JP7660801B2

JP7660801B2 - 脳透過性ｂｔｋ又はｈｅｒ２阻害剤としての化合物およびその製造方法と応用

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Publication number: JP7660801B2
Application number: JP2023502793A
Authority: JP
Inventors: ユエ，チュンチャオ; リウ，グァンフェン; リ，シャイ; リ，ジン; チェン，ガン; ヘ，ヤントン; ツェン，ルイ; ユアン，チェングアン; リ，インフ
Original assignee: Chengdu Hyperway Pharmaceuticals Co Ltd; Shenzhen Hyperway Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Chengdu Hyperway Pharmaceuticals Co Ltd; Shenzhen Hyperway Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2020-07-15
Filing date: 2021-07-13
Publication date: 2025-04-14
Anticipated expiration: 2041-07-13
Also published as: TWI826819B; AU2021307502B2; CN115989231A; JP2023533350A; JP7660800B2; AU2021307502A1; CN113943294A; TW202220995A; WO2022012510A1; JP2023533349A; EP4186906A1; US20230257383A1; CA3185574A1; TW202220996A; US20230364079A1; CN115989231B; KR102887887B1; CN116113633A; KR20230038530A; WO2022012509A1

Description

相互参照

本出願は、２０２０年０７月１５日に中国特許庁に出願され、出願番号２０２０１０６７９７７６．６、発明の名称「ＢＴＫ阻害剤としての化合物およびその製造方法と使用」である中国特許出願の優先権を主張し、また、２０２０年１１月２５日に中国特許庁に出願され、出願番号２０２０１１３３７０２２．９、発明の名称「ＢＴＫ阻害剤としての化合物およびその製造方法と使用」である中国特許出願の優先権を主張し、それらの全内容が援用により本出願に組み込まれる。

本発明は、医薬の技術分野に関し、特に、脳透過性の良好なＢＴＫ又はＨＥＲ２プロテインキナーゼ阻害剤としての化合物およびその製造方法と使用に関する。

ブルトン型チロシンプロテインキナーゼ（ＢＴＫ）は、非受容体タンパク質チロシンキナーゼＴｅｃファミリーのメンバーであり、主に様々な造血細胞系株で発現される。Ｔｅｃファミリーは、ヒト非受容体キナーゼの中でＳｒｃファミリーに次いで２番目に大きいファミリーであり、その主なメンバーとしてＢＴＫ、ＢＭＸ（ｅｔｋ）、ＩＴＫ、ＴＥＣ及びＴＸＫ（ＲＬＫ）を含む。１９９３年、ＢＴＫはヒトＸ－連鎖無ガンマグロブリン血症（Ｘ－１ｉｎｋｅｄａｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ，ＸＬＡ）における欠損タンパク質として同定された。ＢＴＫは、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達経路の重要な調節因子であり、Ｂ細胞の活性化、増殖、分化及び生存において重要な役割を果たし、様々なＢ細胞腫瘍及び自己免疫疾患と密接に関連している。

ＢＴＫ構造には、ＰＨドメイン（プレクストリンホモロジー）、ＴＨドメイン（Ｔｅｃホモロジー）、ＳＨ３ドメイン（Ｓｒｃホモロジー３）、ＳＨ２ドメイン（Ｓｒｃホモロジー２）及びＳＨｌドメイン（Ｓｒｃホモロジー１）の５つの主ドメインが含まれる。ＢＴＫの活性化（リン酸化）は、最初にＳＨｌドメインの活性化環に発生し、さらに主要な自己リン酸化部位を含むＳＨ２及びＳＨ３ドメインに活性化が発生する。これらのＳＨドメインには、ＢＴＫが核細胞質シャトルを行うために必要とする核局在化シグナル（ＮＬＳ）及び核輸出シグナル（ＮＥＳ）も含まれる。

ＢＴＫは、Ｂリンパ球の生成においてかけがえのない役割を果たし、細胞周期の正の調節因子と分化因子を活性化することでＢ細胞の発生、分化を制御することができ、アポトーシス促進タンパク質とアポトーシス耐性タンパク質の発現を調節することでＢ細胞の生存と増殖を制御することもできる。ＢＴＫの持続的な活性化は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の発症の前提条件であって、異常なＢＣＲ－ＢＴＫシグナル伝達は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）における活性化されたＢ細胞サブタイプの生存を促進する可能性がある。ＢＴＫの機能獲得型変異は、大腸癌、急性リンパ球白血病（ＡＬＬ）、慢性顆粒球白血病（ＣＭＬ）にも確認されている。このように、ＢＴＫ依存性経路の異常な活性化が、様々な腫瘍の発生や進展に密接に関係していることが証明されている。

現在、承認された不可逆的なＢＴＫ阻害剤としては、例えば、イブルチニブ（Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）、アカラブルチニブ（ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ）、ザヌブルチニブ（Ｚａｎｕｂｒｕｔｉｎｉｂ）が挙げられ、それらのいずれもＢＴＫのシステイン残基（Ｃｙｓ－４８１）と選択的に不可逆的な共有結合を形成し、ＢＴＫ活性を阻害することにより関連する疾患を治療することを図るものである。しかし、一部のがん患者は第一世代のＢＴＫ阻害剤に対する耐性を獲得することがあるから、解決されていない新たな臨床的要望が生まれる。研究によると、ＢＴＫ－Ｃ４８１Ｓ変異はその薬剤耐性の主メカニズムの１つであるため、ＢＴＫ－Ｃ４８１Ｓ変異を標的にして阻害できる薬物は、新しい治療レジメンとして提供することが期待されている。例えば、ＡＲＱ－５３１は、経口で生物学的に利用可能、有効、かつ可逆的な、野生型及びＣ４８１Ｓ変異に対するＢＴＫ二重阻害剤であり、Ｃ４８１Ｓ変異のＢＴＫ患者に対して有効であることがＡＲＱ－５３１の初期的な臨床結果により示されている。

中枢神経系原発悪性リンパ腫（ＰＣＮＳＬ）は、年間発生率が約０．４７／１０万であり、中国で罹患している人数が毎年１万人以上である。何十年にもわたる治療開発を重ねたところ、現在、一次治療レジメンは、画像的客観寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＣＲ）を実現するために高用量メトトレキサート（ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、ＨＤ－ＭＴＸ）を基本的導入化学療法とし、全脳放射線療法（ｗｈｏｌｅ－ｂｒａｉｎｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ、ＷＢＲＴ）を地固め治療とするものであり、このレジメンのＯＳ中央値が３０～５０ヶ月に達する可能がある。しかし、このレジメンでは、重度の神経毒性を引き起こすことがあり、また、毒性は患者の年齢と放射線量とともに増加し、記憶喪失、認知障害、歩行障害、認知症などの症状として現れ、患者の生活の質に深刻な影響を与える恐れがある。ＰＣＮＳＬ地固め治療における自家造血幹細胞移植と全脳放射線療法の治療効果の優劣性を検討した研究もあるが、結果として両者に差がなかったことが示された。なお、全脳放射線療法は患者の脳機能に不可逆的な損傷を与える恐れがある。どの治療レジメンでも、予後は不良である。

血液脳関門（ｂｌｏｏｄｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ、ＢＢＢ）の存在のため、慣用の免疫化学療法が浸透することが困難にあり、治療効果が乏しい。一次又は二次ＣＮＳ浸潤の治療に用いられる薬剤は、その治療効果が血液脳関門を通過した後の脳内分布に依存し、親油性分子のみが受動拡散してＢＢＢを容易に通過することができる。例えば、リツキシマブなどの従来の免疫化学療剤はモノクローナル抗体であり、分子量が大きく、血液脳関門を通過することが困難であるため、十分な治療効果を発揮することができない。

ＰＣＮＳＬの発症機構がますます深く研究されるにつれて、近年、ＢＣＲ経路の分子に対する特異的標的薬剤は、画期的な進歩を達成し、これらの患者に新しい治療オプションをもたらした。ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、ＢＣＲシグナル経路とＮＦ－κＢシグナル経路を接続するキナーゼであり、ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ阻害を治療する基本標的である。ＢＴＫ阻害剤は、ＢＣＲ経路におけるＭＹＤ８８及びＣＤ７９Ｂに直接作用する選択的薬剤であり、中枢神経系リンパ腫におけるＢＣＲシグナル経路の変異は、しばしばＭＹＤ８８及びＣＤ７９Ｂに支配されるものである。ＰＣＮＳＬは、ＷＨＯ２００８分類に基づいて免疫組織化学の結果を合わせて診断する必要があり、主要なマーカーとしては、すべてのＢ細胞マーカー（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＰＡＸ５）、ＢＣＬ６、ＭＵＭ１／ＩＲＦ４及びＣＤ１０が含まれる。中枢神経系悪性腫瘍ＮＣＣＮガイドライン（２０２０．Ｖ１）では、ＢＴＫｉを再発性及び難治性のＰＣＮＳＬに適用することが推奨されている。

２０２０年３月、ＢＴＫ阻害剤であるベレキシブル（チラブルチニブ塩酸塩）が日本で再発性又は難治性の中枢神経系原発悪性リンパ腫（ＰＣＮＳＬ）の治療薬として承認され、ベレキシブルは、再発性又は難治性のＰＣＮＳＬの治療薬として世界的に承認された最初のＢＴＫ阻害剤である。結果は、ベレキシブル治療後、患者の５２．９％が効果的な寛解を達成したことを示した。再発／難治中枢神経系リンパ腫におけるチラブルチニブの第Ｉ／ＩＩ相試験では、再発／難治性ＣＮＳＬ患者４４例が登録され、第１相には３＋３用量漸増設計を使用し、３２０及び４８０ｍｇのチラブルチニブを１日１回投与（ＱＤ）することで、２８日以内に用量制限毒性（ＤＬＴ）を評価し、第２相には絶食条件下で４８０ｍｇのチラブルチニブＱＤを投与した。その結果、３２０ｍｇと比較して、４８０ｍｇ患者のＯＲＲとＰＦＳが優れており、ＯＲＲ：３２０ｍｇｖｓ．４８０ｍｇｖｓ．４８０ｍｇ（絶食条件）＝６０％ｖｓ．１００％ｖｓ．５２．９％、ＰＦＳ：３２０ｍｇｖｓ．４８０ｍｇｖｓ．４８０ｍｇ（絶食条件）は２．１ｖｓ．１１．１ｖｓ．５．８ヶ月であった。なお、４８０ｍｇ（絶食群）は３２０ｍｇ群よりもＯＲＲが低いのは、患者の特性の違いに起因するだろうと考えられている。チラブルチニブは、各用量下での血漿中薬物濃度がほぼ同等であり、また、４つの異なる時点で、チラブルチニブは３２０ｍｇ、４８０ｍｇ群よりＣＳＦトラフ濃度が高く、血中薬物濃度の増加に伴い脳脊髄液濃度が増加し、それから中枢神経系リンパ腫の治療効果は脳脊髄液濃度（ＣＳＦ）中のＢＴＫｉの薬物濃度に関連していることが分かる。

ＰＣＮＳＬに対する治療薬は、限られているし、ＰＦＳやＯＳも期待より十分ではない。海外で第一世代の不可逆的なＢＴＫ阻害剤（チラブルチニブ）がこの疾患の治療薬として承認されているが、この薬物はＢＴＫタンパク質に対する活性が弱く、臨床用量が高く（１日１回４８０ｍｇ）、副作用が明らかであり、患者のコンプライアンスが低く、一定時間服用されるとＣ４８１Ｓ変異による薬剤耐性が生じる恐れがある。

研究によると、ＢＴＫ阻害剤は、関節リウマチ、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬などの自己免疫疾患にも使用できるということである。その中でも、多発性硬化症の発症原理は、脳の病変に直接関係している。２０１９年、世界の多発性硬化症治療薬の市場規模は２５０億米ドルであり、２０２７には４０６．６億米ドルに達することが見込まれ、期間複合年間増殖率が７．１％になると予測される。臨床及び経済研究データによると、ＭＳの年間治療費は２８，０００米ドルであるというものである。ＢＴＫは、Ｂ細胞受容体シグナル経路の重要なキナーゼとして、Ｂリンパ球、マクロファージ及びミクログリア細胞などのＭＳの病理学的プロセスに関与する免疫細胞の発達および機能に重要である。そのため、ＢＴＫ阻害剤により、ＭＳなどの自己免疫疾患の治療に新しい治療オプションを提供することが期待されている。

ＨＥＲ２（ヒト上皮増殖因子受容体－２）は、ＥＲＢＢ２とも呼ばれ、１７番染色体に位置し、癌原遺伝子に属する。コードされた産物であるＨＥＲ２タンパク質は、チロシンプロテインキナーゼ活性を持つ膜貫通型タンパク質であり、ＥＧＦＲファミリーのメンバー１つに属し、乳がん、卵巣がん及び胃癌などの様々ながんで過剰発現されている。ＨＥＲ２は、細胞の増殖や、分化、生存を媒介し、癌細胞の攻撃性拡散を促進するものである。

乳がんの約１５％～２０％がＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）である。ＨＥＲ２陰性がんと比較して、ＨＥＲ２＋腫瘍は攻撃性が高く、より短い生存時間、より低い全体生存率、より高い再発のリスク及び中枢神経系疾患（脳転移）に関連している。ＨＥＲ２＋乳がん患者の約３０％～５０％は時間とともに脳転移を発症することがある。

２０１８年のＧＬＯＢＯＣＡＮ統計レポートによると、世界中の乳がんの新規症例数は２１０万人に近く、発生率は２７．５／１０万で、全種類の腫瘍の症例数の１１．６％を占めているということである。世界中の新規症例数と死亡者数との比較から見ると、乳がんは全世界の女性のがん関連死亡における第１位の原因であり、罹患率および死亡率が最も高い。中国の乳がん発生率は、４３／１０万と高く、女性の悪性腫瘍の中で第１位である。２０１８年、中国では３６．８万例近くの乳がんの症例が増加し、乳がん治療薬の金額が４００億元に達した。中国での乳がん発生率の増加率は、世界平均の増加率の２倍（年間３０万余り増加）であり、世界第１位である。脳転移を伴うＨＥＲ２陽性の乳がん患者には有効な治療法がなく、死亡率が高い（１０万人あたり１０人が乳がんで死亡したこと）。

トゥキーザ（Ｔｕｋｙｓａ、ツカチニブ）は、ＨＥＲ２に対する優れた標的選択性を有する低分子経口チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）として知られており、２０１９年にはＦＤＡより画期的治療薬の指定（ＢＴＤ）が付与され、画期的治療薬指定のほかにも２０１７年にファストトラック指定、希少疾病用医薬品指定も受けられた。また、トゥキーザは、（トラスツズマブ及びカペシタビンと組み合わせて、トラスツズマブ、ペルツズマブ、Ｔ－ＤＭ１（ａｄｏ－ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｅｍｔａｎｓｉｎｅ）による治療を受けた局所進行性、切除不能又は転移性（脳転移を伴うものを含む）のＨＥＲ２陽性乳がん患者の治療に用いられる。

本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、ＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤としての化合物およびその製造方法と使用を提供する。本発明で提供される化合物は、ＢＴＫプロテインキナーゼ阻害剤又はＨＥＲ２プロテインキナーゼ阻害剤として使用する可能性があり、阻害活性が高いなどの特徴を有する。

本発明は、式Ｉで示される構造を有する化合物、或いはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態、薬学的に許容される水和物、溶媒和物又は塩を提供する。

式中：Ａ₁、Ａ₂、Ａ₃、Ａ₄、Ａ₅、Ａ₆はそれぞれ独立してＣ－Ｒ₅又は窒素（Ｎ）から選択され、かつＡ₁、Ａ₂、Ａ₃、Ａ₄、Ａ₅、Ａ₆の少なくとも１つはＮであり、
Ｍは、置換若しくは非置換の飽和炭化水素基又はヘテロ飽和炭化水素基、置換若しくは非置換の不飽和環式基又は複素環式基、置換若しくは非置換の単環式、二環式又は三環式アリール基又はヘテロアリール基から選択され、前記置換された基はそれぞれ独立して任意の基で置換されたアリール基又はヘテロアリール基、アルキル基又はヘテロアルキル基、シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基、不飽和環式基又は複素環式基、フェノキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、エステル基、ニトロ基、メルカプト基、アミド基、スルホニル基、ホスホニル基、アルキルオキシリン基、アルキルスルホン基、アルキルスルホキシド基から選択され、また、前記置換された基は、任意の基で置換されたアリール基又はヘテロアリール基であり、より好ましくは、任意の基で置換されたフェニル基であり、
Ｑは、Ｃ－Ｒ₁₀Ｒ₁₁、Ｎ－Ｒ₁₂、酸素（Ｏ）、硫黄（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂から選択され、
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂はそれぞれ独立して水素、重水素、ハロゲン、置換若しくは非置換のアルキル基又はヘテロアルキル基、置換若しくは非置換のシクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基、置換若しくは非置換の不飽和環式基又は複素環式基、置換若しくは非置換のアリール基又はヘテロアリール基、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、エステル基、ニトロ基、メルカプト基、アミド基、スルホニル基、ホスホニル基、アルキルオキシリン基、アルキルスルホン基、アルキルスルホキシド基から選択され、又は、Ｒ₃、Ｒ₄は、それらに相連している炭素原子とともに置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ１０シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基を形成し、前記置換の置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、メルカプト基、ニトロ基、カルボキシ基、ヒドロキシアミノ基、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、エステル基、アシル基、アミド基、スルホニル基、ホスホニル基から選択され、
ｍは０～６の整数から選択され、ｎは０～３の整数から選択される。

本発明に係る化合物は、互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態、薬学的に許容される水和物、溶媒和物又は塩などを含む、式Ｉの構造を有する任意の形態をしている。

本発明では、「～群から選択される」は、一般に、群を構成するものが並列関係である。式Ｉで示される構造では、好ましくはＡ₁、Ａ₂、Ａ₃、Ａ₄、Ａ₅、Ａ₆の３つ又は４つがＮであり、Ｒ₂の位置は限定されず、Ｒ₁のパラ位が好ましい。本出願では、前記置換は、一置換又は多置換（例えば、二置換、三置換）であってもよく、具体的な置換位置は特に限定されない。前記非置換の飽和炭化水素基には、非置換のアルキル基及び非置換のシクロアルキル基が含まれる。前記複素環式基、ヘテロアリール基などの基は、その中の１つ又は複数の炭素原子がヘテロ原子で置換され得るものであり、ヘテロ原子は、炭素（Ｃ）以外の酸素、硫黄、窒素、リン（Ｐ）などの原子である。また、上記ハロゲンとしては、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）などが挙げられ、フッ素又は塩素が好ましい。上記「Ｃ３～Ｃ１０」は、炭素数が３～１０から選択される整数である。以下、同様な表現は繰り返さない。

本発明では、橋かけ原子が化学結合で環に結合して形成された環系（次の式に示す）は、橋かけ原子が環の上の任意の接続可能なＣ原子に接続することにより任意のスピロ環又は橋かけ環構造化合物を形成できることを意味する。例えば、次の式は、橋かけ原子Ｑが６員環上の任意の橋かけ原子に接続可能なＣ原子に接続することができることを示しており、即ち、橋かけ原子が同じのＣ原子に接続してスピロ化合物を形成し、例えば橋かけ原子が２番目のＣ原子に接続したりすべて３番目のＣ原子に接続したりすること、また、橋かけ原子が異なるＣ原子に連続して橋かけ環化合物を形成し、例えば、橋かけ原子がそれぞれ１、４番目のＣ原子又は２、４番目のＣ原子に接続することがある。

好ましくは、前記化合物は、式ＩＩで示される構造を有し、或いはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態、薬学的に許容される水和物、溶媒和物又は塩である。

式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６ヘテロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、また、Ｒ₁は、水素、アミノ基、メチル基、エチル基、メトキシ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基から選択され、さらにまた、Ｒ₁は、水素（Ｈ）、アミノ基（ＮＨ₂）、メチル基（ＣＨ₃）から選択され、
Ｒ₂は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６ヘテロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、また、Ｒ₂は、水素、フッ素、塩素、臭素、メチル基、エチル基、メトキシ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基から選択され、さらにまた、Ｒ₂は、水素、塩素、メチル基から選択され、
Ｒ₃、Ｒ₄は、水素、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６ヘテロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ₃、Ｒ₄は、それらに相連している炭素原子とともに置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基又はＮ、Ｏ原子を含むヘテロシクロアルキル基を形成し、
また、Ｒ₃、Ｒ₄は、水素、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基から選択され、又はＲ₃、Ｒ₄は、それらに相連している炭素原子とともにシクロプロピル基、アゼチジニル基、アザシクロペンチル基、アザシクロヘキシル基、オキセタニル基、オキサシクロペンチル基、オキサシクロヘキシル基を形成し、
Ｒ₆は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ６ヘテロアルキル基、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、また、Ｒ₆は、水素、ハロゲン、シアノ基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ３アルキル基、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ３アルキルオキシ基から選択され、また、Ｒ₆は、水素、フッ素、塩素、臭素、トリフルオロメチル基、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基から選択され、さらにまた、Ｒ₆は水素又はフッ素である。

ｍは０、１、２、３から選択され、ｎは０、１、２から選択され、ｎ１は０、１、２、３、４から選択され、
Ｒ₇は、置換若しくは非置換のアリール基、置換若しくは非置換のピリジル基から選択され、ここでは、前記置換の置換基は独立してハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、アルキル基、ヘテロアルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基から選択され、また、前記置換基は独立してフッ素、塩素、臭素、シアノ基、アミノ基、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、Ｃ１～Ｃ３アルキルオキシ基、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、さらにまた、前記置換基は独立してフッ素、塩素、臭素、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、メトキシ基、重水素化メトキシ基、シクロプロピル基、シクロプロピルメトキシ基、エチル基、イソプロピル基、イソブチル基から選択され、ここでは、前記置換基の数は０～５の間の整数であり、

Ｘは

などの許容される結合基から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘは

であり、ただし、Ｒ₉、Ｒ₁₃独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、Ｃ１～Ｃ３アルキルオキシ基、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、或いは、Ｒ₉及びＲ₁₃は、それらに相連している炭素原子とともに置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基又はＮ又はＯを含む置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基を形成し、また、Ｒ₉及びＲ₁₃は、独立して水素、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、トリフルオロメチル基、イソブチル基から選択され、或いは、Ｒ₉及びＲ₁₃は、それらに相連している炭素原子とともにシクロプロピル基を形成し、さらにまた、水素、フッ素、重水素、塩素、メチル基、ヒドロキシ基、アミノ基から選択される。具体的には、Ｘは

であることがある。ただし、Ｘが

であるすべての化合物は、脳透過性ＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤として使用することができ、より好ましくは、Ｒ₉、Ｒ₁₃はともにフッ素から選択される。

本発明のいくつかの実施形態では、前記化合物は式ＩＩＩ、式ＩＶで示される構造を有し、或いはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態、薬学的に許容される水和物、溶媒和物又は塩である。

式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₆、Ｘの構造は前記の通りであり、ｍ、ｎ、ｎ１も前記の通りであり、例えば、Ｘは

などである。

式ＩＩＩ～式ＩＶ中には、ｎ２は０、１、２、３、４から選択され、
Ｒ₈は独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、アルキル基、ヘテロアルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基から選択され、また、Ｒ₈は独立して水素、フッ素、塩素、臭素、シアノ基、アミノ基、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、Ｃ１～Ｃ３アルキルオキシ基、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択され、さらにまた、前記置換基は独立して水素、フッ素、塩素、臭素、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、メトキシ基、重水素化メトキシ基、シクロプロピル基、シクロプロピルメトキシ基、エチル基、イソプロピル基、イソブチル基から選択され、ここでは、前記置換基の数は０～５の間の整数（端点を含む）であり、複数の置換基は同一でも異なっていてもよく、式ＩＶ中、置換若しくは非置換ピリジル基は、結合位置が限定されず、Ｎのオルト位に結合することがある。

本発明のいくつかの実施形態では、式ＩＩ～式ＩＶのＮ含有縮合環は、

で置換することができ、その丙端の単結合が連結するための結合である。なお、式ＩＩ～式ＩＶにおけるＸの構造では、曲線を付した単結合は連結ための結合を表す。Ｒ₆の位置は限定されていない。ｎ１は０、１又は２であることが好ましい。ｎ＝０の場合は５員環であり、ｎが１である場合は６員環であり、それを類推する。

好ましくは、式ＩＩ～式ＩＶ中には、Ｒ₁はアミノ基であり、Ｒ₂は水素又は塩素であり、Ｒ₆は水素又は一置換フッ素であり、式ＩＩにおけるＲ₇は置換若しくは非置換のフェニル基又はピリジル基であり、Ｘは主にエーテル又はアミド構造であり、アミドの窒素はＲ₇に結合している。好ましくは、ｎは０又は１であり、ｍは０又は２であり、Ｒ₃及びＲ₄はともに水素、メチル基であるか、又はそれらに相連している炭素原子とともにシクロプロピル基を形成する。

具体的には、本出願に記載の化合物の構造は、以下のいずれかから選択され（ただし、片末端が単結合のものは、化合物５の式５に示すようにメチル基である）、さらに好ましくは、式２、式５、式３４、式４２、式８９、式１００、式１０１、式１０３、式１０６、式１０９、式１１１、式１１４、式１１６、式１１８、式１２１、式１２５、式１３０、式１４５、式１４６、式１５２、式１５５で示されるこれらの化合物であり、性能が優れているためである。

本発明は、医薬組成物を提供し、この医薬組成物の有効成分は、前述の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物、薬学的に許容される塩若しくは共結晶から選択された１種又は複数種の組み合わせである。さらに、本発明では、前記医薬組成物の製剤の種類などについて特に限定されない。

本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤の製造における、前述の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物、薬学的に許容される塩若しくは共結晶の使用を提供し、また、前記キナーゼ阻害剤はＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤である。あるいは、本発明は、ＢＴＫキナーゼ又はＨＥＲ２キナーゼの過剰発現に起因した疾患を治療するための医薬品の製造における、前述の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物、薬学的に許容される塩若しくは共結晶の使用を提供する。

本発明は、自己免疫疾患、炎症性疾患、血栓塞栓疾患、アレルギー、感染性疾患、増殖性疾患及びがんから選択された任意の一つまたは複数の疾患を治療するための医薬品の製造における、前述の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物、薬学的に許容される塩若しくは共結晶の使用を提供する。

さらに、前記疾患は、関節炎、関節リウマチ、蕁麻疹、尋常性白斑、臓器移植の拒絶反応、潰瘍性大腸炎、クローン病、皮膚炎、喘息、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、特発性血小プレート減少性紫斑病、皮疹、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、天疱瘡、尋常性天疱瘡、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、乳がん、マントル細胞リンパ腫、卵巣がん、食道癌、喉頭癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃癌、肝細胞癌、胃癌、グリオーマ、子宮内膜癌、黒色腫、腎がん、膀胱癌、黒色腫、膀胱癌、胆道癌、腎がん、膵臓がん、リンパ腫、有毛細胞癌、上咽頭がん、咽頭癌、大腸癌、直腸癌、脳及び中枢神経系がん、子宮頸癌、前立腺がん、精巣がん、尿生殖路癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞癌、肺腺癌、骨がん、結腸がん、腺腫、膵臓がん、腺腫、甲状腺がん、濾胞癌、ホジキン白血病、気管支癌、甲状腺がん、子宮体癌、子宮頸癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球白血病、慢性リンパ性白血病、骨髓性白血病、非ホジキンリンパ腫、原発性マクログロブリン血から選択することができる。

従来技術では、ＡＲＱ－５３１の阻害活性は改善される余裕があり、ＴＭＤ８、ＲＥＣ－１などの細胞に対するその阻害活性が低く、過剰な臨床用量、高い副作用などの問題を招いた。また、ＡＲＱ－５３１は、選択性も悪く、ＴＥＣ、ＥＧＦＲに対して高い阻害活性を有し、出血、下痢、湿疹などの副作用を招きやすく、さらに、その薬物動態もあまり理想的ではなく、臨床前の研究によると、イヌのＰＫ実験では、生体利用率がわずか３８％であった。このように、ＡＲＱ－５３１には、阻害活性、選択性、薬物動態の点で改善の余地が十分にある。

ＰＣＮＳＬに対する治療薬は、限られているし、ＰＦＳやＯＳも期待より十分ではない。海外で第一世代の不可逆的なＢＴＫ阻害剤（チラブルチニブ）がこの疾患の治療薬として承認されているが、この薬物はＢＴＫタンパク質に対する活性が弱く、臨床用量が高く（１日１回４８０ｍｇ）、副作用が明らかであり、患者のコンプライアンスが低く、一定時間服用されるとＣ４８１Ｓ変異による薬剤耐性が生じる恐れがある。この薬物の臨床用量が高い理由は、主に２つあり、１つはこの化合物の活性が弱く、さらに重要なのはこの薬物の血液脳関門透過率が低く、血液脳関門を透過する薬物の有効濃度を達成するにはより多くの用量が必要である。だから、チラブルチニブには、阻害活性、薬物動態、脳透過率の点で改善の余地がずいぶんある。

ツカチニブは、ＨＥＲ２に対する優れた標的選択性を有する低分子経口チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）として知られており、２０１９年にはＦＤＡより画期的治療薬の指定（ＢＴＤ）が付与され、画期的治療薬指定のほかにも２０１７年にファストトラック指定、希少疾病用医薬品指定も受けられた。また、ツカチニブは、トラスツズマブ及びカペシタビンと組み合わせて、トラスツズマブ、ペルツズマブ、Ｔ－ＤＭ１（ａｄｏ－ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｅｍｔａｎｓｉｎｅ）による治療を受けた局所進行性、切除不能又は転移性（脳転移を伴うものを含む）のＨＥＲ２陽性乳がん患者の治療に用いられ、２０２０年４月１７日にアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された。この薬物は臨床用量が大きく、３００ｍｇずつ１日２回、副作用が明らかである。文献によると、マウスにおけるツカチニブの脳透過率が５％未満であるそうである。ツカチニブには、薬物動態、脳透過率の点で改善の余地がずいぶんある。

本発明の実施形態におけるインビトロＢＴＫ阻害及びＨＥＲ２阻害キナーゼ活性のアッセイには、前記化合物の粉末を１００％ＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの貯蔵液に調製することができ、暗所で－２０度で凍結保存する。キナーゼ反応中、被験化合物の試験濃度を１μＭとし、３８４ソースプレートで最終濃度の１００倍の１００％ＤＭＳＯ溶液に希釈し、化合物を３倍希釈して１０個の濃度にする。また、本発明の実施形態では、前記化合物を用いて肝ミクロソーム代謝安定性、ラットＰＫ、ラット脳透過率、薬物効果モデルなどの実験も行った。既存の臨床薬（ＡＲＱ－５３１）と比較して、本発明の化合物は、ＢＴＫプロテインキナーゼ阻害剤として、ＢＴＫ、ＢＴＫ（Ｃ４８１Ｓ）阻害活性、肝ミクロソーム代謝安定性、ラットにおける薬物動態、毒性において利点を有する。既存の市販薬チラブルチニブと比較して、本発明の化合物は、ＢＴＫプロテインキナーゼ阻害剤として、ＢＴＫ、ＢＴＫ（Ｃ４８１Ｓ）阻害活性、細胞活性、肝ミクロソーム代謝安定性、ラットにおける薬物動態、ラット血液脳関門透過性などにおいて利点を有する。本発明に係るＨＥＲ２阻害剤化合物は、ＨＥＲ２阻害活性、ＢＴ４７４細胞活性、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞活性の点で既存の市販薬ツカチニブと同等であり、ラット薬物動態及びラット血液脳関門透過率の点でツカチニブよりも有意に優れている。

本発明の実施形態では、目的化合物を以下に示される製造プロセスにより幾つ設計及び合成し、具体的には、中間体Ａ（式Ａで示されるボロン酸又はボロン酸エステル系化合物ともいう）、中間体Ｂ（式Ｂで示されるブロモ化合物）をＳｕｚｕｋｉ反応に供して中間体Ｃ（式Ｃで示される中間体）を合成し、さらに脱保護して式ＩＩで示される構造の化合物を得る。具体的な実施形態では、市販のボロン酸Ａ又は自作のボロン酸エステルＡと自作のブロモ化合物Ｂとをパラジウム触媒下でカップリングすることにより中間体Ｃを得、中間体Ｃを脱保護して実施形態の化合物を得る。第ＩＩ相臨床試験にあるＡＲＱ－５３１薬と比較して、本発明の化合物はＢＴＫ及びＢＴＫ（Ｃ４８１Ｓ）の阻害活性、肝ミクロソーム代謝安定性、ラットにおける薬物動態において明らかな改善を有する。

さらに、本発明の実施形態における以下の合成方法は、簡便で収率が高い。

本発明の実施形態は、上述したＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤を製造するための

（ただし、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、ｍ、ｎの説明は上記の通りである）、例えば、

で示される構造を有する中間体化合物を提供する。

さらに、他の中間体化合物としては、

などがある。

本発明の実施形態は、上述したＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤を製造するための、下記の構造を有する中間体化合物を提供する。また、以下に示す構造化合物は、血液脳関門透過性薬物の製造に使用することができる。

ただし、式Ａ’中、Ｒ６、Ｒ８、ｎ１、ｎ２の説明は上記の通りである。

図１は、本発明の一部の化合物のＴＭＤ８薬物効果モデルを用いた試験結果である。図２は、本発明の一部の化合物のＴＭＤ８薬物効果モデルを用いた試験結果である。図３は、本発明の一部の化合物のＤＯＨＨ－２－Ｌｕｃ脳腫瘍薬物効果モデルを用いた試験結果である。図４は、本発明の一部の化合物のＤＯＨＨ－２－Ｌｕｃ脳腫瘍薬物効果モデルを用いた試験結果の蛍光写真である。

以下、本発明の実施形態における技術案を明確かつ全面に説明するが、説明される実施形態は本発明の一部の実施形態にすぎず、すべての実施形態ではないことが明らかである。当業者が本発明における実施形態に基づいて創造的な努力なしに得られる他のすべての実施形態は、本発明の範囲内に入る。

本発明をさらに理解するために、以下に、実施例を参照しながら、本発明で提供されるＢＴＫプロテインキナーゼ阻害剤として使用できる化合物およびその製造方法と使用について具体的に説明する。

本発明の実施形態では、化合物の構造を、マススペクトル（ＭＳ）又は核磁気共鳴（¹ＨＮＭＲ）装置により決定した。「室温」という用語は、１０℃～２５℃の間を指す。化学略語は次の意味を有する。
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）：１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム
ＤＣＭ：ジクロロメタンＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＢＤＰＳＣｌ：リチウムビストリメチルシリルアミド
９－ＢＢＮ：９－ボラビシクロ［３．３．１］ノナン
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎ：デス－マーチン酸化剤
ＤＭＥ：ジメトキシエタンＴｏｓＭＩＣ：p-トルエンスルホニルメチルイソシアニド
ｔ－ＢｕＯＫ：カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド
Ｄｉｂａｌ－Ｈ：水素化ジイソブチルアルミニウムＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＮＢＳ：Ｎ－ブロモスクシンイミドＴＢＡＦ：テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド
ＨＢＴＵ：ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＢＡＳＴ：ビス（２－メトキシエチル）アミノサルファートリフルオリド
ＰＭＤＴＡ：ペンタメチルジエチレントリアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド
ｄｐｐｆ：１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム
ＴｓＣｌ：４－トルエンスルホニルクロリド
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＰＤＣ：重クロム酸ピリジニウム
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピルＮＣＳ：Ｎ－クロロスクシンイミド。

中間体Ａ－１の製造：

フラスコに化合物Ａ－１－１（５．０ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５０ｍＬ）、Ａ－１－２（１１．６ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２０．６ｇ、１５９．３ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換し、０℃に冷却し、ＨＡＴＵ（２４．２ｇ、６３．７ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、この反応混合物をゆっくりと室温まで昇温し、一晩攪拌して反応させ、ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応系に水を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１１．９ｇの生成物Ａ－１－３を得、収率が７６％であった。

フラスコに化合物Ａ－１－３（５．０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）、ジオキサン（５０ｍＬ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（５．２ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（２．５ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換し、反応液にＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）（５００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を加え、反応液に再度窒素置換し、この反応混合物を９０℃に加熱して一晩攪拌し、ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応系を冷却した後、シリカゲルを直接加えて攪拌し、その後シリカゲルカラムで精製して粗生成物を得、粗生成物を石油エーテルでスラリー化し、３．４ｇの生成物Ａ－１を得、収率が６２％であった。
中間体Ａ－２の製造：

フラスコに化合物Ａ－２－１（２．０ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）及びジオキサン（２０ｍＬ）を加え、氷水浴で冷却した。反応液に過酸化水素（２０ｍＬ、３０％）を滴下した後、反応液を室温で一晩攪拌し、反応を停止した。反応系に水を加え、酢酸エチルで４回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１．６ｇの生成物Ａ－２－２を得、収率が９６％であった。

フラスコに化合物Ａ－２－２（１．００ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２０ｍＬ）、ｐ－ブロモヨードベンゼン（１．９９ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムブロマイド（２３０ｍｇ、０．７０４ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（２．９９ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）及びヨウ化第一銅（１４０ｍｇ、０．７０４ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換した後、１４０℃に加熱し、一晩攪拌して反応させた。反応系を室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して８００ｍｇの生成物Ａ－２－３を得、収率が３８％であった。

フラスコに化合物Ａ－２－３（８００ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１６ｍＬ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（８２１ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５２８ｍｇ、５．３８ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換し、反応液にＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）（８０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）を加え、反応液に再度窒素置換し、この反応混合物を８０℃に加熱して１６時間攪拌した。反応系を冷却した後、シリカゲルを直接加えて混合し、その後シリカゲルカラムで精製して５２０ｍｇの生成物Ａ－２を得、収率が５６％であった。
中間体Ａ－３の製造：

フラスコに化合物Ａ－３－１（１．２８ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（４０ｍＬ）、Ａ－３－２（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）₂（９４５ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．５８ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）及び４Ａモレキュラーシーブ（１．６６ｇ）を加え、反応液を室温で一晩攪拌して反応させた。反応液を吸引濾過し、ろ液にシリカゲルを加えて混合し、その後シリカゲルカラムで精製して６００ｍｇの生成物Ａ－３－３を得、収率が４３％であった。

Ａ－３の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－４の製造：

フラスコに化合物Ａ－４－１（１．０６ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）、Ａ－３－２（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．４５ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１００℃に加熱し、一晩攪拌して反応させ、ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応系に水を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空で蒸発させた後、１．８ｇの生成物Ａ－４－２を得、収率が１００％であった。生成物を精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ａ－４の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

以下の化合物は上記中間体を製造する方法により、対応する市販の原料を用いて合成された。

中間体Ａ－１３の製造：

フラスコに化合物Ａ－１３－１（１．００ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）及びボロン酸トリイソプロピル（１．２５ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を－７０℃に冷却し、反応液にＬＤＡ（２ｍ、３．３ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、反応液をゆっくりと室温まで昇温し、希塩酸を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、スピン乾燥し、残渣をシリカゲルカラムで精製して８３８ｍｇの生成物Ａ－１３－２を得、収率が６７％であった。

Ａ－１３の合成方法は、Ａ－２－１からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１４の製造：

フラスコに化合物Ａ－１４－１（５００ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）、炭酸カリウム（６４７ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ）及び重水素化ヨードメタン（５６６ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃に加熱して一晩攪拌した。反応液を水に注ぎ、希塩酸で調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、スピン乾燥し、残渣をシリカゲルカラムで精製して４３２ｍｇの生成物Ａ－１４－２を得、収率が７６％であった。

Ａ－１４の合成方法は、Ａ－２－２からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１５の製造：

フラスコに化合物Ａ－２－３（５００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（８ｍＬ）を加え、反応液を－７０℃に冷却し、反応液に三臭化ホウ素のジクロロメタン溶液（１ｍ、５ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、２時間保温反応した。反応液に水を加えて反応をクエンチし、ジクロロメタンで２回抽出し、有機相を合わせ、スピン乾燥し、残渣をシリカゲルカラムで精製して３９０ｍｇの生成物Ａ－１５－１を得、収率が８２％であった。

フラスコに化合物Ａ－１５－１（２００ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、ブロモシクロプロパン（１７１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２７６ｍｇ、０．８４７ｍｍｏｌ）及びヨウ化ナトリウム（５３ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１５０℃に加熱して１５時間反応した。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、スピン乾燥し、残渣をシリカゲルカラムで精製して１２１ｍｇの生成物Ａ－１５－２を得、収率が５３％であった。

Ａ－１５の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１６の製造：

Ａ－１６の合成方法は、Ａ－１３－１からＡ－１３を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１７の製造：

フラスコに化合物Ａ－１７－１（２５０ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５ｍＬ）、ｐ－ブロモフェニルボロン酸（７０６ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）、醋酸銅（３２０ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）、ピリジン（４１８ｍｇ、５．２８ｍｍｏｌ）及び４Ａモレキュラーシーブ（粉末状、５００ｍｇ）を加え、反応液を大気環境下、室温で２日間攪拌し、反応液にシリカゲルを直接加えてスピン乾燥して混合し、シリカゲルカラムで精製して３６７ｍｇの生成物Ａ－１７－２を得、収率が７０％であった。

Ａ－１７の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１８の製造：

フラスコに化合物Ａ－１８－１（５００ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）、トルエン（１０ｍＬ）、シクロプロピルボロン酸（３１５ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１０３６ｍｇ、４．８８ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（６８ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）、醋酸パラジウム（３０ｍｇ）及び水（０．５ｍＬ）を加えた。反応液に窒素置換し、１００℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却した後、シリカゲルを直接加えてスピン乾燥して混合し、シリカゲルカラムで精製して３１６ｍｇの生成物Ａ－１８－２を得、収率が７８％であった。

Ａ－１８－３の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－１５－１を合成する方法を参照した。
Ａ－１８の合成方法は、Ａ－２－２からＡ－２を合成する方法を参照した。
以下の化合物は上記中間体を製造する方法により、対応する市販の原料を用いて合成された。

中間体Ａ－２１の製造：

フラスコに化合物Ａ－２１－１（５００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（８ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷塩浴で冷却し、反応液に臭化メチルマグネシウム（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、２．３ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、室温まで昇温して１時間反応させた。飽和アンモニウムクロライド水溶液を反応液に加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引濾過してスピン乾燥して５３５ｍｇの生成物Ａ－２１－１を得、収率が１００％であった。生成物をさらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ａ－２１の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－２２の製造：

Ａ－２の合成については、文献ＪｏｕｒｎａｌｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，ｖｏｌ．６３，＃１０、５１０２－５１１８を参照した。

中間体Ａ－２６の製造：

Ａ－２６－２の合成方法は、Ａ－１８－１からＡ－１８－２を合成する方法を参照した。

フラスコに化合物Ａ－２６－２（５００ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）、メタノール（８ｍＬ）及び水酸化ナトリウム水溶液（１ｍ、５．１ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で一晩反応させた。反応液を水で希釈し、希塩酸で調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引濾過してスピン乾燥して４４０ｍｇの生成物Ａ－２６－３を得、収率が９５％であった。生成物をさらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。

フラスコに化合物Ａ－２６－３（２００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、４－アミノフェニルボロン酸ピナコールエステル（２６８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４３０ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液にＨＡＴＵ（６３３ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を一括的に加え、混合物を室温で一晩反応させた。反応液に水を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して２１９ｍｇの生成物Ａ－２６を得、収率が５２％であった。
中間体Ａ－２７の製造：

フラスコに化合物Ａ－２１－１（１０００ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）、Ｓ－ｔ－ブチルスルフィンアミド（５１１ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ）及び１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、反応液にチタン酸テトラエチル（２１８４ｍｇ、９．５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１００℃に加熱して５時間攪拌した。反応液を冷却し、水を加えてクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して８８２ｍｇの生成物Ａ－２７－１を得、収率が６３％であった。

フラスコに化合物Ａ－２７－１（８８２ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１４ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷塩浴で冷却し、反応液に臭化メチルマグネシウム（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、２．９ｍＬ、２．９ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、室温まで昇温して１時間反応させた。飽和アンモニウムクロライド水溶液を反応液に加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して６３０ｍｇの生成物Ａ－２７－２を得、収率が６８％であった。

フラスコに化合物Ａ－２７－２（６３０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍＬ）を加え、その後塩化水素の１，４－ジオキサン溶液（４Ｍ、６ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間反応させた後、減圧下で濃縮・乾燥させた。残渣に水を加え、水酸化ナトリウム水溶液で調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して３７１ｍｇの生成物Ａ－２７－３を得、収率が８１％であった。

Ａ－２７の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－２８の製造：

Ａ－２８の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－２９の製造：

フラスコに化合物Ａ－２９－１（１０００ｍｇ、５．１７ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴で冷却した。反応液にイソプロピルマグネシウムクロリド（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、６．２ｍＬ、６．２ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、反応液を室温まで昇温して１時間攪拌し、反応液にｐ－フルオロベンズアルデヒド（７７０ｍｇ、６．２０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液を室温で１時間攪拌し、飽和アンモニウムクロライド水溶液を反応液に加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して６１２ｍｇの生成物Ａ－２９－２を得、収率が５０％であった。

フラスコに化合物Ａ－２９－２（６１２ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１２ｍＬ）及びＤｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎ酸化剤（１６３２ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１時間反応させた後、ＴＬＣにより反応が完全になったことが示された。反応液にシリカゲルを直接加えてスピン乾燥して混合し、シリカゲルカラムで精製して４９５ｍｇの生成物Ａ－２９－３を得、収率が８２％であった。

Ａ－２９の合成方法は、Ａ－２１－１からＡ－２７を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－３０の製造：

フラスコに化合物Ａ－３０－１（５００ｍｇ、２．９２ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）、ｐ－ブロモフェノール（６０７ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４８５ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を７０℃に加熱して一晩攪拌した。反応液を冷却し、吸引濾過し、酢酸エチルで洗浄し、ろ液を真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して７４２ｍｇの生成物Ａ－３０－２を得、収率が９７％であった。

Ａ－３０の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－３１の製造：

フラスコに化合物Ａ－３１－１（５００ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）、５－ブロモ－２－クロロピリミジン（５４６ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）及びＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）を加え、反応液を１５０℃に加熱して２時間攪拌した。反応液を冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して５８０ｍｇの生成物Ａ－３１－２を得、収率が６２％であった。

Ａ－３１の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－３４の製造：

フラスコに化合物Ａ－３４－１（５００ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３４４ｍｇ、３．５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１５２０ｍｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌しながら、反応液にＨＢＴＵ（１４４９ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）を一括的に加えた。反応液を室温で一晩攪拌し、反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで４回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して６００ｍｇの生成物Ａ－３４－２を得、収率が９６％であった。

フラスコに化合物ｐ－ブロモヨードベンゼン（８７６ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却した。反応液にｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、１．２４ｍＬ、３．１０ｍｍｏｌ）を滴下し、３０分間攪拌した後、反応液にＡ－３４－２（６００ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液をゆっくりと室温まで昇温して１時間反応させた。反応液に水を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して３６０ｍｇの生成物Ａ－３４－３を得、収率が４１％であった。

Ａ－３４の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－３５の製造：

Ａ－３５－２の合成方法は、Ａ－３４－２からＡ－３４－３を合成する方法を参照した。

Ａ－３５－３の合成方法は、Ａ－２９－２からＡ－２９－３を合成する方法を参照した。

Ａ－３５の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－４０の製造：

フラスコに化合物Ａ－３８（１００ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）、ヨードメタン（４８ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（５１ｍｇ、０．３７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を８０℃に加熱して５時間反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させた後、分取用シリカゲルプレートで精製して６２ｍｇの生成物Ａ－４０を得、収率が６０％であった。

中間体Ａ－４８の製造：

フラスコに化合物Ａ－１５－１（２００ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（４ｍＬ）及びジフルオロクロロ酢酸ナトリウム（２１５ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換し、１００℃に加熱して６時間反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１２８ｍｇの生成物Ａ－４８－１を得、収率が５４％であった。

Ａ－４８の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－５４の製造：

フラスコに化合物Ａ－５４－１（５００ｍｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、５－ブロモ－２－クロロピリミジン（７５２ｍｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）及び炭酸カリウム（６４５ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１００℃に加熱して４時間反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して５１１ｍｇの生成物Ａ－５４－２を得、収率が４６％であった。

Ａ－５４の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－５５の製造：

フラスコに化合物Ａ－５５－１（１．００ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２００ｍｇ）及びメタノール（２５ｍＬ）を加え、反応液に水素置換した後、水素圧（風船）下で一晩攪拌した。反応液を吸引濾過し、ろ液を直接スピン乾燥して１．００ｇの生成物Ａ－５５－２を得、収率が９９％であった。生成物を精製することなくそのまま次のステップで使用した。

フラスコに化合物Ａ－５５－２（８００ｍｇ、５．７９ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却した。反応液にｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、２．８ｍＬ、６．９５ｍｍｏｌ）を滴下し、３０分間攪拌した後、反応液にボロン酸トリメチル（７２３ｍｇ、６．９５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液をゆっくりと室温まで昇温して３０分間反応させた。反応を希塩酸でクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して４３０ｍｇの生成物Ａ－５５－３を得、収率が４１％であった。

Ａ－５５の合成方法は、Ａ－２－１からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－５６の製造：

フラスコに化合物Ａ－５６－１（５００ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）、ジブロモメタン（１０１８ｍｇ、５．８５ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（８ｍＬ）及び炭酸カリウム（１３４８ｍｇ、９．７５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１００℃に加熱して４時間反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して３２０ｍｇの生成物Ａ－５６－２を得、収率が５９％であった。

Ａ－５６の合成方法は、Ａ－５５－２からＡ－５５を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－６０の製造：

フラスコに化合物Ａ－６０－１（５００ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）、ｐ－ブロモフェノール（６８５ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（１０ｍＬ）及び炭酸セシウム（３．２０ｇ、９．９０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を８０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して８３０ｍｇの生成物Ａ－６０－２を得、収率が８２％であった。

Ａ－６０の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－６４の製造：

フラスコに化合物Ａ－６４－１（１．１９２ｇ、８．０５ｍｍｏｌ）、ブロモベンゼン（１０．１ｇ、６４．３ｍｍｏｌ）及び三塩化アルミニウム（２．１５ｇ、１６．１ｍｍｏｌ）を加え、反応液に窒素置換し、９０℃に加熱して３時間反応させた。反応液を冷却し、希塩酸に注ぎ、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせた。有機相を炭酸ナトリウム水溶液で３回抽出し、水相を希塩酸でｐＨ３に調整し、析出した固体を吸引濾過し、水洗し、濾過ケーキを回収し、真空で乾燥させて２．０ｇの生成物Ａ－６４－２を得、収率が８１％であった。生成物をさらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ａ－６４－３の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

フラスコに化合物Ａ－６４－３（２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（３ｍＬ）、アンモニウムクロライド（１５２ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２２０ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌しながら、反応液にＨＢＴＵ（３２４ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を一括的に加えた。反応液を室温で一晩攪拌し、反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲル分取プレートで精製して７０ｍｇの生成物Ａ－６４を得、収率が３５％であった。

中間体Ａ－６８の製造：

フラスコに化合物Ａ－６８－１（２００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）、ｐ－ブロモフェノール（３６１ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（２ｍＬ）及び炭酸カリウム（３８４ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１８０℃に加熱して８時間反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させた後、シリカゲル分取プレートで精製して６０ｍｇの生成物Ａ－６８－２を得、収率が１５％であった。

Ａ－６８の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－６９の製造：

Ａ－６９の合成方法は、Ａ－１－１及びＡ－１－２からＡ－１を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７０の製造：

フラスコに化合物Ａ－２１－１（２００ｍｇ、０．７６６ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（２６７ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４ｍＬ）及びトリフルオロメタンスルホン酸（３５ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で一晩攪拌した。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１９０ｍｇの生成物Ａ－７０－１を得、収率が１００％であった。

Ａ－７０の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７１の製造：

Ａ－７１の合成方法は、Ａ－５４－１からＡ－５４を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７２の製造：

フラスコに化合物Ａ－７２－２（２．００ｇ、８．０６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５ｍＬ）、Ａ－７２－１（１．３１ｇ、８．０６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３．１２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４．６０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を６０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１．５６ｇの生成物Ａ－７２を得、収率が４９％であった。
中間体Ａ－７３の製造：

反応管に化合物Ａ－２１－１（３００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）及びＢＡＳＴ（３ｍＬ）を加え、反応管を密閉し、９０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させた後、シリカゲル分取プレートで精製して２７０ｍｇの生成物Ａ－７３－１を得、収率が８３％であった。

Ａ－７３の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７４の製造：

フラスコに化合物Ａ－７４－１（１．００ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）、ＰＭＤＴＡ（１．４４ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却した。反応液にｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、３．３ｍＬ、８．３０ｍｍｏｌ）を滴下し、２時間保温攪拌した後、反応液にドライアイスを慎重に加え、反応液をゆっくりと室温まで昇温した。反応を希塩酸でクエンチし、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させて１．００ｇの生成物Ａ－７４－２を得、収率が７４％であった。生成物をさらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。

フラスコに化合物Ａ－７４－２（８００ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（８ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴で冷却した。反応液に三臭化ホウ素のジクロロメタン溶液（１７％、２７．７ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、反応液を室温まで昇温して３０分間反応させ、再び氷水浴で冷却し、メタノールをゆっくりと滴下して反応をクエンチし、反応液を直接真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して５６０ｍｇの生成物Ａ－７４－３を収率７６％で得た。

フラスコに化合物Ａ－７４－３（５６０ｍｇ、３．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、メチルアミンのアルコール溶液（３０％、５５７ｍｇ、５．３８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１３９２ｍｇ、１０．８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１７７５ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で一晩攪拌した。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで６回抽出し、有機相を合わせ、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して２５４ｍｇの生成物Ａ－７４－４を得、収率が４２％であった。

Ａ－７４の合成方法は、Ａ－１７－１からＡ－１７を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７５の製造：

Ａ－７５－１の合成方法は、Ａ－３４－１からＡ－３４－２を合成する方法を参照した。

フラスコに化合物Ａ－７５－１（５００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（８ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷塩浴で冷却した。反応液に臭化フェニルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（１ｍ、２．３ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、反応液をゆっくりと室温まで昇温して１時間攪拌した。反応を希塩酸でクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させて５３８ｍｇの生成物Ａ－７５－２を得、収率が１００％であった。生成物をさらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ａ－７５の合成方法は、Ａ－２１－１からＡ－７３を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７６の製造：

フラスコに化合物Ａ－７６－１（２００ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、ｐ－ブロモフェノール（２２８ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（２ｍＬ）及び炭酸セシウム（５３８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を８０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して２８０ｍｇの生成物Ａ－７６－２を収率７６％で得た。

フラスコに化合物Ａ－７６－２（２００ｍｇ、０．５９７ｍｍｏｌ）、メタノールナトリウム（１６１ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）及びＮＭＰ（２ｍＬ）を加え、反応液を８０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１１６ｍｇの生成物Ａ－７６－３を得、収率が５６％であった。

Ａ－７６の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７７の製造：

Ａ－７７－３の合成方法は、Ａ－３４－１からＡ－３４－３を合成する方法を参照した。

Ａ－７７の合成方法は、Ａ－２１－１からＡ－７３を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－７８の製造：

Ａ－７８－２の合成方法は、Ａ－３４－１からＡ－３４－２を合成する方法を参照した。

フラスコに化合物Ａ－７８－２（４７４ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（３０５ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡ（５ｍＬ）、亜鉛粉末（４７ｍｇ）、ｄｐｐｆ（９４ｍｇ）及びＰｄ₂（ｄｂａ）₃（９４ｍｇ）を加え、反応液に窒素置換し、１１０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して４７３ｍｇの生成物Ａ－７８－３を得、収率が１００％であった。

Ａ－７８－４の合成方法は、Ａ－３４－２からＡ－３４－３を合成する方法を参照した。

Ａ－７８の合成方法は、Ａ－２１－１からＡ－７３を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－８２の製造：

フラスコにジクロロメタン（５ｍＬ）を加え、窒素置換し、ドライアイス／アセトニトリル浴で－４０℃に冷却し、四塩化チタン（１４５３ｍｇ、７．６６ｍｍｏｌ）を加えた後、ジメチル亜鉛のトルエン溶液（１ｍ、７．７ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下、添加後、３０分間保温反応させた。反応液に化合物Ａ－２１－１（５００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液を滴下、添加後、１時間保温反応させた後、ゆっくりと室温まで昇温して一晩攪拌した。反応液に水を加えて反応をクエンチし、ジクロロメタンで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して３２６ｍｇの生成物Ａ－８２－１を得、収率が６２％であった。

Ａ－８２の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。

中間体Ａ－１０１の製造：

フラスコにｐ－ブロモヨードベンゼン（１．７１ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）を加え、窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却した後、ｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、２．４ｍＬ、６．０３ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、添加後、３０分間保温反応させた。Ａ－１０１－１（１．００ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）を秤量してテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解し、反応液に滴下し、１０分後、反応液をゆっくりと室温まで昇温した。反応液に水を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して１．４ｇの生成物Ａ－１０１－２を得、収率が７３％であった。

Ａ－１０１の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１０２の製造：

フラスコにＡ－１０１－２（５５０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（６ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷浴下でＤＡＳＴ（４０２ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を加え、２時間保温反応させた。重炭酸ナトリウム水溶液を加えて反応液をクエンチし、ジクロロメタンで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させた後、シリカゲル分取プレートで精製して４１０ｍｇの生成物Ａ－１０２を得、収率が７４％であった。

Ａ－１０２の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ａ－１０３の製造：

フラスコにＡ－１０３－１（５００ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）及び臭化水素酸の水溶液（５ｍＬ）を加え、氷浴で冷却し、亜硝酸ナトリウム（６４５ｍｇ、９．３５ｍｍｏｌ）を加えた後、２０分間保温反応させた。反応液にＣｕＢｒ（２．６９ｇ、１８．７５ｍｍｏｌ）の臭化水素酸の水溶液（５ｍＬ）を加え、反応液をゆっくりと室温まで昇温して３時間反応させた。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、真空で蒸発させた後、シリカゲルカラムで精製して６２０ｍｇの生成物Ａ－１０３－２を得、収率が８９％であった。

フラスコにＡ－１０３－２（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（５ｍＬ）を加え、窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却した後、ｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、０．１７ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、添加後、１時間保温反応させた。反応を希塩酸でクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発させて１７０ｍｇ粗生成物Ａ－１０３－３を得、粗生成物を精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ａ－１０３の合成方法は、Ａ－２－３からＡ－２を合成する方法を参照した。
中間体Ｂ－１の製造：

フラスコに化合物Ｂ－１－１（２．００ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１．４３ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ溶液（１０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴でＴＢＤＰＳＣｌ（５．３０ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）を加え、滴下完了後、氷を取り除き、この反応混合物を室温で１６時間攪拌した後、ＴＬＣにより反応が完全となったことが示された。反応液を水に注ぎ、反応液を酢酸エチルで２回抽出したものを合わせ、水で２回洗浄し、次いで飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、最後に無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空で直接蒸発させて６．６８ｇの生成物Ｂ－１－２を得、生成物を精製することなくそのまま次のステップで使用した。

フラスコにＢ－１－２（６．６８ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３５ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴下で９－ＢＢＮ（０．５ｍ、９１ｍＬ）を滴下し、滴下完了後、この反応混合物を室温で１６時間攪拌し、ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応液を再び氷水浴で冷却し、１０％ＮａＯＨ溶液（２４ｍＬ）と３０％Ｈ₂Ｏ₂溶液（１２ｍＬ）をゆっくりと加え、１時間攪拌を続け、ＴＬＣは中間体の反応が完全であることを示した。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出したものを合わせて、水で２回洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、シリカゲルを直接加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して６．４９ｇの生成物Ｂ－１－３を得、二つのステップの収率が１００％であった。

フラスコに化合物Ｂ－１－３（６．４９ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５０ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴でフラスコにＤｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎ酸化剤（１１．１４ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）を加え、１．５時間攪拌した後、ＴＬＣにより反応が完全となったことが示された。シリカゲルを直接加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して６．４５ｇの生成物Ｂ－１－４を得、収率が１００％であった。

フラスコに化合物Ｂ－１－４（６．４５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）、エタノール（９２６ｍｇ、２０．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（６０ｍＬ）及びＴｏｓＭＩＣ（３．９２ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）を加え、窒素置換し、氷水浴で冷却した。反応液にｔ－ＢｕＯＫ（３．８３ｇ、３４．１ｍｍｏｌ）を加え、３０分間攪拌した後、ゆっくりと室温まで昇温し、１．５時間攪拌を続けた。ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応液を飽和ＮＨ₄Ｃｌ溶液（３５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出したものを合わせ、シリカゲルを加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して２．２７ｇの生成物Ｂ－１－５（ＴＬＣに２つのスポットが示された。）を得、収率が３４％であった。

フラスコにＢ－１－５（２．２７ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（３５ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、ドライアイス－エタノール浴で冷却し、反応液にＤｉｂａｌ－Ｈ（１Ｍ、９ｍＬ）をゆっくりと滴下し、この温度で１．５時間攪拌し、ＴＬＣにより反応が完全となったことが示された後、反応液を冷たい希塩酸（１Ｍ、１０ｍＬ）に加えて気泡がなくなるまで攪拌した後、さらにＤＣＭを加えて２回抽出し、合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、最後に無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、反応液を真空で直接蒸発させて２．２２ｇの生成物Ｂ－１－６を得た。収率が９７％であった。

フラスコに化合物Ｂ－１－６（２．２２ｇ、５．８１ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）及びＫ₂ＣＯ₃（４．８２ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）を加え、次いでＫＭｎＯ₄（３．６７ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、反応液を室温で３０分間攪拌反応させた。ＴＬＣにより原料の反応が完全となったことが示された後、反応液に希塩酸を加えて調整し、反応液が無色になるまでさらにＮａＨＳＯ₃溶液を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、最後に無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、反応液を真空で直接蒸発させて１．８９ｇの生成物Ｂ－１－７を得た。収率が８２％であった。

フラスコに化合物Ｂ－１－７（１．８９ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）、３－クロロピラジン－２－メチルアミン二塩酸塩（１．０３ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２０ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷水浴下で冷却し、反応液にＨＡＴＵ（２．１６ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３．０６ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３０分間攪拌反応させた後、氷を取り除き、室温で３０分間攪拌を続けた。ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出したものを合わせて、水で２回洗浄し、さらに飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、シリカゲルを加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して１．９４ｇの生成物Ｂ－１－８（ＴＬＣに２つのスポットが示された。）を得た。収率が７８％であった。

フラスコに化合物Ｂ－１－８（７９０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（０．８ｍＬ）及び酢酸エチル（８ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷水浴下で反応液にオキシ塩化リン（１．３９ｇ、９．０８ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を１時間攪拌した。ＴＬＣにより原料反応が完全となった。反応液をＮａＨＣＯ₃溶液（４．５ｇＮａＨＣＯ₃／３０ｍＬｈ₂Ｏ）に注いでクエンチし、酢酸エチルで２回抽出したものを合わせて、水で２回洗浄し、さらに飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、最後に無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空で直接蒸発させて６８０ｍｇの生成物Ｂ－１－９（ＴＬＣに２つのスポットが示された。）を得た。収率が８９．０％であった。

フラスコにＢ－１－９（６８０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（７ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、氷水浴下でＮＢＳ（２８７ｍｇ、１．６１ｍｍｏ）を加え、４０分間攪拌した後、ＴＬＣにより反応が完全となった。反応液を水に注いでクエンチし、酢酸エチルで２回抽出したものを合わせて、水で２回洗浄し、さらに飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、シリカゲルを加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して２９８ｍｇの生成物Ｂ－１－１０－Ａ（ＴＬＣで極性の小さいスポットが先に出る）及び３３９ｍｇの生成物Ｂ－１－１０－Ｂ（ＴＬＣで極性の大きいスポットが後に出る）を得た。総収率が８１％であった。

高圧消化槽に化合物Ｂ－１－１０－Ａ（２９８ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）、アンモニア水（６ｍＬ）、ｎ－ブタノール溶液（３ｍＬ）を加え、フラスコを密閉し、９５℃に加熱して１６時間攪拌した。反応液を冷却し、真空でスピン乾燥した後、シリカゲルカラムで精製して１８４ｍｇの生成物Ｂ－１－Ａを得、収率が６４％であった。

Ｂ－１－Ａの合成方法に従ってＢ－１－１０－Ｂをアンモニア水と反応させてＢ－１－Ｂを調製した。
中間体Ｂ－２の製造：

ＮａＨ（８．５６ｇ、３５７ｍｍｏｌ）を秤量し、無水ＴＨＦ（８０ｍＬ）に懸濁させ、４０～４５℃に昇温し、化合物Ｂ－２－１（２２．８５ｇ、１４９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を滴下し、滴下完了後、この温度に維持しながら１５分間攪拌反応させた。アクリル酸エチルのＴＨＦ溶液を滴下し、添加後、１５分間反応を続けた。反応液を室温に冷却した後、氷水に加え、濃ＨＣｌでｐＨを３に調整し、酢酸エチルを加えて２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させ、カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－２を無色の油として得た（３７．６ｇ、８３％）。

化合物Ｂ－２－２（３７．６ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、塩化ナトリウム（２０．９７ｇ、３５９ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１７０ｍＬ）とＨ₂Ｏ（５ｍＬ）に加えて１６０℃で１．７時間反応させた。反応液を冷却し、氷水に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－３を無色の油として得た（２１．６ｇ、７５％）。

化合物Ｂ－２－３（２１．６ｇ、８９．２ｍｍｏｌ）、エチレングリコール（６．６４ｇ、１０７ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸－水和物（１６９ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を秤量してトルエン（１８０ｍＬ）に加え、１２０℃で水を分離して４時間還流した。反応液を冷却し、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させ、カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－４を淡黄色の液体として得た（２３．７ｇ、９３％）。

ＬＡＨ（６．４７ｇ、１６６ｍｍｏｌ）を秤量して三口フラスコに入れ、無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷－塩浴冷却下で化合物Ｂ－２－４（２３．７ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を滴下し、滴下終了後、ゆっくりと室温まで昇温して５時間反応させた。氷水浴下で反応にＨ₂Ｏ／ＴＨＦ（１：１，３０ｍＬ）をゆっくりと滴下し、さらに５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（８ｍＬ）を加え、室温で一晩攪拌した。フラスコにＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５：１、２５０ｍＬ）を加えて反応液を希釈し、ろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５：１）ですすいだ。ろ液に５０ｇシリカゲルを加え、１５分間攪拌し、ろ過し、すすいだ。ろ液を減圧濃縮させて化合物Ｂ－２－５（１６．７ｇ、９９％）を得た。

化合物Ｂ－２－５（１６．７ｇ、８２．６ｍｍｏｌ）を秤量してフラスコに入れ、ピリジン（１００ｍＬ）を加え、氷水浴下でＴｓＣｌ（３４．６ｇ、１８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、１０％クエン酸溶液及び飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。得られた粗生成物をエタノールでスラリー化し、化合物Ｂ－２－６を白色固体として得た（３５ｇ、８３％）。

化合物Ｂ－２－６（３５ｇ、６８．５ｍｍｏｌ）を秤量してフラスコに入れ、１ＮのＨＣｌ溶液（２６０ｍＬ）及びＴＨＦ（３００ｍＬ）を加えて８０℃で５時間反応させた。反応液を酢酸エチルで抽出し、有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－７（２６．２ｇ、８２％）を得た。

フラスコに化合物１，３－ジチアン（２．１ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）を加え、窒素置換し、ドライアイス－エタノール浴冷却下でｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ、８．５ｍＬ）を滴下し、滴下完了後、０℃に昇温して１時間反応させた。ドライアイス－エタノール浴で冷却した後、化合物Ｂ－２－７（６．５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を滴下し、滴下完了後、室温まで昇温して１時間反応させた。反応液を飽和ＮＨ₄Ｃｌ溶液に加えてクエンチし、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－８（６．７７ｇ、８３％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－８（６．７７ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（１．３８ｇ、３４．６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１７０ｍＬ）を加えて７０℃で一晩還流した。反応液を室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－９（３．７ｇ、７７％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－９（３．７ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５０ｍＬ）及び水（１２．５ｍＬ）を加え、氷水浴下でＮＢＳ（５．５６ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）を加え、添加後、室温に移して３時間反応させた。反応液を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させて化合物Ｂ－２－１０の粗生成物を得た。この粗生成物を精製しなかった。

上記で得られた化合物Ｂ－２－１０粗生成物をエタノールで溶解し、氷水浴下でＮａＢＨ４（５０８ｍｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を加え、室温に移して１時間反応させた。反応液を飽和ＮＨ₄Ｃｌ溶液に加えてクエンチし、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１１（２．６６ｇ、二つのステップの収率９１％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－１１（２．５６ｇ、７．８４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２８７ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１．０６ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１５ｍＬ）を加え、さらにＴＢＤＰＳＣｌ（２．５９ｇ、９．４１ｍｍｏｌ）を加えて室温で０．５時間反応させた。反応液を水に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１２（４．０ｇ、９０％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－１２（４．０ｇ、７．０８ｍｍｏｌ）及びメタノール（１２０ｍＬ）を加え、室温で撹拌しながらＭｇ（１．８９ｇ、７７．９ｍｍｏｌ）を加え、３０分後、反応は激しく発熱し、反応を一晩攪拌した。反応液を飽和ＮＨ₄Ｃｌ溶液に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１３（２．４ｇ、８３％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－１３（２．４ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３０ｍＬ）を加え、氷水浴下でＰＤＣ（６．６ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）を加え、添加後、室温に移して２時間反応させた。フラスコに酢酸エチルを加えて反応液を希釈し、水で抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１４（１．９９ｇ、８０％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－１４（１．９９ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）、３－クロロピラジン－２－メチルアミン二塩酸塩（１．０２ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１０ｍＬ）を加え、さらに反応液にＨＢＴＵ（２．１３ｇ、５．６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２．４２ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間反応させた。反応液を水に加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１５（１．９９ｇ、７７％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－２－１５（１．５９ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を加え、ＤＣＭ（３０ｍＬ）を加えて溶解し、窒素保護下、氷水浴下でピリジン（１．８３ｇ、２３．１ｍｍｏｌ）及びトリフルオロメタンスルホン酸無水物（４．８９ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を加え、添加後、室温に移して４時間反応させた。反応液を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させて化合物Ｂ－２－１６の粗生成物を得た。この粗生成物を精製しなかった。

上記で得られた化合物Ｂ－２－１６の粗生成物をＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解し、ＮＢＳ（５６６ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）を加えて室温で０．５時間反応させた。反応液をＮａＨＣＯ₃溶液に加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせて飽和ＮａＣｌ溶液で逆抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２－１７（１．４３ｇ、二つのステップの収率８１％）を得た。

高圧消化槽に化合物Ｂ－２－１７（１．４３ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）、アンモニア水（２０ｍＬ）、ｎ－ブタノール（８ｍＬ）を加え、反応系を９５℃に加熱し、１６時間攪拌した。反応液を真空でスピン乾燥し、カラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ｂ－２（１．２ｇ、８７％）を得た。
中間体Ｂ－３の製造：

Ｂ－３－１は、文献（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０２０、５９，７１６１－７１６７）の方法を参照して調製された。

フラスコに化合物Ｂ－３－１（１．２５ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（５４８ｍｇ、８．０６ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１２ｍＬ）を加え、さらにＴＢＤＰＳＣｌ（１．９４ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）を加えて室温で一晩反応させた。反応液を水に加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させて化合物Ｂ－３－２（２．８５ｇ、１００％）を得た。さらに精製しなかった。

化合物Ｂ－３－２（２．８５ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）をエタノール（２５ｍＬ）に溶解し、水酸化ナトリウム（４０３ｍｇ、１０．１ｍｍｏｌ）の水溶液（１０ｍＬ）を加えた。反応液を６０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を冷却し、水に加え、希塩酸で調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させて化合物Ｂ－３－３（２．５３ｇ、９５％）を得た。この化合物をさらに精製しなかった。

Ｂ－３－３からＢ－３を製造する方法については、Ｂ－２－１４からＢ－２を製造する方法を参照した。
中間体Ｂ－４の製造：

フラスコに化合物Ｂ－４－１（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）、Ｂ－１－３（１７０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（２５１ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、６０℃に加熱した。反応液にＤＩＡＤ（１９４ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）を滴下し、一晩保温反応させた。反応液を冷却し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲルカラムで精製して化合物Ｂ－４－Ａ（５２ｍｇ、極性の小さいスポット）及びＢ－４－Ｂ（１４０ｍｇ、極性の大きいスポット、不純物トリフェニルホスフィンオキシドを含む）を得た。総収率が８２％であった。
中間体Ｂ－５の製造：

フラスコに化合物Ｂ－１－３（５００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２７３ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（５ｍＬ）及び塩化パラトルエンスルホニル（３０９ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２時間攪拌した後、ＴＬＣにより反応がほぼしなくなったことが示された。反応液にＤＭＡＰ（１９８ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を加え、一晩反応させた。反応液を水に加え、希塩酸で調整し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲルカラムで精製して化合物Ｂ－５－１（５５０ｍｇ、７８％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－５－１（２００ｍｇ、０．３８１ｍｍｏｌ）、３－ブロモ－４－クロロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３～Ｃ］ピリジン（８９ｍｇ、０．３８１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４９ｍｇ、０．４５７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡ（２ｍＬ）を加え、反応液を１００℃に加熱して一晩攪拌した。反応液を冷却し、水に加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲル分取プレートで精製して化合物Ｂ－５－２（６０ｍｇ、２７％）を得た。

封管に化合物Ｂ－５－２（６０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、アンモニア水（２ｍＬ）、ｎ－ブタノール（１ｍＬ）を加え、反応系を１００℃に加熱し、一晩攪拌した。反応液を冷却し、真空でスピン乾燥し、シリカゲル分取プレートで精製して化合物Ｂ－５（３８ｍｇ、６６％）を得た。
中間体Ｂ－６の製造：

フラスコに化合物Ｂ－１－１０－Ｂ（２００ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（３ｍＬ）及びＴＢＡＦ（１ｍ、０．７ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で４時間攪拌し、反応液をシリカゲル分取プレートで直接精製して化合物Ｂ－６－１（１０８ｍｇ、９１％）を得た。

化合物Ｂ－６－１をＰＤＣで酸化して（Ｂ－２－１３からＢ－２－１４の合成を参照）Ｂ－６－２を調製した。

フラスコに化合物Ｂ－６－２（９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）及びヨードメタン（５３ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で一晩攪拌した。反応液を水に加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引濾過し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲル分取プレートで精製して化合物Ｂ－６－３（８０ｍｇ、８５％）を得た。

フラスコに化合物Ｂ－６－３（８０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷水浴で冷却した。反応液にオルトチタン酸テトライソプロピル（２８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた後、臭化エチルマグネシウム（０．６ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ、１ｍ）をゆっくりと滴下した。滴下完了後、反応液を室温まで昇温して一晩攪拌した。反応液をアンモニウムクロライド水溶液に注いでクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲル分取プレートで精製して２２ｍｇの化合物Ｂ－６－４を得、収率が２８％であった。

Ｂ－６－４からＢ－６を製造する方法については、Ｂ－２－１７からＢ－２を製造する方法を参照した。
中間体Ｂ－７の製造：

フラスコに化合物Ｂ－６－３（１００ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、窒素置換し、氷水浴で冷却した。反応液に臭化メチルマグネシウム（０．８ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ、１ｍ）を滴下した。滴下完了後、反応液を室温まで昇温して一晩攪拌した。反応液をアンモニウムクロライド水溶液に注いでクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲル分取プレートで精製して６５ｍｇの化合物Ｂ－７－１を得、収率が６５％であった。

Ｂ－７－１からＢ－７を製造する方法については、Ｂ－２－１７からＢ－２を製造する方法を参照した。
中間体Ｂ－８の製造：

フラスコに化合物Ｂ－８－１（ＣＡＳ：６５２－６７－５、１．００ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）、イミダゾール（５５９ｍｇ、８．２１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１５ｍＬ）を加え、さらにＴＢＤＰＳＣｌ（１．８８ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させた。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて水洗し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧濃縮させた後、シリカゲルカラムで精製して化合物Ｂ－８－２（１．６３ｇ、６２％）を得た。

Ｂ－８－２からＢ－８を製造する方法については、Ｂ－１－３からＢ－１－Ａ（Ｂ）を製造する方法を参照した。
中間体Ｂ－９の製造：

フラスコに化合物Ｂ－９－１（８．０ｇ、７６．１ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１２０ｍＬ）及びＲａｎｅｙＮｉ（約１ｇ）を加え、反応液に水素置換し、水素バッグ圧下で９０℃に加熱して一晩攪拌反応させ、ＴＬＣにより原料の反応がほぼ完全になったことが示された。反応液を冷却し、吸引濾過し、ろ液を減圧下でスピン乾燥して８．３ｇの生成物Ｂ－９－２を得、収率が１００％であった。生成物を精製することなくそのまま次のステップで使用した。

Ｂ－９－２をＢ－１－７と縮合、閉環、臭素化してＢ－９を調製した。具体的な方法については、Ｂ－１－７からＢ－１－１０－Ａ（Ｂ）を製造する方法を参照した。
中間体Ｂ－１０の製造：

フラスコに化合物Ｂ－１－９（２００ｍｇ、０．３９５ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（３ｍＬ）を加え、反応液に窒素置換し、ドライアイス／エタノール浴で－７０℃に冷却し、反応液にｎ－ブチルリチウム（２．５ｍ、０．１９ｍＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、３０分間保温反応させた。反応液にヨードメタン（１１２ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、反応液をゆっくりと室温まで昇温した。アンモニウムクロライド水溶液を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて減圧下で濃縮・乾燥させ、カラムクロマトグラフィーで精製してＢ－１０－１（１６０ｍｇ、７８％）を得た。

Ｂ－１０－１をＮＢＳで臭素化し、さらにアンモノリシスしてＢ－１０を調製した。具体的な方法については、Ｂ－１－９からＢ－１－Ａ（Ｂ）を製造する方法を参照した。
実施例１：化合物１の製造

フラスコに化合物Ｂ－１－Ｂ（２０５ｍｇ、０．３６２ｍｍｏｌ）、Ａ－１（１６１ｍｇ、０．４７１ｍｍｏｌ）、Ｎａ₂ＣＯ₃（７７ｍｇ、０．７２４ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）（２０ｍｇ）、ジオキサン（６ｍＬ）及び水（２ｍＬ）を加え、窒素置換し、９５℃に昇温して２．５時間反応した後、ＴＬＣにより反応が完全となったことが示された。反応液を酢酸エチルで希釈し、シリカゲルを直接加えて混合し、次いでシリカゲルカラムで精製して１８２ｍｇの生成物Ｃ－１－Ｂを得、収率が７２％であった。

フラスコに化合物Ｃ－１－Ｂ（１８２ｍｇ、０．２６０ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（４ｍＬ）を加え、反応液にＴＢＡＦ（１Ｍ、０．３９ｍＬ）を加え、反応液を室温で１．５時間攪拌反応させた。ＴＬＣにより反応が完全となったことが示された。反応液を分取用シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）で直接精製し、７０ｍｇの生成物１－Ｂを得、収率が５８％であった。

核磁気共鳴及びマススペクトルにより生成物の構造を特徴付けた結果は、以下の通りである：
¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.56-1.60 (1H, m), 1.94-2.07 (2H, m), 2.20-2.25 (1H, m), 3.28-3.31 (1H, m), 3.38-3.42 (2H, m), 3.47-3.51 (1H, m), 3.77 (1H, dd, J = 11.8 Hz, 3.2 Hz), 4.11 (1H, dd, J = 11.8 Hz, 1.8 Hz), 4.59 (1H, t, J = 5.8 Hz), 6.03 (2H, brs), 7.07 (1H, d, J = 5.0 Hz), 7.20 (1H, ddd, J = 7.4 Hz, 4.9 Hz, 1.0 Hz), 7.63 (2H, dd, J = 10.4 Hz, 5.4 Hz), 7.85-7.90 (1H, m), 7.98-8.02 (2H, m), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41-8.43 (1H, m), 10.97 (1H, s).
MS(ESI) m/z (M+H)⁺：463.0。

１－Ｂの合成方法でＡ－１とＢ－１－Ａを用いて１－Ａを調製した。

核磁気共鳴及びマススペクトルにより生成物の構造を特徴付けた結果は、以下の通りである：
¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.38-1.50 (1H, m), 1.73-1.75 (1H, m), 1.80-1.92 (1H, m), 2.12-2.15 (1H, m), 3.36-3.47 (3H, m), 3.62 (1H, t, J = 11.0 Hz), 4.07-4.10 (1H, m ), 4.69 (1H, t, J = 5.5 Hz), 6.02 (2H, s), 7.07 (1H, d, J = 5.0 Hz), 7.20 (1H, dd, J = 6.9 Hz, 5.2 Hz ), 7.61 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.76 (1H, d, J = 5.0 Hz ), 7.83-7.91 (1H, m), 7.95-8.04 (2H, m), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz ), 8.42 (1H, d, J = 3.8 Hz ),10.97 (1H, s).
MS(ESI) m/z (M+H)⁺：463.1。
実施例２：化合物２の製造

１－Ｂの合成方法でＡ－５とＢ－１－Ａを反応させて２－Ａを調製した。

核磁気共鳴及びマススペクトルにより生成物の構造を特徴付けた結果は、以下の通りである：
¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.41-1.51 (1H, m), 1.50-1.78 (1H, m), 1.85-1.97 (1H, m), 2.13-2.15 (1H, m), 3.35-3.49 (4H, m), 3.65 (1H, t, J = 11.0 Hz), 4.10 (1H, ddd, J = 11.0 Hz, 3.6 Hz, 1.6 Hz), 4.69 (1H, t, J = 5.6 Hz), 6.13 (2H, brs), 7.09 (1H, d, J = 4.9 Hz), 7.19 (1H, dd, J = 6.9 Hz, 5.2 Hz), 7.76 (3H, dd, J = 9.5 Hz, 6.7 Hz), 7.83-7.90 (1H, m), 8.16 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.0 Hz), 10.84 (1H, s).
MS(ESI) m/z (M+H)⁺：445.2。

化合物２－ＡをＳＦＣで分離して２－Ａ－Ｐ１（先に出るピーク）と２－Ａ－Ｐ２（後に出るピーク）を得た。

分取ＳＦＣの条件：
装置: SFC-80 (Thar, Waters)
カラム: CHIRALCEL OJ(30×250mm 5μm) (Daicel)
カラム温度: 35℃
流動相: A=CO₂ 共溶媒 B= ETOH
サイクルタイム:12.5min 運転時間:21 min

１－Ｂの合成方法でＡ－５とＢ－１－Ｂを反応させて２－Ｂを調製した。

核磁気共鳴及びマススペクトルにより生成物の構造を特徴付けた結果は、以下の通りである：
¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.58-1.63 (1H, m), 1.95-2.02 (1H, m), 2.08-2.17 (1H, m), 2.24-2.28 (1H, m), 3.39-3.51 (4H, m), 3.78 (1H, dd, J = 11.7, 3.2 Hz), 4.10 (1H, d, J = 10.1 Hz), 4.60 (1H, t, J = 5.2 Hz), 6.14 (2H, brs), 7.09 (1H, d, J = 4.9 Hz), 7.18 (1H, dd, J = 6.9 Hz, 5.3 Hz), 7.63 (1H, d, J = 5.0 Hz), 7.76 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.84-7.88 (1H, m), 8.16 (2H, d, J = 8.3 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.3 Hz), 8.41 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.0 Hz), 10.84 (1H, s).
MS(ESI) m/z (M+H)⁺：445.2。
実施例３：化合物３の製造

フラスコに化合物２－Ｂ（５０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）、ＮＣＳ（１６．５ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）及び氷酢酸（１ｍＬ）を加え、反応液を８０℃に加熱して２時間反応させた。反応液を減圧下で濃縮・乾燥させ、重炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引濾過し、減圧下で濃縮・乾燥させ、シリカゲル分取プレートで精製して２８ｍｇの生成物３を得、収率が５２％であった。

MS(ESI) m/z (M+H)⁺：479.2。
実施例４～１１９：化合物４～１１９の製造

化合物１－Ｂ又は３の製造方法で、異なる中間体を使用して化合物４～１１９を調製し、使用される中間体の番号、構造式、ＭＳ及び¹Ｈ－ＮＭＲデータを表１４に示す。

実施例１２０：化合物１２０の製造

フラスコに化合物Ｂ－１－４（３．１０ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）、メタノール（３１ｍＬ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１．１７ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（２．０７ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で一晩攪拌した。水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して１．９０ｇの生成物１２０－１を得、収率が５９％であった。

フラスコに化合物１２０－１（１．９０ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を加え、氷浴で冷却し、反応液に水素化アルミニウムリチウム（３７６ｍｇ、９．９１ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加した。反応液を室温に昇温して３時間反応させた。反応液を再び氷浴で冷却し、水（３８０ｍｇ）、１５％ＮａＯＨ水溶液（３８０ｍｇ）、水（１．１４ｇ）をゆっくりと順次に滴下して反応をクエンチした。得られた懸濁液を吸引濾過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して２００ｍｇの生成物１２０－２を得、収率が３１％であった。

フラスコに化合物２，４－ジクロロ－３－ニトロピリジン（２９４ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、１２０－２（２００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２３１ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４時間攪拌した。反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮・乾燥させて４６４ｍｇの生成物１２０－３を得、収率が１００％であった。生成物をさらなる精製しなかった。

フラスコに化合物１２０－３（４６４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）、イソプロパノール（５ｍＬ）、ビス－（４－メトキシベンジル）－アミン（４１５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を９５℃に加熱して４時間攪拌した。反応液を冷却し、減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して５４０ｍｇの生成物１２０－４を得、収率が６６％であった。

フラスコに化合物１２０－４（３８８ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（４ｍＬ）、イミダゾール（７８ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）及びｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（２１０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を６０℃に加熱して一晩攪拌した。ＴＬＣは多くの原料が残っていることを示した。反応液にイミダゾール（１５０ｍｇ）、ＤＭＡＰ（４０ｍｇ）及びｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（１００ｍｇ）を追加し、８０℃に昇温して２時間反応させた。反応液にｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（２００ｍｇ）を追加し続け、２時間後、ＴＬＣにより反応が完全となったことがしめされた。反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して６５０ｍｇの生成物１２０－５を得、収率が１００％であった。

フラスコに化合物１２０－５（６５０ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、メタノール／氷酢酸（５ｍＬ／５ｍＬ）及び鉄粉（４８６ｍｇ、８．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４時間攪拌した。反応液をＮａＨＣＯ₃水溶液にゆっくりと注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮・乾燥させて６１２ｍｇの生成物１２０－６を得、収率が９８％。生成物をさらなる精製しなかった。

フラスコに化合物１２０－６（６１２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６ｍＬ）及びＮ，Ｎ’－カルボニルジイミダゾール（２８０ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を８０℃に加熱して一晩攪拌した。反応液を冷却し、減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して４７０ｍｇの生成物１２０－７を得、収率が７４％であった。

フラスコに化合物１２０－７（４７０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１５ｍＬ）、４－フェノキシフェニルボロン酸（２７１ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）、醋酸銅（１１５ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、４Ａモレキュラーシーブ（５００ｍｇ）及びトリエチルアミン（１９２ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３６時間攪拌した。反応液を珪藻土で吸引濾過し、酢酸エチルで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮・乾燥させ、次いでシリカゲルカラムで精製して２４０ｍｇの生成物１２０－８を得、収率が４１％であった。

フラスコに化合物１２０－８（２６０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（４ｍＬ）を加えた。反応液を５０℃に加熱して３時間攪拌した。反応液を冷却し、減圧下で濃縮・乾燥させ、ＮａＨＣＯ₃水溶液を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮させた。残渣をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）で溶解し、ＴＢＡＦ（１Ｍ、０．２ｍＬ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応液をシリカゲル分取プレートで直接精製して４０ｍｇの生成物１２０を得、収率が３０％であった。

核磁気共鳴及びマススペクトルにより生成物の構造を特徴付けた結果は、以下の通りである：
¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.37-1.53 (1H, m), 1.56-1.71 (1H, m), 1.81-1.95 (1H, m), 2.12-2.29 (1H, m), 2.34-2.44 (4H, m), 3.40-3.54 (1.5H, m), 3.59-3.70 (1H, m), 3.77-4.02 (1H, m), 4.17-4.39 (1H, m), 4.71 (0.5H, t, J = 5.7 Hz ), 4.76-4.83 (2H, m), 6.94 (0.5H, d, J = 5.6 Hz), 7.13 (4H, t, J = 8.5 Hz), 7.18-7.25 (1.5H, m), 7.40-7.48 (4H, m), 7.74 (1H, t, J = 5.6 Hz).
MS(ESI) m/z (M+H)⁺：433.2。
実施例１２１～１３８：化合物１２１～１３８の製造

化合物１－Ｂ又は３の製造方法で、異なる中間体を使用して化合物１２１～１３８を調製し、使用される中間体の番号、構造式、ＭＳ及び¹Ｈ－ＮＭＲデータを表１４に示す。

薬効試験
試験例１：インビトロでのＢＴＫ阻害キナーゼの活性の試験

１．化合物の調製
化合物粉末を１００％ＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭ貯蔵液を調製した。－２０度で遮光して凍結保存した。

２．キナーゼ反応過程
（１）１×キナーゼバッファーを調製した。

（２）化合物濃度勾配の調製：被験化合物の試験濃度を１μＭとし、３８４ソースプレートで１００倍最終濃度の１００％ＤＭＳＯ溶液に希釈し、化合物を３倍希釈して１０個の濃度にした。分液器Ｅｃｈｏ５５０を使用して目的プレートＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４Ｆに２５０ｎＬの１００倍最終濃度の化合物を移した。

（３）１×キナーゼバッファーで最終濃度の２．５倍のキナーゼ溶液を調製した。

（４）化合物ウェル及び陽性対照ウェルにそれぞれ２．５倍最終濃度のキナーゼ溶液１０μＬを加え、陰性対照ウェルに１×キナーゼバッファー１０μＬを加えた。

（５）１０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、反応プレートを振とうして均一に混合した後、室温で１０分間インキュベートした。

（６）１×キナーゼバッファーで５／３倍最終濃度のＡＴＰとキナーゼ基質２との混合溶液を調製した。

（７）最終濃度の５／３倍のＡＴＰと基質との混合溶液１５μＬを加え、反応を開始した。

（８）３８４ウェルプレートを１０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、振とうして均一に混合した後、室温で１０分間インキュベートした。

（９）３０μＬの停止検出液を加えてキナーゼ反応を停止させ、１０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、振とうして均一に混合した。

（１０）ＣａｌｉｐｅｒＥＺＲｅａｄｅｒで変換率を読み取った。

３．データ分析
計算式：

式中：変換率％＿ｓａｍｐｌｅはサンプルの変換率の読み取り値であり、変換率％＿ｍｉｎは陰性対照ウェルの平均値で、酵素活性なしのウェルの変換率の読み取り値を表し、変換率％＿ｍａｘは陽性対照ウェルの変換率の平均値で、化合物の阻害なしのウェルの変換率の読み取り値を表す。

用量反応曲線のあてはめ
濃度のｌｏｇ値をＸ軸、パーセンテージ阻害率をＹ軸とし、分析ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５の［ｌｏｇ（阻害剤）ｖｓ．反応-可変傾斜］を使用して用量反応曲線をあてはめることで、各化合物の酵素活性に対するＩＣ５０値を以下の計算式により求めた。

計算式：Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))
ここで、Y：阻害率（%）、X：濃度、Top：最大の阻害率、Bottom：最小の阻害率、HillSlope：傾き。

ＢＴＫ野生型及びＢＴＫ変異型Ｃ４８１Ｓキナーゼに対する本発明の化合物の阻害活性を表１６に示す。
IC50:A≦5 nM;5 nM＜B≦20 nM;20 nM＜C≦100 nM;100 nM＜D≦1000 nM;E＞1000 nM。

１．Ｔ０、Ｔ５、Ｔ１０、Ｔ２０、Ｔ３０、Ｔ６０及びＮＣＦ６０サンプルのウェルに、１０μＬの供試品又は対照品作業液及び８０μＬのミクロソーム作業液（肝ミクロソームタンパク質の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであった）を加え、空白６０ウェルにミクロソーム作業液のみを添加し、次いでＴ０とＮＣＦ６０を除いたサンプル空白６０、Ｔ５、Ｔ１０、Ｔ２０、Ｔ３０及びＴ６０を３７℃の水浴釜に入れ、約１０分間プレインキュベートした。

２．Ｔ０サンプルに先に３００μＬの停止液（２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドと２００ｎｇ／ｍＬのラベタロールを含むアセトニトリル溶液）を加えてから１０μＬのＮＡＤＰＨ再生系作業液を加えた。

３．インキュベートプレートで空白６０、Ｔ５、Ｔ１０、Ｔ２０、Ｔ３０及びＴ６０をプレインキュベートした後、各サンプルウェルに１０μＬのＮＡＤＰＨ再生系作業液を添加して反応を開始し、ＮＣＦ６０サンプルウェルに１０μＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液を加えた。

４．適切な時間（例えば、５、１０、２０、３０及び６０分間）インキュベートした後、空白６０、Ｔ５、Ｔ１０、Ｔ２０、Ｔ３０、Ｔ６０及びＮＣＦ６０プレートの各供試品サンプルのウェル及び対照品サンプルのウェルに、それぞれ３００μＬの停止液を加えて反応を停止させた。

５．すべてのサンプルプレートをよく振とうして４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、それぞれ１００μＬの供試品又は対照品の上澄みを３００μＬの純水に希釈し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。

６．データ分析は、１次消失の速度論に基づいてＴ_1/2及びＣＬ_int(mic)（μＬ／ｍｉｎ／ｍｇ）値を計算することにより行った。１次消失の速度論の数式は次の通りである。

ヒト及びラットの肝ミクロソーム代謝安定性の試験の結果を表１７に示す。

試験例３：薬物動態試験

薬物動態研究のためには各被験化合物をそれぞれ経口投与方式（１０ｍｇ／ｋｇ、１群３匹）でＳＤラットに単回投与し、被験化合物を５％ＤＭＳＯ＋１０％ｓｏｌｕｔｏｌ＋８５％ｓａｌｉｎｅで溶解し、１～２分間ボルテックスし、５～１０分間超音波処理に付した後、無色透明清澄の投与溶液として調製した。動物は、経口投与の前に一晩絶食させ、投与の４時間後に摂食を再開した。ＳＤラットに経口投与した後、眼窩採血により薬物動態用サンプルを採取した。ただし、採取時点は投与後０．２５ｈ、０．５ｈ、１ｈ、２ｈ、２．５ｈ、３ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ、１０ｈで、各時点で３つの全血サンプルを約０．２～０．３ｍＬの採取量として採取した。血液サンプルを採取した後すぐに氷上に置き、１５分以内に血漿を遠心分離した（遠心分離条件：８０００ｒｐｍ、１分間、室温）。収集した血漿を分析まで－２０℃で保存した。２０μＬの血漿サンプルを１．６ｍＬの９６ウェルのディープウェルプレートに入れ、２００μＬの作業内部標準溶液を加え（空白には内部標準の代わりに同じ体積の溶媒を追加した）、１分間ボルテックス混合し、５８００回転／分で１０分間遠心分離し、１００μＬの上澄みを９６ウェルインジェクションプレートに加え、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳに供して分析した。

本発明のいくつかの化合物の薬物動態試験の結果を以下の表１８に示す。

試験例４：インビトロでの細胞増殖に対する阻害活性の試験

１．細胞培養
細胞を１６４０培地で培養し、１０％不活化されたＦＢＳ及び１％二重抗体を加え、３７℃、５％ＣＯ₂条件下で培養した。

２．細胞のプレーティング
（１）細胞を細胞飽和度が８０％～９０％になるまで通常に培養し、必要な数に達すると、細胞を回収した。

（２）対応する培地で再懸濁し、計数し、適切な密度の細胞懸濁液を調製した。

（３）細胞懸濁液を９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬ加えた。

（４）細胞を３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで一晩培養した。

３．化合物の準備
（１）被験化合物をＤＭＳＯでそれぞれ希釈し、最終濃度が２０ｍＭの母液として調製しておいた。

（２）母液をＤＭＳＯで２０ｍＭから２ｍＭまで１０倍希釈し、次いで２ｍＭから３倍希釈して９個の濃度にした。

（３）空白対照ウェルは、細胞と０．５％ＤＭＳＯであり、高読み取り値対照ウェルとした。

（４）細胞を含まずに培地のみ含むウェルを低読み取り値対照ウェルとした。

４．化合物による細胞の処理
（１）細胞をプレーティングしてから２４時間後、化合物を単独で作用し、１ウェルあたり９９μＬの増殖培地を補充し、次いで１μＬのステップ３で準備した化合物を加え、軽く振とうして均一な混合を確保し、次いで３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターに入れた。

（２）細胞プレートをインキュベーターに７２時間放置した。

５．ＣＴＧ方法による検出
（１）細胞測定プレートを室温で３０分間静置し、１ウェルあたり１００μＬの培地を捨てた。

（２）各ウェルに１００μＬのＣＴＧ試薬（ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏキット）を加え、高速振動機に置いて２分間振とうし、室温で遮光して３０分間放置した。

（３）Ｅｎｖｉｓｉｏｎ装置で化学発光シグナル値を読み取った。

６．データ分析
ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８ｓｏｆｔｗａｒｅでＩＣ₅₀を計算し、次の非線形フィッティング式を使用して化合物のＩＣ₅₀（半数阻害濃度）を得、結果を以下の表に示す。

Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))
Ｘ：化合物濃度のｌｏｇ値、Ｙ：阻害率（％ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）
阻害率（％ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）＝（高読み取り値対照ウェルの読み取り値－化合物ウェルの読み取り値）／（高読み取り値対照ウェルの読み取り値－低読み取り値対照の読み取り値）×１００

試験例５：ＨＥＲ２キナーゼ活性の試験

１．Ｈｅｒ２キナーゼ測定の手順
１）１×キナーゼ反応緩衝液の調製：１倍体積の５×キナーゼ反応緩衝液と４倍体積の水、１ｍＭジチオスレイトール、５ｍＭ塩化マグネシウム、１ｍＭ塩化マンガン、１２．５ｍＭＳＥＢ。

２）Ｅｃｈｏ５５０で反応プレート（７８４０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ）の各ウェルに、希釈された化合物作業液１００ｎｌを移した。シーリングフィルムで反応プレートを密封し、１０００ｇで１分間遠心分離した。

３）１×キナーゼ反応緩衝液で１ｎｇ／μＬのＨｅｒ２キナーゼ溶液を調製した。

４）反応プレートの各ウェルに上記で調製したキナーゼ溶液５μＬを加えた。シーリングフィルムでプレートを密封して１０００ｇで１分間遠心分離し、室温で１０分間放置した。

５）１×キナーゼ反応緩衝液で２×キナーゼ基質とＡＴＰの混合液を調製した。ただし、２×Ｈｅｒ２キナーゼ基質は２μＭＴＫ－基質－ビオチンと４μＭＡＴＰであった。

６）反応プレートに５μＬの２×ＴＫ－基質－ビオチンとＡＴＰの混合液を加え、１０００ｇで３０秒間遠心分離し、反応を開始した。

７）Ｈｅｒ２キナーゼ測定には室温で５０分間反応させた。

８）ＨＴＲＦ検出緩衝液でＳａ－ＸＬ６６５（１２５ｎＭ）とＴＫ－抗体－クリプテートの混合液を調製した。

９）各ウェルに１０μＬのＳａ－ＸＬ６６５とＴＫ－抗体－クリプテートの混合液を加え、１０００ｇで３０秒間遠心分離し、室温で１時間反応させた。

１０）Ｅｎｖｉｓｉｏｎ２１０４で６１５ｎｍ（クリプテート）及び６６５ｎｍ（ＸＬ６６５）の蛍光シグナルを読み取った。

２．データ分析
１）阻害率を、次の数式で算出した。

２）ＩＣ５０の算出及び化合物用量反応曲線のあてはめ：
ＧｒａｐｈＰａｄ６．０で次の非線形フィッティング式を使用して化合物のＩＣ５０を得た。

Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))
Ｘ：化合物濃度のｌｏｇ値；Ｙ：化合物阻害率（％）

試験例６：血液脳関門透過性の試験

各被験化合物では、それぞれＳＤラットを用いて単回経口投与薬物動態研究を行い、用量を１０ｍｇ／ｋｇとし、１群に９匹の動物があった。被験化合物を５％ＤＭＳＯ＋１０％ｓｏｌｕｔｏｌ＋８５％食塩水（ｓａｌｉｎｅ）で溶解し、１～２分間ボルテックスし、５～１０分間超音波処理に付した後、無色透明清澄の投与溶液を調製した。投薬前に動物を一晩絶食させ、投与後１ｈ、２ｈ、４ｈに各群における３匹のＳＤラットの眼窩より約０．２～０．３ｍＬの血液を採取した。血液サンプルを採取した直後に氷上に置き、血漿を１５分間以内に遠心分離した（遠心分離条件：８０００ｒｐｍ、１分間、室温）。収集した血漿を分析まで－２０℃で保存した。採血直後に脳脊髄液と脳組織を採取した。脳脊髄液は、直視下でマイクロインジェクターで硬膜穿刺による脳脊髄液抽出法で抽出し、即ち、抱水クロラールによる麻酔後、頭を固定し、後ろ髪を切り、両耳の接続線で横切開（２ｃｍ）を切り、首と頭蓋底の筋肉層を鈍く刮げて大後頭孔を露出させ、１００μｌのマイクロインジェクターで約１００μｌ程度の脳脊髄液を採取し、分析まで－２０℃で保存した。その後すぐにラットを犠牲にし、頭を切断し、脳組織を摘出し、表面の毛細血管を剥がし、重量を測定し、３倍量の冷たい生理食塩水を加え、ホモジナイザーで１分間ホモジナイズし、分析まで－２０℃で保存した。それぞれの２０μＬの血漿サンプルと脳ホモジナイズサンプルに２００μＬの作業内部標準溶液を加え（ただし、空白には内部標準の代わりに同じ体積の溶媒を追加した）、１分間ボルテックス混合し、１３５００回転／分で１０分間遠心分離し、１００μＬの上澄みを採取し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳに供して分析した。２０μＬの脳脊髄液サンプルに６０μＬの作業内部標準溶液を加え（空白には内部標準の代わりに同じ体積の溶媒を追加した）、１分間ボルテックス混合し、１３５００回転／分で１０分間遠心分離し、５０μＬの上澄みを採取し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳに供して分析した。

試験例７：ＴＭＤ８薬効モデルの試験

ヒトびまん性大Ｂリンパ腫ＴＭＤ８細胞をインビトロで単層培養した。ただし、培養条件としては、ＲＰＭＩ１６４０培地に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを加えた培地、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで培養を行った。週に２回トリプシン－ＥＤＴＡで通常の消化処理して継代培養を行った。細胞飽和度が８０％～９０％になり、数が要求に達すると、細胞を回収し、計数し、接種した。０．２ｍｌ（１ｘ１０⁷個）ＴＭＤ８細胞（マトリゲル添加、体積比１：１）を各マウスの右後ろ背部に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１３７ｍｍ³になった時点で群分けて投薬した。腫瘍の直径を週に２回ノギスで測定した。腫瘍体積をＶ＝０．５ａ×ｂ²で算出した。ただし、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径を表す。

結果を図１及び図２に示す。図１に示される腫瘍を皮下移植したＴＭＤ８マウスの薬効モデルから、同じ１０ｍｇ／ｋｇの用量条件下で、実施例１１８、実施例８９－Ｐ１の２つの化合物は、第ＩＩ相臨床試験にある薬物ＡＲＱ－５３１及び市販薬イブルチニブよりも腫瘍に対する阻害効果が有意に優れたことが分かった。図２に示されるＴＭＤ８マウスにおける皮下移植腫瘍の薬効モデルから、同じ２０ｍｇ／ｋｇの用量条件下で、実施例１１１－Ｐ１、実施例１２５の化合物は、チラブルチニブよりも腫瘍に対する阻害効果が有意に優れたことが分かった。特に実施例１１１－Ｐ１では、腫瘍阻害率に関して、実施例１１１－Ｐ１のＴＧＩは９３％であり、チラブルチニブの約２倍であり、腫瘍の増殖をほぼ完全に制御し、非常に有意的な薬効の利点を持っている。

試験例８：ＤＯＨＨ－２－Ｌｕｃ脳内腫瘍薬効モデルの試験

１．細胞培養
１０％ウシ胎児血清及び５００ｎｇ／ｍＬピューロマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３７℃、５％ＣＯ₂のインキュベーターでＤＯＨＨ－２－ｌｕｃ腫瘍細胞をインビトロで培養した。２～３日ごとに培地を補充するか、又は培地を交換し、継代数は４～５回を超えないようにした。対数増殖期にある腫瘍細胞をインビボでの腫瘍接種に使用した。

２．腫瘍細胞の接種と群分け
Ｚｏｌｅｔｉｌの筋肉内注射により動物を麻酔した後、手術台に仰臥位で固定し、頭頂部の皮膚をヨウ素と７５％アルコールでそれぞれ消毒し、頭の正中線に沿って約０．５ｃｍの皮膚を切開し、冠状線と矢状線を露出させ、脳定位固定装置を使用して冠状線より上に約０．５～１．０ｍｍ、矢状線より右に約２ｍｍの距離に位置を特定し、１ｍＬ注射針で穴を開け、その位置にマイクロインジェクターを垂直に３ｍｍの深さまで挿入し、ＤＯＨＨ－２－ｌｕｃ腫瘍細胞３×１０⁵／２μＬ懸濁液をゆっくりと注入（約１分間）して針を１分間保持し、針を抜いた後、速やかに針穴をボーンワックスで密封し、傷口をスキンステープラーで縫合した。腫瘍接種後約７日目、動物の体重と腫瘍部位の光信号強度に基づいて、動物を５匹ずつの５群にランダムに分けた。

３．画像分析
小動物の生体内イメージングシステムＩＶＩＳＬｕｍｉｎａＩＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、マウスの状態を応じて週に１～２回イメージングし、マウス腫瘍細胞の接種部位における生物発光イメージング（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ、ＢＬＩ、ｕｎｉｔ：ｐｈｏｔｏｎｓ／ｓ）の信号強度を、腫瘍の増殖と薬効を評価するための主要な指標としてモニターし、具体的な操作は次の通りであった。

マウスにＤ－ルシフェリン（１５ｍｇ／ｍＬ、実験動物の体重に対する５μＬ／ｇ）を腹腔内注射した後、１％～２％のイソフルランの吸入によって動物を麻酔し、Ｄ－ルシフェリンを１０分間注射した後、ＩＶＩＳＬｕｍｉｎａＩＩＩにより動物をイメージングした。活体内イメージングソフトウェアＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によりデータを解析し、各動物のＲＯＩ（ｒｅｇｉｏｎｓｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ）内の光信号強度を計算した。

結果を図３、図４に示す。図３によると、マウスの脳内ＤＯＨＨ２腫瘍モデルの研究において、３０ｍｇ／ｋｇ（ＢＩＤ）の同じ用量条件下で、実施例１１１－Ｐ１、実施例１２５の化合物は、チラブルチニブよりも腫瘍に対する阻害効果が有意に優れており、非常に有意的な薬効の利点を持っており、２１日間の投与で副作用は見られなかった、ことが分かった。

図４は、イメージング後のすべての被試動物の蛍光図であり、ただし、この図は、脳内の腫瘍の大きさを色と領域の大きさで表し、色が赤いほど、腫瘍が大きいと示している。それらの画像から、同じ用量の場合、実施例１１１－Ｐ１、実施例１２５の化合物は腫瘍に対する阻害効果が非常に良く、赤い領域がほとんど見られなく、この２つの群における動物の脳内腫瘍が小さかったことが示され、それに対して、モデル群とチラブルチニブ群におけるすべての動物には、大きな赤い領域があり、腫瘍が大きかったことが示された。

上記の実施例から、式Ｉの構造、好ましくは式ＩＩの構造を有するＢＴＫタンバク質キナーゼ阻害剤としての本発明の化合物は、野生型ＢＴＫ及び変異型ＢＴＫ（Ｃ４８１Ｓ）に対して強力な阻害作用を有し、良好な薬物動態特性を有し、ＢＴＫキナーゼの過剰発現に起因した疾患を治療するための医薬品の製造に使用可能であることが分かった。これらの一部の化合物は、ＴＭＤ８皮下腫瘍薬効モデル実験において、上場のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブ、チラブルチニブ及び第ＩＩ相臨床試験にあるＡＲＱ－５３１よりも有意に優れている。

本発明の一部の化合物は、血液脳関門透過率、肝ミクロソーム代謝安定性、薬物動態などの点で、市販薬のチラブルチニブ及びツカチニブよりも有意に優れている。一部の化合物の薬効は、非常に良好であり、ＤＯＨＨ－２－Ｌｕｃ脳内薬効モデルおよび血液脳関門透過性のデータにより証明された。本発明に係る化合物はＢＴＫ又はＨＥＲ２キナーゼの過剰発現に起因した疾患、特に脳疾患を治療するための医薬品の製造に使用可能である。

本発明に係る化合物又はそれらの立体異性体、溶媒和物、水和物、薬学的に許容される塩若しくは共結晶は、自己免疫疾患、炎症性疾患、血栓塞栓疾患、アレルギー、感染性疾患、増殖性疾患及びがんから選択された任意の一つまたは複数の疾患を治療するための医薬品の製造に使用可能であり、新規および良好な治療レジメンを提供することが望まれている。

以上は、本発明の好ましい実施形態に過ぎず、当業者なら、本発明の技術的原理から逸脱することなく、これらの実施形態に対する様々な変更を実現することができるので、これらの変更も本発明の保護すべき範囲と見なされるべきであることに留意する必要がある。

Claims

式ＩＩＩ又は式ＩＶで示される構造を有することを特徴とするＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤としての化合物、或いはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態、薬学的に許容される水和物、溶媒和物又は塩。

（式中、Ｒ₁は、アミノ基であり、
Ｒ₂は、水素であり、
Ｒ₃、Ｒ₄は、水素であり、
Ｒ₆は、水素、フッ素、塩素、臭素、トリフルオロメチル基、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基から選択され、
ｍは０、１、２から選択され、但し、ｍが０のとき、－（ＣＨ ₂ ） _m －の隣接する２つの環状炭素原子の間に共有結合はなく、
ｎは０、１から選択され、
ｎ１は０、１、２、３、４から選択され、
Ｘは

から選択され、ここではＲ₉、Ｒ₁₃はそれぞれ独立してフッ素、トリフルオロメチル基、ヒドロキシ基から選択され、
ｎ２は０、１、２、３、４から選択され、
Ｒ ₈は独立して水素、フッ素、塩素、臭素、シアノ基、アミノ基、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、Ｃ１～Ｃ３アルキルオキシ基、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３～Ｃ６ヘテロシクロアルキル基から選択される。）
前記化合物の構造が、以下から選択される１つであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
請求項１又は２に記載の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物若しくは薬学的に許容される塩から選択された１種又は複数種の組み合わせを有効成分として含むことを特徴とする、医薬組成物。
タンバク質キナーゼ阻害剤（さらに、前記キナーゼ阻害剤はＢＴＫ阻害剤又はＨＥＲ２阻害剤である）の製造における、請求項１又は２に記載の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物若しくは薬学的に許容される塩の使用。
ＢＴＫキナーゼ又はＨＥＲ２キナーゼの過剰発現に起因した疾患を治療するための医薬品の製造における、請求項１又は２に記載の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物若しくは薬学的に許容される塩の使用。
自己免疫疾患、炎症性疾患、血栓塞栓疾患、アレルギー、感染性疾患、増殖性疾患及びがんから選択された任意の一つまたは複数の疾患を治療するための医薬品の製造における、請求項１又は２に記載の化合物又はその立体異性体、溶媒和物、水和物若しくは薬学的に許容される塩の使用。
前記疾患が、関節炎、関節リウマチ、蕁麻疹、尋常性白斑、臓器移植の拒絶反応、潰瘍性大腸炎、クローン病、皮膚炎、喘息、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、特発性血小プレート減少性紫斑病、皮疹、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、天疱瘡、尋常性天疱瘡、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、乳がん、マントル細胞リンパ腫、卵巣がん、食道癌、喉頭癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃癌、肝細胞癌、胃癌、グリオーマ、子宮内膜癌、黒色腫、腎がん、膀胱癌、黒色腫、膀胱癌、胆道癌、腎がん、膵臓がん、リンパ腫、有毛細胞癌、上咽頭がん、咽頭癌、大腸癌、直腸癌、脳及び中枢神経系がん、子宮頸癌、前立腺がん、精巣がん、尿生殖路癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞癌、肺腺癌、骨がん、結腸がん、腺腫、膵臓がん、腺腫、甲状腺がん、濾胞癌、ホジキン白血病、気管支癌、甲状腺がん、子宮体癌、子宮頸癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球白血病、慢性リンパ性白血病、骨髓性白血病、非ホジキンリンパ腫、原発性マクログロブリン血から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の使用。