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JP7351005B2 - プロテアーゼを含む自動食器洗浄組成物 - Google Patents

プロテアーゼを含む自動食器洗浄組成物 Download PDF

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JP7351005B2
JP7351005B2 JP2022522770A JP2022522770A JP7351005B2 JP 7351005 B2 JP7351005 B2 JP 7351005B2 JP 2022522770 A JP2022522770 A JP 2022522770A JP 2022522770 A JP2022522770 A JP 2022522770A JP 7351005 B2 JP7351005 B2 JP 7351005B2
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seq
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ジャクソン、ミシェル
ピカリング、カーリー
アレクセイエフ、ヴィクトール・ユーリエヴィチ
ベーブ、リリア・マリア
ゲーデゲブール、フリッツ
ケイパー、ティイス
プリセリウス、シーナ
ヴァン・スティクト・タンス、サンダー
マルダー、ハーム
レデスティグ、ニルス・ヘニング
ダンクマイヤー、リディア
ストーナー、マイケル
ガースク、アダム
ギルニカル、ルーパ・サントシュ
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Procter and Gamble Co
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Description

本発明は、洗剤の分野に属する。特に、本発明は、特定のプロテアーゼを含む、無リン酸塩自動食器洗浄洗剤組成物に関する。本組成物は、従来のプロテアーゼを含む組成物に対して複数の条件下で改善された洗浄をもたらす。
自動食器洗浄の性能を改善するための恒久的な要望が存在する。食器洗浄機は、ユーザーが選択することができる複数のプログラムを提示する。プログラムは、温度、サイクル数及びサイクルの長さにおいて変動する。プロテアーゼは、温度の影響を受けやすい可能性がある。高温に耐えるように設計されたプロテアーゼは、通常、温度堅牢性が構造的剛性によって駆動されることが多いため、遅い運動速度を有する。
自動食器洗浄製品は、特定の使用条件下で最適な性能を有するように設計され得、例えば、高温の長いサイクルにおいて最適な性能を有するように組成物を設計することができるが、高温の長時間サイクルで最適な性能を有する組成物は、低温の短時間サイクルでは最適な性能を有さない場合があり、逆もまた同様である。
本発明の目的は、高温の長時間プログラム及び低温の短時間プログラムを含む複数のプログラムにおいてより良好な洗浄を提供する無リン酸塩自動食器洗浄組成物を提供することである。
本発明の第１の態様によると、無リン酸塩自動食器洗浄組成物が提供される。組成物は、特定のプロテアーゼを含む。組成物は、食器が非常に汚れている場合であっても、高温サイクル（主洗浄温度は４０℃超、好ましくは４５℃超である）、長時間サイクル（主洗浄は１５分より長い）及び短時間サイクル（主洗浄は１５分未満、好ましくは１２分未満、特に１０分未満持続する）で改善された性能を提示する。
本発明の第２の態様によれば、高温の長時間サイクルでの自動食器洗浄の方法が、提供される。
本発明の第１の態様の開示は、必要な変更を加えて、本発明の第２の態様に適用される。
本発明は、自動食器洗浄組成物を包含する。組成物は、無リン酸塩で、新規のプロテアーゼを含む。本組成物は、高温の長時間サイクルを有するプログラムを含む、広範囲の食器洗浄機プログラムにおいて、特に卵及びクリーム・ブリュレにおいて良好な洗浄を提供する。
「高温」サイクルとは、本明細書において、主サイクルが４０℃超、好ましくは４５℃超の温度で実施される食器洗浄プログラムとして理解される。
本明細書で「長時間」サイクルとは、主サイクルが少なくとも１５分間、好ましくは少なくとも２０分間及びより好ましくは少なくとも２５分間の期間を有する、食器洗浄プログラムとして理解される。
本明細書で「短時間」サイクルとは、主サイクルが１５分間未満、好ましくは１２分間未満、及びより好ましくは１０分間未満の期間を有する、食器洗浄プログラムとして理解される。
本発明の組成物は、変異型プロテアーゼを含み、変異型プロテアーゼは、基準プロテアーゼ（配列番号１又は２のプロテアーゼ）に対して既定の割合の同一性を有する。
本発明の組成物のプロテアーゼは、本明細書において「本発明のプロテアーゼ」と称されることがある。配列番号１又は配列番号２のいずれかを有するプロテアーゼは、本明細書では「基準プロテアーゼ」又は「親プロテアーゼ」と称されることがある。
２つのアミノ酸配列間又は２つのヌクレオチド配列間の関連性は、パラメータ「配列同一性」によって表される。
用語「変異体」は、基準プロテアーゼに対する１つ以上の（例えば、いくつかの）位置において突然変異、すなわち、置換、挿入、及び／又は欠失を含むプロテアーゼを意味する。置換は、ある位置を占有するアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味し、欠失は、ある位置を占有するアミノ酸の除去を意味し、挿入は、ある位置を占有するアミノ酸に隣接しかつその直後に、アミノ酸を付加することを意味する。本発明の変異体は、基準プロテアーゼと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、特に９６％の同一性を有する。
好ましい実施形態では、変異体は、配列番号１のプロテアーゼと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９６％の同一性を示す。配列番号１は、Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ－クレードのサブチリシンＢｇｉ０２４４６に相当する。他の実施形態では、変異体は、配列番号２のプロテアーゼと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９６％の同一性を示す。配列番号２は、Ｂ．ｌｅｎｔｕｓのサブチリシンに相当する。
用語「野生型」プロテアーゼは、自然界に見られる細菌、酵母菌、又は糸状菌等の自然発生微生物によって発現されるプロテアーゼを意味する。
酵素関連の用語
アミノ酸修飾に関する命名法
本明細書の酵素変異体を説明する中で、参照しやすいように以下の命名法が用いられる：元のアミノ酸：位置：置換アミノ酸。
この命名法に従うと、例えば、１９５位におけるグリシンの代わりにグルタミン酸に置換したものは、Ｇ１９５Ｅと示される。同じ位置でグリシンが欠失したものは、Ｇ１９５＊と示され、追加のアミノ酸残基、例えばリジンを挿入したものは、Ｇ１９５ＧＫと示される。特定の酵素が他の酵素と比較して「欠失」を含有し、このような位置で挿入が行われる場合、これは、３６位におけるアスパラギン酸の挿入については＊３６Ｄというように示される。複数の変異は、ダッシュ「－」により分離され、すなわち、Ｓ９９Ｇ－Ｖ１０２Ｎは、グリシンとアスパラギンの代わりにそれぞれセリンとバリンを置換する９９位と１０２位における変異を表す。ある位置（例えば、１０２）のアミノ酸が、アミノ酸の群、例えば、Ｎ及びＩからなる群から選択される別のアミノ酸により置換され得る場合、これは、Ｖ１０２Ｎ、Ｉと示される。「Ｘ」は任意のアミノ酸を表す。
すべての場合において、一般に認められたＩＵＰＡＣの一文字又は三文字アミノ酸略記を用いる。
プロテアーゼのアミノ酸番号付け
本特許で使用する番号は、示した配列に対するものであり、ＢＰＮ番号ではない。
アミノ酸の同一性
２つのアミノ酸配列の間の関連性は、パラメータ「同一性」により説明される。本発明の目的上、２つのアミノ酸配列のアラインメントは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｏｒｇ）バージョン２．８．０からのＮｅｅｄｌｅプログラムを用いることによって割り出される。Ｎｅｅｄｌｅプログラムは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．及びＷｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３～４５３に記載のグローバルアラインメントアルゴリズムを実行する。用いられる置換マトリクスは、ＢＬＯＳＵＭ６２であり、ギャップオープニングペナルティは、１０であり、ギャップエクステンションペナルティは、０．５である。
本明細書で使用される酵素のアミノ酸配列（「本配列」）と、異なるアミノ酸配列（「異質配列」）との間の同一性の度合いは、２つの配列のアラインメントにおける完全一致の数を「本配列」の長さ又は「異質配列」の長さのいずれか短い方で除算して、計算される。この結果を同一性パーセントとして表す。完全一致は、「本配列」及び「異質配列」に、同一のアミノ酸残基が重複部分の同じ位置に備わっている場合に発生する。配列の長さは、配列中のアミノ酸残基の数である。
用語「サクシネート系化合物」及び「コハク酸系化合物」は、本明細書において互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、特許請求の範囲において使用される「ａ」及び「ａｎ」などの冠詞は、特許請求又は記述されるもののうちの１つ以上を意味すると理解される。
別段の注記がない限り、すべての成分又は組成物の濃度は、当該成分又は組成物の活性部分に関するものであり、このような成分又は組成物の市販の供給源に存在する場合のある不純物、例えば、残留溶媒又は副生成物は除外される。
すべての百分率及び比率は、別途記載のない限り、重量基準で計算される。すべての百分率及び比率は、別途記載のない限り、全組成に基づいて計算される。
本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列又は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、特に少なくとも９６％の同一性を有する。プロテアーゼは、配列番号２の番号を使用して、次のｉ）～ｉｖ）：
（ｉ）Ｘ０３９Ｅ、Ｘ０７４Ｄ、Ｘ０９９Ｒ、Ｘ１２６Ａ、Ｘ１２７Ｅ、及びＸ１２８Ｇからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換、好ましくは少なくとも４つ、好ましくは少なくとも５つ、特に６つのアミノ酸置換と組み合わせて、Ｘ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ、Ｘ２０７Ｑ、Ｘ２１１Ｑ／Ｎ及びＸ２１２Ｑからなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのアミノ酸置換、又は
（ｉｉ）Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１１６Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ、
Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｎ、
Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ、
Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ、又は
（ｉｉｉ）Ｘ２４２Ｄ及びＸ２５６Ｅから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換、好ましくはアミノ酸置換Ｘ２５６Ｅを更に含む、群（ｉ）及び（ｉｉ）のプロテアーゼのいずれか、又は
（ｉｖ）Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２５６Ｅ、からなる群のいずれかから選択される置換を含む。
群ｉ）からの好ましい変異体は、
１）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｘ２１１Ｑ、
２）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｘ２１２Ｑ、
３）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ２１１Ｑ／Ｎ－Ｘ２１２Ｑ、
４）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ、
５）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｑ／Ｎ、
６）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ２０７Ｑ－Ｘ２１２Ｑ、
７）
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２８Ｇ
ｅ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｆ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｇ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｈ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｉ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｊ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｋ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｌ．Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２８Ｇ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｑ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｒ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｓ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｔ．Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２８Ｇ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ
ｙ．Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせたＸ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｑ／Ｎ－Ｘ２１２Ｑ、
からなる群から選択されるアミノ酸置換を含む変異体から選択される。
特に好ましい置換は、
ａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ
ｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ａ－Ｘ２１１Ｑ
ｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｇ－Ｘ２１２Ｑ
ｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｅ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ａ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｆ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｇ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｎ
ｈ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２１２Ｑ
ｉ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｊ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２５６Ｅ
ｋ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ
ｌ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｍ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｎ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ａ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｏ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｐ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｋ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｑ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｌ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｒ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｑ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｓ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｒ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｔ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｔ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｕ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｖ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｖ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｗ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２５６Ｅ
ｘ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ
ｙ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｎ
ｚ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２１２Ｑ
ａａ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｂｂ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｎ－Ｘ２５６Ｅ
ｃｃ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｑ
ｄｄ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｅｅ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｆｆ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１２Ｑ
ｇｇ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２１２Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｈｈ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２０７Ｑ－Ｘ２５６Ｅ
ｉｉ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｓ－Ｘ２１１Ｑ
ｊｊ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ１９８Ｌ－Ｘ２１１Ｑ
ｋｋ．Ｘ０３９Ｅ－Ｘ０７４Ｄ－Ｘ０９９Ｒ－Ｘ１１６Ｒ－Ｘ１２６Ａ－Ｘ１２７Ｅ－Ｘ１２８Ｇ－Ｘ２１１Ｑ－Ｘ２４２Ｄ－Ｘ２５６Ｅ、からなる群から選択される。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、次のｉ）～ｉｖ）：
（ｉ）Ｓ０３９Ｅ、Ｎ０７４Ｄ、Ｓ０９９Ｒ、Ｓ１２６Ａ、Ｄ１２７Ｅ、及びＦ１２８Ｇからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換と組み合わせたＮ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ、Ｒ２０７Ｑ、Ｍ２１１Ｑ／Ｎ及びＮ２１２Ｑからなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのアミノ酸置換、又は
（ｉｉ）Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｎ１１６Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ
Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｎ１２６Ａ－Ｓ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ、
Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｎ１２６Ａ－Ｓ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ、
Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｎ１２６Ａ－Ｓ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２０７Ｑ、又は
（ｉｉｉ）Ｎ２４２Ｄ及びＱ２５６Ｅから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を更に含む、（ｉ）及び（ｉｉ）の変異体のいずれか、又は
（ｉｖ）Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｑ２５６Ｅのいずれかから選択されるアミノ酸置換を含む。
又は
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、配列番号２の番号を使用して、
（ｉ）Ｐ０３９Ｅ、Ｎ０７４Ｄ、Ｓ０９９Ｒ、Ｓ１２６Ａ、Ｐ１２７Ｅ、及びＳ１２８Ｇからなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ、Ｔ２０７Ｑ、Ｌ２１１Ｑ／Ｎ及びＮ２１２Ｑからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸置換、又は
（ｉｉ）Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｇ１１６Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ、
Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｇ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｎ、
Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｇ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ、
Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｇ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ、又は
（ｉｉｉ）Ｎ２４２Ｄ及びＬ２５６Ｅから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を更に含む、（ｉ）及び（ｉｉ）の変異体のいずれか、又は
（ｉｖ）Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２５６Ｅから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｆ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｆ１２８Ｇ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｆ１２８Ｇ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２８Ｇ
ｅ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｆ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｇ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｈ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｉ．Ｎ０７４Ｄ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｊ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｋ．Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｌ．Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２８Ｇ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｑ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｒ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｓ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｔ．Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｓ１２８Ｇ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ
ｙ．Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、及び
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ、からなる群から選択される置換と組み合わせて、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｍ２１１Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む。
本発明による好ましいプロテアーゼは、Ｘ２４２Ｄ及びＸ２５６Ｅから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換、より好ましくはＸ２５６Ｅを更に含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％及び特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ
ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ
ｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｎ２１２Ｑ
ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｅ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｆ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｇ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ
ｈ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
ｉ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｊ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ
ｋ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ
ｌ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｋ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｑ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｒ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｓ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｒ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｔ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｔ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｖ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｗ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｑ２５６Ｅ
ｘ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ
ｙ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ
ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
ａａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｂｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ
ｃｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ
ｄｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｅｅ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｆｆ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｇｇ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｈｈ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
ｉｉ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｓ－Ｍ２１１Ｑ
ｊｊ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑ
ｋｋ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｎ１１６Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２４２Ｄ－Ｑ２５６Ｅ、からなる群れから選択されるアミノ酸置換を含む。
好ましくは、本発明のプロテアーゼは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、プロテアーゼは、
ａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ
ｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｌ２１１Ｑ
ｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｎ２１２Ｑ
ｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｅ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｆ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｇ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｎ
ｈ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
ｉ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｊ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｎ－Ｌ２５６Ｅ
ｋ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ
ｌ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｍ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｎ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｌ２１１Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｏ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｐ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｋ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｑ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｒ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｑ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｓ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｒ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｔ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｔ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｕ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｖ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｖ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｗ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２５６Ｅ
ｘ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ
ｙ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｎ
ｚ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
ａａ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｂｂ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｎ－Ｌ２５６Ｅ
ｃｃ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｑ
ｄｄ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｅｅ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｆｆ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
ｇｇ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｈｈ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｔ２０７Ｑ－Ｌ２５６Ｅ
ｉｉ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｓ－Ｌ２１１Ｑ
ｊｊ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｌ２１１Ｑ
ｋｋ．Ｐ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｇ１１６Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｐ１２７Ｅ－Ｓ１２８Ｇ－Ｌ２１１Ｑ－Ｎ２４２Ｄ－Ｌ２５６Ｅ、から選択されるアミノ酸置換を含む。
本発明の組成物中のプロテアーゼの好ましいレベルは、組成物１グラム当たり約０．０４～約７ｍｇ、より好ましくは約０．０５～約４ｍｇの活性プロテアーゼを含む。
自動食器洗浄組成物
自動食器洗浄組成物は、任意の物理的形態であってよい。自動食器洗浄組成物は、ルース粉末であっても、ゲルであっても、単位用量形態で提示されてもよい。好ましくは、組成物は単位用量形態であり、単位用量形態としては、圧縮錠剤及び水溶性パックが挙げられる。本発明の自動食器洗浄組成物は、好ましくは、単位用量形態で提示され、固体、液体及びゲルの形態を含む任意の物理的形態であり得る。本発明の組成物は、多区画型パックの形態、より具体的には、異なる物理的形態の組成物を有する区画、例えば固体形態の組成物を含む区画と液体形態の組成物を含む別の区画とを含む多区画型パックでの提供に非常によく適している。組成物は、好ましくは、ポリビニルアルコールなどの水溶性フィルムに封入される。厚さ１００μｍ未満、好ましくは２０～９０μｍのポリビニルアルコールフィルムに包まれた単位用量形態の組成物がとりわけ好ましい。本発明の洗剤組成物は、約８～約２５グラム、好ましくは約１０～約２０グラムの重量を有する。この重量範囲は、食器洗浄機のディスペンサーに余裕をもって収まる。この範囲は洗剤としては少ない量に相当するものであるが、洗剤は上記に述べたような効果のすべてを提供するように配合されている。
組成物は、好ましくは、無リン酸塩である。本明細書において「無リン酸塩」とは、組成物が、組成物の１重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のリン酸塩を含むものとして理解される。
錯化剤系
本発明の目的のために、「錯化剤」とは、カルシウム、マグネシウム、鉛、銅、亜鉛、カドミウム、水銀、マンガン、鉄、アルミニウム、及び他のカチオン性多価イオンのような多価イオンと結合して水溶性の錯体を形成することが可能な化合物のことである。錯化剤は、Ｃａ２＋に対する対数安定性定数（［ｌｏｇＫ］）が少なくとも３である。安定性定数、ｌｏｇＫは、温度２５℃でイオン強度０．１の溶液中で測定される。
本発明の組成物は、好ましくは、錯化剤系の組成物の１０重量％～５０重量％を含む。錯化剤系は、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、クエン酸、グルタミン酸－Ｎ，Ｎ－二酢酸（ＧＬＤＡ）、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）、カルボキシメチルイヌリン、Ｌ－アスパラギン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸四ナトリウム塩（ＡＳＤＡ）及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の錯化剤を含む。好ましくは、錯化剤系は、少なくとも１０重量％のＭＧＤＡの組成物を含む。錯化系は、クエン酸、（ＧＬＤＡ）、（ＩＤＳ）、カルボキシメチルイヌリン、Ｌ－アスパラギン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸四ナトリウム塩（ＡＳＤＡ）及びこれらの混合物からなる群から選択される錯化剤を更に含み得る。好ましくは、錯化剤系は、組成物の少なくとも１０重量％のＭＧＤＡ及び少なくとも１０重量％のクエン酸の組成物を含む。本発明の目的のために、用語「酸」は、錯化剤を指すとき、酸及びその塩を含む。
好ましい実施形態では、組成物は、ＭＧＤＡの組成物、より好ましくはＭＧＤＡの三ナトリウム塩の少なくとも１５重量％、より好ましくは２０重量％～４０重量％を含む。この高レベルのＭＧＤＡを含む組成物は、硬水でも、長時間及び／又は高温サイクルでも良好に機能する。
本発明の錯化剤系は、クエン酸を更に含むことができる。
分散剤ポリマー
分散剤ポリマーは、組成物の約０．１～約２０重量％、好ましくは０．２～約１５重量％、より好ましくは０．３～重量％の任意の好適な量で使用され得る。
分散剤ポリマーは、自動食器洗浄プロセスにおいてカルシウム又は炭酸カルシウムを懸濁させることができる。
分散剤ポリマーは、２５℃で、３０～２５０ｍｇのＣａ／ｇの分散剤ポリマー、好ましくは３５～２００ｍｇのＣａ／ｇの分散剤ポリマー、より好ましくは４０～１５０ｍｇのＣａ／ｇの分散剤ポリマーの範囲内で、カルシウム結合能を有する。ポリマーが本発明の意味において分散剤ポリマーであるかどうかを判定するために、以下の指示に従い、以下のカルシウム結合能の判定を行う。
カルシウム結合能試験方法
本明細書で言及されるカルシウム結合能は、Ｍｅｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ（商標）ベンチトップメータ及びＰｅｒｆｅｃｔＩＯＮ（商標）櫛形Ｃａ組み合わせ電極などのｐＨ／イオンメータを用いて、滴定によって決定される。結合能を測定するために、ビーカー又はターゴトメータポットに適した加熱撹拌装置を２５℃に設定し、メータ付イオン電極を製造元の指示に従って較正する。電極較正の標準濃度は試験濃度をブラケティングし、２５℃で測定しなければならない。脱イオン水１Ｌに３．６７ｇのＣａＣｌ２－２Ｈ２Ｏを添加することにより、１０００ｍｇ／ｇのＣａの原液を調製し、次いで希釈を行ってそれぞれ１００ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、及び１ｍｇ／ｇ濃度のカルシウムを含む、それぞれ１００ｍＬの３つの作用液を調製する。１００ｍｇ Ｃａ／ｇの作用液を、２５℃で実施される滴定中の初期濃度として使用する。各作用液のイオン強度は、２．５ｇ／ＬのＮａＣｌをそれぞれ添加することによって調節する。１００ｍｇ Ｃａ／ｇの作用液１００ｍＬを加熱し、２５℃に達するまで撹拌する。カルシウムイオン濃度の初期測定は、イオン電極を使用して溶液が２５℃に達したときに行う。次いで、試験ポリマーをカルシウム作用液に徐々に加え（０．０１ｇ／Ｌ間隔で）、各増分の添加後に５分間攪拌した後に測定する。滴定は、溶液が１ｍｇ／ｇのカルシウムに達したら停止する。残りの２つのカルシウム濃度の作用液を用いて、滴定手順を繰り返す。試験ポリマーの結合能は、添加された試験ポリマーのグラム／Ｌに対する、測定されたカルシウム濃度の直線勾配として計算される。
分散剤ポリマーは、好ましくは、６を超えるｐＨを有する水溶液中に溶解した場合に、負の正味電荷を有する。
分散剤ポリマーは、より低いｐＨで負電荷を増加させ、硬水中でのその分散特性を改善するために、スルホン化カルボン酸エステル又はアミドもまた有し得る。好ましい分散剤ポリマーは、スルホン化／カルボキシル化ポリマー、すなわち、スルホン化モノマー及びカルボキシル化モノマーの両方を含むポリマーである。
好ましくは、分散剤ポリマーは、ポリカルボン酸のスルホン化誘導体であり、２、３、４又はそれ以上の異なるモノマー単位を含むことができる。好ましいコポリマーは、次のものを含む：
一般式（ＩＩＩ）を有するカルボン酸モノマーから誘導された少なくとも１つの構造単位：
式中、Ｒ１～Ｒ３は、水素、メチル、２～１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖飽和アルキル基、２～１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖のモノ又はポリ不飽和アルケニル基、－ＮＨ２若しくは－ＯＨ、又は－ＣＯＯＨ、又はＣＯＯＲ４で置換された前述のアルキル又はアルケニル基から独立して選択され、式中、Ｒ４は、水素、アルカリ金属又は２～１２個の炭素を有する直鎖若しくは分枝鎖の飽和若しくは不飽和のアルキル若しくはアルケニル基であり、
好ましいカルボン酸モノマーは、アクリル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、イタコン酸、シトラコン酸、２－フェニルアクリル酸、桂皮酸、クロトン酸、フマル酸、メタクリル酸、２－エチルアクリル酸、メチレンマロン酸又はソルビン酸のうちの１つ以上を含む。アクリル及びメタクリル酸がより好ましい。
任意に、一般式（ＩＶ）を有する少なくとも１つの非イオン性モノマーから誘導される１つ以上の構造単位：
式中、Ｒ５～Ｒ７は、水素、メチル、フェニル又は１～６個の炭素原子を含むヒドロキシアルキル基から独立して選択され、環状構造の一部であってもよく、Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＯＮＲ８－から選択される、任意に存在するスペーサ基であり、Ｒ８は、直鎖若しくは分枝鎖の、１～２２個の炭素原子を有する飽和アルキル基又は６～２２個の炭素原子を有する不飽和の好ましくは芳香族の基から選択される。
好ましい非イオン性モノマーは、ブテン、イソブテン、ペンテン、２－メチルペント－１－エン、３－メチルペント－１－エン、２，４，４－トリメチルペント－１－エン、２，４，４－トリメチルペント－２－エン、シクロペンテン、メチルシクロペンテン、２－メチル－３－メチル－シクロペンテン、ヘキセン、２，３－ジメチルヘキサ－１－エン、２，４－ジメチルヘキサ－１－エン、２，５－ジメチルヘキサ－１－エン、３，５－ジメチルヘキサ－１－エン、４，４－ジメチルヘキサ－１－エン、シクロヘキセン、メチルシクロヘキセン、シクロヘプテン、１０個以上の炭素原子を有する、デカ－１－エン、ドデカ－１－エン、ヘキサデカ－１－エン、オクタデカ－１－エン及びドコサ－１－エンなどのα－オレフィンのうちの１つ以上を含み、好ましい芳香族モノマーは、スチレン、α－メチルスチレン、３－メチルスチレン、４－ドデシルスチレン、２－エチル－４－ベジルスチレン（bezylstyrene）、４－シクロヘキシルスチレン、４－プロピルスチロール、１－ビニルナフタレン、２－ビニルナフタレンであり、好ましいカルボン酸エステルモノマーは、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ｔ－ブチル（メタ）アクリレート、ペンチル（メタ）アクリレート、ヘキシル（メタ）アクリレート、２－エチルヘキシル（メタ）アクリレート、オクチル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート及びベヘニル（メタ）アクリレートであり、好ましいアミドは、Ｎ－メチルアクリルアミド、Ｎ－エチルアクリルアミド、Ｎ－ｔ－ブチルアクリルアミド、Ｎ－２－エチルヘキシルアクリルアミド、Ｎ－オクチルアクリルアミド、Ｎ－ラウリルアクリルアミド、Ｎ－ステアリルアクリルアミド、Ｎ－ベヘニルアクリルアミドである。
並びに一般式（Ｖ）及び（ＶＩ）を有する少なくとも１つのスルホン酸モノマーから誘導される少なくとも１つの構造単位：
式中、Ｒ７は、少なくとも１つのｓｐ２結合を含む基であり、Ａは、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、アミド又はエステル結合であり、Ｂは、単環式又は多環式芳香族基又は脂肪族基であり、各ｔは、独立して０又は１であり、Ｍ＋は、カチオンである。一態様では、Ｒ７は、Ｃ２～Ｃ６アルケンである。別の態様では、Ｒ７は、エテン、ブテン又はプロペンである。
好ましいスルホン化モノマーは、１－アクリルアミド－１－プロパンスルホン酸、２－アクリルアミド－２－プロパンスルホン酸、２－アクリルアミド－２－メチル－１－プロパンスルホン酸、２－メタクリルアミド－２－メチル－１－プロパンスルホン酸、３－メタクリルアミド－２－ヒドロキシ－プロパンスルホン酸、アリルスルホン酸、メタリルスルホン酸、アリルオキシベンゼンスルホン酸、メタリルオキシベンゼンスルホン酸、２－ヒドロキシ－３－（２－プロペニルオキシ）プロパンスルホン酸、２－メチル－２－プロペン－１－スルホン酸、スチレンスルホン酸、ビニルスルホン酸、３－スルホプロピル、３－スルホ－プロピルメタクリレート、スルホメタクリルアミド及び上述の酸又はこれらの水溶性塩の混合物のうちの１つ以上を含む。
好ましくは、このポリマーは、以下の濃度の各種モノマー、すなわち、ポリマーの約４０～約９０重量％、好ましくは約６０～約９０重量％の１種以上のカルボン酸モノマー、ポリマーの約５～約５０重量％、好ましくは約１０～約４０重量％の１種以上のスルホン酸モノマー、及び任意にポリマーの約１重量％～約３０重量％、好ましくは約２～約２０重量％の１種以上の非イオン性モノマーを含む。特に好ましいポリマーは、ポリマーの約７０重量％～約８０重量％の少なくとも１種のカルボン酸モノマー及びポリマーの約２０重量％～約３０重量％の少なくとも１種のスルホン酸モノマーを含む。
ポリマー中、カルボン酸基又はスルホン酸基のすべて又はいくつかが中和形態で存在していてよく、すなわちいくつか又はすべての酸性基中のカルボン酸基及び／又はスルホン酸基の酸性水素原子が、金属イオン、好ましくはアルカリ金属イオン、特にナトリウムイオンと置き換えられ得る。
カルボン酸は、好ましくは（メタ）アクリル酸である。スルホン酸モノマーは、好ましくは２－アクリルアミド－２－プロパンスルホン酸（ＡＭＰＳ）である。
好ましい市販のポリマーとしては、Ａｌｃｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌにより供給されるＡｌｃｏｓｐｅｒｓｅ２４０、Ａｑｕａｔｒｅａｔ ＡＲ５４０、及びＡｑｕａｔｒｅａｔ ＭＰＳ、Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓによって供給されるＡｃｕｍｅｒ３１００、Ａｃｕｍｅｒ２０００、Ａｃｕｓｏｌ５８７Ｇ及びＡｃｕｓｏｌ５８８Ｇ、ＢＦ Ｇｏｏｄｒｉｃｈによって供給されるＧｏｏｄｒｉｃｈ Ｋ－７９８、Ｋ－７７５及びＫ－７９７並びにＩＳＰ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．によって供給されるＡＣＰ１０４２が挙げられる。特に好ましいポリマーは、Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓによって供給されるＡｃｕｓｏｌ５８７Ｇ及びＡｃｕｓｏｌ５８８Ｇである。
適切な分散剤ポリマーには、低分子量のアニオン性カルボン酸ポリマーが含まれる。それらは、約２００，０００ｇ／モル以下、又は約７５，０００ｇ／モル以下、又は約５０，０００ｇ／モル以下又は約３，０００ｇ／モル～約５０，０００ｇ／モル、好ましくは約５，０００ｇ／モル～約４５，０００ｇ／モルの重量平均分子量を有するホモポリマー又はコポリマーであり得る。分散剤ポリマーは、１，０００～２０，０００、特に２，０００～１０，０００及び特に好ましくは３，０００～５，０００の平均分子量を有するポリアクリレートの低分子量ホモポリマーであってもよい。
分散剤ポリマーは、７０，０００未満の分子量を有する、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、アクリル酸及び／又はメタクリル酸とマレイン酸のコポリマー並びにアクリル酸及び／又はメタクリル酸とフマル酸のコポリマーであってもよい。それらの分子量は、２，０００～８０，０００、より好ましくは２０，０００～５０，０００、特に３０，０００～４０，０００ｇ／モルの範囲であり、（メタ）アクリレート対マレエート又はフマレートセグメントの比は３０：１～１：２の範囲である。
分散剤ポリマーは、３，０００～１００，０００、あるいは４，０００～２０，０００の分子量を有するアクリルアミドとアクリレートとのコポリマーであってもよく、分散剤ポリマーの５０重量％未満、あるいは２０重量％未満のアクリルアミド含有量も使用され得る。あるいは、そのような分散剤ポリマーは、４，０００～２０，０００の分子量及びポリマーの０重量％～１５％のアクリルアミド含有量を有してもよい。
本明細書に好適な分散剤ポリマーには、イタコン酸ホモポリマー及びコポリマーも含まれる。
あるいは、分散剤ポリマーは、アルコキシル化ポリアルキレンイミン、アルコキシル化ポリカルボキシレート、ポリエチレングリコール、スチレンコポリマー、セルロースサルフェートエステル、カルボキシル化ポリサッカライド、両親媒性グラフトコポリマー及びこれらの混合物からなる群から選択され得る。
漂白剤系
本発明の組成物は、好ましくは、高濃度の漂白剤、好ましくは過炭酸塩を、漂白活性化剤又は漂白触媒又はその両方と組み合わせて含む、漂白系を含む。好ましくは、漂白活性化剤はＴＡＥＤであり、漂白触媒はマンガン漂白触媒である。
漂白剤
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の約１０～約２０重量％、より好ましくは約１２～約１８重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸塩を含む。
無機及び有機漂白剤が、本明細書における使用に好適である。無機漂白剤には、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩及び過ケイ酸塩などの過水和塩が挙げられる。無機過水和塩は、通常、アルカリ金属塩である。無機過水和塩は、追加の保護なしの結晶性固体として含まれ得る。あるいは、塩はコーティングされていてもよい。好適なコーティングには、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム及びこれらの混合物が挙げられる。当該コーティングは、表面に塗布される混合物として塗布されるか、又は順次積層して塗布され得る。
アルカリ金属過炭酸塩、特に過炭酸ナトリウムは、本明細書における使用に好ましい漂白剤である。過炭酸塩は、最も好ましくは、製品内安定性を提供するコーティングされた形態で製品に組み込まれる。
過酸化モノ過硫酸カリウムは、本明細書で有用な別の無機過水和塩である。
典型的な有機漂白剤は、有機ペルオキシ酸、特にドデカンジペルオキシ酸、テトラデカンジペルオキシ酸及びヘキサデカンジペルオキシ酸である。モノ及びジペルアゼライン酸、モノ及びジペルブラシル酸も、本明細書において好適である。ジアシル及びテトラアシル過酸化物、例えば過酸化ジベンゾイル及び過酸化ジラウロイルは、本発明の関連において使用可能な他の有機過酸化物である。
更なる典型的な有機漂白剤としては、ペルオキシ酸が挙げられ、具体例は、アルキルペルオキシ酸及びアリールペルオキシ酸である。好ましい代表例は、（ａ）ペルオキシ安息香酸及びその環置換の誘導体、例えばアルキルペルオキシ安息香酸の他、ペルオキシ－α－ナフトエ酸及びモノペルフタル酸マグネシウム、（ｂ）脂肪族又は置換脂肪族ペルオキシ酸、例えばペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε－フタルイミドペルオキシカプロン酸［フタロイミノペルオキシヘキサン酸（ＰＡＰ）］、ｏ－カルボキシベンズアミドペルオキシカプロン酸、Ｎ－ノネニルアミドペルアジピン酸及びＮ－ノネニルアミドペルスクシネート、並びに（ｃ）脂肪族及び芳香脂肪族ペルオキシジカルボン酸、例えば１，１２－ジペルオキシカルボン酸、１，９－ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、ジペルオキシフタル酸、２－デシルジペルオキシブタン－１，４－二酸、Ｎ，Ｎ－テレフタロイルジ（６－アミノペルカプロン酸）である。
漂白活性化剤
漂白活性化剤は、典型的には、６０℃以下の温度での洗浄の過程で漂白作用を強化する有機過酸前駆体である。本明細書での使用に好適な漂白活性化剤には、過加水分解条件下で、好ましくは１～１２個の炭素原子、特に２～１０個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキソカルボン酸（peroxoycarboxylic acid）、及び／又は任意に置換された過安息香酸を与える化合物が含まれる。好適な物質は、炭素原子の数が指定されているＯ－アシル基及び／若しくはＮ－アシル基並びに／又は任意に置換されたベンゾイル基を有する。ポリアシル化アルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、アシル化トリアジン誘導体、特に１，５－ジアセチル－２，４－ジオキソヘキサヒドロ－１，３，５－トリアジン（ＤＡＤＨＴ）、アシル化グリコールウリル、特にテトラアセチルグリコールウリル（ＴＡＧＵ）、Ｎ－アシルイミド、特にＮ－ノナノイルスクシンイミド（ＮＯＳＩ）、アシル化フェノールスルホネート、特にｎ－ノナノイル－又はイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ｎ－又はイソ－ＮＯＢＳ）、デカノイルオキシ安息香酸（ＤＯＢＡ）、無水カルボン酸、特に無水フタル酸、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、二酢酸エチレングリコール及び２，５－ジアセトキシ－２，５－ジヒドロフラン、並びにクエン酸トリエチルアセチル（ＴＥＡＣ）も好まれる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の０．０１～５、好ましくは０．２～２重量％の漂白活性化剤、好ましくはＴＡＥＤを含む。
漂白触媒
本明細書の組成物は、好ましくは、漂白触媒、好ましくは金属含有漂白触媒を含有する。より好ましくは、金属含有漂白触媒は、遷移金属含有漂白触媒、特にマンガン又はコバルト含有漂白触媒である。
本明細書での使用に好ましい漂白触媒としては、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ及びＦｅビスピリジルアミン並びに関連する錯体；並びにペンタミン酢酸コバルト（ＩＩＩ）及び関連する錯体が挙げられる。本明細書での使用に特に好ましい漂白触媒は、１，４，７－トリメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ－ＴＡＣＮ）及び１，２，４，７－テトラメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ／Ｍｅ－ＴＡＣＮ）である。本明細書での使用に特に好ましい組成物は、１，４，７－トリメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ－ＴＡＣＮ）及び／又は１，２，４，７－テトラメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ／Ｍｅ－ＴＡＣＮ）である。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物の０．００１～０．５重量％、より好ましくは０．００２～０．１重量％、より好ましくは０．００５～０．０７５重量％の漂白触媒を含む。好ましくは、漂白触媒は、マンガン漂白触媒である。
無機ビルダー
本発明の組成物は、好ましくは、無機ビルダーを含む。好適な無機ビルダーは、炭酸塩、ケイ酸塩及びこれらの混合物からなる群から選択される。炭酸ナトリウムが、本明細書での使用に特に好ましい。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の５～６０重量％、より好ましくは１０～５０重量％、特に１５～４５重量％の炭酸ナトリウムを含む。
界面活性剤
本明細書での使用に好適な界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤が挙げられ、好ましくは、組成物は、いかなる他の界面活性剤も含まない。従来的には、表面修飾目的、特に非イオン性界面活性剤は、膜形成及び斑点形成を回避し、光沢を改善するためのシート化を目的として、自動食器洗浄において使用されてきた。非イオン性界面活性剤は、汚れの再堆積の防止にも寄与することができることが判明している。
好ましくは、本発明の組成物は、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系を含み、より好ましくは、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系は、蒸留水中、濃度１％で測定した場合に４０～７０℃、好ましくは４５～６５℃の転相温度を有する。「非イオン性界面活性剤系」とは、本明細書において、２つ以上の非イオン性界面活性剤の混合物を意味する。非イオン性界面活性剤系が、本明細書での使用に好適である。これらは、単一の非イオン性界面活性剤よりも、製品中で、改善された洗浄及び仕上がり特性並びに良好な安定性を有すると考えられる。
転相温度とは、それよりも低い温度では界面活性剤又はその混合物が油膨張ミセルとして水性相中に優先的に分配され、それよりも高い温度では水膨張逆ミセルとして油性相に優先的に分配される温度である。転相温度は、混濁が生じる温度を識別することによって視覚的に判断することができる。
非イオン性界面活性剤又は系の転相温度は、以下のように判断することができる：蒸留水中、溶液の１重量％の対応する界面活性剤又は混合物を含有する溶液を調製する。溶液を軽く撹拌した後、転相温度を分析して、プロセスが化学平衡で生じることを確実にする。転相温度は、７５ｍｍ密封ガラス試験管中に溶液を浸漬することによって熱安定性の浴槽内で測定する。漏れがないことを確実にするために、転相温度の測定の前後に試験管を秤量しておく。温度が事前予測した転相温度より数度下に達するまで、温度を１℃／分未満の速度で徐々に増加させる。転相温度は、濁りの最初の兆候があった時点で視覚的に判断される。
好適な非イオン性界面活性剤としては、ｉ）６～２０個の炭素原子を有するモノヒドロキシアルカノール又はアルキルフェノール（alkyphenol）と、アルコール又はアルキルフェノール１モル当たり、好ましくは少なくとも１２モル、特に好ましくは少なくとも１６モル、更により好ましくは少なくとも２０モルのエチレンオキシドとの反応によって調製される、エトキシル化非イオン性界面活性剤、ｉｉ）６～２０個の炭素原子及び少なくとも１つのエトキシ基及びプロポキシ基を有するアルコールアルコキシル化界面活性剤、が挙げられる。界面活性剤ｉ）とｉｉ）との混合物が、本明細書での使用に好ましい。
他の好適な非イオン性界面活性剤は、次式で表されるエポキシキャップ化ポリ（オキシアルキル化）アルコールであり、
式中、Ｒ１は、４～１８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基であり、Ｒ２は、２～２６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基であり、ｘは、０．５～１．５、より好ましくは約１の平均値を有する整数であり、ｙは、少なくとも１５、より好ましくは少なくとも２０の値を有する整数である。
好ましくは、式Ｉの界面活性剤は、末端エポキシド単位［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ２］中に少なくとも約１０個の炭素原子を有する。本発明によれば、式Ｉの好適な界面活性剤は、例えば、Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによる１９９４年１０月１３日に公開された国際公開第９４／２２８００号に記載の、Ｏｌｉｎ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＰＯＬＹ－ＴＥＲＧＥＮＴ（登録商標）ＳＬＦ－１８Ｂ非イオン性界面活性剤である。
酵素
他のプロテアーゼ
本発明の組成物は、本発明のプロテアーゼに加えてプロテアーゼを含むことができる。２つ以上のプロテアーゼの混合物は、特に再付着防止剤及び／又はスルホン化ポリマーとともに使用されるとき、より広い温度、サイクル持続時間及び／又は基質範囲にわたって洗浄の増強に貢献することができ、優れた光沢効果を提供することができる。
本発明の変異型プロテアーゼと組み合わせて使用するのに好適なプロテアーゼとしては、メタロプロテアーゼ、及び中性又はアルカリ性微生物セリンプロテアーゼを含むセリンプロテアーゼ、例えば、サブチリシン（ＥＣ３．４．２１．６２）が挙げられる。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物又は微生物起源のものが挙げられる。一態様では、このような好適なプロテアーゼは、微生物起源のものであってもよい。好適なプロテアーゼとしては、前述の好適なプロテアーゼの化学的又は遺伝的に修飾された変異体が挙げられる。一態様では、好適なプロテアーゼは、アルカリ性微生物プロテアーゼ又は／及びトリプシン型プロテアーゼなどのセリンプロテアーゼであってよい。好適な中性又はアルカリ性プロテアーゼの例としては、以下が挙げられる。
（ａ）サブチリシン（ＥＣ ３．４．２１．６２）、特に国際公開第２００４０６７７３７号、同第２０１５０９１９８９号、同第２０１５０９１９９０号、同第２０１５０２４７３９号、同第２０１５１４３３６０号、米国特許第６，３１２，９３６（Ｂ１）号、同第５，６７９，６３０号、同第４，７６０，０２５号、独国特許公開第１０２００６０２２２１６（Ａ１）号、同第１０２００６０２２２２４（Ａ１）号、国際公開第２０１５０８９４４７号、同第２０１５０８９４４１号、同第２０１６０６６７５６号、同第２０１６０６６７５７号、同第２０１６０６９５５７号、同第２０１６０６９５６３号、同第２０１６０６９５６９号に記載されている、バチルス種、Ｂ．レンタス、Ｂ．アルカロフィラス、Ｂ．ズブチリス、Ｂ．アミロリケファシエンス、Ｂ．プミルス、Ｂ．ギブソニイ及びＢ．アキバイなどのバチルス由来のもの。
（ｂ）国際公開第８９／０６２７０号に記載されているフサリウム属プロテアーゼ、並びに同第０５／０５２１６１号及び同第０５／０５２１４６号に記載されているセルロモナス属に由来するキモトリプシンプロテアーゼを含むトリプシン（例えば、ブタ又はウシ起源）などのトリプシン型又はキモトリプシン型プロテアーゼ。
（ｃ）メタロプロテアーゼ、特に国際公開第０７／０４４９９３（Ａ２）号に記載されているバチルス・アミロリケファシエンス由来のもの、国際公開第２０１４１９４０３２号、同第２０１４１９４０５４号及び同第２０１４１９４１１７号に記載されているバチルス、ブレビバチルス、サーモアクチノミセス、ゲオバチルス、パエニバチルス、リシニバチルス又はストレプトミセス種由来のもの、国際公開第２０１５１９３４８８号に記載されているクリベラ・アルミノサ由来のもの並びに国際公開第２０１６０７５０７８号に記載されているストレプトミセス及びリソバクター由来のもの。
（ｄ）国際公開第９２／１７５７７号（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）に記載されているバチルス種ＴＹ１４５、ＮＣＩＭＢ ４０３３９由来のサブチラーゼに対して少なくとも９０％の同一性を有するプロテアーゼ、国際公開第２０１５０２４７３９号及び同第２０１６０６６７５７号に記載されているこのバチルス種ＴＹ１４５サブチラーゼの変異体を含むプロテアーゼ。
本発明の組成物に特に好ましい追加のプロテアーゼは、親プロテアーゼの変異体であり、親プロテアーゼは、配列番号２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、更により好ましくは少なくとも９９％、特に１００％の同一性を示し、変異体は、配列番号２に対する以下の位置のうちの１つ以上、又は２つ以上又は３つ以上の置換を含む。
Ｓ３Ｖ、Ｓ９Ｒ、Ａ１３Ｖ、Ａ１５Ｔ、Ｇ２０＊、Ｌ２１Ｆ、Ｉ３５Ｖ、Ｎ６０Ｄ、Ｖ６６Ａ、Ｎ７４Ｄ、Ｓ８５Ｎ／Ｒ、Ｓ９７ＳＥ、Ｓ９７ＡＤ、Ｓ９７Ｄ／Ｇ、Ｓ９９Ｇ／Ｍ／Ｄ／Ｅ、Ｓ１０１Ａ、Ｖ１０２Ｅ／Ｉ、Ｇ１１６Ｖ／Ｒ、Ｓ１２６Ｆ／Ｌ、Ｐ１２７Ｑ、Ｓ１２８Ａ、Ｓ１５４Ｄ、Ｇ１５７Ｓ、Ｙ１６１Ａ、Ｒ１６４Ｓ、Ａ１８８Ｐ、Ｖ１９９Ｉ、Ｑ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｙ２０３Ｗ、Ｎ２１２Ｄ、Ｍ２１６Ｓ／Ｆ、Ａ２２２Ｖ、Ｑ２３９Ｒ／Ｆ、Ｔ２４９Ｒ、Ｎ２５５Ｄ及びＬ２５６Ｅ／Ｎ／Ｑ／Ｄ
好ましいプロテアーゼには、次の変異体：
Ｓ９Ｒ＋Ａ１３Ｖ＋Ａ１５Ｔ＋ｌ３５Ｖ＋Ｎ６０Ｄ＋Ｑ２３９Ｆ、又は
Ｓ９Ｒ＋Ａ１５Ｔ＋Ｇ２０＋Ｌ２１Ｆ＋Ｎ６０Ｄ＋Ｑ２３９Ｎ、又は
Ｓ９Ｒ＋Ａ１５Ｔ＋Ｖ６６Ａ＋Ｓ９７Ｇ＋Ａ２２２Ｖ＋Ｑ２３９Ｒ＋Ｎ２５５Ｄ、又は
Ｓ９Ｒ＋Ａ１５Ｔ＋Ｖ６６Ａ＋Ｎ７４Ｄ＋Ｑ２３９Ｒ、又は
Ｓ９Ｒ＋Ａ１５Ｔ＋Ｖ６６Ａ＋Ｎ２１２Ｄ＋Ｑ２３９Ｒ、又は
Ｓ９９ＳＥ、又は
Ｓ９９ＡＤ、又は
Ｎ７４Ｄ＋Ｓ８５Ｒ＋Ｇ１１６Ｒ＋Ｓ１２６Ｌ＋Ｐ１２７Ｑ＋Ｓ１２８Ａ、又は
Ｎ７４Ｄ＋Ｓ８５Ｒ＋Ｇ１１６Ｒ＋Ｓ１２６Ｌ＋Ｐ１２７Ｑ＋Ｓ１２８Ａ＋Ｓ１８２Ｄ＋Ｖ２３８Ｒ又は
Ｇ１１６Ｖ＋Ｓ１２６Ｌ＋Ｐ１２７Ｑ＋Ｓ１２８Ａ又は
Ｓ９９Ｍ＋Ｇ１１６Ｖ＋Ｓ１２６Ｌ＋Ｐ１２７Ｑ＋Ｓ１２８Ａ、を含む、配列番号２に対して少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するものが含まれる。
好適な市販入手可能な追加のプロテアーゼ酵素としては、商品名Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ Ｅｖｉｔｙ、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｕｎｏ（登録商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ（登録商標）シリーズ（Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ Ｐｒｏを含む）及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ（デンマーク）のＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）によって販売されているもの；商品名Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｐｒｉｍｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｏｘ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｅｘｔｒｅｍａｓｅ（登録商標）及びＰｕｒａｆｅｃｔ ＯＸＰ（登録商標）としてＤｕｐｏｎｔによって販売されているもの；商品名Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）及びＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）としてＳｏｌｖａｙ Ｅｎｚｙｍｅｓによって販売されているもの；並びにＨｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから入手可能なもの、すなわち、ＢＬＡＰ（配列は米国特許第５，３５２，６０４号の図２９に示され、Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓの突然変異を有する、本明細書において以降ＢＬＡＰと称する）、ＢＬＡＰ Ｒ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄを有するＢＬＡＰ）、ＢＬＡＰ Ｘ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉを有するＢＬＡＰ）及びＢＬＡＰ Ｆ４９（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ａ１９４Ｐ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄを有するＢＬＡＰ）；並びに花王製のＫＡＰ（変異Ａ２３０Ｖ＋Ｓ２５６Ｇ＋Ｓ２５９Ｎを有するバチルス・アルカロフィラスのサブチリシン）が挙げられる。
本発明の変異型プロテアーゼと組み合わせて本明細書での使用に特に好ましいのは、Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）及びＢｌａｚｅ Ｐｒｏ（登録商標）からなる群から選択される市販のプロテアーゼである。
本発明の製品中のプロテアーゼの好ましい濃度としては、組成物１ｇ当たり約０．０５～約１０ｍｇ、より好ましくは約０．５～約７ｍｇ、特に約１～約６ｍｇの活性プロテアーゼが挙げられる。
アミラーゼ
好ましくは、本発明の組成物は、アミラーゼを含み得る。好適なα－アミラーゼとしては、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。化学的又は遺伝的に修飾された変異体（バリアント）が含まれる。好ましいアルカリ性α－アミラーゼは、バチルスの菌種、例えば、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・ステロサーモフィラス、バチルス・ズブチリス又は他のバチルス種、例えば、バチルス種ＮＣＢＩ１２２８９、ＮＣＢＩ１２５１２、ＮＣＢＩ１２５１３、ＤＳＭ９３７５（米国特許第７，１５３，８１８号）、ＤＳＭ１２３６８、ＤＳＭＺ番号１２６４９、ＫＳＭ ＡＰ１３７８（国際公開第９７／００３２４号）、ＫＳＭ Ｋ３６又はＫＳＭ Ｋ３８（欧州特許第１，０２２，３３４号）に由来する。好ましいアミラーゼとしては、以下が挙げられる。
変異体α－アミラーゼが、配列番号３の番号を参照して、
ｉ）９１位での変異及び／又は残基６、７、４０、９６、９８、１００、２２９、２３０、２３１、２６２、２６３、２８５、２８６、２８７、２８８、３２２、３２３、３２４、３２５、３６２、３６３、３６４として定義されるα－アミラーゼＴＩＭバレル構造の基部でのアミノ酸残基での変異、
ｉｉ）１７２位での変異及び２８８位又は３２４位の変異、及び
ｉｉｉ）Ｙ３６４Ｌ、からなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
他の好ましいアミラーゼは、以下が挙げられる。
（ａ）国際公開第９６／２３８７３号、同第００／６００６０号、同第０６／００２６４３号、及び同第２０１７／１９２６５７号に記載の変異体、とりわけ国際公開第０６／００２６４３号において配列番号１２に列挙されているＡＡ５６０酵素に対して以下の位置に１つ以上の置換を有する変異体：
２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、２０２、２１４、２３１、２４６、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４６１、４７１、４８２、４８４、好ましくは、Ｄ１８３＊及びＧ１８４＊の欠失も含む変異体。
（ｂ）国際公開第０６／００２６４３号の配列番号４、バチルス属ＳＰ７２２由来の野生型酵素と少なくとも９０％の同一性を示す変異体、特に１８３及び１８４位に欠失を有する変異体並びに参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０００／６００６０号、同第２０１１／１００４１０号及び同第２０１３／００３６５９号に記載されている変異体。
（ｃ）バチルス種７０７（米国特許第６，０９３，５６２号の配列番号７）由来の野生型酵素と少なくとも９５％の同一性を示す変異体、特に以下の突然変異：Ｍ２０２、Ｍ２０８、Ｓ２５５、Ｒ１７２及び／又はＭ２６１のうちの１つ以上を含むもの。好ましくは、当該アミラーゼは、Ｍ２０２Ｌ、Ｍ２０２Ｖ、Ｍ２０２Ｓ、Ｍ２０２Ｔ、Ｍ２０２Ｉ、Ｍ２０２Ｑ、Ｍ２０２Ｗ、Ｓ２５５Ｎ及び／又はＲ１７２Ｑのうちの１つ以上を含む。Ｍ２０２Ｌ又はＭ２０２Ｔ変異を含むものが、特に好ましい。
（ｄ）国際公開第０９／１４９１３０号に記載されている変異体、好ましくは同第０９／１４９１３０号の配列番号１又は配列番号２、ゲオバチルス・ステロファーモフィラス（Geobacillus Stearophermophilus）由来の野生型酵素又はその切断版と少なくとも９０％の同一性を示すもの。
（ｅ）国際公開第２０１６０９１６８８号の配列番号１と少なくとも８９％の同一性を示す変異体、特にＨ１８３＋Ｇ１８４位での欠失並びに４０５、４２１、４２２及び／又は４２８位に１つ以上の突然変異を含むもの。
（ｆ）パエニバチルス・カードラノリティカスＹＫ９由来の「ＰｃｕＡｍｙｌ α－アミラーゼ」（国際公開第２０１４０９９５２３号の配列番号３）と少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
（ｇ）サイトファーガ種由来の「ＣｓｐＡｍｙ２アミラーゼ」（国際公開第２０１４１６４７７７号の配列番号１）と少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
（ｈ）バチルス・ズブチリス由来のＡｍｙＥ（国際公開第２００９１４９２７１号の配列番号１）と少なくとも８５％の同一性を示す変異体。
（ｉ）受託番号ＡＢ０５１１０２を有するバチルス種ＫＳＭ－Ｋ３８由来の野生型アミラーゼと少なくとも９０％の同一性を示す変異体。
（ｊ）バチルス種由来のＡＡＩ１０の成熟アミノ酸配列（国際公開第２０１６１８０７４８号の配列番号７）と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％の同一性を示す変異体
（ｋ）アリシクロバチルス種アミラーゼの成熟アミノ酸配列（国際公開第２０１６１８０７４８号の配列番号８）と少なくとも８０％の同一性を示す変異体
好ましくは、アミラーゼは、遺伝子操作を受けた酵素であり、漂白酸化を起こしやすいアミノ酸のうちの１つ以上が、より酸化しにくいアミノ酸で置換されている。特に、メチオニン残基は、任意の他のアミノ酸で置換されることが好ましい。特に、最も酸化しやすいメチオニンが置換されることが好ましい。好ましくは、国際公開第０６／００２６４３号の配列番号１２として列挙されているＡＡ５６０酵素において２０２に相当する位置のメチオニンが置換される。好ましくは、この位置のメチオニンは、スレオニン又はロイシン、好ましくはロイシンで置換される。
好適な市販のα－アミラーゼとしては、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＬＩＱＵＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＵＰＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＡＴＬＡＮＴＩＣ（登録商標）、ＩＮＴＥＮＳＡ（登録商標）及びＢＡＮ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ（Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ））、ＫＥＭＺＹＭ（登録商標）ＡＴ ９０００（Ｂｉｏｚｙｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｔｒａｄｉｎｇ ＧｍｂＨ Ｗｅｈｌｉｓｔｒａｓｓｅ ２７ｂ Ａ－１２００ Ｗｉｅｎ Ａｕｓｔｒｉａ）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、ＥＮＺＹＳＩＺＥ（登録商標）、ＯＰＴＩＳＩＺＥ ＨＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ Ｓ（登録商標）シリーズ（ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ Ｓ１０００（登録商標）及びＰＲＥＦＥＲＥＮＺ Ｓ２０００（登録商標）を含む）並びにＰＵＲＡＳＴＡＲ ＯＸＡＭ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ．，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）並びにＫＡＭ（登録商標）（Ｋａｏ，１４－１０ Ｎｉｈｏｎｂａｓｈｉ Ｋａｙａｂａｃｈｏ，１－ｃｈｏｍｅ，Ｃｈｕｏ－ｋｕ Ｔｏｋｙｏ １０３－８２１０，Ｊａｐａｎ）が挙げられる。一態様では、好適なアミラーゼとしては、ＡＴＬＡＮＴＩＣ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＩＮＴＥＮＳＡ（登録商標）及びＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）並びにこれらの混合物が挙げられる。
好ましくは、本発明の組成物は、組成物１ｇ当たり少なくとも０．０１ｍｇ、好ましくは約０．０５～約１０、より好ましくは約０．１～約６、特に約０．２～約５ｍｇの活性アミラーゼを含む。
好ましくは、本発明の組成物のプロテアーゼ及び／又はアミラーゼは、粒状体の形態であり、この粒状体は、粒状体の２９重量％超の硫酸ナトリウムを含み、並びに／又は硫酸ナトリウム及び活性酵素（プロテアーゼ及び／若しくはアミラーゼ）は、３：１～１００：１、又は好ましくは４：１～３０：１、又はより好ましくは５：１～２０：１の重量比である。
結晶成長抑制剤
結晶成長抑制剤は、炭酸カルシウム結晶に結合して、アラゴナイト及び方解石などの種の更なる成長を防止することができる材料である。
効果的な結晶成長抑制剤の例には、ホスホン酸塩、ポリホスホン酸塩、イヌリン誘導体、ポリイタコン酸ホモポリマー及び環状ポリカルボキシレートが挙げられる。
好適な結晶成長抑制剤は、ＨＥＤＰ（１－ヒドロキシエチリデン１，１－ジホスホン酸）、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、トリカルバリル酸及び環状カルボキシレートを含む群から選択されてもよい。本発明の目的のため、用語カルボキシレートは、アニオン形態及びプロトン化したカルボン酸形態の両方を包含する。
環状カルボキシレートは、少なくとも２つ、好ましくは３つ又は好ましくは少なくとも４つのカルボキシレート基を含み、環状構造は、単環若しくは二環アルカン又は複素環のいずれかに基づく。好適な環状構造には、シクロプロパン、シクロブタン、シクロヘキサン若しくはシクロペンタン若しくはシクロヘプタン、ビシクロ－ヘプタン若しくはビシクロ－オクタン、及び／又はテトラヒドロフランが挙げられる。好ましい結晶成長抑制剤の１つは、シクロペンタンテトラカルボキシレートである。
少なくとも７５％、好ましくは１００％のカルボキシレート基を素環の三次元構造の同じ側か又は「シス」位に有する環状カルボキシレートは、本明細書での使用に好ましい。
素環の同じ側にある２つのカルボキシレート基は、直接隣接しているか、又は「オルト」位にあることが好ましい。
好ましい結晶成長抑制剤には、ＨＥＤＰ、トリカルバリル酸、テトラヒドロフランテトラカルボン酸（ＴＨＦＴＣＡ）及びシクロペンタンテトラカルボン酸（ＣＰＴＣＡ）が挙げられる。ＴＨＦＴＣＡは、好ましくは２ｃ，３ｔ，４ｔ，５ｃ配置であり、ＣＰＴＣＡは、シス，シス，シス，シス配置である。本明細書での使用に特に好ましい結晶成長抑制剤は、ＨＥＤＰである。
部分的に脱炭酸したポリイタコン酸ホモポリマーもまた、本明細書での使用に好ましく、好ましくは脱炭酸のレベルは５０モル％～９０モル％の範囲である。本明細書での使用に特に好ましいポリマーは、Ｉｔａｃｏｎｉｘにより供給されるＩｔａｃｏｎｉｘ ＴＳＩ（登録商標）である。
結晶成長抑制剤は、好ましくは、組成物の約０．０１～約１０重量％、特に約０．０２～約５重量％、特に０．０５～３重量％の量で存在する。
金属ケア剤
金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼並びに銀及び銅などの非鉄金属を含む金属の曇り、腐食又は酸化を、防止又は低減することができる。好ましくは、本発明の組成物は、製品の０．１～５重量％、より好ましくは０．２～４重量％、特に０．３～３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは、金属ケア剤はベンゾトリアゾール（ＢＴＡ）である。
ガラスケア剤
ガラスケア剤は、食器洗浄プロセス中にガラス製品の外観を保護する。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の０．１～５重量％、より好ましくは０．２～４重量％、特に０．３～３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは、ガラスケア剤は亜鉛含有材料、特に水亜鉛土である。他の好適なガラスケア剤は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。特に好ましいＰＥＩは、ＢＡＳＦにより供給されるＬｕｐａｓｏｌ（登録商標）ＦＧである。
本発明の自動食器洗浄組成物は、好ましくは、２０℃の蒸留水中１重量／体積％の水溶液中で測定した場合に、約９～約１２、より好ましくは約１０～約１１．５未満、特に約１０．５～約１１．５のｐＨを有する。
本発明の自動食器洗浄組成物は、好ましくは、２０℃において１００グラムの製品を含むＮａＯＨ中で測定した場合に、ｐＨ９．５で、約１０～約２０、より好ましくは約１２～約１８の予備アルカリ度を有する。
本発明の好ましい自動食器洗浄組成物は、以下のものを含む：
ｉ）組成物の１０～２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム、
ｉｉ）ＴＡＥＤ、
ｉｉｉ）任意であるが好ましくは組成物の５～５０重量％の無機ビルダー、好ましくは炭酸ナトリウム、
ｉｖ）任意であるが好ましくは組成物の２～１０重量％の非イオン性界面活性剤、
ｖ）他の任意の成分としては、結晶成長抑制剤、好ましくはＨＥＤＰ、及びガラスケア剤。
本発明の好ましい自動食器洗浄組成物は、以下のものを含む：
ｉ）組成物の１０～２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム、
ｉｉ）マンガン漂白触媒、好ましくは、１，４，７－トリメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ－ＴＡＣＮ）及び１，２，４，７－テトラメチル－１，４，７－トリアザサイクリノナン（Ｍｅ／Ｍｅ－ＴＡＣＮ）、及び任意選択でＴＡＥＤからなる群から選択される漂白触媒、
ｉｉｉ）任意であるが好ましくは組成物の５～５０重量％の炭酸ナトリウム、
ｉｖ）任意であるが好ましくは１～１０重量％のケイ酸ナトリウム、
ｖ）任意であるが好ましくは組成物の２～１０重量％の非イオン性界面活性剤、
ｖｉ）任意であるが好ましくはガラスケア剤。
本発明の組成物のプロテアーゼは、洗濯洗剤にも使用することができる。
（実施例１）
本発明のプロテアーゼ変異体の活性、卵黄除去及びクリーム・ブリュレ除去を、親プロテアーゼＢＧ４６＋Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇに対して評価した（欧州特許第３５０２２４４（Ａ１）号、２２ページ表２、４０行に記載）。
プロテアーゼ活性
ＢＧ４６サブチリシン変異体のプロテアーゼ活性を、ＡＡＰＦ－ｐＮＡ合成ペプチド基質の加水分解を測定することによって試験した。
ＡＡＰＦアッセイについて、使用した試薬溶液は次のとおりであった：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．６、１０ｍＭ ＣａｌＣｌ２、ＤＭＳＯ中の０．００５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－８０（Ｔｒｉｓ／Ｃａ緩衝液）及び１６０ｍＭ ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡ（ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡストック溶液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ－７３８８）。作業溶液を調製するために、１ｍＬのｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡストック溶液を１００ｍＬのＴｒｉｓ／Ｃａ緩衝液に添加し、混合した。酵素サンプルを１ｍｇ／ｍＬのｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡ作用液を含むマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）に添加し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダーを室温（ＲＴ）で動的モードで使用して、４０５ｎｍで３～５分間の活性をアッセイした。プロテアーゼ活性をｍＯＤ／分として表した。
Ｔｒｉｓ－ＥＤＴＡ中の安定性アッセイ
本明細書に記載のＢＧ４６サブチリシン変異体をストレス緩衝液で希釈し、上記のＡＡＰＦアッセイを使用して、加熱インキュベーション工程の前後に変異体のタンパク質分解活性を測定することによって、当該変異体の安定性を測定した。基準プロテアーゼが約１５～３０％の残留活性を示すように、加熱インキュベーション工程の温度及び持続時間を選択した。サンプルを、３８４ウェルの熱サイクラーにおいて、５７℃で５分間インキュベートした。Ｔｒｉｓ－ＥＤＴＡ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ９；５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ８０）の緩衝条件で安定性を測定した。安定性ＰＩは、サブチリシン変異体の残留活性を親プロテアーゼＢＧ４６＋Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇの残留活性で除算することによって得られた。
自動食器洗浄アッセイ
クリーム・ブリュレの汚れ：クリーム・ブリュレの汚れに対するＢＧ４６サブチリシン変異体の洗浄性能は、Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ（ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）でＣＦＴが調製し、ＤＭ１０ｃとラベル付けしたカスタムオーダーのメラミン食器洗浄機モニター（タイル）を使用して試験した。この試験において使用したＤＭ１０ｃタイルは、市販のＤＭ１０モニター（クリーム・ブリュレはＤｅｂｉｃ．ｃｏｍの製品）を調製するために使用される同じ汚れを使用して調製されるが、１５０℃ではなく１４０℃で２時間焼成した。
ＤＭ１０ｃメラミンタイルを蓋として使用し、マイクロタイタープレート（ＭＴＰ）上にしっかりと押し付けた。メラミンタイルの蓋をＭＴＰに取り付ける前に、水の硬度を３７４ｐｐｍに調整した３ｇ／ＬのＡＤＷ洗剤溶液と各酵素サンプルを、ＭＴＰに添加した。ＭＴＰの体積容量、それ故に、それに追加される溶液の量は変化する可能性があり、溶液と染色面との接触を可能にする最小量の溶液をＭＴＰに添加する必要がある。この例では、酵素を含有する３００μＬの体積の洗剤を、アルミニウム９６ウェルＭＴＰの各ウェルに添加した。特に指定がない限り、ＭＴＰを２５０ｒｐｍで、４０℃で４５分間Ｉｎｆｏｒｓ熱シェーカー中でインキュベートした。インキュベーション後、タイルをＭＴＰから取り出し、水道水で簡単にすすぎ、風乾した。
プレートを撮影し、カスタムソフトウェアを使用して各汚れの範囲からＲＧＢ値を測定することによって、汚れ除去を定量化した。洗浄したタイルの汚れ除去率（ＳＲＩ％）値を、以下の式においてＲＧＢ値を使用して計算した。
ＳＲＩ％＝（ΔＥ／ΔＥ初期）×１００
式中、ΔＥ＝ＳＱＲ（（Ｒ洗浄後－Ｒ洗浄前）２＋（Ｇ洗浄後－Ｇ洗浄前）２＋（Ｂ洗浄後－Ｂ洗浄前）２）
式中、ΔＥ初期＝ＳＱＲ（（Ｒ白－Ｒ洗浄前）２＋（Ｇ白－Ｇ洗浄前）２＋（Ｂ白－Ｂ洗浄前）２）
各サンプル値からブランク対照（酵素なし）の値を差し引くことにより、洗浄性能を得た（以下「ブランク減算洗浄」）。各条件及びＢＧ４６サブチリシン変異体について、ブランク減算洗浄を同濃度の親プロテアーゼのブランク減算洗浄で除算することによって性能指数（ＰＩ）を計算した。親プロテアーゼのＰＩの値は、試験に含まれた、かつラングミュア適合又はヒルシグモイド適合に適合した親プロテアーゼの標準曲線から決定した。
卵黄汚れ：卵黄マイクロスワッチ（ＰＡＳ－３８、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ ＢＶ、Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）におけるＢＧ４６サブチリシン変異体の洗浄性能を、予備すすぎ又は未すすぎのスワッチで測定した。すすぎＰＡＳ３８のスワッチを調製するために、ｐＨ１１の１８０μｌの１０ｍＭのＣＡＰＳ緩衝液を、ＰＡＳ３８マイクロスワッチを含有するＭＴＰに添加した。プレートを密閉し、６０℃及び１１００ｒｐｍの振盪で、ｉＥＭＳインキュベーター内で３０分間インキュベートした。このインキュベーション後、緩衝液を除去し、スワッチを脱イオン水ですすいで残留緩衝液を除去した。次いで、プレートを、性能アッセイで使用する前に風乾した。マイクロスワッチプレートは、酵素を添加する前に、水硬度３７４ｐｐｍの３ｇ／ｌ ＡＤＷ界面活性剤溶液で満たされ、最終酵素濃度は０．０５～１０ｐｐｍであった。
ＰＡＳ－３８スワッチを洗剤及び酵素で４０℃で３０分間インキュベートした後、アリコートを空のＭＴＰに移し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダーを使用して吸光度を４０５ｎｍで読み取った。各サンプル値からブランク対照（酵素なし）の値を差し引くことにより、吸光度の結果を得た（以下「ブランク減算吸光度」）。各条件及びＢＧ４６サブチリシン変異体について、ブランク減算吸光度を同濃度のＢＧ４６＋Ｓ０３９Ｅ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ親プロテアーゼのブランク減算吸光度で除算することによって性能指数（ＰＩ）を計算した。
自動食器洗浄組成物
以下に列挙するように、様々な洗浄組成物を使用した。自動食器洗浄（ＡＤＷ）洗浄アッセイは、括弧内に示される最終濃度で以下の組成物を使用して実施した。ＧＳＭ－Ｂ洗剤（３ｇ／Ｌ）（ＷＦＫ Ｔｅｓｔｇｅｗｅｂｅ ＧｍｂＨ、Ｂｒｕｇｇｅｎ，Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ（ｗｗｗ．ｔｅｓｔｇｅｗｅｂｅ．ｄｅ））から酵素なしで購入したＧＳＭ－Ｂ無リン酸塩ＡＤＷ洗剤、表１に示される組成）及びＭＧＤＡ洗剤（３ｇ／Ｌ）（表２に示される組成）。
（実施例２）
自動食器洗浄におけるプロテアーゼ洗浄性能
基準プロテアーゼは、本発明の範囲外のものである。それは、野生型Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ Ｂｇ４６プロテアーゼ配列番号１の変異体であり、欧州特許第３５０２２４４（Ｂ１）号、表２、２１ページ、４４～４４行に記載されているように、以下の変異Ａ３７Ｔ－Ｓ３９Ｅ－Ｉ４３Ｖ－Ａ４７Ｖ－Ｐ５４Ｔ－Ｔ５６Ｙ－Ｉ８０Ｖ－Ｎ８５Ｓ－Ｅ８７Ｄ－Ｓ９９Ｒ－Ｔ１１４Ｑ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ２４２Ｄがある。
プロテアーゼＡは、本発明の変異体である。それは、野生型Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ Ｂｇ４６プロテアーゼ配列番号１の変異体であり、以下の変異Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑがある。
プロテアーゼＢは、本発明の変異体である。それは、野生型Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ Ｂｇ４６プロテアーゼ配列番号１の変異体であり、以下の変異Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑがある。
洗浄性能方法：Ｍｉｅｌｅ Ｍｏｄｅｌ ＧＳＬ２を使用した混合プロテアーゼ洗浄
表１に記載のＡＤＷ洗浄組成物の自動食器洗浄（ＡＤＷ）性能を、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ（ＣＦＴ）ＢＶ、Ｓｔｏｏｍｌｏｇｇｅｒｗｅｇ１１、３１３３ＫＴ Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ、ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓによって供給される混合プロテアーゼタイル（ＤＭ２２、ＤＭ２３）で評価した。表２に記載の洗剤組成物１６．２１ｇ（固体及び液体成分を合わせた）及び酵素添加の１回用量を、各サイクルのディスペンサー引き出しの開口部で各自動食器洗浄機に添加した。
混合プロテアーゼＣＦＴタイルを、Ｍｉｅｌｅ自動食器洗浄機で４５℃（８分保持時間、５５℃すすぎ）、２１ｇｐｇの水硬度で洗浄した。モデルＧＳＬ２バラスト汚れを、表３に記載されるように、混合汚れ組成物として各処理に添加した。
機械ドアを閉じる前に、ＣＦＴタイルを機械（各タイルの２つの複製、すなわち処理ごとに２つの内部複製）に添加した。次いで、ディスペンサー引き出しが開かれると、機械を開始し、酵素添加を含む洗剤組成物を、５０ｇの混合汚れポットとともに各機械に投入した。これを更に３回繰り返して、処理当たり４つの外部複製及び２つの内部複製をもたらした。
本明細書で提供される混合プロテアーゼタイル上の各例示的なＡＤＷ組成物の洗浄性能データは、各処理について４つの外部複製物及び２つの内部複製物を含めることから生成された８つの複製の平均である。組成物Ａの洗浄性能（基準プロテアーゼを含む）を基準とし、組成物Ｂ（本発明のプロテアーゼＡ）及び組成物Ｃ（本発明のプロテアーゼＢ）と比較した。イメージ分析を使用して汚れを分析し、汚れ除去の割合として計算された結果を以下に示した。０＝除去なし、１００＝完全な除去。すなわち、汚れ除去指数（ＳＲＩ）。
以下の表４に示される結果は、汚れ除去指数として表される。
＊データの統計的評価は、組成物Ａと組成物Ｂ及びＣとの間の９５％信頼度で有意差を示す。
プロテアーゼ洗浄は、洗浄後のＡＤＷ洗浄の測定である。上記の表４の結果から分かるように、タンパク質洗浄は、基準プロテアーゼを含む組成物Ａと比較して、本発明のプロテアーゼＡを含む組成物Ｂと、本発明のプロテアーゼＢを含む組成物Ｃとの両方について著しく改善された。
（実施例３）
自動食器洗浄におけるプロテアーゼ洗浄性能
Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）はＤｕＰｏｎｔによって供給された
Ｂｌａｚｅ（登録商標）はＮｏｖｏｚｙｍｅｓによって供給された
Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）ＰｌｕｓはＮｏｖｏｚｙｍｅｓ社によって供給された
プロテアーゼＡは、本発明の変異体である。それは、野生型Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ Ｂｇ４６プロテアーゼ配列番号１の変異体であり、以下の変異Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑがある。
プロテアーゼＢは、本発明の変異体である。それは、野生型Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ Ｂｇ４６プロテアーゼ配列番号１の変異体であり、以下の変異Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑがある。
洗浄性能方法：Ｍｉｅｌｅ Ｍｏｄｅｌ ＧＳＬ２を使用した混合プロテアーゼ洗浄
表１に記載のＡＤＷ洗剤組成物の自動食器洗浄（ＡＤＷ）性能を、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ（ＣＦＴ）ＢＶ、Ｓｔｏｏｍｌｏｇｇｅｒｗｅｇ１１、３１３３ＫＴ Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ、ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓによって供給される混合プロテアーゼタイル（ＤＭ２２、ＤＭ３２、ＤＭ３３、ＤＭ９３）で評価した。表２に記載の洗剤組成物１７．３２ｇ（固体及び液体成分を合わせた）及び酵素添加の１回用量を、各サイクルのディスペンサー引き出しの開口部で各自動食器洗浄機に添加した。
混合プロテアーゼＣＦＴタイルを、Ｍｉｅｌｅ自動食器洗浄機で４５℃（８分保持時間、５５℃すすぎ）、２１ｇｐｇの水硬度で洗浄した。モデルＧＳＬ２バラスト汚れを、表３に記載されるように、混合汚れ組成物として各処理に添加した。
機械ドアを閉じる前に、ＣＦＴタイルを機械（各タイルの２つの複製、すなわち処理ごとに２つの内部複製）に添加した。次いで、ディスペンサー引き出しが開かれると、機械を開始し、酵素添加を含む洗剤組成物を、５０ｇの混合汚れポットとともに各機械に投入した。これを更に３回繰り返して、処理当たり４つの外部複製及び２つの内部複製をもたらした。
本明細書で提供される混合プロテアーゼタイル上の各例示的なＡＤＷ組成物の洗浄性能データは、各処理について４つの外部複製物及び２つの内部複製物を含めることから生成された８つの複製の平均である。組成物Ａ（Ｂｌａｚｅ（商標）及びＳｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）Ｐｌｕｓを含有する）の洗浄性能を基準１とし、組成物Ｂ（Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）及びＳｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）Ｐｌｕｓを含有する）を基準２とし、組成物Ｃ（この発明のプロテアーゼＡ＋Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ）及び組成物Ｄ（この発明のプロテアーゼＢ＋Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ）と比較した。イメージ分析を使用して汚れを分析し、汚れ除去の割合として計算された結果を以下に示した。０＝除去なし、１００＝完全な除去。すなわち、汚れ除去指数（ＳＲＩ）。
以下の表４に示される結果は、汚れ除去指数として表される。
＊データの統計的評価は、組成物Ａと組成物Ｃ及びＤとの間の９５％信頼度で有意差を示す。
＊データの統計的評価は、組成物Ｂと組成物Ｃ及びＤとの間の９５％信頼度で有意差を示す。
プロテアーゼ洗浄は、洗浄後のＡＤＷ洗浄の測定である。上記の表４及び５の結果から分かるように、タンパク質洗浄は、本発明のプロテアーゼＡを含む組成物Ｃ及び本発明のプロテアーゼＢを含む組成物Ｄの両方について、Ｂｌａｚｅ（登録商標）プロテアーゼを含む組成物Ａ及びＥｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）プロテアーゼ組成物Ｂと比較して、著しく改善された。Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）及びＢｌａｚｅ（登録商標）を含む両方の組成物は、本発明ではない。
本明細書に開示される寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。その代わりに、特に指示がない限り、そのような寸法は各々、列挙された値とその値を囲む機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図される。例えば、「４０ｍｍ」と開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。

Claims (12)

  1. プロテアーゼを含む、無リン酸塩自動食器洗浄組成物であって、前記プロテアーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、前記プロテアーゼが、配列番号１の番号を使用して、
    （ｉ）Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑのアミノ酸置換を含むか、又は、
    （ｉｉ）Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎのアミノ酸置換と、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ、Ｒ２０７Ｑ、Ｎ２１２Ｑ、Ｎ２４２Ｄ及びＱ２５６Ｅからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換とを含む、自動食器洗浄組成物。
  2. 前記プロテアーゼが、
    Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑのアミノ酸置換と、Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ、Ｒ２０７Ｑ、Ｎ２１２Ｑ、Ｎ２４２Ｄ及びＱ２５６Ｅからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換とを含む、請求項１に記載の自動食器洗浄組成物。
  3. 前記プロテアーゼが、
    Ｎ１９８Ｇ／Ａ／Ｋ／Ｌ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｓ／Ｌ－Ｎ２１２Ｑから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１又は２に記載の自動食器洗浄組成物。
  4. 前記プロテアーゼが、
    Ｒ２０７Ｑのアミノ酸置換を含む、請求項１又は２に記載の自動食器洗浄組成物。
  5. 前記プロテアーゼが、
    Ｒ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑのアミノ酸置換を含む、請求項１又は２に記載の自動食器洗浄組成物。
  6. 前記プロテアーゼが、
    ａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ
    ｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ
    ｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｅ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｆ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｈ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
    ｉ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｊ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ
    ｌ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｍ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｎ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｏ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｐ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｋ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｑ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｓ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｔ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｒ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｕ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｔ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｖ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｖ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｚ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ
    ａａ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ
    ｂｂ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｃｃ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ
    ｄｄ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ
    ｅｅ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ
    ｆｆ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ
    ｊｊ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｓ－Ｍ２１１Ｑ
    ｋｋ．Ｓ０３９Ｅ－Ｎ０７４Ｄ－Ｓ０９９Ｒ－Ｓ１２６Ａ－Ｄ１２７Ｅ－Ｆ１２８Ｇ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
  7. 前記プロテアーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、特に少なくとも９６％の同一性を有し、３９、７４、９９、１１６、１２６、１２７、１２８、１９８、２０７、２１１、２１２、２４２、及び２５６位の出発アミノ酸Ｘが、それぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｓ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ｆ、Ｎ、Ｒ、Ｍ、Ｎ、Ｎ及びＱである、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 変異体α－アミラーゼを含み、前記変異体α－アミラーゼが、配列番号３の番号を参照して、
    ｉ）９１位での変異並びに／又は残基６、７、４０、９６、９８、１００、２２９、２３０、２３１、２６２、２６３、２８５、２８６、２８７、２８８、３２２、３２３、３２４、３２５、３６２、３６３、及び３６４として定義されるα－アミラーゼＴＩＭバレル構造の基部でのアミノ酸残基の変異、
    ｉｉ）１７２位での変異及び２８８位又は３２４位での変異、並びに
    ｉｉｉ）Ｙ３６４Ｌからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. １０重量％～５０重量％の有機錯化剤系の組成物を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 漂白系を含み、前記漂白系が、１０重量％超の漂白剤の組成物並びに漂白活性化剤及び／又は漂白触媒を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 前記漂白触媒が、１，４，７－トリメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ－ＴＡＣＮ）、１，２，４，７－テトラメチル－１，４，７－トリアザシクロノナン（Ｍｅ／Ｍｅ－ＴＡＣＮ）及びこれらの混合物からなる群から選択されるマンガン漂白触媒である、請求項１０に記載の組成物。
  12. 汚れた食器を食器洗浄機において洗浄する方法であって、
    ｉ）前記汚れた食器を提供する工程と、
    ｉｉ）長時間の高温プログラムを使用して、少なくとも４０℃の温度で１５分超持続する主洗浄サイクルを有する工程と、
    ｉｉｉ）請求項１～１１のいずれか一項に記載の洗浄組成物で前記食器を処理する工程と、
    ｉｖ）任意に、前記食器をすすぐ工程と、を含む、方法。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12410385B2 (en) * 2019-10-24 2025-09-09 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition comprising an amylase
WO2023114932A2 (en) * 2021-12-16 2023-06-22 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods of use
EP4448712A1 (en) * 2021-12-16 2024-10-23 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing composition comprising a protease
WO2023114794A1 (en) * 2021-12-16 2023-06-22 The Procter & Gamble Company Fabric and home care composition comprising a protease
EP4525615A2 (en) 2022-05-14 2025-03-26 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
WO2024102698A1 (en) * 2022-11-09 2024-05-16 Danisco Us Inc. Subtilisin variants and methods of use

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100003366A1 (en) 2008-06-06 2010-01-07 Danisco Us Inc., Genencor Division Variant Alpha-Amylases from Bacillus Subtilis and Methods of Use, Thereof
WO2017219011A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Danisco Us Inc Protease variants and uses thereof
US20190144792A1 (en) 2016-06-15 2019-05-16 Henkel Ag & Co. Kgaa Bacillus gibsonii protease and variants thereof

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4760025A (en) 1984-05-29 1988-07-26 Genencor, Inc. Modified enzymes and methods for making same
DE68924654T2 (de) 1988-01-07 1996-04-04 Novonordisk As Spezifische Protease.
US6287841B1 (en) 1988-02-11 2001-09-11 Genencor International, Inc. High alkaline serine protease
DK0493398T3 (da) 1989-08-25 2000-05-22 Henkel Research Corp Alkalisk, proteolytisk enzym og fremgangsmåde til fremstilling deraf
DK58491D0 (da) 1991-04-03 1991-04-03 Novo Nordisk As Hidtil ukendte proteaser
AU682314B2 (en) * 1992-07-17 1997-10-02 Genencor International, Inc. High alkaline serine proteases
US5576281A (en) 1993-04-05 1996-11-19 Olin Corporation Biogradable low foaming surfactants as a rinse aid for autodish applications
MA23346A1 (fr) * 1993-10-14 1995-04-01 Genencor Int Variantes de la subtilisine
CZ105296A3 (en) * 1993-10-14 1996-09-11 Procter & Gamble Bleaching agent containing protease enzymes, cleansing agents, agent for cleaning fabrics and fabric cleaning method
ES2287931T3 (es) * 1993-10-14 2007-12-16 THE PROCTER & GAMBLE COMPANY Composiciones limpiadoras que contienen proteasa.
US6599730B1 (en) * 1994-05-02 2003-07-29 Procter & Gamble Company Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
AR000862A1 (es) 1995-02-03 1997-08-06 Novozymes As Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del
US6093562A (en) 1996-02-05 2000-07-25 Novo Nordisk A/S Amylase variants
JP3025627B2 (ja) 1995-06-14 2000-03-27 花王株式会社 液化型アルカリα−アミラーゼ遺伝子
AR015977A1 (es) 1997-10-23 2001-05-30 Genencor Int Variantes de proteasa multiplemente substituida con carga neta alterada para su empleo en detergentes
US6403355B1 (en) 1998-12-21 2002-06-11 Kao Corporation Amylases
AU781258B2 (en) 1999-03-31 2005-05-12 Novozymes A/S Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same
RU2003105683A (ru) 2000-07-28 2004-08-20 Хенкель Кгаа (De) Новый амилолитический фермент из bacillus sp.а7-7(dsm12368), а также моющее и чистящее средство с этим новым амилолитическим ферментом
WO2004067737A2 (en) 2003-01-30 2004-08-12 Novozymes A/S Subtilases
WO2005052161A2 (en) 2003-11-19 2005-06-09 Genencor International, Inc. Serine proteases, nucleic acids encoding serine enzymes and vectors and host cells incorporating same
EP3000887B1 (en) 2004-07-05 2019-10-02 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with altered properties
DK1934340T3 (da) 2005-10-12 2014-06-16 Danisco Us Inc Anvendelse og fremstilling af en opbevaringsstabil neutral metalloprotease
DE102006022224A1 (de) 2006-05-11 2007-11-15 Henkel Kgaa Subtilisin aus Bacillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
DE102006022216A1 (de) 2006-05-11 2007-11-15 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
CA2726265A1 (en) 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Geobacillus stearothermophilus alpha-amylase (amys) variants with improved properties
JP5560266B2 (ja) 2008-06-06 2014-07-23 ダニスコ・ユーエス・インク バシルススブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来アルファ‐アミラーゼを用いるデンプンからのグルコースの生産
EP2362897A2 (en) 2008-11-11 2011-09-07 Danisco US Inc. Compositions and methods comprising serine protease variants
EP2357220A1 (en) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent
BR112012028467B1 (pt) * 2010-05-06 2021-02-17 Danisco Us Inc. variantes de subtilisina, seu método de produção, ácido nucleico, e método de limpeza
EP2540824A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing
DK2935575T3 (en) 2012-12-21 2018-07-23 Danisco Us Inc ALPHA-amylase variants
DK2970931T3 (en) 2013-03-11 2018-01-22 Danisco Us Inc COMBINATORY ALPHA AMYLASE VARIATIONS
US20160160202A1 (en) 2013-05-29 2016-06-09 Danisco Us Inc. Novel metalloproteases
EP3004341B1 (en) 2013-05-29 2017-08-30 Danisco US Inc. Novel metalloproteases
JP6367930B2 (ja) 2013-05-29 2018-08-01 ダニスコ・ユーエス・インク 新規メタロプロテアーゼ
EP2832853A1 (en) 2013-07-29 2015-02-04 Henkel AG&Co. KGAA Detergent composition comprising protease variants
WO2015089447A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Danisco Us Inc. Serine proteases of the bacillus gibsonii-clade
DK3080262T3 (da) 2013-12-13 2019-05-06 Danisco Us Inc Serinproteaser af bacillus-arter
US10030239B2 (en) 2013-12-20 2018-07-24 Novozymes A/S Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same
US20160298102A1 (en) 2013-12-20 2016-10-13 Novozymes A/S Polypeptides Having Protease Activity and Polynucleotides Encoding Same
CN106170546A (zh) 2014-03-21 2016-11-30 丹尼斯科美国公司 芽孢杆菌属的丝氨酸蛋白酶
WO2015193488A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 Novozymes A/S Metalloprotease from kribbella aluminosa and detergent compositions comprising the metalloprotease
US20180002642A1 (en) 2014-10-27 2018-01-04 Danisco Us Inc. Serine proteases
WO2016069569A2 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Danisco Us Inc. Serine proteases
EP3224357A1 (en) 2014-10-27 2017-10-04 Danisco US Inc. Serine proteases of bacillus species
EP3212785A2 (en) 2014-10-30 2017-09-06 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
WO2016066757A2 (en) 2014-10-30 2016-05-06 Novozymes A/S Protease variants and polynucleotides encoding same
WO2016075078A2 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Novozymes A/S Metalloproteases and uses thereof
DE102014225472A1 (de) 2014-12-10 2016-06-16 Henkel Ag & Co. Kgaa Handgeschirrspülmittel mit verbesserter Wirkung gegen Stärke
EP3234122B1 (en) 2014-12-15 2020-10-14 Novozymes A/S Subtilase variants
AR104783A1 (es) 2015-05-08 2017-08-16 Novozymes As VARIANTES DE a-AMILASA Y POLINUCLEÓTIDOS QUE LAS CODIFICAN
JP7015695B2 (ja) 2015-06-17 2022-02-03 ダニスコ・ユーエス・インク バチルス・ギブソニイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）クレードセリンプロテアーゼ
EP3241890B1 (en) 2016-05-03 2019-06-26 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
WO2018118950A1 (en) * 2016-12-21 2018-06-28 Danisco Us Inc. Bacillus gibsonii-clade serine proteases
ES3023210T3 (en) * 2017-12-19 2025-05-30 Procter & Gamble Automatic dishwashing detergent composition

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100003366A1 (en) 2008-06-06 2010-01-07 Danisco Us Inc., Genencor Division Variant Alpha-Amylases from Bacillus Subtilis and Methods of Use, Thereof
US20190144792A1 (en) 2016-06-15 2019-05-16 Henkel Ag & Co. Kgaa Bacillus gibsonii protease and variants thereof
WO2017219011A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Danisco Us Inc Protease variants and uses thereof

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