JP7352623B2 - 抗うつ製品の製造におけるヒドロキシチロソールおよびその誘導体の新規使用 - Google Patents

Description

本発明は、バイオ医薬分野に属し、具体的には、ヒドロキシチロソールの新規使用に関する。

社会経済の不断の発展に伴って、生活リズム加速、社会競争が日に日に激しくなり、人々の心理圧力が次第に増大し、うつ病の発症率が年々上昇している。世界保健機関の推定によると、世界中でうつ病の発症率は約３％～５％であり、合計約１～２億人である。２０２２年までに、うつ病が発展途上国にとっては最も深刻な医療負担となるだろう。

うつ病は、抑鬱障害とも呼ばれ、自己のうつ気分体験を中心とする臨床症候群或いは状態であり、持続性かつ顕著な自発性の気分低下を主要臨床的特徴とし、気分障害の主要なタイプである。臨床病状は、主に意気消沈、打ち解けない、離群、身体不快感、食欲不振および睡眠障害がある；一部の病例においては、明らかな焦慮と運動性激越があり、重症者は、幻覚、妄想などの精神病症状が見られる可能性がある。うつ病は、主に以下の種類がある：内因性うつ病、反応性うつ病、仮面うつ病、学習障害を特徴とするうつ病、薬物による二次性うつ病、身体疾患による二次性うつ病、産後うつ病など。現在、市販のうつ病を治療する薬物は、パロキセチン、セルトラリン、フルボキサミン、ヴェンラファキシンがあるが、比較的多くの薬の副作用、例えば、嗜眠、便秘、胃腸不快感、呼吸抑制、記憶力減退と依存性などが存在し、更に安全な抗うつ薬を探し求め、開発することは、重要な意義がある。

現在、うつ病の発病メカニズムに関する理論学説について、様々なものが提唱されている。例えば、モノアミン系神経伝達物質学説、神経内分泌学説、神経可塑性学説など。そのうち、モノアミン類神経伝達物質学説の研究は最も広くと深く、それはうつ病の発病が５－ヒドロキシトリプタミン、ノルアドレナリン、ドーパミンなどの神経伝達物質のレベルの低下と関係があると考えられている。ドーパミンとは、重要なカテコールアミン系神経伝達物質の一つであり、細胞のパルス伝達に援助するために用いられる化学物質である。このような脳内分泌物は、人間の情欲、感覚と関係があり、興奮や快楽の情報を伝えることができる。側坐核領域と線条体領域のドーパミン能が損害を受け、またはドーパミンレベルが低下すると、快感欠損、焦慮、食欲不振などのうつ病症状が見られる。脳内ドーパミンレベルは、うつ病の重症度と治療効果の指標の一つである可能性があるため、脳内ドーパミンのレベルを調節することが、うつ病の治療に対して重要な意義がある。

ヒドロキシチロソール（（ｈｙｄｒｏｘｙｔｙｒｏｓｏｌ、Ｃ_８Ｈ_１０Ｏ_３、ＣＡＳ：１０５９７－６０－１）は、３，４－ジヒドロキシフェニルエタノール（３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌ）とも呼ばれ、親水親油性の天然ポリフェノール化合物の一つである。常温低純度の場合に、黄色油状物を呈し、高濃度の場合に、無色油状物を呈し、いずれも流動性を有する。主に、オリーブ科オリーブ属の果実と葉にオレウロペインの形式で存在し、オリーブオイル中の有効成分である。カテコールとフェネチルアルコールの構造を有するため、ヒドロキシチロソールは、強い抗酸化性を持ち、近年注目されている。研究により、ヒドロキシチロソールは、極めて強い抗酸化作用を有し、炎症の発生発展に対して比較的良い抑制と予防治療効果を奏し、ドーパミン作動性細胞に対して潜在的な神経保護作用を有するので、パーキンソン病とアルツハイマー症候群の治療に応用できることが明らかになった。従来技術では、ヒドロキシチロソールの調製方法と軟骨保護、骨関節炎の予防および治療、降血脂、黄斑変性症治療製品の製造における使用が開示されているが、うつ病の予防および治療用途としてのヒドロキシチロソールの使用がまだ開示されていない。

本発明は、従来技術問題に鑑みてなされたものであって、うつ病およびその合併症の病状を予防および治療し、うつ病の再発を予防する作用を有する抗うつ製品の製造におけるヒドロキシチロソールの新規使用を提供するものである。

前述した目的を実現するために、本発明の用いる技術方案は、以下のとおりである。

うつ病の予防および治療用製品の製造におけるヒドロキシチロソールおよびその誘導体の使用。心理ストレスを受けたことによって引き起こされる心理疾患の病状を緩和および改善するために用いることができ、意気消沈、打ち解けない、身体不快感、食欲不振および睡眠障害などのうつ病中の様々な病状を緩和および改善するために用いることができる。

前記ヒドロキシチロソール誘導体は、式（Ｉ）で表される化合物のうちの一部または全部の－ＯＨが塩基、酸、アルコールとからなる塩、エステルまたはエーテルであるヒドロキシチロソール塩、ヒドロキシチロソールエステルおよびヒドロキシチロソールエーテルｎｏ少なくとも１種から選択される。

前記ヒドロキシチロソール誘導体は、ヒトまたは動物体内で加水分解されてヒドロキシチロソールに転換され、同じまたは近い生理活性を産生することができる。

前記ヒドロキシチロソール塩は、ヒドロキシチロソールと無機または有機塩基とからなる生理的に許容可能な塩である。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのヒドロキシチロソールのアルカリ金属塩と、カルシウム塩、マグネシウム塩などのヒドロキシチロソールのアルカリ土類金属塩と、アンモニウム塩と、ヒドロキシチロソールと窒素含有有機塩基からなる塩とを含むが、これらに限定されない。前記窒素含有有機塩基は、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルベンジルアミン、Ｎ－ベンゼル基－β－フェニルエチルアミン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、プロカイン（Ｐｒｏｃａｉｎｅ）、アンフェタミン（Ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ）を含むが、これらに限定されない。

前記ヒドロキシチロソールエステルは、ヒドロキシチロソールと無機または有機酸とからなる生理的に許容可能なエステルであり、前記無機酸は、硫酸、リン酸、炭酸、塩酸から選択され、前記有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、マレイン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、コハク酸または脂肪酸から選択される。

前記ヒドロキシチロソールエーテルは、ヒドロキシチロソールアルキルエーテル、ヒドロキシチロソールアリールエーテル、およびヒドロキシチロソール配糖体を含む。前記アルキルエーテルとしては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－オクチル基、イソプロピル基またはｔｅｒｔ－ブチルメチルを挙げることができる。前記アリールエーテルは、炭素原子を含む芳香族エーテルであってもよく、窒素原子、硫黄原子、酸素原子を含む複素環エーテルであってもよい。前記ヒドロキシチロソール配糖体は、ヒドロキシチロソールグルコシド、ヒドロキシチロソールフルクトシドなどであってもよい。

前記ヒドロキシチロソールおよびその誘導体は、化学合成、微生物発酵または動植物抽出から由来することができ、例えば、オリーブ果実、オリーブ葉、または他のヒドロキシチロソールおよびその誘導体を含むものから抽出される。

前記うつ病を予防または治療するための製品としては医薬品、食品、機能性食品、特別医療目的用食品または化粧品でもよい。

前記抗うつ病製品としては医薬品、食品、機能性食品、特別医療目的用食品または化粧品などを製造するための許容可能な添加物をさらに含むことができる。例えば、フィラー、担体、乳化剤、賦形剤などが挙げられる。

前記うつ病を予防または治療するための製品としては経口、注射または外用剤形でもよい。前記経口剤形は、トローチ、錠剤、カプセルおよび顆粒剤を含むが、これらに限定されない。好ましくは舌下錠などの経口剤形である。前記粉末注射剤形は、注射液、粉末注射剤を含むが、これらに限定されない。前記外用剤形は、座薬、噴霧剤、フィルム剤、貼付剤を含むが、これらに限定されない。好ましくは鼻腔投与剤形のような鼻粘膜を介して薬剤を吸収することができる腔投与剤形である。

前記抗うつ病食品としては焙煎食品、調味料、飲料類、酒類、乳および乳製品、冷凍飲料、スープ、栄養棒、塗布物、栄養補助食品、食品または飼料添加物、機能性食品を含むが、これらに限定されない。

前記うつ病を予防または治療するための製品は、他の製品の適用用量を低下させ、副作用を減少させるために、他の抗うつ病製品と組み合わせて使用することができる。また、ヒドロキシチロソールおよびその誘導体と他の活性成分とからなる配合製剤であってもよく、相乗効果を奏し、抑うつ治療の効果を向上させ、副作用を低減させることができる。

他の活性成分は、塩酸セルトラリン、フルオキセチン、パロキセチン、シタロプラム、フルボキサミン、塩酸ドクサピン、セレギリン、サフィナミドメシル、トロキサトンなどの抗うつ活性を有する成分、クアゼパム、テマゼパム、舒楽安定、γ－アミノ酪酸のいずれか一つまたは組み合わせなどの鎮静催眠活性を有する成分、サリドロシド、ヒドロキシサリドロシド、チロソールなどの抗酸化活性を有する成分、ガストロジンなどの神経衰弱治療作用を有する成分から選択されるが、これらに限定されない。

前記うつ病を予防または治療するための製品におけるヒドロキシチロソールおよびその誘導体の含有量が、０．０１％～９９．９９％であり、好ましくは０．０５％～９５％、より好ましくは０．０５％～６５％である。前記％は、質量体積パーセント（ｗ／ｖ）または質量百分率（ｗ／ｗ）である。

さらに、経口製品における質量百分率が、０．０５％～６０％であり、好ましくは０．１％～４０％である。注射用製品における質量百分率が、０．１％～９５％であり、好ましくは０．５％～５０％である。外用品における質量百分率が、０．１％～６５％である。

本発明は、以下の有益な効果を有する。
本発明によれば、うつ病およびその合併症の病状を予防または治療するために用いることができ、うつ病の再発を予防し、うつ病の発症率を低下させ、うつ病患者の生活の質を改善し、他の抗うつ薬と併用することにより、他の製品の副作用を低減させることができる抗うつ製品の製造におけるヒドロキシチロソールおよびその誘導体の新規使用が提供される。

以下、実施例を参照しながら、本発明をさらに詳細に説明するが、図面を参照しながら以下に説明される実施例は例示的なものであり、本発明を限定するものと理解してはいけない。

実施例１：ヒドロキシチロソール舌下錠の調製
通常の工程により舌下錠を作製し、配合成分（１０００粒）は、以下の通りである。
湿式造粒打錠法を用いて、処方量の蔗糖と微結晶セルロースを秤取し、均一に混ぜて、次に、ヒドロキシチロソールと１０％デンプンスラリーとを均一に混ぜて、結合剤として加えて軟材を作製し、２０メッシュ篩を通過し、湿顆粒を７０℃で１時間乾燥させ、２０メッシュ篩で整粒し、タルク粉末を加えて均一に混ぜて打錠し、舌下錠を得た。

実施例２：ヒドロキシチロソールソフトカプセルの調製
通常の工程によりソフトカプセルを作製し、配合成分（１０００粒）は、以下の通りである。
処方量のヒドロキシチロソールを取って、植物油を加えて溶解し、薬液として使用に備えた。グリセリンおよび水を７０℃に加熱して攪拌溶解し、ゼラチンを加え、２時間攪拌した後、浮上した泡を除去して濾過した。ソフトカプセル機をオンにし、左右のカプセルおよびノズル本体加熱をオンにするとともに、ポンプ循環と冷凍をオンにした。ノズル本体を４３℃に設定し、左右カプセルを６０℃に設定した。予熱完了後、両側の皮膜厚さをいずれも０．７０ｍｍに調節した。皮膜を調整した後、薬液をホッパーに入れ、装着量を調節し、ソフトカプセルを製造した。ソフトカプセルを洗って、乾燥した。

実施例３：ヒドロキシチロソール錠剤の調製
通常の工程により錠剤を作製し、配合成分（１０００錠）は、以下の通りである。
粉砂糖、微結晶セルロースとデンプングリコール酸ナトリウムを均一に混ぜて、次に、ヒドロキシチロソールとデンプンスラリーを均一に混ぜて結合剤として加え、軟材を作製し、１４メッシュのナイロン篩を通過して湿顆粒を作製し、４５℃で乾燥し、タルク粉末を加え、均一に混ぜた後、１２メッシュのナイロン篩を通過し、顆粒が含有量の測定に合格した後、打錠し、錠剤を得た。

実施例４：ヒドロキシチロソール顆粒剤の調製
通常の工程により顆粒剤を作製し、配合成分（１０００袋）は、以下の通りである。
亜硫酸水素ナトリウム、砂糖と微結晶セルロースを均一に混ぜて、ヒドロキシチロソールとデンプンスラリーを均一に混ぜて結合剤として加え、軟材を作製し、１２メッシュのナイロン篩を通過した。８０メッシュの篩を通過した食用エッセンスと整粒された顆粒を混合し、個包装し、顆粒剤を得た。

実施例５：ヒドロキシチロソール注射剤の調製
通常の工程により注射液（１０００本）を作製し、配合成分は、以下の通りである。
調製容器に処方量８０％の注射用水を加え、二酸化炭素で飽和させ、ヒドロキシチロソールを加えて溶解した後、予め調製されたエデン酸二ナトリウム溶液と亜硫酸水素ナトリウム溶液を加えて均一に攪拌し、二酸化炭素で飽和した注射用水を十分な量まで加え、不純物を濾過除去した。二酸化炭素気流下で分注し、ポッティングし、滅菌した。

実施例６：ヒドロキシチロソール注射剤の調製
通常の工程により注射液（１００本）を作製し、配合成分は、以下の通りである。
ビタミンＥを精製大豆油に溶解し、ヒドロキシチロソールを加え、均質化し、不純物を濾過除去し、ポッティングし、滅菌し、注射剤を得た。

実施例７：保健飲料の調製
通常の工程により保健飲料を作製し、配合成分は、以下の通りである。
上表の質量に従って原料を秤取し、少量の水で溶解した後、水を加えて１０００ ｍＬとし、滅菌、分注し、保健飲料を得た。ここで、ヒドロキシチロソールとチロシンを主原料とし、製品の風味や食感をさらに調節するために、本発明の製品配合成分に適量のクエン酸とスクラロース調味剤、および食用エッセンスをさらに添加し、具体的な製造過程については、食品分野の通常の操作に従って行えばよい。

実施例８：複方ヒドロキシチロソール錠剤の調製
通常の工程により錠剤を作製し、配合成分（１０００錠）は、以下の通りである。
フルオキセチン、粉砂糖、微結晶セルロースとデンプングリコール酸ナトリウムを均一に混ぜて、次に、ヒドロキシチロソールと１０％デンプンスラリーを均一に混ぜて加えて軟材を作製し、１４メッシュのナイロン篩を通過して湿顆粒を作製し、４５℃で乾燥した。乾顆粒を１２メッシュのナイロン篩を通過して整粒し、該顆粒とタルク粉末を均一に混ぜて、再度１２メッシュのナイロン篩を通過し、顆粒が含有量の測定に合格した後、打錠し、錠剤を得た。

実施例９：ヒドロキシチロソールカプロン酸エステルの調製
調製方法は、以下の通りである。
ｐ－ヒドロキシベンゼンエタノール１ｇを２．３ｍＬのピリジンに溶解し、トルエン１０ｍＬで希釈して氷水浴中で冷却した。ヘキサン酸クロリド３ｍＬを加えて固体を生成した。一夜、混合物を室温にした。生成物を酢酸エチルと水の混合溶液に溶解し、有機相を保持し、水相を除去した。有機相を１．５ｍｏｌ／ＬのＨＣｌ溶液と４％炭酸水素ナトリウム溶液で順次洗浄し、水分を乾燥させ、濃縮、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステルを得た。そのプロトン核磁気共鳴特徴付けは、^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３） δ７．０－６．８ （ｍ， ３Ｈ）； ４．４０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．１Ｈｚ）； ２．９０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝ ６．８Ｈｚ）； ２．２２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．３Ｈｚ）； ２．２３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．３Ｈｚ）； ２．２５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．４Ｈｚ）； １．３５－２．３２ （ｍ， ６Ｈ）； １．５６－１．２５ （ｍ， １２Ｈ）， ０．９３－０．８７ （ｍ， ９Ｈ）である。
その化学構造は、以下の通りである。

実施例１０：ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠の調製
通常の工程によりヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠を作製し、配合成分（１０００錠）は、以下の通りである。
湿式造粒打錠法を用いて、処方量の蔗糖と微結晶セルロースを秤取し、均一に混ぜて、次に、ヒドロキシチロソールと１０％デンプンスラリーを均一に混ぜて、結合剤として加えて軟材を作製し、２０メッシュ篩を通過し、湿顆粒を７０℃で１時間乾燥させ、２０メッシュ篩で整粒し、タルク粉末を加えて均一に混ぜて打錠し、舌下錠を得た。

実施例１１：尾懸垂法獲得性絶望うつモデル試験
山東省薬学科学院がヒドロキシチロソールおよびその誘導体を提供された。済南朋悦実験動物繁育有限会社が体重１８～２２ｇのＩＣＲマウス７０匹を提供され、動物室の温度：２０℃～２５℃、相対湿度：４５％～５５％、昼夜：１２時間／１２時間、自由に水分と飲食を摂取した。環境適応１週間後、ランダムにモデル対照群（０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール低用量群（１ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール中用量群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール高用量群（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、実施例８群（錠剤１粒当たりヒドロキシチロソール２０ｍｇ、フルオキセチン５ｍｇを含む）、フルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）計７群に分けた。６群の試験群の夫々に対してサンプルを胃内投与し、１日１回、連続３０日間、０．１ｍＬ／１０ｇの体重であった；モデル対照群に対して、対応する溶媒を胃内投与し、胃内投与が０．１ｍＬ／１０ｇ体重であった。最後のサンプルを投与した２時間後、各群のマウスの尾（尾尖部から２ｃｍ）をそれぞれ尾懸垂箱（３０ｃｍ×３０ｃｍ×２５ｃｍ）上部のラックにテープで貼り付け、逆さ釣りの状態とし、頭部を箱底から約５ｃｍ離れ、一回に２匹のマウスを掛け、中間を仕切板で隔てた。マウスは異常体位を克服するために暴れたが、次第にあきらめて断続的な無動となり、絶望状態を示した。掛け時間は６分間とし、後の４分間以内の懸尾累積無動時間（無動状態、すなわちマウスの暴れ停止又は何の活動も無し状態）を統計し、結果は表１の通りである。
表１は、マウスにおける尾懸垂試験のヒドロキシチロソールの影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝１０）である。
注：モデル対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５である。

表１で分かるように、全ての投与群の懸尾無動時間は、モデル対照群と比較するとき、有意差が認められた。このうち、ヒドロキシチロソールの投与量が多いほど、マウスの懸尾無動時間が用量依存性短縮を呈した。ヒドロキシチロソール中用量群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）は、フルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、有意差がなく、ヒドロキシチロソールおよびそのカプロン酸エステル誘導体は、いずれも病態改善またはうつ病補助治療効果を奏することが示された。また、実施例８群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄヒドロキシチロソール＋１ｍｇ／ｋｇ／ｄフルオキセチン）は、ヒドロキシチロソール群（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、懸尾無動時間上に有意差が認められず、かつヒドロキシチロソール（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）とフルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）より有意に優れ、組成物の併用は相乗効果があり、病状の緩和に役立つことが示された。

実施例１２：オープンフィールド試験
山東省薬学科学院がヒドロキシチロソールおよびその誘導体を提供された。済南朋悦実験動物繁育有限会社が体重１８～２２ｇのＩＣＲマウス７０匹を提供され、動物室の温度：２０℃～２５℃、相対湿度：４５％～５５％、昼夜：１２時間／１２時間、自由に水分と飲食を摂取した。環境適応１週間後、うつ病モデルマウスは、コルチコステロンを用いて腹腔注射２１日、動物行動学変化を観察することによってモデルの成功を判断した。モデル作成成功後、ランダムにモデル対照群（０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール低用量群（１ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール中用量群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール高用量群（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、実施例８群（錠剤１粒当たりヒドロキシチロソール２０ｍｇ、フルオキセチン５ｍｇを含む）、フルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）計７群に分け、各群がマウス１０匹であった。７つの試験群の夫々に対してサンプルを１日１回に胃内投与し、連続３０日間、胃内投与が０．１ｍＬ／１０ｇ体重であった。モデル対照群に対して、対応する溶媒を胃内投与し、胃内投与が０．１ｍＬ／１０ｇ体重であった。最後のサンプルを投与した２時間後、各群のマウスをそれぞれ蓋のないオープンボックス（５５ｃｍ×５５ｃｍ×４０ｃｍ）に単独置き、箱の底部に白線で１１ｃｍ×１１ｃｍの小さい格子に分け、該箱底と四壁を比較的暗い部屋でマウスと顕著な対比をなすように黒色にした。カメラを部屋中心の上方に固定し、マウスの自発活動を撮像記録して測定した。モデル作成２１日後、マウスの移動距離と立ち上がり回数を測定し、マウスを箱の底部の中央に置き、自由に活動させて環境に５分間に適応させた後、５分間測定し、毎回ビデオカメラで記録・観察した。２回の実験の間、箱の底部の夫々の小格を７０％のエタノールできれいに拭き取った。毎回の測定時間は、午後の４時であり、室内が２５℃～２８℃に安定し、かつ室内が静かであった。マウスの自発活動を記録し、マウスが１つの小格または１０ｃｍを越えると、それぞれ平行１点と記録され、同時に、マウスの両前肢が、立ち上がり或いは段ボール壁に接触すると、立ち上がり１回と記録された。結果は表２の通りである。
表２は、マウスにおける平行移動格数および立ち上がり回数に対するヒドロキシチロソールの影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝１０）である。
注：モデル対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５である。

表２で分かるように、投与群の平行移動格数および立ち上がり回数は、モデル対照群と比較するとき、有意差が認められた。このうち、ヒドロキシチロソールの投与量が多いほど、マウスの活動回数が用量依存性増加、探索行為増加を呈した。ヒドロキシチロソール中用量群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）は、フルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、有意差がなく、ヒドロキシチロソールおよびそのカプロン酸エステル誘導体が、いずれも病態改善またはうつ病治療効果を奏することが示された。また、実施例８群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄヒドロキシチロソール＋１ｍｇ／ｋｇ／ｄフルオキセチン）は、ヒドロキシチロソール群（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、平行移動格数および立ち上がり回数上に有意差が認められず、かつヒドロキシチロソール（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）とフルオキセチン群（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）より有意に優れ、組成物の併用は相乗効果があり、病状の緩和に役立つことが示された。

実施例１３：ラットにおける慢性的な予測不能な軽度ストレスうつ病モデル
山東省薬学科学院がヒドロキシチロソールおよびその誘導体を提供された。済南朋悦実験動物繁育有限会社が体重１８３～２２４ｇのＳＤラット７０匹を提供され、動物室の温度：２０℃～２５℃、相対湿度：４５％～５５％、昼夜：１２時間／１２時間、自由に水分と飲食を摂取した。

環境適応１週間後、ランダムにモデル対照群（０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール低用量群（０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール中用量群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール高用量群（６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、実施例８群（錠剤１粒当たりヒドロキシチロソール２０ｍｇ、フルオキセチン５ｍｇを含む）、フルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（４ｍｇ／ｋｇ／ｄ）計７群に分けた。モデル作成と投与：ブランク対照群ラットは、正常に水分と飲食を摂取し、いかなる刺激を与えずに、５匹／１ケージで飼育した。残りのラットは、６週間の慢性的な予測不能な温和刺激うつ病モデルの構築（単ケージ飼育）を行った。毎日１種のストレス方式を選択し、異なるストレス源をランダムに分布し、少なくとも７日の間隔で同じストレス源を利用した。２４時間の持続圧力を除いて、毎日の８：３０～１２：００にストレスを実施した。ストレス方法：夜間照明１２時間、ケージ傾斜４５°、冷水（４℃～８℃）で水泳５分間、４５℃熱水で水泳５分間、行為制限１時間、湿ったマット２４時間、尾を挟む１分間、禁水２４時間、絶食２４時間、混雑ケージ一夜などを含む。慢性ストレス２週間後、すべてのラットに対して強制水泳試験と蔗糖選好試験を再度行った。そして、投与群へ投与開始し、１日１回、４週間連続投与（投与期間でモデル作成を続けた）、モデル対照群に対して相応の溶媒を経口投与し、強制水泳試験と蔗糖選好試験を用いてラットにおける抑うつ様行動の薬物の影響を評価した。

糖水試験の前に、２瓶の水を用いて動物を４８時間適応させ、最初の２４時間、２瓶にも等量の１％（ｗ／ｖ）蔗糖水を入れた。第二の２４時間、１瓶に１％糖水を入れ、別の１瓶に等量の純水を入れ、１２時間後に２瓶の位置を交換した。その後、動物に対して禁水するが、禁食しなく、２４時間後に糖水／純水の消費実験を行った。各ケージにラットを１匹置き、夫々のラットへ予め秤量したほぼ等量の２瓶の水（１％糖水１瓶、精製水１瓶）を投与した。試験時間は２時間で、試験１時間後に２瓶の位置を交換した。試験終了後、２瓶の重量を再秤量した。ラット１匹あたりの糖選好＝［糖水消費量／（白水消費量＋糖水消費量）］×１００％。結果は表３の通りである。
表３は、ラットにおける糖選好および強制水泳行為に対するヒドロキシチロソールの影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝１０）である。
注：モデル対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５である。

糖水選好試験および強制水泳の結果により、モデル対照群に比べ、投与群の糖水選好および水泳無動時間は、いずれも明らかに改善され、かつ投与量と正相関が示された。ヒドロキシチロソール中用量群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）は、フルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、有意差がなく、ヒドロキシチロソールおよびそのカプロン酸エステル誘導体が、うつ病の治療またはうつ病補助治療効果を奏することが示された。同時に、実施例８群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄヒドロキシチロソール＋０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄフルオキセチン）は、ヒドロキシチロソール群（６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、糖水選好および水泳無動時間に有意差が認められず、かつヒドロキシチロソール（２ ｍｇ／ｋｇ／ｄ）とフルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）より有意に優れ、組成物の併用は相乗効果があり、病状の緩和に役立つことが示された。

実施例１４：うつ病ラットにおける脳内モノアミン系神経伝達物質含有量に対するヒドロキシチロソールの影響
山東省薬学科学院がヒドロキシチロソールおよびその誘導体を提供された。済南朋悦実験動物繁育有限会社が体重１８３～２２４ｇのＳＤラット７０匹を提供され、動物室の温度：２０℃～２５℃、相対湿度：４５％～５５％、昼夜：１２時間／１２時間、自由に水分と飲食を摂取した。

環境適応１週間後、ランダムにモデル対照群（０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール低用量群（０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール中用量群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソール高用量群（６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、実施例８群（錠剤１粒当たりヒドロキシチロソール２０ｍｇ、フルオキセチン５ｍｇを含む）、フルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）計７群に分けた。

モデルの作成方法は、実施例１３と同様である。

慢性的なストレスを与えた２週間後、投与群へ投与開始し、１日１回、４週間連続投与（投与期間でモデル作成を続けた）し、モデル対照群に対して対応する溶媒を経口投与した。投与終了後、０．３５ｍＬ／１００ｇの腹腔注射によりラットを麻酔し、速やかに脳を剥離した。氷盤上で小脳と血腫周辺の組織を分離除去し、称量し、組織４００ｍｇを取り、組織ホモジナイザーに入れ、０．１ｍｏｌ／Ｌの過塩素酸（０．０５％ＥＤＴＡ－Ｎａ_２を含む）１ｍＬを加え、氷水浴下でホモジェナイズした。完成後、ホモジェネートを１．５ｍＬの遠心管に移し、４℃条件下で１００００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心し、上澄み液を取って－８０℃の冷蔵庫で保存した。

適量のノルアドレナリン（ＮＥ）、ドーパミン（ＤＡ）と５－ヒドロキシトリプタミン（５－ＨＴ）標準物質をそれぞれ精密に秤量し、０．１ｍｏｌ／Ｌの過塩素酸（０．１％システインを含む）溶液でそれぞれ質量濃度が１ｍｇ／ｍＬである標準原液に調製し、原液をそれぞれＮＥ濃度０．１、０．５、１．５、３、４．５μｇ／ｍＬに希釈した。ＤＡ濃度が０．２、１、２、４、５μｇ／ｍＬであり、５－ＨＴ濃度が０．５、１、１．５、２、３μｇ／ｍＬであり、各成分の標準物質対照液とした。

ＨＰＬＣを用いて測定を行った。クロマトグラフィー条件：ＣＬＣ－ＯＤＳカラムを選択し、移動相がｐＨ＝２．５イオン対試薬（ドデシル硫酸ナトリウム０．１５ｇ、ＥＤＴＡ－Ｎａ２０．０２８ｇ、ｐＨ＝２．５～３硫酸溶液０．２ｍＬ、１０％メタノール溶液４００ｍＬ、蒸留水で１０００ｍＬに定容した）であった。流速１．２ｍＬ／分間、カラム温度４０℃、蛍光励起波長２８５ｎｍ、発光波長３１３ｎｍ、注入量２０μＬ、ピーク面積外部標準法で定量した。

表４は、ラットにおける脳内モノアミン系神経伝達物質含有量に対するヒドロキシチロソールの影響（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝１０）である。
注：モデル対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５である。

表４で分かるように、モデル対照群に比べ、投与群のモノアミン系神経伝達物質は、いずれも大幅に高め、かつヒドロキシチロソールの投与量と正相関が示された。ヒドロキシチロソール中用量群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、ヒドロキシチロソールカプロン酸エステル群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）は、フルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、有意差がなく、ヒドロキシチロソールおよびそのカプロン酸エステル誘導体が、うつ病の動物における脳内モノアミン系神経伝達物質のレベルを向上させることができることが示された。同時に、実施例８群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄヒドロキシチロソール＋０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄフルオキセチン）は、ヒドロキシチロソール群（６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）と比較するとき、脳内モノアミン系神経伝達物質のレベルに有意差が認められず、かつヒドロキシチロソール（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）とフルオキセチン群（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）より有意に優れ、組成物の併用は相乗効果があり、うつ病の病状の緩和に役立つことが示された。

実施例１５：ヒドロキシチロソール舌下錠、ヒドロキシチロソール錠およびヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠の薬物動態の特徴
山東省薬学科学院がヒドロキシチロソール舌下錠（２０ｍｇ／錠）、ヒドロキシチロソール錠（２０ｍｇ／錠）およびヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠（２０ｍｇ／錠）を提供され、その調製方法は、実施例１、２および１０で説明した通りである。済南朋悦実験動物繁育有限会社が雌雄各半、体重８．０～１２ｋｇのＢｅａｇｌｅ犬１８匹を提供された。動物室温度：、２０℃～２５℃、相対湿度：４５％～５５％、昼夜：１２時間／１２時間、自由に水分と飲食を摂取した。

投与量は、いずれも４０ｍｇ／匹であった。ランダムにＡ、ＢとＣ計３群に分け、１２時間禁食した後、Ａ群にヒドロキシチロソール舌下錠を投与し、Ｂ群にヒドロキシチロソール錠を経口投与し、Ｃ群にヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠を投与した。それぞれ投与前と投与後の０．０８３、０．１６７、０．２５、０．５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０時間で、計１２個の時間点で後肢伏在静脈から２ｍＬの血液を採血し、ヘパリン抗凝固により血液を収集し、血漿を分離して－２０℃の冷蔵庫で保存して測定対象とした。動物へ投与４時間後に、統一食事を与えた。

上記Ｂｅｇｌｅ犬の１回目の投与７日後に、２回目の投与を行い、投与１時間で直ちに屠殺し、速やかに脳を剥離した。氷盤上で小脳と血腫周辺の組織を分離除去し、称量し、組織５００ｍｇを取り、組織ホモジナイザーに入れ、生理食塩水２．５ｍＬを加え、氷水浴下でホモジェナイズした。完成後、ホモジェネートを１．５ｍＬの遠心管に移し、４℃条件下で１００００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心し、上澄み液を取って－８０℃の冷蔵庫で保存した。

血漿および脳組織のホモジネートサンプルを室温で解凍し、２００μＬを取って１．５ｍＬＥＰ管に入れ、２０μｇ／ｍＬサリシン（内部標準）対照溶液１０μＬを加え、３分間渦巻き混合し、アセトニトリル１ｍＬを加え、３分間渦巻き混合し、１４８００ｒ／ｍｉｎで１２分間遠心し、上澄み液１ｍＬを取って、３７℃窒素で乾かし、残留物に初期流動相１２０μＬを加えて再溶解し、１４８００ｒ／ｍｉｎで１５分間遠心し、上澄み液を取って、サンプリング測定を行った。

ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いて、その中のヒドロキシチロソールの含有量を分析した。カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ_１８ カラム（２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ）。クロマトグラフィー条件：移動相アセトニトリル（Ａ）－０．１％ギ酸（Ｂ）、グラジエント溶離（０～１分間、９５％Ｂ；１～３．５分間、９５％→５％Ｂ；３．５～５分間、５％Ｂ；５～６分間、５％→９５％Ｂ；６～７．５分間、９５％Ｂ）、カラム温度：３５℃、体積流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ。注入量５μＬ；質量分析条件：ＭＲＭ多重反応モニタリング、エレクトロスプレー・マイナスイオン源；キャピラリー電圧２．５ｋＶ；抽出電圧３Ｖ；イオン源温度１２０℃；脱溶媒ガス温度４００℃；コリジョン電圧１５Ｖ；コーン電圧３０Ｖ；脱溶媒ガス体積流量８００Ｌ／ｈ；ヒドロキシチロソールとサリシンの選択検出イオン質核比ｍ／ｚは、それぞれ１５３．０１→１２３．０１、２８５．２８→１２３．０４であった。

方法論検証の結果により、本方法は生物サンプル中のヒドロキシチロソールの含有量の測定に適用し、線形範囲は５～１０００ｎｇ／ｍＬであることが示された。得られたヒドロキシチロソール舌下錠、ヒドロキシチロソール錠およびヒドロキシチロソールカプロン酸エステル舌下錠のＢｅａｇｌｅ犬体内における薬物動態パラメータは、表５の通りである。
表５は、Ｂｅａｇｌｅ犬の血漿におけるヒドロキシチロソールの薬物動態パラメータ（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝６）である。
表６は、投与１時間後、Ｂｅａｇｌｅ犬の脳組織におけるヒドロキシチロソールの濃度（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝６）である。
結果により、経口錠剤に比べて、ヒドロキシチロソールを舌下投与の投与方式の方が早く血液循環に入ってピークに達することができ、かつヒドロキシチロソールも早く脳に富化可能であることが示された。ヒドロキシチロソールカプロン酸エステルは、ヒドロキシチロソールの血漿と脳組織の暴露レベルを高めることができ、ヒドロキシチロソールが血液脳関門を透過して脳組織に入ってうつ病の予防と治療効果を発揮することに有利である。

Claims (11)

1. 式（Ｉ）で表される、
   

   

   ヒドロキシチロソールの、ヒドロキシチロソールを唯一の抗うつ有効成分とする、うつ病を予防または治療するための製品の製造における使用。
2. 請求項１の式（Ｉ）で表される化合物の－ＯＨが置換されてなる、式（II）で表される、
   ヒドロキシチロソール誘導体の、うつ病を予防または治療するための製品の製造における使用。
3. 請求項１の式（Ｉ）で表される化合物の一部または全部の－ＯＨが置換されてなる、ヒドロキシチロソール誘導体の、うつ病を予防または治療するための製品の製造における使用であって、
   前記ヒドロキシチロソール誘導体は、ヒドロキシチロソールと無機酸または有機酸が反応してなる、生理的に許容可能なヒドロキシチロソールエステルであり、
   前記無機酸は、硫酸、リン酸、炭酸、塩酸から選択され、
   前記有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、マレイン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、コハク酸または脂肪酸から選択される、
   ことを特徴とする、前記使用。
4. 前記うつ病を予防または治療するための製品は、医薬品、食品、機能性食品、特別医療目的用食品から選択される、ことを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の使用。
5. 前記うつ病を予防または治療するための製品は、経口剤、注射剤または外用剤の医薬品であることを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の使用。
6. 前記経口剤は、舌下錠であり、前記外用剤は、鼻腔投与剤である、ことを特徴とする請求項５に記載の使用。
7. 前記ヒドロキシチロソール誘導体は、他の活性成分と組み合わせて配合剤にする、ことを特徴とする請求項２または３に記載の使用。
8. 前記他の活性成分は、抗うつ活性を有する成分、鎮静催眠活性を有する成分、抗酸化活性を有する成分、または、神経衰弱治療作用を有する成分から選ばれるものであり、
   前記抗うつ活性を有する成分は、塩酸セルトラリン、フルオキセチン、パロキセチン、シタロプラム、フルボキサミン、塩酸ドクサピン、セレギリン、サフィナミドメシル、トロキサトン、
   前記鎮静催眠活性を有する成分は、クアゼパム、テマゼパム、エスタゾラム、γ－アミノ酪酸のいずれか一種または組み合わせ、
   前記抗酸化活性を有する成分は、サリドロシド、ヒドロキシサリドロシド、チロソール、
   前記神経衰弱治療作用を有する成分は、ガストロジン、
   から選択されるものであることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
9. 前記うつ病を予防または治療するための製品における前記ヒドロキシチロソール及び前記ヒドロキシチロソール誘導体の含有量が、０．０１％～９９．９９％であり、前記％は質量体積パーセント（ｗ／ｖ）または質量百分率（ｗ／ｗ）である、ことを特徴とする請求項１～３のいずれか一項に記載の使用。
10. ホスファチジルセリン、シデ樹皮抽出物、ホノキオール、マグノロールのいずれも含有せず、
    式（Ｉ）で表される、
    

    

    ヒドロキシチロソール、
    及び／または、
    式（II）で表される、
    ヒドロキシチロソール誘導体を抗うつ有効成分として含有する、うつ病を予防または治療するための製品。
11. 前記うつ病を予防または治療するための製品は、医薬品、食品、機能性食品、特別医療目的用食品から選択される、ことを特徴とする請求項１０に記載の製品。