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JP7581225B2 - Ｃｔｌａ－４遮断剤とｐｄ－１遮断剤とを含む抗癌併用療法 - Google Patents

Ｃｔｌａ－４遮断剤とｐｄ－１遮断剤とを含む抗癌併用療法 Download PDF

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Description

（１）発明の分野
本発明は、ＣＴＬＡ－４遮断剤とＰＤ－１遮断剤とを含む抗がん（以下、癌と表記される）併用（組合せ）療法に関する。特に、本発明は、ＣＴＬＡ－４遮断剤が、低減したエフェクター機能を有する若しくは測定可能なエフェクター機能を全く有さない抗ＣＴＬＡ－４抗体、またはＦｃドメインを欠く抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントであり、そして、ＰＤ－１遮断剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－１抗体フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントである、併用療法に関する。
（２）関連技術の記載
腫瘍免疫療法は、種々の癌適応症の治療においてより重要な役割を担ってきている。細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）およびプログラム死受容体１（ＰＤ－１）のようなＴ細胞上で発現される免疫チェックポイント阻害受容体の抗体遮断を利用した臨床的成功は、癌に対する免疫療法の顕著な進歩を促している。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によるＣＴＬＡ－４またはＰＤ－１の単独療法遮断は、対照ランダム化臨床試験において抗腫瘍応答の増強および有益な臨床結果をもたらしている。
種々の癌を治療するための免疫チェックポイント遮断（免疫チェックポイント阻害）の顕著な特徴は、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＴＬＡ－４抗体とを含む併用療法の臨床的に検証された利点である。益々多くの臨床データが発表されるにつれて、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４併用療法は、いずれか一方のチェックポイント経路のみを標的化する場合と比較して優れた臨床効果をもたらしうることが明らかになりつつある。しかし、抗ＣＴＬＡ－４抗体に関連する免疫関連毒性（ｉｒＡＥ）は、単独療法の場合および抗ＰＤ－１抗体との併用療法の両方において重要である。例えば、商品名ＹＥＲＶＯＹとしてブリストルマイヤーズスクイブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）により販売されており、米国食品医薬品局（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＵＳ ＦＤＡ）により承認されている唯一の抗ＣＴＬＡ－４抗体である抗ＣＴＬＡ－４抗体イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）は、腸、肝臓、皮膚、ホルモン産生腺および／または眼の炎症のような重篤で致命的な免疫媒介性副作用を誘発する可能性があるため、黒枠警告（Ｂｌａｃｋ Ｂｏｘ ｗａｒｎｉｎｇ）の対象となっている。イピリムマブは、進行性腎細胞癌および特定の結腸直腸癌に対する、抗ＰＤ－１抗体ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（商品名ＯＰＤＩＶＯとしてＢｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂにより販売されている）との併用療法としても承認されているが、重大なｉｒＡＥのリスクゆえに、イピリムマブは１ｍｇ／ｋｇの低用量または治療量以下の用量で投与される。併用療法のための治療量以下の用量は、切除不能もしくは転移性黒色腫の場合の３ｍｇ／ｋｇの単独療法用量または黒色腫補助療法の場合の１０ｍｇ／ｋｇの単独療法用量よりも有意に低い（ＹＥＲＶＯＹの添付文書およびラベル（２０１８年７月）を参照されたい）。
ＦＤＡにより承認されている抗ＰＤ１ ｍＡｂであるニボルマブおよびペンブロリズマブは、共にヒト化抗ＰＤ１ ＩｇＧ４カッパ抗体であり、それぞれ、米国特許第８，００８，４４９号および米国特許第８，３５４，５０９号に開示されている。ＩｇＧ４アイソタイプＦｃドメインは、検出可能なエフェクター機能をほとんど有さないものとして一般に認識されている。
イピリムマブはヒト抗ＣＴＬＡ－４ ＩｇＧ１カッパ抗体であり、米国特許第６，９８４，７２０号に開示されている。ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖（ＨＣ）定常ドメインは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に対する高いアフィニティを有すると一般に認識されているＦｃドメインを有し、これは重要なエフェクター機能［例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）］を抗体にもたらす。研究は、Ｆｃエフェクター機能が抗ＣＴＬＡ－４抗体の有効性に必要であることを示している。例えば、Ｉｎｇｒａｍら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１５：３９１２－３９１７（２０１８）は、重鎖Ｆｃドメインとそれに伴うエフェクター機能とを欠く、抗ＣＴＬＡ－４アルパカ重鎖のみの抗体フラグメント（ＶＨＨ）が、抗腫瘍効果を有さないことをマウスモデルにおいて示した。しかし、抗腫瘍効果を分子に回復させることが、エフェクター機能を示すマウスＩｇＧ２重鎖Ｆｃドメインをそれに融合させることにより可能であった。また、Ｓｅｌｂｙら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．１：３２－４２（２０１３）は、エフェクター機能を排除するように突然変異したＦｃドメインに融合または結合した抗ＣＴＬＡ－４抗体が、抗腫瘍活性を示さないことをマウスモデルにおいて示した。Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．；２１０：１６９５－７１０（２０１３）および国際特許出願番号ＷＯ２０１４０８９１１３も参照されたい。
トレメリズマブはヒト抗ＣＴＬＡ－４ヒトＩｇＧ２抗体であり、米国特許第８，４９１，８９５号に開示されている。ヒトＩｇＧ２アイソタイプは、潜在的なエフェクター機能活性を最小化することによりｉｒＡＥを潜在的に低減するために選択された。しかし、Ｖａｒｇａｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３３：６４９－６６３（２０１８）に示されているとおり、トレメリズマブはエフェクター機能を保有しており、Ｂｅｒｔｒａｎｄら，ＢＭＣ Ｍｅｄ．１３：２１１－２１４（２０１５）は、トレメリズマブはイピリムマブより高い用量で投与可能であるが、それはｉｒＡＥ、特に腸および皮膚炎症性免疫媒介性毒性を尚も誘発しうることを示した。Ｒｉｂａｓら，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １２：８７３－９９３（２００７）、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ－Ｍｅｒｃｋら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：５１２－５２０（２０１０）およびＫｏｎｉｔｚｅｒら，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１０：ｅ０１４５６３３（２０１５）（これは、ＩｇＧ１アイソフォームに類似した同等性のＡＤＣＣおよびＡＤＣＰをインビトロで誘導する他のヒトＩｇＧ２抗体を示した）も参照されたい。
イピリムマブのｉｒＡＥを低減する他の試みは、プロテアーゼ切断可能リンカーを介して、抗体の活性抗原結合部位を含む独自のマスキングペプチドに連結されたイピリムマブで構成されるプロボディ（ｐｒｏｂｏｄｙ）であるＢＭＳ－９８６２４９を含む。マスキングペプチドは、正常組織においてＣＴＬＡ－４に結合するイピリムマブの能力を最小化することによりｉｒＡＥを低減しうる［国際特許出願ＷＯ２００９０２５８４６、ＷＯ２０１００８１１７３、ＷＯ２０１８２２２９４９、ＷＯ２０１８０８５５５５、Ｐａｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２９：３４９－３６３（２０１９）、およびＫｏｒｍａｎら，Ａｂｓｔｒａｃｔ ＳＹ０９－０１，ＡＡＣＲ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｖｏｌ ７７，ｉｓｓｕｅ １３（２０１７）を参照されたい］。
イピリムマブのような抗ＣＴＬＡ－４抗体の治療効果が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の減少を伴いうることを示唆する研究を考慮して、増強したＡＤＣＣ活性を有するイピリムマブのような抗ＣＴＬＡ－４抗体が現在の抗体より有効な抗腫瘍活性をもたらすと、提示されている。米国特許第１０，１９６，４４５号は、増強したＡＤＣＣ活性を有する幾つかのイピリムマブ変異体を開示している。
幾つかの抗癌療法の標準治療は、化学療法と組み合わされた抗ＰＤ－１抗体を供与することを含む。抗ＣＴＬＡ－４抗体の抗腫瘍活性は、これらの療法の有効性を更に増強しうる；しかし、胃腸毒性は化学療法中に見られる最も一般的に遭遇する副作用の１つであるため、抗ＣＴＬＡ－４抗体を療法に加えることは胃腸毒性を悪化させる可能性がある。
明らかに、関連ｉｒＡＥ、特に、現在の抗ＣＴＬＡ－４抗体に関連した皮膚および腸炎症性免疫媒介性毒性を伴うことなく、より高い、より最適なレベルでの投与を可能にした抗ＣＴＬＡ－４抗体は、抗ＰＤ－１アンタゴニスト、および、所望により化学療法と組み合わされたより有効な治療を可能にする可能性が高いであろう。
発明の簡潔な概要
本発明者らは、ＣＴＬＡ－４に結合する特定のＣＴＬＡ－４遮断剤が、単独療法として投与された場合には低減した抗腫瘍活性を有するか又は測定可能な抗腫瘍活性を全く有さないが、ＰＤ－１遮断剤との併用療法で使用された場合には臨床的に適切な抗腫瘍活性を示しうることを見出した。本発明者らはまた、これらの特定のＣＴＬＡ－４遮断剤が、現在承認されているＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法に関連づけられている免疫媒介性副作用（ｉｒＡＥ）（皮膚および腸におけるｉｒＡＥを含む）を誘発することなく、ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法において抗腫瘍活性をもたらしうることを見出した。本明細書に開示されているＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断の組合せは、化学療法を含む併用療法を含んでいる現在のＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法より高い治療指数の療法を可能にし、これは、患者の臨床結果の改善を伴う、より有効な癌治療をもたらしうる。
本発明のＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法の一部として使用される特定のＣＴＬＡ－４遮断剤は、（ｉ）エフェクター－サイレント（ｅｆｆｅｃｔｏｒ－ｓｉｌｅｎｔ（エフェクター無効化））抗ＣＴＬＡ－４抗体、および（ｉｉ）結晶化可能フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）（Ｆｃ）ドメインを欠くエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメント、またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合するＦｃドメインにおけるその領域の欠失を含むＦｃドメインを有するエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されうる。エフェクター－サイレント抗体または抗体フラグメントは、（ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅ（ビアコア）アッセイで測定可能である、１以上のＦｃＲへの測定可能な結合を示さない（ここで、マイクロモル範囲の会合定数は、測定可能な結合を示さない）、または（ｉｉ）同じアイソタイプの抗体に典型的である結合と比較して低減したＢｉａｃｏｒｅアッセイで測定可能な１以上のＦｃＲへの測定可能な結合を示す。これらの特定のＣＴＬＡ－４遮断剤は、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤である。
特定の実施形態において、これらのエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、抗癌単独療法においては測定可能な抗腫瘍活性を示さないかもしれないが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１遮断剤との併用抗癌療法においては、ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法に典型的に関連するｉｒＡＥ、特に、皮膚または腸炎症性免疫関連毒性を示すことなく、測定可能な抗腫瘍活性を示すであろう。
本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１遮断剤と組み合わされて、ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法に典型的に関連するｉｒＡＥ、特に、皮膚または腸炎症性免疫関連毒性を示すことなく、より高い用量で、かつ、より長期にわたって使用されうる。現在、抗ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法における使用に関して承認されている抗ＣＴＬＡ－４抗体イピリムマブの用量は１ｍｇ／ｋｇであり、一方、単独療法における使用に関して承認されているのは３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ用量であり［Ｐａｃｋａｇｅ Ｉｎｓｅｒｔ ａｎｄ Ｌａｂｅｌ ｆｏｒ ＹＥＲＶＯＹ（Ｊｕｌｙ ２０１８）を参照されたい］、あるいは、国際特許出願ＷＯ２０１８１８３４０８におけるＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法に想定されているのは１００ｍｇ以下の一定用量である。したがって、本発明のＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法は、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントを、単独療法において抗ＣＴＬＡ－４抗体に関して現在承認されている用量と同じ又はそれより高い用量で使用することが可能である。本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントはまた、ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法において現在使用または想定されているものと同様の用量で、しかも、抗ＣＴＬＡ－４抗体で現在達成可能な時間より長い持続期間にわたって、そして、ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断併用療法に典型的に関連するｉｒＡＥ、特に、皮膚または腸炎症性免疫関連毒性を示すことなく、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用されうる。
したがって、本発明は、癌治療を要する個体における癌を治療するための併用療法を提供し、該方法は、（ｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１遮断剤の治療量、および（ｉｉ）エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤の治療量を、癌を有する個体に投与して癌を治療することを含み、ここで、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１遮断剤を伴わない単独療法において個体に投与された場合にはそれが示さない抗腫瘍活性を、併用療法においては示す。他の実施形態において、併用療法は、エフェクター機能を示す抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む併用療法と比較して、有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０における定義でグレード（Ｇｒａｄｅ）２より大きな、併用療法の経過中の腸または皮膚における免疫媒介性副作用（ｉｒＡＥ）を誘発せず、またはそれを誘発するリスクを低減する。特定の実施形態において、併用療法の一部として使用されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、併用療法の少なくとも最初の１０週間にわたり、グレード２より大きな皮膚または腸におけるｉｒＡＥを誘発しない。特定の実施形態において、併用療法は、併用療法の少なくとも最初の４週間にわたり検出可能なｉｒＡＥをもたらさず、あるいは、併用療法の少なくとも最初の４週間にわたりグレード１より大きなｉｒＡＥをもたらさない。
１つの実施形態において、本明細書に記載されている併用療法の一部として使用されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントである。
もう１つの実施形態において、本明細書に記載されている併用療法の一部として使用されるＰＤ－１遮断剤は、抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体をエフェクター－サイレントにする、Ｆｃドメイン内の１以上の突然変異を含むＨＣドメインを含む。ＰＤ－１遮断剤は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントであってもよく、それらのそれぞれは、Ｆｃドメインをまたは１以上のＦｃＲに結合するＦｃドメインの領域を欠いており、このことは抗体フラグメントをエフェクター－サイレントにする。
本発明は更に、（ｉ）ＩｇＧ４またはＩｇＧ２ Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ－１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体およびエフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体フラグメントからなる群から選択されるＰＤ－１遮断剤を含む第１製剤、ならびに、（ｉｉ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤を含む第２製剤を、癌治療を要する個体に投与することを含む、抗癌併用療法を提供する。
本発明は更に、（ｉ）ＩｇＧ４またはＩｇＧ２ Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ－１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体およびエフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体フラグメントからなる群から選択されるＰＤ－１遮断剤と、（ｉｉ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤と、を含む製剤を、癌治療を要する個体に投与することを含む、抗癌併用療法を提供する。
本発明は更に、（ｉ）ＩｇＧ４またはＩｇＧ２ Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体およびエフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントからなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１遮断剤を含む第１製剤、ならびに、（ｉｉ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤を含む第２製剤を、癌治療を要する個体に投与することを含む、抗癌併用療法を提供する。
本発明は更に、（ｉ）ＩｇＧ４またはＩｇＧ２ Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体およびエフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントからなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１遮断剤と、（ｉｉ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤と、を含む製剤を、癌治療を要する個体に投与することを含む、抗癌併用療法を提供する。
併用療法のより詳細な実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
併用療法の特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
併用療法の特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
併用療法のもう１つの実施形態において、Ｆｃドメインを欠くエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）または抗原結合性フラグメント二量体Ｆ（ａｂ’）２であり、あるいは一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）または抗原結合性フラグメント二量体Ｆ（ａｂ’）２を含む。
併用療法の特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＲＥＧＮ４６５９、ＡＧＥＮ１８８４ｗ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５－変異体１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７および８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１からなる群から選択される抗ＣＴＬＡ－４抗体の、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲを含む。
併用療法の特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、イピリムマブのＶＨおよびＶＬ、トレメリムマブのＶＨおよびＶＬ、ＲＥＧＮ４６５９のＶＨおよびＶＬ、ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５のＶＨおよびＶＬ－変異体１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７のＶＨおよびＶＬ、または、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１のＶＨおよびＶＬを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬ、（ｉｉ）配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬ、（ｉｉｉ）配列番号９５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号９６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬ、または、（ｉｖ）配列番号９７に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号９８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉ）配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉｉ）配列番号７７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｖ）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖ）配列番号８１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉ）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉ）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉｉ）配列番号８７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｘ）配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｘ）配列番号９１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または、（ｘｉ）配列番号９３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
併用療法の他の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、表４～１８に開示されているエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択されるエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体である。
併用療法の他の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４結合剤は、１以上の免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）を含み各ＩＳＶＤがラクダ重鎖のみの抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含むエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントであり；但し、ＩＳＶＤはいずれも、アミノ配列ＦＹＧＭＧ（配列番号６９）を含むＣＤＲ１、アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０）を含むＣＤＲ２およびアミノ酸ＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７１）またはＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７２）を含むＣＤＲ３を有するＶＨＨを含まず（それらのＩＳＶＤは国際特許出願ＷＯ２００８０７１４４７、ＷＯ２０１７０８７５８７およびＷＯ２０１７０８７５８８に開示されている）、また、ＷＯ２００８０７１４４７に開示されているＣＤＲ３における１、２または３個の突然変異を含むＶＨＨを含まず；例外的に、前記の１以上のＩＳＶＤがエフェクター－サイレント異種ＨＣドメインまたはＦｃドメイン（例えば、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗体ＨＣドメインまたはＦｃドメインのいずれかを含む）に融合または連結されている実施形態におけるＣＤＲを含むＩＳＶＤは、この但し書きによっては除外されない。
併用療法の特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、ペンブロリズマブ、ニボルマブまたはセミプリマブ－ｒｗｌｃの３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの軽鎖ＣＤＲを含む。併用療法の特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）ペンブロリズマブのＶＨおよびＶＬ、（ｉｉ）ニボルマブのＶＨおよびＶＬ、または（ｉｉｉ）セミプリマブ－ｒｗｌｃのＶＨおよびＶＬを含む。
他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または（ｉｉｉ）配列番号９９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１００に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。もう１つの実施形態において、抗ＰＤ１抗体は、（ｉ）配列番号２７に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣおよび配列番号２８に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ、（ｉｉ）配列番号２５に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣおよび配列番号２６に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ、または（ｉｉｉ）配列番号１０１に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣおよび配列番号１０２に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣを含む。
併用療法の特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、（ｉ）アテゾリズマブのＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｉ）アベルマブのＶＨおよびＶＬドメイン、または（ｉｉｉ）デュルバルマブのＶＨおよびＶＬドメインを含む。
他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉ）配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｉｉｉ）配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
併用療法の特定の実施形態において、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に開示されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含むことが可能であり、これらはＣ末端リジンを含むことが可能であり、あるいは、Ｃ－末端リジンまたはＣ末端グリシン－リジンジペプチドを欠いていることが可能である。
併用療法の特定の実施形態において、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、（ｉ）ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、（ｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、もしくはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換突然変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｖ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓアミノ酸置換を含むＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｖ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換とＮ２６７Ａ、Ｐ３２９ＧもしくはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａアミノ酸置換とを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、アミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、表１９～２７に開示されている抗ＰＤ－１抗体から選択される抗ＰＤ－１抗体、または表２８～３６に開示されているＰＤ－Ｌ１抗体から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
併用療法のもう１つの実施形態において、Ｆｃドメインをそれぞれが欠いている抗ＰＤ－１抗体フラグメントまたは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）または抗原結合性フラグメント二量体Ｆ（ａｂ’）２である。
併用療法のもう１つの実施形態において、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、１以上のＩＳＶＤを含み、各ＩＳＶＤはラクダ重鎖のみの抗体のＶＨＨを含む。
併用療法の特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇのＣＴＬＡ－４遮断剤を含む用量または個体の体重に左右されず約１００ｍｇを超えるＣＴＬＡ－４遮断剤の一定用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇのＣＴＬＡ－４遮断剤を含む用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、３ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇのＣＴＬＡ－４遮断剤を含む用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、約１０ｍｇ／ｋｇを超えるＣＴＬＡ－４遮断剤を含む用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、約２もしくは３ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上を含む用量または個体の体重に左右されず約２００ｍｇ以上である一定用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、個体の体重に左右されない２００ｍｇ～４００ｍｇの用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、個体の体重に左右されない４００ｍｇの用量で投与される。
併用療法の特定の実施形態において、最初にＰＤ－１遮断剤が個体に投与され、そして、二番目にＣＴＬＡ－４遮断剤が個体に投与され、あるいは、最初にＣＴＬＡ－４遮断剤が個体に投与され、そして、二番目にＰＤ－１遮断剤が個体に投与される。特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤およびＣＴＬＡ－４遮断剤が同時に投与される。
併用療法の特定の実施形態において、個体は、併用療法の前、それと同時またはその後に化学療法剤を投与される。特定の実施形態において、化学療法剤は、アクチノマイシン、全トランス－レチノイン酸、アリトレチノイン、アザシチジン、アザチオプリン、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルモフル、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロランブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イマチニブ、イクサベピロン、イリノテカン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ニトロソウレア、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ロミデプシン、テガフール、テモゾロミド（経口ダカルバジン）、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、ウチデロン、バルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビンおよびボリノスタットからなる群から選択される。
併用療法の特定の実施形態において、癌は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌または唾液腺癌である。
併用療法の特定の実施形態において、癌は、膵臓癌、気管支癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭癌、肝癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である。
併用療法の特定の実施形態において、個体はヒトであり、ＣＴＬＡ－４遮断剤はヒトＣＴＬＡ－４に結合し、ＰＤ－１遮断剤はヒトＰＤ－１に結合し、そして、ＰＤ－Ｌ１遮断剤はヒトＰＤ－Ｌ１に結合する。
抗体および組成物
本発明は更に、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントを提供し、それぞれがＶＨおよびＶＬを含み、ここで、ＶＨは３つの重鎖ＣＤＲを含み、ＶＬは３つの軽鎖ＣＤＲを含み、それらは一緒になってＣＴＬＡ－４に結合する。特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４はヒトＣＴＬＡ－４である。
より詳細な実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン（ただし、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、Ｎ２９７Ａ置換のみからなるイピリムマブを含まない）、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９ＧおよびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を有し、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＲＥＧＮ４６５９、ＡＧＥＮ１８８４ｗ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５および８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７からなる群から選択される抗ＣＴＬＡ－４抗体の、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、イピリムマブのＶＨおよびＶＬ、トレメリムマブのＶＨおよびＶＬ、ＲＥＧＮ４６５９のＶＨおよびＶＬ、ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５のＶＨおよびＶＬ、または、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７のＶＨおよびＶＬを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５－変異体１のＶＨおよびＶＬ、または８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１のＶＨおよびＶＬを含む。これらの変異体は、ＶＨアミノ酸配列における１８位のメチオニンの、イソロイシンによる置換を含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体または抗エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号７に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉｉ）配列番号９５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号９６に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または（ｉｖ）配列番号９７に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号９８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７４に記載されているアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉｉ）配列番号７７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｖ）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖ）配列番号８１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉ）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉ）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉｉ）配列番号８７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｘ）配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｘ）配列番号９１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または、（ｘｉ）配列番号９３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される。
もう１つの実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、１以上の免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）を含み、各ＩＳＶＤはラクダ重鎖のみの抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含み；但し、ＩＳＶＤは、いずれもアミノ配列ＦＹＧＭＧ（配列番号６９）を含むＣＤＲ１、アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０）を含むＣＤＲ２およびアミノ酸ＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７１）またはＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７２）を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨを含まず（それらのＩＳＶＤは国際特許出願ＷＯ２００８０７１４４７、ＷＯ２０１７０８７５８７およびＷＯ２０１７０８７５８８に開示されている）、または、ＷＯ２００８０７１４４７に開示されているＣＤＲ３における１、２または３個の突然変異を含むＶＨＨを含まず；例外的に、前記の１以上のＩＳＶＤがエフェクター－サイレント異種ＨＣドメインまたはＦｃドメイン（例えば、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗体ＨＣドメインまたはＦｃドメインのいずれかを含む）に融合または連結されている実施形態におけるＣＤＲを含むＩＳＶＤは、この但し書きによっては除外されない。
本発明は更に、表４～１８に開示されているエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体のそれぞれを提供し；但し、該エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、Ｎ２９７Ａ置換のみからなるイピリムマブを含まない。
本発明は更に、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
本発明は更に、
（ａ）重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）［ここで、（ｉ）ＶＨはペンブロリズマブの少なくとも３つのＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＶＬはペンブロリズマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、（ｉｉ）ＶＨはニボルマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、ＶＬはニボルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、または、（ｉｉｉ）ＶＨはセミプリマブ－ｒｗｌｃの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、ＶＬはセミプリマブ－ｒｗｌｃの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含む］、ならびに
（ｂ）（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、もしくはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓアミノ酸置換を含むＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換と、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａアミノ酸置換と、を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、
を含む抗ＰＤ－１抗体を提供し、ここで、アミノ酸位置はＥｕ番号付けに従い特定される。
前記の抗ＰＤ－１抗体の更に他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または、（ｉｉｉ）配列番号９９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１００に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
抗ＰＤ－１抗体の特定の実施形態において、本明細書に開示されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインは更に、Ｃ末端リジンを含むか、またはＣ末端リジンもしくはＣ末端グリシン－リジンジペプチドのいずれかを欠くことが可能である。
本発明は更に、重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む抗ＰＤ－１抗体フラグメントを提供し、ここで、（ｉ）ＶＨはペンブロリズマブの少なくとも３つのＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、そして、ＶＬはペンブロリズマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、（ｉｉ）ＶＨはニボルマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはニボルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、または（ｉｉｉ）ＶＨはセミプリマブ－ｒｗｌｃの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはセミプリマブ－ｒｗｌｃの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含む。
抗ＰＤ－１抗体フラグメントの更に他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または、（ｉｉｉ）配列番号９９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１００に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
前記の抗ＰＤ－１抗体フラグメントの特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される。
本発明は更に、表１９～２７に開示されている抗ＰＤ－１抗体のそれぞれを提供する。
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
本発明は更に、
（ａ）重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）［ここで、（ｉ）ＶＨはデュルバルマブの少なくとも３つのＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、そして、ＶＬはデュルバルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、（ｉｉ）ＶＨはアベルマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはアベルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、または、（ｉｉｉ）ＶＨはアテゾリズマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはアテゾリズマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含む］、ならびに
（ｂ）（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、もしくはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓアミノ酸置換を含むＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｖ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換と、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａアミノ酸置換と、を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、
を含む抗ＰＤ－１抗体を提供し、ここで、アミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定され、ただし、ＶＨおよびＶＬがそれぞれ配列番号１０７および配列番号１０８のアミノ酸配列を有する場合には、重鎖（ＨＣ）定常ドメインは、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍの置換組合せを有するＩｇＧ１アイソタイプではなく、あるいは、ＶＨおよびＶＬがそれぞれ配列番号１０３および配列番号１０４のアミノ酸配列を有する場合には、ＨＣ定常ドメインは、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍの置換組合せを有するＩｇＧ１アイソタイプではない。
前記の抗ＰＤ－Ｌ１抗体の更に他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、（ｉ）配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または、（ｉｉｉ）配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体の特定の実施形態において、本明細書に開示されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインは更に、Ｃ末端リジンを含むか、または、Ｃ末端リジンもしくはＣ末端グリシン－リジンジペプチドのいずれかを欠くことが可能である。
本発明は更に、重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントを提供し、ここで、（ｉ）ＶＨはデュルバルマブの少なくとも３つのＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、そして、ＶＬはデュルバルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、（ｉｉ）ＶＨはアベルマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはアベルマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含み、または、（ｉｉｉ）ＶＨはアテゾリズマブの少なくとも３つのＨＣ－ＣＤＲを含み、そして、ＶＬはアテゾリズマブの少なくとも３つのＬＣ－ＣＤＲを含む。
更に他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、（ｉｉ）配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬ、または、（ｉｉｉ）配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
前記の抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントの特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される。
本発明は更に、表２８～３６に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体のそれぞれを提供し、ただし、ＶＨおよびＶＬがそれぞれ配列番号１０７および配列番号１０８のアミノ酸配列を有する場合には、重鎖（ＨＣ）定常ドメインは、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍの置換組合せを有するＩｇＧ１アイソタイプではなく、あるいは、ＶＨおよびＶＬがそれぞれ配列番号１０３および配列番号１０４のアミノ酸配列を有する場合には、ＨＣ定常ドメインは、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍの置換組合せを有するＩｇＧ１アイソタイプではない。
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
本発明は更に、（ｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体および本明細書に開示されている抗ＰＤ－１抗体および薬学的に許容される担体を含む、または、（ｉｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体および本明細書に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体および薬学的に許容される担体を含む、組成物を提供する。
本発明は更に、（ｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントおよび本明細書に開示されている抗ＰＤ－１抗体および薬学的に許容される担体を含む、または、（ｉｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントおよび本明細書に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体および薬学的に許容される担体を含む、組成物を提供する。
本発明は更に、（ｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントおよび本明細書に開示されている抗ＰＤ－１抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、または、（ｉｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントおよび本明細書に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、組成物を提供する。
本発明は更に、（ｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体および本明細書に開示されている抗ＰＤ－１抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、または、（ｉｉ）本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体および本明細書に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、組成物を提供する。
本発明は更に、個体における癌の治療のためのまたは個体における癌の治療用医薬の製造のための、本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体または組成物のいずれかを提供する。
本発明は更に、個体における癌の治療のためのまたは個体における癌の治療用医薬の製造のための、本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントまたは組成物のいずれかを提供する。
特定の実施形態において、癌は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌または唾液腺癌である。
特定の実施形態において、癌は、膵臓癌、気管支癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭癌、肝癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である。
図１Ａ～１Ｅ：ＣＴＬＡ－４遮断媒介性大腸炎はＦｃ依存性である。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、示されているとおりに、抗体で週２回、５５日間処置した。図１Ａ：Ｆｃコンピテント（ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）抗ＣＴＬＡ－４抗体（α－ＣＴＬＡ４）またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体の投与の後の腸炎症遺伝子発現プロファイリングは、Ｄ２６５Ａ置換（α－ＣＴＬＡ４（Ｄ２６５Ｓ））を有する。７週間にわたる週２回の処置の後、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による腸炎症マーカーの評価のために、近位小腸を収集した。アイソタイプ対照処置と比較した場合のそれらの２つの抗体に関する腸炎症遺伝子の発現の変化倍数のヒートマップが示されている。複数のパネルにおいて発現を分析し、各パネル内でサイクル閾値データをユビキチンに対して正規化した。複数のパネルの一部として分析された遺伝子からの正規化データを平均化した後、アイソタイプ対照に対する変化倍数を決定した。図１Ｂ：実験期間中の体重減少。図１Ｃ：第４９日および第５０日に血清中のＦＩＴＣ－デキストラン蛍光を測定することにより、腸透過性を評価した。図１Ｄ：相対的腸炎症および大腸炎重症度に関する組織学的所見が認定病理医によって検査され、スコア化された。図１Ｅ：第５５日からの結腸のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色組織切片の代表的な顕微鏡写真。 図２Ａ～２Ｅ：ＣＴＬＡ－４ ＩＳＶＤ（ｎＡｂ）の特徴づけ。図２Ａ：エフェクター－サイレントＣＴＬＡ４ ＩＳＶＤ（ＣＴＬＡ４ ｎＡｂ）とエフェクターコンピテントα－ＣＴＬＡ４との比較。図２Ｂ：脾臓活性化Ｔ細胞を、示されているとおりに、ＣＬＴＡ４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ４の存在下、３日間培養した。増殖（図２Ｃ）、ＩＦＮγの産生（図２Ｄ）およびＩＬ－２の産生（図２２Ｅ）を測定し、アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ２ａ）に対する変化倍数としてプロットした。データは２～３回の独立した実験の代表例である。 図３Ａ～３Ｄ：抗ＰＤ－１抗体（α－ＰＤ１）と組合されたＣＴＬＡ４ ｎＡｂは強力な抗腫瘍効果を有する。図３Ａ：腫瘍が１００ｍｍ３（範囲７８～１２５ｍｍ３）の平均サイズに達したら、示されている抗体（α－ＣＴＬＡ４、α－ＰＤ１α－ＣＴＬＡ４（Ｄ２６５Ａ））を２０ｍｐｋで、および／またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂを３０ｍｐｋで、ＣＴ２６腫瘍担持マウスに４日ごとに５用量投与した。データは３２日間にわたる平均腫瘍体積を示す。結果は２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス１０匹／群）。図３Ｂ：示されているとおりの処置後第１日の腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞／Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ比。結果は２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス７匹／群）。図３Ｃおよび図３Ｄ：処置後第８日の全腫瘍からの遺伝子発現プロファイル。結果は１つまたは２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス５匹／群）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（独立ｔ検定）。エラーバー±ＳＥＭ。図３Ｅ：アイソタイプ対照と比較した場合の各処置群に関する個々の動物腫瘍体積を示す。第３９日までの完全奏効（ＣＲ）が応答性処置群に関して示されている。データは、ｎ＝マウス１０匹／群の場合の２つの独立した実験の代表例である。 図４Ａ～４Ｄ：抗ＣＴＬＡ－４抗体媒介性大腸炎はＦｃ依存性である。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、示されているとおりに、抗体（α－ＣＴＬＡ４、α－ＰＤ１、α－ＣＴＬＡ４（Ｄ２６５Ａ））のみで、またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂと組み合わせて、週２回、５５日間処置した。図４Ａ：実験期間中の体重減少。図４Ｂ：第５５日における近位空腸における腸炎の組織学的評価。図４Ｃ：結腸のＨ＆Ｅ染色組織切片の顕微鏡写真。図４Ｄ：アイソタイプ対照処置と比較した場合の、示されているサンプルに関する腸炎症遺伝子の発現の変化倍数のヒートマップを示す。複数のパネルにおいて発現を分析し、各パネル内でサイクル閾値データをユビキチンに対して正規化した。複数のパネルの一部として分析された遺伝子からの正規化データを平均化した後、アイソタイプ対照に対する変化倍数を決定した。 図５Ａ～５Ｃ：Ｆｃエフェクター機能性抗ＣＴＬＡ－４は皮膚炎症を誘発するが、系炎症を誘発しない。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、示されているとおりに、α－ＣＴＬＡ４またはα－ＣＴＬＡ４（Ｄ２６５Ａ）で、週２回、５５日間処置した。図５Ａ：耳皮膚のＨ＆Ｅ染色組織切片の顕微鏡写真。図５Ｂ：耳皮膚ＩＬ－１７産生Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞および好中球の絶対数をフローサイトメトリーにより測定した。図５Ｃ：腎臓（上パネル）、肝臓（中央パネル）および肺（下パネル）のＨ＆Ｅ染色組織切片の顕微鏡写真。結果は、２つの独立した実験のうちの１つを表している（ｎ＝マウス４～８匹／群）。スケールバーは１００μｍを表す。エラーバー±ＳＥＭ。 図６Ａ～６Ｄ：Ｆｃ充足抗ＣＴＬＡ－４抗体は結腸Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇを枯渇させない。図６Ａ：示されている器官におけるＣＴ２６腫瘍担持マウスにおける細胞内ＣＴＬＡ－４染色。図６Ｂ：Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞におけるＣＴＬＡ－４の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（対応ｔ検定）。図６Ｃおよび図６Ｄ：示されているとおりに処置された２４時間後の結腸粘膜固有層およびＣＴ２６腫瘍浸潤性Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇの代表的なドットプロットおよび統計。データは２～４つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス４～１２匹／群）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（独立ｔ検定）。エラーバー±ＳＥＭ。 図７Ａ～７Ｄ：Ｆｃ機能は、抗ＣＴＬＡ－４阻害Ｔｒｅｇ媒介性大腸炎抑制において、腸に関与した。脾臓ＣＤ４５ＲｂｈｉｇｈナイーブＴ細胞をＣＢ１７－ＳＣＩＤレシピエントマウスに導入し、示されているとおりにα－ＣＴＬＡ４またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂで処置した。図７Ａ：実験期間中の体重減少。図７Ｂ：結腸のＨ＆Ｅ染色組織切片の顕微鏡写真。図７Ｃ：第４７日の病理学的スコア（ｎ＝マウス１４～１８匹／群）。図７Ｄ：ナイーブＴ細胞移植後第４７日における結腸全体の遺伝子発現プロファイル（ｎ＝マウス６匹／群）。データは２つの独立した実験のうちの１つを表す。Ｎｓ＝非有意。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１（独立ｔ検定）。エラーバー±ＳＥＭ。 図８Ａ～８Ｅ：ＦｃγＲ結合およびＣＴＬＡ－４遮断は結腸マクロファージを活性化する。図８Ａおよび図８Ｂ：ＣＴ２６担持マウスの脾臓、結腸粘膜固有層および腫瘍から単離されたマクロファージ上のＣＤ１６／ＣＤ３２表面発現をフローサイトメトリーにより評価した。図８Ｃ：ＣＴ２６担持マウスの脾臓、結腸粘膜固有層および腫瘍におけるマクロファージ（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｆ４／８０＋）の割合をフローサイトメトリーにより評価した。図８Ｄ：α－ＣＴＬＡ４、α－ＣＴＬＡ４（Ｄ２６５Ａ）またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂで処置されたマウスの結腸からのＩｌ１ｂ、Ｔｎｆα、ＩｆｎγおよびＳｔａｔ１ ｍＲＮＡ発現を処置後第０日、第１０日および第１８日に評価した。データは２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス８～１０匹／群）。ｎｓ＝非有意、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（対応ｔ検定）。エラーバー±ＳＥＭ。図８Ｅ：結腸粘膜固有層ＩＬ－１７産生ＣＤ４＋ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ ＴＣＲｂ＋ ＣＤ４＋ ＣＤ８ａ－ ＩＬ－１７Ａ＋）の割合、ＩＦＮγ産生ＣＤ８ａ＋ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ ＴＣＲｂ＋ ＣＤ４－ ＣＤ８ａ＋ ＩＦＮγ＋）の絶対数および好中球（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｌｙ６Ｇｈｉｇｈ）をフローサイトメトリーにより測定した。結果は２つの独立した実験のうちの１つを表す（ｎ＝マウス４～８匹／群）。＊＊ｐ＜０．０１（独立ｔ検定）。スケールバーは１００μｍ エラーバー±ＳＥＭを表す。 図９Ａ～９Ｂ：マウス同系ＭＢ４９膀胱腫瘍モデル研究における抗腫瘍効果。図９Ａ：腫瘍が１０２ｍｍ３（８７～１１７ｍｍ３の範囲）の平均サイズに達したら、示されている抗体の用量（３０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ、１０ｍｇ／ｋｇ α－ＣＴＬＡ４、５ｍｇ／ｋｇ α－ＰＤ１、またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂとα－ＰＤ－１との組合せ）をＭＢ４９腫瘍担持マウスに４日ごとに４用量投与した。データは２１日間にわたる平均腫瘍体積を示す。結果は２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス１０匹／群）。図９Ｂ：各処置群に関する個々の動物の腫瘍体積を示す。第２１日までの完全奏効（ＣＲ）が応答性処置群に関して示されている。データはｎ＝マウス１０匹／群の実験の結果を示す。 図１０Ａ～１０Ｂ：マウス同系ＭＣ３８結腸腫瘍モデル研究における抗腫瘍効果。図１０Ａ：腫瘍が２２０ｍｍ３（範囲１７９～２６１ｍｍ３）の平均サイズに達したら、示されている抗体の用量（３０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ、１０ｍｇ／ｋｇ α－ＣＴＬＡ４、５ｍｇ／ｋｇ α－ＰＤ１、またはＣＴＬＡ４ ｎＡｂとα－ＰＤ－１との組合せ）をＭＣ３８腫瘍担持マウスに４日ごとに４用量投与した。データは２３日間にわたる平均腫瘍体積を示す。結果は２つの独立した実験の代表例である（ｎ＝マウス１０匹／群）。図１０Ｂ：各処置群に関する個々の動物の腫瘍体積を示す。第２３日までの完全奏効（ＣＲ）が応答性処置群に関して示されている。データはｎ＝マウス１０匹／群の実験の結果を示す。 図１１：エフェクター細胞による腸炎症の誘発。腸炎症のＦｃ媒介性誘発がＴｒｅｇ枯渇には無関係にエフェクターＴ細胞により誘導されうることを例示するカートーン。
発明の詳細な説明
定義
本明細書中で用いる「有害事象」または「ＡＥ」は、ヒト個体における医学的治療または行為の実施による医学的治療の実施に一時的に関連しているいずれかの好ましくなく意図しない兆候（異常な検査所見を含む）、症状または疾患（これらは医学的治療または行為に関連しているとみなされてもみなされなくてもよい）として、米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）により２０１７年１１月２７日付で公開された有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０に記載されている。ＡＥは、医学的考証および科学的分析に使用される特定の事象を一意的に表す用語である。医学的治療は１以上の関連ＡＥを有する可能性があり、各ＡＥは、同じまたは異なる重症度を有しうる。ＡＥの重症度にはグレード（Ｇｒａｄｅ）が割り当てられる。ＣＴＣＡＥは、この一般的な指針に基づいて、各ＡＥに関する重症度の特有の臨床的説明と共に、グレード１～５を示している。グレード１：軽度、または無症候性または軽度の症状、臨床的または診断的観察のみ、あるいは介入が適応とならない。グレード２：中等度または最小限の、局所的または非侵襲的介入が適応となる、あるいは、年齢に適した手段的日常生活動作（ＡＤＬ）が制限される。グレード３：重度、または医学的に重大であるが、直ちに生命を脅かすわけではない、あるいは入院または入院延長が適応となる、身体障害となる、セルフケア（ＡＤＬ）が制限される。グレード４：生命を脅かす結果、または緊急の介入が適応となる。グレード５：ＡＥに関連した死亡。
本明細書中で用いる「抗体」は、（ａ）ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）、または（ｂ）ラクダ抗体の種の場合には、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重鎖（ＨＣ）を含む糖タンパク質を意味する。各ＨＣは、重鎖可変領域またはドメイン（ＶＨ）と重鎖定常領域またはドメインとから構成される。天然に存在する特定のＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡ抗体においては、重鎖定常領域は３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。一般に、抗体の基本的な抗体構造単位は、２つのＨＣ／ＬＣペアを含む四量体であり、ただし、ラクダ抗体の種は２つのＨＣのみを含み、この場合、構造単位はホモ二量体である。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つのＬＣ（約２５ｋＤａ）およびＨＣ鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。
天然に存在する特定の抗体においては、各軽鎖は、ＬＣ可変領域またはドメイン（ＶＬ）とＬＣ定常ドメインとから構成される。ＬＣ定常ドメインは１つのドメインＣＬから構成される。ヒトＶＨは６個のファミリーメンバー、すなわち、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６を含み、ヒトＶＬは１６個のファミリーメンバー、すなわち、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０を含む。これらのファミリーメンバーのそれぞれは、特定のサブタイプに更に分けられうる。ＶＨおよびＶＬドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分可能であり、それらのなかに、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が散在している。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲ領域と４つのＦＲ領域とから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用するＣＤＲを含む結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合をもたらしうる。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら，（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に従う。
典型的には、重鎖定常ドメインにおけるアミノ酸の番号付けは番号１１８から開始し、これはＥｕ番号付けスキームに従うものである。Ｅｕ番号付けスキームはヒトＩｇＧ１（Ｅｕ）のアミノ酸配列に基づいており、これは、Ｅｄｅｌｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．６３：７８－８５（１９６９）に記載されているＩｇＧ１のアミノ酸配列の１１８位から開始する定常ドメインを有し、Ｂｅｒａｎｇｅｒら編，Ｇｉｎｅｔｏｕｘ，Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ Ｃ－ＤＯＭＡＩＮ，ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｅｘｏｎ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ，ｔｈｅ Ｅｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇｓ：Ｈｕｍａｎ ＩＧＨＧ，作成日１７／０５／２００１，バージョン：０８／０６／２０１６（これはｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ＃ｒにおいてアクセス可能である）に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４定常ドメインに関して示されている。
一般に、抗体のＶＨ／ＶＬペアは６つのＣＤＲ（ＶＨ上の３つのＣＤＲおよびＶＬ上の３つのＣＤＲ）を含むが、最先端技術は、ほとんどの場合、重鎖のＣＤＲ３領域が抗体特異性の主要決定因子であると認識しており、重鎖のＣＤＲ３のみに基づく特異的抗体生成の例が当技術分野で公知である（例えば、Ｂｅｉｂｏｅｒら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－８４９（２０００）；Ｋｌｉｍｋａら，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８３：２５２－２６０（２０００）；Ｒａｄｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５（１９９８）；Ｘｕら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００））。Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）（抗体のＣＤＲ領域を配列により定めている）を参照されたい。また、Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（抗体のＣＤＲ領域を構造により定めている）を参照されたい。
抗体が結合する抗原におけるエピトープを含むアミノ酸と特異的に相互作用するアミノ酸を含む抗体配列におけるＣＤＲを特定するためには、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ（Ａｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ教授のグループ）に開示され、以下の表に再掲されている以下の一般則が用いられうる。これらの一般的に不変の特徴が見出されない稀な例が存在するが、Ｃｙｓ残基は最も保存された特徴である。
Figure 0007581225000001
Figure 0007581225000002
一般に、基本的な抗体構造単位は、四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一ペアを含み、各ペアは、１つのＬＣ（約２５ｋＤａ）およびＨＣ（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。ＨＣのカルボキシ末端部分は、抗体のエフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒトＬＣは、カッパおよびラムダＬＣとして分類される。更に、ヒトＨＣは、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定める。ＬＣおよびＨＣにおいては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、ＨＣは約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
抗体の重鎖は、末端リジン（Ｋ）残基、または、末端グリシンおよびリジン（ＧＫ）残基を有する、または有さない可能性がある。したがって、特定の実施形態において、本発明における抗体は、本明細書中に示されている重鎖定常領域アミノ酸配列を含み、更に、末端リジンを欠き、グリシン残基で終結し、あるいは他の実施形態においては末端グリシン残基も欠く。これは、末端リジン、時にはグリシンとリジンとが一緒に、抗体の発現中に切断されうるか、または、人体に導入されると切断除去されるからであり、この場合、抗体の有効性、安定性または免疫原性に対する明らかな悪影響は伴わない。幾つかの場合には、重鎖をコードする核酸分子は、末端リジンをコードするコドンまたは末端リジンおよびグリシンのコドンが意図的に省略されうる。
本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、完全長抗体のフラグメント、すなわち、完全長抗体が結合する抗原に特異的に結合する能力を保有するが完全長より短い抗体フラグメントを意味し、これは、Ｆｃドメイン全体を欠いているか、またはＦｃγＲへの抗体の結合をもたらすＦｃドメインの部分を欠いている。抗体結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；ｓｃＦｖ分子；ナノボディ（ＮＡＮＯＢＯＤＹ）、および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、一次抗体からの可変ドメインと二次抗体からの定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、（ｉ）一次抗体および二次抗体は、異なる種に由来し（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４））、または、（ｉｉ）一次抗体および二次抗体は、異なるアイソタイプに由来し、例えば、可変ドメインはＩｇＧ１抗体に由来し、定常ドメインはＩｇＧ４に由来する。１つの態様においては、可変ドメインは、非ヒト抗体、例えばマウス抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列は、ヒト抗体から得られる。もう１つの態様においては、可変ドメインは、マウス抗体由来のヒト化可変ドメインであり、定常ドメインはヒト抗体のものである。
本明細書中で用いる「併用療法」は、第１治療用物質および第２治療用物質を連続的または同時に個体に投与することを含む、ヒトまたは動物個体の治療を意味する。一般に、第１治療用物質および第２治療用物質は混合物としてではなく別々に個体に投与され；しかし、投与前に第１治療用物質と第２治療用物質とを混合する実施形態がありうる。
本明細書中で用いる「保存的置換」は、タンパク質の生物活性を改変することなく変化が頻繁に施されうるような、類似した特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格コンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸によるアミノ酸の置換を意味する。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は、生物活性を実質的に変化させないと当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）（１９８７）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換を表２に示す。
Figure 0007581225000003
「細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ４抗原」および「ＣＤ１５２」（例えば、Ｍｕｒａｔａ，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５５：４５３－４６０（１９９９）を参照されたい）は互換的に用いられ、変異体、アイソフォーム、ヒトＣＴＬＡ－４の種ホモログ、およびＣＴＬＡ－４と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む（例えば、Ｂａｌｚａｎｏ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：２８－３２（１９９２）を参照されたい）。完全なＣＴＬＡ－４核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアセッション番号Ｌ１５００６として見出されうる。
本明細書中で用いる「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に起因し抗体アイソタイプによって異なる生物活性を意味する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、およびＢ細胞活性化が含まれる。抗体は幾つかのメカニズムにより作用し、そのほとんどは免疫系の他の武器に関わる。抗体は分子の相互作用を単に遮断することが可能であり、あるいは、Ｃ１複合体上のＣ１ｑとクラスター化抗体との相互作用により古典的補体経路（補体依存性細胞傷害またはＣＤＣとして公知である）を活性化することが可能である。重要なことに、抗体は、Ｆｃ受容体の関与により、抗体媒介性免疫応答と細胞性免疫応答とを結びつけるものとしても作用する。
本明細書中で用いる「エフェクター－サイレント」は、（ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅ（ビアコア）アッセイで測定可能である、１以上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）への測定可能な結合を示さない（ここで、マイクロモル範囲の会合定数は、測定可能な結合を示さない）、または（ｉｉ）同じアイソタイプの抗体に典型的である結合と比較して、低減したＢｉａｃｏｒｅアッセイで測定可能な１以上のＦｃＲへの測定可能な結合を示す抗体または抗体フラグメントに関するものである。特定の実施形態において、抗体は、ＨＣ定常ドメインおよびＦｃドメインに１以上の突然変異を含むことが可能であり、特に、それにより、突然変異抗体は、突然変異抗体と同じアイソタイプの野生型抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合が低減しており、または該結合を有さない。特定の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩの１以上に対するエフェクター－サイレント抗体のアフィニティまたは結合定数は、野生型アイソタイプのアフィニティと比較して少なくとも１０００倍減少しており、野生型アイソタイプのアフィニティと比較して少なくとも１００倍～１０００倍減少しており、野生型アイソタイプのアフィニティと比較して少なくとも５０倍～１００倍減少しており、または野生型アイソタイプのアフィニティと比較して少なくとも１０倍～５０倍減少している。特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体は、野生型アイソタイプによる結合と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩの１以上への検出可能または測定可能な結合を示さない。一般に、エフェクター－サイレント抗体は、測定可能な抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を欠いている。エフェクター－サイレント抗体フラグメントは、Ｆｃドメイン、またはＦｃＲへの結合をもたらすＦｃドメインの部分を欠いており、したがって、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａまたはＦｃγＲＩの１以上への検出可能または測定可能な結合を示さない。エフェクター－サイレント抗体または抗体フラグメントの場合、結合はヒトＦｃＲに対して測定される。
本明細書中で用いる「Ｆａｂフラグメント」は、１つのＬＣと、１つのＨＣのＶＨおよびＣＨ１とを含み、そして、ＨＣ定常ドメインの残部を含有しない。Ｆａｂ分子のＣＨ１は、別のＦａｂフラグメントまたはＨＣ含有分子とジスルフィド結合を形成できない。「Ｆａｂフラグメント」は、抗体のパパイン切断の産物でありうる。
本明細書中で用いる「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つのＬＣと、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域までのＨＣ定常ドメインおよびＶＨドメインを含有する１つのＨＣのフラグメントとを含み、そして、ＨＣ定常ドメインの残部を含有せず、その結果、２つのＦａｂ’フラグメントの２つのＨＣ間で鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子が形成されうる。
本明細書中で用いる「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つのＬＣおよび２つのＨＣフラグメントを含み、各ＨＣフラグメントは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域までのＨＣ定常ドメインおよびＶＨドメインを含み、そして、ＨＣ定常ドメインの残部を含有せず、その結果、２つのＨＣ間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、２つの重鎖間のジスルフィド結合により互いに結合した２つのＦａｂ’フラグメントから構成される。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の部位で抗体を切断するペプシンで抗体を消化することにより得られうる。
本明細書中で用いる「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」は、抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む抗体から得られる結晶化可能なフラグメントドメインまたは領域である。抗体において、２つのＦｃドメインは、２以上のジスルフィドにより、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により互いに結合する。Ｆｃドメインは、抗体をプロテアーゼパパインで消化することにより得られうる。
本明細書中で用いる「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体媒介性（体液性）免疫応答を細胞エフェクター機能と結び付ける重要な免疫調節性受容体である。ＦｃγＲ（ＩｇＧ）、ＦｃεＲＩ（ＩｇＥ）、ＦｃαＲＩ（ＩｇＡ）、ＦｃμＲ（ＩｇＭ）およびＦｃδＲ（ＩｇＤ）を含む、全てのクラスの免疫グロブリンの受容体が特定されている。白血球上で見出されるヒトＩｇＧに対する受容体の、以下の３つのクラスが存在する：ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂおよびＦｃγＲＩＩｃ）およびＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ）。ＦｃγＲＩは高アフィニティ受容体（ナノモル範囲のＫＤ）として分類され、一方、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、低から中程度のアフィニティ（マイクロモル範囲ＫＤ）である。抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）においては、エフェクター細胞（ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球および好酸球）の表面上のＦｃＲが、標的細胞に結合しているＩｇＧのＦｃ領域に結合する。結合に際して、シグナル伝達経路が始動し、これは溶解酵素、パーフォリン、グランザイムおよび腫瘍壊死因子のような種々の物質の分泌を引き起こし、これらは標的細胞の破壊をもたらす。ＡＤＣＣエフェクター機能のレベルはヒトＩｇＧサブタイプによって異なる。これはアロタイプおよび特定のＦｃＲに左右されるが、簡単に言うと、ＡＤＣＣエフェクター機能はヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３においては高く、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４においては低い。
本明細書中で用いる「Ｆｖ領域」は単一のＶＨおよびＶＬペアを含み、ここで、ＶＨポリペプチドおよびＶＬポリペプチドは、ジスルフィド結合により互いに結合している。
本明細書中で用いる「ヒト化」［リシェーピング（Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）またはＣＤＲグラフティングとも称される］は、異種（一般には、げっ歯類）由来のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の免疫原性を低下させるための、およびエフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体活性化、Ｃ１ｑ結合）を改善するための十分に確立された技術である。操作されるｍＡｂは、分子生物学の技術を用いて操作されるが、ヒトフレームワークへのげっ歯類相補性決定領域（ＣＤＲ）の単なるＣＤＲグラフティングは、しばしば、元のｍＡｂの結合アフィニティおよび／または特異性の喪失をもたらす。抗体をヒト化するために、ヒト化抗体の設計は、ＣＤＲの残基における保存的アミノ酸置換、およびげっ歯類ｍＡｂからヒトフレームワーク領域への残基の逆置換（逆突然変異）のような変異を含む。位置は、構造分析のための配列比較によりまたは可変領域の三次元構造の相同性モデルの分析により、識別または特定されうる。親和性（アフィニティ）成熟のプロセスは、ごく最近では、選択された位置におけるアミノ酸を変化させるためにファージライブラリーを使用している。同様に、げっ歯類ＣＤＲをグラフティングするための最も適切なヒトフレームワークを選択するために、多数のアプローチが用いられている。抗体構造に関する既知パラメーターのデータセットが増加するにつれて、これらの技術の高度化および洗練も促進される。単一抗体からのコンセンサスもしくは生殖細胞系列配列、または幾つかの異なるヒトｍＡｂからの各軽鎖もしくは重鎖可変領域内のフレームワーク配列の断片が使用されうる。ヒト化のためのもう１つのアプローチは、げっ歯類配列の表面残基のみをヒトｍＡｂにおいて見出される最も一般的な残基で修飾することであり、「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」または「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」と呼ばれている。しばしば、ヒト抗体またはヒト化抗体はヒトにおいて実質的に非免疫原性である。
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」は、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウス、ラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体または抗体フラグメントの形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを含み、ここで、超可変ループは、非ヒト免疫グロブリンのループに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、ヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部（例えば、Ｆｃドメイン）を含みうる。
本明細書中で用いる「過剰増殖性疾患」は、細胞増殖が正常レベルを超えて増加する症状を意味する。例えば、過剰増殖性疾患または障害には、悪性疾患（例えば、食道癌、結腸癌、胆管癌）および非悪性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、良性前立腺肥大）が含まれる。
本明細書中で用いる「免疫関連有害事象」または「ｉｒＡＥ」は、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１および抗ＣＴＬＡ－４抗体のような１以上の免疫チェックポイントインヒビターの使用に起因しうる免疫系の不均衡による自己免疫症状であるＡＥを意味する。
本明細書中で用いる「免疫応答」は、侵入病原体、病原体感染細胞もしくは組織、癌性細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には正常ヒト細胞もしくは組織の選択的損傷、破壊、人体からの排除をもたらす、例えばリンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および前記細胞または肝臓により産生される可溶性高分子（抗体、サイトカインおよび補体を含む）の作用を意味する。
本明細書中で用いる「免疫グロブリン単一可変ドメイン」（「ＩＳＶ」またはＩＳＶＤとも称される）は、一般に、別の可変ドメインとの相互作用を伴わずに（例えば、通常の４本鎖モノクローナル抗体のＶＨドメインとＶＬドメインとの間で要求されるＶＨ／ＶＬ相互作用を伴わずに）機能的抗原結合部位を形成しうる免疫グロブリン可変ドメイン（これは、ＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬドメインを含む重鎖または軽鎖ドメインでありうる）を意味するものとして用いられる。ＩＳＶＤの例には、ナノボディ（ＮＡＮＯＢＯＤＹ）（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨおよび／またはラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨを含む）、ＩｇＮＡＲ、ドメイン、ＶＨドメインである又はＶＨドメイン由来である（単一ドメイン）抗体（例えば、ｄＡｂ（商標））、およびＶＬドメインである又はＶＬドメイン由来である（単一ドメイン）抗体（例えば、ｄＡｂ（商標））が含まれる。重鎖可変ドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＨＨドメイン）に基づくおよび／または由来するＩＳＶＤが一般に好ましい。
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団を意味し、すなわち、集団を含む抗体分子は、少量で存在しうる考えられうる天然で生じる突然変異の場合を除き、アミノ酸配列において同一である。対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープにしばしば特異的である可変ドメインにおける異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による抗体の製造を要すると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）に最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１（２００５）も参照されたい。
本明細書中で用いる「ＮＡＮＯＢＯＤＹ」および「ナノボディ」は、Ａｂｌｙｎｘ Ｎ．Ｖ．の登録商標である。
抗体または免疫グロブリンに関して本明細書中で用いる「非ヒトアミノ酸配列」は、非ヒト哺乳動物のアミノ酸配列に特徴的であるアミノ酸配列を意味する。この用語は、ライブラリーの多様性がインシリコで生成される完全ヒト抗体ライブラリーから得られる抗体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含まない（例えば、米国特許第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を参照されたい）。
「ＰＤ－１」は、Ｔ細胞調節因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーの抑制性メンバーであるプログラム死１（ＰＤ－１）タンパク質を意味する（Ｏｋａｚａｋｉら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９－８２（２００２）；Ｂｅｎｎｅｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：７１１－８（２００３））。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが含まれる。ＰＤ－１遺伝子は、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質をコードしている（Ａｇａｔａら，Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７６５－７２（１９９６））。ＰＤ－１の２つのリガンド、すなわち、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）およびＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）が特定されており、これらは、ＰＤ－１に結合すると、Ｔ細胞活性化をダウンレギュレートすることが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎら（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７－３４；Ｃａｒｔｅｒら（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４－４３）。ＰＤ－１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫抑制性タンパク質として公知である（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ら，ＥＭＢＯ Ｊ．１１：３８８７－３８９５（１９９２）；Ｂｌａｎｋ，Ｃ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６（５）：７３９－７４５（Ｅｐｕｂ ２００６ Ｄｅｃ．２９））。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用は免疫チェックポイントとして機能し、これは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の低減および／または癌細胞による免疫回避につながりうる（Ｄｏｎｇら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１－７（２００３）；Ｂｌａｎｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７－３１４（２００５）；Ｋｏｎｉｓｈｉら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４－１００（２００４））。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２との局所相互作用を阻害することにより逆転可能であり、また、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用が遮断された場合、効果は相加的である（Ｉｗａｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１２２９３－１２２９７（２００２）；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７－６６（２００３））。
「プログラム死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ－１」、「ＰＤ－１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ－１」および「ｈＰＤ－１」は互換的に用いられ、変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤ－１の種ホモログ、およびＰＤ－１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。完全なＰＤ－１配列はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ６４８６３において見出されうる。
本明細書中で用いる「ＳｃＦｖ」または「一本鎖可変フラグメント」は、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドにより互いに融合または連結されたＶＨおよびＶＬを含む融合タンパク質である。リンカーは、通常、柔軟性のためにグリシンが豊富であり、また、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に連結することが可能であり、またはその逆も可能である。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保有する。
本明細書中で用いる「治療量以下の用量」は、過剰増殖性疾患（例えば、癌）の治療のために単独で投与される場合の治療用化合物の通常のまたは典型的な用量より低い、治療用化合物（例えば、抗体）の用量を意味する。治療用化合物の用量は、標的とされる疾患に応じて変動しうる。例えば、ＣＴＬＡ－４抗体の治療量以下の用量は、切除不能または転移性黒色腫の治療のための抗ＣＴＬＡ－４抗体ＹＥＲＶＯＹ（ヤーボイ）の既知単独療法用量である約３ｍｇ／ｋｇより少ない抗体の単一用量、あるいは、黒色腫補助療法の既知単独療法用量である約１０ｍｇ／ｋｇより少ないＹＥＲＶＯＹの単一用量である。
本明細書中で用いる「治療」または「治療する」は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療用物質を、該物質が治療活性または予防活性を示す疾患症状の１以上を有する又は疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、治療用物質は、任意の臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療用物質の量は、患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられる任意の臨床的尺度により評価されうる。この用語は更に、障害に関連した症状の発生の遅延および／またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。この用語は更に、既存の無制御の又は望ましくない症状の改善、追加的な症状の予防、およびそのような症状の根本原因の改善または予防を含む。したがって、この用語は、障害、疾患もしくは症状を有するヒトまたは動物対象、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発生する可能性を有するヒトまたは動物対象に、有益な結果がもたらされていることを示す。
本明細書中で用いる「治療的有効量」は、治療されている対象において所望の効果を達成するのに十分な特定の物質の量を意味する。例えば、これは、ＣＴＬＡ－４の活性化を抑制し、そして抗腫瘍応答を誘導するのに必要なＣＴＬＡ－４遮断剤の量、またはそれぞれ抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１遮断剤と共投与された場合に抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１の応答性を増強するのに必要な量でありうる。
本明細書中で用いる「治療指数」は「治療域」、「安全域」または「治療比」としても公知であり、治療効果をもたらす治療用物質の量と毒性を引き起こす治療用物質の量との比較である。
本明細書中で用いる「治療」は、それがヒトまたは獣医個体に適用される場合には、抗体または抗原結合性フラグメントを、抗体または抗体フラグメントでの治療を要するヒトまたは動物個体と接触させることを含む治療的処置を意味する。
本明細書中で用いる「ＶＨＨ」は、ＶＨドメインが、ＨＣ抗体から得られるまたはＨＣ抗体に由来する、またはＨＣ抗体から誘導されることを示す。重鎖抗体は、２つのＨＣを有しＬＣを有さない機能的抗体である。重鎖抗体は、生物学的な科であるラクダ科のメンバーであるラクダ類に存在し、ラクダ類から入手可能である。
序論
市販されている抗ＰＤ－１抗体ＫＥＹＴＲＵＤＡおよびＯＰＤＩＶＯのようなＰＤ－１アンタゴニストは、低減したＦｃγＲ機能を有するヒトＩｇＧ４バックボーンを含み、というのも、ＦｃγＲ結合機能を有する抗ＰＤ－１抗体を使用した前臨床試験は、腫瘍免疫療法に不可欠なＣＤ８＋ 細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の枯渇ゆえに不十分な抗腫瘍効果を示したからである（例えば、国際特許出願ＷＯ２０１４／０８９１１３を参照されたい）。対照的に、高いＦｃγＲ結合アフィニティを有するマウスＩｇＧ２ａ－抗ＣＴＬＡ－４抗体を、測定可能なＦｃγＲ結合アフィニティを欠く突然変異マウスＩｇＧ１－抗ＣＴＬＡ－４抗体と比較した前臨床実験において、抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用した単独療法は、強力な抗腫瘍応答を引き起こすためにはＦｃγＲ機能を要することが示された（Ｓｅｌｂｙら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．１：３２－４２（２０１３））。ＣＴＬＡ－４発現は、ＴＩＬ上では脾臓またはリンパ節におけるＴｒｅｇ集団と比較して高かったため（Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０：１６９５－７１０（２０１３））、抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト単独療法におけるＦｃγＲ機能の必要性はマウス腫瘍モデルにおいて、Ｔ調節性細胞（Ｔｒｅｇ）枯渇と相関した。
本発明者らは、抗ＣＴＬＡ－４抗体の有効性のためにＦｃγＲ機能が必要であることは、抗ＣＴＬＡ－４抗体を抗ＰＤ－１抗体と組み合わせることにより回避されうると仮定した。この仮定は、枯渇ＣＤ８＋ 細胞傷害性Ｔ細胞の抗ＰＤ－１媒介性活性化におけるＣＤ２８媒介性共刺激のための重要な役割を示す新たなデータにより支持されている。抗ＣＴＬＡ－４および抗ＰＤ－１抗体は、異なるメカニズムによりそれらの抗腫瘍活性をもたらす。重要なことに、抗ＣＴＬＡ－４抗体と抗ＰＤ－１抗体との組合せ効果は、それらの２つの抗体によってもたらされる組合せ遮断は、いずれか一方の抗体のみによっては活性化されない多数の遺伝子（増殖関連遺伝子およびケモカイン遺伝子を含む）の活性化をもたらすので、単に相加的であるだけではない（例えば、図３Ｃおよび４Ｄを参照されたい）。これらのデータは、単独療法におけるＣＴＬＡ－４遮断の作用メカニズムがＰＤ－１遮断と組み合わせて実施された場合のその作用メカニズムとは異なることを示唆している。
新たなデータは、ＰＤ－１遮断後のエフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞の活性化におけるＣＤ２８媒介性共刺激の重要性を示している。ＰＤ－１シグナル伝達は、以前推定されていたＴＣＲではなく、ＣＤ２８を脱リン酸化し、そして、ＣＤ２８シグナル伝達は、ＰＤ－１遮断後に観察される抗腫瘍応答の増強に必要である。したがって、単独療法のＣＴＬＡ－４遮断は主にＴ細胞プライミング事象を標的としうるが、ＣＴＬＡ－４遮断とＰＤ－１遮断との組合せは、ＰＤ－１遮断のみから予想されるもの以上に枯渇Ｔ細胞の活性化を促進させると予想される。本発明者らが仮定したところによると、このメカニズムはＣＴＬＡ－４アンタゴニストにより増強され、これは、ｉｒＡＥ媒介性毒性の重要な要因となりうるＴｒｅｇ細胞の枯渇、およびＦｃ受容体の機能には無関係に、ＣＤ２８媒介性活性化の増強を可能にする。
ＦｃＲに結合する抗ＣＴＬＡ－４抗体（Ｆｃ機能性抗体）に対するその場合の潜在的な警告は、Ｔｒｅｇ枯渇または骨髄細胞とＴ細胞との細胞架橋が、望ましくない免疫関連炎症を誘発しうることである。本発明者らは、ＣＴＬＡ－４遮断癌免疫療法に関連する観察されたｉｒＡＥに寄与している可能性があるのはＦｃ機能であると仮定した。ｉｒＡＥの誘発のためのＦｃ機能の潜在的な役割に反論するために用いられてきた１つの批評は、イピリムマブ（ヒトＩｇＧ１バックボーン上のもの）治療およびトレメリムマブ（ヒトＩｇＧ２バックボーン上のもの）治療が共に腸炎症に関連していることである。ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１と比較して、ヒトＦｃγＲに対する有意に低いアフィニティを有するが、ヒトＩｇＧ２バックボーンを有する抗体とＩｇＧ１バックボーンを有する抗体との直接比較は、インビトロＡＤＣＣおよびＡＤＣＰバイオアッセイを用いた場合、両方が類似レベルのＦｃ機能を誘発することを示している（Ｖａｒｇａｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．３３：６４９－６６３（２０１８））。更に、ヒトＩｇＧ１アイソタイプバックボーンまたはヒトＩｇＧ２アイソタイプバックボーンのいずれかを有するキメラ抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のインビボＴｒｅｇ枯渇および抗腫瘍活性は、ヒトＦｃγＲノックインマウスにおいて同等であった（Ｖａｒｇａｓら，同誌））。
同系腫瘍モデルにおいて腸炎症を誘発するためのＦｃ機能の潜在的な役割を評価するための重要な障害は、マウス抗ＣＴＬＡ－４代用抗体を使用した場合の測定可能な炎症および大腸炎の欠如であった。この障害を回避するために、本発明者らは、Ｃａｙａｔｔｅら，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３：ｅ１０（２０１２）において既に開発されている、ＰＣＲに基づくパネルを採用して、マウスＩＢＤモデルにおける炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する腸炎症遺伝子のアップレギュレーションを測定した。本明細書中の実施例に示されているとおり、このＰＣＲに基づくパネルは、明白な大腸炎または組織損傷の組織学的証拠の非存在下でさえも、Ｆｃ機能性抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（α－ＣＴＬＡ４）で処置されたマウスにおける腸炎症を示すバイオマーカー遺伝子の発現の増加を本発明者らが検出することを可能にした（図１Ａ、３Ｃおよび４Ｄを参照されたい）。腸炎症遺伝子発現経路の無症候性刺激のこの観察は本発明者らを鼓舞して、根本的な炎症が臨床的大腸炎の発生へと進行するのかどうかを決定するための治療スケジュールを拡張させた。このｉｒＡＥ大腸炎マウスモデルは、免疫腫瘍学の前臨床開発で利用される同系腫瘍モデルにおいて、付随抗腫瘍応答の状況または非存在下、腸炎症の誘導のためのＦｃ機能の必要性を評価するための実証的実験を本発明者らが実施することを可能にした。
実施例に記載されている結果は、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体もエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントも、測定可能な抗腫瘍活性を単独療法の場合に誘発しないことを明らかに示している。しかし、エフェクター－サイレント抗体またはエフェクター－サイレント抗体フラグメントを抗ＰＤ１抗体と組み合わせて投与すると、エフェクター機能性抗ＣＴＬＡ－４抗体の単独で又はそれと抗ＰＤ－１抗体との組合せで誘発される抗腫瘍活性に匹敵する抗腫瘍活性がもたらされ（図３Ａを参照されたい）、そしてこの場合、エフェクター機能性抗ＣＴＬＡ－４抗体の単独で又はそれと抗ＰＤ－１抗体との組合せで観察される腸または皮膚ｉｒＡＥは生じず（図４Ｂおよび５Ａ）、体重減少も生じない（図４Ａ）。これらの結果、ならびにＦｃ媒介性抗腫瘍活性および腸炎症に関連する潜在的なＴｒｅｇ非依存性メカニズムの本発明者らの発見を考慮すると、本発明は、改善された治療指数およびより広範な有用性を有するＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１遮断組合せ抗癌免疫療法を可能にする。
併用療法
本発明は、（ｉ）抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体、エフェクター－サイレント抗ＰＤ－１抗体フラグメントおよびエフェクター－サイレント抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントからなる群から選択されるＰＤ－１遮断剤と、（ｉｉ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体およびエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントからなる群から選択されるエフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤とを、癌治療を要する個体に投与することを含む、抗癌併用療法を提供する。
エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、ＰＤ－１遮断剤との併用療法において、進行性腎細胞癌またはマイクロサテライト不安定性－高またはミスマッチ修復欠損転移性結腸直腸癌を標的とするイピリムマブ／ニボルマブ併用療法として米国ＦＤＡにより承認されているイピリムマブの治療量以下の１ｍｇ／ｋｇ用量より多い用量で投与可能であり、この場合、併用療法の期間中または個体が併用療法を受けている期間の少なくとも一部にわたって、有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０に記載されている基準によるグレード（Ｇｒａｄｅ）１～２を超える皮膚または腸ｉｒＡＥの誘発リスクがイピリムマブ／ニボルマブ併用療法で観察されるものより低い。特定の実施形態において、用量は、併用療法の期間中または個体が併用療法を受けている期間の少なくとも一部にわたって、グレード１を超えるｉｒＡＥを誘発しない。
したがって、特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、１ｍｇ／ｋｇを超える用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、少なくとも３ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は少なくとも１０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、３ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に投与されうる。特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、個体の体重に左右されない一定用量、例えば、１００ｍｇを超える用量で個体に投与されうる。
併用療法の特定の実施形態において、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤は、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体または（ｂ）エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントである。抗ＣＴＬＡ－４抗体にはエフェクター機能活性が不要であるため、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、「エフェクター－サイレント」となるように操作されたＨＣドメインを有し、すなわち、そのＦｃドメインは修飾されていて、該抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（ビアコア）アッセイによる測定で、エフェクター－サイレント抗体と同じアイソタイプの野生型抗体のＦｃドメイン（例えば、突然変異していないＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＦｃドメインのＦｃドメイン）と比較して、低減したＦｃＲ結合を有するか、または測定可能なＦｃＲ結合を全く有さない。エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、Ｆｃドメインを欠いているか、または１以上のＦｃＲに結合するＦｃドメインの領域を欠いている。
特定の実施形態において、本発明の併用療法は、腫瘍を除去するための手術の前または後に個体に投与され、そして、放射線療法の前、途中または後に使用されうる。
特定の実施形態において、本発明の併用療法は、生物療法剤または化学療法剤で以前に治療されていない個体に投与（適用）され、すなわち、個体は未治療である。他の実施形態において、併用療法は、生物療法剤または化学療法剤による以前の療法の後で持続的応答が得られなかった個体に投与され、すなわち、個体は治療経験を有する。
特定の実施形態において、本発明の併用療法は、触診によりまたは当技術分野で周知のイメージング技術、例えばＭＲＩ、超音波もしくはＣＡＴスキャンにより見出されるのに十分な大きさの腫瘍を治療するために使用される。幾つかの実施形態において、本発明の併用療法は、少なくとも約２００ｍｍ３、３００ｍｍ３、４００ｍｍ３、５００ｍｍ３、７５０ｍｍ３または最大１０００ｍｍ３の寸法を有する進行期腫瘍を治療するために使用される。
特定の実施形態において、本発明の併用療法は、ＰＤ－Ｌ１発現に関して陽性試験結果を示す癌を有する個体に投与される。幾つかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１発現は、個体から摘出された腫瘍サンプルの固定ホルマリンパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）または凍結組織切片における免疫組織化学的（ＩＨＣ）アッセイにおいて、診断用抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用して検出される。個体の担当医は、本発明の併用療法による治療の開始前に個体から摘出された腫瘍組織サンプルにおけるＰＤ－Ｌ１発現を決定するための診断試験を指示することが可能であるが、医師は、治療の開始後の任意の時点、例えば治療サイクルの完了後に、最初または後続の診断試験を指示しうると想定される。
併用療法は、本明細書に開示されている例示的な抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－１抗体フラグメントのいずれか１つ、または本明細書に開示されている例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントのいずれか１つと組合された、本明細書に開示されている例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体またはエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントのいずれか１つを含みうる。
（ａ）エフェクター－サイレント抗体
本発明のエフェクター－サイレント抗体は、抗体が１以上のＦｃＲへの測定可能な結合を示さないようにまたは同じＩｇＧアイソタイプの未修飾抗体のものと比較して低減した１以上のＦｃＲへの結合を示すように修飾されたＨＣ定常ドメインまたはそのＦｃドメインを含む。他の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩのそれぞれへの測定可能な結合を示さない、または同じＩｇＧアイソタイプの未修飾抗体のものと比較して低減した、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩのそれぞれへの結合を示しうる。特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインまたはＦｃドメインは、ヒトＨＣ定常ドメインまたはＦｃドメインである。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体は、ＨＣ定常ドメインの２９７位（Ｅｕ番号付け系）のアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮ－グリコシル化を欠くように修飾されているＩｇＧ１またはＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む。Ｎ－グリコシル化のコンセンサス配列はＡｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（ここで、２９８位のＸａａはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）であり、４つ全てのアイソタイプにおいて、Ｎ－グリコシル化コンセンサス配列はＡｓｎ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒである。修飾は、ＨＣ定常ドメインをコードする核酸分子における２９７位のＡｓｎをコードするコドンを、別のアミノ酸、例えばＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、ＧｌｙまたはＧｌｕ、例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７ＥまたはＮ２９７Ｄをコードするコドンで置換することにより達成されうる。あるいは、２９８位のＳｅｒのコドンはＰｒｏのコドンで置換可能であり、２９９位のＴｈｒのコドンはＳｅｒのコドン以外の任意のコドンで置換可能である。もう１つの実施形態において、Ｎ－グリコシル化コンセンサス配列を含むアミノ酸のそれぞれが別のアミノ酸で置換される。そのような修飾ＩｇＧ分子は、測定可能なエフェクター機能を有さない。特定の実施形態において、これらの突然変異ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含むことが可能であり、ここで、置換は保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。他の実施形態において、２９７位のＮ－グリコシル化を欠くように修飾されたそのようなＩｇＧは、測定可能なエフェクター機能を排除するための本明細書に開示されている１以上の追加的な突然変異を更に含みうる。
ＨＣ定常ドメインのＮ－グリコシル化を阻止にする、２９７位で突然変異した例示的なＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインは、配列番号４４に記載されており、ＨＣ定常ドメインのＮ－グリコシル化を阻止にする２９７位で突然変異した例示的なＩｇＧ２ ＨＣ定常ドメインは、配列番号５０に記載されており、ＨＣ定常ドメインのＮ－グリコシル化を阻止する２９７位で突然変異した例示的なＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインは、配列番号５６に記載されている。特定の実施形態において、これらの突然変異ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含むことが可能であり、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓ（ここで、位置はＥｕ番号付けに従い特定される）から選択される１以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、ここで、該ＨＣ定常ドメインはエフェクター－サイレントである。特定の実施形態において、修飾ＩｇＧ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ置換（ここで、位置はＥｕ番号付けに従い特定される）を含む。特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインは、Ｐｒｏ３２９位のアミノ酸置換と、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓ（ここで、位置はＥｕ番号付けに従い特定される）から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。これらおよび他の置換は、ＷＯ９４２８０２７；ＷＯ２００４０９９２４９；ＷＯ２０１２１３００８３１；米国特許第９，７０８，４０６号、第８，９６９，５２６号、第９，２９６，８１５号；Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ４０６，２６７－２７３（２０ Ｊｕｌ．２０００）に開示されている。
前記の特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、またはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を含み、ここで、位置はＥｕ番号付けに従い特定される。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを含み、ここで、ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、ＩｇＧ１の２３３位～２３６位のアミノ酸をヒトＩｇＧ２ ＨＣの対応アミノ酸で置換すること、ならびに３２７、３３０および３３１位のアミノ酸をヒトＩｇＧ４ ＨＣの対応アミノ酸で置換することにより、エフェクター－サイレントになるように修飾されており、ここで、位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される（Ａｒｍｏｕｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４（１９９９）；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４（２００１））。特定の実施形態において、修飾ＩｇＧ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体は、Ｎ末端からＣ末端への方向にヒンジ領域、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むハイブリッドヒト免疫グロブリンＨＣ定常ドメインに融合または連結されたＶＨドメインを含み、ここで、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域またはヒトＩｇＤヒンジ領域の少なくとも一部のアミノ酸配列を含み、ＣＨ２ドメインはヒトＩｇＧ４ ＣＨ２ドメインのものであり、その一部は、そのＮ末端領域においてヒトＩｇＧ２ ＣＨ２またはヒトＩｇＤ ＣＨ２ドメインのＮ末端領域の４～３７アミノ酸残基により置換されている。そのようなハイブリッドヒトＨＣ定常ドメインは、米国特許第７，８６７，４９１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗体はＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインを含み、ここで、Ｅｕ系による２２８位のセリンはプロリンで置換されている。例えば、配列番号５２を参照されたい。この修飾はＥＵ系におけるＣｙｓ２２６位のシステインとＣｙｓ２２９位のシステインとの間の潜在的な鎖間ジスルフィド結合の形成を妨げ、適切な鎖内ジスルフィド結合の形成を妨げうる。Ａｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５（１９９３）を参照されたい。また、Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１－８，（２００１）；配列番号１４および４１も参照されたい。他の実施形態において、ＩｇＧ４定常ドメインは、Ｓ２２８Ｐ置換に加えて、Ｐ２３９Ｇ、Ｄ２６５ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含み、ここで、位置はＥｕ番号付けに従い特定される。前記の特定の実施形態において、ＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインはヒトＨＣ定常ドメインである。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
例示的なＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインは、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号４４に記載されているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む。例示的なＩｇＧ２ ＨＣ定常ドメインは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８および配列番号４９に記載されているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。例示的なＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインは、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５および配列番号５６に記載されているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
エフェクター－サイレント抗体のより具体的な例は、特定の例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて、後記に記載されている。
（ｂ）例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体
本発明の併用療法および抗体含有組成物において使用されうる例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体には、ＣＴＬＡ－４に結合しＢ７へのＣＴＬＡ－４の結合を阻害する任意のエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体が含まれる。特定のエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体には、以下のエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体、およびこれらの抗体のいずれか１つと薬学的に許容される担体とを含む組成物が含まれる。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合を示さない、または野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低減した結合を示すＨＣ定常ドメインに融合または連結されたイピリムマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されたイピリムマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号４、配列番号５および配列番号６を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３を含む。
他の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合を示さない、または野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低減した結合を示すＨＣ定常ドメインに融合または連結されたトレメリムマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されたトレメリムマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１を含む。
他の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）イピリムマブのＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｉ）トレメリムマブのＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｉｉ）ＲＥＧＮ４６５９のＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｖ）ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨおよびＶＬドメイン、または（ｖ）国際特許出願ＷＯ２０１７１９４２６５に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体クローン２Ｃ８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。イピリムマブのＶＨドメインは、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含む。トレメリムマブのＶＨドメインは、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含む。ＲＥＧＮ４６５９のＶＨドメインは、配列番号９５に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９６に記載されているアミノ酸配列を含む。ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨドメインは、配列番号９７に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９８に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＶＨおよびＶＬドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
他の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）（米国公開特許出願第２０１７０２１６４３３号および国際出願ＷＯ２０１８１８３４８０を参照されたい）、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５または８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、ＶＨドメインは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合を示さない、または野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低減した結合を示すＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５または８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７の変異体を含み、ここで、変異体のＶＨアミノ酸配列の１８位のメチオニンはイソロイシンで置換されている。したがって、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５－変異体１のＶＨおよびＶＬ、または８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１のＶＨおよびＶＬを含みうる。
他の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ４抗体は、（ｉ）配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉ）配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉｉ）配列番号７７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｖ）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖ）配列番号８１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉ）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉ）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉｉ）配列番号８７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｘ）配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｘ）配列番号９１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または、（ｘｉ）配列番号９３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有する。特定の実施形態において、ＶＨおよびＶＬドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体の他の実施形態において、ＶＨドメインはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、あるいは、生じる抗ＣＴＬＡ４抗体をエフェクター－サイレントにする１以上の突然変異を含むように修飾されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結されている。
１つの実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２３３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３５Ｇ／Ｇ２３６Ｒ、Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、およびＤ２６５Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
もう１つの実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｉｉｉ）アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
もう１つの実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、（ｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換と、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異とを有するＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、（ｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換と、更に、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、あるいは、（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換と、更に、アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異と、Ｎ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換突然変異と、を有するＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメインを含み、ここで、（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）におけるアミノ酸位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。
表４～１８は、癌を有する個体を治療するための療法において抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用されうる特定の例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体を示す。本発明はまた、Ｎ２９７Ａ置換のみからなるイピリムマブ以外の表に示されている抗体を提供し、また、Ｎ２９７Ａ置換のみからなるイピリムマブを含む組成物以外の、表に示されている抗体と薬学的に許容される担体とを各組成物が含む組成物を提供する。表４～１８における全てのＨＣアミノ酸置換位置は、Ｅｕ番号付けスキームに従っている。
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（ｃ）例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメント
本発明の併用療法および抗体含有組成物において使用されうる例示的なエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントには、ＣＴＬＡ－４に結合しＢ７へのＣＴＬＡ－４の結合を阻害する任意の抗体フラグメントが含まれる。これらの抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントの特定の例には、以下の抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントおよび組成物が含まれ、各組成物は、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）イピリムマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）イピリムマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含むＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ’）２である。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号４、配列番号５および配列番号７を含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）トレメリムマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）トレメリムマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ、配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４を含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）イピリムマブのＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｉ）トレメリムマブのＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｉｉ）ＲＥＧＮ４６５９のＶＨおよびＶＬドメイン、（ｉｖ）ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨおよびＶＬドメイン、または（ｖ）国際特許出願ＷＯ２０１７１９４２６５に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体クローン２Ｃ８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。イピリムマブのＶＨドメインは、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含む。トレメリムマブのＶＨドメインは、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を含む。ＲＥＧＮ４６５９のＶＨドメインは、配列番号９５に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９６に記載されているアミノ酸配列を含む。ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨドメインは、配列番号９７に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９８に記載されているアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、イピリムマブのＶＨおよびＶＬ、トレメリムマブのＶＨおよびＶＬ、ＲＥＧＮ４６５９のＶＨおよびＶＬ、ＡＧＥＮ１８８４ｗのＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ３Ｈ３Ｌ３のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５のＶＨおよびＶＬ、または８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７のＶＨおよびＶＬを含む。
特定の実施形態において、抗ＣＴＬＡ－４抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１のＶＨおよびＶＬ、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５－変異体１のＶＨおよびＶＬ、または、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１のＶＨおよびＶＬを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは、（ｉ）配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉ）配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｉｉ）配列番号７７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｖ）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖ）配列番号８１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉ）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉ）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｖｉｉｉ）配列番号８７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｉｘ）配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、（ｘ）配列番号９１に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９２に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｘｉ）配列番号９３に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号９４に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
特定の実施形態において、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントは１以上の免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）を含み、各ＩＳＶＤは、ラクダ重鎖のみの抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含み、但し、ＩＳＶＤは、アミノ配列ＦＹＧＭＧ（配列番号６９）を含むＣＤＲ１、アミノ酸配列ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０）を含むＣＤＲ２、およびアミノ酸ＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７１）またはＥＰＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号７２）を含むＣＤＲ３を含まず（それらのＩＳＶＤは国際特許出願ＷＯ２００８０７１４４７、ＷＯ２０１７０８７５８７およびＷＯ２０１７０８７５８８に開示されている）、また、ＷＯ２００８０７１４４７に開示されているＣＤＲ３における１、２または３個の突然変異を含むＩＳＶＤ変異体を含まず、例外的に、前記の１以上のＩＳＶＤがエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメイン（例えば、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメインのいずれか）に融合または連結されている実施形態におけるＣＤＲを含むＩＳＶＤは、この但し書きによっては除外されない。
（ｄ）例示的な抗ＰＤ－１抗体
本発明の併用療法において使用されうる例示的な抗ＰＤ－１抗体には、ＰＤ－１に結合しＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１の結合を阻害する任意の抗体が含まれる。もう１つの実施形態において、例示的な抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびセミプリマブ－ｒｗｌｃからなる群から選択される。例示的な抗体には、以下の抗ＰＤ－１抗体、および抗ＰＤ１抗体と薬学的に許容される塩とを含む組成物が含まれる。
ペンブロリズマブは、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５またはＳＣＨ－９００４７５としても公知であり、米国特許第８，３５４，５０９号およびＷＯ２００９／１１４３３５に記載されているヒト化抗ＰＤ－１抗体であり、Ｈａｍｉｄら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．３６９（２）：１３４－１４４（２０１３）に開示されている。ペンブロリズマブの重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２７および２８に記載されているアミノ酸配列により示されている。
ニボルマブは、ＯＰＤＩＶＯ、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８またはＢＭＳ－９３６５５８としても公知であり、ＷＯ２００６／１２１１６８および米国特許第８，００８，４４９号に記載されている完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－１抗体である。ニボルマブの重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２５および２６に記載されているアミノ酸配列により示されている。
セミプリマブ－ｒｗｌｃは、セミプリマブ、ＬＩＢＴＡＹＯまたはＲＥＧＮ２８１０としても公知であり、ＷＯ２０１５１１２８００および米国特許第９，９８７，５００号に記載されている組換えヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。セミプリマブ－ｒｗｌｃの重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１０１および１０２に記載されているアミノ酸配列により示されている。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されたペンブロリズマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されたペンブロリズマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６を含む。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されたニボルマブの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されたニボルマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。３つのＨＣ－ＣＤＲは、それぞれ配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９を含み、そして、３つのＬＣ－ＣＤＲは、それぞれ配列番号２０、配列番号２１および配列番号２を含む。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）エフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されたセミプリマブ－ｒｗｌｃの３つのＨＣ－ＣＤＲを含むＶＨと、（ｉｉ）ＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されたニボルマブの３つのＬＣ－ＣＤＲを含むＶＬと、を含む。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、（ｉ）ペンブロリズマブのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）、（ｉｉ）ニボルマブのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）、または、（ｉｉｉ）セミプリマブ－ｒｗｌｃのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）を含む。ペンブロリズマブのＶＨドメインは、配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を含む。ニボルマブのＶＨドメインは、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を含む。セミプリマブ－ｒｗｌｃのＶＨドメインは、配列番号９９に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１００に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＶＨおよびＶＬドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含むことが可能であり、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体ＶＨドメインは、特定のＶＨに現在連結されていないＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結されることが可能であり、あるいは、生じる抗ＰＤ－１抗体をエフェクターサイレントにするＦｃドメイン内の１以上の突然変異を含むように修飾されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結される。
特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、これは、ＨＣ定常ドメインをコードする核酸分子における２９７位のＡｓｎのコドンを別のアミノ酸、例えばＧｌｎのコドンで置換することにより、ＨＣ定常ドメインの２９７位のアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮ－グリコシル化を欠くように修飾される。他の実施形態において、２９７位のＮ－グリコシル化を欠くように修飾されたそのようなＩｇＧは更に、検出可能なエフェクター機能を排除するための本明細書に開示されている１以上の追加的な突然変異を含む。特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインは、ヒトＨＣ定常ドメインである。特定の実施形態において、該分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、本発明は、Ｓ２２８Ｐ置換を有するように、そして更に、Ｓ２２８Ｐ置換に加えて、Ｐ２３９Ｇ、Ｄ２６５Ａ、またはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含むように修飾されているＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインを含む抗ＰＤ－１抗体を提供し、ここで、位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。前記の特定の実施形態において、ＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインはヒトＨＣ定常ドメインである。特定の実施形態において、該分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
もう１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプを含むことが可能であり、ここで、ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、ＩｇＧ１の２３３位～２３６位のアミノ酸をヒトＩｇＧ２ ＨＣの対応アミノ酸で置換すること、ならびに３２７、３３０および３３１位のアミノ酸をヒトＩｇＧ４ ＨＣの対応アミノ酸で置換することにより、エフェクター－サイレントとなるように修飾されており、ここで、位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
もう１つの実施形態において、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、ここで、該ポリペプチドは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合を示さないか、または野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低減した結合を示す。これらの及び他の置換は、ＷＯ９４２８０２７、ＷＯ２００４０９９２４９、ＷＯ２０１２１３００８３１；米国特許第９，７０８，４０６号、第８，９６９，５２６号、第９，２９６，８１５号；Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ４０６，２６７－２７３（２０００年７月２０日）に開示されている。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
表１９～２７は、癌を有する個体を治療するための療法において、本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わせて使用されうる特定の例示的な抗ＰＤ－１抗体を示す。本発明はまた、表に示されている抗体および組成物を提供し、各組成物は、表に示されている抗体と薬学的に許容される担体とを含む。表１９～２７における全てのＨＣアミノ酸置換位置は、Ｅｕ番号付けスキームに従っている。
Figure 0007581225000019
Figure 0007581225000020
Figure 0007581225000021
Figure 0007581225000022
Figure 0007581225000023
Figure 0007581225000024
Figure 0007581225000025
Figure 0007581225000026
Figure 0007581225000027
（ｅ）例示的な抗ＰＤ－１抗体フラグメント
本発明の併用療法において使用されうる例示的な抗ＰＤ－１抗体フラグメントには、ＰＤ－１に結合しＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１の結合を阻害する任意の抗ＰＤ－１抗体フラグメントが含まれ、更に、ＰＤ－１に結合する以下の抗ＰＤ－１抗体フラグメント、および以下の抗ＰＤ－１抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物が含まれる。
特定の実施形態において、抗体フラグメントは、配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＨと、配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＬとを含むＦｖまたはｓｃＦｖである。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＨと、配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＨとを含むＦ（ａｂ）である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、配列番号２９に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＨと、配列番号３０に記載されているアミノ酸配列を有するペンブロリズマブＶＨとを含むＦ（ａｂ’）２である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨと、配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨとを含むＦｖまたはｓｃＦｖである。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨと、配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ）である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨと、配列番号２４に記載されているアミノ酸配列を有するニボルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ’）２である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、１以上の免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）を含み、各ＩＳＶＤは、ラクダ重鎖のみの抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含み、但し、ＩＳＶＤは、アミノ酸配列ＴＨＡＭＧ（配列番号７３）を含むＣＤＲ１、アミノ酸配列ＶＩＴＷＳＧＧＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７４）またはＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７５）を含むＣＤＲ２、およびアミノ酸ＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹ（配列番号７６）またはＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹ（配列番号７７）を含むＣＤＲ３を含まず（それらのＩＳＶＤは、国際特許出願ＷＯ２００８０７１４４７、ＷＯ２０１７０８７５８７およびＷＯ２０１７０８７５８９に開示されている）、また、ＷＯ２００８０７１４４７に開示されているＣＤＲ３における１、２または３個の突然変異を含むＩＳＶＤ変異体を含まず、例外的に、前記の１以上のＩＳＶＤがエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメイン（例えば、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメインのいずれか）に融合または連結されている実施形態におけるＣＤＲを含むＩＳＶＤは、この但し書きによっては除外されない。
（ｆ）例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体
本発明の併用療法において使用されうる例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１の結合を阻害する任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体が含まれ、更に、以下の抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および以下の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と薬学的に許容される担体とを含む組成物が含まれる。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、（ｉ）アテゾリズマブのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはＨＣ定常ドメインまたはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）、（ｉｉ）アベルマブのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはＨＣ定常ドメインまたはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）、または（ｉｉｉ）デュルバルマブのＶＨおよびＶＬドメイン（ここで、ＶＨドメインはＨＣ定常ドメインまたはエフェクター－サイレントＨＣ定常ドメインに融合または連結されており、ＶＬドメインはＬＣカッパまたはラムダ定常ドメインに融合または連結されている）を含む。デュルバルマブのＶＨドメインは、配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を含む。アベルマブのＶＨドメインは、配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を含む。アテゾリズマブのＶＨドメインは、配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＶＨおよびＶＬドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体ＶＨドメインは、特定のＶＨに現在連結されていないＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結されることが可能であり、あるいは、生じる抗ＰＤ－１抗体をエフェクターサイレントにするＦｃドメイン内の１以上の突然変異を含むように修飾されているＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインに融合または連結される。
特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、これは、ＨＣ定常ドメインをコードする核酸分子における２９７位のＡｓｎのコドンを別のアミノ酸、例えばＧｌｎのコドンで置換することにより、ＨＣ定常ドメインの２９７位のアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮ－グリコシル化を欠くように修飾される。あるいは、Ｓｅｒのコドンは、Ｐｒｏのコドンで置換されることが可能であり、またはＴｈｒのコドンはＳｅｒのコドン以外の任意のコドン（例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ｄ）で置換されることが可能である。あるいは、３つ全てのコドンが修飾される。他の実施形態において、２９７位のＮ－グリコシル化を欠くように修飾されたそのようなＩｇＧは更に、検出可能なエフェクター機能を排除するための本明細書に開示されている１以上の追加的な突然変異を含む。特定の実施形態において、ＨＣ定常ドメインは、ヒトＨＣ定常ドメインである。特定の実施形態において、分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
特定の実施形態において、本発明は、Ｓ２２８Ｐ置換を有するように、そして更に、Ｓ２２８Ｐ置換に加えて、Ｐ２３９Ｇ、Ｄ２６５Ａ、またはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含むように修飾されているＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体を提供し、ここで、位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。前記の特定の実施形態において、ＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインはヒトＨＣ定常ドメインである。特定の実施形態において、分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
もう１つの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを含むことが可能であり、ここで、ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、ＩｇＧ１の２３３位～２３６位のアミノ酸をヒトＩｇＧ２ ＨＣの対応アミノ酸で置換すること、ならびに３２７、３３０および３３１位のアミノ酸をヒトＩｇＧ４ ＨＣの対応アミノ酸で置換することにより、エフェクター－サイレントとなるように修飾されており、ここで、位置は、Ｅｕ番号付けに従い特定される。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
もう１つの実施形態において、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインのＦｃドメインは、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、ここで、該ポリペプチドは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩへの測定可能な結合を示さず、または野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低減した結合を示す。これらの及び他の置換は、ＷＯ９４２８０２７、ＷＯ２００４０９９２４９、ＷＯ２０１２１３００８３１；米国特許第９，７０８，４０６号、第８，９６９，５２６号、第９，２９６，８１５号；Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ４０６，２６７－２７３（２０００年７月２０日）に開示されている。特定の実施形態において、ＨＣ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／または欠失を更に含み、ここで、置換は、保存的突然変異または非保存的突然変異でありうる。
表２８～３６は、癌を有する個体を治療するための療法において、本明細書に開示されている抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わせて使用されうる例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体を示す。本発明はまた、抗体２５－９および３１－８以外の表に示されている抗体を提供し、また、抗体２５－９および３１－８以外の表に示されている抗体と薬学的に許容される担体とを各組成物が含む組成物を提供する。表２８～３６における全てのＨＣアミノ酸置換位置は、Ｅｕ番号付けスキームに従っている。
Figure 0007581225000028
Figure 0007581225000029
Figure 0007581225000030
Figure 0007581225000031
Figure 0007581225000032
Figure 0007581225000033
Figure 0007581225000034
Figure 0007581225000035
Figure 0007581225000036
（ｇ）例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメント
本発明の併用療法において使用されうる例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントには、ＰＤ－Ｌ１に結合しＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントが含まれ、更に、以下の抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメント、および以下の抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物が含まれる。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＨと、配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＬとを含むＦｖまたはｓｃＦｖである。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＨと、配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ）である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０３に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＨと、配列番号１０４に記載されているアミノ酸配列を有するデュルバルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ’）２である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨと、配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨとを含むＦｖまたはｓｃＦｖである。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨと、配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ）である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０５に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨと、配列番号１０６に記載されているアミノ酸配列を有するアベルマブＶＨとを含むＦ（ａｂ’）２である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨと、配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨとを含むＦｖまたはｓｃＦｖである。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨと、配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨとを含むＦ（ａｂ）である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、配列番号１０７に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨと、配列番号１０８に記載されているアミノ酸配列を有するアテゾリズマブＶＨとを含むＦ（ａｂ’）２である。
特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントは、１以上の免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶＤ）を含み、各ＩＳＶＤはラクダ重鎖のみの抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含み、但し、ＩＳＶＤは、国際特許出願ＷＯ２００８０７１４４７の開示における配列番号３９４～３９９を有する抗ＰＤ－Ｌ１ ＩＳＶＤを含まず、また、ＷＯ２００９０３０２８５に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１ ＩＳＶＤを含まず（それらの国際特許出願の両方を参照により本明細書に組み入れることとする）、例外的に、前記の１以上のＩＳＶＤがエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメイン（例えば、本明細書に開示されているエフェクター－サイレント抗体定常ドメインまたはＦｃドメインのいずれか）に融合または連結されているＩＳＶＤは、この但し書きによっては除外されない。
（ｈ）例示的な併用療法の投与レジメン
本発明は、ＰＤ－１遮断剤の免疫刺激効果とＣＴＬＡ－４遮断剤の抗腫瘍効果とを兼ね備えた抗癌療法であって、ＰＤ－１遮断剤と組み合わせて投与されたＣＴＬＡ－４遮断剤で典型的に観察される皮膚または腸ｉｒＡＥを示さない抗癌療法を提供する。本発明の特徴は、ＣＴＬＡ－４遮断剤が、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で１以上のＦｃＲへの測定可能な結合を示さず、またはＢｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、同じアイソタイプの野生型抗体の場合と比較して低減した１以上のＦｃＲへの結合を示すことである。したがって、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、測定可能なエフェクター機能を示さず、またはエフェクター機能の低減を示し、このことは、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤が、エフェクター機能を示すＣＴＬＡ－４遮断剤では利用できない用量および投与期間でＰＤ－１遮断剤との併用療法において使用されることを可能にする。この特徴は、本発明のＣＴＬＡ－４遮断剤を、現在利用可能なＣＴＬＡ－４遮断剤から際立たせるものである。
本発明の典型的な投与レジメンにおいては、ＣＴＬＡ－４遮断剤およびＰＤ－１遮断剤は、別々の用量および異なる方法で同時に個体に投与されうる。一般に、本発明のＣＴＬＡ－４遮断剤は、ＰＤ－１遮断剤との併用療法において、米国ＦＤＡによって特定の適応症に対するイピリムマブ／ニボルマブ併用療法に関して現在承認されているのと少なくとも同じ用量、投与頻度および治療期間で投与されうる。しかし、併用療法は、米国ＦＤＡによって承認されている特定の適応症には限定されず、本発明の併用療法から利益が得られうる任意の適応症を含みうる。現在承認されている用量は、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるニボルマブの投与の後のイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇである。ついで、この用量の組合せが３週間ごとに４用量にわたって繰り返されることが可能であり、ついで、必要に応じて、ニボルマブの用量が２週間ごとに継続されうる。しかし、他の実施形態において、本発明のＣＴＬＡ－４遮断剤は、１ｍｇ／ｋｇを超える用量、例えば、少なくとも３ｍｇ／ｋｇの用量で併用療法において投与されうる。更にもう１つの実施形態において、用量は少なくとも１０ｍｇ／ｋｇであることが可能であり、更に他の実施形態において、用量は約１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇでありうる。特定の実施形態において、本発明のＣＴＬＡ－４遮断剤は、承認されているイピリムマブ／ニボルマブ併用療法におけるものと同じ投与頻度および治療期間で投与されうる。特定の実施形態において、本発明のＣＴＬＡ－４遮断剤は、承認されているイピリムマブ／ニボルマブ併用療法におけるニボルマブのものと同じ投与頻度および治療期間で投与されうる。
併用療法の特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、個体の体重に基づかない用量で投与される。したがって、特定の実施形態において、ＣＴＬＡ－４結合剤は、約１０ｍｇ～３００ｍｇの間の用量で投与されうる。もう１つの実施形態において、用量は、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇおよび３００ｍｇからなる群から選択される。
本発明の併用療法において、ＰＤ－１遮断剤は、特定の適応症に対する単独療法におけるＰＤ－１遮断剤に関して承認されているものと同じ用量、投与頻度および治療期間で投与されうる。ＣＴＬＡ－４遮断剤の用量は、前記のとおりであることが可能であり、ＣＴＬＡ－４遮断剤は、前記と同じ投与頻度および治療期間でまたはＣＴＬＡ－４遮断剤と組合される特定のＰＤ－１遮断剤の場合と同じ投与頻度および治療期間で、投与されうる。
現在市販されているＰＤ－１遮断剤の特定の用量はＰＤ－１遮断剤によって異なり、したがって、本発明の併用療法の特定の実施形態において、用量、投与頻度および／または治療期間は、特定の適応症に対する特定のＰＤ－１遮断剤に関して米国ＦＤＡにより承認されているものと少なくとも同じでありうる。例えば、ペンブロリズマブは、必要に応じて［小児個体（２歳から１８歳まで）では、必要に応じて、３週間ごとに２ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇまで］３週間ごとに投与される２００ｍｇの用量として承認されており、ニボルマブは２週間ごとの３ｍｇ／ｋｇの用量として承認されており、セミプリマブ－ｒｗｌｃは、必要に応じて３週間ごとに投与される３５０ｍｇの用量として承認されており、アテゾリズマブは、必要に応じて３週間ごとに投与される１２００ｍｇの用量として承認されており、アベルマブは、必要に応じて２週間ごとに投与される１０ｍｇ／ｋｇまたは８００ｍｇの用量として承認されており、デュルバルマブは、必要に応じて２週間ごとに投与される１０ｍｇ／ｋｇの用量として承認されている。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントであり、これは約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１７５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２４０ｍｇ、約１７５ｍｇ～約２４０ｍｇ、または約２００ｍｇ～約２４０ｍｇの用量で投与されうる。幾つかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの用量は、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２４０ｍｇまたは２５０ｍｇである。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、必要に応じて、３週間ごとの頻度で投与されうる。本発明の併用療法のもう１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、２５０ｍｇを超える用量で投与可能であり、例えば、必要に応じて６週間ごとの頻度で約４００ｍｇの用量で投与されうる。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントであり、これは約１０ｍｇ／ｋｇ～約１２００ｍｇの用量で投与されうる。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１抗体フラグメントは、必要に応じて、２～３週間ごとの頻度で投与されうる。
ＰＤ－１遮断剤は、単独療法における現在市販されているＰＤ－１遮断剤に関して承認されているのと少なくとも同じ用量、投与頻度および治療期間で投与されうるが、本発明の任意の特定の組合せに関する実際の用量、投与頻度および治療期間は、ＰＤ－１遮断剤単独療法に関して承認されているものとは異なりうる。したがって、本発明の併用療法の特定の実施形態において、併用療法における任意の特定のＰＤ－１遮断剤の用量、投与頻度および治療期間は、併用療法に関して実施される臨床試験から決定される。
併用療法の特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、ニボルマブまたはニボルマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて、２～３週間ごとに３０～６０分にわたって３ｍｇ／ｋｇの用量で個体に静脈内投与され、この場合、ＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量は、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたって静脈内投与される。特定の実施形態において、ニボルマブまたはニボルマブのエフェクター－サイレント変異体は、３ｍｇ／ｋｇの初期用量で３０分にわたって個体に静脈内投与され、ついで、ＣＴＬＡ－４遮断剤が、同じ日に３０分にわたって３週間ごとに４用量にわたって静脈内投与され、ついで、ニボルマブが、３０分にわたる２週間ごとの２４０ｍｇまたは３０分にわたる４週間ごとの４８０ｍｇの一定用量で静脈内投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、ペンブロリズマブまたはペンブロリズマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて、３週間ごとに３０分にわたって２００ｍｇの用量で成体個体に静脈内投与され、または３週間ごとに３０分間にわたって２ｍｇ／ｋｇ～最大約２００ｍｇの用量で小児個体に静脈内投与され、この場合、各治療の後、ＣＴＬＡ－４遮断剤の用量が投与され、ここで、ＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量は、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたって静脈内投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、ペンブロリズマブまたはペンブロリズマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて６週間ごとに３０分にわたって４００ｍｇの用量で成体個体に静脈内投与され、この場合、各治療の後、ＣＴＬＡ－４遮断剤の用量が投与され、ここで、ＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量は、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたって静脈内投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、セミプリマブ－ｒｗｌｃまたはセミプリマブ－ｒｗｌｃのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて３週間ごとに３０分にわたって３５０ｍｇの用量で個体に静脈内投与され、この場合、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたって、ＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量が静脈内投与される。特定の実施形態において、セミプリマブ－ｒｗｌｃまたはセミプリマブ－ｒｗｌｃのエフェクター－サイレント変異体は、３５０ｍｇの初期用量で３０分にわたって個体に静脈内投与され、ついで、ＣＴＬＡ－４遮断剤が同じ日に３０分にわたって３週間ごとに必要に応じて投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、アテゾリズマブまたはアテゾリズマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて３週間ごとに６０分にわたって１２００ｍｇの用量で個体に静脈内投与され、この場合、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたってＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量が静脈内投与される。特定の実施形態において、アテゾリズマブまたはアテゾリズマブのエフェクター－サイレント変異体は、１２００ｍｇの初期用量で６０分にわたって個体に静脈内投与され、ついで、ＣＴＬＡ－４遮断剤が同じ日に３０分にわたって、３週間ごとに必要に応じて投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、アベルマブまたはアベルマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて２週間ごとに６０分にわたって１０ｍｇ／ｋｇまたは８００ｍｇの用量で個体に静脈内投与され、この場合、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたってＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量が静脈内投与される。特定の実施形態において、アベルマブまたはアベルマブのエフェクター－サイレント変異体は、１０ｍｇ／ｋｇまたは８００ｍｇの初期用量で６０分にわたって個体に静脈内投与され、ついで、ＣＴＬＡ－４遮断剤が同じ日に３０分にわたって、２週間ごとに必要に応じて投与される。
特定の実施形態において、ＰＤ－１遮断剤は、デュルバルマブまたはデュルバルマブのエフェクター－サイレント変異体であり、これは、必要に応じて２週間ごとに６０分にわたって１０ｍｇ／ｋｇの用量で個体に静脈内投与され、この場合、ＰＤ－１遮断剤の投与の後、ＰＤ－１遮断剤と同じ治療期間またはＰＤ－１遮断剤の期間より短い若しくは長い期間にわたってＣＴＬＡ－４遮断剤の各用量が静脈内投与される。特定の実施形態において、デュルバルマブまたはデュルバルマブのエフェクター－サイレント変異体は、１０ｍｇ／ｋｇの初期用量で６０分にわたって個体に静脈内投与され、ついで、ＣＴＬＡ－４遮断剤が同じ日に３０分にわたって、２週間ごとに必要に応じて投与される。
現在承認されているＣＴＬＡ－４遮断剤およびＰＤ－１遮断剤は、３０～６０分の時間枠にわたって個体への静脈内投与を可能にする濃度の製剤中で提供されるが、本発明の併用療法は、ＣＴＬＡ－４遮断剤および／またはＰＤ－１遮断剤のそれぞれが１回の注射でそれぞれが別々に個体に投与されることを可能にする製剤中で提供される実施形態を想定している。それらの２つの遮断剤の少なくとも１つを１回の注射で投与しうることは、両方の遮断剤を個体に投与するための時間を有意に短縮するであろう。
もう１つの実施形態において、本発明は、ＣＴＬ－４遮断剤およびＰＤ－１遮断剤が同時に共投与される併用療法を提供する。共投与は、ＣＴＬＡ－４遮断剤およびＰＤ－１遮断剤を別々の製剤中で提供し、各製剤を、別々のＩＶによって同時に個体に提供することにより、または混合後に混合物をＩＶによって個体に投与することにより、または各製剤を個体に別々に注射することにより、達成されうる。共投与は、ＣＴＬ－４遮断剤およびＰＤ－１遮断剤を単一製剤中で提供し、ついでそれを１回のＩＶまたは１回の注射で個体に投与することによっても達成されうる。
（ｉ）併用療法処置
本発明の併用療法は、任意の増殖性疾患の治療、特に癌の治療に使用されうる。特定の実施形態において、本発明の併用療法は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌または唾液腺癌を治療するために使用されうる。
もう１つの実施形態において、本発明の併用療法は、膵臓癌、気管支癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭癌、肝癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌を治療するために使用されうる。
現在市販されているＰＤ－１遮断剤は、黒色腫（転移性または切除不能）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、尿路上皮癌、ＭＳＩＨＣ、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、腎細胞癌（進行性を含む）および皮膚扁平上皮癌から選択される少なくとも１以上の癌を治療するために米国ＦＤＡにより承認されている。したがって、本発明の併用療法は、黒色腫（転移性または切除不能）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、尿路上皮癌、ＭＳＩＨＣ、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、腎細胞癌（進行性を含む）および皮膚扁平上皮癌から選択される少なくとも１以上の癌を治療するために使用されうる。
（ｊ）化学療法と組合された併用療法
本発明の併用療法は、化学療法と組み合わせて癌を有する個体に投与されうる。個体は、本発明の併用療法を個体が受けているのと同時に化学療法を受けることが可能である。個体は、化学療法を完了した後、本発明の併用療法を受けることが可能である。個体は併用療法の完了後に化学療法が投与されうる。本発明の併用療法は、化学療法を受けている又は化学療法を完了しており疾患進行または再発癌を伴う再発性または転移性癌を有する個体にも投与されうる。
化学療法は、以下のものからなる群から選択される化学療法剤を含みうる。
（ｉ）アルキル化剤、例えば二官能性アルキル化剤、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシルおよびメルファラン（これらに限定されるものではない）；
（ｉｉ）単官能性アルキル化剤、例えばダカルバジン、ニトロソウレアおよびテモゾロミド（経口ダカルバジン）（これらに限定されるものではない）；
（ｉｉｉ）アントラサイクリン、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンおよびバルビシン（これらに限定されるものではない）；
（ｉｖ）細胞骨格破壊因子（タキサン）、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサンおよびタキソテール（これらに限定されるものではない）；
（ｖ）エポチロン、例えばイキサベピロンおよびウチデロン（これらに限定されるものではない）；
（ｖｉ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、例えばボリノスタットおよびロミデプシン（これらに限定されるものではない）；
（ｖｉｉ）トポイソメラーゼｉのインヒビター、例えばイリノテカンおよびトポテカン（これらに限定されるものではない）；
（ｖｉｉｉ）トポイソメラーゼｉｉのインヒビター、例えばエトポシド、テニポシドおよびタフルポシド（これらに限定されるものではない）；
（ｉｘ）キナーゼインヒビター、例えばボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブおよびビスモデギブ（これらに限定されるものではない）；
（ｘ）ヌクレオチド類似体および前駆体類似体、例えばアザシチジン、アザチオプリン、フルオロピリミジン（例えば、カペシタビン、カルモフル、ドキシフルリジン、フルオロウラシルおよびテガフル）、シタラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサートおよびチオグアニン（ｔｉｏｇｕａｎｉｎｅ）（旧称：ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）（これらに限定されるものではない）；
（ｘｉ）ペプチド抗生物質、例えばブレオマイシンおよびアクチノマイシン（これらに限定されるものではない）；白金に基づく物質、例えばカルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチン（これらに限定されるものではない）；
（ｘｉｉ）レチノイド、例えばトレチノイン、アリトレチノインおよびベキサロテン（これらに限定されるものではない）；ならびに
（ｘｉｉｉ）ビンカアルカロイドおよびその誘導体、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン（これらに限定されるものではない）。
化学療法用の化学療法剤の用量の選択は、物質の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、物質の免疫原性、および治療される個体における標的細胞、組織または器官の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。追加的な治療用物質の用量は、許容レベルの副作用をもたらす量であるべきである。したがって、各追加的治療用物質の用量および投与頻度は、部分的には、個々の治療用物質、治療される癌の重症度、および患者の特性に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際の指針が利用可能である。例えば、以下のものを参照されたい：Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；第５７版（２００２年１１月）。適切な投与レジメンの決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされることが可能であり、例えば、個体の臨床履歴（例えば、過去の治療）、治療される癌の型および病期、ならびに併用療法における治療用物質の１以上に対する応答のバイオマーカーに左右される。
例えば、ペンブロリズマブは、（ｉ）ペメトレキセドおよび白金化学療法またはカルボプラチンならびにパクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセルのいずれかとペンブロリズマブとを含む非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療のための、および、（ｉｉ）ペンブロリズマブおよび白金含有化学療法を含む頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）の治療のための併用療法に関して米国ＦＤＡにより現在承認されており、そして、アテゾリズマブは、ベバシズマブ（商品名ＡＶＡＳＴＩＮで販売されている抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体）、パクリタキセルおよびカルボプラチンを含むＮＳＣＬＣの治療のための併用療法に関して現在承認されている。
したがって、本発明は、白金含有化学療法、ペメトレキセドおよび白金化学療法、または、カルボプラチンならびにパクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセルのいずれかを含む化学療法の工程を更に含む、本発明の併用療法の実施形態を含む。特定の実施形態において、化学療法工程を伴う併用療法は、少なくともＮＳＣＬＣおよびＨＮＳＣＣを治療するために使用されうる。
化学療法工程と更に組合された併用療法は、任意の増殖性疾患の治療、特に癌の治療に使用されうる。特定の実施形態において、本発明の併用療法は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌または唾液腺癌を治療するために使用されうる。
もう１つの実施形態において、化学療法工程と更に組合された併用療法は、膵臓癌、気管支癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭癌、肝癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌を治療するために使用されうる。
特定の実施形態において、化学療法工程を伴う併用療法は、黒色腫（転移性または切除不能）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、尿路上皮癌、ＭＳＩＨＣ、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、腎細胞癌（進行性を含む）および皮膚扁平上皮癌から選択される少なくとも１以上の癌を治療するために使用されうる。
以下の実施例は、本発明の更に詳細な理解を促すことを意図したものである。
実施例１
Ｆｃ機能は腸炎症ｉｒＡＥの誘発に必要である
腸炎症性ｉｒＡＥは、抗ＣＴＬＡ－４抗体単独療法またはそれと抗ＰＤ－１抗体との併用による免疫療法中の癌患者において観察されている。構成的および条件付きノックアウトモデルにおけるＣＴＬＡ－４欠損マウスの前臨床試験は、複数の器官における重度の免疫性炎症疾患の発生を示している。しかし、代理抗ＣＴＬＡ－４抗体による同系腫瘍モデルの治療は、癌患者で観察される毒性を予測する明白なｉｒＡＥを誘発することが報告されていない。同様に、腸炎症の組織病理学的評価を、ＣＴ２６同系モデルまたは異種移植モデル（ＣＴ２６結腸癌細胞株を接種したマウス）において評価した。Ｆｃコンピテント抗マウスＣＴＬＡ－４ ｍＡｂ ９Ｄ９－ｍＩｇＧ２ａ（α－ＣＴＬＡ－４またはα－ＣＴＬＡ４）（ｑ４×４）で処置されたＣＴ２６腫瘍担持マウスは、腸組織粘膜固有層において観察された最小限度の顆粒球浸潤（グレード１／５）を引き起こした。Ｆｃ－突然変異抗ｍＣＴＬＡ－４ ｍＡｂ ９Ｄ９－ｍＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ（α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ））、無Ｆｃ抗ｍＣＴＬＡ－４ ＩＳＶＤ Ｆ８９４（ＣＴＬＡ－４ Ｎａｂ）またはアイソタイプで処置されたコホートにおいては、顆粒球浸潤は観察されなかった。一方、付随する潰瘍形成も他の組織損傷も観察されなかった。
α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）Ｆｃ突然変異体は、Ｆｃγ受容体に対する測定可能なアフィニティを欠いており（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２３：４１－５１（２００５））、したがって、Ｆｃエフェクター機能を欠いている。マウスにおいては、抗マウスＣＴＬＡ４ ｍＡｂ単独療法の抗腫瘍効果は、Ｆｃエフェクター機能を介して腫瘍内制御性Ｔ細胞枯渇をもたらす抗体の能力に依存する（Ｓｅｌｂｙら，前掲）。したがって、ＣＴＬＡ－４ Ｎａｂおよびα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）は共に、単独療法の抗腫瘍効果を有するとは予想されていなかった。
前記の最小限度の組織病理学的所見は、腸における炎症性細胞活性化のマーカーを検出するための、潜在的により高感度の手段として、遺伝子発現プロファイルを評価するように促した。本発明者らは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）前臨床モデルおよび患者の糞便サンプルおよび生検における腸炎症に関連する遺伝子のプロテオミクスおよび発現プロファイリングのために、本発明者らが既に開発していたＰＣＲ遺伝子発現パネルを利用した（Ｃａｙａｔｔｅ，Ｃら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，３：ｅ１０（２０１２））。
α－ＣＴＬＡ－４での処置の開始後の種々の時点で小腸および結腸組織サンプルにおいて遺伝子発現プロファイルを測定し、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）と比較して、腸炎症誘発のためのＦｃ機能の役割を詳細に評価した。図１Ａに示されているとおり、α－ＣＴＬＡ－４で処置されたマウスの近位小腸サンプルにおいては多数の腸炎症遺伝子の発現がアップレギュレーションされたが、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）で処置されたマウスの場合にはアップレギュレーションされなかった。その結果は、無症状の状況での小腸および結腸組織における遺伝子発現により腸炎症経路の発現が検出されうることを示した。
腸炎症に関連する遺伝子のアップレギュレーションは、６～７週間以上の処置の後のイピリムマブ処置患者において観察されたとおり、臨床的腸炎への進行に対する持続的処置の効果を評価することを可能にした（Ｓａｍａａｎら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１５：２２２－２３４（２０１８））。腸炎症と腸炎への進行とに対するＣＴＬＡ－４遮断およびＦｃ機能の相対的効果を評価するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスにα－ＣＴＬＡ－４、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）を週２回投与した。２つの群のマウス（１つの群はＣＴ２６腫瘍を有し、ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスの１群は腫瘍を有さない）をＦｃコンピテントα－ＣＴＬＡ－４で処置して、腸炎症の誘導に対する腫瘍免疫の誘導および腫瘍増殖からの潜在的寄与を評価した。腸炎への進行をモニターするために、体重および体調スコアを持続的処置の全期間にわたって週２回評価した。
アイソタイプ抗体およびα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）が投与されたマウスにおいては、体重は第５０日まで増加し続けた。対照的に、α－ＣＴＬＡ－４が投与されたマウスは、約３５～４０日後に平均体重の減少を示した（図１Ｂ）。第４９日および第５０日のＦＩＴＣ－デキストラン強制飼養マウスにおける評価では、腸透過性はα－ＣＴＬＡ－４処置群の両方で増加したが、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスにおいては増加しなかった（図１Ｃ）。病理学者（Ｌ．Ａ）により評価された近位小腸および結腸の炎症の組織学的証拠は、α－ＣＴＬＡ－４処置群における中等度および重度の腸炎への進行を示し（図１Ｄおよび図１Ｅ）、広範な免疫浸潤、粘膜の肥厚および杯細胞の喪失を伴っていた。対照的に、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスにおいては腸炎は観察されず、これは、ＣＴＬＡ－４遮断誘発性腸炎にはＦｃ機能が必要であるという証拠を示している。注目すべきことに、腫瘍増殖および抗腫瘍応答は、α－ＣＴＬＡ－４誘発性腸炎に必要でなかった。
高いＦｃγＲアフィニティを有するマウスＩｇＧ２ａキメラ抗体を、検出可能なＦｃγＲ結合を有さない突然変異ＩｇＧ１キメラと比較した実験において、強力な単独療法抗腫瘍応答には、強力なＦｃγＲ機能を有する抗ＣＴＬＡ－４抗体が必要であることが既に報告されている（Ｓｅｌｂｙら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．１：３２－４２（２０１３））。マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）バックボーン上の抗ＣＴＬＡ－４抗体で観察される強力な単独療法において、腫瘍におけるＴｒｅｇの特異的枯渇が表面上重要な役割を果たしている（Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０：１６９５－７１０（２０１３））。抗ＰＤ－１の効果に対するＣＤ２８の重要性を示す最近の報告（参考文献を参照されたい）は、リガンドＣＤ８０およびＣＤ８６に対するＣＴＬＡ－４の、より強力な相互作用をＣＴＬＡ－４アンタゴニストで遮断することによる、ＣＤ２８機能の増強が、Ｔｒｅｇ ＴＩＬの枯渇を要することなく強力な併用抗腫瘍効果をもたらしうることを、本発明者らに示唆した。ＣＤ８０およびＣＤ８６への結合を阻害しうる、マウスＣＴＬＡ－４（ｍＣＴＬＡ－４）に特異的なＩＳＶＤを、重鎖のみのラクダ抗体から誘導された単一ドメインＶＨＨ抗体フラグメントを使用して開発した。これらの小さな１５ｋＤａのタンパク質はＦｃ領域を欠いているため、ＦｃγＲに結合しない。完全なＦｃ機能を有する抗体と比較するために、強力な単独療法抗腫瘍効果を有することが既に示されているα－ＣＴＬＡ－４（参考文献を参照されたい）を使用した。異なるＣＴＬＡ－４エピトープに結合する潜在的影響に関する対照実験を行うために、ＦｃγＲに対する検出可能なアフィニティを欠くα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）を使用して、抗腫瘍効果および忍容性のための強力なＦｃγＲ機能の必要性に関する対照実験を行った。
ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂは、半減期延長（ＨＬＥ）サブユニットとしての抗ヒトアルブミンＶＨＨドメインおよび３５ＧＳリンカーより連結された２つの抗ＣＴＬＡ－４ ＶＨＨドメインから構成される（配列番号６１を参照されたい）。参照アンタゴニスト（１００％）として使用したα－ＣＴＬＡ－４と比較して、抗ＣＴＬＡ－４ ＶＨＨはＣＤ８０およびＣＤ８６の両方に対して９６％の阻害を示した（図２Ａおよび図２Ｂ）。増殖（図２Ｃ）、ＩＦＮγ（図２Ｄ）およびＩＬ－２応答（図２Ｅ）を増強する能力に関して、インビトロＭＬＲベースのバイオアッセイにおいて、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂをα－ＣＴＬＡ－４およびエフェクター－サイレントα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）と更に比較した。
ＣＴＬＡ－４遮断のためのＦｃ機能はＰＤ－１併用免疫療法に必要でない
３つのＣＴＬＡ－４アンタゴニストでの単独療法および抗マウスＰＤ－１抗体ｍＤＸ４００（α－ＰＤ－１）との併用療法により誘発される相対的な抗腫瘍効果を、抗ＰＤ－１単独療法に対して中等度の応答しか示さない同系ＣＴ２６結腸癌腫瘍モデルにおける腫瘍体積の経時的変化を測定することにより評価した（図３Ａ～３Ｅ）。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）のいずれかで処置された単独療法コホートにおいては抗腫瘍活性は観察されず、アイソタイプ対照（図３Ａの群１）と同等であった。α－ＣＴＬＡ－４で処置されたマウスにおいて強力な抗腫瘍単独療法活性が観察され、これは、マウス同系腫瘍モデルにおける抗腫瘍単独療法の有効性のためには抗ＣＴＬＡ－４抗体におけるＦｃ機能が必要であることを示した以前の報告と一致している（Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０：１６９５－７１０（２０１３））（図３Ａの群２）。α－ＰＤ－１単独での処置は、α－ＣＴＬＡ－４と比較して低ないし中程度の抗腫瘍増殖阻害を示した。しかし、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）とα－ＰＤ－１との併用療法は、α－ＣＴＬＡ－４単独またはα－ＣＴＬＡ－４とα－ＰＤ－１との併用で観察されたものに匹敵する強力な抗腫瘍効果をもたらした（図３Ａの群２）。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂおよびα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）はＣＴＬＡ－４上の別々のエピトープに結合するため、その効果はエピトープに特異的ではない。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）およびα－ＣＴＬＡ－４の間のα－ＰＤ－１併用処置において同様の抗腫瘍応答が観察されたため、Ｆｃ機能とは無関係に強力な併用効果の更なる証拠が明らかであった。図３Ｄは、図３Ａに要約されている１０匹のマウス処置のそれぞれに関する個々の結果を示す。α－ＣＴＬＡ－４処置マウスにおいて、およびα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ｓ）とα－ＰＤ－１との組合せで処置されたマウスにおいて、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ｓ）のみが投与されたマウスと比較して、ＣＤ８ Ｔ細胞の増殖およびＣＤ８／Ｔｒｅｇ比の増加が観察された（図３Ｂ）。これらの結果が示すところによると、Ｆｃ機能を欠く抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニストを抗ＰＤ－１アンタゴニストと組み合わせることにより、抗ＰＤ－１アンタゴニスト単独療法で達成可能なものより優れた抗腫瘍効果が得られ、単独療法におけるＦｃ機能を有する抗ＣＴＬＡ－４抗体の抗腫瘍効果と同様の抗腫瘍効果が組合せにおいて得られた。
強力な組合せ活性に関連する潜在的な相補的メカニズムを解明するために、処置開始の９日後の腫瘍における有効な癌免疫療法に関連する免疫応答遺伝子の調節を調べた。α－ＣＴＬＡ－４処置マウスからの腫瘍のＰＣＲ発現プロファイリングは、ＩＦＮγ、ＩＦＮ応答遺伝子、ケモカイン、炎症性サイトカインおよびＭＨＣを含む、有効な免疫療法に関連する多数の遺伝子の強力なアップレギュレーションを示した（図３Ｃ）。α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスからの腫瘍においては中程度のアップレギュレーションしか観察されず、このことは、α－ＣＴＬＡ－４処置腫瘍において観察された強力なアップレギュレーションが少なくとも部分的にＦｃ機能に依存していたことを示している。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂおよびα－ＰＤ－１処置マウスからの腫瘍においても中程度の応答が観察された。対照的に、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）とα－ＰＤ－１とで処置された併用療法コホートにおいては、腫瘍免疫応答遺伝子の強力なアップレギュレーションが観察された。図３Ｄは、ＰＤ－１遮断の非存在下では、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂもα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）も抗腫瘍活性を有さないことを示している。これらのデータは、純粋なＣＴＬＡ－４遮断およびＰＤ－１遮断の相補的メカニズムがＦｃに非依存的に強力な組合せ利益をもたらしうるという仮説を支持している。
抗ＰＤ－１と組合された、Ｆｃ機能非含有ＣＴＬＡ－４遮断は優れた治療指数をもたらす
免疫チェックポイント遮断の顕著な特徴は、いずれかのチェックポイントのみを標的化する場合と比較して優れた臨床効果をもたらす、抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体の臨床的に検証された併用（組合せ）の利点である。しかし、抗ＰＤ－１とのＣＴＬＡ－４遮断併用療法に関連する免疫関連毒性（ｉｒＡＥ）は患者の腸炎症の誘発の増加に関連づけられている（Ｒｉｂａｓ ＆ Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５９：１３５０－１３５５（２０１８））。また、α－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）および無Ｆｃ ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂは共に、強力な抗腫瘍免疫を誘導するためにはα－ＰＤ－１との組合せが必要であった。腸炎症の誘発に対する強力な腫瘍免疫の潜在的影響に関する対照実験を行うために、処置開始後第１８日に、５回の処置の後でα－ＰＤ－１とα－ＣＴＬＡ、α－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）またはＣＴＬＡ－４ ｎＡｂのいずれかとの併用療法を受けたマウスにおいて腸炎症発現プロファイルを調べた（図４Ｄ）。
腸炎症に対するＣＴＬＡ－４遮断およびＦｃ機能の相対的効果を評価するために、α－ＣＴＬＡ、α－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）、無Ｆｃ ＣＴＬＡ４ ｎＡｂ、α－ＰＤ－１を、またはα－ＰＤ－１と種々の抗ｍＣＴＬＡ４アンタゴニストとの組合せをナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスに週２回投与した。体重および体調スコアを研究の全期間にわたって週２回評価した。全ての群におけるマウスの体重は約第２０日まで増加した（図４Ａ）。アイソタイプ、α－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）、ＣＴＬＡ４ ｎＡｂもしくはα－ＰＤ－１またはそれらの組合せが投与されたマウスにおいては、体重は第５０日まで増加し続けた。α－ＣＴＬＡが投与されたマウスは約第３０日の後から平均体重の減少を示し、第５０日までに処置前のレベル付近までの減少を示した。α－ＰＤ－１と組合されたα－ＣＴＬＡの投与は平均体重のより急速な減少を招き、第２０日から第５０日にかけて処置前レベル未満までの減少を示した。注目すべきことに、α－ＰＤ－１と組合されたα－ＣＴＬＡで処置されたマウスにおいては第２８日から、そしてα－ＣＴＬＡが投与されたマウスにおいては第４２日から、８匹中２匹のマウスの体調スコアが２（体調不良）に低下した。これらのコホートは光沢のあるモジャモジャな毛皮を示し、これらのコホートにおいては腹部腫脹が観察された。
炎症の分析は７週間の投与の後に予定され、このとき、α－ＣＴＬＡが投与されたマウスはその期間にわたって体重の減少を示し、それは、α－ＰＤ－１と組合せて投与された場合に悪化した（図４Ａの群Ｂ）。対照的に、エフェクター－サイレントＣＴＬＡ－４遮断剤またはα－ＰＤ－１はいずれも、その期間中にアイソタイプ対照と比較して有意な体重減少を示さなかった（図４Ｂの群Ａ）。
併用処置群の全てのマウスならびにアイソタイプ対照およびα－ＰＤ－１処置群の４匹のマウスを、組織収集のために第５０日に安楽死させた。アイソタイプ対照群およびα－ＰＤ－１処置群の残りの４匹のマウスならびに単剤処置群の全てのマウスを、組織収集のために第５４日に安楽死させた。剖検時に、炎症遺伝子の発現を決定するためのＲＴ－ｑＰＣＲのために、および組織病理学的検査による炎症の評価のために、近位小腸および結腸を摘出した。
アイソタイプ対照と比較した、各処置群からの近位小腸における遺伝子発現のヒートマップを（図４Ｄ）に示す。α－ＣＴＬＡの投与は、空腸（図４Ｄ）および結腸（図４Ｅ）の炎症遺伝子のアップレギュレーションを誘導するのに十分であった。α－ＣＴＬＡとα－ＰＤ－１との組合せは、α－ＣＴＬＡ単独療法より一層強力な、炎症遺伝子のアップレギュレーションを誘導した。対照的に、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂの投与は腸炎症遺伝子発現をほとんど又は全く誘導せず、α－ＰＤ－１と組合された場合にわずかなアップレギュレーションを誘発したに過ぎなかった。同様に、α－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）の単独またはα－ＰＤ－１との組合せの投与は、炎症遺伝子の最小限度ないし低度の誘発をもたらした。ＦＩＴＣ－デキストラン強制経口投与後の血清において評価された腸透過性は、α－ＣＴＬＡ処置マウスおよびα－ＣＴＬＡとα－ＰＤ－１との併用処置を受けたマウスにおいて有意に増加した。
近位小腸における炎症の重症度を第５０日の近位空腸における腸炎の組織学的評価によりスコア化した。組織病理学的評価により、α－ＣＴＬＡの投与はほとんどのマウスにおいて軽度ないし重度の炎症をもたらした。α－ＣＴＬＡとα－ＰＤ－１との組合せで処置されたコホートにおいては、持続的処置は全てのマウスにおいて中等度ないし非常に重度の炎症を誘発した（図４Ｂ）。非常に重度の腸炎を有するマウスは、空腸炎、中程度の数の肥満細胞を伴うびまん性好中球病変およびマイスナー神経叢のニューロンの変性を示した。対照的に、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）のいずれかの投与は、組織病理学的評価において炎症を誘発しなかった。α－ＰＤ－１と組合されたＣＴＬＡ－４ ｎＡｂの投与は、炎症を引き起こさずまたは数匹のマウスにおいて最小限度ないし軽度の炎症を引き起こした。α－ＰＤ－１と組合されたα－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）の投与は、８匹中僅か１匹のマウスにおいて軽度の炎症を引き起こした。代表的な顕微鏡写真は各処置群における炎症の相対レベルを示している（図４Ｃ）。
図５Ａ～５Ｃに示されているとおり、α－ＣＴＬＡ－４ Ｆｃエフェクター機能は皮膚炎症を誘発するが（図５Ａ）、全身炎症を引き起こさず、この場合、腎臓、肝臓または肺においては検出可能な炎症が認められなかった（図５Ｃ）。耳の皮膚のＩＬ－１７産生Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞および好中球の絶対数をフローサイトメトリーで測定した。図５Ｂに示されているとおり、α－ＣＴＬＡ－４処置マウスの耳の皮膚には高レベルのＩＬ－１７産生Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞および好中球が存在したが、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスのものには存在しなかった。総合すると、これらのデータは、エフェクター機能を有する抗マウスＣＴＬＡ－４抗体による腸炎症の誘発におけるＦｃエフェクター機能の重要な役割を裏付けている。Ｆｃエフェクター機能は腸炎のＢＡＬＢ／ｃマウスモデルにおいて抗マウスα－ＣＴＬＡ誘発性腸炎症に寄与したが、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ処置マウスまたはα－ＣＴＬＡ（Ｄ２６５Ａ）処置マウスにおいては腸炎症は軽度であり、または存在しなかった。
要約すると、２つの特性がα－ＣＴＬＡ－４によるＣＴ２６腫瘍モデルの腸炎症の誘発に関連していた。第１に、Ｆｃ機能性アイソタイプ対照は、炎症に関連する遺伝子発現を誘導しなかったので、ＣＴＬＡ－４の特異性が必要であった。しかし、ＣＤ８０／ＣＤ８６リガンドへのＣＴＬＡ－４結合の遮断は、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂおよびα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスの腸における炎症遺伝子のアップレギュレーションを誘導するには不十分であった。したがって、α－ＣＴＬＡ－４におけるＩｇＧ２ａアイソフォームに存在する強力なＦｃ機能の能力が腸炎症の誘発に必要であった。
腸炎症の活性化はＴｒｅｇの枯渇とは無関係にＴｅｆｆ細胞の活性化により開始される
抗ＣＴＬＡ－４媒介性抗腫瘍免疫の作用メカニズム（ＭＯＡ）は、理論的には、Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞およびＴエフェクター（Ｔｅｆｆ）細胞集団（ＣＴＬ、ＴＨ１細胞など）に対する薬力学（ＰＤ）効果により媒介される。腫瘍微小環境（ＴＩＬ）内のＴｒｅｇ細胞の枯渇は、マウス同系腫瘍モデルにおける抗ＣＴＬＡ－４抗体の顕著なＭＯＡである（Ｓｉｍｐｓｏｎら，前掲）。また、抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂによるＦｃ－ＦｃγＲの同時篏合は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＣＤ２８シグナル伝達を調節して、Ｔｒｅｇの枯渇に無関係にＴ細胞活性化の増強をもたらす（Ｗａｉｇｈｔら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，３３：１０３３－１０４７（２０１８）。
ＴｒｅｇおよびＴエフェクター細胞に対するＣＴＬＡ－ ４ｎＡｂからのα－ＣＴＬＡ－４の効果の差次的効果を特徴づけるために、腫瘍（ＴＩＬ）、結腸粘膜固有層、血液および脾臓からのＴ細胞集団に対するフローサイトメトリーを皮下投与の２０時間後に行った。交差遮断せずに薬物結合ＣＴＬＡ－４の染色を可能にする抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂクローンＵＣ１０－４Ｂ９（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、α－ＣＴＬＡ－４またはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）で処置されたマウスからのＴｒｅｇにおけるＣＴＬＡ－４発現レベルを測定することが可能であった。文献に既に文献で報告されているとおり（Ｓｅｌｂｙら，前掲，Ｓｉｍｐｓｏｎら，前掲）、本発明者らは、ＣＴ２６腫瘍担持マウスの脾臓（ＣＴＬＡ－４ｌｏ）および腫瘍微小環境（Ｔｒｅｇ ｈｉ）内のＴｒｅｇにおけるＣＴＬＡ－４の差次的発現を観察した。ＰＢＭＣ内のＴｒｅｇは、二峰性レベルのＣＴＬＡ－４ｌｏ－ｍｉｄを発現した。興味深いことに、結腸粘膜固有層からのＴｒｅｇは二峰性レベルのＣＴＬＡ－４ｍｉｄ－ｈｉを発現した。結腸におけるＣＴＬＡ－４ｈｉ Ｔｒｅｇは同様のレベルのＴｒｅｇ ＴＩＬ集団を発現した。種々のＴ細胞集団上のＣＴＬＡ－４の差次的発現レベルは、受容体密度に依存する殺傷メカニズムにより、ＡＤＣＣ媒介性枯渇の能力に影響を及ぼす。Ｔｒｅｇ集団は、通常より高いレベルのＣＴＬＡ－４を発現するが、腫瘍環境中のＴｒｅｇは、脾臓で見出されるもの（ＭＦＩ＝２，４００）より遥かに高いレベル（３．３倍高い；Ｔｒｅｇ ＴＩＬのアイソタイプ対照においてはＭＦＩ＝８，１００）を発現する。より高いＣＴＬＡ－４レベル（ＣＴＬＡ－４ｈｉ モードＭＦＩ＝１０，０００）を発現した結腸からの粘膜固有層Ｔｒｅｇは、フローサイトメトリーを使用した相対的発現レベルに関してＴｒｅｇ ＴＩＬに類似していた（図６Ａ）。図６Ｂ～６Ｄに示されているとおり、Ｔｒｅｇの有意な枯渇は、最も高いＣＴＬＡ－４発現密度を示すα－ＣＴＬＡ－４処置マウスの腫瘍微小環境からのＴＩＬに限定されていた。Ｆｃ機能を欠くＦｃ突然変異α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）での処置は、Ｔｒｅｇの枯渇を引き起こさなかった。
より高いＣＴＬＡ－４レベルを発現する細胞はα－ＣＴＬＡによる枯渇を受けやすいという仮定に基づいて、本発明者らは、Ｔｒｅｇ ＴＩＬ集団と同様に、粘膜固有層におけるＣＴＬＡ－４ｈｉ Ｔｒｅｇが枯渇すると予想した。驚いたことに、α－ＣＴＬＡ－４処置マウスの腫瘍から単離されたＴｒｅｇ ＴＩＬだけが枯渇しているようであった。α－ＣＴＬＡ－４処置マウスの結腸からの粘膜固有層由来Ｔｒｅｇは枯渇していないようであった。α－ＣＴＬＡ－４処置マウスの結腸からの粘膜固有層由来Ｔｒｅｇの検出可能な枯渇は観察されなかった。このことは、腸炎症の誘発が腸粘膜におけるＴｒｅｇの喪失によって開始されなかったことを示唆している。
本発明者らは、α－ＣＴＬＡ－４誘発性腸炎症に寄与した可能性のあるサプレッサー機能をもたらすＴｒｅｇにおける可能な表現型の変化を調べた。ＭＣ３８腫瘍が移植されたＦｏｘＰ３ ＧＬＤレポーターマウスからの結腸粘膜固有層（ＬＰ）Ｔｒｅｇを、Ｔｒｅｇ機能に関連する遺伝子のＰＣＲ発現プロファイリングのために選別した（図７Ａ）。しかし、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）処置マウスと比較して、α－ＣＴＬＡのＬＰ Ｔｒｅｇ細胞においては有意な遺伝子発現の差異は観察されなかった。大腸炎のＣＤ４５ＲＢｈｉ Ｔ細胞移入モデルを使用して、Ｔｒｅｇに対するＦｃ機能の潜在的効果を更に詳細に調べた。ＣＤ４５ＲＢｈｉ Ｔ細胞の存在下のＴｒｅｇ細胞の受動的移入は大腸炎の発生からマウスを防御した（図７Ｂ～７Ｃ）。Ｔｒｅｇ細胞とＣＤ４５ＲＢｈｉ Ｔ細胞とが共投与されたマウスをα－ＣＴＬＡ－４で処置すると、Ｔｒｅｇ防御の喪失および大腸炎の発生がもたらされた。対照的に、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ処置マウスにおいては防御の喪失は観察されなかった（図７Ｂ～７Ｃ）。処置の２４時間後のマウスからのフローサイトメトリー選別結腸Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞の遺伝子発現プロファイルは、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはアイソタイプ対照で処置されたマウスから得られた細胞で観察された遺伝子発現と比較して、α－ＣＴＬＡ－４処置マウスの遺伝子発現の有意なアップレギュレーションを示し、これは、ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈで観察されたものに類似している。全体として、これらの結果が示唆しているところによると、Ｆｃ媒介性Ｔｒｅｇ枯渇はα－ＣＴＬＡ－４による腸炎症の誘発に必須ではないが、腸炎症に応答したＴｒｅｇの調節機能はモジュレーションされうる。
抗原提示細胞上のＣＤ８０、ＣＤ８６およびＦｃγＲならびにＴ細胞上のＣＴＬＡ－４およびＣＤ２８の限定的発現は、Ｔｒｅｇ枯渇には無関係にＴ細胞のＦｃ機能的α－ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ活性化に重要な役割を果たしている可能性がある（Ｗａｉｇｈｔら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，３３：１０３３－１０４７，２０１８）。腫瘍におけるＦｃ増強活性化は有利であるが、腸組織における意図しないｉｒＡＥをもたらしうる。本発明者らは、腸組織の免疫エフェクター細胞活性化におけるＦｃ機能の寄与の可能性を調べた。腫瘍と結腸との両方からのマクロファージにおけるＣＤ１６／３２発現のフローサイトメトリー分析は、脾臓マクロファージと比較して、抗原提示細胞上の有意に高いレベルのＦｃＲを示した（図８Ａおよび８Ｂ）。また、腫瘍および結腸粘膜固有層におけるＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｆ４／８０＋ マクロファージの割合は、脾臓におけるものよりも実質的に高かった（図８Ｃ）。Ｆｃ機能は腸組織におけるＩＬ１β、ＴＮＦαおよびＩＦＮγサイトカイン応答の活性化に必要であり、処置開始の１０日後という早い時期に明らかであり、これは腸炎症の明白な証拠が見られるかなり前であり、このことはｉｒＡＥ誘導における重要な役割を示唆している（図８Ｃ）。
１ヶ月間の処置の後にα－ＣＴＬＡ－４処置マウスの結腸粘膜固有層から単離されたＣＤ４ Ｔ細胞におけるサイトカイン応答は、Ｆｃ媒介性腸炎症に関連するＩＬ－１７、ＴＮＦαおよびＩＦＮγ産生細胞の、より高い割合を示した（図８Ｅ）。また、α－ＣＴＬＡ－４処置マウスにおいては好中球のＦｃ依存的増加もで誘導された（図８Ｅ）。全体的に、これらの結果は、ＣＴＬＡ－４遮断関連腸炎症がエフェクター細胞のＦｃ媒介性活性化により誘発されたことを示しており、これは、図１１に示されているとおり、炎症性サイトカイン応答の刺激をもたらすＴ細胞とのＡＰＣの細胞架橋のＦｃγＲ抗体増強により増強される。腸炎症のＦｃ媒介性誘発は、Ｔｒｅｇ枯渇には無関係にエフェクターＴ細胞により誘発されうる。
考察
幾つかの最近の報告は同系マウス癌免疫療法腫瘍モデルにおけるＣＴＬＡ－４遮断単独療法のためのＦｃ機能の重要な役割を支持している（国際特許出願ＷＯ ２０１４／０８９１１３；Ｓｅｌｂｙら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３２－４２（２０１３）；Ｖａｒｇａｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，３３：６４９－６６３（２０１８））。ＩｎｇｒａｍらはＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１５：３９１２－３９１７，（２０１８）において、抗ＣＴＬＡ－４ ＩＳＶＤに抗腫瘍効力を付与するには、Ｆｃドメインを該ＩＳＶＤに融合させる必要があることを報告している。実際、本発明者らは、単独療法として腫瘍をＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）で処置したところ、効力の欠如を観察した。より高い細胞表面ＣＴＬＡ－４レベルを発現する腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの特異的枯渇は腫瘍モデルにおける腫瘍効力に寄与することが示されている（Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２１０：１６９５－１７１０（２０１３）；Ｓｅｌｂｙら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ １：３２－４２（２０１３））。
α－ＣＴＬＡ－４による腸炎の誘発は、粘膜固有層に存在するＴｒｅｇの検出可能な枯渇には関連していなかった。本発明者らの研究は、抗ＰＤ－１抗体と組合された場合に、強力な腸炎症を誘発することなく強力な抗腫瘍活性を示すことにより抗癌治療におけるＣＴＬＡ－４遮断の可能性を拡大するものである。ＣＴＬＡ－４遮断とＰＤ－１遮断との組合せの利益を得るためには、Ｆｃ機能は必要なかった。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）とα－ＰＤ－１とを含む併用治療は、強力なＦｃ機能を有するα－ＣＴＬＡ－４により誘導されるものと同様の、腫瘍におけるＩＦＮγ関連免疫応答遺伝子の活性化を誘導した。対照的に、腸炎へと進行する強い腸炎症は、主にα－ＣＴＬＡ－４処置マウスにおいて観察され、抗ＰＤ－１抗体ｍＤＸ４００と組合された場合に増強した。これらの結果は、ＣＤ２８の活性化を促進するＣＴＬＡ－４の単純な遮断が、ＰＤ－１遮断と組合された場合、枯渇Ｔ細胞の抗腫瘍応答を増強するのに十分であることを示している。
Ｋａｍｐｈｏｒｓｔら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５５：１４２３－１４２７（２０１７）における以前の報告は、枯渇ＣＤ８ Ｔ細胞のＰＤ－１遮断レスキューがＴＣＲ活性化のＣＤ２８共刺激を要することを示した。更に、Ｈｕｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５５：１４２８－１４３３（２０１７）における随伴報告は、補助受容体ＣＤ２８がＰＤ－１リクルートＳｈｐ２ホスファターゼによる脱リン酸化の標的としてＴＣＲよりも非常に好ましいこと、およびＣＤ２８が優先的に脱リン酸化されることを示した。本発明者らの結果は、Ｆｃ機能を有さない抗ＣＴＬＡ－４抗体によるＣＴＬＡ－４の単純な遮断とＣＤ２８のＰＤ－１媒介性脱リン酸化の遮断とによりもたらされるＴＣＲ補助受容体ＣＤ２８の相補的活性化が、癌免疫療法のための組合せの利益を得るのに十分でありうることを示している。Ｆｃ－ＦｃγＲ架橋によるＦｃ媒介性増強活性化を伴わない単純な組合せ遮断の利点は、それが、より高い用量範囲およびより長い治療時間を可能にする、より大きな治療指数を可能にすることでありうる。この利点はまた、より低い腸炎症ｉｒＡＥリスクプロファイルゆえに、化学療法標準治療との更なる組合せを促進しうる。
実験手順
マウス
野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスをジャクソン研究所（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から入手した。野生型Ｂａｌｂ／ｃおよびＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスをＴａｃｏｎｉｃから入手した。Ｂ６．Ｆｏｘｐ３ＧＤＬ（ＧＦＰ－ＤＴＲ－ルシフェラーゼ）マウスを特定病原体除去条件下で誕生させ、維持し、Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＭＲＬ）動物施設（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）において濾過空気の存在下のマイクロアイソレーター内で飼育した。全ての動物の取り扱いは、実験動物管理の評価認定協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）のガイドラインに従い、ＭＲＬの施設内動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
腫瘍チャレンジおよび処置
同系腫瘍実験のために、ＣＴ２６、ＭＣ３８およびＭＢ４９腫瘍モデルを使用した。８～１２週齢のＢａｌｂ／ＣまたはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脇腹に３×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。腫瘍直径を電子ノギスで測定し、長さ×幅×幅×１／２により腫瘍体積を算出した。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したら、処置を開始した。α－ＣＴＬＡ－４、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）、マウス抗ＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ抗体アイソタイプ対照、マウス抗ＩｇＧ２ａ抗体アイソタイプ対照、α－ＰＤ－１抗体の１０ｍｇ／ｋｇで、週２回、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）処置した。ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはＩＳＶＤ対照の３０ｍｇ／ｋｇで、週２回、マウスを皮下処置した。
α－ＣＴＬＡ－４は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣと配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣとを含む。
α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）は、配列番号６０に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣと配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣとを含む。
α－ＰＤ－１は、配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣと配列番号６４のアミノ酸配列を有するＬＣとを含む。
ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂは、配列番号６１に記載されているアミノ酸配列を含む。
抗ＰＤ－１ ＩＳＶＤ Ｆ０３７（ＰＤ－１ ｎＡｂ）は、配列番号６２に記載されているアミノ酸配列を含む。
大腸炎および皮膚炎症の誘発
８～１２週齢のナイーブＢａｌｂ／ｃマウスをα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）、マウス抗ＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａアイソタイプ対照、マウス抗ＩｇＧ２ａアイソタイプ対照の抗体の２０ｍｇ／ｋｇで８週間にわたって週２回、皮下処置した。マウスをＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはＩＳＶＤ対照の３０ｍｇ／ｋｇで週２回、皮下処置した。第５５日に、ＥＬＩＳＡおよびルミネックスアッセイのために血漿を採集した。器官を採集し、以下のとおりに処置した：１）１０％ 中性緩衝化ホルマリン中で固定し、組織病理学評価のためにパラフィン包埋組織切片をＨ＆Ｅで染色した；２）更なるＲＮＡ抽出のために液体窒素中で急速凍結した；または３）細胞単離のためにＨＢＳＳ中に配置した。
Ｔ細胞誘発性大腸炎
Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞を処理し、磁気ビーズ分離（ＳＴＥＭ ＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてＣＤ４に関して精製した。ＴＣＲｂ＋ ＣＤ４＋ ＣＤ２５－ ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ Ｔ細胞）およびＴＣＲｂ＋ ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＣＤ４５ＲＢｌｏｗ（Ｔｒｅｇ細胞）をＦＡＣＳ Ａｒｉａ（ＢＤ）で選別した。３×１０５個のＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ Ｔ細胞および１×１０５個のＴｒｅｇ細胞を静脈内注射した。３５０μｇのα－ＣＴＬＡ－４もしくはアイソタイプ対照または６００μｇのＣＴＬＡ－４ ｎＡｂもしくはＩＳＶＤ対照をマウスに週２回投与（ｉ．ｐ．）した。注射後７週間にわたってマウスをモニターし、体重を測定した。
腸透過性
血清中のＦＩＴＣの蛍光測定の４時間前に、マウスにＦＩＴＣ－デキストラン（４ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で強制飼養した。
結腸粘膜固有層、皮膚および腫瘍細胞単離
結腸粘膜固有層細胞を単離した。これは、まず、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有するハンクス緩衝塩類溶液中で０．５ｃｍの腸組織片を３７℃で２０分間インキュベートすることより上皮細胞を取り出し、ついで、このインキュベーションをもう一度繰り返すことにより行った。残りの組織を小さな断片へと切断し、ついで、０．２５０ｍｇ／ｍＬ ＬＩＢＥＲＡＳＥ（Ｒｏｃｈｅ）、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＳＰＡＳＥ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含有するＨＢＳＳ １×培地で同一条件で消化した。得られた細胞懸濁液を４０％／８０％ ＰＥＲＣＯＬＬ勾配上に重層し、６００ｇで１０分間遠心分離した。境界部においてＬＰ細胞を回収した。
耳の皮膚を細断し、０．２５０ｍｇ／ｍｌ ＬＩＢＥＲＡＳＥ（Ｒｏｃｈｅ）、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＳＰＡＳＥ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含有するＨＢＳＳ １×培地で３７℃で９０分間消化した。細胞懸濁液を濾過し、ＨＢＳＳ １×バッファーで２回洗浄した。腫瘍を細断し、０．２５０ｍｇ／ｍｌ ＬＩＢＥＲＡＳＥ（Ｒｏｃｈｅ）、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＳＰＡＳＥ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含有するＨＢＳＳ １×培地で３７℃で３０分間消化した。細胞懸濁液を濾過し、ＨＢＳＳ １×バッファーで２回洗浄した。
結腸、耳皮膚、肝臓、肺、腎臓片からの組織学的試料を１０％ 中性緩衝化ホルマリン中で一晩固定し、７０％ エタノールに移し、常法により処理し、パラフィン内に包埋し、４～５μｍに切断し、ついでヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。結腸は、疾患の重症度に関して、以下の３つの基準に従い、病理学者により盲検様式でスコア化された：炎症：存在する場合には、多数（６０～７０％）の単核細胞（マクロファージおよびリンパ球）ならびに３０～４０％の好中球および帯状核細胞の浸潤により特徴づけられた。炎症のスコア化は浸潤の重症度、腺の喪失、びらん（浸食）、腺腔の拡張、陰窩膿瘍および上皮細胞の変性の存在を含む。炎症は０～４のスケールでスコア化された：０＝陰性；１＝最小；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度。アポトーシス：アポトーシス小体の保有度を０～３のスケールでスコアした：０＝陰性；１＝低；２＝中等度；３＝高。再生：評価された再生変化は粘膜の上部１／３における有糸分裂像の保有度、個々の腺構造内の核密度（核密集度）、表面上皮の規則性のスコア化を含む。アポトーシスは０～３のスケールでスコア化された：０＝陰性；１＝低；２＝中等度；３＝高。
フローサイトメトリーおよび抗体
細胞をＰＢＳに再懸濁させ、固定可能生存率解析用染料（ｆｉｘａｂｌｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｓｔａｉｎ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で暗所の氷上で３０分間染色した。ついで、細胞を染色バッファー（ＦＢＳ，ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に再懸濁させ、蛍光色素直接結合体（ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）の種々の組合せで氷上で３０分間染色した。細胞内抗原に関しては、表面染色細胞を透過処理し、Ｆｏｘｐ３染色バッファーセット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で氷上で３０分間固定し、ついで、特異的抗体で染色した。マウス抗体：ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ８ａ（５３－６．７）、ＣＴＬＡ－４（ＵＣ１０－４Ｂ９）、ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３）、ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）、ＴＣＲβ（Ｈ５７－５９７）、ＴＣＲγδ（ＧＬ３）、ＣＤ４（ＲＭ４－５またはＧＫ１．５）、ＣＤ２５（ＰＣ６１）、ＣＤ４５ＲＢ（１６Ａ）、Ｌｙ６Ｇ（１Ａ８）、Ｆ４／８０（Ｔ４５－２３４２）、ＣＤ１６／３２（２．４Ｇ２）、ＩＦＮγ（ＸＭＧ１．２）、ＩＬ－１７Ａ（ＴＣ１１－１８Ｈ１０）、ＴＮＦα（ＭＰ６－ＸＴ２２）、Ｆｏｘｐ３（ＦＪＫ－１６ｓ）。抗体の全てはＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢｉｏｌｅｇｅｎｄまたはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。全てのサンプルについて、ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ）でデータ取得を行った。ＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して、データを解析した。
サイトカイン産生をフローサイトメトリーで測定する際に、細胞を５００ｎｇ／ｍＬ イオノマイシン、５０ｎｇ／ｍＬ ＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で刺激した。１時間後、ブレフェルジンＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を染色前に更に２時間添加した。
マウス同種混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
２．１０５のマウスＣ５７Ｂ６／Ｊ（８～１２週齢、雌）脾臓Ｔ細胞を、ＥＡＳＹＳＥＰマウスＴ細胞単離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）を使用して単離し、示されている濃度のα－ＣＴＬＡ－４、α－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）、ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂまたはアイソタイプ対照の存在下、１×１０５個の照射（２０００ラド）Ｂａｌｂ／ｃマウス脾細胞と共培養した。第３日に上清を回収し、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γ産生を製造業者のプロトコール（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）に従うＥＬＩＳＡにより測定した。ついで細胞を［３Ｈ］－チミジン（１μＣｉ／ウェル）で６時間または１６～１８時間パルスした。細胞ハーベスターを使用して、細胞をガラス繊維フィルター上に回収した。製造業者の説明に従いＭｉｃｒｏＢｅｔａプレートカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ ２４５０）を使用して、フィルターをカウントした。
組織および細胞からの全ＲＮＡの単離ならびにそれに続くＦｌｕｉｄｉｇｍ ＢＩＯＭＡＲＫプラットフォームを使用する遺伝子発現解析
リアルタイムＰＣＲ分析のために、２つの方法のいずれかにより全ＲＮＡを単離した。器官をＲＮＡ ＳＴＡＴ－６０（Ｔｅｌ－Ｔｅｓｔ Ｉｎｃ．，Ｆｒｉｅｎｄｓｗｏｏｄ，ＴＸ）においてポリトロンホモジナイザーでホモジナイズし、ついで、ＭａｇＭＡＸ－９６ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を製造業者の説明に従い使用して、ＲＮＡ抽出を行った。細胞サンプルに関しては、ＡＲＣＴＵＲＵＳ ＰＩＣＯＰＵＲＥ ＲＮＡ単離キットを製造業者の説明に従い使用して、ＲＮＡを単離した。
ＤＮアーゼで処理された全ＲＮＡを、ＱＵＡＮＴＩＴＥＣＴ逆転写（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を製造業者の説明に従い使用して逆転写した。プライマーをＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から商業的に入手した。遺伝子特異的前増幅を、Ｆｌｕｉｄｉｇｍ ＢＩＯＭＡＲＫの製造業者の説明（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ）に従い、少なくとも２ｎｇのｃＤＮＡに対して行った。ついで、それぞれ９００ｎＭの２つの未標識プライマーおよび２５０ｎＭのＦＡＭ標識プローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）をＵＮＧ含有ＴＡＱＭＡＮ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘと共に使用して、Ｆｌｕｉｄｉｇｍ ＢＩＯＭＡＲＫにおいてリアルタイム定量ＰＣＲを行った。４８×４８アレイまたは９６×９６アレイにおいて、製造業者の説明（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ）に従い、サンプルおよびプライマーを実施に付した。ユビキチレベルを別個の反応において測定し、ΔＣｔ法によりデータを正規化するために使用した［各サンプルに関する関心遺伝子およびユビキチンに関する平均サイクル閾値を使用し、式１．８?（Ｃｔユビキチン － Ｃｔ関心遺伝子）×１０４を使用して、正規化値を得た］。プライマー参照配列は要求に応じて入手可能である。
統計
この研究の残りにおいて統計的有意性を計算するために両側対応ｔ検定および独立ｔ検定を用いた。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ７ソフトウェアを使用して、統計処理を行った。
実施例２
ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂの抗腫瘍効果をマウス同系ＭＢ４９腫瘍モデルにおいて評価した。ＭＢ４９細胞は尿路上皮癌株であり、これは、初代膀胱上皮細胞外植片を７，１２－ジメチルベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）に２４時間曝露させ、ついで長期培養することにより、成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスから誘導された。膀胱癌の同系マウスモデルは３５年以上にわたって広範に使用されている。
ＭＢ４９マウス膀胱癌細胞を８０匹のマウスに皮下（ｓ．ｃ．）移植し、各群１０匹のマウスからなる５つの処置群に動物を割り当てた。開始腫瘍体積の中央値が１０３ｍｍ３に達したら、マウスに４日に１回、合計４用量の皮下注射を行った。無関係な対照ＩＳＶＤ（３０ｍｇ／ｋｇ、ロット番号０１ＡＱＬ）および５ｍｇ／ｋｇ ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂ（ロット番号６４ＡＩＳ）を処置対照として投与した。処置は３０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ、１０ｍｇ／ｋｇ Ｆｃコンピテントα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）、５ｍｇ／ｋｇ α－ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ４標的化剤とα－ＰＤ－１との組合せを含むものであった。処置開始後２１日間にわたって腫瘍成長をモニターした。
図９Ａは各処置群の個々の動物の腫瘍体積を示す。第２１日までの完全奏効（ＣＲ）が応答性処置群に関して示されている。図９Ｂは各処置群（開始時の数ｎ＝１０／群）の平均腫瘍体積および平均の標準誤差を示す。腫瘍体積が大きいために研究から除外された動物の腫瘍体積は、その処置群について最後の測定が行われるまで平均において繰り越された。図９Ａ～９Ｂは、ＣＴ２６結腸腫瘍モデル（図３Ａを参照されたい）、ＭＢ４９膀胱腫瘍モデルおよびＭＣ３８結腸腫瘍モデルの場合と同様に、無Ｆｃ－ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂとα－ＰＤ－１との併用療法が、Ｆｃ機能に無関係に、強力な抗腫瘍効果をもたらしたことを示している。
実施例３
ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂの抗腫瘍効果をマウス同系ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて評価した。ＭＣ３８マウス結腸癌細胞を８０匹のマウスに皮下移植し、各群１０匹のマウスからなる５つの処置群に動物を割り当てた。開始腫瘍体積の中央値が２４６ｍｍ３に達したら、マウスに４日に１回、合計４用量の皮下注射を行った。無関係な対照ＩＳＶＤ（３０ｍｇ／ｋｇ）および５ｍｇ／ｋｇ ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂを処置対照として投与した。処置は３０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂ、１０ｍｇ／ｋｇ Ｆｃコンピテントα－ＣＴＬＡ－４（Ｄ２６５Ａ）、５ｍｇ／ｋｇ α－ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ４標的化剤とα－ＰＤ－１との組合せを含むものであった。処置開始後２３日間にわたって腫瘍成長をモニターした。
図１０Ａは各処置群の個々の動物の腫瘍体積を示す。第２３日までの完全奏効（ＣＲ）が応答性処置群に関して示されている。図１０Ｂは各処置群（開始時の数ｎ＝１０／群）の平均腫瘍体積および平均の標準誤差を示す。腫瘍体積が大きいために研究から除外された動物の腫瘍体積は、その処置群について最後の測定が行われるまで平均において繰り越された。図１０Ａ～１０Ｂは、ＣＴ２６結腸腫瘍モデル（図３Ａを参照されたい）、ＭＢ４９膀胱腫瘍モデルおよびＭＣ３８結腸腫瘍モデルの場合と同様に、無Ｆｃ－ＣＴＬＡ－４ ｎＡｂとα－ＰＤ－１との併用療法が、Ｆｃ機能に無関係に強力な抗腫瘍効果をもたらしたことを示している。
配列
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Figure 0007581225000050
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Ｕｌｌｍａｎ－Ｃｕｌｌｅｒｅ ＆ Ｆｏｌｔｚ，Ｂｏｄｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｓｃｏｒｉｎｇ：ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｈｅａｌｔｈ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｌａｂ Ａｎｉｍ Ｓｃｉ．１９９９ Ｊｕｎ；４９（３）：３１９－２３．
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Ｗａｉｇｈｔら，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＦｃγＲ Ｃｏ－ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｎ ＡＰＣｓ Ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔ Ｃｅｌｌ Ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１８ Ｊｕｎ １１；３３（６）：１０３３－１０４７．ｅ５．
本発明は例示実施形態に関して本明細書に記載されているが、本発明はこれらに限定されないと理解されるべきである。当業者および本明細書の教示の読者はその範囲内の追加的な修飾および実施形態を認識するであろう。したがって、本発明は特許請求の範囲のみにより限定される。

Claims (6)

  1. エフェクター機能を有する抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用するための、そして、中度から重度の皮膚または腸炎症性免疫関連毒性を引き起こさず個体の癌を治療するための、エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む組成物であって、
    ここで、該エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体は、
    （ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅ（ビアコア）アッセイによる測定で、１以上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）への測定可能な結合を示さない、もしくは、当該抗体と同じアイソタイプの野生型ＩｇＧと比較して低減した１以上のＦｃＲへの結合を示すエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体、あるいは、
    （ｉｉ）Ｆｃドメインを欠くまたは１以上のＦｃ受容体に結合するＦｃドメインの領域を欠くエフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントである、
    組成物。
  2. エフェクター－サイレント抗ＣＴＬＡ－４抗体が、
    アミノ酸２９７位から開始するＮ－グリコシル化部位Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒにおける突然変異であって、該Ｎ－グリコシル化部位におけるＮ－グリコシル化を阻止する突然変異を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン；
    Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｅ２３３Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、もしくはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン；
    Ｎ２９７Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ／Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、もしくはＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓアミノ酸置換を含むＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン；あるいは
    Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換とＮ２６７Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａアミノ酸置換とを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の追加的なアミノ酸置換、挿入および／もしくは欠失を更に含む該突然変異Ｆｃドメイン、
    を含み、
    ここで、アミノ酸位置はＥｕ番号付けに従い特定される、請求項１記載の組成物。
  3. （ａ）抗ＰＤ１抗体が、（ｉ）ペンブロリズマブの３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、（ｉｉ）ニボルマブの３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、または（ｉｉｉ）セミプリマブ－ｒｗｌｃの３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲを含む、ならびに
    （ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、（ｉ）デュルバルマブの３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｉｉ）アベルマブの３つのＨＣ ＣＤＲＡおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、または（ｉｉｉ）アテゾリズマブの３つのＨＣ ＣＤＲＡおよび３つのＬＣ ＣＤＲを含む、請求項１記載の組成物。
  4. 抗ＣＴＬＡ－４抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体フラグメントが、（ｉ）イピリムマブの３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、（ｉｉ）トレメリムマブの３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｉｉｉ）ＲＥＧＮ４６５９の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｉｖ）ＡＧＥＮ１８８４ｗの３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｖ）８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｖｉ）８Ｄ２／８Ｄ２（ＲＥ）－変異体１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｖｉｉ）８Ｄ２Ｈ１Ｌ１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣＣＤＲ、（ｖｉｉｉ）８Ｄ２Ｈ１Ｌ１－変異体１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｉｘ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ２の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｘ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ２－変異体１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｘｉ）８Ｄ３Ｈ３Ｌ３の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｘｉｉ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｘｉｉｉ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５－変異体１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、（ｘｉｖ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲ、または（ｘｖ）８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７－変異体１の３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲを含む、請求項１記載の組成物。
  5. 癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、腎癌、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌または唾液腺癌である、請求項１記載の組成物。
  6. 癌が、膵臓癌、気管支癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮もしくは子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭癌、肝癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項１記載の組成物。
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