JP7527665B2 - Method for identifying and producing eustoma plants, and eustoma plants - Google Patents
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Description
本発明は、トルコギキョウ植物を判別する方法、作出する方法、及びトルコギキョウ植物に関する。 The present invention relates to a method for identifying and producing lisianthus plants, and to lisianthus plants.
トルコギキョウは国内産出額第4位の花き品目であるが、近年はフザリウム属菌による立枯病が頻発している。現在流通するトルコギキョウ品種のほとんどがフザリウム・ソラニー罹病性であると考えられるが、国内の生産現場では薬剤等による土壌消毒を毎年のように行うものの、その効果は完全ではなく、フザリウム属菌を圃場から根絶するには至っていない。薬剤の使用は、圃場回転率の低下や生産者への費用的身体的負担等の問題も多く、化学防除に代わる立枯病病原菌の封じ込め対策方法が強く求められており、立枯病抵抗性のトルコギキョウ品種育成が強く望まれている。 Lisianthus is the fourth most produced flower crop in Japan, but in recent years there have been frequent cases of damping-off caused by Fusarium fungi. Most Lisianthus varieties currently on the market are thought to be susceptible to Fusarium solani, and although soil disinfection with chemicals is carried out almost every year at domestic production sites, this is not completely effective and Fusarium fungi have not yet been eradicated from the fields. The use of chemicals has many problems, such as a decrease in field turnover and the financial and physical burden on producers, so there is a strong demand for methods to contain the damping-off pathogen instead of chemical control, and there is a strong desire to develop Lisianthus varieties that are resistant to damping-off.
しかしながら、これまでトルコギキョウの育種は、花型や草姿などの外観や早晩性に着目して進められており、トルコギキョウの立枯病発生については報告があるものの(例えば、非特許文献1)、病害抵抗性育種は行われていない。病害抵抗性系統を育種するためには、全世代の全個体に対して病原菌を接種する必要があることが大きな理由である。 However, up until now, breeding of lisianthus has focused on the appearance, such as flower type and plant shape, and on early and late maturity, and although there have been reports of damping-off disease in lisianthus (e.g., Non-Patent Document 1), no breeding for disease resistance has been carried out. The main reason for this is that in order to breed disease-resistant strains, it is necessary to inoculate all individuals of all generations with the pathogen.
本発明は、病原菌を接種する必要のない、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー(Fusarium solani))によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法を提供することを目的とする。また、同様に、本発明は、病原菌を接種する必要のない、トルコギキョウ植物を選抜し、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示す交配後代トルコギキョウ植物を作出する方法を提供することを目的とする。さらに、本発明は、特定のDNAの特徴を有する、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示す交配後代トルコギキョウ植物を提供することを目的とする。 The present invention aims to provide a method for identifying a lisianthus plant that is resistant to lisianthus wilt disease caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) without the need for inoculation with a pathogen. Similarly, the present invention aims to provide a method for selecting a lisianthus plant and producing a progeny lisianthus plant that is resistant to lisianthus wilt disease caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) without the need for inoculation with a pathogen. Furthermore, the present invention aims to provide a progeny lisianthus plant that has specific DNA characteristics and is resistant to lisianthus wilt disease caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani).
本発明者らは、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物ユーストマ・グランディフロラム(Eustoma grandiflorum)とフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)の特定のゲノムDNAにおける違いに基づき、効率的に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別及び選抜できることを見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors have discovered that resistant lisianthus plants can be efficiently identified and selected based on differences in specific genomic DNA between Eustoma grandiflorum, a lisianthus plant susceptible to wilt disease caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), and Eustoma exaltatum, a lisianthus plant resistant to wilt disease caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), and have thus completed the present invention.
したがって、本発明は、例えば、以下の発明を提供する。
〔1〕
フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法であって、被検トルコギキョウ植物が、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含む、方法。
(1)AGTTTGCTTCCAGTGAGACCTCCAGCTCTATATATACCTGCATAAATGACGTAATAATAGAAATATGATGTGATAGTGTGTTAGTGAGGAAATTCAGTAAATACAAATAGGAAGTTTCTAATAAACTGCTAAGATCATTCCAGCTGTTTTTTCATCCAATATAGCAAGCGAACTTTCTTGTCTAAACCACAATCACATTGCCTTTGCT(配列番号1)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAATATATGTCAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAACAAGGGGAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTATTCCAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTAAGTTTTATATATTACTAAAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC(配列番号2)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)GTCACGAGTTCAAGCTGCGAAAACAACCTCTTGTAAAAAAAAGTGTAGGTTATGAATGTACGGGATGTAAAAACAGAATCTTGTAAAAAAAGTGTAGATATGACTGCACATATCAGATCGCAAAGCGATTCCGTTTCTCTCCGGACCTTGCTTGCACAAACGTAGGAAGTTACTACGGGAGCGTCCTTTGTAT(配列番号3)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)CTGTCTCATCTTTCGGCGCTTCCTCTTAAGTCTCCTCATTCTCTTCTTCTTCCACTGAACATGGCACAAACACAATCACGTTAACAGATGAAAACACTTC(配列番号4)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)GATTGATCTCTAGACTTTATATGTTAGTCTATAAATAGGGCTATATAATCTGTTAAGTCAATCAATAAGATCGCTTCTTTCTTCTTTTCTACACTTGAAGA(配列番号5)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)TGTGAAGTCATTCCAGATTCCTTGGAAACCCCATCCAGTGTATAACTGAGCACCATATCTCGCTAATGACTTGACATTTAAAAAATAGGTGCCTTACGGTT(配列番号6)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)TTTGCCCTCAAGGTCCTTCCACATTTGCAGGAGAGAAGATGTACGAGTGCTGGCACTGTCTTGCTCACCCTCCCATAGCCGCCCAGACTCTGGAGATTGTGCATTTTTAAGAATAGAAGAACCAAAAATGGAATGATTGGGCAAACCAGTAACAGCCATTCCACTTCAGTAATCAAAATCAACCATCTGACAACCCAATCATGCTAATCATAGCATAAAGTAGCATATAACACATCCATATGCTCTCATCACATCCAAAAACTGTCCATTACCAATATGCAGTTACATCAAACACCTGGTATTTGATATACAAGTGTCAGAAAATTACATTTCTGGAAAAAGAGAAAAGGTCATAACGCCCATCTTTTCTCTGAAAAGTGAAACCCACCCAACAAAAAAACTGAAAAAGTCAACATTTGAAGGCCACCGAATTATTCAAAATTTGGAATCAAATAAAGCGACGACATAAAACCCATCAATAAAAATAGAATCTTGCACACTCGCCCACCCTACCTCCCAATCA(配列番号19)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)TGCTTCAGCCCGCAATCTAAACTTCATGATCCAGCTCTTTATCAAATGCTGCATAAGGTAACTGATAATCTTTTATCAATCCGGGCATATTTGTAGTGTCATGTCTCCTTAATTTTCTATCCTGGATGACACTTTTCAATGAAGCTTTTCATTGATCTAATTTTCTTAATGGCAATAGTGTTCATGTTGTAAGTTATTTAGATCTTGTACTCCATGTTTTATCTTGGTTTCTCTTCCTCTCCCCCTTTAAATGTGATTATATACTTTAGTTTCTGGAGCTTATTTAGTATTGAATTGGTTGATTGCCTTCATGTTGATACTTGTTACATTATGGAGATTTGATTTATCATTCCTGTATTGCAGTTCATGCGAAAAGTGCTTGCACTGCTGATGGCTGAGTTCCGAAAGCTAGGTGCTAATGTTGTACATGCAACCTTTTCAAAATTCATCATTGACACTGGGAAATCTGATCTTCTTGCCGCAAAAGCTTATTGTGATAGTTTGCTCAAAACTCTGCAGACT(配列番号21)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)CCGGTGTGGGCTCAACATTAGCAAACCATGAAGTGTTTTTTTTTCACCTTTATTTGACATACCATGAAGTGTTAATCCACAATTACAAAAAATAACAAGTTTGTTAAGAAAGGCAAGGTCACCAAACAGCGGTCACACATATATACATACACACACATATATATATATATATAATGACACCTTTTAGAGAAAAAAAACTTAAGTGCTGTACCGGACATGCTCGGTGGGCTCTGGTGTCAATATTATACTATGATCATGATTAGGGCTGTAAATGAACCAAGCCGTTCGGTTGTTAGGCTCGTTTGGTTCGAGCTCAAACTCGAGCTCGGCTCGGATAAAAGGTTAATGAACAGAGCTTGAACACCTTTTTCTGTTCGAGCTCGGTAAGTGACACCGTTCGTTTAAGGTGTTCGGCTCGTTAATGTTGTTCGTTGAGTTAAACGAACCAAGCTTGAACAAGTAAATATGTTCGTTTAAATAAACGAACAAGCTCGGCTCGTTCGCTAAGTTAAATGAACAGAGCTTGAACAACGCAATGCTCGGCTCGTTCGGCTCGTTTACAGCCCTAATCATGATTAAAATGACAGGATACATATATACACACACTTTTCTTTCGACCTGCATAATTCTTTATTCTTTTTCAGTCCCTCAATGTTTTCTACTTTCTGTATAAAAGCATTATAATTTTGTAGACTTATGAAATACCCTAATTTGGTTGTCGAAGCAAAACTTCACAGGACTTCAAATAGACATGATAATATATCTGCGCTAACTTAATTATGATAACTGATGCTTTTGTTTTCTCATATACATAAATTTGTGTCTACTTTCTTTTTATGAACAAGGGGGAGAAGGGTGTCTGGAT(配列番号23)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)TCCAGTTCTACGATCAGAGCCTTAATCGAAAAAGCATAAACCAATAAACCACCGAACATGTTAGCGATGATGAGTGTAGCAACCTTTTGTCCATTGTACGGGTTGCACCTCCATTACGGTGCATTTTTCGGTCAAGGTACGCCTTGGCCATTGGGTATATTATTTACATTGTTCCAAAAAAGATGATGAGTGTAGCAAAACAGAAAATCCGTCTTATTATTTTATCTTTTAATGGTTAATGAGTAATATTTTAAGTCGGTCACTAATTATTGATAATGCTCCGTAATTTACAAGTTGGTCTCTTTGGGAG(配列番号25)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)TGGCATGACAAAAGCTAGGCTACTAAAAGACTAGGCAACCCTTTTATAAGCATATTGCATCCTGCAAGTGATGCCTTCATTCATCTTTCACTACAACGAATCAACGGAAGCAAGCTAGAAAAGCTAACTTCTGTTTTGTTTTGTCATTCTAGTTACCAATATGCACCTAAAGGAATCAACGGGCTATTTGCATTCAAACAGTGGAAAAAAAAAACTACACACATTGGAATTAAGAAGTCATTACAGTCAGACACAATAATTCGCCACGTGCCATCCTTGTAGAGAAAAACAAGAAACAGATACAGCTATCAAACATATTTTCTTCAAGGAACTTACGGCGAGACAATATGCTTACAGTTAAAGAAAACCATTATTTGCCAAGTAAGCAGAAAATATTGCTCAGGGGCCTTCA(配列番号27)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)TCTTTGCCTTCGACTTCTTTCATCTTTTAGGGTTTCCACTGCTTTTGTAACATATATACAATGATGAACTACTCTATAAATATGATGGTGATAAAATTTATTAAGAAAAAAAAAAGAAAAGATTGATGAATGCCGCCCGGTAAGGTCCCGAGTTCGAACCAGAATCAGAAACGGAACTAGCTTTCGAATATATATGTCCTAATAGCCATGCATCCTGTAACACTTTTCTACTATAAGTCCTAATAGTCTAAAAAACTGTACATTGAGGCCTTCTCTTCCCATTTTGCCCAAATTTCCTGGGACCAGCCA(配列番号29)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)GGGAGGACGTCATACTGCAGCCTCCACAGGAAAAGATTCAGTCGACTAGAGCTCTTAAGTTTCCATATACGATGCGTAGCTTGAGCATTCCGAGACTATGTCGCTGATGTTTGCACAGTATAGACGCTAGCGACACAAAATCTACCCGAAGCGTTTGGTCCTCATCGCCAACAATCGTCCGTGTGGTTCTCCATTCGGCTGGGTCTGTGTAGTTCCTTCTTCAATATGTATGAGCCAAGTCAAACTCGAATAGTTCGGCTCTTTTAAAGAGTTATAACGTTATCAAGCCGAACTCGAACATATCTTAAGACTCGATATATTGACCAAGTCAAGTCAAACTGTTTTTTAACTTAAACGAGTCTAAACTCGAAAACCTACTATTTGATTCGGTTTGGCTCGTTAACCGCATTGTAATTATCTCATCATTCTTGTCGATTTTATTTTTTGTGCTTCACTCTATTTAATTCGTAAGAAAATTCTATTTAATTAAACTTTATATTAAAAAGAAGTTTCTTTTCTTGTTTATGGGAACCATGATCTAACCAAATATTCACTATGTTATACTGTAATAGATGAGGAGAGGGAAATATAAGAGCAACG(配列番号31)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)CTCCTCCGAATCCACTTGAGGTGCATATAGGCTTATAATATTGATTGCTTCTTTTTCAAGCACCAACTTACGGGCTATAGTTCTTTCTCCTTTCCTAAAAACACCTACTACTAAGTATGTTAATCATGCATCTGCAATAACTCCAACTCCAACTCCATTTATTATCTTATTCTTTCATGTGTACATGATTTTAAATCTTGAATTATCCAGCATCCTATCTTTTGAACATATCCACTTTGTCTCTTGTAAAAATAAAATATTTATTTTTATCCTTATCATTGAATCCACTAATTCTATTGTTTATCCCGTTAGAGTTCCAGTGTTGCATGTTCGTAGTCTTATACTCTTACCTAAACTAGTATTTTGTCTCTTAGTATCTAACTTACGGTTTAAGAACTCTTGCTTATTTTTCACTGTATTCGAGTTCTCTAGGAGATGCAGCGTCTCCAGTTCAATTGTCGTCCCATTCGAGCCATGCGACGAGGATCCTTGTTTATTTGACACTACATCCAAGTACCTCAGATGCA(配列番号33)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)TGGTGAAATTAGCATTACAGTTTCATCTTTATTTGCAGAAATTTTCCCATAAGTTAAAAGCATAGCTAAAAACGCGTTAACTTGGCAAGTACTCGGCCTTTAACATTGATTAGACATGTGTAAAGGTTGATCTTAATGTTAGGTCCCTTAGAACACACTAAAAGGGGAGTTGAATAGTGTGTTCACCAAGTATGATTATTTTCTACGTATAAAGCAAAATTGTTAGAACATGTCATTTTAGAAATCCATTATTGAACTCCAGATCAATGCAAACCCATATCAATTTAGCAAAATTCTTATTCTCTATACCAATTCCTCTATTGGATTCTCTAATTCAAACATCTACGAAATTCCATCCATATGTAAATCAAGTATCACGAATTCTTTCGCGTTAAACTATTCTAA(配列番号35)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAATATATGTCAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAACAAGGGGAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTATTCCAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTAAGTTTTATATATTACTAAAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC(配列番号37)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)TGGCACTCTTGTGAAAGACAGTTTTATATATATAAGAGTCGCTATATATATTTTGATCATATAATGAATCTAATTCAAACTAGTAACATGCATGTTGTATATGTATGTACTATAGCAAATGGGATCACCTTTAAGACGATCTAATCAATAAACATTAAGTATGCATATGCTTAAAGTGAAATATTTGAAAGAAAAAGTTATGCCGCTAGCAATGTAGAGGTGGATTCGTTTAAAGGCCACAAGACGTTATAACTTAATTATTTTTATAAATAGTGCAATGATTGTTGTTGTATTTTTATAAATACTGCAATTAATTAATCTATGCAGGTATATATAGAGTCGAGGGTTTCACTGGA(配列番号39)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)GGTCTTCAGATGGACGTGACTTGGTATCTAATTGAATAGTTCGCTAAGTACAAAATTGTGCACGGGATGGATGATCTATCAATAGTTCATATTCATTGTATCTTATGTTACAGTCTAATTTAAACAATGGACGATCTCGTTTTTGCGATTTTTGATCACAATAAAAAAAAAATACATTAAAAGTGGACAAATAATTCGATGCAATTGATGCACTATGAAGCAAATTTGATCCTCTCGCTCAAGGTCGTAATACTGCTTAATAATTAGGTTATGGTTACTATGGGTCATCGGAAAACAACCTCTGTATGTTTCTAATACATGGATATGGTTGCATACATCTGACCCCTATACCCGCCATAGACGGGAGCCTCTAACGCAATGGTGTAATGTTGTGTTGTAATTAGGTTATGGTTACAAGGGTGGGCCTTGAACCAACTAGTAAGTTTGTTGCTTTGTAACTTTAAGGTTACCGGTTCAAGCCTGCCTCTTACACAAAGTACTGAATAAGACTTCATATATCACATCGCAAAACGATTCGACCCCTCTTTAGATCGTGCGTAAACG(配列番号41)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)GCTGCAACATTCACTTGACTTGGTCTGGTGGATGCTTCATTTCCAGAACTTTGAGCCACCCCAACAGAAACCCACAAATAAGAGATCAAAACCAACACTGTTCTCCACATATATAACTTGGCCTGCATTTTTTGCACAAAAGCCGCAGCTCAAAGTGTGATTCTTGATGTCTTTCTGGAAATATGAGTGCATCTGCAGAGAGATGCATTATGAACTCTGGGAATTCTAGTACAGAATTTGTGGAATCGTGGAAATTTGACATGGCTTGCAGGTAAGTTTCTTATACATTATTAATAATTTTTTTTCTTATTTCAAATTATATTCAGGCGCGGAAGGTTCCATATTTATTGAATCAAACTATACTGTCCTATATCTAACTTCTGCGTATCTATTCCATGAAAGGTACGAAGAAGAAGAAGTTACTTGCATTTGATTAATGAACTAAAGACGACAACAACATTCCATATGACTTTAGAGTCTCTCGCTTATGGCAGTGTATAGATGGTCGGATGTACACAACTATACCTATATGTTAGAAACGCATAGATGTTTCCCGATGACCCATAATAAAAATTGTGTCAAGCTATGTCGATCAACTGCTATCTCTCACCCCATTTTCCATCGTCCGCCACGTGCCAACAGGGAGGGTGAGCCTAAATGAGAGAATGGGGAGGAAGAATTGTATGAGTGGGATGGCTGGCGCGTGGTGGACAGAGGGAAAGGAGGTGAGGGATTTGAGGGTCCACACTAAAAGTAGCCGATAGACCTTAAGAGGGAAATTTAACTTATGTACAATCTAAAATGTCGCCTCATGTTTCAAACACACTCATCATAAACTTTTAGACCTGATAAGCTTATGACCATTATGCCCAAGTCGTATTAGCACCATACTACATGCTTAGTCG(配列番号43)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔2〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3に対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔1〕に記載の方法。
〔3〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔1〕又は〔2〕に記載の方法。
〔4〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおけ152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおけ260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおけ538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔1〕~〔3〕のいずれかに記載の方法。
〔5〕
上記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセットを用いたPCR法によって増幅したDNA断片の長さに基づき、
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することをさらに含む、〔4〕に記載の方法。
〔6〕
被検トルコギキョウ植物が、上記(1)~(19)からなる群から選択される3以上の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含む、〔1〕~〔5〕のいずれかに記載の方法。
〔7〕
〔1〕~〔6〕のいずれかの方法において、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかのゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカー。
〔8〕
ユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)とフザリウム属菌による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物において、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含む、フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する方法。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔9〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔8〕に記載の方法。
〔10〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔8〕又は〔9〕に記載の方法。
〔11〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166~193位の塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔8〕~〔10〕のいずれかに記載の方法。
〔12〕
上記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセットを用いたPCR法によって増幅したDNA断片の長さに基づき、
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することをさらに含む、〔11〕に記載の方法。
〔13〕
上記交配後代トルコギキョウ植物が、上記(1)~(19)からなる群から選択される3以上の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含む、〔8〕~〔12〕のいずれかに記載の方法。
〔14〕
〔8〕~〔13〕のいずれかの方法において、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかのゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカー。
〔15〕
ユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)とフザリウム属菌による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物であって、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすトルコギキョウ植物。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔16〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔15〕に記載の交配後代トルコギキョウ植物。
〔17〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔15〕又は〔16〕に記載の交配後代トルコギキョウ植物。
〔18〕 上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔15〕~〔17〕のいずれかに記載の交配後代トルコギキョウ植物。
〔P1〕
フザリウム・ソラニーによる立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法であって、被検トルコギキョウ植物が、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム・ソラニーによる立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含む、方法。
(1)AGTTTGCTTCCAGTGAGACCTCCAGCTCTATATATACCTGCATAAATGACGTAATAATAGAAATATGATGTGATAGTGTGTTAGTGAGGAAATTCAGTAAATACAAATAGGAAGTTTCTAATAAACTGCTAAGATCATTCCAGCTGTTTTTTCATCCAATATAGCAAGCGAACTTTCTTGTCTAAACCACAATCACATTGCCTTTGCT(配列番号1)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAATATATGTCAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAACAAGGGGAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTATTCCAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTAAGTTTTATATATTACTAAAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC(配列番号2)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)GTCACGAGTTCAAGCTGCGAAAACAACCTCTTGTAAAAAAAAGTGTAGGTTATGAATGTACGGGATGTAAAAACAGAATCTTGTAAAAAAAGTGTAGATATGACTGCACATATCAGATCGCAAAGCGATTCCGTTTCTCTCCGGACCTTGCTTGCACAAACGTAGGAAGTTACTACGGGAGCGTCCTTTGTAT(配列番号3)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)CTGTCTCATCTTTCGGCGCTTCCTCTTAAGTCTCCTCATTCTCTTCTTCTTCCACTGAACATGGCACAAACACAATCACGTTAACAGATGAAAACACTTC(配列番号4)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)GATTGATCTCTAGACTTTATATGTTAGTCTATAAATAGGGCTATATAATCTGTTAAGTCAATCAATAAGATCGCTTCTTTCTTCTTTTCTACACTTGAAGA(配列番号5)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)TGTGAAGTCATTCCAGATTCCTTGGAAACCCCATCCAGTGTATAACTGAGCACCATATCTCGCTAATGACTTGACATTTAAAAAATAGGTGCCTTACGGTT(配列番号6)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)TTTGCCCTCAAGGTCCTTCCACATTTGCAGGAGAGAAGATGTACGAGTGCTGGCACTGTCTTGCTCACCCTCCCATAGCCGCCCAGACTCTGGAGATTGTGCATTTTTAAGAATAGAAGAACCAAAAATGGAATGATTGGGCAAACCAGTAACAGCCATTCCACTTCAGTAATCAAAATCAACCATCTGACAACCCAATCATGCTAATCATAGCATAAAGTAGCATATAACACATCCATATGCTCTCATCACATCCAAAAACTGTCCATTACCAATATGCAGTTACATCAAACACCTGGTATTTGATATACAAGTGTCAGAAAATTACATTTCTGGAAAAAGAGAAAAGGTCATAACGCCCATCTTTTCTCTGAAAAGTGAAACCCACCCAACAAAAAAACTGAAAAAGTCAACATTTGAAGGCCACCGAATTATTCAAAATTTGGAATCAAATAAAGCGACGACATAAAACCCATCAATAAAAATAGAATCTTGCACACTCGCCCACCCTACCTCCCAATCA(配列番号19)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)TGCTTCAGCCCGCAATCTAAACTTCATGATCCAGCTCTTTATCAAATGCTGCATAAGGTAACTGATAATCTTTTATCAATCCGGGCATATTTGTAGTGTCATGTCTCCTTAATTTTCTATCCTGGATGACACTTTTCAATGAAGCTTTTCATTGATCTAATTTTCTTAATGGCAATAGTGTTCATGTTGTAAGTTATTTAGATCTTGTACTCCATGTTTTATCTTGGTTTCTCTTCCTCTCCCCCTTTAAATGTGATTATATACTTTAGTTTCTGGAGCTTATTTAGTATTGAATTGGTTGATTGCCTTCATGTTGATACTTGTTACATTATGGAGATTTGATTTATCATTCCTGTATTGCAGTTCATGCGAAAAGTGCTTGCACTGCTGATGGCTGAGTTCCGAAAGCTAGGTGCTAATGTTGTACATGCAACCTTTTCAAAATTCATCATTGACACTGGGAAATCTGATCTTCTTGCCGCAAAAGCTTATTGTGATAGTTTGCTCAAAACTCTGCAGACT(配列番号21)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)CCGGTGTGGGCTCAACATTAGCAAACCATGAAGTGTTTTTTTTTCACCTTTATTTGACATACCATGAAGTGTTAATCCACAATTACAAAAAATAACAAGTTTGTTAAGAAAGGCAAGGTCACCAAACAGCGGTCACACATATATACATACACACACATATATATATATATATAATGACACCTTTTAGAGAAAAAAAACTTAAGTGCTGTACCGGACATGCTCGGTGGGCTCTGGTGTCAATATTATACTATGATCATGATTAGGGCTGTAAATGAACCAAGCCGTTCGGTTGTTAGGCTCGTTTGGTTCGAGCTCAAACTCGAGCTCGGCTCGGATAAAAGGTTAATGAACAGAGCTTGAACACCTTTTTCTGTTCGAGCTCGGTAAGTGACACCGTTCGTTTAAGGTGTTCGGCTCGTTAATGTTGTTCGTTGAGTTAAACGAACCAAGCTTGAACAAGTAAATATGTTCGTTTAAATAAACGAACAAGCTCGGCTCGTTCGCTAAGTTAAATGAACAGAGCTTGAACAACGCAATGCTCGGCTCGTTCGGCTCGTTTACAGCCCTAATCATGATTAAAATGACAGGATACATATATACACACACTTTTCTTTCGACCTGCATAATTCTTTATTCTTTTTCAGTCCCTCAATGTTTTCTACTTTCTGTATAAAAGCATTATAATTTTGTAGACTTATGAAATACCCTAATTTGGTTGTCGAAGCAAAACTTCACAGGACTTCAAATAGACATGATAATATATCTGCGCTAACTTAATTATGATAACTGATGCTTTTGTTTTCTCATATACATAAATTTGTGTCTACTTTCTTTTTATGAACAAGGGGGAGAAGGGTGTCTGGAT(配列番号23)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)TCCAGTTCTACGATCAGAGCCTTAATCGAAAAAGCATAAACCAATAAACCACCGAACATGTTAGCGATGATGAGTGTAGCAACCTTTTGTCCATTGTACGGGTTGCACCTCCATTACGGTGCATTTTTCGGTCAAGGTACGCCTTGGCCATTGGGTATATTATTTACATTGTTCCAAAAAAGATGATGAGTGTAGCAAAACAGAAAATCCGTCTTATTATTTTATCTTTTAATGGTTAATGAGTAATATTTTAAGTCGGTCACTAATTATTGATAATGCTCCGTAATTTACAAGTTGGTCTCTTTGGGAG(配列番号25)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)TGGCATGACAAAAGCTAGGCTACTAAAAGACTAGGCAACCCTTTTATAAGCATATTGCATCCTGCAAGTGATGCCTTCATTCATCTTTCACTACAACGAATCAACGGAAGCAAGCTAGAAAAGCTAACTTCTGTTTTGTTTTGTCATTCTAGTTACCAATATGCACCTAAAGGAATCAACGGGCTATTTGCATTCAAACAGTGGAAAAAAAAAACTACACACATTGGAATTAAGAAGTCATTACAGTCAGACACAATAATTCGCCACGTGCCATCCTTGTAGAGAAAAACAAGAAACAGATACAGCTATCAAACATATTTTCTTCAAGGAACTTACGGCGAGACAATATGCTTACAGTTAAAGAAAACCATTATTTGCCAAGTAAGCAGAAAATATTGCTCAGGGGCCTTCA(配列番号27)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)TCTTTGCCTTCGACTTCTTTCATCTTTTAGGGTTTCCACTGCTTTTGTAACATATATACAATGATGAACTACTCTATAAATATGATGGTGATAAAATTTATTAAGAAAAAAAAAAGAAAAGATTGATGAATGCCGCCCGGTAAGGTCCCGAGTTCGAACCAGAATCAGAAACGGAACTAGCTTTCGAATATATATGTCCTAATAGCCATGCATCCTGTAACACTTTTCTACTATAAGTCCTAATAGTCTAAAAAACTGTACATTGAGGCCTTCTCTTCCCATTTTGCCCAAATTTCCTGGGACCAGCCA(配列番号29)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)GGGAGGACGTCATACTGCAGCCTCCACAGGAAAAGATTCAGTCGACTAGAGCTCTTAAGTTTCCATATACGATGCGTAGCTTGAGCATTCCGAGACTATGTCGCTGATGTTTGCACAGTATAGACGCTAGCGACACAAAATCTACCCGAAGCGTTTGGTCCTCATCGCCAACAATCGTCCGTGTGGTTCTCCATTCGGCTGGGTCTGTGTAGTTCCTTCTTCAATATGTATGAGCCAAGTCAAACTCGAATAGTTCGGCTCTTTTAAAGAGTTATAACGTTATCAAGCCGAACTCGAACATATCTTAAGACTCGATATATTGACCAAGTCAAGTCAAACTGTTTTTTAACTTAAACGAGTCTAAACTCGAAAACCTACTATTTGATTCGGTTTGGCTCGTTAACCGCATTGTAATTATCTCATCATTCTTGTCGATTTTATTTTTTGTGCTTCACTCTATTTAATTCGTAAGAAAATTCTATTTAATTAAACTTTATATTAAAAAGAAGTTTCTTTTCTTGTTTATGGGAACCATGATCTAACCAAATATTCACTATGTTATACTGTAATAGATGAGGAGAGGGAAATATAAGAGCAACG(配列番号31)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)CTCCTCCGAATCCACTTGAGGTGCATATAGGCTTATAATATTGATTGCTTCTTTTTCAAGCACCAACTTACGGGCTATAGTTCTTTCTCCTTTCCTAAAAACACCTACTACTAAGTATGTTAATCATGCATCTGCAATAACTCCAACTCCAACTCCATTTATTATCTTATTCTTTCATGTGTACATGATTTTAAATCTTGAATTATCCAGCATCCTATCTTTTGAACATATCCACTTTGTCTCTTGTAAAAATAAAATATTTATTTTTATCCTTATCATTGAATCCACTAATTCTATTGTTTATCCCGTTAGAGTTCCAGTGTTGCATGTTCGTAGTCTTATACTCTTACCTAAACTAGTATTTTGTCTCTTAGTATCTAACTTACGGTTTAAGAACTCTTGCTTATTTTTCACTGTATTCGAGTTCTCTAGGAGATGCAGCGTCTCCAGTTCAATTGTCGTCCCATTCGAGCCATGCGACGAGGATCCTTGTTTATTTGACACTACATCCAAGTACCTCAGATGCA(配列番号33)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)TGGTGAAATTAGCATTACAGTTTCATCTTTATTTGCAGAAATTTTCCCATAAGTTAAAAGCATAGCTAAAAACGCGTTAACTTGGCAAGTACTCGGCCTTTAACATTGATTAGACATGTGTAAAGGTTGATCTTAATGTTAGGTCCCTTAGAACACACTAAAAGGGGAGTTGAATAGTGTGTTCACCAAGTATGATTATTTTCTACGTATAAAGCAAAATTGTTAGAACATGTCATTTTAGAAATCCATTATTGAACTCCAGATCAATGCAAACCCATATCAATTTAGCAAAATTCTTATTCTCTATACCAATTCCTCTATTGGATTCTCTAATTCAAACATCTACGAAATTCCATCCATATGTAAATCAAGTATCACGAATTCTTTCGCGTTAAACTATTCTAA(配列番号35)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAATATATGTCAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAACAAGGGGAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTATTCCAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTAAGTTTTATATATTACTAAAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC(配列番号37)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)TGGCACTCTTGTGAAAGACAGTTTTATATATATAAGAGTCGCTATATATATTTTGATCATATAATGAATCTAATTCAAACTAGTAACATGCATGTTGTATATGTATGTACTATAGCAAATGGGATCACCTTTAAGACGATCTAATCAATAAACATTAAGTATGCATATGCTTAAAGTGAAATATTTGAAAGAAAAAGTTATGCCGCTAGCAATGTAGAGGTGGATTCGTTTAAAGGCCACAAGACGTTATAACTTAATTATTTTTATAAATAGTGCAATGATTGTTGTTGTATTTTTATAAATACTGCAATTAATTAATCTATGCAGGTATATATAGAGTCGAGGGTTTCACTGGA(配列番号39)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)GGTCTTCAGATGGACGTGACTTGGTATCTAATTGAATAGTTCGCTAAGTACAAAATTGTGCACGGGATGGATGATCTATCAATAGTTCATATTCATTGTATCTTATGTTACAGTCTAATTTAAACAATGGACGATCTCGTTTTTGCGATTTTTGATCACAATAAAAAAAAAATACATTAAAAGTGGACAAATAATTCGATGCAATTGATGCACTATGAAGCAAATTTGATCCTCTCGCTCAAGGTCGTAATACTGCTTAATAATTAGGTTATGGTTACTATGGGTCATCGGAAAACAACCTCTGTATGTTTCTAATACATGGATATGGTTGCATACATCTGACCCCTATACCCGCCATAGACGGGAGCCTCTAACGCAATGGTGTAATGTTGTGTTGTAATTAGGTTATGGTTACAAGGGTGGGCCTTGAACCAACTAGTAAGTTTGTTGCTTTGTAACTTTAAGGTTACCGGTTCAAGCCTGCCTCTTACACAAAGTACTGAATAAGACTTCATATATCACATCGCAAAACGATTCGACCCCTCTTTAGATCGTGCGTAAACG(配列番号41)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)GCTGCAACATTCACTTGACTTGGTCTGGTGGATGCTTCATTTCCAGAACTTTGAGCCACCCCAACAGAAACCCACAAATAAGAGATCAAAACCAACACTGTTCTCCACATATATAACTTGGCCTGCATTTTTTGCACAAAAGCCGCAGCTCAAAGTGTGATTCTTGATGTCTTTCTGGAAATATGAGTGCATCTGCAGAGAGATGCATTATGAACTCTGGGAATTCTAGTACAGAATTTGTGGAATCGTGGAAATTTGACATGGCTTGCAGGTAAGTTTCTTATACATTATTAATAATTTTTTTTCTTATTTCAAATTATATTCAGGCGCGGAAGGTTCCATATTTATTGAATCAAACTATACTGTCCTATATCTAACTTCTGCGTATCTATTCCATGAAAGGTACGAAGAAGAAGAAGTTACTTGCATTTGATTAATGAACTAAAGACGACAACAACATTCCATATGACTTTAGAGTCTCTCGCTTATGGCAGTGTATAGATGGTCGGATGTACACAACTATACCTATATGTTAGAAACGCATAGATGTTTCCCGATGACCCATAATAAAAATTGTGTCAAGCTATGTCGATCAACTGCTATCTCTCACCCCATTTTCCATCGTCCGCCACGTGCCAACAGGGAGGGTGAGCCTAAATGAGAGAATGGGGAGGAAGAATTGTATGAGTGGGATGGCTGGCGCGTGGTGGACAGAGGGAAAGGAGGTGAGGGATTTGAGGGTCCACACTAAAAGTAGCCGATAGACCTTAAGAGGGAAATTTAACTTATGTACAATCTAAAATGTCGCCTCATGTTTCAAACACACTCATCATAAACTTTTAGACCTGATAAGCTTATGACCATTATGCCCAAGTCGTATTAGCACCATACTACATGCTTAGTCG(配列番号43)のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔P2〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3に対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔P1〕に記載の方法。
〔P3〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔P1〕又は〔P2〕に記載の方法。
〔P4〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおけ152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおけ260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおけ538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔P1〕~〔P3〕のいずれかに記載の方法。
〔P5〕
上記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセットを用いたPCR法によって増幅したDNA断片の長さに基づき、
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することをさらに含む、〔P4〕に記載の方法。
〔P6〕
被検トルコギキョウ植物が、上記(1)~(19)からなる群から選択される3以上の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム・ソラニーによる立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含む、〔P1〕~〔P5〕のいずれかに記載の方法。
〔P7〕
〔P1〕~〔P6〕のいずれかの方法において、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかのゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカー。
〔P8〕
ユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)とフザリウム・ソラニーによる立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物において、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含む、フザリウム・ソラニーによる立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する方法。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔P9〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔P8〕に記載の方法。
〔P10〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔P8〕又は〔P9〕に記載の方法。
〔P11〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166~193位の塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔P8〕~〔P10〕のいずれかに記載の方法。
〔P12〕
上記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセットを用いたPCR法によって増幅したDNA断片の長さに基づき、
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することをさらに含む、〔P11〕に記載の方法。
〔P13〕
上記交配後代トルコギキョウ植物が、上記(1)~(19)からなる群から選択される3以上の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含む、〔P8〕~〔P12〕のいずれかに記載の方法。
〔P14〕
〔P8〕~〔P13〕のいずれかの方法において、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかのゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカー。
〔P15〕
ユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)とフザリウム・ソラニーによる立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物であって、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすトルコギキョウ植物。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
〔P16〕
上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することである、〔P15〕に記載の交配後代トルコギキョウ植物。
〔P17〕
上記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
上記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
上記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、〔P15〕又は〔P16〕に記載の交配後代トルコギキョウ植物。
〔P18〕 上記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
上記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
上記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
上記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
上記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位塩基が挿入されていることであり、
上記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
上記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
上記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
上記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
上記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
上記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
上記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
上記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
上記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
上記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、〔P15〕~〔P17〕のいずれかに記載の交配後代トルコギキョウ植物。
Therefore, the present invention provides, for example, the following inventions.
[1]
A method for identifying a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium fungus, the method comprising: identifying a test lisianthus plant as a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium fungus when the test lisianthus plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) below at at least one site on a homologous chromosome:
(1) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AGTTTGCTTCCAGTGAGACCTCCAGCTCTATATATAACCTGCATAAATGACGTAATAATAGAAATATGATGTGATAGTGTGTTAGTGAGGAAATTCAGTAAATACAAAATAGGAAGTTTCTAAATACTGCTAAGATCATTCCAGCTGTTTTTTCATCCAATATAGCAAGCGAACTTTCTTGTCTAAACCACAATCACATTGCCTTTGCT (SEQ ID NO: 1) is a Eustoma exartatum type.
(2) CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAAATATATGTCAAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAAAAGGGGAAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTA TTCCAAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTTAAGTTTTATATATTACTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC (SEQ ID NO: 2) is a type Eustoma exartatum.
(3) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GTCACGAGTTCAAGCTGCGAAAACAACCTCTTGTAAAAAAAAAGTGTAGGTTATGAATGTACGGGATGTAAAAAACAGAATCTTGTAAAAAAAAAAGTGTAGATATGACTGCACATATCAGATCGCAAAGCGATTCCGTTTCTCTCCGGACCTTGCTTGCACAAACGTAGGAAGTTACTACGGGAGCGTCCTTGTAT (SEQ ID NO: 3) is of the Eustoma exartatum type.
(4) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of CTGTCTCATCTTTCGGCGCTTCCTCTCTTAAGTCTCCCTCATTCTCTTCTTCTTCCACTGAACATGGCACAAACACAATCACGTTAACAGATGAAAACACTTC (SEQ ID NO: 4) is a Eustoma exartatum type.
(5) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GATTGATCTCTAGACTTTATATGTTAGTCTATAAATAGGGCTATATAATCTGTTAAGTCAATCAATAAGATCGCTTCTTTCTTCTTTCTTTCTACACTTGAAGA (SEQ ID NO: 5) is a Eustoma exartatum type.
(6) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TGTGAAGTCATTCCAGATTCCTTGGAAACCCCATCCAGTGTATAACTGAGCACCATATCTCGCTAATGACTTGACATTTAAAAAAATAGGTGCCTTACGGTT (SEQ ID NO: 6) is a Eustoma exartatum type.
(7)TTTGCCCTCAAGGTCCTTCCACATTTGCAGGAGAGAGAAGATGTACGAGTGCTGGCACTGTCTTGCTCACCCTCCCATAGCCGCCCAGACTCTGGAGATTGTGCATTTTTAAGAATAGAAG AACCAAAATGGAATGATTGGGCAAACCAGTAACAGCCATTCCACTTCAGTAATCAAATCAACCATCTGACAACCCAATCATGCTAATCATAGCATAAAGTAGCATATAACACATCCATA TGCTCTCATCACATCCAAAAAAACTGTCCATTACCAATATGCAG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTACATCAAACACCTGGTATTTGATATACAAGTGTCAGAAAATTACATTTCTGGAAAAGAGAAAGGTCATAACGCCCATCTTTTCTCTGAAAGTGAAACCCACCCAACAAAAAAACTGAAAAGTCAACATTTGAAGGCCACCGAATTATTCAAAATTGGAATCAAATAAAAGCGACGACATAAAACCCATCAATAAAAAATAGAATCTTGCAACTCGCCCCACCCTACCTCCCCAATCA (SEQ ID NO: 19) is a type Eustoma exartatum.
(8) TGCTTCAGCCCGCAATCTAAACTTCATGATCCAGCTCTTTATCAAATGCTGCATAAGGTAACTGATAATCTTTTATCCAATCCGGGCATATTGTAGTGTCATGTCTCCTTTAATTTTTCTA TCCTGGATGACACTTTTCAA TGAAGCTTTTCATTGATCTAATTTTCTTAATGGCAATAGTGTTCATGTTGTAAGTTATTTAGATCTTGTACTCCATGTTTTATCTTGGTTTCTCCTCCTCCCCCTTAAATGTGATTAT ATACTTTTAGTTTCTGGAGCTTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTTAGTATTGAATTGGTTGATTGCCTTCATGTTGATACTTGTTACATTATGGAGATTTGATTTATCATTCCTGTATTGCAGTTTCATGCGAAAAGTGCTTGCACTGCTGATGGCTGAGTTCCGAAAGCTAGGTGCTAATGTTGTACATGCAACCTTTTCAAAATTCATCATTGACACTGGGAAATCTGATCTTCTTGCCGCAAAAGCTTATTGTGATAGTTTGCTCAAAAACTCTGCAGACT (SEQ ID NO: 21) is a type Eustoma exartatum.
(9) CCGGTGTGGGCTCAACATTAGCAAACCATGAAGTGTTTTTTTTTTCACCTTTATTTGACATACCATGAAGTGTTAATCCACAATTACAAAAAAATAACAAGTTTGTTAAGAAAGGCAAGGT CACCAAACAGCGGTCACATATATACATACACACACATATATATATATATAATATATATAATGACACCTTTTAGAGAAAAAAACTTAAGTGCTGTACCGGACATGCTCGGT GGGCTCTGGTGTCAATATTATACTATGATCATGATTAGGGCTGTAAATGAACCAAGCCGTTCGGTTGTTAGGCTCGTTTGGTTCGAGCTCAAACTCGAGCTCGGCTCGGATAAAAGGTTAA TGAACAGAGCTTGAACACCTTTTCTGTTCGAGCTCGGTAAGTGACACCGTTCGTTTAAGGTGTTCGGCTCGTTAATGTTGTTCGTTGAGTTAAACGAACCAAAGCTT GAACAAGTAAATATGTTCGTTAAATAAACGAACAAGCTCGGCTCGTTCGCTAAGTTAAATGAACAGAGCTTGAACAACGCAATGCTCGGCTCGTTCGGCTCGTTACAGCCCTAATCATG ATTAAATGACAGGATACATATATACACACTTTTCTTTCGACCTGCATAATTCTTTATTCTTTTTCAGTCCCTCAATGTTTTCTACTTTCTGTATAAAAGCATTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TAATTTTGTAGACTTATGAAATACCCTAATTGGTTGTCGAAGCAAAACTTCACAGGACTTCAAATAGACATGATAATATCTGCGCTAACTTAATTATGATACTGATGCTTTTGTTTTCTCATATACATAAATTGTGTCTACTTTCTTTTTATGAACAAGGGGGAGAAGGGGTGTCTGGAT (SEQ ID NO: 23) is a type Eustoma exartatum.
(10)TCCAGTTCTACGATCAGAGCCTTAATCGAAAAAAGCATAAACCAATAAAACCACCGAACATGTTAGCGATGATGAGTGTAGCAACCTTTTGTCCATTGTACGGGTTGCACCTCCCATTACG GTGCATTTTTCGGTCAAGGTACGCCTTGGCCATTGGGTATATTATTTACATTGTTCC Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAAAAAAGATGATGAGTGTAGCAAAAACAGAAAATCCGTCTTATTATTTTATCTTTTAATGGTTAATGAGTAATATTTTAAGTCGGTCACTAATTATTGATAATGCTCCGTAATTTACAAGTTGGTCTCTTTGGGAG (SEQ ID NO: 25) is a type Eustoma exaltatum.
(11) TGGCATGACAAAAGCTAGGCTACTAAAAGACTAGGCAACCCTTTATAAGCATATTGCATCCTGCAAGTGATGCCTTCATTCATCTTTCACTACAACGAATCAACGGAAGCAAGCTAG AAAAGCTAACTTCTGTTTTGTTTTGTCATTCTAGTTACCAATATGCACTAAAGGAATCAACGGGCTATTTGCATTCAAACAGTGGAAAAAAAAAACTACACACATTG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GAATTAAGAAGTCATTACAGTCAGACACAATAATTCGCCACGTGCCATCCTTGTAGAGAAAACAAAGAAAACAGATACAGCTATCAAACATATTTTCTTCAAGGAACTTACGGCGAGACAATATGCTTACAGTTAAAGAAAACCATTATTGCCAAGTAAGCAGAAAAATTTGCTCAGGGGCCTTCA (SEQ ID NO: 27) is a type Eustoma exartatum.
(12) TCTTTGCCTTCGACTTCTTTCATCTTTTAGGGTTTCCACTGCTTTTGTAACATATATACAATGATGAACTACTCTATAAATATGATGGTGATAAAAATTTATTAAGAAAAAAAAAAAGAA AAGATTGATGAATGCCGCCCGGTAAGGTCCCGAGTTTCGAACCAGAATCAGAAACGGA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of ACTAGCTTTCGAATATATAGTCCTAATAGCCATGCATCCTGTAACACTTTTCTACTATAAGTCCTAATAGTCTAAAAAAAACTGTACATTGAGGCCTTCTCTTCCCATTTTGCCAAATTTCCTGGGACCAGCCA (SEQ ID NO: 29) is a type Eustoma exartatum.
(13) GGGAGGACGTCATACTGCAGCCTCCACAGGAAAAGATTCAGTCGACTAGAGCTCTTAAGTTTCCATATACGATGCGTAGCTTGAGCATTCCGAGACTATGTCGCTGATGTTTGCACAG TATAGACGCTAGCGACACAAAATCTACCCGAAGCGTTTGG TCCTCATCGCCAACAATCGTCCGTGTGGTTCTCCATTCGGCTGGGTCTGTGTAGTTCCTTCCAATATGTATGAGCCAAGTCAAACTCGAATAGTTCGGCTCTTTAAAGAGTTATAACG TTATCAAGCCGAACTCGAACATATCTTAAGACTCGATATAT TGACCAAGTCAAGTCAAACTGTTTTTTTAACTTAAACGAGGTCTAAAACTCGAAAACCTACTATTTGATTCGGTTTGGCTCGTTAACCGCATTGTAATTATCTCATCATTCTTGTCGATTTTAT TTTTTGTGCTTCACTCTATTTAATTCGTAAGAAAATTCTAT Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTAATTAAACTTTATATTAAAAGAAGTTTCTTTTCTTGTTTATGGGAACCATGATCTAACCAAATATTCACTATGTTATACTGTAATAGATGAGGAGAGGGGAAATATAAGAGCAACG (SEQ ID NO: 31) is a type Eustoma exaltatum.
(14) CTCCTCCGAATCCACTTGAGGTGCATATAGGCTATAATAATTGATTGCTTCTTTTCAAGCACCAACTTACGGGCTATAGTTCTTTCTCCTTTCCTAAAAACACCTACTACTACTAAGTAT GTTAATCATGCATCTGCAATAACTCCAAACTCCAACTCCATTTATTATCTTATTCTTTCATGTGTACATGATTTTAAATCTTGAATTATCCAGCATCCTATCTTTTGAACATATCCACTTTG TCTCTTGTAAAAAAATAAAAATATTTATTTTTATCCTTATCATTGAAT The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of CCACTAATTCTATTGTTTATCCCGTTAGAGTTCCAGTGTTGCATGTTCGTAGTCTTATACTCTTACCTAAACTAGTATTTTGTCTCTTAGTATCTAACTTACGGTTTAAGAACTCTTGCTTATTTTTCACTGTATTCGAGTTCTCTAGGAGATGCAGCGTCTCCAGTTCAATTGTCGTCCCCATTCGAGCCATGCGACGAGGATCCTGTTTATTTGACACTACATCCAAGTACCTCAGATGCA (SEQ ID NO: 33) is a type Eustoma exartatum.
(15) TGGTGAAATTAGCATTTACAGTTTCCATCTTTATTTGCAGAAAATTTTCCCATAAGTTAAAGCATAGCTAAAACGCGTTAACTTGGCAAGTACTCGGCCTTTAACATTGATTAGACATG TGTAAAGGTTGATCTTAATGTTAGGTCCCTTAGAACACACTAAAAGGGGAGTTGAATAGTGTGTTCACCAAGTATGATTATTTTCTACGTATAAAAGCAAAATTGT Genomic DNA corresponding to that of TAGAACATGTCATTTTAGAAATCCATTATTGAACTCCAGATCAATGCAAACCCATATCAATTTAGCAAAATTCTTATTCTCTATACCAATTCCTCTATTGGATTCTCTAATTCAAACATCTACGAAATTCCATCCATATGTAAATCAAGTATCACGAATTCTTTCGCGTTAAAACTATTCTAA (SEQ ID NO: 35) is of the Eustoma exartatum type.
(16) CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAAATATATGTCAAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAAAAGGGGAAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTT ATTCCAAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTTAAGTTTTATATATTACTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAATAATATAGGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC (SEQ ID NO: 37) is a type Eustoma exartatum.
(17) TGGCACTCTTGTGAAAGACAGTTTTATATATATAAGAGTCGCTATATATTTTGATCATATAATGAATCTAATTCAAACTAGTAACATGCATGTTGTATATGTATGTACTATAGCAA ATGGGATCACCTTTAAGACGATCTAATCAATAAACATTAAGTATGCATATGCTTAAAGTGAAATATTTGAAAGAAAAAAGT Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TATGCCGCTAGCAATGTAGAGGTGGATTCGTTTAAAGGCCACAAGACGTTATAACTTAATTATTTTTAAAATAGTGCAATGATTGTTGTTGTATTTTTAAAATAACTGCAATTAAATTAAATCTATGCAGGTATATATAGAGTCGAGGGTTTCACTGGA (SEQ ID NO: 39) is a type Eustoma exaltatum.
(18) GGTCTTCAGATGGACGTGACTTGGTATCTAATTGAATAGTTCGCTAAGTACAAAATTGTGCACGGGATGGATGATCTATCAATAGTTCATATTCATTGTATCTTATGTTACAGTCTAA TTTAAACAATGGACGATCTCGTTTTTGCGAT TTTTGATCACAATAAAAAAAAAAATACATTTAAAGTGGACAAATAATTCGATGCAATTGATGCACTATGAAGCAAATTTGATCCTCTCGCTCAAGGTCGTAATACTGCTTAATAATTAGGTT ATGGTTACTATGGGTCATCGGAAAACAACCTC TGTATGTTTCTAATACATGGATATGGTTGCATACATCTGACCCCCTATAACCCGCATAGACGGGAGCCTCTAACGCAATGGTGTAATGTTGTGTTGTAATTAGGTTATGGTTACAAGGGTGG GCCTTGAACCAACTAGTAAGTTTGTTGCTTTG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TAACTTTAAGGTTACCGGTTCAAGCCTGCCTCTTACACAAAGTACTGAATAAGACTTCATATATCACATCGCAAAAACGATTCGACCCCTCTTTAGATCGTGCGTAAACG (SEQ ID NO: 41) is a type Eustoma exartatum.
(19) GCTGCAACATTCACTTGACTTGGTCTGGTGGATGCTTCATTTCCAGAACTTTGAGCCACCCCAACAGAAACCCACAAATAAGAGATCAAAACCAACACTGTTCTCCACATATATAACT TGGCCTGCATTTTTTGCACAAAAGCCGCAGCTCAAGTGTGATTCTTGATGTCTTTCTGGAAATATGAGTGCATCTGCAGAGAGATGCATTATGAACTCTGGGAATTCTAGTAGTACAG AATTTGTGGAATCGTGGAAATTTGACATGGCTTGCAGGTAAGTTTCTTTATACATTATTAATAATTTTTTTTTCTTATTTCAAAATTATATTCAGGCGCGGAAGGTTCCATATTTATTGAATCA AACTATACTGTCCTATATCTAACTTCTGCGTATCTATTCCATGAAAGGTACGAAGAAGAAGAAGTTACTTGCATTTGATTAATGAACTAAAGACGACAACAACATTCCATATGACTTT AGAGTCTCTCGCTTATGGCAGTGTATAGATGGTCGGATGTACACAACTATAACCTATATGTTAGAAACGCATAGATGTTTCCCGATGACCCATAATAAAAATTGTGTCAAGCTATGTCGATC AACTGCTATCTCTCACCCCATTTTCCATCGTCCGCCACGTGCCAACAGGGAGGGTGAGCCTAAATGAGAGAATGGGGAGGAAGAATTGTATGAGTGGGATGGCTGGCGCGTGGTGGA Genomic DNA corresponding to that of CAGAGGAAAGGAGGTGAGGGATTTGAGGGTCCAACTAAAAGTAGCCGATAGACCTTAAGAGGAAATTTAACTTATGTACAATCTAAAATGTCGCCTCATGTTTCAAACAACTCATCATAAAACTTTTAGACCTGATAAGCTTATGACCATTATGCCCAAGTCGTATTAGCACCATACTACATGCTTAGTCG (SEQ ID NO: 43) is a type Eustoma exartatum.
[2]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
The method according to [1], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[3]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The method according to [1] or [2], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in that the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[4]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, in that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is a Eustoma exartatum type, in that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The method according to any one of [1] to [3], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
[5]
Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
The method of
[6]
The method according to any one of [1] to [5], comprising identifying a test lisianthus plant as a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium sp. when the test lisianthus plant satisfies three or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
[7]
A marker for determining whether or not a genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type in the method according to any of [1] to [6].
[8]
A method for producing a eustoma plant resistant to damping-off caused by Fusarium, comprising: selecting a progeny eustoma plant between Eustoma exaltatum and a eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium when the progeny eustoma plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of the following (1) to (19) at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type.
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 is of the Eustoma exartatum type.
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type.
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type.
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type.
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type.
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type.
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type.
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type.
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type.
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type.
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type.
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type.
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type.
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type.
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type.
(18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type.
(19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
[9]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
The method according to [8], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[10]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The method according to [8] or [9], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in that the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[11]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is a Eustoma exartatum type, in that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The method according to any of [8] to [10], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
[12]
Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
The method of claim 11, further comprising determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:43 is of the Eustoma exaltatum type.
[13]
The method according to any one of [8] to [12], comprising selecting the progeny lisianthus plant when the progeny lisianthus plant satisfies three or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
[14]
A marker for determining whether or not a genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type in any of the methods according to [8] to [13].
[15]
A progeny eustoma plant of a cross between Eustoma exaltatum and a eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium sp., the eustoma plant satisfying one or more conditions selected from the group consisting of the following (1) to (19) at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type.
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 is of the Eustoma exartatum type.
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type.
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type.
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type.
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type.
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type.
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type.
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type.
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type.
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type.
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type.
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type.
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type.
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type.
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type.
(18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type.
(19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
[16]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
The hybrid progeny eustoma plant according to [15], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of the above (19) is of the Eustoma exaltatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[17]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The hybrid progeny eustoma plant according to [15] or [16], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in which the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[18] The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in (11) above is a Eustoma exartatum type, which means that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
A hybrid progeny eustoma plant according to any one of [15] to [17], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of the above (19) is of the Eustoma exartatum type, the bases at positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or the bases at positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or the bases at positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
[P1]
A method for identifying a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium solani, the method comprising: identifying a test lisianthus plant as a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium solani when the test lisianthus plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) below at at least one location on a homologous chromosome:
(1) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AGTTTGCTTCCAGTGAGACCTCCAGCTCTATATATAACCTGCATAAATGACGTAATAATAGAAATATGATGTGATAGTGTGTTAGTGAGGAAATTCAGTAAATACAAAATAGGAAGTTTCTAAATACTGCTAAGATCATTCCAGCTGTTTTTTCATCCAATATAGCAAGCGAACTTTCTTGTCTAAACCACAATCACATTGCCTTTGCT (SEQ ID NO: 1) is a Eustoma exartatum type.
(2) CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAAATATATGTCAAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAAAAGGGGAAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTTA TTCCAAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTTAAGTTTTATATATTACTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAATAATATAGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC (SEQ ID NO: 2) is a type Eustoma exartatum.
(3) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GTCACGAGTTCAAGCTGCGAAAACAACCTCTTGTAAAAAAAAAGTGTAGGTTATGAATGTACGGGATGTAAAAAACAGAATCTTGTAAAAAAAAAAGTGTAGATATGACTGCACATATCAGATCGCAAAGCGATTCCGTTTCTCTCCGGACCTTGCTTGCACAAACGTAGGAAGTTACTACGGGAGCGTCCTTGTAT (SEQ ID NO: 3) is of the Eustoma exartatum type.
(4) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of CTGTCTCATCTTTCGGCGCTTCCTCTCTTAAGTCTCCCTCATTCTCTTCTTCTTCCACTGAACATGGCACAAACACAATCACGTTAACAGATGAAAACACTTC (SEQ ID NO: 4) is a Eustoma exartatum type.
(5) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GATTGATCTCTAGACTTTATATGTTAGTCTATAAATAGGGCTATATAATCTGTTAAGTCAATCAATAAGATCGCTTCTTTCTTCTTTCTTTCTACACTTGAAGA (SEQ ID NO: 5) is a Eustoma exartatum type.
(6) Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TGTGAAGTCATTCCAGATTCCTTGGAAACCCCATCCAGTGTATAACTGAGCACCATATCTCGCTAATGACTTGACATTTAAAAAAATAGGTGCCTTACGGTT (SEQ ID NO: 6) is a Eustoma exartatum type.
(7)TTTGCCCTCAAGGTCCTTCCACATTTGCAGGAGAGAGAAGATGTACGAGTGCTGGCACTGTCTTGCTCACCCTCCCATAGCCGCCCAGACTCTGGAGATTGTGCATTTTTAAGAATAGAAG AACCAAAATGGAATGATTGGGCAAACCAGTAACAGCCATTCCACTTCAGTAATCAAATCAACCATCTGACAACCCAATCATGCTAATCATAGCATAAAGTAGCATATAACACATCCATA TGCTCTCATCACATCCAAAAAAACTGTCCATTACCAATATGCAG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTACATCAAACACCTGGTATTTGATATACAAGTGTCAGAAAATTACATTTCTGGAAAAGAGAAAGGTCATAACGCCCATCTTTTCTCTGAAAGTGAAACCCACCCAACAAAAAAACTGAAAAGTCAACATTTGAAGGCCACCGAATTATTCAAAATTGGAATCAAATAAAAGCGACGACATAAAACCCATCAATAAAAAATAGAATCTTGCAACTCGCCCCACCCTACCTCCCCAATCA (SEQ ID NO: 19) is a type Eustoma exartatum.
(8) TGCTTCAGCCCGCAATCTAAACTTCATGATCCAGCTCTTTATCAAATGCTGCATAAGGTAACTGATAATCTTTTATCCAATCCGGGCATATTGTAGTGTCATGTCTCCTTTAATTTTTCTA TCCTGGATGACACTTTTCAA TGAAGCTTTTCATTGATCTAATTTTCTTAATGGCAATAGTGTTCATGTTGTAAGTTATTTAGATCTTGTACTCCATGTTTTATCTTGGTTTCTCCTCCTCCCCCTTAAATGTGATTAT ATACTTTTAGTTTCTGGAGCTTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTTAGTATTGAATTGGTTGATTGCCTTCATGTTGATACTTGTTACATTATGGAGATTTGATTTATCATTCCTGTATTGCAGTTTCATGCGAAAAGTGCTTGCACTGCTGATGGCTGAGTTCCGAAAGCTAGGTGCTAATGTTGTACATGCAACCTTTTCAAAATTCATCATTGACACTGGGAAATCTGATCTTCTTGCCGCAAAAGCTTATTGTGATAGTTTGCTCAAAAACTCTGCAGACT (SEQ ID NO: 21) is a type Eustoma exartatum.
(9) CCGGTGTGGGCTCAACATTAGCAAACCATGAAGTGTTTTTTTTTTCACCTTTATTTGACATACCATGAAGTGTTAATCCACAATTACAAAAAAATAACAAGTTTGTTAAGAAAGGCAAGGT CACCAAACAGCGGTCACATATATACATACACACACATATATATATATATAATATATATAATGACACCTTTTAGAGAAAAAAACTTAAGTGCTGTACCGGACATGCTCGGT GGGCTCTGGTGTCAATATTATACTATGATCATGATTAGGGCTGTAAATGAACCAAGCCGTTCGGTTGTTAGGCTCGTTTGGTTCGAGCTCAAACTCGAGCTCGGCTCGGATAAAAGGTTAA TGAACAGAGCTTGAACACCTTTTCTGTTCGAGCTCGGTAAGTGACACCGTTCGTTTAAGGTGTTCGGCTCGTTAATGTTGTTCGTTGAGTTAAACGAACCAAAGCTT GAACAAGTAAATATGTTCGTTAAATAAACGAACAAGCTCGGCTCGTTCGCTAAGTTAAATGAACAGAGCTTGAACAACGCAATGCTCGGCTCGTTCGGCTCGTTACAGCCCTAATCATG ATTAAATGACAGGATACATATATACACACTTTTCTTTCGACCTGCATAATTCTTTATTCTTTTTCAGTCCCTCAATGTTTTCTACTTTCTGTATAAAAGCATTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TAATTTTGTAGACTTATGAAATACCCTAATTGGTTGTCGAAGCAAAACTTCACAGGACTTCAAATAGACATGATAATATCTGCGCTAACTTAATTATGATACTGATGCTTTTGTTTTCTCATATACATAAATTGTGTCTACTTTCTTTTTATGAACAAGGGGGAGAAGGGGTGTCTGGAT (SEQ ID NO: 23) is a type Eustoma exartatum.
(10)TCCAGTTCTACGATCAGAGCCTTAATCGAAAAAAGCATAAACCAATAAAACCACCGAACATGTTAGCGATGATGAGTGTAGCAACCTTTTGTCCATTGTACGGGTTGCACCTCCCATTACG GTGCATTTTTCGGTCAAGGTACGCCTTGGCCATTGGGTATATTATTTACATTGTTCC Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAAAAAAGATGATGAGTGTAGCAAAAACAGAAAATCCGTCTTATTATTTTATCTTTTAATGGTTAATGAGTAATATTTTAAGTCGGTCACTAATTATTGATAATGCTCCGTAATTTACAAGTTGGTCTCTTTGGGAG (SEQ ID NO: 25) is a type Eustoma exaltatum.
(11) TGGCATGACAAAAGCTAGGCTACTAAAAGACTAGGCAACCCTTTATAAGCATATTGCATCCTGCAAGTGATGCCTTCATTCATCTTTCACTACAACGAATCAACGGAAGCAAGCTAG AAAAGCTAACTTCTGTTTTGTTTTGTCATTCTAGTTACCAATATGCACTAAAGGAATCAACGGGCTATTTGCATTCAAACAGTGGAAAAAAAAAACTACACACATTG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of GAATTAAGAAGTCATTACAGTCAGACACAATAATTCGCCACGTGCCATCCTTGTAGAGAAAACAAAGAAAACAGATACAGCTATCAAACATATTTTCTTCAAGGAACTTACGGCGAGACAATATGCTTACAGTTAAAGAAAACCATTATTGCCAAGTAAGCAGAAAAATTTGCTCAGGGGCCTTCA (SEQ ID NO: 27) is a type Eustoma exartatum.
(12) TCTTTGCCTTCGACTTCTTTCATCTTTTAGGGTTTCCACTGCTTTTGTAACATATATACAATGATGAACTACTCTATAAATATGATGGTGATAAAAATTTATTAAGAAAAAAAAAAAGAA AAGATTGATGAATGCCGCCCGGTAAGGTCCCGAGTTTCGAACCAGAATCAGAAACGGA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of ACTAGCTTTCGAATATATAGTCCTAATAGCCATGCATCCTGTAACACTTTTCTACTATAAGTCCTAATAGTCTAAAAAAAACTGTACATTGAGGCCTTCTCTTCCCATTTTGCCAAATTTCCTGGGACCAGCCA (SEQ ID NO: 29) is a type Eustoma exartatum.
(13) GGGAGGACGTCATACTGCAGCCTCCAGGAAAAGATTCAGTCGACTAGAGCTCTTAAGTTTCCATATACGATGCGTAGCTTGAGCATTCCGAGACTATGTCGCTGATGTTTGCACAG TATAGACGCTAGCGACACAAAATCTACCCGAAGCGTTTGG TCCTCATCGCCAACAATCGTCCGTGTGGTTCTCCATTCGGCTGGGTCTGTGTAGTTCCTTCCAATATGTATGAGCCAAGTCAAACTCGAATAGTTCGGCTCTTTAAAGAGTTATAACG TTATCAAGCCGAACTCGAACATATCTTAAGACTCGATATAT TGACCAAGTCAAGTCAAACTGTTTTTTTAACTTAAACGAGGTCTAAAACTCGAAAACCTACTATTTGATTCGGTTTGGCTCGTTAACCGCATTGTAATTATCTCATCATTCTTGTCGATTTTAT TTTTTGTGCTTCACTCTATTTAATTCGTAAGAAAATTCTAT Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TTAATTAAACTTTATATTAAAAGAAGTTTCTTTTCTTGTTTATGGGAACCATGATCTAACCAAATATTCACTATGTTATACTGTAATAGATGAGGAGAGGGGAAATATAAGAGCAACG (SEQ ID NO: 31) is a type Eustoma exaltatum.
(14) CTCCTCCGAATCCACTTGAGGTGCATATAGGCTATAATAATTGATTGCTTCTTTTCAAGCACCAACTTACGGGCTATAGTTCTTTCTCCTTTCCTAAAAACACCTACTACTACTAAGTAT GTTAATCATGCATCTGCAATAACTCCAACTCCAACTCCATTTATTATCTTATTCTTTCATGTGTACATGATTTTAAATCTTGAATTATCCAGCATCCTATCTTTTGAACATATCCACTTTG TCTCTTGTAAAAAAATAAAAATATTTATTTTTATCCTTATCATTGAAT The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of CCACTAATTCTATTGTTTATCCCGTTAGAGTTCCAGTGTTGCATGTTCGTAGTCTTATACTCTTACCTAAACTAGTATTTTGTCTCTTAGTATCTAACTTACGGTTTAAGAACTCTTGCTTATTTTTCACTGTATTCGAGTTCTCTAGGAGATGCAGCGTCTCCAGTTCAATTGTCGTCCCCATTCGAGCCATGCGACGAGGATCCTGTTTATTTGACACTACATCCAAGTACCTCAGATGCA (SEQ ID NO: 33) is a type Eustoma exartatum.
(15) TGGTGAAATTAGCATTTACAGTTTCCATCTTTATTTGCAGAAAATTTTCCCATAAGTTAAAGCATAGCTAAAACGCGTTAACTTGGCAAGTACTCGGCCTTTAACATTGATTAGACATG TGTAAAGGTTGATCTTAATGTTAGGTCCCTTAGAACACACTAAAAGGGGAGTTGAATAGTGTGTTCACCAAGTATGATTATTTTCTACGTATAAAAGCAAAATTGT Genomic DNA corresponding to that of TAGAACATGTCATTTTAGAAATCCATTATTGAACTCCAGATCAATGCAAACCCATATCAATTTAGCAAAATTCTTATTCTCTATACCAATTCCTCTATTGGATTCTCTAATTCAAACATCTACGAAATTCCATCCATATGTAAATCAAGTATCACGAATTCTTTCGCGTTAAAACTATTCTAA (SEQ ID NO: 35) is of the Eustoma exartatum type.
(16) CAGAAGATGACGAGGCATACCATCAATCAAAAAAATATATGTCAAAAAAGTAATACAGACAATTGAATAGGCATAAAAAAAAAGGGGAAAAAAATAAGCAAGCATCATATCGTTCATTTT ATTCCAAACCATAGTTATCGAACACAGCTTAGTAGTTTAGTGGTTCAACTGGTAGGCCATTGAGCCAAACTTTTAAGTTTTATATATTACTA Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of AAATAATATAGGGGCGGACCTTCGAGCAACTGGTAAAAGGTGATGCTTTGTAACCTTGAGGTCACGGGTTCGTCCCGCGGAAAATAGCCTCGAGTTCGAGCCACAGAAATAATCTCTTGTACAAAAGTGTAAGATAAGGCTGCGTACATCAGATTGCGAAACGATCTGGCC (SEQ ID NO: 37) is a type Eustoma exartatum.
(17) TGGCACTCTTGTGAAAGACAGTTTTATATATATAAGAGTCGCTATATATTTTGATCATATAATGAATCTAATTCAAACTAGTAACATGCATGTTGTATATGTATGTACTATAGCAA ATGGGATCACCTTTAAGACGATCTAATCAATAAACATTAAGTATGCATATGCTTAAAGTGAAATATTTGAAAGAAAAAAGT Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TATGCCGCTAGCAATGTAGAGGTGGATTCGTTTAAAGGCCACAAGACGTTATAACTTAATTATTTTTAAAATAGTGCAATGATTGTTGTTGTATTTTTAAAATAACTGCAATTAAATTAAATCTATGCAGGTATATATAGAGTCGAGGGTTTCACTGGA (SEQ ID NO: 39) is a type Eustoma exaltatum.
(18) GGTCTTCAGATGGACGTGACTTGGTATCTAATTGAATAGTTCGCTAAGTACAAAATTGTGCACGGGATGGATGATCTATCAATAGTTCATATTCATTGTATCTTATGTTACAGTCTAA TTTAAACAATGGACGATCTCGTTTTTGCGAT TTTTGATCACAATAAAAAAAAAAATACATTTAAAGTGGACAAATAATTCGATGCAATTGATGCACTATGAAGCAAATTTGATCCTCTCGCTCAAGGTCGTAATACTGCTTAATAATTAGGTT ATGGTTACTATGGGTCATCGGAAAACAACCTC TGTATGTTTCTAATACATGGATATGGTTGCATACATCTGACCCCCTATAACCCGCATAGACGGGAGCCTCTAACGCAATGGTGTAATGTTGTGTTGTAATTAGGTTATGGTTACAAGGGTGG GCCTTGAACCAACTAGTAAGTTTGTTGCTTTG Genomic DNA corresponding to the genomic DNA of TAACTTTAAGGTTACCGGTTCAAGCCTGCCTCTTACACAAAGTACTGAATAAGACTTCATATATCACATCGCAAAAACGATTCGACCCCTCTTTAGATCGTGCGTAAACG (SEQ ID NO: 41) is a type Eustoma exartatum.
(19) GCTGCAACATTCACTTGACTTGGTCTGGTGGATGCTTCATTTCCAGAACTTTGAGCCACCCCAACAGAAACCCACAAATAAGAGATCAAAACCAACACTGTTCTCCACATATATAACT TGGCCTGCATTTTTTGCACAAAAGCCGCAGCTCAAGTGTGATTCTTGATGTCTTTCTGGAAATATGAGTGCATCTGCAGAGAGATGCATTATGAACTCTGGGAATTCTAGTAGTACAG AATTTGTGGAATCGTGGAAATTTGACATGGCTTGCAGGTAAGTTTCTTTATACATTATTAATAATTTTTTTTTCTTATTTCAAAATTATATTCAGGCGCGGAAGGTTCCATATTTATTGAATCA AACTATACTGTCCTATATCTAACTTCTGCGTATCTATTCCATGAAAGGTACGAAGAAGAAGAAGTTACTTGCATTTGATTAATGAACTAAAGACGACAACAACATTCCATATGACTTT AGAGTCTCTCGCTTATGGCAGTGTATAGATGGTCGGATGTACACAACTATAACCTATATGTTAGAAACGCATAGATGTTTCCCGATGACCCATAATAAAAATTGTGTCAAGCTATGTCGATC AACTGCTATCTCTCACCCCATTTTCCATCGTCCGCCACGTGCCAACAGGGAGGGTGAGCCTAAATGAGAGAATGGGGAGGAAGAATTGTATGAGTGGGATGGCTGGCGCGTGGTGGA Genomic DNA corresponding to that of CAGAGGAAAGGAGGTGAGGGATTTGAGGGTCCAACTAAAAGTAGCCGATAGACCTTAAGAGGAAATTTAACTTATGTACAATCTAAAATGTCGCCTCATGTTTCAAACAACTCATCATAAAACTTTTAGACCTGATAAGCTTATGACCATTATGCCCAAGTCGTATTAGCACCATACTACATGCTTAGTCG (SEQ ID NO: 43) is a type Eustoma exartatum.
[P2]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
The method according to [P1], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[P3]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The method according to [P1] or [P2], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in that the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[P4]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in (11) above is a Eustoma exartatum type, which means that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The method according to any one of [P1] to [P3], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exaltatum type, in which bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
[P5]
Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
The method according to [P4], further comprising determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type.
[P6]
The method according to any one of [P1] to [P5], comprising identifying a test lisianthus plant as a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium solani when the test lisianthus plant satisfies three or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
[P7]
A marker for determining whether or not a genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 and 43 is of the Eustoma exaltatum type in any of the methods [P1] to [P6].
[P8]
A method for producing a eustoma plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium solani, the method comprising: selecting a progeny eustoma plant between Eustoma exaltatum and a eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium solani, the progeny eustoma plant satisfying one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) below at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type.
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 is of the Eustoma exartatum type.
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type.
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type.
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type.
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type.
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type.
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type.
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type.
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type.
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type.
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type.
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type.
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type.
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type.
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type.
(18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type.
(19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
[P9]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of the genomic DNA of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
The method according to [P8], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[P10]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The method according to [P8] or [P9], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in that the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[P11]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is a Eustoma exartatum type, in that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The method according to any one of [P8] to [P10], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
[P12]
Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or
The method according to [P11], further comprising determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type.
[P13]
The method according to any one of [P8] to [P12], comprising selecting the progeny lisianthus plant when the progeny lisianthus plant satisfies three or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
[P14]
A marker for determining whether or not a genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 and 43 is of the Eustoma exaltatum type in any of the methods [P8] to [P13].
[P15]
A progeny eustoma plant of a cross between Eustoma exaltatum and a eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium solani, the eustoma plant satisfying one or more conditions selected from the group consisting of the following (1) to (19) at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type.
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 is of the Eustoma exartatum type.
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type.
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type.
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type.
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type.
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type.
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type.
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type.
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type.
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type.
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type.
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type.
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type.
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type.
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type.
(18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type.
(19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
[P16]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 7,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 8,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 9,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in the above (7) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in the above (11) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in the above (13) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 32;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in the above (14) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 34;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 36;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in the above (16) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 38;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in the above (17) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 40;
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 42;
A hybrid progeny lisianthus plant described in [P15], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 44.
[P17]
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is of the Eustoma exartatum type, because the base at
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
A hybrid progeny lisianthus plant described in [P15] or [P16], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, in which the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is adenine, the base at
[P18] The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 in (7) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exartatum type, which means that bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 in the above (9) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in the above (10) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted into positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in (11) above is a Eustoma exartatum type, which means that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in the above (12) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 in the above (13) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 in the above (14) is a Eustoma exaltatum type, in that bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in the above (15) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 in (16) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in the above (18) is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
A hybrid progeny eustoma plant according to any one of [P15] to [P17], wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 of (19) above is of the Eustoma exartatum type, the bases at positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or the bases at positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or the bases at positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
本発明によれば、ゲノムDNAにおける違いに基づき、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法を提供することができる。本発明は、ゲノムDNA情報を利用するため、病原菌を接種する必要がなく、簡便且つ効率的に判別及び選抜することができる。また、本発明によれば、ゲノムDNAにおける違いに基づき、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物と抵抗性であるトルコギキョウ植物の交配後代植物から、抵抗性を示すトルコギキョウ植物を効率的に選抜することができる。 According to the present invention, a method for identifying eustoma plants that are resistant to eustoma wilt caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) based on differences in genomic DNA can be provided. The present invention uses genomic DNA information, making it possible to easily and efficiently identify and select eustoma plants without the need for inoculation with pathogenic fungi. Furthermore, according to the present invention, resistant eustoma plants can be efficiently selected from progeny plants of a cross between a eustoma plant susceptible to wilt caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) and a resistant eustoma plant based on differences in genomic DNA.
フザリウム属菌は、トルコギキョウの立枯病の原因菌であり、フザリウム・ソラニー、及びフザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)等が含まれる。フザリウム・ソラニーは、トルコギキョウの立枯病の原因菌であり、現在流通するトルコギキョウ品種(ユーストマ・グランディフロラム)のほとんどがフザリウム・ソラニー罹病性であると考えられる。一方、ユーストマ・エグザルタトゥムは、フザリウム・ソラニーによる立枯病に対して抵抗性を示す。なお、本明細書において、特段の限定がない限り、「トルコギキョウ植物」はユーストマ属植物を意味する。「植物」は、特段の限定がない限り、植物又は植物の一部、例えば、胚、花粉、胚珠、配偶子、種子、葉、花、枝、果実、茎、根、葯等を含む。 Fusarium fungi are the causative fungus of wilt disease of lisianthus, and include Fusarium solani and Fusarium oxysporum. Fusarium solani is the causative fungus of wilt disease of lisianthus, and most of the lisianthus varieties (Eustoma grandiflorum) currently in circulation are thought to be susceptible to Fusarium solani. On the other hand, Eustoma exartatum is resistant to wilt disease caused by Fusarium solani. In this specification, unless otherwise specified, "lisianthus plant" means a plant of the genus Eustoma. Unless otherwise specified, "plant" includes a plant or a part of a plant, such as an embryo, pollen, ovule, gamete, seed, leaf, flower, branch, fruit, stem, root, anther, etc.
一般に、トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を有するか否かは、当業者が通常用いる方法を用いて判定ことができ、例えば、トルコギキョウ植物を人工的にフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)に感染させ、同様にフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)に感染させた罹病性のトルコギキョウ植物(Mock)と比較して、病徴が弱まれば抵抗性を有し、病徴が同等であれば抵抗性を有さない(罹病性である)と判定する方法が挙げられる。無発病の植物においては、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)の増殖が抑制され、植物には変化が見られない。一方、発病程度が進んだ植物においては、増殖したフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)の菌糸が植物の外へも観察される。このように、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)を接種した植物を観察(例えば、電子顕微鏡等により)することで、当該植物が抵抗性か罹病性かを判断することもできる。 In general, whether a lisianthus plant is resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) can be determined by a method commonly used by those skilled in the art. For example, a lisianthus plant is artificially infected with Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) and compared with a susceptible lisianthus plant (Mock) similarly infected with Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), if the symptoms are weaker, it is determined that the plant is resistant, and if the symptoms are the same, it is determined that the plant is not resistant (susceptible). In unaffected plants, the proliferation of Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) is suppressed and no changes are observed in the plant. On the other hand, in plants with advanced disease, the mycelium of the proliferated Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) is observed outside the plant. In this way, by observing (e.g., using an electron microscope, etc.) a plant inoculated with a Fusarium fungus (e.g., Fusarium solani), it is possible to determine whether the plant is resistant or susceptible.
フザリウム・ソラニーによる立枯病のトルコギキョウの抵抗性評価方法については、本発明者らが以下のように安定的に抵抗性評価を行える接種方法を確立している。
(接種方法)
水耕装置(ホームハイポニカSarah,協和(株))にトルコギキョウ植物を定植し、約3週間後に注射針で株元2箇所に針刺し付傷処理後に、菌濃度1×107~1×108個/mLのフザリウム・ソラニー懸濁液を1mL/株ずつ株元灌注する方法で接種を行う。
フザリウム・オキシスポラムの接種については、トルコギキョウ植物を土に定植し断根処理処理後に、菌濃度1×107~1×108個/mLのフザリウム・オキシスポラム懸濁液を1mL/株ずつ株元灌注する方法で接種を行う。
(評価)
フザリウム・ソラニー種後1週間毎に発病程度を調査し、表1に記載のように、発病度、発病株率を算出する。他のフザリウム属菌についても同様に抵抗性を評価することができる。
Regarding a method for evaluating resistance of lisianthus to damping-off disease caused by Fusarium solani, the present inventors have established an inoculation method that allows stable evaluation of resistance as described below.
(Inoculation method)
Lisianthus plants were planted in a hydroponic system (Home Hyponica Sarah, Kyowa Co., Ltd.), and after about three weeks, the plants were punctured with a syringe needle at two points at the base of the plants, and then inoculated by irrigating the base with 1 mL of a Fusarium solani suspension at a fungal concentration of 1 x 10 to 1 x 10 cells/mL at each plant.
For inoculation with Fusarium oxysporum, a lisianthus plant is planted in soil, the roots are pruned, and then 1 mL of a Fusarium oxysporum suspension having a fungus concentration of 1×10 7 to 1×10 8 cells/mL is irrigated at the base of the plant.
(evaluation)
The degree of disease occurrence was checked every week after Fusarium solani was infected, and the disease occurrence degree and the percentage of diseased plants were calculated as shown in Table 1. Resistance to other Fusarium species can be evaluated in the same manner.
本明細書において、例えば、発病指数0の植物を抵抗性とし、発病指数1~4の植物を罹病性としてもよく、発病指数0~1の植物を抵抗性とし、発病指数2~4を罹病性としてもよい。また、例えば、罹病性の植物が発病指数3又は4となるところを発病指数0~2に抑えることを抵抗性を示すとしてもよい。また、植物の複数の株について評価した場合、発病指数1以上を示す株の割合が、例えば、15%未満、10%未満、5%未満、1%未満又は0%である場合に、当該植物が抵抗性であるとしてもよい。また、発病指数1以上を示す株の割合が、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、95%以上又は100%である場合に、当該植物が罹病性であるとしてもよい。 In this specification, for example, a plant with a disease index of 0 may be resistant, a plant with a disease index of 1 to 4 may be susceptible, or a plant with a disease index of 0 to 1 may be resistant, and a plant with a disease index of 2 to 4 may be susceptible. For example, a plant may be resistant when its disease index is suppressed to 0 to 2, whereas a susceptible plant would have a disease index of 3 or 4. When multiple strains of a plant are evaluated, the plant may be resistant if the proportion of strains showing a disease index of 1 or higher is, for example, less than 15%, less than 10%, less than 5%, less than 1%, or 0%. The plant may be susceptible if the proportion of strains showing a disease index of 1 or higher is 60% or more, 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, or 100%.
本発明は、被験トルコギキョウ植物における、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー、フザリウム・オキシスポラム)による立枯病に罹病性であるユーストマ・グランディフロラムの特定のDNA配列に対応する配列が、フザリウム・ソラニーによる立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥム型である場合に、当該トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー、フザリウム・オキシスポラム)による立枯病に対して抵抗性を示す可能性が高いという知見に基づくものである。本発明によれば、上述したフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー、フザリウム・オキシスポラム)の接種等を必要とすることなく、DNA情報に基づき、トルコギキョウ植物が、フザリウム・オキシスポラム)フザリウム・ソラニー、フザリウム・オキシスポラム)による立枯病に対して抵抗性を示すか否かを判別することができる。トルコギキョウ植物のゲノムは約1400Mbである。 The present invention is based on the finding that if a sequence corresponding to a specific DNA sequence of Eustoma grandiflorum, which is susceptible to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani, Fusarium oxysporum), in a test lisianthus plant is of the Eustoma exartatum type, which is resistant to damping-off caused by Fusarium solani, the lisianthus plant is highly likely to be resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani, Fusarium oxysporum). According to the present invention, it is possible to determine whether a lisianthus plant is resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani, Fusarium oxysporum) based on DNA information, without the need for inoculation with the above-mentioned Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani, Fusarium oxysporum). The genome of the lisianthus plant is approximately 1400 Mb.
ユーストマ・グランディフロラムの特定のDNA配列としては、配列番号1~6に示される塩基配列、及び配列番号19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43が挙げられる。これらの塩基配列と、対応するユーストマ・エグザルタトゥムにおける塩基配列、その比較を以下に示す。 Specific DNA sequences of Eustoma grandiflorum include the base sequences shown in SEQ ID NOs: 1 to 6, as well as SEQ ID NOs: 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43. These base sequences and the corresponding base sequences in Eustoma exaltatum are compared below.
なお、‘紫盃’の学名として、ユーストマ・ラッセルリアナム(Eustoma russellianum))が使用されることもある。 The scientific name for 'Shisakusai' is sometimes called Eustoma russellianum.
表2及び表3に示すように、ユーストマ・グランディフロラムの特定のDNA配列に対応するユーストマ・エグザルタトゥムにおける配列において、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対する抵抗性と連鎖する特定のインデル(Indel)及び/又はヌクレオチドの一塩基多型が存在する。 As shown in Tables 2 and 3, in the sequence of Eustoma exaltatum corresponding to a specific DNA sequence of Eustoma grandiflorum, there are specific indels and/or single nucleotide polymorphisms of nucleotides that are linked to resistance to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani).
表2に示されるように、後述するユーストマ・グランディフロラム‘紫盃’とユーストマ・エグザルタトゥム‘大川1号’のQTL解析により見出されたインデルの一つは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号1の配列上に存在し、配列番号1に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの56位~157位の102bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号7)において欠失している。ここで、配列番号1を配列番号7と比較すると、配列番号1に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの52位のSNP(チミン>シトシン)も観察される。 As shown in Table 2, one of the indels found by the QTL analysis of Eustoma grandiflorum 'Shisa' and Eustoma exaltatum 'Okawa No. 1' described below is present in the sequence of SEQ ID NO: 1 of Eustoma grandiflorum, and 102 bp from positions 56 to 157 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 1 is deleted in the corresponding sequence of Eustoma exaltatum (SEQ ID NO: 7). Here, when SEQ ID NO: 1 is compared with SEQ ID NO: 7, a SNP (thymine > cytosine) at position 52 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 1 is also observed.
また、もう一つのインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号2の配列上に存在し、配列番号2に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの174位~213位の40bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号8)において欠失している。ここで、同欠失箇所において、配列番号8に記載の塩基配列においてGCの挿入(2bp)も観察される。また、配列番号2を配列番号8と比較すると、配列番号2に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの245位のSNP(グアニン>アデニン)、249位(アデニン>シトシン)も観察される。 Another indel is present in the sequence of SEQ ID NO:2 of Eustoma grandiflorum, and 40 bp from positions 174 to 213 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:2 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:8) of Eustoma exartatum. Here, a GC insertion (2 bp) is also observed in the base sequence described in SEQ ID NO:8 at the deletion site. Furthermore, when SEQ ID NO:2 is compared with SEQ ID NO:8, SNPs at positions 245 (guanine > adenine) and 249 (adenine > cytosine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:2 are also observed.
さらに、もう一つのインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号3の配列上に存在し、配列番号3に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの139位~154位の16bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号9)において欠失している。ここで、配列番号3を配列番号9と比較すると、配列番号3に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの65位のSNP(アデニン>チミン)及び159位のSNP(アデニン>グアニン)も観察される。 Furthermore, another indel exists in the sequence of SEQ ID NO: 3 of Eustoma grandiflorum, and 16 bp from positions 139 to 154 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 3 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 9) of Eustoma exaltatum. Here, when SEQ ID NO: 3 is compared with SEQ ID NO: 9, a SNP (adenine > thymine) at position 65 and a SNP (adenine > guanine) at position 159 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 3 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号19の配列上に存在し、配列番号19に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの330位~331位間に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号20)において、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の93bpが挿入されている。また、配列番号19に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの391位~392位間に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号20)において、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の11bpが挿入されている。また、配列番号19に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの78位~80位の3bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号20)において欠失している。ここで、配列番号19を配列番号20と比較すると、配列番号19に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの43位のSNP(アデニン>シトシン)、71位のSNP(チミン>アデニン)、111位のSNP(グアニン>チミン)、167位のSNP(シトシン>チミン)、216位のSNP(チミン>シトシン)、247位のSNP(シトシン>チミン)、249位のSNP(チミン>アデニン)、265位のSNP(チミン>シトシン)、275位のSNP(アデニン>グアニン)、278位のSNP(チミン>シトシン)、285位のSNP(アデニン>チミン)、393位のSNP(シトシン>アデニン)、408位のSNP(アデニン>グアニン)、414位のSNP(シトシン>アデニン)、432位のSNP(チミン>シトシン)、438位のSNP(アデニン>グアニン)、442位のSNP(チミン>アデニン)、463位のSNP(グアニン>アデニン)、466位のSNP(アデニン>グアニン)、及び500位のSNP(シトシン>チミン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:19 of Eustoma grandiflorum, and 93 bp from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:20 in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:20) are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:19. Also, 11 bp from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:20 in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:20) are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:19. Also, 3 bp from positions 78 to 80 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:19 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:20). Here, when comparing SEQ ID NO: 19 with SEQ ID NO: 20, the SNP at position 43 (adenine > cytosine), the SNP at position 71 (thymine > adenine), the SNP at position 111 (guanine > thymine), the SNP at position 167 (cytosine > thymine), the SNP at position 216 (thymine > cytosine), the SNP at position 247 (cytosine > thymine), the SNP at position 249 (thymine > adenine), the SNP at position 265 (thymine > cytosine), the SNP at position 275 (adenine > guanine), the SNP at position 276 (thymine > adenine), the SNP at position 278 (thymine > cytosine), the SNP at position 279 (thymine > adenine), the SNP at position 281 (thymine > cytosine), the SNP at position 282 (thymine > cytosine), the SNP at position 283 (thymine > cytosine), the SNP at position 284 (thymine > cytosine), the SNP at position 285 (thymine > cytosine), the SNP at position 286 (thymine > cytosine), the SNP at position 287 (thymine > cytosine), the SNP at position 288 (thymine > cytosine), the SNP at position 289 (thymine > adenine), the SNP at position 290 (thymine > cytosine), the SNP at position 291 (thymine > cytosine), the SNP at position 292 (thymine > cytosine), the SNP at position 293 (thymine > cytosine), the SNP at position 294 (thymine > cytosine), the SNP at position 2 Also observed are SNPs at positions 8 (thymine > cytosine), 285 (adenine > thymine), 393 (cytosine > adenine), 408 (adenine > guanine), 414 (cytosine > adenine), 432 (thymine > cytosine), 438 (adenine > guanine), 442 (thymine > adenine), 463 (guanine > adenine), 466 (adenine > guanine), and 500 (cytosine > thymine).
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号21の配列上に存在し、配列番号21に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの240位~291位の52bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号22)において欠失している。ここで、配列番号21を配列番号22と比較すると、配列番号21に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの84位のSNP(グアニン>アデニン)、100位のSNP(シトシン>チミン)、126位のSNP(アデニン>チミン)、141位のSNP(グアニン>アデニン)、308位のSNP(チミン>シトシン)、379位のSNP(シトシン>チミン)、387位のSNP(グアニン>アデニン)、414位のSNP(チミン>グアニン)、462位のSNP(グアニン>アデニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:21 of Eustoma grandiflorum, and 52 bp from positions 240 to 291 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:21 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:22). Here, when comparing SEQ ID NO:21 with SEQ ID NO:22, SNPs at positions 84 (guanine > adenine), 100 (cytosine > thymine), 126 (adenine > thymine), 141 (guanine > adenine), 308 (thymine > cytosine), 379 (cytosine > thymine), 387 (guanine > adenine), 414 (thymine > guanine), and 462 (guanine > adenine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:21 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号23の配列上に存在し、配列番号23に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの260位~535位の276bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号24)において欠失している。また、配列番号23に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの538位~569位の32bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号24)において欠失している。また、配列番号23に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの165位~166位間に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号24)において、配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の28bp(TAリピート 12組)が挿入されている。ここで、配列番号23を配列番号24と比較すると、配列番号23に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位のSNP(アデニン>グアニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:23 of Eustoma grandiflorum, and 276 bp from positions 260 to 535 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:23 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:24). Also, 32 bp from positions 538 to 569 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:23 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:24). Also, 28 bp (12 pairs of TA repeats) from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:23 in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO:24). Here, when comparing SEQ ID NO:23 with SEQ ID NO:24, a SNP (adenine > guanine) at position 197 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:23 is also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号25の配列上に存在し、配列番号25に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの78位~190位の113bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号26)において欠失している。また、配列番号25に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの同位置に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号25)において、配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の212bpが挿入されている。ここで、配列番号25を配列番号26と比較すると、配列番号25に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの258位のSNP(グアニン>アデニン)及び304位のSNP(チミン>アデニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:25 of Eustoma grandiflorum, and 113 bp from positions 78 to 190 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:25 are deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:26) of Eustoma exartatum. In addition, 212 bp from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:26 are inserted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:25) of Eustoma exartatum at the same position of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:25. Here, when SEQ ID NO:25 is compared with SEQ ID NO:26, SNPs (guanine>adenine) at positions 258 and 304 (thymine>adenine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:25 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号27の配列上に存在し、配列番号27に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの83位~135位の53bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号28)において欠失している。また、配列番号27に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの211位~212位間に、配列番号28に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの213位~214位の2bpが挿入されている。ここで、配列番号27を配列番号28と比較すると、配列番号27に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの15位のSNP(シトシン>グアニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:27 of Eustoma grandiflorum, and 53 bp from positions 83 to 135 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:27 are deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:28) of Eustoma exartatum. In addition, 2 bp from positions 213 to 214 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:28 are inserted between positions 211 to 212 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:27. Here, when SEQ ID NO:27 is compared with SEQ ID NO:28, a SNP (cytosine>guanine) at position 15 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:27 is also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号29の配列上に存在し、配列番号29に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの124位~203位の80bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号30)において欠失している。ここで、配列番号29を配列番号30と比較すると、配列番号29に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの109位のSNP(アデニン>グアニン)及び206位のSNP(シトシン>チミン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:29 of Eustoma grandiflorum, and 80 bp from positions 124 to 203 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:29 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:30) of Eustoma exaltatum. Here, when comparing SEQ ID NO:29 with SEQ ID NO:30, a SNP (adenine>guanine) at position 109 and a SNP (cytosine>thymine) at position 206 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:29 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号31の配列上に存在し、配列番号31に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの247位~340位の94bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号32)において欠失している。ここで、配列番号31を配列番号32と比較すると、配列番号31に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの162位のSNP(チミン>シトシン)、196位のSNP(シトシン>チミン)、229位のSNP(チミン>グアニン)、246位のSNP(チミン>アデニン)及び386位のSNP(チミン>シトシン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:31 of Eustoma grandiflorum, and 94 bp from positions 247 to 340 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:31 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exaltatum (SEQ ID NO:32). Here, when comparing SEQ ID NO:31 with SEQ ID NO:32, SNPs at positions 162 (thymine > cytosine), 196 (cytosine > thymine), 229 (thymine > guanine), 246 (thymine > adenine) and 386 (thymine > cytosine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO:31 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号33の配列上に存在し、配列番号33に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの171位~342位の172bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号34)において欠失している。ここで、配列番号33を配列番号34と比較すると、配列番号33に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの8位のSNP(グアニン>アデニン)、25位のSNP(アデニン>グアニン)、408位のSNP(チミン>アデニン)、417位のSNP(チミン>シトシン)、489位のSNP(シトシン>アデニン)、515位のSNP(チミン>シトシン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO: 33 of Eustoma grandiflorum, and 172 bp from positions 171 to 342 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 33 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exaltatum (SEQ ID NO: 34). Here, when comparing SEQ ID NO: 33 with SEQ ID NO: 34, SNPs at positions 8 (guanine > adenine), 25 (adenine > guanine), 408 (thymine > adenine), 417 (thymine > cytosine), 489 (cytosine > adenine), and 515 (thymine > cytosine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 33 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号35の配列上に存在し、配列番号35に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの198位~342位の145bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号36)において欠失している。また、配列番号35に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの同位置に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号36)において、配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の431bpが挿入されている。また、配列番号35に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの163位の1bpが、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号36)において欠失している。ここで、配列番号35を配列番号36と比較すると、配列番号35に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの4位のSNP(チミン>シトシン)、128位のSNP(チミン>グアニン)、132位のSNP(シトシン>チミン)、146位のSNP(シトシン>アデニン)、161位のSNP(アデニン>グアニン)、187位のSNP(シトシン>チミン)、189位のSNP(アデニン>チミン)、191位のSNP(チミン>アデニン)、194位のSNP(グアニン>アデニン)、195位のSNP(アデニン>チミン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO:35 of Eustoma grandiflorum, and 145 bp from positions 198 to 342 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:35 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:36) of Eustoma exartatum. In addition, 431 bp from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:36 is inserted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:36) of Eustoma exartatum at the same position of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:35. In addition, 1 bp at position 163 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:35 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO:36) of Eustoma exartatum. Here, when comparing SEQ ID NO: 35 with SEQ ID NO: 36, the following SNPs are also observed in the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 35: SNP at position 4 (thymine > cytosine), SNP at position 128 (thymine > guanine), SNP at position 132 (cytosine > thymine), SNP at position 146 (cytosine > adenine), SNP at position 161 (adenine > guanine), SNP at position 187 (cytosine > thymine), SNP at position 189 (adenine > thymine), SNP at position 191 (thymine > adenine), SNP at position 194 (guanine > adenine), and SNP at position 195 (adenine > thymine).
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号37の配列上に存在し、配列番号37に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの176位~213位の38bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号38)において欠失している。ここで、配列番号37を配列番号38と比較すると、配列番号37に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの94位のSNP(アデニン>チミン)、96位のSNP(グアニン>チミン)、174位のSNP(シトシン>グアニン)、245位のSNP(グアニン>アデニン)、249位のSNP(アデニン>シトシン)、325位のSNP(チミン>シトシン)、367位のSNP(グアニン>アデニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO: 37 of Eustoma grandiflorum, and 38 bp from positions 176 to 213 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 37 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO: 38). Here, when comparing SEQ ID NO: 37 with SEQ ID NO: 38, SNPs at positions 94 (adenine > thymine), 96 (guanine > thymine), 174 (cytosine > guanine), 245 (guanine > adenine), 249 (adenine > cytosine), 325 (thymine > cytosine), and 367 (guanine > adenine) of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 37 are also observed.
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号39の配列上に存在し、配列番号39に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの207位~315位の109bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号39)において欠失している。ここで、配列番号39を配列番号40と比較すると、配列番号39に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの33位のSNP(チミン>アデニン)、37位のSNP(アデニン>グアニン)、48位のSNP(アデニン>シトシン)、66位のSNP(グアニン>シトシン)、67位のSNP(アデニン>グアニン)、84位のSNP(チミン>シトシン)、87位のSNP(シトシン>チミン)、107位のSNP(グアニン>シトシン)、331位のSNP(チミン>シトシン)、340位のSNP(チミン>シトシン)も観察される。 A further indel is present in the sequence of SEQ ID NO:39 of Eustoma grandiflorum, and 109 bp from positions 207 to 315 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:39 is deleted in the corresponding sequence of Eustoma exaltatum (SEQ ID NO:39). Here, when comparing SEQ ID NO: 39 with SEQ ID NO: 40, the following SNPs are also observed in the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 39: SNP at position 33 (thymine > adenine), SNP at position 37 (adenine > guanine), SNP at position 48 (adenine > cytosine), SNP at position 66 (guanine > cytosine), SNP at position 67 (adenine > guanine), SNP at position 84 (thymine > cytosine), SNP at position 87 (cytosine > thymine), SNP at position 107 (guanine > cytosine), SNP at position 331 (thymine > cytosine), and SNP at position 340 (thymine > cytosine).
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号41の配列上に存在し、配列番号41に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの278位~432位の155bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号42)において欠失している。また、配列番号41に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの同位置に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号42)において、配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の18bpが挿入されている。ここで、配列番号41を配列番号42と比較すると、配列番号41に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの444位のSNP(チミン>グアニン)、451位のSNP(シトシン>チミン)、467位のSNP(チミン>アデニン)、502位のSNP(グアニン>チミン)、510位のSNP(シトシン>チミン)、512位のSNP(チミン>グアニン)、517位のSNP(チミン>シトシン)、539位のSNP(アデニン>グアニン)、540位のSNP(シトシン>グアニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO: 41 of Eustoma grandiflorum, and 155 bp from positions 278 to 432 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 41 are deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 42) of Eustoma exaltatum. In addition, 18 bp from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 42 are inserted in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 42) of Eustoma exaltatum at the same position of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 41. Here, when comparing SEQ ID NO: 41 with SEQ ID NO: 42, the following SNPs are also observed in the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 41: SNP at position 444 (thymine > guanine), SNP at position 451 (cytosine > thymine), SNP at position 467 (thymine > adenine), SNP at position 502 (guanine > thymine), SNP at position 510 (cytosine > thymine), SNP at position 512 (thymine > guanine), SNP at position 517 (thymine > cytosine), SNP at position 539 (adenine > guanine), and SNP at position 540 (cytosine > guanine).
さらなるインデルは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号43の配列上に存在し、配列番号43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの603位~746位の144bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号44)において欠失している。また、配列番号43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの同位置に、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号44)において、配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の423bpが挿入されている。また、配列番号43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの412位、414位、460位、470位、569位の各1bpがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号44)において欠失している。また、配列番号43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの473位~477位の5bp、481位~483位の3bpが、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号44)において欠失している。ここで、配列番号43を配列番号44と比較すると、配列番号43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの100位のSNP(グアニン>チミン)、210位のSNP(アデニン>グアニン)、228位のSNP(アデニン>グアニン)、298位のSNP(チミン>アデニン)、412位のSNP(アデニン>シトシン)、421位のSNP(チミン>シトシン)、439位のSNP(グアニン>アデニン)、452位のSNP(シトシン>アデニン)、461位のSNP(チミン>アデニン)、463位のSNP(シトシン>アデニン)、464位のSNP(アデニン>チミン)、485位のSNP(シトシン>チミン)、493位のSNP(アデニン>グアニン)、494位のSNP(グアニン>アデニン)、495位のSNP(チミン>アデニン)、496位のSNP(グアニン>アデニン)、502位のSNP(アデニン>グアニン)、503位のSNP(チミン>アデニン)、505位のSNP(グアニン>アデニン)、516位のSNP(アデニン>グアニン)、530位のSNP(アデニン>グアニン)、532位のSNP(グアニン>アデニン)、541位のSNP(グアニン>アデニン)、、542位のSNP(シトシン>チミン)、544位のSNP(チミン>シトシン)、549位のSNP(グアニン>アデニン)、553位のSNP(シトシン>チミン)、554位のSNP(シトシン>チミン)、577位のSNP(チミン>シトシン)、748位のSNP(シトシン>チミン)、774位のSNP(グアニン>アデニン)、775位のSNP(グアニン>チミン)、779位のSNP(アデニン>チミン)、790位のSNP(グアニン>アデニン)も観察される。 Further indels are present in the sequence of SEQ ID NO: 43 of Eustoma grandiflorum, and 144 bp from positions 603 to 746 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 43 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 44) of Eustoma exaltatum. In addition, 423 bp from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 is inserted in the same position of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 43 in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 44) of Eustoma exaltatum. In addition, 1 bp each at positions 412, 414, 460, 470, and 569 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 43 is deleted in the corresponding sequence (SEQ ID NO: 44) of Eustoma exaltatum. Furthermore, 5 bp from positions 473 to 477 and 3 bp from positions 481 to 483 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 43 are deleted in the corresponding sequence of Eustoma exartatum (SEQ ID NO: 44). Here, when SEQ ID NO: 43 is compared with SEQ ID NO: 44, the SNP at position 100 (guanine > thymine), the SNP at position 210 (adenine > guanine), the SNP at position 228 (adenine > guanine), the SNP at position 298 (thymine > adenine), the SNP at position 412 (adenine > cytosine), the SNP at position 421 (thymine > cytosine), the SNP at position 439 (guanine > cytosine), the SNP at position 440 (guanine > cytosine), the SNP at position 441 (guanine > cytosine), the SNP at position 442 (guanine > cytosine), the SNP at position 443 (guanine > cytosine), the SNP at position 444 (guanine > cytosine), the SNP at position 441 (guanine > cytosine), the SNP at position 442 ... adenine), SNP at position 452 (cytosine > adenine), SNP at position 461 (thymine > adenine), SNP at position 463 (cytosine > adenine), SNP at position 464 (adenine > thymine), SNP at position 485 (cytosine > thymine), SNP at position 493 (adenine > guanine), SNP at position 494 (guanine > adenine), SNP at position 495 (thymine > adenine), SNP at position 496 (guanine > adenine) ), SNP at position 502 (adenine > guanine), SNP at position 503 (thymine > adenine), SNP at position 505 (guanine > adenine), SNP at position 516 (adenine > guanine), SNP at position 530 (adenine > guanine), SNP at position 532 (guanine > adenine), SNP at position 541 (guanine > adenine), SNP at position 542 (cytosine > thymine), SNP at position 544 (thymine > cytosine), Also observed are SNPs at position 549 (guanine > adenine), 553 (cytosine > thymine), 554 (cytosine > thymine), 577 (thymine > cytosine), 748 (cytosine > thymine), 774 (guanine > adenine), 775 (guanine > thymine), 779 (adenine > thymine), and 790 (guanine > adenine).
表3に示されるように、ユーストマ・グランディフロラム‘紫盃’とユーストマ・エグザルタトゥム‘大川1号’のQTL解析により見出された1又は複数のSNPの一つは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号4の配列上に存在し、配列番号4に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの100位のシトシンがユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号10)においてチミンである。また、もう一つのゲノムDNAは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号5の配列上に存在し、配列番号5に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの37位のアデニン及び38位のグアニンが、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号11)において、それぞれチミン及びアデニンである。さらに、もう一つのゲノムDNAは、ユーストマ・グランディフロラムの配列番号6の配列上に存在し、配列番号6に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの8位のシトシン、40位のグアニン、53位のシトシン及び100位のチミンが、ユーストマ・エグザルタトゥムの対応する配列(配列番号12)において、順にアデニン、アデニン、チミン及びシトシンである。
As shown in Table 3, one or more SNPs found by the QTL analysis of Eustoma grandiflorum 'Shisa' and Eustoma exaltatum 'Okawa No. 1' are present on the sequence of SEQ ID NO: 4 of Eustoma grandiflorum, and the cytosine at
本明細書において、配列同一性は、例えば、少なくとも75%、80%、85%、88%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%であるか、又は100%であってもよい。 As used herein, sequence identity may be, for example, at least 75%, 80%, 85%, 88%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or even 100%.
<フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法>
本実施形態に係る、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を判別する方法(以下「本判別方法」ともいう)は、被検トルコギキョウ植物が、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含む。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
Method for identifying eustoma plants that are resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani)
The method for identifying a lisianthus plant that is resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) according to this embodiment (hereinafter also referred to as "this identification method") includes identifying a test lisianthus plant as a lisianthus plant that is resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) when the test lisianthus plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) below at at least one location on a homologous chromosome.
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type. (2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type. (3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type. (4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type. (5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 5 is of the Eustoma exartatum type. (6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is of the Eustoma exartatum type. (7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type. (8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type. (9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type. (10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type. (11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type. (12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exaltatum type. (13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type. (14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type. (15) The genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type. (16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type. (17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type. (18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type. (19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
被験トルコギキョウ植物とは、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であるか否か判別する対象となるトルコギキョウ植物を意味する。 The test lisianthus plant refers to a lisianthus plant that is to be determined to be resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani).
なお、上記(1)~(19)の条件を満たすか否かについては、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列全体を調べる必要がある訳ではなく、あくまでも配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43に記載の塩基配列からなるゲノムDNAに対応するDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型か否かを判断できればよい。例えば、表2に示し、また後述する特定のインデルが存在しているか否かで(1)~(3)及び(7)~(19)の各条件を満たすか判断する場合、特定のインデルが存在していれば(1)~(3)及び(7)~(19)の各条件を満たすと判断できるため、配列番号1~3、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかに記載の塩基配列からなるゲノムDNAに対応するDNA全体を調べる必要はなく、インデルの有無のみの調査で足りる。また、例えば、表2及び3に示し、また後述する特定のSNPが存在しているか否かで(1)~(19)の各条件を満たすか判断する場合、特定のSNPが存在していれば(1)~(19)の各条件を満たすと判断できるため、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のいずれかに記載の塩基配列からなるゲノムDNAに対応するDNA全体を調べる必要はなく、SNPの有無のみの調査で足りる。また、インデルの有無とSNPの有無を組み合わせて調査してもよい。 In order to determine whether the above conditions (1) to (19) are met, it is not necessary to examine the entire sequence of each of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43; it is sufficient to determine whether the DNA corresponding to the genomic DNA consisting of the base sequences set forth in SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type. For example, when determining whether each of the conditions (1) to (3) and (7) to (19) is satisfied based on the presence or absence of a specific indel as shown in Table 2 and described below, it can be determined that each of the conditions (1) to (3) and (7) to (19) is satisfied if a specific indel is present. Therefore, it is not necessary to examine the entire DNA corresponding to the genomic DNA consisting of any of the base sequences set forth in SEQ ID NOs: 1 to 3, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43, and it is sufficient to examine only the presence or absence of an indel. Furthermore, for example, when determining whether each of the conditions (1) to (19) is satisfied based on the presence or absence of a specific SNP shown in Tables 2 and 3 and described below, it can be determined that each of the conditions (1) to (19) is satisfied if a specific SNP is present, so it is not necessary to examine the entire DNA corresponding to the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43, and it is sufficient to examine only the presence or absence of SNPs. Also, the presence or absence of indels and the presence or absence of SNPs may be examined in combination.
被験トルコギキョウ植物は、ユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物であってもよい。ユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物として、例えば、ユーストマ・エグザルタトゥムを使用して交配により作出した交配後代植物、ユーストマ・エグザルタトゥムを使用して葯培養により作出した半数体を倍加した植物、及びユーストマ・エグザルタトゥムを使用して遺伝子組み換え技術等により作出した植物等が挙げられる。 The test lisianthus plant may be a plant derived from Eustoma exaltatum. Examples of plants derived from Eustoma exaltatum include progeny plants produced by crossbreeding using Eustoma exaltatum, doubled haploid plants produced by anther culture using Eustoma exaltatum, and plants produced by recombinant gene technology using Eustoma exaltatum.
本判別方法は、相同染色体上の2箇所において、上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、前記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別することを含むものであってもよい。この場合、当該交配後代トルコギキョウ植物は、上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすゲノムDNAをホモ型に有することになる。 The discrimination method may include discriminating the test lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above are satisfied at two locations on the homologous chromosome. In this case, the progeny lisianthus plant will have homozygous genomic DNA that satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
本判別方法は、被検トルコギキョウ植物が、上記(1)~(19)からなる群から選択される2以上、3以上、4以上、5以上、6以上、8以上、10以上、13以上、15以上、17以上又はすべての条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別するものであってもよい。 The discrimination method may be for discriminating a test lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when the test lisianthus plant satisfies 2 or more, 3 or more, 4 or more, 5 or more, 6 or more, 8 or more, 10 or more, 13 or more, 15 or more, 17 or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
また、本判別方法は、上記(1)~(19)の条件のうち、上記(1)~(3)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別するものであってもよく、上記(4)~(6)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別するものであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。 In addition, the present discrimination method may be one that discriminates the subject lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (3) among the above conditions (1) to (19) are satisfied, and may be one that discriminates the subject lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (4) to (6) are satisfied. This makes it possible to more efficiently and accurately discriminate resistant lisianthus plants.
また、本判別方法は、上記(1)~(3)に加え、(7)の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別するものであってもよい。また、本判別方法は、上記(4)~(5)に加え、(7)の条件を満たす場合に、上記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であると判別するものであってもよい。これにより強い抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。 Furthermore, the present discrimination method may be one that discriminates the subject lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when the condition (7) is satisfied in addition to the above (1) to (3). The present discrimination method may be one that discriminates the subject lisianthus plant as a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) when the condition (7) is satisfied in addition to the above (4) to (5). This makes it possible to more efficiently and accurately discriminate lisianthus plants that exhibit strong resistance.
配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列番号に示される配列に対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、上述したユーストマ・グランディフロラムとユーストマ・エグザルタトゥムの差異(表2及び表3参照)に基づき、ユーストマ・エグザルタトゥムにより近いことを意味する。 The genomic DNA corresponding to the sequences shown in each of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type, which means that it is closer to Eustoma exaltatum based on the above-mentioned differences between Eustoma grandiflorum and Eustoma exaltatum (see Tables 2 and 3).
ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、具体的には、例えば、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、及び配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することが挙げられる。ここで配列同一性は、少なくとも75%、85%、88%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%であるか、又は100%であってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。 Specifically, the Eustoma exartatum type means, for example, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:1 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:7, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:2 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:8, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:3 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:9, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:19 is of the Eustoma exartatum type means that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:20, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:22, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:24, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:26, and that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28. has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:28, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:32, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:34, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:35 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:36, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:38, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:39 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:40, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:41 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:42, and genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:43 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:44. Here, the sequence identity is at least 75%, 85%, 88%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or may be 100%. This allows resistant lisianthus plants to be identified more efficiently and accurately.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号1における56~157位の塩基が欠失していること、配列番号2における174~213位の塩基が欠失していること、配列番号3における139~154位の塩基が欠失していること、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していること、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基が挿入されていること、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていること、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していること、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していること、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していること、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していること、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていること、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していること、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していること、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていること、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。 In addition, the Eustoma exartatum type refers to, for example, a deletion of bases at positions 56 to 157 in SEQ ID NO: 1, a deletion of bases at positions 174 to 213 in SEQ ID NO: 2, a deletion of bases at positions 139 to 154 in SEQ ID NO: 3, an insertion of bases at positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 330 and 331 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, an insertion of bases at positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 391 and 392 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, a deletion of bases at positions 78 to 80 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, a deletion of bases at positions 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 21, or a deletion of bases at positions 178 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 22. a deletion of bases at positions 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases at positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases at positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases at positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; an insertion of bases at positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 between positions 165 and 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases at positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25; an insertion of the base at position 90, a deletion of bases at positions 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27, a deletion of bases at positions 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29, a deletion of bases at positions 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31, a deletion of bases at positions 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33, a deletion of bases at positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35, an insertion of bases at positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:36 into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35, a deletion of bases at positions 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37 The bases may be deleted from positions 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39, the bases may be deleted from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41, the bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 42 may be inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41, the bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, the bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence described in SEQ ID NO: 44 may be inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, or the bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43. This makes it possible to more efficiently and accurately distinguish lisianthus plants that exhibit resistance.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約105bp(例えば、100~107bp)短いこと、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約38bp(例えば、35~40bp)短いこと、配列番号3のゲノムDNAに対応する配列が約16bp(例えば、13~17bp)短いこと、配列番号19のゲノムDNAに対応する配列が約93bp(例えば、90~95bp)長いこと、配列番号19のゲノムDNAに対応する配列が約11bp(例えば、9bp~13bp)長いこと、配列番号21のゲノムDNAに対応する配列が約52bp(例えば、50bp~55bp)短いこと、配列番号23のゲノムDNAに対応する配列が約308bp(例えば、300bp~312bp)短いこと、配列番号23のゲノムDNAに対応する配列が約28bp(例えば、25bp~31bp)長いこと、配列番号25のゲノムDNAに対応する配列が約99bp(例えば、95bp~104bp)長いこと、配列番号27のゲノムDNAに対応する配列が約53bp(例えば、50bp~56bp)短いこと、配列番号29のゲノムDNAに対応する配列が約80bp(例えば、77bp~83bp)短いこと、配列番号31のゲノムDNAに対応する配列が約94bp(例えば、91bp~97bp)短いこと、配列番号33のゲノムDNAに対応する配列が約172bp(例えば、168bp~175bp)短いこと、配列番号35のゲノムDNAに対応する配列が約286bp(例えば、280bp~294bp)長いこと、配列番号37のゲノムDNAに対応する配列が約38bp(例えば、35bp~41bp)短いこと、配列番号39のゲノムDNAに対応する配列が約109bp(例えば、106bp~112bp)短いこと、配列番号41のゲノムDNAに対応する配列が約137bp(例えば、132bp~142bp)短いこと、配列番号43のゲノムDNAに対応する配列が約266bp(例えば、260bp~272bp)長いことであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。上記の各配列が特定の長さ分短いこと又は長いことは、各配列のインデルの合計が特定の長さであることを表す。すなわち、例えば、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約102bp(例えば、100~107bp)短いことは、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAにおけるインデル(この場合は欠失)が約105bpであることを意味する。 In addition, the Eustoma exartatum type means, for example, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is about 105 bp (e.g., 100-107 bp) shorter, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is about 38 bp (e.g., 35-40 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is about 16 bp (e.g., 13-17 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is about 93 bp (e.g., 90-95 bp) longer, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 20 is about 100 bp (e.g., 100-107 bp) shorter. The sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:19 is about 11 bp (e.g., 9 bp to 13 bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 is about 52 bp (e.g., 50 bp to 55 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is about 308 bp (e.g., 300 bp to 312 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is about 28 bp (e.g., 25 bp to 31 bp) longer, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 is about 99 bp (e.g., 95 bp to 104 bp) shorter. bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 is about 53 bp (e.g., 50 bp to 56 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 is about 80 bp (e.g., 77 bp to 83 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 is about 94 bp (e.g., 91 bp to 97 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 is about 172 bp (e.g., 168 bp to 175 bp) shorter, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:35 is about 286 bp (e.g., 280 bp to 294 bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is about 38 bp (e.g., 35 bp to 41 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is about 109 bp (e.g., 106 bp to 112 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is about 137 bp (e.g., 132 bp to 142 bp) shorter, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is about 266 bp (e.g., 260 bp to 272 bp) longer. This makes it possible to more efficiently and accurately identify resistant lisianthus plants. The fact that each of the above sequences is shorter or longer by a specific length indicates that the sum of the indels in each sequence is a specific length. That is, for example, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:1 is shorter by about 102 bp (e.g., 100-107 bp), which means that the indel (in this case, a deletion) in the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:1 is about 105 bp.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であることを、表2において示したSNPに基づき決定してもよく、例えば、配列番号1に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの52位の塩基がシトシンであること、配列番号2に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの245位がアデニンであり、且つ/又は249位の塩基がシトシンであること、並びに配列番号3に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの56位がチミンであり、且つ/又は159位の塩基がグアニンであることであってもよい。また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であることを、上述したインデルとSNPを組み合わせて決定してもよい。 The Eustoma exaltatum type may also be determined based on the SNPs shown in Table 2, for example, that the base at position 52 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 1 is cytosine, that the base at position 245 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 2 is adenine and/or that the base at position 249 is cytosine, and that the base at position 56 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 is thymine and/or that the base at position 159 is guanine. The Eustoma exaltatum type may also be determined by combining the above-mentioned indels and SNPs.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号10の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有すること、配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号11の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有すること、及び配列番号6のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号12の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有することことが挙げられる。また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号4における100位の塩基がチミンであること、配列番号5における37位の塩基がチミンであり、且つ/又は38位の塩基がアデニンであること、並びに、配列番号6における8位の塩基がアデニンであり、且つ/又は40位の塩基がアデニンであり、且つ/又は53位の塩基がチミンであり、且つ/又は100位の塩基がシトシンであることであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。
In addition, examples of the Eustoma exaltatum type include genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 10, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 5 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 11, and genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 12. In addition, examples of the Eustoma exaltatum type include, for example, the base at
配列番号1~6の各配列番号に示される配列のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法としては、当業者が通常用いる方法を用いることができるが、後述するインデル、一塩基多型(SNP)に基づく方法の他に、例えば、対応するゲノムDNAに対するプローブを用いてハイブリダイゼーションを行う方法、及び対応するゲノムDNAをクローニングし、ユーストマ・エグザルタトゥムの配列と比較する方法等が挙げられる。 Methods for determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of each sequence shown in SEQ ID NOs: 1 to 6 is of the Eustoma exaltatum type can be any method commonly used by those skilled in the art, including the methods based on indels and single nucleotide polymorphisms (SNPs) described below, as well as methods of hybridization using a probe for the corresponding genomic DNA, and methods of cloning the corresponding genomic DNA and comparing it with the sequence of Eustoma exaltatum.
インデルに基づく方法としては、上述した方法以外に、例えば、欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセットを用いたPCR法によって増幅したDNA断片の長さに基づき、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法が挙げられる。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より簡便に効率的よく判別することができる。各プライマーセットを用いて増幅したDNA断片の長さがより短い又はより長いとユーストマ・エグザルタトゥム型であると決定することができる。より具体的には、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約102bp(例えば、100~105bp)短いこと、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約38bp(例えば、35~38bp)短いこと、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約16bp(例えば、13~16bp)短いことにより、ユーストマ・エグザルタトゥム型であると決定することができる。他の各配列が特定の長さ分短いこと又は長いことについては、上述したとおりであり、その情報も当然使用することができる。PCR法により増幅することは、例えば、被験トルコギキョウ植物からDNA抽出し、そのDNAを鋳型として各プライマーセットを用いてPCR法によりDNA断片を増幅することであってよい。増幅したDNA断片の長さは、例えば、アガロースゲル電気泳動により確認できる。増幅したDNA断片の長さは、例えば、分子量マーカーとの比較により確認するができる。また、例えば、ユーストマ・グランディフロラム及び/又はユーストマ・エグザルタトゥムの対応するゲノムDNAの増幅断片を対照として共に電気泳動し、増幅断片の長さを比較することにより、インデルの有無を判断することもできる。 In addition to the above-mentioned methods, the indel-based method may be, for example, a method for determining whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type, based on the length of a DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to sandwich a deletion and/or insertion. and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is the Eustoma exaltatum type, and/or whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is the Eustoma exaltatum type. This makes it possible to more simply and efficiently distinguish eustoma plants that exhibit resistance. If the length of the DNA fragment amplified using each primer set is shorter or longer, it can be determined that the plant is of the Eustoma exaltatum type. More specifically, if the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is about 102 bp (e.g., 100-105 bp) shorter, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is about 38 bp (e.g., 35-38 bp) shorter, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is about 16 bp (e.g., 13-16 bp) shorter, it can be determined that the plant is of the Eustoma exaltatum type. The fact that each of the other sequences is shorter or longer by a specific length is as described above, and this information can also be used. Amplification by PCR may, for example, involve extracting DNA from a test eustoma plant, and amplifying a DNA fragment by PCR using each primer set with the DNA as a template. The length of the amplified DNA fragment can be confirmed, for example, by agarose gel electrophoresis. The length of the amplified DNA fragment can be confirmed, for example, by comparison with a molecular weight marker. In addition, the presence or absence of indels can be determined by electrophoresis together with amplified fragments of the corresponding genomic DNA of Eustoma grandiflorum and/or Eustoma exaltatum as a control and comparing the lengths of the amplified fragments.
プライマーセットは、インデル(欠失及び/又は挿入)を挟み込むように設計され、且つ増幅したDNA断片の長さによりインデルの有無が検出できるものであればよく、各配列番号1~3、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43上に存在する配列に基づくものであってもよいが、基づかないものであってもよい。また、プライマーは、オリゴヌクレオチドプライマーであってよく、各プライマーの長さも特に制限されないが、例えば、18bp~35bp、20bp~30bp又は20bp~25bpであってもよい。例えば、プライマーセットは、表2のIDE756_180Fの欠失を挟み込むが、配列番号1よりも広いゲノムDNAを増幅するように設計されてもよい。また、プライマーセットは、1種のフォワードプライマー及び1種のリバースプライマーを含むプライマー対に限られず、例えば、2種のフォワードプライマー及び1種リバースプライマーを含むものであってもよい。フォワードプライマーは、インデルの5’側、リバースプライマーがインデルの3’側に設計されてもよい。プライマーセットは、インデルのすぐ上流及び下流に設計する必要はなく、インデル部分を含む領域を増幅するものであればよく、例えば、ユーストマ・グランディフロラムのゲノムにおける50~800bp、100~500bp又は150~400bpのDNA断片を増幅するものであってもよい。また、例えば、プライマーセットは、配列番号1における56~157位の塩基の欠失、配列番号2における174~213位の塩基の欠失、又は配列番号3における139~154位の塩基の欠失を挟み込むように設計され、ユーストマ・グランディフロラムのゲノムにおける50~1200bp、100~800bp、200bp~700bp又は150~400bpのDNA断片を増幅するものであってもよい。 The primer set may be designed to sandwich an indel (deletion and/or insertion) and may be capable of detecting the presence or absence of an indel based on the length of the amplified DNA fragment, and may be based on the sequences present in each of SEQ ID NOs: 1 to 3, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43, or may not be based on the sequences. The primers may be oligonucleotide primers, and the length of each primer is not particularly limited, but may be, for example, 18 bp to 35 bp, 20 bp to 30 bp, or 20 bp to 25 bp. For example, the primer set may be designed to sandwich the deletion of IDE756_180F in Table 2, but to amplify a wider genomic DNA than SEQ ID NO: 1. The primer set is not limited to a primer pair including one type of forward primer and one type of reverse primer, and may include, for example, two types of forward primers and one type of reverse primer. The forward primer may be designed on the 5' side of the indel, and the reverse primer may be designed on the 3' side of the indel. The primer set does not need to be designed immediately upstream and downstream of the indel, and may amplify a region including the indel portion, for example, a DNA fragment of 50 to 800 bp, 100 to 500 bp, or 150 to 400 bp in the genome of Eustoma grandiflorum. In addition, for example, the primer set may be designed to sandwich the deletion of bases at positions 56 to 157 in SEQ ID NO: 1, the deletion of bases at positions 174 to 213 in SEQ ID NO: 2, or the deletion of bases at positions 139 to 154 in SEQ ID NO: 3, and may amplify a DNA fragment of 50 to 1200 bp, 100 to 800 bp, 200 to 700 bp, or 150 to 400 bp in the genome of Eustoma grandiflorum.
このようなプライマーセットの一例としては、表2のIDE756_180Fの欠失を挟み込むフォワードプライマーAGTTTGCTTCCAGTGAGACCTC(配列番号13)及びリバースプライマーAGCAAAGGCAATGTGATTGTGG(配列番号14)、表2のIDE934_147Fの欠失を挟み込むフォワードプライマーCAGAAGATGACGAGGCATACCA(配列番号15)及びリバースプライマーGGCCAGATCGTTTCGCAATC(配列番号16)、並びに、表2のIDE965_187Fの欠失を挟み込むフォワードプライマーGTCACGAGTTCAAGCTGCGAA(配列番号17)及びリバースプライマーATACAAAGGACGCTCCCGTAG(配列番号18)が挙げられる。これらは、それぞれがトルコギキョウ植物において、配列番号1、2及び3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAを特異的に増幅することができるプライマーセットでもある。例えば、上記配列番号13~18に記載の各塩基配列と99%以上、98%以上、97%以上、95%以上、90%以上、85%以上又は80%以上の配列相同性を有するヌクレオチド配列を含むプライマーを使用してもよい。 Examples of such primer sets include forward primer AGTTTGCTTCCAGTGAGACCTC (sequence number 13) and reverse primer AGCAAAGGCAATGTGATTGTGG (sequence number 14) that flank the deletion of IDE756_180F in Table 2, forward primer CAGAAGATGACGAGGCATACCA (sequence number 15) and reverse primer GGCCAGATCGTTTCGCAATC (sequence number 16) that flank the deletion of IDE934_147F in Table 2, and forward primer GTCACGAGTTCAAGCTGCGAA (sequence number 17) and reverse primer ATACAAAGGACGCTCCCGTAG (sequence number 18) that flank the deletion of IDE965_187F in Table 2. These are also primer sets that can specifically amplify genomic DNA in a lisianthus plant, each of which corresponds to the genomic DNA of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3. For example, primers containing nucleotide sequences that have sequence homology of 99% or more, 98% or more, 97% or more, 95% or more, 90% or more, 85% or more, or 80% or more with each of the base sequences described in SEQ ID NOs: 13 to 18 above may be used.
SNPに基づく方法として、上述した方法以外に、例えば、増幅断片多型法(RAPD法)、制限酵素切断断片長多型法(RFLP法)、CAPS(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence)法、SSLP(simple sequence length polymorphism)法、増幅断片長多型法(AFLP法)及びSSCP(Single-stranded conformation polymorphism)法等が挙げられる。既知のSNPに基づいて判別する方法としては、当業者が通常用いる方法を用いることができるが、例えば、SSR(Simple sequence repeat)マーカー及びSNPマーカー等のDNAマーカーを使用した方法が挙げられる。DNAマーカーを使用する場合には、既知のSNPを含むゲノムDNAの配列に基づいて適宜プライマー/プローブを設計し、例えば、蛍光標識したプローブによりSNPの塩基タイプを確認する方法、PCR等のDNA増幅法により増幅の有無を確認する方法、及び増幅産物を特定の制限酵素により処理した際の切断の有無を確認する方法(CAPSマーカー等)が挙げられる。増幅産物を特定の制限酵素により処理する場合であって、SNPが制限酵素認識部位に含まれない場合には、制限酵素認識部位を付加するdCAPS(Derived Cleaved Amplified Polymorphic Sequences)マーカーのプライマーを設計して使用してもよい。 In addition to the above-mentioned methods, other methods based on SNPs include, for example, the amplified fragment length polymorphism method (RAPD method), the restriction fragment length polymorphism method (RFLP method), the cleaved amplified polymorphic sequence (CAPS) method, the simple sequence length polymorphism (SSLP) method, the amplified fragment length polymorphism method (AFLP method), and the single-stranded conformation polymorphism (SSCP) method. Methods for distinguishing based on known SNPs can be methods commonly used by those skilled in the art, such as methods using DNA markers such as SSR (simple sequence repeat) markers and SNP markers. When using a DNA marker, a primer/probe is appropriately designed based on the sequence of genomic DNA containing a known SNP, and examples of the method include a method of confirming the base type of the SNP using a fluorescently labeled probe, a method of confirming the presence or absence of amplification by a DNA amplification method such as PCR, and a method of confirming the presence or absence of cleavage when the amplified product is treated with a specific restriction enzyme (such as a CAPS marker). When the amplified product is treated with a specific restriction enzyme and the SNP is not contained in the restriction enzyme recognition site, a primer for a dCAPS (Derived Cleavaged Amplified Polymorphic Sequences) marker that adds a restriction enzyme recognition site may be designed and used.
本判別方法により、上記ゲノムDNAにおける違いに基づき、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を効率的に判別することができる。 This discrimination method makes it possible to efficiently discriminate lisianthus plants that are resistant to lisianthus wilt disease caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) based on the differences in the above-mentioned genomic DNA.
本発明は、一実施形態として、上記の本判別方法において、配列番号1~6のゲノムDNAのゲノムDNAのいずれかに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカーも提供する。マーカーは、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を選抜するための選抜マーカーであってもよい。 As one embodiment, the present invention also provides a marker for determining whether or not a genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6 is of the Eustoma exaltatum type in the above-mentioned discrimination method. The marker may be a selection marker for selecting a lisianthus plant that is resistant to damping-off caused by a fungus of the genus Fusarium (e.g., Fusarium solani).
このようなマーカーとしては、例えば、上述した配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列番号に示される配列のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法に用いることができるプライマー(セット)、及びプローブ等を挙げることができる。具体的には、例えば、対応するゲノムDNAに対するプローブを用いてハイブリダイゼーションによりユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法におけるプローブ、インデル(欠失及び/又は挿入)を挟み込むように設計されたプライマーセット、SNPの塩基タイプを確認するためのプローブ、SNPの有無をDNA増幅法による増幅の有無により確認するためのプライマーのセット、並びにDNA増幅法による増幅産物を特定の制限酵素により処理した際の切断の有無によりSNPの有無を確認するためのdCAPSマーカー等が挙げられる。 Examples of such markers include primers (sets) and probes that can be used in a method for determining whether or not genomic DNA corresponding to the genomic DNA of the sequence shown in each of the above-mentioned SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type. Specific examples include a probe in a method for determining whether or not a genomic DNA is of the Eustoma exaltatum type by hybridization using a probe for the corresponding genomic DNA, a primer set designed to sandwich an indel (deletion and/or insertion), a probe for confirming the base type of an SNP, a primer set for confirming the presence or absence of an SNP based on the presence or absence of amplification by a DNA amplification method, and a dCAPS marker for confirming the presence or absence of an SNP based on the presence or absence of cleavage when the amplified product by the DNA amplification method is treated with a specific restriction enzyme.
また、このようなマーカー又はマーカーのセットを、上記の本判別方法において、被検トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であるか否かを判別するためのマーカー又はマーカーのセットとすることもできる。 In addition, such a marker or set of markers can also be used as a marker or set of markers for determining whether or not a test eustoma plant is resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) in the above-mentioned discrimination method.
このようなマーカー又はマーカーのセットとしては、例えば、
配列番号1における56~157位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号2における174~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号3における139~154位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける260位~569位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間における、配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位における配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位における配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位における配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位における配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられる。
Such a marker or set of markers may be, for example:
A primer set designed to flank the deletion of bases 56 to 157 in SEQ ID NO:1;
A primer set designed to flank the deletion of bases 174 to 213 in SEQ ID NO:2;
A primer set designed to flank the deletion of bases 139 to 154 in SEQ ID NO:3;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 328 to 420 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 481 to 491 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 80 in the genomic DNA of SEQ ID NO:19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21;
A primer set designed to flank the deletion of bases 260 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 166 to 193 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 between positions 165 and 166 of the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 79 to 290 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:26 at positions 78 to 190 of a genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to flank the deletion of bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27;
A primer set designed to flank the deletion of bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29;
A primer set designed to flank the deletion of bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31;
A primer set designed to flank the deletion of bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33;
A primer set designed to flank the deletion of bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 197 to 627 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 36 at positions 198 to 342 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 35;
A primer set designed to flank the deletion of bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37;
A primer set designed to flank the deletion of bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO:39;
A primer set designed to flank the deletion of bases 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO:41;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 276 to 293 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 42 at positions 278 to 432 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 41;
A primer set designed to flank the deletion of bases 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO:43;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 589 to 1011 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 at positions 603 to 746 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 43;
and a primer set designed to flank the deletion of bases 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO:43, and combinations thereof.
本実施形態に係るマーカーにおける具体的な態様等は、本判別方法の欄を含む、上述した具体的な態様等を制限なく適用できる。 Specific aspects of the marker according to this embodiment can be the specific aspects described above, including those in the section on this discrimination method, without any restrictions.
<フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する方法>
本実施形態に係る、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する方法(以下「本作出方法」ともいう)は、ユーストマ・エグザルタトゥムとフザリウム・ソラニーによる立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物において、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、当該交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含む。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合には、当該交配後代トルコギキョウ植物が、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を示す可能性が高いからである。
Method for Producing Lisianthus Plants Resistant to Fusarium Damage Caused by Fusarium Fungi (e.g., Fusarium solani)
A method for producing a lisianthus plant exhibiting resistance to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) according to this embodiment (hereinafter also referred to as the "production method") includes selecting a progeny lisianthus plant between Eustoma exartatum and a lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium solani when the progeny lisianthus plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of the following (1) to (19) at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type. (2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type. (3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type. (4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type. (5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 5 is of the Eustoma exartatum type. (6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is of the Eustoma exartatum type. (7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type. (8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type. (9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type. (10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type. (11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type. (12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exaltatum type. (13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type. (14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type. (15) The genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type. (16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type (17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type (18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type (19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type. This is because when one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above are satisfied, the progeny lisianthus plant is highly likely to exhibit resistance to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani).
交配後代トルコギキョウ植物は、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥムとフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物との交配により得られた雑種第1代(F1)であってもよく、さらなる交配により得られた雑種第2代(F2)以降の植物、例えば、F3、F4であってもよく、例えば、F1を罹病性であるトルコギキョウ植物と戻し交配をした第1代(BC1)であってもよく、さらに戻し交配をした第2代(BC2)以降の植物であってもよい。 The progeny lisianthus plant may be a first generation hybrid (F 1 ) obtained by crossing Eustoma exartatum, which is resistant to wilt caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), with a lisianthus plant, which is susceptible to wilt caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), or a second generation hybrid (F 2 ) or later plant obtained by further crossing, such as F 3 or F 4. For example, the progeny lisianthus plant may be a first generation (BC 1 ) obtained by backcrossing F 1 with a susceptible lisianthus plant, or a second generation (BC 2 ) or later plant obtained by further backcrossing.
フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるユーストマ・グランディフロラムと抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥムとの雑種第1代は、ユーストマ・グランディフロラムのゲノムDNAとユーストマ・エグザルタトゥムのゲノムDNAをヘテロ型に有するが、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を示す。 The first generation hybrid between Eustoma grandiflorum, which is susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), and Eustoma exaltatum, which is resistant to the disease, has the genomic DNA of Eustoma grandiflorum and the genomic DNA of Eustoma exaltatum in a heterozygous form, but is resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani).
本作出方法は、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物と、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥム又はユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物を交配することを含んでもよい。 The method for producing the product may include crossing a lisianthus plant susceptible to wilt caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) with Eustoma exaltatum or a plant derived from Eustoma exaltatum that is resistant to wilt caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani).
フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物としては、例えば、ユーストマ・エグザルタトゥムを使用して交配により作出した交配後代植物、ユーストマ・エグザルタトゥムを使用して葯培養により作出した半数体を倍加した植物、及びユーストマ・エグザルタトゥムを使用して遺伝子組み換え技術等により作出した植物等であって、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を示す植物が挙げられる。 Examples of plants derived from Eustoma exaltatum that are resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) include hybrid progeny plants produced by breeding using Eustoma exaltatum, doubled haploid plants produced by anther culture using Eustoma exaltatum, and plants produced by genetic engineering techniques using Eustoma exaltatum, etc., which are resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani).
フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物は、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるユーストマ属植物であれば特に限定されないが、例えば、ユーストマ・グランディフロラム又はユーストマ・グランディフロラムに由来する植物が挙げられる。罹病性のトルコギキョウ植物品種としては、例えば、ユーストマ・グランディフロラム‘紫盃’、‘ミンク’、‘ボレロホワイト’等が挙げられる。フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるユーストマ・グランディフロラムに由来する植物としては、例えば、ユーストマ・グランディフロラムを使用して交配により作出した交配後代植物、ユーストマ・グランディフロラムを使用して葯培養により作出した半数体を倍加した植物、及びユーストマ・グランディフロラムを使用して遺伝子組み換え技術等により作出した植物等であって、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性である植物が挙げられる。 The lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) is not particularly limited as long as it is a Eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), and examples thereof include Eustoma grandiflorum and plants derived from Eustoma grandiflorum. Examples of susceptible lisianthus plant varieties include Eustoma grandiflorum 'Murasakisai', 'Mink', 'Bolero White', etc. Examples of plants derived from Eustoma grandiflorum that are susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) include hybrid progeny plants produced by breeding using Eustoma grandiflorum, doubled haploid plants produced by anther culture using Eustoma grandiflorum, and plants produced by genetic engineering techniques using Eustoma grandiflorum, etc., which are susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani).
本作出方法は、交配後代トルコギキョウ植物において、相同染色体上の2箇所において、上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、当該交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含むものであってもよい。この場合、当該交配後代トルコギキョウ植物は、上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすゲノムDNAをホモ型に有することになる。このような交配後代トルコギキョウ植物を作出する方法としては、例えば、上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすゲノムDNAを有する雄親及び同様の条件を満たすゲノムDNAを有する雌親を用いた交配により得られた後代トルコギキョウ植物からマーカー等を用いて選抜する方法、並びに上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすゲノムDNAを有する植物から葯培養により上記ゲノムDNAを有する半数体を作出し、倍化する方法等が挙げられる。 The method for producing the hybrid lisianthus may include selecting a hybrid lisianthus plant when two locations on a homologous chromosome satisfy one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above. In this case, the hybrid lisianthus plant has homozygous genomic DNA that satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above. Examples of methods for producing such hybrid lisianthus plants include a method of selecting using markers or the like from a progeny lisianthus plant obtained by crossing a male parent having genomic DNA that satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above and a female parent having genomic DNA that satisfies the same conditions, and a method of producing a haploid having the genomic DNA by anther culture from a plant having genomic DNA that satisfies one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above, and doubling the haploid.
本作出方法は、交配後代トルコギキョウ植物において、上記(1)~(19)からなる群から選択される2以上、3以上、4以上、5以上又はすべての条件を満たす場合に、当該交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含んでもよい。 The method for producing this product may include selecting a progeny lisianthus plant when the progeny lisianthus plant satisfies two or more, three or more, four or more, five or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
また、本作出方法は、上記(1)~(19)の条件のうち、上記(1)~(3)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜するものであってもよく、上記(4)~(6)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜するものであってもよい。これにより抵抗性を示す交配後代トルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく選抜することができる。 The method for producing the resistant lisianthus may be for selecting the progeny lisianthus plant when one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (3) among the conditions (1) to (19) above are satisfied, or for selecting the progeny lisianthus plant when one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (4) to (6) above are satisfied. This makes it possible to more efficiently and accurately select progeny lisianthus plants exhibiting resistance.
また、本作出方法は、上記(1)~(3)に加え、(7)の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜するものであってもよい。また、本作出方法は、上記(4)~(5)に加え、(7)の条件を満たす場合に、上記交配後代トルコギキョウ植物を選抜するものであってもよい。これにより強い抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく選抜することができる。 The breeding method may be for selecting the progeny lisianthus plant when the above conditions (1) to (3) and (7) are satisfied. The breeding method may be for selecting the progeny lisianthus plant when the above conditions (4) to (5) and (7) are satisfied. This makes it possible to more efficiently and accurately select lisianthus plants that exhibit strong resistance.
配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列番号に示される配列のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、上述したユーストマ・グランディフロラムとユーストマ・エグザルタトゥムの差異に基づき、ユーストマ・エグザルタトゥムにより近いことを意味する(表2及び表3参照)。 The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of the sequence shown in each of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type, which means that it is closer to Eustoma exaltatum based on the above-mentioned differences between Eustoma grandiflorum and Eustoma exaltatum (see Tables 2 and 3).
ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、具体的には、例えば、配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号7の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号8の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号9のゲノムDNAの配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号20の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号22の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号24の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号26の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号28の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号30の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号32の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号34の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号36の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号38の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号40の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号42の配列と少なくとも90%の配列同一性を有すること、及び配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号44の配列と少なくとも90%の配列同一性を有することが挙げられる。ここで配列同一性は、少なくとも75%、85%、88%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%であるか、又は100%であってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく選抜することができる。 Specifically, the Eustoma exartatum type means, for example, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 7, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 8, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 9, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type means that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 20, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 22, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 24, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 26, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 has at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 27, and Examples of the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:28 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:30, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:32, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:34, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:35 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:36, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:38, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:39 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:40, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:41 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:42, and the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:43 have at least 90% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:44. Here, the sequence identity is at least 75%, 85%, 88%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or may be 100%. This allows for more efficient and accurate selection of resistant lisianthus plants.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していること、配列番号2における174~213位の塩基が欠失していること、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していること、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していること、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基が挿入されていること、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていること、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していること、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していること、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していること、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していること、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていること、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していること、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していること、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていること、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることでであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。 In addition, the Eustoma exartatum type refers to, for example, a deletion of bases from positions 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1, a deletion of bases from positions 174 to 213 in SEQ ID NO: 2, a deletion of bases from positions 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3, an insertion of bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 330 and 331 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, an insertion of bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 391 and 392 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, an insertion of bases from positions 78 to 80 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, a deletion of bases from positions 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21; a deletion of bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; an insertion of bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 between positions 165 and 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23; a deletion of bases from positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25; and an insertion of bases from positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:26 between positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25. a deletion of bases from positions 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27, a deletion of bases from positions 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29, a deletion of bases from positions 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31, a deletion of bases from positions 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33, a deletion of bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35, an insertion of bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:36 into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35, and a deletion of bases from positions 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37. , the bases at positions 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted, the bases at positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, the bases at positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41, the bases at positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, the bases at positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, or the bases at positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 may be deleted. This makes it possible to more efficiently and accurately distinguish lisianthus plants that exhibit resistance.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約105bp(例えば、100~107bp)短いこと、配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約38bp(例えば、35~40bp)短いこと、配列番号3のゲノムDNAに対応する配列が約16bp(例えば、13~17bp)短いこと、配列番号19のゲノムDNAに対応する配列が約93bp(例えば、90~95bp)長いこと、配列番号19のゲノムDNAに対応する配列が約11bp(例えば、9bp~13bp)長いこと、配列番号21のゲノムDNAに対応する配列が約52bp(例えば、50bp~55bp)短いこと、配列番号23のゲノムDNAに対応する配列が約308bp(例えば、300bp~312bp)短いこと、配列番号23のゲノムDNAに対応する配列が約28bp(例えば、25bp~31bp)長いこと、配列番号25のゲノムDNAに対応する配列が約99bp(例えば、95bp~104bp)長いこと、配列番号27のゲノムDNAに対応する配列が約53bp(例えば、50bp~56bp)短いこと、配列番号29のゲノムDNAに対応する配列が約80bp(例えば、77bp~83bp)短いこと、配列番号31のゲノムDNAに対応する配列が約94bp(例えば、91bp~97bp)短いこと、配列番号33のゲノムDNAに対応する配列が約172bp(例えば、168bp~175bp)短いこと、配列番号35のゲノムDNAに対応する配列が約286bp(例えば、280bp~294bp)長いこと、配列番号37のゲノムDNAに対応する配列が約38bp(例えば、35bp~41bp)短いこと、配列番号39のゲノムDNAに対応する配列が約109bp(例えば、106bp~112bp)短いこと、配列番号41のゲノムDNAに対応する配列が約137bp(例えば、132bp~142bp)短いこと、配列番号43のゲノムDNAに対応する配列が約266bp(例えば、260bp~272bp)長いことであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく判別することができる。上記の各配列が特定の長さ分短いこと又は長いことは、各配列のインデルの合計が特定の長さであることを表す。すなわち、例えば、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAが約102bp(例えば、100~107bp)短いことは、配列番号1のゲノムDNAのゲノムDNAに対応するゲノムDNAにおけるインデル(この場合は欠失)が約105bpであることを意味する。 In addition, the Eustoma exartatum type means, for example, that the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is about 105 bp (e.g., 100-107 bp) shorter, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is about 38 bp (e.g., 35-40 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is about 16 bp (e.g., 13-17 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is about 93 bp (e.g., 90-95 bp) longer, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 20 is about 100 bp (e.g., 100-107 bp) shorter. The sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:19 is about 11 bp (e.g., 9 bp to 13 bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 is about 52 bp (e.g., 50 bp to 55 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is about 308 bp (e.g., 300 bp to 312 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is about 28 bp (e.g., 25 bp to 31 bp) longer, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 is about 99 bp (e.g., 95 bp to 104 bp) shorter. bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 is about 53 bp (e.g., 50 bp to 56 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 is about 80 bp (e.g., 77 bp to 83 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 is about 94 bp (e.g., 91 bp to 97 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 is about 172 bp (e.g., 168 bp to 175 bp) shorter, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:35 is about 286 bp (e.g., 280 bp to 294 bp) longer, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is about 38 bp (e.g., 35 bp to 41 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is about 109 bp (e.g., 106 bp to 112 bp) shorter, the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is about 137 bp (e.g., 132 bp to 142 bp) shorter, and the sequence corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is about 266 bp (e.g., 260 bp to 272 bp) longer. This makes it possible to more efficiently and accurately identify resistant lisianthus plants. The fact that each of the above sequences is shorter or longer by a specific length indicates that the sum of the indels in each sequence is a specific length. That is, for example, the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:1 is shorter by about 102 bp (e.g., 100-107 bp), which means that the indel (in this case, a deletion) in the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:1 is about 105 bp.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であることを、表2において示したSNPに基づき決定してもよく、例えば、配列番号1に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの52位の塩基がシトシンであること、配列番号2に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの245位がアデニンであり、且つ/又は249位の塩基がシトシンであること、並びに配列番号3に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの56位がチミンであり、且つ/又は159位の塩基がグアニンであることであってもよい。また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であることを、上述したインデルとSNPを組み合わせて決定してもよい。 The Eustoma exaltatum type may also be determined based on the SNPs shown in Table 2, for example, that the base at position 52 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 1 is cytosine, that the base at position 245 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 2 is adenine and/or that the base at position 249 is cytosine, and that the base at position 56 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 is thymine and/or that the base at position 159 is guanine. The Eustoma exaltatum type may also be determined by combining the above-mentioned indels and SNPs.
また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号10の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有すること、配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号11の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有すること、及び配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが配列番号12の配列と99%以上又は100%の配列同一性を有することことが挙げられる。また、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるとは、例えば、配列番号4における100位の塩基がチミンであること、配列番号5における37位の塩基がチミンであり、且つ/又は38位の塩基がアデニンであること、並びに、配列番号6における8位の塩基がアデニンであり、且つ/又は40位の塩基がアデニンであり、且つ/又は53位の塩基がチミンであり、且つ/又は100位の塩基がシトシンであることであってもよい。これにより抵抗性を示すトルコギキョウ植物を、より効率的に精度よく選抜することができる。
In addition, examples of the Eustoma exaltatum type include genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 10, genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 5 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 11, and genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 having 99% or more or 100% sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 12. In addition, examples of the Eustoma exaltatum type include, for example, the base at
配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列番号に示される配列のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法に関しては、上述したとおりである。 The method for determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of each of the sequences shown in SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type is as described above.
トルコギキョウ植物の交配方法は特に限定されることなく、当業者が通常用いる方法により行うことができる。フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物を雄親として、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥム又はユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物を雌親としてもよく、逆でもよい。また、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物と、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性であるユーストマ・エグザルタトゥム又はユーストマ・エグザルタトゥムに由来する植物を交配することは、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する過程でいずれかの段階で行われていればよく、最初の交配である必要はない。 The method of crossbreeding a lisianthus plant is not particularly limited and can be performed by a method commonly used by those skilled in the art. A lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) may be used as a male parent, and a Eustoma exartatum or a plant derived from Eustoma exartatum that is resistant to damping-off caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) may be used as a female parent, or vice versa. In addition, crossing a lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) with Eustoma exaltatum or a plant derived from Eustoma exaltatum that is resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) may be carried out at any stage in the process of producing a lisianthus plant resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), and does not have to be the first crossing.
また、当該交配後代トルコギキョウ植物を選抜した後、さらに交配をしてもよい。例えば、より優れた形質を有する交配後代植物を得るために、例えば、近親交配、戻し交配及び連続戻し交配等を行ってもよい。例えば、ユーストマ・エグザルタトゥムとフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるユーストマ属植物(例えば、ユーストマ・グランディフロラム)の交配後代植物について、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対する抵抗性を示す植物体を選抜しながら罹病性であるユーストマ属植物との戻し交配を行うことで、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対する抵抗性を有しつつ、形質は罹病性であるユーストマ属植物により近い交配後代植物を得ることができる。 After selecting the progeny lisianthus plant, further crossbreeding may be performed. For example, inbreeding, backcrossing, and successive backcrossing may be performed to obtain a progeny plant with better characteristics. For example, for a progeny plant of a cross between Eustoma exaltatum and a Eustoma plant (e.g., Eustoma grandiflorum) that is susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani), a plant body that exhibits resistance to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) is selected, and backcrossed with the susceptible Eustoma plant, thereby obtaining a progeny plant that has resistance to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) while being closer in characteristics to the susceptible Eustoma plant.
本作出方法は、交配後代トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対する抵抗性を有するか否かを判定することをさらに含んでもよい。本作出方法によれば、上記ゲノムDNAにおける違いに基づき、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)によるトルコギキョウ立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を選抜することができる。したがって、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)を接種する必要はないが、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)を接種することにより交配後代トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対する抵抗性を有するか否かを確認することを妨げるものではない。例えば、交配後代トルコギキョウ植物を人工的にフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)に感染させ、同様にフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)に感染させた罹病性のトルコギキョウ植物(例えば、ユーストマ・グランディフロラム)(Mock)と比較して、発病の程度(例えば、表1の発病指数又は発病株率)が弱まれば抵抗性を示し、発病の程度が同等であれば抵抗性を有さない(罹病性である)と確認する方法が挙げられる。 The method for producing the lisianthus may further include determining whether the progeny lisianthus plant has resistance to wilt caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani). According to the method for producing the lisianthus plant, a lisianthus plant that is resistant to wilt caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) can be selected based on the difference in the genomic DNA. Therefore, it is not necessary to inoculate the plant with Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani), but this does not prevent confirmation of whether the progeny lisianthus plant has resistance to wilt caused by Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani) by inoculating the plant with Fusarium genus fungi (e.g., Fusarium solani). For example, a hybrid progeny lisianthus plant is artificially infected with Fusarium fungus (e.g., Fusarium solani) and compared with a susceptible lisianthus plant (e.g., Eustoma grandiflorum) (Mock) similarly infected with Fusarium fungus (e.g., Fusarium solani), if the degree of disease (e.g., the disease index or diseased plant rate in Table 1) is reduced, it indicates resistance, and if the degree of disease is the same, it is confirmed that the plant does not have resistance (is susceptible).
本作出方法により、上記ゲノムDNAにおける違いに基づき、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物と抵抗性であるトルコギキョウ植物の交配後代植物から、抵抗性を示すトルコギキョウ植物を効率的に選抜することができる。 By using this method, it is possible to efficiently select resistant lisianthus plants from the progeny of a cross between a lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) and a resistant lisianthus plant, based on the differences in the above-mentioned genomic DNA.
本作出方法における具体的な態様等は、上述した具体的な態様等を制限なく適用できる。 The specific aspects of the method for producing this invention can be the same as those described above without any restrictions.
本発明は、一実施形態として、上記の本作出方法において、配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43のゲノムDNAのいずれかに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定するためのマーカーも提供する。マーカーは、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を選抜するための選抜マーカーであってもよい。 As one embodiment, the present invention also provides a marker for determining whether or not the genomic DNA corresponding to any of the genomic DNAs of SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 in the above-mentioned method for producing the plant is of the Eustoma exaltatum type. The marker may be a selection marker for selecting a lisianthus plant that is resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani).
このようなマーカーとしては、例えば、上述した配列番号1~6、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41及び43の各配列番号に示される配列のゲノムDNAに対応するゲノムDNAが、ユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法に用いることができるプライマー(セット)、及びプローブ等を挙げることができる。具体的には、例えば、対応するゲノムDNAに対するプローブを用いてハイブリダイゼーションによりユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを決定する方法におけるプローブ、インデルを挟み込むように設計されたプライマーセット、SNPの塩基タイプを確認するためのプローブ、SNPの有無をDNA増幅法による増幅の有無により確認するためのプライマーのセット、並びにDNA増幅法による増幅産物を特定の制限酵素により処理した際の切断の有無によりSNPの有無を確認するためのdCAPSマーカー等が挙げられる。 Examples of such markers include primers (sets) and probes that can be used in a method for determining whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of the sequence shown in each of the above-mentioned SEQ ID NOs: 1 to 6, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, and 43 is of the Eustoma exaltatum type. Specific examples include a probe in a method for determining whether or not the genomic DNA is of the Eustoma exaltatum type by hybridization using a probe for the corresponding genomic DNA, a primer set designed to sandwich an indel, a probe for confirming the base type of the SNP, a primer set for confirming the presence or absence of an SNP based on the presence or absence of amplification by a DNA amplification method, and a dCAPS marker for confirming the presence or absence of an SNP based on the presence or absence of cleavage when the amplified product by the DNA amplification method is treated with a specific restriction enzyme.
また、このようなマーカー又はマーカーのセットを、上記の本作出方法において、被検トルコギキョウ植物がフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物であるか否かを判別するためのマーカー又はマーカーのセットとすることもできる。 In addition, such a marker or set of markers can also be used as a marker or set of markers to determine whether or not a test eustoma plant is resistant to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) in the above-mentioned method for producing the eustoma plant.
本実施形態に係るマーカーにおける具体的な態様等は、本判別方法の欄を含む、上述した具体的な態様等を制限なく適用できる。 Specific aspects of the marker according to this embodiment can be the specific aspects described above, including those in the section on this discrimination method, without any restrictions.
<特定の条件を満たす、ユーストマ・エグザルタトゥムと罹病性トルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物>
本発明は、一実施形態として、ユーストマ・エグザルタトゥム(Eustoma exaltatum)とフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物であって、相同染色体上の少なくとも1箇所において、以下の(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たすトルコギキョウ植物も提供する。
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
<Progeny lisianthus plants between Eustoma exaltatum and disease-susceptible lisianthus plants that meet certain conditions>
As one embodiment, the present invention also provides a progeny eustoma plant of a cross between Eustoma exaltatum and a eustoma plant susceptible to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani), the progeny satisfying one or more conditions selected from the group consisting of the following (1) to (19) at at least one site on a homologous chromosome:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type. (2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type. (3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type. (4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type. (5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 5 is of the Eustoma exartatum type. (6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 6 is of the Eustoma exartatum type. (7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type. (8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type. (9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type. (10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type. (11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type. (12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exaltatum type. (13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type. (14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type. (15) The genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type. (16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type. (17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type. (18) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type. (19) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type.
当該交配後代トルコギキョウ植物は、人工的に交配により作出されたトルコギキョウ植物である。上記(1)~(19)からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合には、当該交配後代トルコギキョウ植物は、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を示す可能性が高い。したがって、当該交配後代トルコギキョウ植物は、フザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して抵抗性を示す、あるいは抵抗性であるトルコギキョウ植物であってもよい。 The progeny lisianthus plant is a lisianthus plant artificially produced by crossbreeding. When one or more conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above are satisfied, the progeny lisianthus plant is highly likely to exhibit resistance to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani). Therefore, the progeny lisianthus plant may be a lisianthus plant that exhibits or is resistant to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani).
本実施形態において、交配後代トルコギキョウ植物は、上記(1)~(19)からなる群から選択される2以上、3以上、4以上、5以上又はすべての条件を満たすものであってもよい。 In this embodiment, the progeny lisianthus plant may satisfy two or more, three or more, four or more, five or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (19) above.
また、実施形態において、交配後代トルコギキョウ植物は、上記(1)~(19)の条件のうち、上記(1)~(3)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たすものであってもよく、上記(4)~(6)からなる群から選択される1以上、2以上又はすべての条件を満たすものであってもよい。 In an embodiment, the progeny lisianthus plant may satisfy one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (1) to (3) among the conditions (1) to (19) above, or may satisfy one or more, two or more, or all of the conditions selected from the group consisting of (4) to (6) above.
また、交配後代トルコギキョウ植物は、上記(1)~(3)に加え、(7)の条件を満たすものであってもよい。また、交配後代トルコギキョウ植物は、上記(4)~(5)に加え、(7)の条件を満たすものであってもよい。このような交配後代トルコギキョウ植物はより強い抵抗性を示すことが期待される。 The hybrid progeny lisianthus plants may satisfy the above conditions (1) to (3) and also (7). The hybrid progeny lisianthus plants may satisfy the above conditions (4) to (5) and also (7). Such hybrid progeny lisianthus plants are expected to show stronger resistance.
ユーストマ・エグザルタトゥムとフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物は、雑種第1代(F1)であってもよく、さらなる交配により得られた雑種第2代(F2)以降の植物、例えば、F3、F4であってもよく、例えば、F1を罹病性であるトルコギキョウ植物と戻し交配をした第1代(BC1)であってもよく、さらに戻し交配をした第2代(BC2)以降の植物であってもよい。 A progeny lisianthus plant obtained by crossing Eustoma exartatum with a lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium sp. (e.g., Fusarium solani) may be a first generation hybrid (F 1 ), or a second generation hybrid (F 2 ) or later plant obtained by further crossing, such as an F 3 or F 4. For example, the progeny lisianthus plant may be a first generation (BC 1 ) plant obtained by backcrossing an F 1 with a susceptible lisianthus plant, or a second generation (BC 2 ) or later plant obtained by further backcrossing.
ユーストマ・エグザルタトゥムとフザリウム属菌(例えば、フザリウム・ソラニー)による立枯病に対して罹病性であるトルコギキョウ植物の交配後代トルコギキョウ植物については、上述したとおりである。また、本実施形態における具体的な態様等は、本判別方法及び本作出方法の欄を含む、上述した具体的な態様等を制限なく適用できる。 The progeny lisianthus plant obtained by crossing Eustoma exartatum with a lisianthus plant susceptible to damping-off caused by Fusarium fungi (e.g., Fusarium solani) is as described above. In addition, the specific aspects of this embodiment can be the specific aspects described above, including the present discrimination method and the production method, without any restrictions.
トルコギキョウゲノム情報を利用したフザリウム・ソラニー病害抵抗性遺伝因子の解析を以下のように行った。 The genetic factors conferring resistance to Fusarium solani disease were analyzed using the eustoma genome information as follows.
(1)病害抵抗性の異なる系統を両親とした分離集団における病害抵抗性検定
トルコギキョウ生産圃場で立枯病を発症した個体から分離したフザリウム・ソラニーに対し極強の抵抗性を示すトルコギキョウ野生種‘大川一号’と、極弱の抵抗性を示す固定自殖系統‘紫盃’を材料に、病害抵抗性を司る因子の遺伝性解析を行った。両系統を両親とする分離集団における病害抵抗性をフザリウム・ソラニーの接種検定により評価し、抵抗性の優劣性を明らかにした。
(1) Disease resistance test in a segregating population with different disease resistance lines as parents We conducted a genetic analysis of factors controlling disease resistance using the wild Eustoma species "Okawa Ichigou," which shows extremely high resistance to Fusarium solani, isolated from individuals that developed damping-off disease in a Eustoma production field, and the fixed inbred line "Shibai," which shows extremely low resistance. Disease resistance in a segregating population with both lines as parents was evaluated by inoculation tests with Fusarium solani, and the superiority or inferiority of resistance was clarified.
接種検定は以下のように行った。水耕装置(ホームハイポニカSarah,協和(株))に抵抗性分離集団を定植し、約3週間後に注射針で株元2箇所に針刺し付傷処理後に、菌濃度1×107~1×108個/mLのフザリウム・ソラニーMAFF712388菌懸濁液を1mL/株ずつ株元灌注する方法で接種を行った。菌接種後1週間毎に発病程度を調査し、発病度、発病株率を算出した(表4) The inoculation test was carried out as follows. The resistant segregant population was planted in a hydroponic device (Home Hyponica Sarah, Kyowa Co., Ltd.), and after about three weeks, the plant was pierced with a syringe needle at two points at the base, and then inoculation was carried out by irrigating the base with 1 mL of a suspension of Fusarium solani MAFF712388 bacteria at a concentration of 1 x 107 to 1 x 108 bacteria/mL at each plant. The degree of disease was investigated every week after inoculation, and the disease severity and rate of diseased plants were calculated (Table 4).
水耕措置を用いたトルコギキョウ立枯病(フザリウム・ソラニー)抵抗性検定法により、固定系統・品種のユーストマ・グランディフロラム‘紫盃’、ユーストマ・エグザルタトゥム‘大川1号’及びそのF1、F2系統における抵抗性評価を行ったところ、‘大川1号’は抵抗性(発病株率0%)、‘紫盃’は罹病性(発病株率90%)、そのF1系統は抵抗性(発病株率0%)であり、F2系統では抵抗性が分離した。‘大川1号’の抵抗性には遺伝性があり、優性の抵抗性遺伝子が存在することが示唆された。F2の同一個体について抵抗性評価を反復実施するために、挿し芽増殖によるF2検定材料の育苗法を確立し、F2系統の接種試験を実施し、F2抵抗性解析集団における各個体毎の抵抗性の分離を明らかにした。 Resistance evaluation was performed on the fixed line/variety Eustoma grandiflorum 'Shisa' and Eustoma exartatum 'Okawa No. 1' and their F 1 and F 2 lines by a hydroponic resistance test method. 'Okawa No. 1' was resistant (0% diseased plant rate), 'Shisa' was susceptible (90% diseased plant rate), and its F 1 line was resistant (0% diseased plant rate), while resistance was segregated in the F 2 line. It was suggested that the resistance of 'Okawa No. 1' is hereditary and that there is a dominant resistance gene. In order to repeatedly perform resistance evaluation on the same F 2 individual, a seedling raising method for F 2 test material by cutting propagation was established, and an inoculation test of the F 2 line was performed, and the segregation of resistance for each individual in the F 2 resistance analysis population was clarified.
候補遺伝子座両領域を絞り込むには多くの組み替え個体が必要であるため、2年目には新たにF2系統191個体についてフザリウム・ソラニー山形菌株に対する病害抵抗性を評価した。F2系統191個体における発病程度別個体数は、無発病(発病指数0)から枯死(発病指数4)と広く分離した。F2系統では発病度、発病株率ともに、F2の両親の中間の値を示した。 Since many recombinant individuals are needed to narrow down the candidate loci, in the second year, 191 F2 lineages were newly evaluated for disease resistance to Fusarium solani Yamagata strain. The number of individuals by disease severity in the 191 F2 lineages was widely separated from no disease (disease index 0) to dead (disease index 4). In the F2 lineages , both the disease severity and the diseased plant rate showed intermediate values between the F2 parents.
繰り返されたさし穂によるQTL解析は、回数が増えるにつれ困難であると考えられたため、挿し穂ではなく実質的に同質と思われる実生苗を得るために作出してきた組替え自殖系統Recombinant inbred line(RILs)での抵抗性検定を行った。RILsは、遺伝子座乗領域同定を達成するために、ユーストマ・グランディフロラム系統‘紫盃’×ユーストマ・エグザルタトゥム野生種‘大川1号’雑種を繰り返し自殖させたものである。 Because repeated QTL analysis using cuttings was deemed to be difficult as the number of times increased, resistance tests were carried out using recombinant inbred lines (RILs) that had been produced to obtain seedlings that were considered to be essentially identical to the cuttings. RILs were created by repeatedly selfing a hybrid of Eustoma grandiflorum strain 'Shisakabe' x Eustoma exaltatum wild species 'Okawa No. 1' in order to identify the gene locus region.
同質な遺伝的背景を持つRILs個体を1組あたり20個体ずつ定植し、10組200個体に病原菌を接種した。全組について非接種区は発病度が0で推移した、接種区は、接種後60日目には、病害抵抗性に大きな開きが確認された。 RILs individuals with homogeneous genetic backgrounds were planted in groups of 20 individuals, and 10 groups (200 individuals) were inoculated with the pathogen. In all groups, the disease intensity remained at 0 in the non-inoculated areas, but in the inoculated areas, a large difference in disease resistance was confirmed 60 days after inoculation.
(2)病害抵抗性の異なる系統を両親とした分離集団を利用した病害抵抗性に関与する遺伝子領域のゲノム座乗位置の同定
極弱の抵抗性を示す固定自殖系統‘紫盃’は、現在流通しているトルコギキョウ品種(ユーストマ・グランディフロラム)とのゲノム共通性が高いと予想されている。一方でフザリウム・ソラニーに対し極強の抵抗性を示すユーストマ・エグザルタトゥム野生種‘大川1号’のゲノムはユーストマ・グランディフロラムに対し多くの遺伝的多型をもつと考えられる。病害抵抗性遺伝子座の同定の第一歩として、両系統間のDNA多型を同定した。
(2) Identification of the genomic locus of gene regions involved in disease resistance using a segregating population with strains of different disease resistance as parents. The fixed inbred strain 'Shisai', which shows extremely weak resistance, is expected to have a high degree of genomic commonality with the currently available lisianthus variety (Eustoma grandiflorum). On the other hand, the genome of the wild species Eustoma exartatum 'Okawa No. 1', which shows extremely strong resistance to Fusarium solani, is thought to have many genetic polymorphisms compared to Eustoma grandiflorum. As a first step in identifying disease resistance gene loci, we identified DNA polymorphisms between the two strains.
多検体遺伝子型検定が容易なインデル(Indel;Insersion/deletion)を情報解析により探索し、‘紫盃’‘大川1号’間で10bp以上の違いがあるインデルを同定した。そのうち、現在のリファレンスゲノムを構成する943個のコンティグに散在するインデルを1つのコンティグあたり1つずつ抽出し多型検出するためのプライマーを設計した。 By searching for indels (insertion/deletion) that can be easily tested for genotypes in multiple samples using information analysis, we identified indels that differ by 10 bp or more between Shisai and Okawa No. 1. From these, we extracted indels scattered across the 943 contigs that make up the current reference genome, one per contig, and designed primers to detect polymorphisms.
設計したプライマーセットについて‘紫盃’‘大川1号’のゲノムを鋳型にPCR増幅し、両系統間の多型をアガロースゲル電気泳動で確認した結果、多型を示すセットが多く確認され、そのうち330組のインデルマーカーについては雑種第二代においても安定的に増幅され多型を示した。 The designed primer set was amplified by PCR using the genomes of 'Shisakai' and 'Okawa No. 1' as templates, and polymorphisms between the two strains were confirmed by agarose gel electrophoresis. As a result, many sets showing polymorphisms were confirmed, and of these, 330 pairs of indel markers were stably amplified and showed polymorphisms even in the second generation of hybrids.
次にRAD-Seq解析により‘紫盃’‘大川1号’F2分離集団の多検体それぞれについて得ていたゲノム上に散在する制限酵素認識部位からの短鎖配列情報の中から、分離比の歪みのないマーカーを選抜し、短期間低コストかつ高い正確性で‘紫盃’ב大川1号’交雑分離集団でのDNA多型解析を行った。 Next, markers that did not distort the segregation ratio were selected from the short sequence information from restriction enzyme recognition sites scattered across the genome that had been obtained from multiple samples of the 'Shibai' and 'Okawa No. 1' F2 segregating populations using RAD-Seq analysis, and DNA polymorphism analysis of the 'Shibai' x 'Okawa No. 1' hybrid segregating populations was performed in a short period of time, at low cost, and with high accuracy.
その結果、96個体以上の雑種第二代でタイピングが可能だった1479マーカー、86個体以上の雑種第二代でタイピングが可能だった2480マーカー、76個体以上の雑種第二代でタイピングが可能だった3019マーカーを得た。 As a result, we obtained 1,479 markers that could be typed in second-generation hybrids with 96 or more individuals, 2,480 markers that could be typed in second-generation hybrids with 86 or more individuals, and 3,019 markers that could be typed in second-generation hybrids with 76 or more individuals.
これらの結果と発病度の結果を用いてQTL解析を行った結果、大川1号がもつ抵抗性遺伝子座の1つはコンティグ番号187F_pilon近傍に座乗していることが示唆された(LOD値 5.05,p<0.05で有意差あり)。また、147F_pilion及び180F_pilion(両コンティグは同一連鎖群に含まれる)間の領域にも抵抗性差異に関与する領域の存在が示唆された。 A QTL analysis was performed using these results and the disease severity results, suggesting that one of the resistance loci in Okawa No. 1 is located near contig number 187F_pilon (LOD value 5.05, significant difference at p<0.05). In addition, the presence of a region involved in resistance differences in the region between 147F_pilion and 180F_pilion (both contigs are included in the same linkage group) was also suggested.
(3)SNP遺伝子型と発病指数の関係の解析
これらの領域を解析したところ、下記の表に示すように、それぞれ1~4個のSNPを有する領域であることが分かった。
(3) Analysis of the Relationship between SNP Genotype and Disease Incidence Index When these regions were analyzed, it was found that each region contained 1 to 4 SNPs, as shown in the table below.
第一回集団(実生春実験)と2480マーカーを用いたQTL解析により得られたこれらの遺伝子型と発病指数を図1に示す。遺伝子型Aは紫盃タイプ、遺伝子型Bは大川1号タイプ、遺伝子型Hはヘテロタイプを示す。 These genotypes and disease indexes obtained from the first population (spring seedling experiment) and QTL analysis using 2480 markers are shown in Figure 1. Genotype A indicates the Murasakibai type, genotype B indicates the Okawa No. 1 type, and genotype H indicates the heterotype.
また、3座SNP(180Fpil_584498、147Fpil_3163121、187Fpil_1,651,751)すべてが紫盃タイプであるF2(F2_AAA)、3座すべてがヘテロタイプであるF2(F2_HHH)、3座すべてが大川1号タイプであるF2(F2_BBB)の発病指数を、紫盃及び大川1号と比較した結果を図2に示す。
Figure 2 shows the results of comparing the disease indexes of an F2 (F2_AAA) in which all three loci SNPs (180Fpil_584498, 147Fpil_3163121, 187Fpil_1,651,751) are of the Shibai type, an F2 (F2_HHH) in which all three loci are heterotypes, and an F2 (F2_BBB) in which all three loci are of the
雑種第二代第一集団のさし穂増殖により繰り返し試験を行なった試験の中で、安定して抵抗性だった系統を「極強系統」、安定して罹病した系統を「極弱系統」としてそれぞれ6系統ずつについて全ゲノムリシーケンスを行なった。それら情報からゲノム全体の8割以上を網羅するカバー率のコンティグ群に含まれるインデル多型を検出し検証した結果、遺伝子型分離と抵抗性強弱が概ね一致した位置は、QTL解析で同定した候補領域と一致した。 In repeated tests using cuttings propagated from the first population of the second hybrid, stably resistant lines were designated "extremely strong lines" and lines that were stably infected were designated "extremely weak lines," and whole genome resequencing was performed on six of each line. From this information, indel polymorphisms contained in a contig group with a coverage rate of more than 80% of the entire genome were detected and verified, and the positions where genotype separation and resistance strength roughly coincided were found to be consistent with the candidate regions identified by QTL analysis.
第一回集団(実生78個体、春実験)のうち、候補領域がすべて罹病性(紫盃)タイプの遺伝型を示した3系統の発病指数は3.3と極めて高く罹病性系統の発病指数3.6に近かったことから、これらの領域の遺伝型の相違を指標に罹病性抵抗性を区別できる可能性が示唆された。 Of the first group (78 seedlings, spring experiment), the three lines in which all candidate regions showed the genotype of susceptible (purple cup) type had an extremely high disease index of 3.3, close to the 3.6 disease index of the susceptible line, suggesting the possibility that disease resistance can be distinguished using the differences in the genotypes of these regions as an indicator.
(4)インデル遺伝子型とフザリウム・ソラニーに対する発病指数の関係の解析
初年度までの集団で得た抵抗性座乗候補領域の信頼性を検証するために、第一回集団における3座SNP近傍に複数のインデルマーカーを設計し、2年目に供試した雑種第二代第二集団実生191個体の発病スコアとインデル遺伝子型を検証した。その結果、ID756_180F_584,498、IDE934_147F_2,665,700、IDE965_187F_958,712の3座遺伝子型と平均発病指数において、第一集団と同様の傾向が認められたため、当領域が病害抵抗性に関与すると考えられた(図3)。
(4) Analysis of the relationship between indel genotypes and disease index against Fusarium solani In order to verify the reliability of the resistance locus candidate region obtained in the population up to the first year, multiple indel markers were designed near the three-locus SNP in the first population, and the disease score and indel genotype of 191 seedlings of the second hybrid population of the second generation tested in the second year were verified. As a result, the three-locus genotypes of ID756_180F_584,498, IDE934_147F_2,665,700, and IDE965_187F_958,712 showed the same tendency as the first population in terms of the average disease index, suggesting that this region is involved in disease resistance (Figure 3).
3座に加え、180Fと147Fに挟まれる位置に存在する293Fコンティグにもインデルマーカーを設計しその遺伝子型と病害抵抗性値の関係を調査したところ、4座(ID756_180F_584,498、IDE934_147F_2,665,700、IDE965_187F_958,712、IDE903_293F_182,103)で選択した雑種は293Fマーカー以外の3座で選択した雑種よりもさらに病原性と相関することが明らかとなった(図4)。 In addition to the three loci, indel markers were also designed for the 293F contig located between 180F and 147F, and the relationship between the genotype and disease resistance value was investigated. It was found that hybrids selected at four loci (ID756_180F_584,498, IDE934_147F_2,665,700, IDE965_187F_958,712, IDE903_293F_182,103) were more strongly correlated with pathogenicity than hybrids selected at the three loci other than the 293F marker (Figure 4).
3座が全て紫盃タイプを持つものの発病程度平均値は、3座について大川1号タイプをもつものに比べ大きく、病気にかかりやすいことが示唆された。統計的にこの差を立証するために、当領域の組み換え個体を使用した多検体での解析を行なった。 The average disease severity in those with the Purple Cup type at all three loci was greater than in those with the Okawa No. 1 type at all three loci, suggesting that they were more susceptible to the disease. To statistically prove this difference, we conducted an analysis of multiple samples using recombinant individuals in this region.
‘紫盃’ב大川1号’雑種を自殖させた組替え自殖系統(Recombinant Inbred lines;RILs)の作出と利用を行った。まず雑種第二代の自殖交配を行い、世代を進め、最終的に118組の雑種第4代を得た。次にRILsに対する接種の準備段階として、雑種第4代95個体の祖先である雑種第2代95個体について抵抗性候補遺伝子座の多型解析を行った。候補座の遺伝型が罹病性系統(AAA)および抵抗性系統(BBB)をもつような個体を探索し同定した。 We produced and utilized recombinant inbred lines (RILs) by selfing a hybrid of 'Shibai' x 'Okawa No. 1'. First, self-crossing was performed on the second generation of hybrids, and by progressing through the generations, we ultimately obtained 118 pairs of fourth generation hybrids. Next, in preparation for inoculation with RILs, we performed polymorphism analysis of candidate resistance loci on 95 second generation hybrid individuals, which were the ancestors of the 95 fourth generation hybrid individuals. We searched for and identified individuals whose genotypes at candidate loci were susceptible (AAA) and resistant (BBB) lines.
それらの自殖後代種子を複数年の交配で育成した。最終年度には、抵抗性を司るQTL領域について様々なパターンでホモ化したと考えられるRILsに対して病害抵抗性評価を行った(前述)。菌株として、これまで使用してきたフザリウム・ソラニー山形菌よりも病原性の強いフザリウム・ソラニー福島菌株を用いた。それらの遺伝型を確認した結果、候補QTL座を確実に識別可能なIDE756_180F_ 584,498、IDE934_147F_2, 665, 700、IDE965_187F_ 958,712における遺伝子型がいずれも抵抗性系統型である集団が得られ、それらは3座がいずれも罹病性系統型の集団よりも統計的に有意に、フザリウム・ソラニーに対して強い(発病度指数が小さい)ことが明らかとなった(図5)。図5において、Aは紫盃タイプ、Bは大川1号タイプを意味する。 The self-fertilized progeny seeds were cultivated through multiple years of crossing. In the final year, disease resistance evaluation was performed on RILs that were thought to have homogenized in various patterns for the QTL region responsible for resistance (as described above). The strain used was the Fusarium solani Fukushima strain, which is more pathogenic than the Fusarium solani Yamagata strain that had been used up until now. As a result of confirming their genotypes, a population was obtained in which the genotypes at IDE756_180F_ 584,498, IDE934_147F_2, 665,700, and IDE965_187F_ 958,712, which allow reliable identification of candidate QTL loci, were all resistant phylogenetic types, and it was revealed that these populations were statistically significantly more resistant to Fusarium solani (had a smaller disease severity index) than the population with susceptible phylogenetic types at all three loci (Figure 5). In Figure 5, A represents the Murasaki-sai type and B represents the Okawa No. 1 type.
3座がフザリウム・ソラニー抵抗性親型のこの集団について数百粒以上の種子を得た。これらは、抵抗性F1品種を育成する際に中間母本として利用可能である。IDE756_180F_ 584,498、IDE934_147F_2, 665, 700、IDE965_187F_ 958,712における遺伝子型を確認するために用いた各選抜マーカーの配列を下記の表に示す。 Over several hundred seeds were obtained from this population of three-locus Fusarium solani resistant parents. These can be used as intermediate mothers in developing resistant F1 varieties. The sequences of the selection markers used to confirm the genotypes in IDE756_180F_ 584,498, IDE934_147F_2, 665,700, and IDE965_187F_ 958,712 are shown in the table below.
上記選抜マーカーにより増幅される配列(紫盃タイプ及び大川1号タイプ)とその比較について下記の表に示す。 The sequences amplified by the above selection markers (Shibai type and Okawa No. 1 type) and a comparison of them are shown in the table below.
また、各選抜マーカーを用いたPCR法により得られたDNA増幅産物の泳動写真を図6に示す。 Figure 6 shows the electrophoretic images of the DNA amplified products obtained by PCR using each selection marker.
病原菌を接種し強弱検定を行うことなく、遺伝子型の確認によってその後代個体のフザリウム・ソラニーによる立枯病抵抗性を評価可能であることが示された。 It was shown that it is possible to evaluate the resistance of progeny individuals to Fusarium solani wilt disease by confirming the genotype without inoculating the pathogen and testing for its strength.
(5)同一連鎖群に座乗する2座に関するさらなる解析
上記3座が全て紫盃タイプを持つものの発病程度平均値は、3座について大川1号タイプをもつものに比べ大きかったが、うち2座は同一連鎖群に座乗していたため、2座に挟まれた領域の病害抵抗性関与をさらに検証した。2座(IDE756-180F及びIDE926-147F)をホモ固定化(IDE756-180Fを抵抗性の遺伝子型B、IDE926-147Fを罹病性の遺伝子型A)したものの後代(第三世代の雑種)における立枯病害抵抗性を検証した。なお、別の染色体にある187Fは罹病性の遺伝型(A)で固定した。第三世代の各雑種(縦軸)における180Fコンティグから147コンティグまでの範囲の各座の多型を図7に示す。遺伝子型Aは紫盃タイプ、遺伝子型Bは大川1号タイプ、遺伝子型Hはヘテロタイプを示す。また、図7の囲み線部分の各座の平均発病指数値を図8に示す。図8において、実線は罹病性型ホモの発病度平均値―抵抗性型ホモ系統発病度平均値、破線は罹病性型ホモの発病度平均値―ヘテロ系統発病度平均値、一点鎖線は抵抗性型ホモ系統発病度平均値―ヘテロ系統発病度平均値を示す。すなわち、罹病性の遺伝型(A)をもつ雑種の発病指数は、抵抗性の遺伝型をもつ雑種の発病指数よりも高かった。したがって、2座に挟まれた領域の遺伝子型と雑種の抵抗性の強弱には相関があることが分かった。よって、当領域の遺伝子型を調査すれば、強抵抗性の系統が選抜できることがわかった。
(5) Further analysis of two loci located on the same linkage group The average disease severity of the above three loci with the Purple Cup type was higher than that of the Okawa No. 1 type for all three loci, but since two of the loci were located on the same linkage group, the involvement of the region between the two loci in disease resistance was further examined. The resistance to damping-off disease in the progeny (third-generation hybrids) of two loci (IDE756-180F and IDE926-147F) that were homozygously fixed (IDE756-180F is resistant genotype B, IDE926-147F is susceptible genotype A) was examined. In addition, 187F, which is located on a different chromosome, was fixed with the susceptible genotype (A). Figure 7 shows the polymorphisms of each locus in the range from the 180F contig to the 147 contig in each third-generation hybrid (vertical axis). Genotype A indicates the Murasaki-sai type, genotype B indicates the Okawa No. 1 type, and genotype H indicates the heterotype. The average disease index value of each locus in the enclosed line part of FIG. 7 is shown in FIG. 8. In FIG. 8, the solid line indicates the average disease intensity of susceptible homozygotes minus the average disease intensity of resistant homozygotes, the dashed line indicates the average disease intensity of susceptible homozygotes minus the average disease intensity of heterozygotes, and the dashed line indicates the average disease intensity of resistant homozygotes minus the average disease intensity of heterozygotes. That is, the disease index of the hybrid with the susceptible genotype (A) was higher than that of the hybrid with the resistant genotype. Therefore, it was found that there is a correlation between the genotype of the region sandwiched between the two loci and the strength of resistance of the hybrid. Therefore, it was found that by investigating the genotype of this region, a line with strong resistance can be selected.
(6)インデル遺伝子型とフザリウム・オキシスポラムに対する発病指数の関係の解析
静岡県のトルコギキョウ産地から分離・同定されたフザリウム・オキシスポラムの1菌株(以下、フザリウム・オキシスポラム静岡菌株)は、フザリウム・ソラニーのQTL解析で用いた両親(紫盃及び大川1号)に対して異なる罹病性を示したため、それら両親の雑種がフザリウム・オキシスポラムのQTL解析に利用可能であると予想された。そこで雑種に対してフザリウム・オキシスポラム静岡菌株を接種したところ、抵抗性が分離した。さらに、「(4)インデル遺伝子型とフザリウム・ソラニーに対する発病指数の関係の解析」において得られた3座がフザリウム・ソラニー抵抗性親型(3座がB)の集団に対して、フザリウム・オキシスポラム静岡菌株を接種したところ、発病個体は認められなかった(図9)。
(6) Analysis of the relationship between indel genotype and disease index against Fusarium oxysporum One strain of Fusarium oxysporum isolated and identified from a lisianthus-producing area in Shizuoka Prefecture (hereafter, Fusarium oxysporum Shizuoka strain) showed different susceptibility to the parents (Shisakai and Okawa 1) used in the QTL analysis of Fusarium solani, so it was expected that a hybrid of these parents could be used for the QTL analysis of Fusarium oxysporum. When the hybrid was inoculated with Fusarium oxysporum Shizuoka strain, resistance was isolated. Furthermore, when the population of the Fusarium solani-resistant parent type (three loci are B) obtained in "(4) Analysis of the relationship between indel genotype and disease index against Fusarium solani" was inoculated with Fusarium oxysporum Shizuoka strain, no diseased individuals were observed (Figure 9).
病原菌を接種し強弱検定を行うことなく、遺伝子型の確認によってその後代個体のフザリウム・オキシスポラムによる立枯病抵抗性を評価可能であることが示された。 It was shown that it is possible to evaluate the resistance of progeny individuals to Fusarium oxysporum wilt disease by confirming the genotype without inoculating the pathogen and testing for its strength.
Claims (15)
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、及び
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、前記被検トルコギキョウ植物を、フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示す可能性が高いトルコギキョウ植物であると判別することを含み、
前記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
前記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
前記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
前記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
前記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
前記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、
前記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
前記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
前記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位塩基が挿入されていることであり、
前記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
前記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
前記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
前記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
前記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
前記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
前記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
前記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
前記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
前記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、方法。 A method for identifying a eustoma plant which is likely to exhibit resistance to damping-off caused by Fusarium sp., comprising:
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type;
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type;
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type;
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type;
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type;
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type;
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type;
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type;
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type;
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type;
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type;
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type;
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type;
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type;
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type;
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type;
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type;
(18) the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exartatum type, and (19) the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exartatum type. When the test eustoma plant satisfies one or more conditions selected from the group consisting of:
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exartatum type, in that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, in that bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, in that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is a Eustoma exartatum type, and the base at position 100 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is thymine.
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, and the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is adenine, the base at position 40 is adenine, the base at position 53 is thymine, and the base at position 100 is cytosine.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exaltatum type, and bases from positions 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in (10) above is a Eustoma exartatum type, in which bases at positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases at positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted between positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in (11) above is a Eustoma exartatum type, which means that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in (12) above is a Eustoma exartatum type, in which bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in (13) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in (14) above is a Eustoma exaltatum type, and bases from positions 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in (15) above is a Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in (16) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in (18) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The method of (19) above, wherein the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type, and wherein bases from positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases from positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することを含む、請求項1又は2に記載の方法。 Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or 3. The method of claim 1 or 2, comprising determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type.
前記プライマーセットが、前記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、SNPの有無をDNA増幅法による増幅の有無により確認するためのプライマーセット、又はDNA増幅法による増幅産物を特定の制限酵素により処理した際の切断の有無によりSNPの有無を確認するためのプライマーセットである、請求項5に記載の組成物又はプライマーセット。 The composition is a composition for determining whether or not a sample is a Eustoma exaltatum type by hybridization using the probe , or a composition for confirming the base type of a SNP using the probe ,
The composition or primer set described in claim 5, wherein the primer set is a primer set designed to flank the deletion and/or insertion, a primer set for confirming the presence or absence of a SNP based on the presence or absence of amplification by a DNA amplification method, or a primer set for confirming the presence or absence of a SNP based on the presence or absence of cleavage when the amplified product by the DNA amplification method is treated with a specific restriction enzyme.
配列番号2における174~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号3における139~154位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける260位~569位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間における、配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位における配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位における配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位における配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位における配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択され、
ユーストマ・グランディフロラムのゲノムにおいて50~1200bpのDNA断片を増幅する、請求項5又は6に記載のプライマーセット。 A primer set designed to flank the deletion of bases 56 to 157 in SEQ ID NO:1;
A primer set designed to flank the deletion of bases 174 to 213 in SEQ ID NO:2;
A primer set designed to flank the deletion of bases 139 to 154 in SEQ ID NO:3;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 328 to 420 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 481 to 491 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 80 in the genomic DNA of SEQ ID NO:19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21;
A primer set designed to flank the deletion of bases 260 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 166 to 193 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 between positions 165 and 166 of the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 79 to 290 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:26 at positions 78 to 190 of a genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to flank the deletion of bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27;
A primer set designed to flank the deletion of bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29;
A primer set designed to flank the deletion of bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31;
A primer set designed to flank the deletion of bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33;
A primer set designed to flank the deletion of bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 197 to 627 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 36 at positions 198 to 342 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 35;
A primer set designed to flank the deletion of bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37;
A primer set designed to flank the deletion of bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO:39;
A primer set designed to flank the deletion of bases 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO:41;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 276 to 293 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 42 at positions 278 to 432 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 41;
A primer set designed to flank the deletion of bases 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO:43;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 589 to 1011 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 at positions 603 to 746 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 43;
A primer set designed to flank the deletion of bases 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and combinations thereof;
The primer set according to claim 5 or 6, which amplifies a DNA fragment of 50 to 1200 bp in the genome of Eustoma grandiflorum.
配列番号15と90%以上の配列同一性を有するプライマー、及び配列番号16と90%以上の配列同一性を有するプライマーを含むプライマーセット、
配列番号17と90%以上の配列同一性を有するプライマー、及び配列番号18と90%以上の配列同一性を有するプライマーを含むプライマーセットからなる群から選択される、請求項5~7のいずれか一項に記載のプライマーセット。 A primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 13 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 14;
A primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 15 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 16;
The primer set according to any one of claims 5 to 7, selected from the group consisting of a primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 17 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 18.
(1)配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(2)配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(3)配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(4)配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(5)配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(6)配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(7)配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(8)配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(9)配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(10)配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(11)配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(12)配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(13)配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(14)配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(15)配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(16)配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(17)配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、
(18)配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である、及び
(19)配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型である
からなる群から選択される1以上の条件を満たす場合に、前記交配後代トルコギキョウ植物を選抜することを含み、
前記(1)の配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号1のゲノムDNAにおける56~157位の塩基が欠失していることであり、
前記(2)の配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号2のゲノムDNAにおける174~213位の塩基が欠失していることであり、
前記(3)の配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号3のゲノムDNAにおける139~154位の塩基が欠失していることであり、
前記(4)の配列番号4のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号4のゲノムDNAにおける100位の塩基がチミンであることであり、
前記(5)の配列番号5のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号5のゲノムDNAにおける37位の塩基がチミンであり、且つ38位の塩基がアデニンであることであり、
前記(6)の配列番号6のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号6のゲノムDNAにおける8位の塩基がアデニンであり、40位の塩基がアデニンであり、53位の塩基がチミンであり、且つ100位の塩基がシトシンであることである、
前記(7)の配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間に配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基が欠失していることであり、
前記(8)の配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基が欠失していることであり、
前記(9)の配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号23のゲノムDNAにおける152位~153位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける260位~535位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける538位~569位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間に配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位塩基が挿入されていることであり、
前記(10)の配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位において配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基が挿入されていることであり、
前記(11)の配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基が欠失していることであり、
前記(12)の配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基が欠失していることであり、
前記(13)の配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基が欠失していることであり、
前記(14)の配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基が欠失していることであり、
前記(15)の配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位に配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基が挿入されていることであり、
前記(16)の配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基が欠失していることであり、
前記(17)の配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基が欠失していることであり、
前記(18)の配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位に配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基が挿入されていることであり、
前記(19)の配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であることが、配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基が欠失していること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位に配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基が挿入されていること、及び/又は配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位が欠失していることである、
フザリウム属菌による立枯病に抵抗性を示すトルコギキョウ植物を作出する方法。 In a progeny eustoma plant between Eustoma exaltatum, which is resistant to wilt caused by Fusarium spp., and a eustoma plant susceptible to wilt caused by Fusarium spp., the eustoma plant has a chromosome number of 1 or more at least one site on the homologous chromosome.
(1) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exartatum type;
(2) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exartatum type;
(3) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exartatum type;
(4) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is of the Eustoma exartatum type;
(5) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is of the Eustoma exartatum type;
(6) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is of the Eustoma exartatum type;
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type;
(8) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exartatum type;
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exartatum type;
(10) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exartatum type;
(11) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exartatum type;
(12) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 29 is of the Eustoma exartatum type;
(13) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 is of the Eustoma exartatum type;
(14) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 is of the Eustoma exartatum type;
(15) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 is of the Eustoma exartatum type;
(16) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 is of the Eustoma exartatum type;
(17) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 is of the Eustoma exartatum type;
(18) the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 is of the Eustoma exaltatum type; and (19) the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 is of the Eustoma exaltatum type.
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 in the above (1) is a Eustoma exartatum type, in that bases 56 to 157 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 in the above (2) is a Eustoma exartatum type, in which bases 174 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 in the above (3) is a Eustoma exartatum type, in that bases 139 to 154 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 in the above (4) is a Eustoma exartatum type, and the base at position 100 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 4 is thymine.
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:5 in the above (5) is a Eustoma exartatum type, in which the base at position 37 in the genomic DNA of SEQ ID NO:5 is thymine and the base at position 38 is adenine,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:6 in (6) above is of the Eustoma exaltatum type, and the base at position 8 in the genomic DNA of SEQ ID NO:6 is adenine, the base at position 40 is adenine, the base at position 53 is thymine, and the base at position 100 is cytosine.
(7) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 328 to 420 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 481 to 491 of the genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 are inserted between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19, and/or bases from positions 78 to 80 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:21 in the above (8) is a Eustoma exaltatum type, and bases from positions 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21 are deleted,
(9) The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:23 is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 152 to 153 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 260 to 535 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 538 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23 are deleted, and/or bases from positions 166 to 193 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:24 are inserted between positions 165 to 166 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:25 in (10) above is a Eustoma exartatum type, in which bases at positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25 are deleted, and/or bases at positions 79 to 290 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO:26 are inserted at positions 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:27 in (11) above is a Eustoma exartatum type, which means that bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 in (12) above is a Eustoma exartatum type, in which bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 in (13) above is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 31 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 in (14) above is a Eustoma exaltatum type, and bases from positions 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 33 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 in (15) above is a Eustoma exartatum type, in which bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35 are deleted, and/or bases from positions 197 to 627 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 36 are inserted into positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 35,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 in (16) is a Eustoma exaltatum type, which means that bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 37 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 in (17) above is a Eustoma exaltatum type, and bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 39 are deleted,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 in (18) above is of the Eustoma exartatum type, in which bases from positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41 are deleted, and/or bases from positions 276 to 293 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 42 are inserted into positions 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 41,
The genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 in (19) above is of the Eustoma exartatum type, that is, bases at positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted, and/or bases at positions 589 to 1011 of the genomic DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 44 are inserted into positions 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and/or bases at positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43 are deleted.
A method for producing lisianthus plants that are resistant to Fusarium wilt disease.
配列番号1のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号2のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号3のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号19のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号21のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号23のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号25のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号27のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号29のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号31のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号33のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号35のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号37のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号39のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号41のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否か、及び/又は
配列番号43のゲノムDNAに対応するゲノムDNAがユーストマ・エグザルタトゥム型であるか否かを、決定することを含む、請求項9に記載の方法。 Based on the length of the DNA fragment amplified by PCR using a primer set designed to flank the deletion and/or insertion,
Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 1 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 2 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 3 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 19 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 21 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 23 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 25 is of the Eustoma exaltatum type, and/or Whether or not the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO: 27 is of the Eustoma exaltatum type, and/or 10. The method of claim 9, comprising determining whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:29 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:31 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:33 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:35 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:37 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:39 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:41 is of the Eustoma exaltatum type, and/or whether the genomic DNA corresponding to the genomic DNA of SEQ ID NO:43 is of the Eustoma exaltatum type.
前記プライマーセットが、前記欠失及び/又は挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、SNPの有無をDNA増幅法による増幅の有無により確認するためのプライマーセット、又はDNA増幅法による増幅産物を特定の制限酵素により処理した際の切断の有無によりSNPの有無を確認するためのプライマーセットである、請求項12に記載の組成物又はプライマーセット。 The composition is a composition designed to determine whether or not a sample is a Eustoma exartatum type by hybridization using the probe , or a composition for confirming the base type of a SNP using the probe ;
The composition or primer set described in claim 12, wherein the primer set is a primer set designed to flank the deletion and/or insertion, a primer set for confirming the presence or absence of a SNP based on the presence or absence of amplification by a DNA amplification method, or a primer set for confirming the presence or absence of a SNP based on the presence or absence of cleavage when the amplified product by the DNA amplification method is treated with a specific restriction enzyme.
配列番号2における174~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号3における139~154位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける330位~331位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの328位~420位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける391位~392位間における、配列番号20に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの481位~491位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号19のゲノムDNAにおける78位~80位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号21のゲノムDNAにおける240位~291位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける260位~569位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号23のゲノムDNAにおける165位~166位間における、配列番号24に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの166位~193位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号25のゲノムDNAにおける78位~190位における配列番号26に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの79位~290位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号27のゲノムDNAにおける83位~135位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号29のゲノムDNAにおける124位~203位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号31のゲノムDNAにおける247位~340位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号33のゲノムDNAにおける171位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号35のゲノムDNAにおける198位~342位における配列番号36に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの197位~627位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号37のゲノムDNAにおける176位~213位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号39のゲノムDNAにおける207位~315の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号41のゲノムDNAにおける278位~432位における配列番号42に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの276位~293位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける603位~746位における配列番号44に記載の塩基配列からなるゲノムDNAの589位~1011位の塩基の挿入を挟み込むように設計されたプライマーセット、
配列番号43のゲノムDNAにおける473位~477位の塩基の欠失を挟み込むように設計されたプライマーセット、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択され、
ユーストマ・グランディフロラムのゲノムにおいて50~1200bpのDNA断片を増幅する、請求項12又は13に記載のプライマーセット。 A primer set designed to flank the deletion of bases 56 to 157 in SEQ ID NO:1;
A primer set designed to flank the deletion of bases 174 to 213 in SEQ ID NO:2;
A primer set designed to flank the deletion of bases 139 to 154 in SEQ ID NO:3;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 328 to 420 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 330 and 331 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 481 to 491 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20 between positions 391 and 392 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 80 in the genomic DNA of SEQ ID NO:19;
A primer set designed to flank the deletion of bases 240 to 291 in the genomic DNA of SEQ ID NO:21;
A primer set designed to flank the deletion of bases 260 to 569 in the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 166 to 193 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:24 between positions 165 and 166 of the genomic DNA of SEQ ID NO:23;
A primer set designed to flank the deletion of bases 78 to 190 in the genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 79 to 290 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO:26 at positions 78 to 190 of a genomic DNA of SEQ ID NO:25;
A primer set designed to flank the deletion of bases 83 to 135 in the genomic DNA of SEQ ID NO:27;
A primer set designed to flank the deletion of bases 124 to 203 in the genomic DNA of SEQ ID NO:29;
A primer set designed to flank the deletion of bases 247 to 340 in the genomic DNA of SEQ ID NO:31;
A primer set designed to flank the deletion of bases 171 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:33;
A primer set designed to flank the deletion of bases from positions 198 to 342 in the genomic DNA of SEQ ID NO:35;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 197 to 627 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 36 at positions 198 to 342 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 35;
A primer set designed to flank the deletion of bases 176 to 213 in the genomic DNA of SEQ ID NO:37;
A primer set designed to flank the deletion of bases 207 to 315 in the genomic DNA of SEQ ID NO:39;
A primer set designed to flank the deletion of bases 278 to 432 in the genomic DNA of SEQ ID NO:41;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 276 to 293 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 42 at positions 278 to 432 of the genomic DNA of SEQ ID NO: 41;
A primer set designed to flank the deletion of bases 603 to 746 in the genomic DNA of SEQ ID NO:43;
A primer set designed to sandwich an insertion of bases from positions 589 to 1011 of a genomic DNA consisting of the base sequence set forth in SEQ ID NO: 44 at positions 603 to 746 of a genomic DNA of SEQ ID NO: 43;
A primer set designed to flank the deletion of bases from positions 473 to 477 in the genomic DNA of SEQ ID NO: 43, and combinations thereof;
The primer set according to claim 12 or 13, which amplifies a DNA fragment of 50 to 1200 bp in the genome of Eustoma grandiflorum.
配列番号17と90%以上の配列同一性を有するプライマー、及び配列番号18と90%以上の配列同一性を有するプライマーを含むプライマーセットからなる群から選択される、請求項12~14のいずれか一項に記載のプライマーセット。 A primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 13 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 14; A primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 15 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 16;
The primer set according to any one of claims 12 to 14, selected from the group consisting of a primer set comprising a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 17 and a primer having 90% or more sequence identity with SEQ ID NO: 18.
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