯＸＪ２、ＮＦＡＴＣ１、ＺＦＰ３６、ＨＤＧＦ、ＥＬＦ１、ＰＭＬ、ＭＹＢＬ２、ＳＭＡＤ２、ＣＨＤ２、ＳＴＡＴ１、ＰＡＸ５、ＳＴＡＴ２、ＰＹＧＯ２、ＩＲＦ９、ＰＣＧＦ２、およびＡＴＦ３などの遺伝子のタンパク質レベルが、化合物１での処理に応答して変化することが判明し、６時間の処理と比べて、１８時間の処理を行った後ではより大きな変化が観察された。

総合すると、これらの結果は、インターフェロンシグナル伝達、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達、アポトーシス、および細胞接着と関連付けられる遺伝子のアップレギュレーション、ならびに細胞周期および転写と関連付けられる遺伝子のグローバルなダウンレギュレーションが、化合物１の処理に対する感受性についてのバイオマーカーとして供し得ることを実証する。特に、ＩＬ２３Ａ、ＣＣＬ２、ＩＦＩＴＭ３、ＣＬＤＮ７、ＴＮＦ、およびＳＲＧＡＰ１などの例示的な遺伝子は、化合物１の処理に対する感受性についてのバイオマーカーとして供し得る。

Claims

有効成分として式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を含む、血液がんを治療するための医薬組成物であって、
該有効成分が、血液がんの対象に対し奏功的である可能性のあるかを同定して、あるいは血液がんであるかその疑いのある対象に対し奏功性を予測して用いられ、
該同定または予測は、
（ａ）該対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外で測定し；
（ｃ）
（ｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または
（ｉｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、改変されたレベルにあるならば、該対象を該有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断することを含む、医薬組成物。
血液がんを選択的に治療する医薬を製造するための、式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩の有効成分としての使用であって、該選択的治療が
（ａ）血液がんの対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外で測定し；
（ｃ）
（ｉ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが検出可能であるか；または
（ｉｉ）バイオマーカーのレベルが、バイオマーカーの参照となるレベルと比べて、改変されたレベルにあるならば、該対象を該有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断し；および
（ｄ）治療的に効果的な量の有効成分を、該有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断された対象に投与することを含む、使用。
バイオマーカーが
（ａ）セレブロン（ＣＲＢＮ）で、ＣＲＢＮが検出可能であるか、またはサンプル中の参照となるレベルよりも高い場合に、該対象を医薬組成物に対して奏功的である可能性があるものと診断し、または
（ｂ）イカロス（Ikaros）、アイオロス（Aiolos）、ＺＦＰ９１、またはそれらの組み合わせで、
（ｉ）サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるレベルよりも低い場合に、有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断し、または
（ｉｉ）イカロスと、アイオロスとの両方のレベルが、それらの個々の参照となるレベルよりも低い場合に、有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断する、請求項１に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが
（ａ）セレブロン（ＣＲＢＮ）で、ＣＲＢＮが検出可能であるか、またはサンプル中の参照となるレベルよりも高い場合に、該対象を医薬組成物に対して奏功的である可能性があるものと診断し、または
（ｂ）イカロス（Ikaros）、アイオロス（Aiolos）、ＺＦＰ９１、またはそれらの組み合わせで、
（ｉ）サンプル中のバイオマーカーのレベルが参照となるレベルよりも低い場合に、有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断し、または
（ｉｉ）イカロスと、アイオロスとの両方のレベルが、それらの個々の参照となるレベルよりも低い場合に、有効成分に対して奏功的である可能性があるものと診断する、請求項２に記載の使用。
有効成分として式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を含む、血液がんを治療するための医薬組成物であって、
該有効成分が、血液がんの対象に対し奏功的である可能性のあるかを同定して、あるいは血液がんであるかその疑いのある対象に対し奏功性を予測して用いられ、
該同定または予測は、
（ａ）該対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該治療用化合物を該サンプルに生体外で加え；
（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；および
（ｄ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、改変されたレベルにあるならば、該対象を、その治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断することを含む、医薬組成物。
有効成分として式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を含む、血液がんを治療するための医薬組成物であって、
該有効成分が、血液がんの対象に対し奏功的である可能性のあるかを同定して、あるいは血液がんであるかその疑いのある対象に対し奏功性を予測して用いられ、
該同定または予測は、
（ａ）治療用化合物を投与された対象からサンプルを採取し；
（ｂ）サンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外で測定し；および
（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルが、参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、改変されたレベルにあるならば、該対象をその治療用化合物に対して奏功的である可能性があるものと、診断することを含む、医薬組成物。
有効成分として式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を含む、血液がんを治療するための医薬組成物であって、
対象において血液がんを治療する際の該有効成分の効能をモニター観察しながら使用し、
該モニタリングは
（ａ）該医薬組成物を投与された対象からサンプルを採取し；
（ｂ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外で測定し；および
（ｃ）該サンプル中のバイオマーカーのレベルを、参照となるバイオマーカーのレベルと比較し、ここで改変されたバイオマーカーのレベルは、対象において血液がんを治療する際の有効成分の効能を示すことを含む、医薬組成物。
有効成分として式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩を含む、血液がんを治療するための医薬組成物であって、
血液がんの対象を該有効成分を用いて治療するための投与量または頻度を調整して使用し、
該調整は
（ａ）投与量の該有効成分を投与された対象から異なる時点で１または複数のサンプルを採取し；
（ｂ）１または複数のサンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外でモニター観察し；および
（ｃ）参照となるサンプル中のバイオマーカーの改変されたレベルに基づいて、該有効成分を該対象に後続して投与するための投与量を調整することを含む、医薬組成物。
治療的に効果的な量の該有効成分を、該有効成分に対して奏功的である可能性があるとして診断された対象に投与することをさらに含む、請求項７または８に記載の医薬組成物。
（ａ）サンプル中のバイオマーカーの改変されたレベルが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い
（ｂ）サンプル中のバイオマーカーの改変されたレベルが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い、
（ｃ）参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、バイオマーカーのレベルの上昇が、対象にある血液がんを治療する際の該有効成分の効能を示す、
（ｄ）参照となるバイオマーカーのレベルと比べて、バイオマーカーのレベルの低下が、対象にある血液がんを治療する際の該有効成分の効能を示す、
（ｅ）参照となるバイオマーカーのレベルが、該有効成分を対象に投与する前に、該対象より得られた参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、参照となるサンプルが該サンプルと同じ供給源からのものである、
（ｆ）参照となるバイオマーカーのレベルが、血液がんを患っていない健康な対象から採取された参照となるサンプル中のバイオマーカーのレベルであり、参照となるサンプルが該サンプルと同じ供給源からのものである、または
（ｇ）参照となるバイオマーカーのレベルが、所定のバイオマーカーのレベルである、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーがアポトーシスのマーカーを含み、該バイオマーカーのレベルの改変がアポトーシスの誘発を示す、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、
（ａ）切断型カスパーゼ３、切断型カスパーゼ７、切断型ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ＢＣＬ２、サバイビン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびＤＮＡ、Ｂｃｌ－２－様タンパク質１１（ＢＩＭ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、およびインターロイキン－２７（ＩＬ２７）、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、
（ｂ）アネキシン－Ｖ、７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）、およびディープ・レッド・アントラキノン７（ＤＲＡＱ７）、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、または
（ｃ）ＩＬ－８、ＩＬ－１ａ、ｓＰＧＥ２、ｓＴＮＦα、ｓＩｇＧ、ｓＩＬ－１７Ａ、ｓＩＬ－１７Ｆ、ｓＩＬ－２、ｓＩＬ－６、コラーゲン－Ｉおよび－ＩＩＩ、ＰＡＩ－１、ＣＤ６９、およびｓＩＬ－１０、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
（ａ）サンプル中のバイオマーカーが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い、または
（ｂ）サンプル中のバイオマーカーが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い、請求項１２に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、インターフェロンシグナル伝達と関連付けられる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、インターロイキン－６シグナルトランスデューサー（ＩＬ６ＳＴ）、インターフェロン誘導の膜貫通型タンパク質３（ＩＦＩＴＭ３）、インターフェロンアルファ－誘導性タンパク質６（ＩＦＩ６）、２’－５’－オリゴアデニレート合成酵素３（ＯＡＳ３）、インターフェロンα（ＩＦＮα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達と関連付けられる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン１（ＣＣＬ１）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、細胞接着と関連付けられる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、Ｅ－セレクチン（ＳＥＬＥ）、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＳＥＬＰＬＧ）、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、細胞－細胞間結合と関連付けられる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、クラウジン７（ＣＬＤＮ７）、クラウジン１２（ＣＬＤＮ１２）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
バイオマーカーがＧ－タンパク質結合受容体である、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが遊離脂肪酸受容体２（ＦＦＡＲ２）を含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
バイオマーカーは細胞外マトリックスと関連付けられる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、ＣＤ２０９、ＳＥＲＰＩＮＡ、ＳＥＲＰＩＮＢ７、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
（ａ）バイオマーカーが細胞周期と関連付けられる、
（ｂ）バイオマーカーが転写と関連付けられる、
（ｃ）バイオマーカーが、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１（ｐ２１）からなる群より選択される、または
（ｄ）バイオマーカーが、ＰＤ１およびＬＡＧ３を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、アイオロス（ＩＫＺＦ３）、イカロス（ＩＫＺＦ１）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＺＦＰ９１（ＺＦＰ９１）、タンパク質Ｃ－ｅｔｓ－１（ＥＴＳ１）、マックス結合タンパク質ＭＮＴ（ＭＮＴ）、筋細胞特異的エンハンサー因子２Ｂ（ＭＥＦ２Ｂ）、ｓｎＲＮＡ活性化タンパク質複合体サブユニット１（ＳＮＡＰＣ１）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ｂ（ＫＤＭ４Ｂ）、転写因子ＡＰ－４（ＴＦＡＰ４）、核極転写因子１（ＵＢＴＦ）、ブロモ隣接ホモロジードメイン含有１タンパク質（ＢＡＨＤ１）、メチル－ＣｐＧ－結合ドメインタンパク質４（ＭＢＤ４）、クロモボックスタンパク質ホモログ２（ＣＢＸ２）、腫瘍タンパク質６３（ＴＰ６３）、トランスデュシン様エンハンサータンパク質３（ＴＬＥ３）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｐ１（ＦＯＸＰ１）、ジンクフィンガーおよびＢＴＢドメイン含有タンパク質１１（ＺＢＴＢ１１）、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ転写サブユニット２６のメディエーター（ＭＥＤ２６）、環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－７（ＡＴＦ７）、ジンクフィンガータンパク質６４４（ＺＮＦ６４４）、リジン特異的脱メチル化酵素５Ｂ（ＫＤＭ５Ｂ）、上流刺激因子２（ＵＳＦ２）、転写因子２５（ＴＣＦ２５）、リジン特異的脱メチル化酵素４Ａ（ＫＤＭ４Ａ）、致死（３）悪性脳腫瘍様タンパク質２（Ｌ３ＭＢＴＬ２）、ｎＲＮＡ－活性化タンパク質複合体サブユニット４（ＳＮＡＰＣ４）、リジン特異的脱メチル化酵素５（ＫＤＭ５）、転写因子ＣＯＥ１（ＥＢＦ１）、フォークヘッドボックスタンパク質Ｊ２（ＦＯＸＪ２）、活性化Ｔ細胞細胞質の核因子１（ＮＦＡＴＣ１）、ｍＲＮＡ低下アクチベータータンパク質ＺＦＰ３６（ＺＦＰ３６）、肝がん誘発性成長因子（ＨＤＧＦ）、ＥＴＳ関連の転写因子Ｅｌｆ－１（ＥＬＦ１）、前骨髄球性白血病タンパク質（ＰＭＬ）、Ｍｙｂ関連性タンパク質ＢＭＹＢＬ２、マザー・アゲインスト・デカペンタプレジック・ホモロジー２（ＳＭＡＤ２）、クロモドメイン－ヘリカーゼ－ＤＮＡ－結合タンパク質２（ＣＨＤ２）、転写１のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ１）、ペアボックスタンパク質Ｐａｘ５（ＰＡＸ５）、転写２のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子（ＳＴＡＴ２）、ピゴパスホモログ２（ＰＹＧＯ２）、インターフェロン制御因子９（ＩＲＦ９）、ポリコーム・グループ・ＲＩＮＧフィンガータンパク質２（ＰＣＧＦ２）、および環状ＡＭＰ依存性転写因子ＡＴＦ－３（ＡＴＦ３）からなる群より選択される１または複数のタンパク質を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ＩＬ２３Ａ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２（ＣＣＬ２）、およびＳＬＩＴ－ＲＯＢＯＲｈｏＧＴＰａｓｅ－活性化タンパク質１（ＳＲＧＡＰ１）からなる群より選択される１または複数の遺伝子を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、ＣＲＢＮ結合タンパク質またはＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
（ａ）ＣＲＢＮ結合タンパク質が、イカロス、アイオロス、およびＺＦＰ９１からなる群より選択される、または
（ｂ）ＣＲＢＮ結合タンパク質の転写標的が、ＢＣＬ６、ｃ－ＭＹＣ、およびＩＲＦ４からなる群より選択される、請求項２９に記載の医薬組成物。
バイオマーカーがインターフェロン誘導性遺伝子を含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、インターフェロン調節７（ＩＲＦ７）、インターフェロン誘発のテトラトリコペプチド反復単位３を有するタンパク質（ＩＦＩＴ３）、ＤＥＡＤボックスタンパク質５８（ＤＤＸ５８）、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、Ｔ細胞活性化のマーカーを含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
Ｔ細胞活性化のマーカーがＴ細胞活性化関連サイトカインを含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
Ｔ細胞活性化関連サイトカインがインターロイキン２（ＩＬ－２）を含む、請求項３４に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、エフェクターサイトカインまたはエフェクターケモカインを含む、
請求項５または６に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項３６に記載の医薬組成物。
サンプル中のバイオマーカーが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも高い、請求項１４～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
サンプル中のバイオマーカーが、バイオマーカーの参照となるレベルよりも低い、請求項１４～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
バイオマーカーが白血球で発現される、請求項５、６、１０～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
白血球がリンパ系細胞を含む、請求項４０に記載の医薬組成物。
リンパ系細胞がＴ細胞を含む、請求項４１に記載の医薬組成物。
血液がんを治療する医薬製造するための、式（Ｉ）：
で示される化合物、あるいはそのエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、互変異性体、アイソトポログ、または医薬的に許容される塩の有効成分としての使用であって、該治療が、
（ａ）血液がんの対象から第１のサンプルを採取し；
（ｂ）第１のサンプル中のバイオマーカーのレベルを生体外で測定し；
（ｃ）治療的に効果的な量の該有効成分を該対象に投与し；
（ｄ）治療を施した後の対象から少なくとも１つのさらなるサンプルを採取し；および
（ｅ）少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルを測定し；
仮に少なくとも１つのさらなるサンプル中のバイオマーカーのレベルが、第１のサンプル中のバイオマーカーのレベルであるか、またはその付近であるならば、その場合にはもう一つ別の治療的に効果的な量の該有効成分を該対象に投与することを含む、使用
。
バイオマーカーがイカロスを含む、請求項４３に記載の使用。
バイオマーカーが白血球で発現される、請求項４４に記載の使用。
白血球が骨髄細胞を含む、請求項４５に記載の使用。
骨髄細胞が好中球を含む、請求項４６に記載の使用。
バイオマーカーが、表現型がＣＤ１１ｂ^＋、ＣＤ３４^－、およびＣＤ３３^－である好中球を含む、請求項４３に記載の使用。
化合物が、
（ａ）（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩、
（ｂ）（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオン、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩、
（ｃ）（Ｓ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオンと、（Ｒ）－２－（２,６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１,３－ジオンとの、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは医薬的に許容される塩との混合物
を含む、請求項５、６、１０～４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
治療的に効果的な量の第２の活性剤またはサポートケア治療剤を投与することをさらに含む、請求項５、６、１０～４２、４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２の活性剤が、ＨＤＡＣ阻害剤（例、パノビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、またはシタリノスタット）、ＢＣＬ２阻害剤（例、ベネトクラクス）、ＢＴＫ阻害剤（例、イブルチニブまたはアカラブルチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例、エベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例、イデラリシブ）、ＰＫＣβ阻害剤（例、エンザスタウリン）、ＳＹＫ阻害剤（例、フォスタマチニブ）、ＪＡＫ２阻害剤（例、フェドラチニブ、パクリチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、またはモメロチニブ）、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例、アリセルチブ）、ＥＺＨ２阻害剤（例、タゼメトスタット、ＧＳＫ１２６、ＣＰＩ－１２０５、３－デアザネプラノシンＡ、ＥＰＺ００５６８７、ＥＩ１、ＵＮＣ１９９９、またはシネファンギン）、ＢＥＴ阻害剤（例、ビラブレシブまたは４－［２－（シクロプロピルメトキシ）－５－（メタンスルホニル）フェニル］－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン）、低メチル化剤（例、５－アザシチジンまたはデシタビン）、化学治療剤（例、ベンダムスチン、ドキソルビシン、エトポシド、メトトレキサート、シタラビン、ビンクリスチン、イホスファミド、メルファラン、デキサメタゾン、またはオキサリプラチン）、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例、リツキシマブまたオビヌツズマブ）、エピジェネティック化合物、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項５０に記載の医薬組成物。
第２の活性剤が
（ａ）リツキシマブ、
（ｂ）オビヌツズマブ
を含む、請求項５１に記載の医薬組成物。
血液がんが、造血組織またはリンパ系組織に影響を及ぼす、請求項５、６、１０～４２、４９～５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
血液がんが非ホジキンリンパ腫を含む、請求項５、６、１０～４２、４９～５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
非ホジキンリンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含む、請求項５４に記載の医薬組成物。
ＤＬＢＣＬが、従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である、請求項５５に記載の医薬組成物。
血液がんが、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）を含む、請求項５３に記載の医薬組成物。
ＣＬＬ／ＳＬＬが、従来の療法に対して再発性、難治性または抵抗性である、請求項５７に記載の医薬組成物。
サンプルが血液がん細胞を含む、請求項５、６、１０～４２、４９～５８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
バイオマーカーのレベルを測定することが、
（ａ）バイオマーカーのタンパク質のレベル、
（ｂ）バイオマーカーのｍＲＮＡのレベル、または
（ｃ）バイオマーカーのｃＤＮＡのレベル
を測定することを含む、請求項５、６、１０～４２、４９～５９のいずれか一項に記載の医薬組成物。