JP7640821B1 - 画像取得装置及び画像取得方法 - Google Patents

Abstract

画像取得装置は、サンプルのマクロ画像を取得する画像取得装置であって、複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、サンプルに対して斜めから照射する第２照射部と、複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部と、照射された励起光に応じたサンプルからの蛍光を結像する結像レンズと、結像レンズによって結像された光像を撮像し、サンプルの蛍光マクロ画像を出力するイメージセンサと、を有するマクロ観察用カメラと、蛍光マクロ画像に基づいて、サンプルのミクロ画像の取得条件を設定する制御装置と、を備える。

Description

本開示は、画像取得装置及び画像取得方法に関する。

特許文献１には、暗視野照明によって暗視野マクロ画像を取得し、該暗視野マクロ画像に基づき、ミクロ画像取得条件を設定することが記載されている。

特開２００７－３１０２３１号公報

従来、より鮮明なマクロ画像を取得しミクロ画像取得条件をより適切に設定することが求められている。

本開示は上記実情に鑑みてなされたものであり、ミクロ画像取得条件をより適切に設定することを目的とする。

本開示の一態様に係る画像取得装置は、試料のマクロ画像を取得する画像取得装置であって、複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、試料に対して斜めから照射する励起光照射部と、複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部と、照射された励起光に応じた試料からの蛍光を結像する結像レンズと、結像レンズによって結像された光像を撮像し、試料の蛍光マクロ画像データを出力するイメージセンサと、を有するマクロ観察用カメラと、蛍光マクロ画像データに基づいて、試料のミクロ画像の取得条件を設定する設定部と、を備える。

本開示の一態様に係る画像取得方法は、試料のマクロ画像を取得する画像取得方法であって、複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、試料に対して斜めから照射する励起光照射ステップと、照射された励起光に応じて試料から生じ、複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各前記反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部を透過した蛍光を、イメージセンサを用いて撮像し、試料の蛍光マクロ画像データを出力する撮像ステップと、蛍光マクロ画像データに基づいて、試料のミクロ画像の取得条件を設定する設定ステップと、を備える。

本開示の一態様に係る画像取得装置及び画像取得方法では、試料に対して斜めから励起光が照射され、励起波長域の光を反射する蛍光フィルタ部及び結像レンズを経た試料からの蛍光の光像がイメージセンサによって撮像され、試料の蛍光マクロ画像データが出力される。このように、試料に対して斜めから励起光が照射されることにより、マクロ観察用カメラが試料の直上に設けられる構成において、試料からの蛍光がイメージセンサによって適切に撮像される。また、イメージセンサの前段において、励起波長域の光が蛍光フィルタ部によって反射されるため、イメージセンサによって、励起光を含まない蛍光のみが適切に撮像される。このようにして撮像された蛍光マクロ画像データが出力されて、試料のミクロ画像の取得条件が設定されることにより、ミクロ画像の取得条件を適切に設定することができる。すなわち、蛍光フィルタ部を介することによって蛍光のみがイメージセンサによって撮像されることにより、蛍光マクロ画像データに基づき、試料における組織が明確に検出され、組織の領域検出やフォーカス計測位置の設定等を適切に実施し、ミクロ画像の取得条件を適切に設定することができる。

設定部は、蛍光マクロ画像データに基づいて、ミクロ画像の取得時における露光時間を設定してもよい。上述したように、マクロ観察用カメラから出力されるマクロ画像データから試料の組織が明確に検出されるので、マクロ画像データに基づき、ミクロ画像の取得時における適切な露光時間を高精度に設定することができる。

設定部は、蛍光マクロ画像データにおいて他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数だけ抽出し、抽出した複数の確認点の輝度に基づき、露光時間を設定してもよい。このように、確認点の輝度が考慮されて露光時間が設定されることにより、露光時間をより高精度に設定することができる。

励起光照射部は、各励起波長域毎に、励起光を照射し、イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、カラーイメージセンサは、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、設定部は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データ毎に、露光時間を設定してもよい。適切な露光時間は励起波長域によって異なるところ、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データ毎に露光時間が設定されることにより、露光時間をより高精度に設定することができる。

励起光照射部は、各励起波長域毎に、励起光を照射し、イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、カラーイメージセンサは、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、設定部は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データ毎に、試料に含まれる組織の領域を検出する組織認識を行ってもよい。励起光を含まない鮮明な蛍光マクロ画像データに基づき組織認識が行われることにより、試料に含まれる組織の領域を高精度に検出することができる。

励起光照射部は、各励起波長域毎に、励起光を照射し、イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、カラーイメージセンサは、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、設定部は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像データ毎に、フォーカス計測位置を設定してもよい。励起光を含まない鮮明な蛍光マクロ画像データに基づきフォーカス計測位置の設定が行われることにより、組織の配置に応じて、フォーカス位置の設定を高精度に行うことができる。

上記画像取得装置は、試料に明視野照明を行う明視野照明部を更に備えていてもよい。このような構成によれば、上述した蛍光マクロ画像データに加えて、明視野マクロ画像データを取得することができる。

上記画像取得装置は、試料に暗視野照明を行う暗視野照明部を更に備えていてもよい。このような構成によれば、上述した蛍光マクロ画像データに加えて、暗視野マクロ画像データを取得することができる。

上記画像取得装置は、結像レンズに向かう蛍光の光軸上に対して、蛍光フィルタ部を出し入れ可能に構成された切替部を更に備えていてもよい。このような構成によれば、例えば、蛍光マクロ画像データを取得する際のみ蛍光フィルタ部を蛍光の光軸上に設け、それ以外の場合（例えば明視野マクロ画像データを取得する際又は暗視野マクロ画像データを取得する際）には蛍光フィルタ部を蛍光の光軸上から退避させることが可能になり、各画像データを適切に取得することができる。

本開示によれば、ミクロ画像取得条件をより適切に設定することができる。

図１は、本実施形態に係る画像取得装置を模式的に示した図である。 図２は、サンプルの明視野マクロ画像、暗視野マクロ画像、及び蛍光マクロ画像を示す図である。 図３は、前処理後の蛍光マクロ画像を示す図である。 図４は、マクロ画像表示の切り替えを説明する図である。 図５は、組織認識時の表示イメージを示す図である。 図６は、全色励起での蛍光マクロ画像及びフォーカス計測点の表示イメージを示す図である。 図７は、フォーカス計測位置の設定処理を説明する図である。 図８は、ある励起波長域での蛍光マクロ画像及び確認点の表示イメージを示す図である。 図９は、露光時間設定処理を説明する図である。 図１０は、蛍光マクロ画像表示の切り替えを説明する図である。 図１１は、マクロ画像撮像処理を示すフローチャートである。 図１２は、組織認識処理を示すフローチャートである。 図１３は、フォーカス計測位置の設定処理を示すフローチャートである。 図１４は、露光時間設定処理を示すフローチャートである。

以下、本開示の実施形態について、図面を参照して詳細に説明する。なお、各図において同一又は相当部分には同一符号を付し、重複する説明を省略する。

図１は、本実施形態に係る画像取得装置１を模式的に示した図である。画像取得装置１は、サンプルＳ（試料）を載せたスライドガラス１２５に光を照射してスキャンを行い、サンプルＳの画像取得を行う装置である。画像取得装置１は、特に、サンプルＳのマクロ画像を取得する装置である（詳細は後述）。画像取得の対象となるサンプルＳとしては、例えば、蛍光性の色素で染色された組織切片等の生体サンプルが用いられる。スライドガラス１２５は、サンプルＳを密封するプレパラートであってもよい。画像取得装置１は、顕微鏡装置１０と、顕微鏡装置１０による画像取得等の制御を行う制御装置２０（設定部）と、表示装置３０と、入力装置４０と、を備えている。

顕微鏡装置１０は、マクロ画像取得部１１０と、励起光源１３０と、第１導光ファイバ１４０と、第１照射部１５０と、蛍光マクロミラー１６０と、第２導光ファイバ１７０と、ミクロ画像取得部１９０と、を備えている。

マクロ画像取得部１１０は、サンプルＳの蛍光マクロ画像（蛍光マクロ画像データ）、明視野マクロ画像（明視野マクロ画像データ）、及び暗視野マクロ画像（暗視野マクロ画像データ）を取得する。マクロ画像とは、サンプルＳの低倍率画像（ミクロ画像と比較して低倍率の画像であり、サンプルＳ全体を含む画像）である。マクロ画像取得部１１０は、サンプルＳの全体像に相当する低解像度のマクロ画像を取得する。マクロ画像は、サンプルＳに対する撮像条件、具体的にはミクロ画像の取得条件を設定するための画像である。ミクロ画像とは、サンプルＳの高倍率画像（マクロ画像と比較して高倍率の画像であり、例えば、４倍、１０倍、２０倍、或いは４０倍といった高倍率のレンズを用いて得た画像）である。

蛍光マクロ画像とは、サンプルＳに励起光を照射することにより生じる蛍光が撮像されることにより取得されるサンプルＳのマクロ画像である。明視野マクロ画像とは、透過照明を用いて取得されるサンプルＳのマクロ画像である。暗視野マクロ画像とは、透過照明を直接利用せず、斜光照明等を照射して生じた散乱光を利用して暗い視野の中でサンプルＳを光らせて観察されるサンプルＳのマクロ画像である。

マクロ画像取得部１１０は、サンプルホルダ１１１と、スキャンステージ１１２と、明視野光源１１３（明視野照明部）と、暗視野光源１１４（暗視野照明部）と、暗視野マクロ撮像用シャッタ１１５と、バーコード撮像用光源１１６と、第２照射部１１７（励起光照射部）と、結像レンズ１１８と、カラーイメージセンサ（イメージセンサ）１１９と、蛍光フィルタ部１２０と、切替部１２１と、を備えている。結像レンズ１１８と、カラーイメージセンサ１１９と、蛍光フィルタ部１２０と、切替部１２１とによって、マクロ画像を撮像するマクロ観察用カメラが構成されている。

サンプルホルダ１１１は、搬送されてきたスライドガラス１２５を載置するホルダである。上述したように、スライドガラス１２５にはサンプルＳが載せられている。スキャンステージ１１２は、サンプルホルダ１１１をＸＹ方向（前後・左右方向）に移動させるＸＹステージであり、サンプルホルダ１１１がスライドガラス１２５を載置した後、サンプルホルダ１１１をマクロ画像取得位置まで搬送する。また、スキャンステージ１１２は、サンプルホルダ１１１をミクロ画像取得部１９０によるミクロ画像取得位置まで搬送してもよい。この場合、スキャンステージ１１２は、マクロ画像取得位置及びミクロ画像取得位置のそれぞれにサンプルホルダ１１１を搬送可能なマクロミクロ切替ステージであってもよい。

明視野光源１１３は、サンプルＳのマクロ画像である明視野マクロ画像を取得する際に用いられる明視野照明手段である。明視野光源１１３は、マクロ観察用カメラの結像レンズ１１８の光軸と平行の光軸を有している。例えば、明視野光源１１３は、白色光源（例えば白色ＬＥＤ）であり、サンプルホルダ１１１に保持されたスライドガラス１２５の真下に設けられている。すなわち、明視野光源１１３は、サンプルホルダ１１１におけるスライドガラス１２５の載置面に直交する方向であって、且つ、サンプルＳに対して、第２照射部１８０及びカラーイメージセンサ１１９の反対側に設けられている。明視野光源１１３は、例えば拡散板（不図示）を介して、サンプルＳに真下から明視野照明を行う。

暗視野光源１１４は、サンプルＳのマクロ画像である暗視野マクロ画像を取得する際に用いられる暗視野照明手段（斜光照明手段）である。暗視野光源１１４は、マクロ観察用カメラの結像レンズ１１８の光軸に対して傾斜した光軸を有している。例えば、暗視野光源１１４は、白色光源（例えば白色ＬＥＤ）であり、サンプルホルダ１１１に保持されたスライドガラス１２５の斜め下方に設けられている。すなわち、暗視野光源１１４は、サンプルホルダ１１１におけるスライドガラス１２５の載置面に直交する方向であって、且つ、サンプルＳに対して、第２照射部１８０及びカラーイメージセンサ１１９の反対側に設けられている。暗視野光源１１４は、サンプルＳに斜め下方から暗視野照明を行う。暗視野マクロ撮像用シャッタ１１５は、暗視野マクロ画像の撮像時に、明視野光源１１３の拡散板（不図示）を遮る。これにより、明視野光源１１３及び暗視野光源１１４が共存する構成においても、適切に暗視野照明を行うことができる。

バーコード撮像用光源１１６は、明視野マクロ画像取得時等に、スライドガラス１２５に添付されたバーコードを読み込むために光を照射する光源である。当該バーコードが読み込まれることにより、スライドガラス１２５（すなわちサンプルＳ）を一意に特定することができる。すなわち、後述する制御装置２０は、当該バーコードの情報からスライドガラス１２５（すなわちサンプルＳ）を一意に特定してもよい。

第２照射部１１７は、サンプルＳのマクロ画像である蛍光マクロ画像を取得する際に用いられる蛍光マクロ用励起光照射部である。第２照射部１１７は、励起光源１３０から出力される励起光を、サンプルＳに対して斜め上方から照射する。ここでの励起光は、複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域を有する光である。このように、サンプルＳの斜め上方から励起光が照射されることにより、サンプルＳの直上にマクロ観察用カメラ（蛍光フィルタ部１２０、結像レンズ１１８、及びカラーイメージセンサ１１９）が設けられる構成において、励起光を照射する構成とマクロ観察用カメラとが干渉することなく、サンプルＳからの蛍光を適切に撮像することができる。

第２照射部１１７から照射される励起光に係る構成である、励起光源１３０、第１導光ファイバ１４０、第１照射部１５０、蛍光マクロミラー１６０、及び第２導光ファイバ１７０について説明する。

励起光源１３０は、マクロ画像取得部１１０における蛍光マクロ画像の取得に係る励起光、及び、ミクロ画像取得部１９０における蛍光ミクロ画像の取得に係る励起光を生成して出力する光源（例えばＬＥＤ）である。このように、画像取得装置１では、蛍光マクロ画像及び蛍光ミクロ画像の取得に係る光源として同一の励起光源１３０が用いられている。なお、本実施形態では、蛍光マクロ画像及び蛍光ミクロ画像の取得に係る光源として同一の励起光源１３０が用いられるとして説明するがこれに限定されず、蛍光マクロ画像及び蛍光ミクロ画像の取得に係る光源としてそれぞれ別の光源が用いられてもよい。

励起光源１３０は、複数の励起波長域の励起光を出射可能に構成されている。励起光源１３０は、励起光の励起波長域を切り替えながら出射することができる。複数の励起波長域は、例えばマルチバンドパスフィルタである蛍光フィルタ部１２０の各反射波長域に対応している（詳細は後述）。

第１導光ファイバ１４０は、励起光源１３０から出力された励起光を第１照射部１５０まで導光する光ファイバである。第１照射部１５０は、第１導光ファイバ１４０を介して励起光源１３０から導光された励起光を、蛍光マクロミラー１６０に向けて照射する。蛍光マクロミラー１６０は、第１照射部１５０から照射された励起光の光路上に配置されており、励起光を反射して第２導光ファイバ１７０に導光する。なお、蛍光マクロミラー１６０は、蛍光ミクロ画像取得時には、ミラーの角度が変更されて、励起光をミクロ画像取得部１９０方向に導光する。第２導光ファイバ１７０は、蛍光マクロミラー１６０を介して入力された励起光をマクロ画像取得部１１０の第２照射部１１７まで導光する。

蛍光フィルタ部１２０は、サンプルＳの直上であってサンプルＳとカラーイメージセンサ１１９との間の領域に設けられており、複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する。このような蛍光フィルタ部１２０によれば、励起波長域の光が反射されるので、励起波長域の光がカラーイメージセンサ１１９によって撮像されることが抑制される。

蛍光フィルタ部１２０は、例えば、マルチバンドパスフィルタを含むPinkel配置で使用されるフィルタであってもよい。マルチバンドパスフィルタが用いられる構成においては、励起波長域の切り替えに応じてフィルタを切り替える必要がなく、ステージ動作も１スキャンでよい。

切替部１２１は、蛍光フィルタ部１２０の一又は複数のマルチバンドパスフィルタを保持するフィルタホイールであり、回転することにより、蛍光の光軸上にマルチバンドパスフィルタが配置されている状態と配置されていない状態（フィルタ無しの状態）とを切り替える構成である。すなわち、切替部１２１は、結像レンズ１１８に向かう蛍光の光軸上に対して、蛍光フィルタ部１２０を出し入れ可能に構成された部材である。切替部１２１は、例えば、蛍光マクロ画像の取得時のみ蛍光フィルタ部１２０を蛍光の光軸上に設け、それ以外の場合（例えば、明視野マクロ画像又は暗視野マクロ画像の取得時）に蛍光フィルタ部１２０を蛍光の光路上から退避させてもよい。切替部１２１は、明視野マクロ画像又は暗視野マクロ画像の取得時においては、蛍光マクロ画像の取得時とは異なるマルチバンドパスフィルタに切り替えてもよい。なお、切替部１２１は、フィルタホイールに限らず、蛍光フィルタ部１２０の一又は複数のマルチバンドパスフィルタをスライドさせて光軸上に配置するスライド機構であってもよい。また、マルチバンドパスフィルタが光軸上に配置されている状態であっても、明視野マクロ画像及び暗視野マクロ画像の取得は可能であるため、切替部１２１は必ずしも設けられていなくてもよい。

なお、蛍光フィルタ部１２０は、例えば、切り替え可能な複数のシングルバンドフィルタを含むSedat配置で使用されるフィルタであってもよい。この場合、切替部１２１は、各励起波長に応じてシングルバンドフィルタの切り替えを行ってもよい。このような構成においては、スキャン動作が各励起波長域毎に行われる。

結像レンズ１１８は、蛍光フィルタ部１２０を透過した光、すなわち照射された励起光に応じたサンプルＳからの蛍光を結像するレンズである。結像レンズ１１８は、スライドガラス１２５全体をカラーイメージセンサ１１９に結像する。

カラーイメージセンサ１１９は、結像レンズ１１８によって結像された光像を撮像し、サンプルＳの蛍光マクロ画像を出力するイメージセンサである。カラーイメージセンサ１１９は、結像レンズ１１８により結像されたスライドガラス１２５全体の像を撮像する。なお、本実施形態では、カラーイメージセンサ１１９を用いるとして説明するが、カラーイメージセンサ１１９に代えてイメージセンサであるモノクロイメージセンサが用いられてもよい。

制御装置２０は、顕微鏡装置１０における画像取得動作の制御、画像取得条件の設定、及び取得されたサンプルＳの画像データの処理等を行う制御手段である。制御装置２０は、例えばＣＰＵ及び必要なメモリ、ハードディスクなどの記憶装置を含むコンピュータによって構成される。また、この制御装置２０に対して、表示装置３０、及び入力装置４０が接続されている。表示装置３０は、例えばＬＥＤディスプレイ、ＯＬＥＤディスプレイまたは液晶ディスプレイ等のディスプレイであり、本画像取得装置１の動作に必要な操作画面の表示、あるいは取得されたサンプルＳの画像の表示等に用いられる。また、入力装置４０は、例えばキーボード又はマウスであり、画像取得に必要な情報の入力、画像取得動作についての指示の入力等に用いられる。

制御装置２０は、マクロ画像取得時には、サンプルＳがマクロ画像取得位置に搬送されるようにスキャンステージ１１２を制御する。制御装置２０は、蛍光マクロ画像を取得する場合、所定の励起波長域の励起光が照射されるように励起光源１３０を制御すると共に、励起波長域に応じた蛍光フィルタ部１２０のマルチバンドパスフィルタが配置されるように切替部１２１を制御する。制御装置２０は、明視野マクロ画像を取得する場合、明視野照明が行われるように明視野光源１１３を制御する。制御装置２０は、暗視野マクロ画像を取得する場合、暗視野照明が行われるように暗視野光源１１４を制御すると共に、明視野光源１１３の拡散板（不図示）が遮られるように暗視野マクロ撮像用シャッタ１１５を制御する。また、制御装置２０は、ミクロ画像取得時には、サンプルＳがミクロ画像取得位置に搬送されるようにスキャンステージ１１２を制御する。そして、制御装置２０は、後述する、設定されたミクロ画像の取得条件でミクロ画像が取得されるように、ミクロ画像取得部１９０を制御する。

制御装置２０は、カラーイメージセンサ１１９によって撮像された蛍光マクロ画像に基づいて、サンプルＳのミクロ画像の取得条件を設定する。ミクロ画像の取得条件とは、例えば、ミクロ画像の取得時におけるフォーカス計測点の位置（フォーカス計測位置）及び露光時間等である。すなわち、制御装置２０は、蛍光マクロ画像に基づいて、ミクロ画像の取得時におけるフォーカス計測点の位置設定（フォーカス計測位置の設定）及び露光時間設定を行う。また、制御装置２０は、上述したフォーカス計測点の位置設定及び露光時間設定を行う前提として、蛍光マクロ画像に基づいて、サンプルＳに含まれる組織の領域を検出する組織認識を行う。制御装置２０は、組織認識により検出されたサンプルＳに含まれる組織の領域に基づいて、ミクロ画像の取得時におけるミクロスキャン領域を設定する。フォーカス計測点は、例えば、他の領域と比べて輝度が高い点（確認点）に設定されてもよい。また、制御装置２０は、例えば蛍光フィルタ部１２０として上述したSedat配置で使用されるフィルタが用いられる場合においては、励起波長域が異なる励起光の蛍光マクロ画像毎に組織認識を行ってもよい。さらに、制御装置２０は、励起波長域が異なる励起光の蛍光マクロ画像毎にミクロスキャン領域を設定してもよい。

図２は、準備されたサンプルＳの明視野マクロ画像、暗視野マクロ画像、及び蛍光マクロ画像を示す図である。ここでは、サンプルＳの画像として、サンプルＩのサンプルＳの画像が示されている。図２において、組織認識された領域は、四角形の組織認識領域Ａ１で示されている。また、図２において、設定された複数のフォーカス計測点は十字マークで示されている。図２から明らかなように、明視野マクロ画像及び暗視野マクロ画像においては、サンプルＩについて、高精度に組織認識を行うことができていない。例えば、サンプルＩの明視野マクロ画像では、組織認識領域Ａ１が極端に小さくなっており、また、サンプルＩの暗視野マクロ画像では、組織認識領域Ａ１が実際の組織の領域よりも大きくなっている。組織認識が適切に行われていない以上、当然に、サンプルＩの明視野マクロ画像及び暗視野マクロ画像では、フォーカス計測点の設定を適切に行うことができていない。具体的には、フォーカス計測点が組織以外の気泡やごみなどに設定されている。

これに対して、サンプルＩの蛍光マクロ画像では、組織認識領域Ａ１が実際の組織Ｓ１０の領域と概ね一致しており、高精度に組織認識を行うことができている。以上のように、蛍光マクロ画像を用いることにより、組織認識の精度を向上させることができる。

一方で、フォーカス計測点については、サンプルＩの蛍光マクロ画像では組織Ｓ１０に重なるように設定されているものの、サンプルＩの蛍光マクロ画像では組織Ｓ１０に重ならない領域（適切でない領域）に設定されている箇所がある。この点、例えば、蛍光マクロ画像に対して、ネガポジを反転させる前処理を行った上で組織認識及びフォーカス計測点の設定を行うことにより、図３に示されるように、組織認識精度をより向上させるとともに、フォーカス計測点の設定の精度を向上させることができる。図３は、サンプルＩの前処理後の蛍光マクロ画像における組織認識及びフォーカス計測点の設定を示している。図３に示される例では、組織認識領域Ａ１が実際の組織Ｓ１０の領域に一致しており、フォーカス計測点についても全て蛍光マクロ画像中の組織Ｓ１０に重なって設定されている。

制御装置２０は、上述したように、撮像された蛍光マクロ画像をネガポジ反転させる前処理を行った蛍光マクロ画像（疑似明視野蛍光マクロ画像）に基づいて、組織認識及びフォーカス計測点の位置設定（フォーカス計測位置の設定）を行ってもよい。なお、制御装置２０は、図４に示されるように、同一のサンプルＳに対して、明視野マクロ画像と、暗視野マクロ画像と、蛍光マクロ画像と、前処理後の蛍光マクロ画像（疑似明視野蛍光マクロ画像）とを、それぞれ切り替えて表示するように、表示装置３０を制御してもよい。この場合、図４に示されるように、表示装置３０に各画像の表示アイコンが表示され、表示アイコンがクリックされることにより、表示されるマクロ画像が切り替えられてもよい。

以下では、組織認識、フォーカス計測点の位置設定、及び露光時間設定を順次行う際の制御装置２０の処理及び表示装置３０における表示について、図５～図１０を参照して説明する。図５は、組織認識時の表示装置３０における表示イメージを示す図である。図５に示されるように、制御装置２０は、組織認識を行ったサンプルＳの組織Ｓ１０と、組織認識領域Ａ１と、サンプルＳの組織Ｓ１０の推定サイズＳｉとが合わせて表示されるように、表示装置３０を制御する。

つづいて、制御装置２０は、組織認識を行ったサンプルＳについてフォーカス条件設定を行い、図６に示されるように、例えば５つのフォーカス計測点がサンプルＳの組織Ｓ１０に重ねられた画像が表示されるように、表示装置３０を制御する。図６は、全色励起での蛍光マクロ画像及びフォーカス計測点の表示イメージを示す図である。全色励起での蛍光マクロ画像とは、全ての励起波長域の励起光をサンプルＳに照射した状態で検出される蛍光マクロ画像である。図７は、フォーカス条件設定処理を説明する図である。例えば、ある励起波長域（例えばＶｉｏｌｅｔ（３６０ｎｍ以上４００ｎｍ以下の波長域））の励起光を照射し、該励起光に応じた蛍光フィルタ部１２０が設定されることにより、図７（ａ）に示される蛍光マクロ画像が取得されるとする。そして、制御装置２０は、図７（ｂ）に示されるように、当該蛍光マクロ画像について、他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数（例えば５つ）抽出し、抽出した５つの確認点をそれぞれフォーカス計測点に設定する。そして、制御装置２０は、図７（ｃ）に示されるように、設定したフォーカス計測点が全色励起での蛍光マクロ画像に重畳表示されるように、表示装置３０を制御する。このように、制御装置２０は、ある励起波長域（例えばＶｉｏｌｅｔ）の励起光に応じて検出された蛍光マクロ画像からフォーカス計測点を抽出し、抽出したフォーカス計測点が全色励起での蛍光マクロ画像に重畳表示されるように表示装置３０を制御してもよい。制御装置２０は、例えば、蛍光フィルタ部１２０として上述したPinkel配置で使用されるフィルタが用いられる場合においては、上述したように、単一の励起波長域の励起光に応じた蛍光マクロ画像のみからフォーカス計測点を設定してもよい。また、制御装置２０は、例えば蛍光フィルタ部１２０として上述したSedat配置で使用されるフィルタが用いられる場合においては、励起波長域が異なる励起光の蛍光マクロ画像毎にフォーカス計測点を設定してもよい。

つづいて、制御装置２０は、励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に露光時間を設定する。すなわち、制御装置２０が、励起波長域毎に順次励起光が照射されるように励起光源１３０を制御し、カラーイメージセンサ１１９が、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像を出力する。制御装置２０は、蛍光マクロ画像において他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数（例えば３つ）だけ抽出して、図８に示されるように、例えば十字で示す３つの確認点がサンプルＳの組織Ｓ１０に重ねられた画像が表示されるように、表示装置３０を制御する。図８は、ある励起波長域での蛍光マクロ画像及び確認点の表示イメージを示す図である。

図９は、露光時間設定処理を説明する図である。制御装置２０は、上述したように、ある励起波長域（例えばＣｙａｎ（４６０ｎｍ以上４９０ｎｍ以下の波長域））の励起光に応じた蛍光マクロ画像（図９（ａ）参照）について、他の領域と比べて強度（輝度）が高い、位置が独立した３点を降順に確認点として抽出する（図９（ｂ）参照）。そして、制御装置２０は、抽出した複数（３点）の確認点の輝度に基づき、露光時間を設定する。最大輝度の位置が把握されていることから、露光時間を高精度に設定することができる。上述したように、制御装置２０は、このような露光時間設定の処理を、励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に行う。制御装置２０は、図１０に示されるように、励起光の励起波長域を切り替えることにより、適宜蛍光マクロ画像表示が切り替えられるように、表示装置３０を制御してもよい。図１０に示される例では、全色励起（Ｃｏｍｍｏｎ（例えば、複数の異なる単色光を組み合わせた波長域））の蛍光マクロ画像と、Ｖｉｏｌｅｔの蛍光マクロ画像と、Ｃｙａｎの蛍光マクロ画像とが切り替えられている。

次に、図１１～図１４を参照して、画像取得装置１が実行する処理について説明する。図１１は、マクロ画像撮像処理を示すフローチャートである。図１２は、組織認識処理を示すフローチャートである。図１３は、フォーカス計測位置の設定処理を示すフローチャートである。図１４は、露光時間設定処理を示すフローチャートである。これらの処理は、例えば、ミクロ画像の取得条件の設定に係る処理である。

マクロ画像撮像処理について説明する。図１１に示されるように、まず、明視野マクロ画像が撮像される（ステップＳ１）。具体的には、制御装置２０によって、サンプルＳがマクロ画像取得位置に搬送されるようにスキャンステージ１１２が制御され、明視野照明が行われるように明視野光源１１３が制御される。これにより、カラーイメージセンサ１１９によって明視野マクロ画像が撮像される。

つづいて、サンプルＳが蛍光サンプルであるか否かが判定され（ステップＳ２）、蛍光サンプルでない場合には処理が終了する。一方で、サンプルＳが蛍光サンプルである場合には、暗視野マクロ画像が撮像される（ステップＳ３）。具体的には、制御装置２０によって、暗視野照明が行われるように暗視野光源１１４が制御すると共に、明視野光源１１３の拡散板（不図示）が遮られるように暗視野マクロ撮像用シャッタ１１５が制御される。これにより、カラーイメージセンサ１１９によって暗視野マクロ画像が撮像される。

つづいて、蛍光マクロ画像が撮像される（ステップＳ４）。具体的には、制御装置２０によって、所定の励起波長域の励起光が照射されるように励起光源１３０が制御される（励起光照射ステップ）と共に、励起波長域に応じた蛍光フィルタ部１２０のマルチバンドパスフィルタが配置されるように切替部１２１が制御される。これにより、カラーイメージセンサ１１９によって蛍光マクロ画像が撮像される（撮像ステップ）。

組織認識処理（設定ステップ）について説明する。図１２に示されるように、まず、サンプルＳが蛍光サンプルであるか否かが判定され（ステップＳ１１）、蛍光サンプルでない場合には、明視野マクロ画像の解析が行われる（ステップＳ１２）。具体的には、制御装置２０によって、明視野マクロ画像に基づき、組織認識が行われる。一方で、サンプルＳが蛍光サンプルである場合には、まず、暗視野マクロ画像の解析が行われる（ステップＳ１３）。具体的には、制御装置２０によって、暗視野マクロ画像に基づき、組織認識が行われる。

つづいて、蛍光マクロ画像の前処理が実施される（ステップＳ１４）。具体的には、制御装置２０によって、蛍光マクロ画像のネガポジを反転させる反転処理が行われる。これにより、組織認識の精度が向上する。最後に、反転処理後の蛍光マクロ画像の解析が行われる（ステップＳ１５）。具体的には、制御装置２０によって、反転処理後の蛍光マクロ画像に基づき、組織認識が行われる。

フォーカス計測位置の設定処理（設定ステップ）について説明する。図１３に示されるように、まず、サンプルＳが蛍光サンプルであるか否かが判定され（ステップＳ２１）、蛍光サンプルでない場合には、明視野マクロ画像を用いてフォーカス計測位置の設定が行われる（ステップＳ２２）。

一方で、サンプルＳが蛍光サンプルである場合には、まず、蛍光フィルタ部１２０としてPinkel配置で使用されるフィルタが用いられているか否かが判定される（ステップＳ２３）。Pinkel配置で使用されるフィルタが用いられている場合には、単一の励起波長域の励起光に応じた蛍光マクロ画像を用いてフォーカス計測位置の設定が行われる（ステップＳ２４）。具体的には、制御装置２０によって、ある励起波長域（例えばＶｉｏｌｅｔ）の励起光に応じた蛍光マクロ画像について、他の領域と比べて輝度が高い確認点が例えば５つ抽出され、抽出された５つの確認点がそれぞれフォーカス計測点に設定される。一方で、Pinkel配置ではなくSedat配置で使用されるフィルタが用いられる場合においては、励起波長域が異なる励起光の蛍光マクロ画像毎にフォーカス計測点が設定される（ステップＳ２５）。

露光時間設定処理について説明する。図１４に示されるように、まず、サンプルＳが蛍光サンプルであるか否かが判定され（ステップＳ３１）、蛍光サンプルでない場合には、明視野マクロ画像を用いて露光時間の設定が行われる（ステップＳ３２）。

一方で、サンプルＳが蛍光サンプルである場合には、まず、蛍光マクロ画像を用いて、露光時間が設定される（ステップＳ３３）。具体的には、制御装置２０によって、励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に露光時間が設定される。制御装置２０は、蛍光マクロ画像において他の領域と比べて輝度が高い確認点を例えば３つ抽出し、該確認点に基づいて露光時間の初期値を設定する。

次に、本実施形態に係る画像取得装置１の作用効果について説明する。

本実施形態に係る画像取得装置１は、サンプルＳのマクロ画像を取得する画像取得装置であって、複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、サンプルＳに対して斜めから照射する第２照射部１１７と、複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部１２０と、照射された励起光に応じたサンプルＳからの蛍光を結像する結像レンズ１１８と、結像レンズ１１８によって結像された光像を撮像し、サンプルＳの蛍光マクロ画像を出力するカラーイメージセンサ１１９と、を有するマクロ観察用カメラと、蛍光マクロ画像に基づいて、サンプルＳのミクロ画像の取得条件を設定する制御装置２０と、を備える。

画像取得装置１では、サンプルＳに対して斜めから励起光が照射され、励起波長域の光を反射する蛍光フィルタ部１２０及び結像レンズ１１８を経たサンプルＳからの蛍光の光像がカラーイメージセンサ１１９によって撮像され、サンプルＳの蛍光マクロ画像が出力される。このように、サンプルＳに対して斜めから励起光が照射されることにより、マクロ観察用カメラがサンプルＳの直上に設けられる構成において、サンプルＳからの蛍光がカラーイメージセンサ１１９によって適切に撮像される。また、カラーイメージセンサ１１９の前段において、励起波長域の光が蛍光フィルタ部１２０によって反射されるため、カラーイメージセンサ１１９によって、励起光を含まない蛍光のみが適切に撮像される。このようにして撮像された蛍光マクロ画像が出力されて、サンプルＳのミクロ画像の取得条件が設定されることにより、ミクロ画像の取得条件を適切に設定することができる。すなわち、蛍光フィルタ部１２０を介することによって蛍光のみがカラーイメージセンサ１１９によって撮像されることにより、蛍光マクロ画像に基づき、サンプルＳにおける組織が明確に検出され、組織の領域検出やフォーカス計測位置の設定等を適切に実施し、ミクロ画像の取得条件を適切に設定することができる。

制御装置２０は、蛍光マクロ画像に基づいて、ミクロ画像の取得時における露光時間を設定してもよい。上述したように、マクロ観察用カメラから出力されるマクロ画像からサンプルＳの組織が明確に検出されるので、マクロ画像に基づき、ミクロ画像の取得時における適切な露光時間を高精度に設定することができる。

制御装置２０は、蛍光マクロ画像において他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数だけ抽出し、抽出した複数の確認点の輝度に基づき、露光時間を設定してもよい。このように、確認点の輝度が考慮されて露光時間が設定されることにより、露光時間をより高精度に設定することができる。

制御装置２０は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に、露光時間を設定してもよい。適切な露光時間は励起波長域によって異なるところ、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に露光時間が設定されることにより、露光時間をより高精度に設定することができる。

制御装置２０は、蛍光マクロ画像に基づいて、サンプルＳに含まれる組織の領域を検出する組織認識或いはミクロスキャン領域の設定を行ってもよい。さらに、制御装置２０は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に、サンプルＳに含まれる組織の領域を検出する組織認識或いはミクロスキャン領域の設定を行ってもよい。励起光を含まない鮮明な蛍光マクロ画像に基づき組織認識が行われることにより、サンプルＳに含まれる組織の領域を高精度に検出することができる。

制御装置２０は、蛍光マクロ画像に基づいて、フォーカス計測位置の設定を行ってもよい。さらに、制御装置２０は、各励起波長域に応じた蛍光マクロ画像毎に、フォーカス計測位置の設定を行ってもよい。励起光を含まない鮮明な蛍光マクロ画像に基づきフォーカス計測位置の設定が行われることにより、組織の配置に応じて、フォーカス計測位置の設定を高精度に行うことができる。

上記画像取得装置１は、サンプルＳに明視野照明を行う明視野光源１１３を更に備えていてもよい。このような構成によれば、上述した蛍光マクロ画像に加えて、明視野マクロ画像を取得することができる。

上記画像取得装置１は、サンプルＳに暗視野照明を行う暗視野光源１１４を更に備えていてもよい。このような構成によれば、上述した蛍光マクロ画像に加えて、暗視野マクロ画像を取得することができる。

上記画像取得装置１は、結像レンズ１１８に向かう蛍光の光軸上に対して、蛍光フィルタ部１２０を出し入れ可能に構成された切替部１２１を更に備えていてもよい。このような構成によれば、例えば、蛍光マクロ画像を取得する際のみ蛍光フィルタ部１２０を蛍光の光軸上に設け、それ以外の場合（例えば明視野マクロ画像を取得する際又は暗視野マクロ画像を取得する際）には蛍光フィルタ部１２０を蛍光の光軸上から退避させることが可能になり、各画像データを適切に取得することができる。

最後に、本開示に含まれる種々の例示的態様を、以下の［Ｅ１］～［Ｅ９］及び［Ｅ１０］～［Ｅ１６］に記載する。

［Ｅ１］
試料のマクロ画像を取得する画像取得装置であって、
複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、前記試料に対して斜めから照射する励起光照射部と、
前記複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各前記反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部と、照射された前記励起光に応じた前記試料からの蛍光を結像する結像レンズと、前記結像レンズによって結像された光像を撮像し、前記試料の蛍光マクロ画像データを出力するイメージセンサと、を有するマクロ観察用カメラと、
前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記試料のミクロ画像の取得条件を設定する設定部と、を備える画像取得装置。

［Ｅ２］
前記設定部は、前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記ミクロ画像の取得時における露光時間を設定する、［Ｅ１］記載の画像取得装置。

［Ｅ３］
前記設定部は、前記蛍光マクロ画像データにおいて他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数だけ抽出し、抽出した複数の前記確認点の輝度に基づき、前記露光時間を設定する、［Ｅ２］記載の画像取得装置。

［Ｅ４］
前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記露光時間を設定する、［Ｅ２］又は［Ｅ３］記載の画像取得装置。

［Ｅ５］
前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記試料に含まれる組織の領域を検出する組織認識を行う、［Ｅ１］～［Ｅ４］のいずれか一項記載の画像取得装置。

［Ｅ６］
前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、ミクロ画像の取得時におけるフォーカス計測位置を設定する、［Ｅ１］～［Ｅ５］のいずれか一項記載の画像取得装置。

［Ｅ７］
前記試料に明視野照明を行う明視野照明部を更に備える、［Ｅ１］～［Ｅ６］のいずれか一項記載の画像取得装置。

［Ｅ８］
前記試料に暗視野照明を行う暗視野照明部を更に備える、［Ｅ１］～［Ｅ７］のいずれか一項記載の画像取得装置。

［Ｅ９］
前記結像レンズに向かう前記蛍光の光軸上に対して、前記蛍光フィルタ部を出し入れ可能に構成された切替部を更に備える、［Ｅ１］～［Ｅ８］のいずれか一項記載の画像取得装置。

［Ｅ１０］
試料のマクロ画像を取得する画像取得方法であって、
複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、前記試料に対して斜めから照射する励起光照射ステップと、
照射された前記励起光に応じて前記試料から生じ、前記複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各前記反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部を透過した蛍光を、イメージセンサを用いて撮像し、前記試料の蛍光マクロ画像データを出力する撮像ステップと、
前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記試料のミクロ画像の取得条件を設定する設定ステップと、を備える画像取得方法。

［Ｅ１１］
前記設定ステップでは、前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記ミクロ画像の取得時における露光時間を設定する、［Ｅ１０］記載の画像取得方法。

［Ｅ１２］
前記設定ステップでは、前記蛍光マクロ画像データにおいて他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数だけ抽出し、抽出した複数の前記確認点の輝度に基づき、前記露光時間を設定する、［Ｅ１１］記載の画像取得方法。

［Ｅ１３］
前記励起光照射部ステップでは、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記撮像ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記露光時間を設定する、［Ｅ１１］又は［Ｅ１２］記載の画像取得方法。

［Ｅ１４］
前記励起光照射ステップでは、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記撮像ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記試料に含まれる組織の領域を検出する組織認識を行う、［Ｅ１１］～［Ｅ１３］のいずれか一項記載の画像取得方法。

［Ｅ１５］
前記励起光照射ステップでは、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
前記撮像ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
前記設定ステップでは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、ミクロ画像の取得時におけるフォーカス計測位置を設定する、［Ｅ１１］～［Ｅ１４］のいずれか一項記載の画像取得方法。

［Ｅ１６］
前記結像レンズに向かう前記蛍光の光軸上に対して、前記蛍光フィルタ部を出し入れする切替えステップを更に備える、［Ｅ１０］～［Ｅ１５］のいずれか一項記載の画像取得方法。

１…画像取得装置、２０…制御装置（設定部）、１１３…明視野光源（明視野照明部）、１１４…暗視野光源（暗視野照明部）、１１７…第２照射部（励起光照明部）、１１８…結像レンズ、１１９…カラーイメージセンサ（イメージセンサ）、１２０…蛍光フィルタ部、１２１…切替部、Ｓ…サンプル（試料）。

Claims (9)

1. 試料のマクロ画像を取得する画像取得装置であって、
   複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、前記試料に対して斜めから照射する励起光照射部と、
   前記複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各前記反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部と、照射された前記励起光に応じた前記試料からの蛍光を結像する結像レンズと、前記結像レンズによって結像された光像を撮像し、前記試料の蛍光マクロ画像データを出力するイメージセンサと、を有するマクロ観察用カメラと、
   前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記試料の蛍光ミクロ画像の取得条件を設定する設定部と、を備え、
   前記設定部は、前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記蛍光ミクロ画像の取得時における露光時間を設定し、
   前記励起光照射部は、前記蛍光マクロ画像及び前記蛍光ミクロ画像の取得に係る光源として同一の励起光源を有し、
   前記蛍光マクロ画像は、前記試料の全体像に相当する低解像度の画像である、画像取得装置。
2. 前記設定部は、前記蛍光マクロ画像データにおいて他の領域と比べて輝度が高い確認点を所定の数だけ抽出し、抽出した複数の前記確認点の輝度に基づき、前記露光時間を設定する、請求項１記載の画像取得装置。
3. 前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
   前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
   前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記露光時間を設定する、請求項１又は２記載の画像取得装置。
4. 前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
   前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
   前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記試料に含まれる組織の領域を検出する組織認識を行う、請求項１又は２記載の画像取得装置。
5. 前記励起光照射部は、各前記励起波長域毎に、前記励起光を照射し、
   前記イメージセンサは、カラーイメージセンサであって、前記カラーイメージセンサは、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データをそれぞれ出力し、
   前記設定部は、各前記励起波長域に応じた前記蛍光マクロ画像データ毎に、前記蛍光ミクロ画像の取得時におけるフォーカス計測位置を設定する、請求項１又は２記載の画像取得装置。
6. 前記試料に明視野照明を行う明視野照明部を更に備える、請求項１記載の画像取得装置。
7. 前記試料に暗視野照明を行う暗視野照明部を更に備える、請求項１記載の画像取得装置。
8. 前記結像レンズに向かう前記蛍光の光軸上に対して、前記蛍光フィルタ部を出し入れ可能に構成された切替部を更に備える、請求項６又は７記載の画像取得装置。
9. 試料のマクロ画像を取得する画像取得方法であって、
   複数の励起波長域の内の少なくとも１つの励起波長域の励起光を、前記試料に対して斜めから照射する励起光照射ステップと、
   照射された前記励起光に応じて前記試料から生じ、前記複数の励起波長域に対応する複数の反射波長域と、各前記反射波長域の間の透過波長域とをそれぞれ有する蛍光フィルタ部を透過した蛍光を、イメージセンサを用いて撮像し、前記試料の蛍光マクロ画像データを出力する撮像ステップと、
   前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記試料の蛍光ミクロ画像の取得条件を設定する設定ステップと、を備え、
   前記設定ステップでは、前記蛍光マクロ画像データに基づいて、前記蛍光ミクロ画像の取得時における露光時間を設定し、
   前記励起光照射ステップでは、前記蛍光マクロ画像及び前記蛍光ミクロ画像の取得に係る光源として同一の励起光源を用い、
   前記蛍光マクロ画像は、前記試料の全体像に相当する低解像度の画像である、画像取得方法。

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