JP7001160B2 - 濾過回収装置及び濾過回収方法 - Google Patents

Description

本発明は、濾過回収装置及び濾過回収方法に関する。

濾過対象物を含む液体を濾過する装置として、例えば、特許文献１に記載のセルストレーナーが知られている。特許文献１に記載のセルストレーナーは、上方が開口し液体を濾過する濾過部（フィルタ）と、濾過部を開口部内に保持する保持部と、チューブに保持した際、チューブの内部と外部とを連通する連通部を有する。特許文献１に記載のセルストレーナーでは、濾過部が保持部の側面及び底面に配置されている。

特開２０１３－１４１４５６号公報

しかしながら、特許文献１のセルストレーナーでは、濾過対象物を容易に回収するという点で未だ改善の余地がある。

本発明は、濾過対象物を容易に回収することができる濾過回収装置及び濾過回収方法を提供することを目的とする。

本発明の一態様の濾過回収装置は、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、
液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、
を備え、
前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される。

本発明の一態様の濾過回収方法は、
濾過対象物を含む液体を濾過し、回収する濾過回収方法であって、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、を備え、前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される、濾過回収装置を用いて、前記濾過対象物を含む前記液体を濾過することによって、前記濾過フィルタで前記濾過対象物を捕捉するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記排出口を塞ぐステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記導入口から回収用液体を導入するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダ内に保持された前記回収用液体と共に前記濾過対象物を回収するステップ、
を含む。

本発明によれば、濾過対象物を容易に回収することができる濾過回収装置及び濾過回収方法を提供することができる。

本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置の一例の概略斜視図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置の一例の概略分解斜視図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置の一例の概略断面図である。 例示的なフィルタ部の一部の拡大斜視図である。 図４のフィルタ部の一部を厚み方向から見た概略図である。 図３の濾過回収装置の一部分の概略拡大図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置を遠沈管に取り付けた状態を示す概略図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の一例のフローチャートである。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す図である。 本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す図である。 本発明に係る実施の形態１の変形例の濾過回収装置の概略構成図である。 本発明に係る実施の形態２の濾過回収装置の一例の概略構成図である。 本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置の一例の概略斜視図である。 本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置の一例の概略分解斜視図である。 本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置の一例の概略断面図である。 本発明に係る実施の形態３の変形例の濾過回収装置の概略構成図である。 本発明に係る実施の形態４の濾過回収方法の一例のフローチャートである。 本発明に係る実施の形態５の濾過回収方法の一例のフローチャートである。 本発明に係る実施の形態６の濾過回収方法の一例のフローチャートである。 比較例１の濾過回収装置の概略構成図である。 比較例２の濾過回収装置の概略構成図である。 比較例３の濾過回収装置の概略構成図である。

（本発明に至った経緯）
濾過対象物を含む液体をフィルタを用いて濾過した場合、濾過対象物は空気中にさられた状態でフィルタに捕捉されている。フィルタに捕捉された濾過対象物は、回収器具等によって回収されるか、又はフィルタを裏返すことによって回収される。

このような回収方法においては、フィルタから濾過対象物を剥離させにくく、濾過対象物を容易に回収することができない。これにより、回収率を向上させることができないといった問題がある。また、濾過対象物が細胞である場合、回収器具等の物理的接触によって細胞が傷つけられる恐れがある。

本発明者らは、濾過対象物を含む液体をフィルタによって濾過した後、フィルタに捕捉された濾過対象物を回収用の液体に浸した状態にし、回収用の液体と共に濾過対象物を回収することを検討した。

そこで、本発明者らは、濾過フィルタと、濾過フィルタを保持するホルダとを備える装置において、濾過を行った後、ホルダの排出口を塞いだ状態にすることで、回収用の液体を装置内部に保持することを見出した。これにより、本発明者らは、濾過対象物を回収する際に、フィルタに捕捉された濾過対象物を回収用の液体に浸すことで、濾過フィルタから濾過対象物を離し、ピペットなどの回収器具によって濾過対象物回収することを見出した。

更に、本発明者らは、濾過対象物が細胞である場合、回収用の液体を溶媒などにすることによって、フィルタに捕捉された細胞と共に溶媒を回収することによって、細胞懸濁液を生成することを見出した。また、本発明者らは、装置内部に導入する回収用の液体の量を調節することによって、生成する細胞懸濁液の液量を調節することを見出した。

以上の知見に基づき、本発明者らは、以下の発明に至った。

本発明の一態様の濾過回収装置は、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、
液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、
を備え、
前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される。

このような構成により、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、前記ホルダの内壁には、前記ホルダの内側に向かって突設する突起部が形成されており、
前記突起部は、前記濾過フィルタを保持してもよい。

このような構成により、突起部により濾過フィルタを排出口より上方に保持することができ、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、前記突起部は、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端に形成されており、
前記濾過フィルタは、前記導入口よりも前記排出口に近い位置に配置されてもよい。

このような構成により、濾過対象物を回収する際に導入する回収用液体の液量を少なくすることができる。

前記濾過回収装置において、前記ホルダは、
前記突起部を有する筒状の第１ホルダと、
前記第１ホルダに嵌め込まれる筒状の第２ホルダと、
を有し、
前記濾過フィルタは、前記第１ホルダの前記突起部と、前記第２ホルダの一端とによって挟持されてもよい。

このような構成により、ホルダ内部に回収用液体を保持しやすくなり、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、前記第１ホルダは、前記ホルダの前記導入口側に位置する第１端部および前記ホルダの前記排出口側に位置する第２端部を有する筒状の第１本体部を備え、
前記第２ホルダは、前記ホルダの前記導入口側に位置する第３端部および前記ホルダの前記排出口側に位置する第４端部を有する筒状の第２本体部を備え、
前記第１ホルダの内壁と前記第２ホルダの外壁とは、面接触しており、
前記濾過フィルタは、前記複数の貫通孔を有するフィルタ部と、前記フィルタ部の外周を囲むように配置された枠部と、を備え、
前記突起部は、前記第１本体部の前記第２端部に設けられており、
前記第１本体部の内壁と前記第２本体部の外壁とが面接触し、
前記濾過フィルタの前記枠部は、前記第２本体部の前記第４端部と、前記突起部の上面とで挟持されてもよい。

このような構成により、ホルダ内部に保持された回収用液体がホルダ外部に漏れるのを抑制することができ、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、前記第２ホルダは、前記第２本体部の前記第３端部において、前記第２本体部の外壁から前記第２ホルダの外側に向かって延びるフランジを有し、
前記フランジは、前記第１本体部の前記第１端部と接触していてもよい。

このような構成により、第１ホルダから第２ホルダの取り外しが容易になる。

前記濾過回収装置において、前記濾過フィルタの前記枠部は、前記フィルタ部から前記枠部に向かう方向に連続して延びた状態で、前記第１ホルダの前記突起部と前記第２ホルダの前記一端とによって厚み方向に挟持されてもよい。

このような構成により、濾過フィルタの径方向外側に引っ張る力を抑制した状態で、濾過フィルタをホルダの流路内に保持することができる。その結果、濾過中に濾過フィルタが破損することを抑制することができる。

前記濾過回収装置において、前記ホルダの内壁には、前記排出口が塞がれた状態で前記ホルダ内部に保持される液体の液量を示す液量指示部が設けられていてもよい。

このような構成により、濾過対象物を回収用液体と共に回収する際に、回収する液量を調節することができる。

前記濾過回収装置において、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端は、フラット面に対して面接触するように構成されていてもよい。

このような構成により、濾過回収装置をフラット面に載置したとき排出口から回収用液体が漏れることを抑制することができ、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、前記濾過フィルタは、金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とし、前記複数の貫通孔を有するフィルタ部と、前記フィルタ部の外周を囲むように配置された枠部と、を備えてもよい。

このような構成により、濾過対象物をより容易に回収することができる。

前記濾過回収装置において、更に、
底面部、及び前記底面部の外縁に沿って形成されると共に前記底面部から上方に向かって延びる側壁部を有し、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端に着脱可能に取り付けられるシャーレを備え、
前記シャーレの前記底面部は、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端に配置され、
前記シャーレの前記側壁部は、前記ホルダの外壁を囲っていてもよい。

このような構成により、ホルダ内に保持された回収用液体が漏れることを抑制することができるため、濾過対象物を容易に回収することができる。

本発明の一態様の濾過回収方法は、
濾過対象物を含む液体を濾過し、回収する濾過回収方法であって、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、を備え、前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される、濾過回収装置を用いて、前記濾過対象物を含む前記液体を濾過することによって、前記濾過フィルタで前記濾過対象物を捕捉するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記排出口を塞ぐステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記導入口から回収用液体を導入するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダ内に保持された前記回収用液体と共に前記濾過対象物を回収するステップ、
を含む。

このような構成により、濾過対象物を容易に回収することができる。

前記濾過回収方法において、前記濾過回収装置の前記ホルダの前記排出口を塞ぐステップは、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端をシャーレの底面部に配置することを含んでもよい。

このような構成により、濾過対象物をより容易に回収することができる。

前記濾過回収方法において、前記濾過回収装置の前記ホルダの内壁には、前記排出口が塞がれた状態で前記ホルダ内部に保持される液体の液量を示す液量指示部が設けられており、
前記回収用液体を導入するステップは、前記液量指示部に基づいて前記回収用液体を導入することを含んでもよい。

このような構成により、濾過対象物と共に回収する液体の液量を調節することができる。

本発明の一態様の濾過回収方法は、
濾過対象物を含む液体を濾過し、回収する濾過回収方法であって、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、を備え、前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される、濾過回収装置を用いて、前記濾過対象物を含む前記液体を濾過することによって、前記濾過フィルタで前記濾過対象物を捕捉するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダから前記濾過フィルタを取り外すステップ、
前記濾過フィルタで捕捉された前記濾過対象物を回収用液体によって剥離するステップ、
前記回収用液体と共に前記濾過対象物を回収するステップ、
を含む。

このような構成により、濾過対象物を容易に回収することができる。

本発明の一態様の濾過回収方法は、
細胞凝集塊から細胞を剥離し、濾過回収する濾過回収方法であって、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、を備え、前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される、濾過回収装置に、細胞凝集塊を導入するステップ、
前記濾過回収装置に剥離溶液を導入するステップ、
前記細胞凝集塊を前記剥離溶液に浸漬した状態を維持することによって前記細胞凝集塊から細胞を剥離するステップ、
前記濾過回収装置から前記剥離溶液を排出することによって、前記濾過フィルタで前記細胞を捕捉するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記排出口を塞ぐステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記導入口から回収用液体を導入するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダ内に保持された前記回収用液体と共に前記細胞を回収するステップ、
を含む。

このような構成により、濾過対象物を容易に回収することができる。

本発明の一態様の濾過回収方法は、
濾過対象物を含む液体を濾過し、回収する濾過回収方法であって、
複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、を備え、前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置される、濾過回収装置に、溶媒を導入するステップ、
前記濾過回収装置に、前記濾過対象物を含む前記液体を導入することによって、前記濾過フィルタで前記濾過対象物を捕捉するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記排出口を塞ぐステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダの前記導入口から回収用液体を導入するステップ、
前記濾過回収装置の前記ホルダ内に保持された前記回収用液体と共に前記濾過対象物を回収するステップ、
を含む。

このような構成により、濾過対象物を容易に回収することができる。

以下、本発明に係る実施の形態１について、添付の図面を参照しながら説明する。また、各図においては、説明を容易なものとするため、各要素を誇張して示している。

（実施の形態１）
本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置は、濾過及び回収を行うことができる装置である。具体的には、濾過回収装置は、濾過対象物を含む液体を濾過フィルタによって濾過した後、濾過回収装置の内部に回収用液体を保持する。その後、ピペットなどによって、濾過フィルタで捕捉された濾過対象物を回収用液体と共に回収する。

本明細書において、「濾過対象物」とは、液体に含まれる対象物のうち濾過されるべき対象物を意味している。例えば、濾過対象物は、液体に含まれる生物由来物質であってもよい。「生物由来物質」とは、細胞（真核生物）、細菌（真性細菌）、ウィルス等の生物に由来する物質を意味する。細胞（真核生物）としては、例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、ＥＳ細胞、幹細胞、間葉系幹細胞、単核球細胞、単細胞、細胞塊、浮遊性細胞、接着性細胞、神経細胞、白血球、再生医療用細胞、自己細胞、がん細胞、血中循環がん細胞（ＣＴＣ）、ＨＬ－６０、ＨＥＬＡ、菌類を含む。細菌（真性細菌）としては、例えば、大腸菌、結核菌を含む。

実施の形態１では、１つの例として、液体は細胞懸濁液であり、濾過対象物は細胞として説明する。

［全体構成］
図１は、本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置１Ａの一例の概略斜視図である。図２は、本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置１Ａの一例の概略分解斜視図である。図３は、本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置１Ａの一例の概略断面図である。図中のＸ、Ｙ、Ｚ方向は、それぞれ濾過回収装置１Ａの横方向、縦方向、厚み方向を示している。

図１－図３に示すように、濾過回収装置１Ａは、濾過フィルタ１０と、濾過フィルタ１０を保持するホルダ２０とを備える。

＜濾過フィルタ＞
濾過フィルタ１０は、金属製フィルタである。具体的には、濾過フィルタ１０は、金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とする。濾過フィルタ１０は、複数の貫通孔を有するフィルタ部１１と、フィルタ部１１の外周を囲むように配置された枠部１２と、を備える。実施の形態１では、フィルタ部１１と枠部１２とは一体で形成されている。

図４は、例示的なフィルタ部１１の一部の拡大斜視図である。図５は、図４のフィルタ部１１の一部を厚み方向から見た概略図である。

図４及び図５に示すように、フィルタ部１１は、液体に含まれる濾過対象物が捕捉される第１主面ＰＳ１と、第１主面ＰＳ１に対向する第２主面ＰＳ２とを有する板状構造体である。フィルタ部１１には、第１主面ＰＳ１と第２主面ＰＳ２とを貫通する複数の貫通孔１３が形成されている。具体的には、フィルタ部１１を構成するフィルタ基体部１４に、複数の貫通孔１３が形成されている。

図１－３に戻って、フィルタ部１１の形状は、濾過フィルタ１０の厚み方向（Ｚ方向）から見て、例えば、円形、長方形、楕円形である。実施の形態１では、フィルタ部１１の形状は、略円形である。なお、本明細書において、「略円形」とは、短径の長さに対する長径の長さの比が１．０以上１．２以下であることをいう。

図４及び図５に戻って、複数の貫通孔１３は、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１及び第２主面ＰＳ２上に周期的に配置されている。具体的には、複数の貫通孔１３は、フィルタ部１１においてマトリクス状に等間隔で設けられている。

実施の形態１では、貫通孔１３は、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１側、即ちＺ方向から見て、正方形の形状を有する。なお、貫通孔１３は、Ｚ方向から見た形状が正方形に限定されず、例えば長方形、円形、又は楕円などの形状であってもよい。

実施の形態１では、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１に対して垂直な面に投影した貫通孔１３の形状（断面形状）は、長方形である。具体的には、貫通孔１３の断面形状は、濾過フィルタ１０の半径方向の一辺の長さが濾過フィルタ１０の厚み方向の一辺の長さより長い長方形である。なお、貫通孔１３の断面形状は、長方形に限定されず、例えば、平行四辺形又は台形等のテーパー形状であってもよいし、対称形状であってもよいし、非対称形状であってもよい。

実施の形態１では、複数の貫通孔１３は、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１側（Ｚ方向）から見て正方形の各辺と平行な２つの配列方向、即ち図４中のＸ方向とＹ方向に等しい間隔で設けられている。このように、複数の貫通孔１３を正方格子配列で設けることによって、開口率を高めることが可能であり、濾過フィルタ１０に対する液体の通過抵抗を低減することができる。このような構成により、濾過の時間を短くし、濾過対象物へのストレスを低減することができる。

なお、複数の貫通孔１３の配列は、正方格子配列に限定されず、例えば、準周期配列、又は周期配列であってもよい。周期配列の例としては、方形配列であれば、２つの配列方向の間隔が等しくない長方形配列でもよく、三角格子配列又は正三角格子配列などであってもよい。なお、貫通孔１３は、フィルタ部１１に複数設けられていればよく、配列は限定されない。

複数の貫通孔１３の間隔は、濾過対象物である細胞の種類（大きさ、形態、性質、弾性）又は量に応じて適宜設計されるものである。ここで、貫通孔１３の間隔とは、図５に示すように、貫通孔１３をフィルタ部１１の第１主面ＰＳ１側から見て、任意の貫通孔１３の中心と隣接する貫通孔１３の中心との距離ｂを意味する。周期配列の構造体の場合、貫通孔１３の間隔ｂは、例えば、貫通孔１３の一辺ｄの１倍より大きく１０倍以下であり、好ましくは貫通孔１３の一辺ｄの３倍以下である。あるいは、例えば、フィルタ部１１の開口率は、１０％以上であり、好ましくは開口率は、２５％以上である。このような構成により、フィルタ部１１に対する液体の通過抵抗を低減することができる。そのため、処理時間を短くすることができ、細胞へのストレスを低減することができる。なお、開口率とは、（貫通孔１３が占める面積）／（貫通孔１３が空いていないと仮定したときの第１主面ＰＳ１の投影面積）で計算される。

フィルタ部１１の厚みは、貫通孔１３の大きさ（一辺ｄ）の０．１倍より大きく１００倍以下が好ましい。より好ましくは、フィルタ部１１の厚みは、貫通孔１３の大きさ（一辺ｄ）の０．５倍より大きく１０倍以下である。このような構成により、液体に対する濾過フィルタ１０の抵抗を低減することができ、濾過の時間を短くすることができる。その結果、濾過対象物へのストレスを低減することができる。

フィルタ部１１において、濾過対象物を含む液体が接触する第１主面ＰＳ１は、表面粗さが小さいことが好ましい。ここで、表面粗さとは、第１主面ＰＳ１の任意の５箇所において触針式段差計で測定された最大値と最小値の差の平均値を意味する。実施の形態１では、表面粗さは、濾過対象物の大きさより小さいことが好ましく、濾過対象物の大きさの半分より小さいことがより好ましい。言い換えると、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１上の複数の貫通孔１３の開口が同一平面（ＸＹ平面）上に形成されている。また、フィルタ部１１のうち貫通孔１３が形成されていない部分であるフィルタ基体部１４は、繋がっており、一体に形成されている。このような構成により、フィルタ部１１の表面（第１主面ＰＳ１）への濾過対象物の付着が低減され、液体の抵抗を低減することができる。

貫通孔１３は、第１主面ＰＳ１側の開口と第２主面ＰＳ２側の開口とが連続した壁面を通じて連通している。具体的には、貫通孔１３は、第１主面ＰＳ１側の開口が第２主面ＰＳ２側の開口に投影可能に設けられている。即ち、フィルタ部１１を第１主面ＰＳ１側から見た場合に、貫通孔１３は、第１主面ＰＳ１側の開口が第２主面ＰＳ２側の開口と重なるように設けられている。実施の形態１において、貫通孔１３は、その内壁が第１主面ＰＳ１及び第２主面ＰＳ２に対して垂直となるように設けられている。

フィルタ基体部１４を構成する材料は、金属及び／又は金属酸化物を主成分としている。フィルタ基体部１４は、例えば、金、銀、銅、白金、ニッケル、パラジウム、チタン、これらの合金及びこれらの酸化物であってもよい。特に、チタンや、ニッケル‐パラジウム合金を使用することにより、金属の溶出が少なく、濾過対象物への影響を低減することができる。

枠部１２は、フィルタ部１１の外周を囲むように配置される部材である。枠部１２は、フィルタ部１１の第１主面ＰＳ１側から見て、リング状に形成されている。また、濾過フィルタ１０を第１主面ＰＳ１側から見て、枠部１２の中心は、フィルタ部１１の中心と一致する。即ち、枠部１２は、フィルタ部１１と同心円上に形成されている。

枠部１２は、濾過フィルタ１０とホルダ２０とを接続する接続部として機能する。

また、枠部１２には、フィルタの情報（例えば、貫通孔１３の寸法など）を表示してもよい。これにより、改めて測長などを行うことなくフィルタ孔寸法を把握したり、表裏を判別したりしやすくなる。

実施の形態１では、濾過フィルタ１０は直径２５ｍｍであり、膜厚１．８μｍである。フィルタ部１１の直径は２０ｍｍであり、枠部１２の幅は２．５ｍｍである。濾過フィルタ１０は、これらの寸法に限定されることなく、他の寸法で作製されていてもよい。

実施の形態１では、枠部１２を構成する材料は、フィルタ部１１（フィルタ基体部１４）を構成する材料と同じである。なお、枠部１２の材料とフィルタ部１１の材料は同じでなくてもよく、異なっていてもよい。また、枠部１２の材料とフィルタ部１１とは一体で形成されていなくてもよく、別の部材で構成されていてもよい。

＜ホルダ＞
図１－３に戻って、ホルダ２０は、液体を導入する導入口２０ａ、液体を排出する排出口２０ｂ、及び導入口２０ａと排出口２０ｂとを連通する流路２０ｃを有する。ホルダ２０は、導入口２０ａと排出口２０ｂとの間の流路２０ｃに濾過フィルタ１０を保持する。実施の形態１では、ホルダ２０は、流路２０ｃにおいて排出口２０ｂより上方に濾過フィルタ１０を保持する。

ホルダ２０は、例えば、ポリオキシメチレン、ポリエーテルエーテルケトンなどの材料で形成されている。

ホルダ２０は、筒状に形成されている。具体的には、ホルダ２０においては、導入口２０ａと排出口２０ｂとが対向して設けられている。ホルダ２０の内部において、導入口２０ａと排出口２０ｂとを連通するように流路２０ｃが設けられている。

実施の形態１では、ホルダ２０は、筒状の第１ホルダ２１と、第１ホルダ２１の内側に配置される筒状の第２ホルダ２２と、を有する。

第１ホルダ２１は、ホルダ２０の外壁と、排出口２０ｂが設けられるホルダ２０の一端側を形成している。第１ホルダ２１の内部には、濾過フィルタ１０を保持する突起部２１ａが形成されている。突起部２１ａは、第１ホルダ２１の内壁から第１ホルダ２１の内側に向かって突設している。具体的には、突起部２１ａは、第１ホルダ２１内においてリング状に形成されている。

より具体的には、第１ホルダ２１は、ホルダ２０の導入口２０ａ側に位置する第１端部Ｅ１およびホルダ２０の排出口２０ｂ側に位置する第２端部Ｅ２を有する筒状の第１本体部２１ａａを備える。

実施の形態１では、突起部２１ａは、第１ホルダ２１の下部に形成されている。言い換えると、突起部２１ａは、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に形成されている。より具体的には、突起部２１ａは、第１本体部２１ａａの第２端部Ｅ２に設けられている。突起部２１ａは、濾過フィルタ１０を載置する台座として機能する。これにより、濾過フィルタ１０は、排出口２０ｂよりも上方であって、ホルダ２０の導入口２０ａよりも排出口２０ｂに近い位置に配置される。

突起部２１ａの高さは、ホルダ２０の高さの０．０１倍以上２倍未満に設定される。突起部２１ａの高さが低いほど回収用液が少量で済むため、突起部２１ａの高さは、ホルダ２０の高さの０．１倍以上０．５倍以下に設定されるのが好ましい。突起部２１ａの高さとは、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端側の端面から突起部２１ａの上面までの長さを意味する。

濾過フィルタ１０の枠部１２は、突起部２１ａの上面に載置される。このため、濾過フィルタ１０の保持位置は、突起部２１ａが形成される位置によって決定される。言い換えると、濾過フィルタ１０の保持位置は、突起部２１ａが形成される位置を変更することによって変更することができる。

実施の形態１では、濾過フィルタ１０は、ホルダ２０の内壁に対して略垂直に配置されている。本明細書において、略垂直とは、８０°以上１００°以下の範囲を意味する。これにより、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１及び第２主面ＰＳ２を、液体５０の流れる方向に対して略垂直に配置することができる。

第１ホルダ２１の下面は、フラット面に対して面接触するように構成されている。第１ホルダ２１の下面とは、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端側の端面を意味する。即ち、第１ホルダ２１の下面は、第１本体部２１ａａの第２端部Ｅ２の端面を意味する。第１ホルダ２１の下面は、平坦な形状を有している。本明細書では、「平坦な形状」とは、第１ホルダ２１を水平面に載置したときに第１ホルダ２１の下面の全面が該水平面に接触する形状を意味する。

このように、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端は、フラット面に対して面接触するように構成されている。これにより、濾過回収装置１Ａをフラット面に配置したとき、濾過回収装置１Ａから液体が漏れるのを抑制することができる。

濾過溶液および濾過回収溶液、洗浄液に対して、濾過回収装置１Ａ全体の重力が浮力より大きいことが好ましい。こうすることにより、液体中で濾過回収装置１Ａが浮くことがなく、容器との設置が容易になるため濾過作業がしやすい。

第２ホルダ２２は、ホルダ２０の内壁と、導入口２０ａが設けられるホルダ２０の他端側を形成している。第２ホルダ２２は、第１ホルダ２１の内側に配置されることによって、第２ホルダ２２の外壁と第１ホルダ２１の内壁とが面接触する。即ち、第２ホルダ２２は、第１ホルダ２１に嵌め込まれることによって、第２ホルダ２２の外壁と第１ホルダ２１の内壁とが面接触する。これにより、ホルダ２０のシール性を向上させている。

また、濾過回収装置１Ａを組み立てするとき、濾過フィルタ１０を第１ホルダ２１内に入れることで、濾過フィルタ１０と第１ホルダ２１との位置合わせをすることができる。さらに、接着剤を使用しなくてもホルダ２０に濾過フィルタ１０を固定できるため、工程が少なく、さらに、濾過対象物への影響を低減することができる。

また、第２ホルダ２２が第１ホルダ２１の内側に配置されることによって、第２ホルダ２２の一端と第１ホルダ２１の突起部２１ａによって濾過フィルタ１０の枠部１２を挟持している。これにより、濾過フィルタ１０を流路２０ｃに保持することができる。

より具体的には、第２ホルダ２２は、ホルダ２０の導入口２０ａ側に位置する第３端部Ｅ３およびホルダ２０の排出口２０ｂ側に位置する第４端部Ｅ４を有する筒状の第２本体部２２ａａを備える。ホルダ２０においては、第１本体部２１ａａの内壁と第２本体部２２ａａの外壁とが面接触する。濾過フィルタ１０の枠部１２は、第２本体部２２ａａの第４端部Ｅ４と、突起部２１ａの上面とで挟持される。

実施の形態１では、ホルダ２０の外面に穴２４が設けられている。具体的には、第１ホルダ２１の外面に２つの円形の穴２４が設けられている。２つの穴２４は、対向している。穴２４は、例えば、貫通孔で形成されている。第１ホルダ２１の外面に穴２４が設けられることによって、第１ホルダ２１から第２ホルダ２２の取り外しが容易になる。また、第１ホルダ２１に第２ホルダ２２を嵌め込む際の位置合わせに穴２４を利用することができる。また、濾過をするときに穴２４に容器の一部を取り付けることができる。また、穴２４を設けることによって、温度変化などによる樹脂の伸縮を緩和し、ホルダ２０の割れ及び勘合性の低下を抑制することができる。さらに、穴２４によって第１ホルダ２１と第２ホルダ２２との間の摩擦抵抗を低減し、第１ホルダ２１から第２ホルダ２２の取り外しを容易にすることができる。なお、穴２４は、貫通孔に限定されず、非貫通孔であってもよい。非貫通孔とは、第１ホルダ２１の外面を窪ませて形成される。また、穴２４の数は、２つに限定されず、穴２４は１つ又は複数設けられてもよい。穴２４の形状は、円形に限定されず、円形以外の形状、例えば、四角形などであってもよい。

図６は、図３の濾過回収装置の一部分の概略拡大図である。図６に示すように、濾過フィルタ１０の枠部１２は、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持されている。

具体的には、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とは、濾過フィルタ１０の枠部１２を厚み方向（Ｚ方向）に挟持している。また、濾過フィルタ１０の枠部１２は、フィルタ部１１から枠部１２に向かう方向（Ｘ，Ｙ方向）に連続して延びた状態で、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持される。

「フィルタ部１１から枠部１２に向かう方向（Ｘ，Ｙ方向）に連続して延びた状態で第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持される」とは、濾過フィルタ１０の枠部１２において、フィルタ部１１から枠部１２に向かう方向（Ｘ，Ｙ方向）に延びる部分が屈曲せずに第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持されることを意味する。言い換えると、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持される枠部１２の部分が屈曲していないことを意味する。

このように、第１ホルダ２１に第２ホルダ２２を嵌め込むことによって、濾過フィルタ１０の枠部１２は、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって保持される。より具体的には、濾過フィルタ１０の枠部１２は、第２ホルダ２２の第２本体部２２ａａの第４端部Ｅ４と、第１ホルダ２１の突起部２１ａの上面２１ａｂとで挟持される。

第１ホルダ２１の突起部２１ａの上面２１ａｂおよび第２ホルダ２２の第２本体部２２ａａの第４端部Ｅ４には、弾性力もしくは摩擦力のある部材が配置されていてもよい。これにより、濾過フィルタ１０の厚みによらずにホールドしやすい。また、操作中に濾過フィルタ１０がホルダ２０から外れるのを抑制することができる。

枠部１２は、第２ホルダ２２の一端と接触する第１面ＰＳ３と、第１ホルダ２１の突起部２１ａと接触する第２面ＰＳ４とを有する。枠部１２の第１面ＰＳ３はフィルタ部１１の第１主面ＰＳ１と同じ側にあり、枠部１２の第２面ＰＳ４はフィルタ部１１の第２主面ＰＳ２と同じ側にある。実施の形態１では、枠部１２の第１面ＰＳ３と第２面ＰＳ４とは、互いに対向しており、且つそれぞれ、屈曲せずに平坦に形成されている。

第２ホルダ２２の一端は、平坦に形成された端面を有し、枠部１２の第１面ＰＳ３と接触する。第１ホルダ２１の突起部２１ａの上面は、平坦に形成されており、枠部１２の第２面ＰＳ４と接触する。

実施の形態１では、濾過フィルタ１０の枠部１２は、全周にわたって第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって挟持されている。また、枠部１２は、フィルタ部１１から枠部１２に向かう方向（Ｘ，Ｙ方向）に連続して延びた状態で、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって挟持される。言い換えると、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とは、枠部１２を屈曲させずに厚み方向に挟持している。これにより、濾過フィルタ１０の径方向外側に引っ張る力を抑制した状態で、濾過フィルタ１０をホルダ２０の流路２０ｃ内に保持することができる。その結果、濾過中に濾過フィルタ１０が破損することを抑制することができる。

第２ホルダ２２は、フランジ２２ａと、取っ手２２ｂと、を有する。

フランジ２２ａは、第２ホルダ２２の上部に形成されている。フランジ２２ａは、第２ホルダ２２の上部において、第２ホルダ２２の外側に向かって延びている。具体的には、フランジ２２ａは、第２ホルダ２２の上部において、リング状に形成されている。

図７は、本発明に係る実施の形態１の濾過回収装置１Ａを遠沈管４０に取り付けた状態を示す概略図である。図７に示すように、第２ホルダ２２がフランジ２２ａを有することによって濾過回収装置１Ａを、例えば、遠沈管４０に取り付けることができる。具体的には、遠沈管４０の開口に濾過回収装置１Ａを取り付ける場合、フランジ２２ａが遠沈管４０の開口を画定する開口端部に載置される。このように、フランジ２２ａが遠沈管４０の開口端部によって支持される。

取っ手２２ｂは、第２ホルダ２２の上部に形成されている。取っ手２２ｂは、フランジ２２ａから第２ホルダ２２の外側に向かって延びている。第２ホルダ２２に取っ手２２ｂを設けることによって、濾過回収装置１Ａの取り回しが容易になる。

［濾過回収方法］
濾過回収方法の一例を図８及び図９Ａ～９Ｅを用いて説明する。図８は、本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の一例のフローチャートを示す。図９Ａ～９Ｅは、本発明に係る実施の形態１の濾過回収方法の工程の一例を示す。なお、濾過回収方法とは、濾過回収装置１Ａを用いて、濾過対象物を含む液体を濾過し、濾過対象物を回収する方法を意味する。

図８及び図９Ａに示すように、ステップＳＴ１１において、濾過回収装置１Ａを用いて濾過対象物５１を含む液体５０を濾過することによって、濾過フィルタ１０に濾過対象物５１を捕捉する。具体的には、濾過回収装置１Ａを遠沈管４０に取り付け（図７参照）、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の導入口２０ａから濾過対象物５１を含む液体５０をホルダ２０内部の流路２０ｃに導入する。なお、図９Ａにおいては、遠沈管４０の図示を省略している。

濾過対象物５１を含む液体５０は、流路２０ｃに配置された濾過フィルタ１０を通過し、排出口２０ｂから排出される。これにより、図９Ｂに示すように、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１には、貫通孔１３よりも大きい濾過対象物５１が捕捉される。

ステップＳＴ１２において、濾過回収装置１Ａで捕捉した濾過対象物５１を洗浄する。具体的には、濾過フィルタ１０に洗浄液を導入し、濾過対象物５１を洗浄する。

ステップＳＴ１３において、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の排出口２０ｂを塞ぐ。例えば、図９Ｃに示すように、濾過回収装置１Ａをシャーレ６０に配置する。具体的には、濾過回収装置１Ａのホルダ２０のうち排出口２０ｂが設けられている一端をシャーレ６０の底面部６１に配置する。シャーレ６０の底面部６１は平坦状に形成されているため、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端側の端面と面接触する。なお、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端側の端面は、上述したように、平坦状に形成されている。これにより、排出口２０ｂがシャーレ６０の底面部６１によって塞がれた状態となる。即ち、排出口２０ｂがシャーレ６０の底面部６１によってシールされた状態となる。

ステップＳＴ１４において、濾過回収装置１Ａに回収用液体５２（以下、「液体５２」と称する）を導入する。図９Ｄに示すように、ホルダ２０の導入口２０ａから液体５２を導入する。ステップＳＴ１３により、ホルダ２０の排出口２０ｂは塞がれた状態となっているため、液体５２がホルダ２０内部の流路２０ｃに保持される。

これにより、濾過対象物５１が濾過フィルタ１０から離れ、ホルダ２０内部に保持された液体５２中を浮遊する。

なお、ホルダ２０の排出口２０ｂが塞がれた状態とは、液体５２の漏れを抑制している状態であり、完全に液体５２が漏れない状態でなくてもよい。ホルダ２０内部の流路２０ｃに、濾過対象物５１を回収可能な程度の液量の液体５２を保持できていればよい。即ち、濾過回収装置１Ａにおいては、ホルダ２０の排出口２０ｂが塞がれた状態において、回収に影響がない程度の液体５２の漏れは許容されてもよい。

ステップＳＴ１５において、濾過回収装置１Ａに保持されている液体５２と共に濾過対象物５１を回収する。図９Ｅに示すように、例えば、ピペット５３を用いて、ホルダ２０の流路２０ｃに保持された液体５２を濾過対象物５１と共に回収する。

このように、濾過回収方法は、ステップＳＴ１１～ＳＴ１５を実行することによって、濾過対象物５１を回収用の液体５２と共に回収することができる。

［効果］
実施の形態１に係る濾過回収装置１Ａ及び濾過回収方法によれば、以下の効果を奏することができる。

濾過回収装置１Ａは、濾過フィルタ１０と、導入口２０ａ、排出口２０ｂ及び導入口２０ａと排出口２０ｂとを連通する流路２０ｃを有するホルダ２０と、を備える。濾過フィルタ１０は、ホルダ２０の流路２０ｃにおいて排出口２０ｂより上方に配置される。

このような構成により、濾過回収装置１Ａにおいて、濾過対象物５１を含む液体５０の濾過を行った後、濾過フィルタ１０に捕捉された濾過対象物５１を容易に回収することができる。

具体的には、濾過対象物５１の回収の際に、排出口２０ｂを塞ぐことができる。これにより、ホルダ２０の導入口２０ａから回収用の液体５２を導入し、ホルダ２０内部の流路２０ｃに、液体５２を保持することができる。その結果、ピペット５３によって液体５２と共に濾過対象物５１を容易に回収することができる。

また、濾過フィルタ１０をホルダ２０の排出口２０ｂの上方に配置することによって、排出口２０ｂを容易に塞ぐことができる。例えば、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端を平面上に載置した場合、濾過フィルタ１０の影響を受けずに排出口２０ｂを塞ぐことができる。具体的には、濾過フィルタ１０のうねりなどによってホルダ２０と平面との間のシール性を損なうこと抑制することができる。

また、濾過対象物が細胞である場合、回収用の液体５２を溶媒などにすることによって、細胞と共に溶媒を回収することによって、細胞懸濁液を容易に生成することができる。また、回収用液体を導入することにより捕捉された細胞の乾燥を防ぎ、活性を保つことができる。更に、濾過回収装置１Ａの内部に導入する回収用の液体５２の量を調節することによって、生成する細胞懸濁液の液量を容易に調節することができる。また、濾過回収装置１Ａの内部に導入する回収用の液体５２の量を調節することによって、回収する細胞懸濁液の濃度を容易に調節することができる。

ホルダ２０の内壁には、ホルダ２０の内側に向かって突設する突起部２１ａが形成されており、突起部２１ａは、濾過フィルタ１０を保持する。このような構成により、濾過フィルタ１０をホルダ２０の導入口２０ａと排出口２０ｂの間の流路２０ｃに配置することができる。

突起部２１ａは、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に形成されており、濾過フィルタ１０は、導入口２０ａよりも排出口２０ｂに近い位置に配置される。このような構成により、濾過フィルタ１０を排出口２０ｂの近くに配置することができるため、回収に必要な液体５２の液量を減らすことができる。即ち、少量の液体５２で濾過対象物５１の回収を行うことができる。

ホルダ２０は、突起部２１ａを有する筒状の第１ホルダ２１と、第１ホルダ２１の内側に配置される筒状の第２ホルダ２２と、を有する。濾過フィルタ１０は、第１ホルダ２１の突起部２１ａと、第２ホルダ２２の一端とによって挟持される。このような構成により、濾過フィルタ１０をホルダ２０の流路２０ｃに強固に固定することができる。

排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端は、フラット面に対して面接触するように構成されている。このような構成により、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端をフラット面に載置したときに、排出口２０ｂを容易に塞ぐことができる。

濾過フィルタ１０は、金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とし、複数の貫通孔１３を有するフィルタ部１１と、フィルタ部１１の外周を囲むように配置された枠部１２と、を備える。このような構成により、濾過対象物５１を容易に回収することができ、回収率を向上させることができる。例えば、樹脂フィルタなどにおいては、貫通孔の寸法及び配置にばらつきがあり、濾過対象物が貫通孔に入り込んでしまう場合がある。金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とする濾過フィルタ１０においては、貫通孔の寸法及び配置が樹脂フィルタに比べて均等に設計されている。このため、濾過回収装置１Ａでは、金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とする濾過フィルタ１０を用いることによって、濾過対象物５１を回収する際、濾過フィルタ１０から濾過対象物５１を剥離し易くなり、樹脂フィルタに比べて回収率を向上させることができる。

濾過回収方法において、上述した濾過回収装置１Ａの効果と同じ効果を奏する。

なお、実施の形態１では、濾過フィルタ１０は金属製フィルタである例を説明したが、これに限定されない。濾過フィルタ１０は、液体５０に含まれる濾過対象物を濾過することができる膜状もしくはシート状物質であればよい。

実施の形態１では、濾過回収装置１Ａは、１つの濾過フィルタ１０を備える例について説明したが、これに限定されない。濾過回収装置１Ａは、複数の濾過フィルタを備えてもよい。濾過回収装置１Ａが複数の濾過フィルタを備える場合、複数の濾過フィルタは液体５０が流れる方向に直列に配置されてもよい。また、複数の濾過フィルタの貫通孔の寸法は、異なっていてもよい。例えば、複数の濾過フィルタは、液体５０が流れる上流側から、貫通孔の寸法が大きい順に直列に配置されていてもよい。このような構成により、一度にサイズの異なる濾過対象物を濾過し、回収することができる。

実施の形態１では、濾過対象物５１を細胞、液体５０を細胞懸濁液として説明したが、これに限定されない。

実施の形態１では、ホルダ２０は、第１ホルダ２１と第２ホルダ２２とで構成される例について説明したが、これに限定されない。ホルダ２０は、第１ホルダ２１と第２ホルダ２２とが一体形成されていてもよいし、２つ以上のパーツで構成されていてもよい。

実施の形態１では、濾過フィルタ１０の枠部１２は、全周にわたって第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって挟持されている例について説明したが、これに限定されない。例えば、枠部１２は、第１ホルダ２１の突起部２１ａと第２ホルダ２２の一端とによって部分的に挟持されてもよい。このような構成により、濾過フィルタ１０の径方向外側に引っ張る力を更に抑制することができる。その結果、濾過中に濾過フィルタ１０が破損することを抑制することができる。

実施の形態１では、第２ホルダ２２が、フランジ２２ａと取っ手２２ｂとを備える例について説明したが、これに限定されない。フランジ２２ａ及び取っ手２２ｂは、必須の構成ではない。

実施の形態１では、排出口２０ｂが設けられるホルダ２０の一端に、ホルダ２０の外側に向かって延びるフランジを設けてもよい。このような構成により、濾過回収装置１Ａを安定して配置することができる。

実施の形態１では、濾過を行う際に、濾過回収装置１Ａを遠沈管４０に取り付ける例について説明したが、これに限定されない。濾過を行う際には、濾過回収装置１Ａは、遠沈管以外の容器又は装置などに取り付けられていてもよい。

実施の形態１では、回収を行う際に、ホルダ２０の排出口２０ｂは、シャーレ６０の底面部６１で塞がれる例について説明したが、これに限定されない。回収を行う際には、ホルダ２０の排出口２０ｂから回収用の液体５２が漏れることを抑制できればよく、排出口２０ｂを塞ぐ構成であればよい。例えば、台座のフラット面などによって排出口２０ｂを塞いでもよい。あるいは、フラット面だけなく、滑らかな凸面によって排出口２０ｂを塞いでもよい。

実施の形態１では、濾過回収方法は、濾過フィルタ１０で捕捉された濾過対象物５１を洗浄するステップＳＴ１２を含む例について説明したが、これに限定されない。濾過回収方法において、ステップＳＴ１２は必須の構成ではない。

実施の形態１では、濾過回収方法は、ホルダ２０の排出口２０ｂを塞ぐステップＳＴ１３及びホルダ２０の内部に回収用液体５２を導入するステップＳＴ１４を含む例について説明したが、これに限定されない。

例えば、濾過回収方法では、回収用液体５２を収容したシャーレ６０に濾過回収装置１Ａを配置することによって、排出口２０ｂからホルダ２０内部に液体５２を導入してもよい。具体的には、シャーレ６０に収容されている回収用液体５２に、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端側を向けて、濾過回収装置１Ａを液体５２に沈めていく。これにより、排出口２０ｂからホルダ２０内部に液体５２が浸入する。排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端がシャーレ６０の底面部６１に面接触することによって、排出口２０ｂが塞がれて、ホルダ２０内部に液体５２が保持される。

このような構成においても、濾過対象物５１を容易に回収することができる。

実施の形態１では、濾過回収方法は、濾過回収装置１Ａで捕捉した濾過対象物５１を回収する例について説明したが、これに限定されない。例えば、濾過回収方法は、濾過回収装置１Ａの濾過フィルタ１０を通過した液体５０及び対象物を回収してもよい。濾過回収装置１Ａが遠沈管４０などの容器に取り付けられている場合、濾過フィルタ１０を通過した液体５０及び対象物は、遠沈管４０の底に溜まる。濾過回収装置１Ａを遠沈管４０から取り外し、遠沈管４０内部に溜まった液体５０及び対象物を回収してもよい。

実施の形態１では、濾過フィルタ１０は、ホルダ２０の内壁に対して略垂直に配置される例について説明したが、これに限定されない。濾過フィルタ１０は、ホルダ２０の内壁に対して斜めに配置されてもよい。

実施の形態１では、濾過回収装置１Ａと濾過回収方法について説明したが、これに限定されない。例えば、濾過回収装置１Ａを含む、濾過方法を実施するためのキットとして使用されてもよい。

図１０は、本発明に係る実施の形態１の変形例の濾過回収装置１Ｂの概略構成図である。図１０に示すように、濾過フィルタ１０Ａは、ホルダ２０の内壁に対して斜めに配置されてもよい。具体的には、第１ホルダ２１の突起部２１ｂの高さをホルダ２０の内壁に沿って変化させることによって、濾過フィルタ１０Ａをホルダ２０の内壁に対して斜めに配置する。

例えば、濾過回収装置１ＢをＹＺ平面で切断した断面において、左側の突起部２１ｂの高さを右側の突起部２１ｂの高さよりも高くする。これにより、濾過フィルタ１０Ａをホルダ２０の内壁に対して角度θ１傾けて配置することができる。濾過フィルタ１０Ａの傾斜角度θ１は、例えば、１０°以上８０°以下に設定される。

このような構成により、濾過対象物５１を容易に集めることができるため、より容易に回収することができる。

（実施の形態２）
本発明に係る実施の形態２の濾過回収装置について説明する。

実施の形態２では、主に実施の形態１と異なる点について説明する。実施の形態２においては、実施の形態１と同一又は同等の構成については同じ符号を付して説明する。また、実施の形態２では、実施の形態１と重複する記載は省略する。

実施の形態２では、ホルダの内壁に液量指示部を設けている点で、実施の形態１と異なる。

図１１は、本発明に係る実施の形態２の濾過回収装置１Ｃの一例の概略構成図である。図１１に示すように、濾過回収装置１Ｃでは、ホルダ２０の内壁に、排出口２０ｂが塞がれた状態でホルダ２０内部に保持される液体５２の液量を示す液量指示部２３が設けられている。

液量指示部２３は、ホルダ２０内部の流路２０ｃに保持されている回収用の液体５２の液量を示す目盛として機能する。例えば、濾過対象物５１が細胞であって、回収時に所望の液量の細胞懸濁液を生成したい場合、ユーザは、液量指示部２３を基準にして回収用の液体５２を濾過回収装置１Ｃのホルダ２０の内部に導入する。具体的には、ホルダ２０の内部に保持されている液体５２の液面が、所望の液量を示す液量指示部２３に到達するまで、液体５２をホルダ２０内部に導入する。これにより、回収する際に、所望の液量の細胞懸濁液を生成することができる。

実施の形態２では、液量指示部２３は、複数の溝２３ａによって形成されている。複数の溝２３ａは、ホルダ２０の内壁において、リング状に設けられている。複数の溝２３ａは、濾過回収装置１Ｃの高さ方向に順に設けられている。

［効果］
実施の形態２に係る濾過回収装置１Ｃによれば、以下の効果を奏することができる。

濾過回収装置１Ｃでは、ホルダ２０の内壁に、排出口２０ｂが塞がれた状態でホルダ２０内部に保持される液体５２の液量を示す液量指示部２３が設けられている。このような構成により、ホルダ２０内部に保持されている液体５２の液量を、ユーザが容易に確認することができる。これにより、回収に必要な液体５２の液量を容易に調節することができる。

また、濾過対象物５１が細胞である場合、所望の液量の細胞懸濁液を生成するために必要な液体５２を、液量指示部２３に基づいて容易に調節することができる。

また、液量指示部２３に基づいて液体５２の液量を調節することによって、細胞懸濁液の濃度調整を行うこともできる。これにより、回収後において、所望の濃度の細胞懸濁液に調整するための濃度調節工程又は再分散工程などを省略することができる。

なお、実施の形態２では、液量指示部２３は、複数の溝２３ａによって形成される例について説明したが、これに限定されない。液量指示部２３は、１つ又は複数の溝２３ａを有していればよい。

また、液量指示部２３は、ホルダ２０内部に保持されている液体５２の液量が確認できる目盛として機能するものであればよい。例えば、液量指示部２３は、１つ又は複数の凹部、１つ又は複数の凸部、１つ又は複数の文字、又はこれらの組み合わせであってもよい。

また、濾過回収装置１Ｃを用いて濾過回収方法を実施してもよい。濾過回収装置１Ｃを用いた濾過回収方法では、実施の形態１の濾過回収方法のステップＳＴ１４は、液量指示部２３に基づいて回収用の液体５２を導入することを含んでもよい。このような構成により、濾過対象物５１と共に回収する液体５２の液量を調節することができる。

（実施の形態３）
本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置について説明する。

実施の形態３では、主に実施の形態１及び２と異なる点について説明する。実施の形態３においては、実施の形態１及び２と同一又は同等の構成については同じ符号を付して説明する。また、実施の形態３では、実施の形態１及び２と重複する記載は省略する。

実施の形態３では、シャーレを備える点が、実施の形態１及び２と異なる。

図１２は、本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置１Ｄの一例の概略斜視図である。図１３は、本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置１Ｄの一例の概略分解斜視図である。図１４は、本発明に係る実施の形態３の濾過回収装置１Ｄの一例の概略断面図である。

図１２－１４に示すように、濾過回収装置１Ｄは、ホルダ２０に着脱可能に取り付けられるシャーレ３０を備える。シャーレ３０は、濾過を行うときにホルダ２０から取り外され、回収を行うときにホルダ２０に取り付けられる。シャーレ３０は、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端を収容可能な大きさで形成されている。

シャーレ３０は、底面部３１、及び底面部３１の外縁に沿って形成されると共に底面部３１から上方に向かって延びる側壁部３２を有する。シャーレ３０は、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に着脱可能に取り付けられる。

シャーレ３０が排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に取り付けられた状態において、底面部３１は、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に配置される。側壁部３２は、ホルダ２０の外壁を囲うように配置される。

これにより、底面部３１とホルダ２０の一端との接触により、排出口２０ｂを塞いでいる。また、側壁部３２とホルダ２０の外壁との間のスペースを小さくする、又はなくすことによって、ホルダ２０内部に保持されている液体５２が排出口２０ｂから漏れ出すスペースを小さくしている、又はなくしている。

実施の形態３では、シャーレ３０の底面部３１は、平坦状に形成されている。シャーレ３０の側壁部３２は、ホルダ２０の外壁に沿って配置されており、ホルダ２０の外壁に面接触している。

また、シャーレ３０の側壁部３２の内側壁は、ホルダ２０の外壁に面接触している。具体的には、シャーレ３０の側壁部３２の内側壁とは、第１ホルダ２１の外壁に面接触している。これにより、シャーレ３０とホルダ２０との接触面積を増やし、濾過回収装置１Ｄのシール性を向上させることができる。即ち、ホルダ２０内部に保持されている液体５２がホルダ２０の外部に漏れ出すことを抑制することができる。

［効果］
実施の形態３に係る濾過回収装置１Ｄによれば、以下の効果を奏することができる。

濾過回収装置１Ｄでは、底面部３１、及び底面部３１の外縁に沿って形成されると共に底面部３１から上方に向かって延びる側壁部３２を有するシャーレ３０が、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端に着脱可能に取り付けられる。このような構成により、濾過対象物５１を回収する際に、排出口２０ｂからの液体５２の漏れを更に抑制することができる。このため、より容易に濾過対象物５１を回収することができる。

また、液体５２の漏れをより抑制することができるため、ホルダ２０内部に保持される液体５２の液量の調節がより容易になる。これにより、細胞懸濁液の濃度調節などがより容易に行うことができる。

なお、実施の形態３では、シャーレ３０の側壁部３２が、ホルダ２０の外壁に面接触する例について説明したが、これに限定されない。シャーレ３０の側壁部３２は、ホルダ２０の外壁と面接触していなくてもよい。シャーレ３０の側壁部３２とホルダ２０との外壁との間のスペースを小さくすることによって、排出口２０ｂからの液体５２の漏れが抑制することができればよい。

図１５は、本発明に係る実施の形態３の変形例の濾過回収装置１Ｅの概略構成図である。図１５に示すように、濾過回収装置１Ｅは、ホルダ２０の内壁に、液量指示部２３を設けていてもよい。このような構成により、ホルダ２０内部に保持されている液体５２の液量を、ユーザが容易に確認することができる。これにより、回収に必要な液体５２の液量を容易に調節することができる。

（実施の形態４）
本発明に係る実施の形態４の濾過回収方法について説明する。

実施の形態４では、主に実施の形態１と異なる点について説明する。実施の形態４においては、実施の形態１と同一又は同等の構成については同じ符号を付して説明する。また、実施の形態４では、実施の形態１と重複する記載は省略する。

実施の形態４では、濾過回収装置から濾過フィルタを取り外し、濾過フィルタを回収用液体に浸漬することによって濾過対象物を回収する点が、実施の形態１と異なる。

図１６は、本発明に係る実施の形態４の濾過回収方法の一例のフローチャートである。図１６に示すように、ステップＳＴ２１において、濾過回収装置１Ａを用いて濾過対象物５１を含む液体５０を濾過することによって、濾過フィルタ１０に濾過対象物５１を捕捉する。具体的には、濾過回収装置１Ａを遠沈管４０に取り付け（図７参照）、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の導入口２０ａから濾過対象物５１を含む液体５０をホルダ２０内部の流路２０ｃに導入する。

濾過対象物５１を含む液体５０は、流路２０ｃに配置された濾過フィルタ１０を通過し、排出口２０ｂから排出される。これにより、濾過フィルタ１０に、貫通孔１３よりも大きい濾過対象物５１が捕捉される。

ステップＳＴ２２において、濾過回収装置１Ａで捕捉した濾過対象物５１を洗浄する。具体的には、濾過フィルタ１０に洗浄液を導入し、濾過対象物５１を洗浄する。

ステップＳＴ２３において、濾過回収装置１Ａにおいて、ホルダ２０から濾過フィルタ１０を取り外す。具体的には、濾過回収装置１Ａを遠沈管４０から取り外した後、第２ホルダ２２を第１ホルダ２１から取り外す。そして、第１ホルダ２１から濾過フィルタ１０を取り外す。また、ステップＳＴ２３においては、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１上に濾過対象物５１を捕捉した状態で、濾過フィルタ１０をホルダ２０から取り外す。

ステップＳＴ２４において、濾過フィルタ１０に捕捉された濾過対象物５１を回収用液体によって剥離する。具体的には、回収用液体を溜めた容器に濾過フィルタ１０を浸漬する。これにより、濾過対象物が濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１から離れる。あるいは、濾過対象物が濾過フィルタ１０から離れやすくなる。

ステップＳＴ２５において、濾過フィルタ１０が浸漬されている液体と共に濾過対象物５１を回収する。例えば、ピペットを用いて、液体と共に濾過対象物５１回収する。

このように、実施の形態４に係る濾過回収方法は、ステップＳＴ２１～ＳＴ２５を実行することによって、濾過対象物５１を回収用液体と共に回収することができる。

［効果］
実施の形態４に係る濾過回収方法によれば、以下の効果を奏することができる。

実施の形態４に係る濾過回収方法では、濾過回収装置１Ａによって濾過対象物５１を濾過した後、ホルダ２０から濾過フィルタ１０を取り外し、濾過フィルタ１０を回収用液体に浸漬する。これにより、濾過フィルタ１０で捕捉された濾過対象物５１が濾過フィルタ１０を離れるため、濾過対象物５１を容易に回収することができる。

なお、実施の形態４では、ステップＳＴ２４は、濾過フィルタ１０を回収用液体に浸漬する例について説明したが、これに限定されない。例えば、ステップＳＴ２４は、濾過フィルタ１０に回収用液体を流しかけてもよい。この場合、ステップＳＴ２５においては、濾過フィルタ１０に回収用液体を流しかけることによって濾過フィルタ１０から離れた濾過対象物５１を回収用液体と共に回収する。

実施の形態４の濾過回収方法では、ステップＳＴ２２は必須ではない。

（実施の形態５）
本発明に係る実施の形態５の濾過回収方法について説明する。

実施の形態５では、主に実施の形態１と異なる点について説明する。実施の形態５においては、実施の形態１と同一又は同等の構成については同じ符号を付して説明する。また、実施の形態５では、実施の形態１と重複する記載は省略する。

実施の形態５では、細胞凝集塊を細胞に剥離する点が、実施の形態１と異なる。

図１７は、本発明に係る実施の形態５の濾過回収方法の一例のフローチャートである。図１７に示すように、ステップＳＴ３１において、濾過回収装置１Ａに細胞凝集塊を導入する。具体的には、ホルダ２０内の濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１上に細胞凝集塊を配置する。

ステップＳＴ３２において、濾過回収装置１Ａに剥離溶液を導入する。具体的には、ホルダ２０の排出口２０ｂを塞いだ状態でホルダ２０の導入口２０ａから剥離溶液を導入し、濾過フィルタ１０上に配置された細胞凝集塊を剥離溶液に浸漬する。実施の形態５では、剥離溶液は、トリプシン溶液を用いた。

ステップＳＴ３３において、細胞凝集塊を剥離溶液に浸漬した状態を維持することによって細胞凝集塊から細胞を剥離する。具体的には、細胞凝集塊を剥離溶液に浸漬した状態を所定の時間維持する。所定の時間は、例えば、５分間である。

ステップＳＴ３４において、濾過回収装置１Ａから剥離溶液を排出することによって、濾過フィルタ１０で細胞を捕捉する。具体的には、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の排出口２０ｂを開放し、排出口２０ｂから剥離溶液を排出する。これにより、濾過フィルタ１０に細胞を捕捉する。

ステップＳＴ３５において、濾過フィルタ１０で捕捉した細胞を洗浄する。ステップST３６において、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の排出口２０ｂを塞ぐ。具体的には、排出口２０ｂが設けられているホルダ２０の一端をフラット面に配置し、ホルダ２０の一端とフラット面とを面接触させる。

ステップＳＴ３７において、濾過回収装置１Ａに回収用液体を導入する。具体的には、ホルダ２０の導入口２０ａから回収用液体を導入し、ホルダ２０の流路２０ｃに回収用液体を保持する。

ステップＳＴ３８において、回収用液体と共に細胞を回収する。例えば、ピペット５３を用いて、ホルダ２０の流路２０ｃに保持された回収用液体と共に細胞を回収する。

このように、実施の形態５に係る濾過回収方法は、ステップＳＴ３１～ＳＴ３７を実行することによって、細胞凝集塊から剥離させた細胞を回収用液体と共に回収することができる。

［効果］
実施の形態５に係る濾過回収方法によれば、以下の効果を奏することができる。

実施の形態５に係る濾過回収方法では、細胞凝集塊から細胞を剥離し、剥離した細胞を回収用液体と共に容易に回収することができる。

このように、実施の形態５に係る濾過回収方法は、細胞凝集塊から細胞を剥離させる方法として利用することができる。このような方法においては、細胞が剥離溶液（例えば、トリプシン溶液）に接触している時間を短くすることができるため、細胞への影響を少なくすることができる。また、遠心分離などに比べて、剥離した細胞の再凝集が起こる可能性が小さく、細胞への物理的ダメージも低減することができる。

なお、実施の形態５では、ステップＳＴ３２は、ホルダ２０の導入口２０ａから剥離溶液を導入する例について説明したが、これに限定されない。ステップＳＴ３２においては、剥離溶液が保持された容器内に濾過回収装置１Ａを浸漬してもよい。

実施の形態５の濾過回収方法では、ステップＳＴ３５は必須の構成ではない。

（実施の形態６）
本発明に係る実施の形態６の濾過回収方法について説明する。

実施の形態６では、主に実施の形態１と異なる点について説明する。実施の形態６においては、実施の形態１と同一又は同等の構成については同じ符号を付して説明する。また、実施の形態６では、実施の形態１と重複する記載は省略する。

実施の形態６では、濾過回収装置に濾過対象物を含む液体を導入する前に、濾過回収装置に溶媒を導入する点が、実施の形態１と異なる。

図１８は、本発明に係る実施の形態６の濾過回収方法の一例のフローチャートである。図１８に示すように、ステップＳＴ４１において、濾過回収装置１Ａに溶媒を導入する。具体的には、ホルダ２０の排出口２０ｂを塞いだ状態で、ホルダ２０の導入口２０ａから溶媒を導入する。実施の形態６では、溶媒は、濾過対象物５１を含む液体５０と同じである。

ステップＳＴ４２において、濾過回収装置１Ａに濾過対象物５１を含む液体５０を導入することによって、濾過フィルタ１０に濾過対象物５１を捕捉する。具体的には、ホルダ２０の排出口２０ｂを開放し、ホルダ２０の導入口２０ａから濾過対象物５１を含む液体５０を導入する。

濾過対象物５１を含む液体５０は、流路２０ｃに配置された濾過フィルタ１０を通過し、排出口２０ｂから排出される。これにより、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１には、貫通孔１３よりも大きい濾過対象物５１が捕捉される。

ステップＳＴ４３において、濾過回収装置１Ａで捕捉した濾過対象物５１を洗浄する。具体的には、濾過フィルタ１０に洗浄液を導入し、濾過対象物５１を洗浄する。

ステップＳＴ４４において、濾過回収装置１Ａのホルダ２０の排出口２０ｂを塞ぐ。

ステップＳＴ４５において、濾過回収装置１Ａに回収用液体を導入する。具体的には、ホルダ２０の導入口２０ａから回収用液体を導入する。ステップＳＴ４４により、ホルダ２０の排出口２０ｂは塞がれた状態となっているため、液体５２がホルダ２０内部の流路２０ｃに保持される。

これにより、濾過対象物５１が濾過フィルタ１０から離れ、ホルダ２０内部に保持された回収用液体中を浮遊する。

ステップＳＴ４６において、濾過回収装置１Ａに保持されている回収用液体と共に濾過対象物５１を回収する。

このように、実施の形態６に係る濾過回収方法は、ステップＳＴ４１～ＳＴ４６を実行することによって、濾過対象物５１を回収用液体と共に回収することができる。

［効果］
実施の形態６に係る濾過回収方法によれば、以下の効果を奏することができる。

実施の形態６に係る濾過回収方法では、濾過対象物５１を含む液体５０を濾過回収装置１Ａに導入する前に、濾過回収装置１Ａに溶媒を導入している。

なお、実施の形態６では、ステップＳＴ４１は、ホルダ２０の排出口２０ｂを塞いだ状態で、ホルダ２０の導入口２０ａから溶媒を導入する例を説明したが、これに限定されない。例えば、ステップＳＴ４１は、溶媒を保持する容器内に、濾過回収装置１Ａを浸漬させることによって、濾過回収装置１Ａ内に溶媒を導入してもよい。

実施の形態６の濾過回収方法では、ステップＳＴ４３は必須の構成ではない。

実施例１を説明する。実施例１として、実施の形態１の濾過回収装置１Ａを用いて、細胞懸濁液の濾過及び回収を行い、回収した細胞懸濁液の評価を行った。また、比較例１－３を用いて、実施例１と同様の条件にて評価を行った。

実施例１で用いた濾過回収装置１Ａの情報について表１に示す。なお、実施例１の濾過回収装置１Ａの構成は、実施の形態１で述べているため、説明を省略する。また、表１に示す貫通孔の間隔とは、隣り合う２つの貫通孔１３を分割するフィルタ基体部１４の幅の寸法を意味する。

なお、「ホルダ２０の外径」は、第１ホルダ２１の外径に対応する。「ホルダ２０の内径」は、第２ホルダ２２の内径に対応する。「ホルダ２０の高さ」は、ホルダ２０のＺ方向の長さに対応する。「突起部２１ａの高さ」は、突起部２１ａのＺ方向の長さを意味する。

比較例１について説明する。図１９は、比較例１の濾過回収装置１０１Ａの概略構成図である。図１９に示すように、比較例１の濾過回収装置１０１Ａでは、ホルダ１２０Ａの排出口１２１ｂに濾過フィルタ１１０Ａが配置されている。比較例１では、シャーレ１６０の底面部１６１に濾過回収装置１０１Ａを配置した場合、濾過フィルタ１１０Ａのうねりによって、排出口１２１ｂを塞ぐことができない状態となる。

比較例２について説明する。図２０は、比較例２の濾過回収装置１０１Ｂの概略構成図である。図２０に示すように、比較例２の濾過回収装置１０１Ｂでは、ホルダ１２０Ｂの排出口１２２ｂよりも上方に濾過フィルタ１１０Ｂが配置されている。濾過フィルタ１１０Ｂは、ホルダ１２０Ｂの側壁の一部を形成している。比較例２では、導入口１２２ａから回収用液体５２を導入した場合、ホルダ１２０Ｂの側壁の一部を形成している濾過フィルタ１１０Ｂの部分から液体５２が漏れる。このため、ホルダ１２０Ｂ内部に液体を保持することができず、一定量の液体を回収することができない。さらに、濾過対象物である細胞が大気や濾過フィルタ１１０Ｂに触れる時間が長くなり、損傷を受ける。これにより、細胞の活性が低下する可能性がある。

比較例３について説明する。図２１は、比較例３の濾過回収装置１０１Ｃの概略構成図である。図２１に示すように、比較例３の濾過回収装置１０１Ｃでは、濾過フィルタ１１０Ｃとして樹脂フィルタを用いている。比較例３の濾過回収装置１０１Ｃでは、ホルダ１２０Ｃの排出口１２３ｂに濾過フィルタ１１０Ｃが配置されている。また、濾過フィルタ１１０Ｃは、ホルダ１２０Ｃの側壁の一部を形成している。比較例３では、導入口１２３ａから回収用液体５２を導入した場合、ホルダ１２０Ｃの側壁の一部を形成している濾過フィルタ１１０Ｃの部分から液体５２が漏れる。

なお、比較例１－２において、濾過フィルタ１１０Ａ、１１０Ｂは、実施例１の濾過フィルタ１０と同じ寸法で設計している。比較例３は、濾過フィルタ１１０Ｃとして樹脂フィルタを用いているが、フィルタの外径、厚み、貫通孔の寸法については、実施例１の濾過フィルタ１０の寸法に相当する樹脂フィルタを用いている。また、比較例１－３において、ホルダ１２０Ａ、１２０Ｂ、１２０Ｃは、突起部の高さの寸法を除き、実施例１のホルダ２０と同じ寸法で設計している。なお、比較例１及び３においては突起部を有しておらず、比較例２においては突起部の高さが４．１ｍｍである。

実施例１及び比較例１－３において、濾過回収装置１Ａ、１０１Ａ、１０１Ｂ、１０１Ｃをそれぞれ５０ｍＬの遠沈管の上部に取り付け、導入口２０ａ、１２１ａ、１２２ａ、１２３ａから細胞懸濁液を導入し、細胞懸濁液の濾過を行った。表２に実施例１及び比較例１－３で行った濾過の条件を示す。

実施例１において、濾過回収装置１Ａを用いて濾過を開始して２０秒後に、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１上に細胞懸濁液がなくなり、第１主面ＰＳ１上で捕捉された細胞により白濁していることを目視で確認した。濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１上に細胞懸濁液がなくなり、細胞が第１主面ＰＳ１上に捕捉されている状態を目視で確認した。確認後すぐに、ホルダ２０の導入口２０ａからＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）を５ｍＬ導入し、濾過フィルタ１０上に捕捉された細胞を洗浄した。同様に、比較例１－３においても、濾過フィルタ１１０Ａ、１１０Ｂ、１１０Ｃを用いて濾過をそれぞれ行い、濾過フィルタ１１０Ａ、１１０Ｂ、１１０Ｃで細胞が捕捉されている状態を目視で確認した。なお、比較例３においては、濾過フィルタ１１０Ｃに樹脂フィルタを用いているため、３０ｋＰａの圧力で吸引することにより濾過を行った。比較例１－３においても、ＰＢＳによって、濾過フィルタ１１０Ａ、１１０Ｂ、１１０Ｃに捕捉された細胞をそれぞれ洗浄した。

洗浄した後、実施例１において、濾過回収装置１Ａを外径３５ｍｍのシャーレ６０の底面部６１に配置し、回収用液体５２として５ｍＬのＰＢＳをホルダ２０の導入口２０ａから導入した。次に、細胞懸濁液の目標回収液量を３ｍＬとして、ピペット５３によってホルダ２０内部に保持された細胞懸濁液を手作業で回収した。同様に、比較例１－３においても、濾過回収装置１０１Ａ、１０１Ｂ、１０１Ｃをそれぞれシャーレ１６０の底面部１６１に配置し、ホルダ１２０Ａ、１２０Ｂ、１２０ＣのそれぞれにＰＢＳを５ｍＬ導入した。次に、細胞懸濁液の目標回収液量を３ｍＬとして、ピペット５３によって１２０Ａ、１２０Ｂ、１２０Ｃ内部に保持された細胞懸濁液をそれぞれ手作業で回収した。

実施例１及び比較例１－３で回収した細胞懸濁液について、回収した液量、回収した細胞懸濁液の細胞の数、細胞の回収率、及び細胞の生存率を評価した。

回収液量は、メスシリンダーを使用し測定した。また、トリパンブルーで染色した細胞を自動セルカウンター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製ＣｏｕｎｔｅｓｓＩＩＦＬ）を使用し、１ｍＬ中の総細胞数および生細胞数、死細胞数を計測した。

細胞懸濁液の回収率および細胞の数、細胞の回収率、細胞の生存率は、以下の計算式を用いて算出した。

（細胞懸濁液の回収率［％］）＝（回収した液量［ｍＬ］）／（目標回収液量［ｍＬ］）×１００

（細胞の数［個］）＝（自動セルカウンターの測定値［個／ｍＬ］）×（回収液量［ｍＬ］）

（細胞の回収率［％］）＝（濾過後の懸濁液中の細胞数［個］）／（濾過前の懸濁液中の細胞数［個］）×１００

（細胞の生存率［％］）＝（生細胞数［個］）／（総細胞数［個］）×１００

評価結果を表３に示す。

表３に示すように、実施例１においては、細胞の回収率が９６％、細胞の生存率が９８％であった。また、目標回収液量である３ｍＬに対して、ピペット５３を用いて回収した細胞懸濁液の液量が２．９７ｍＬであった。即ち、目標回収液量に対する細胞懸濁液の回収率は、９９％であった。

このように、実施例１においては、細胞の回収率が９６％と非常に高いことから、濾過フィルタ１０に捕捉された細胞を容易に回収できていることがわかる。また、実施例１においては、細胞の生存率が９８％であることから、細胞を傷つけずに回収できていることがわかる。更に、実施例１においては、回収した細胞懸濁液の液量が目標回収液量の９９％であり、所望の液量の細胞懸濁液を回収できていることがわかる。

比較例１においては、細胞の回収率が５２％、細胞の生存率が９６％であった。しかしながら、回収した細胞懸濁液の液量は１．５６ｍＬであり、目標回収液量に対する細胞懸濁液の回収率は５２％であった。

比較例１では、実施例１と比べて、回収した細胞懸濁液の液量が少ない。比較例１では、濾過フィルタ１１０Ａがホルダ１２０Ａの排出口１２１ｂに配置されており、又、濾過フィルタ１１０Ａ自体にうねりがあるため、シャーレ１６０の底面部１６１によって排出口１２１ｂが塞がれず、排出口１２１ｂから細胞懸濁液が漏れたものと考えられる。

比較例２においては、細胞の回収率が３０％、細胞の生存率が９０％であった。また、比較例２では、回収した細胞懸濁液の液量は０．３０ｍＬであり、目標回収液量に対する細胞懸濁液の回収率は１０％であった。

比較例２では、実施例１と比べて、細胞の回収率が低く、又、回収した細胞懸濁液の液量も少ない。比較例２では、ホルダ１２０Ｂの側壁の一部が濾過フィルタ１１０Ｂによって形成されている。このため、ホルダ１２０Ｂの内部に保持された細胞懸濁液がホルダ１２０Ｂの側面の一部を形成する濾過フィルタ１１０Ｂの部分から漏れる。これにより、回収した細胞懸濁液の液量が少なくなったと考えられる。また、ホルダ１２０Ｂ内部に液体を保持することが困難であるため、細胞が濾過フィルタ１１０Ｂから離れにくく、細胞の回収率も小さくなったと考えられる。

比較例３においては、細胞の回収率が３１％、細胞の生存率が８９％であった。また、比較例３では、回収した細胞懸濁液の液量は、０．２８ｍＬであり、目標回収液量に対する細胞懸濁液の回収率は９％であった。

比較例３では、実施例１と比べて、細胞の回収率及び細胞の生存率が低く、又、回収した細胞懸濁液の液量も少ない。比較例３では、ホルダ１２０Ｃの排出口１２３ｂに濾過フィルタ１１０Ｃが配置されている。また、濾過フィルタ１１０Ｃがホルダ１２０Ｃの側壁の一部を形成している。このため、比較例３では、ホルダ１２０Ｃ内の細胞懸濁液が、ホルダ１２０Ｃの側壁の一部を形成している濾過フィルタ１１０Ｃの部分から漏れる。このため、これにより、回収した細胞懸濁液の液量が少なくなったと考えられる。また、ホルダ１２０Ｃ内部に液体を保持することが困難であるため、細胞が濾過フィルタ１１０Ｃから離れにくく、細胞の回収率も小さくなったと考えられる。

また、比較例３では、濾過フィルタ１１０Ｃとして樹脂フィルタを用いている。このため、吸引等の外部応力を加えないと液体が濾過フィルタ１１０Ｃを通過しないため、遠沈管内を陰圧状態にしている。これにより、濾過フィルタ１１０Ｃの貫通孔の内部に細胞が入り込み、回収できなくなるため、ピペッティングが必要となる。また、回収した細胞を顕微鏡で観察した結果、細胞に変形及び損傷が確認された。陰圧状態での濾過及びピペッティングの影響により、細胞の変形又は損傷が生じ、細胞の生存率が低下したものと考えられる。

実施例２について説明する。実施例２として、実施の形態１の濾過回収装置１Ａを用いて、細胞懸濁液の濾過及び回収を行い、回収した細胞懸濁液の評価を行った。なお、実施例２では、実施例１と比べて少量の液量で実験を行うため、実施例１の濾過回収装置１Ａよりも寸法の小さい装置を用いた。

実施例２で用いた濾過回収装置１Ａの情報について表４に示す。なお、実施例２の濾過回収装置１Ａの構成は、実施の形態１で述べているため、説明を省略する。また、表４に示す貫通孔１３の間隔とは、隣り合う２つの貫通孔１３を分割するフィルタ基体部１４の幅の寸法を意味する。

実施例２において、濾過回収装置１Ａを１５ｍｌの遠沈管の上部に取り付け、導入口２０ａから細胞懸濁液を導入し、細胞懸濁液の濾過を行った。表５に実施例２で行った濾過の条件を示す。

実施例２において、濾過回収装置１Ａを用いて濾過を開始して６０秒後に、濾過フィルタ１０の第１主面ＰＳ１上に細胞懸濁液がなくなり、細胞が第１主面ＰＳ１上に捕捉されている状態を目視で確認した。確認後すぐに、ホルダ２０の導入口２０ａからＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）を５ｍＬ導入し、濾過フィルタ１０上に捕捉された細胞を洗浄した。

洗浄した後、濾過回収装置１Ａを外径３５ｍｍのシャーレ６０の底面部６１に配置し、回収用液体５２として５ｍＬのＰＢＳをホルダ２０の導入口２０ａから導入した。次に、細胞懸濁液の目標回収液量を０．５ｍＬとして、ピペット５３によってホルダ２０内部に保持された細胞懸濁液を手作業で回収した。

実施例２で回収した細胞懸濁液について、回収した液量、回収した細胞懸濁液の細胞の数、細胞の回収率、及び細胞の生存率を評価した。評価結果を表６に示す。

表６に示すように、実施例２においては、細胞の回収率が９８％、細胞の生存率が９８％であった。また、目標回収液量である０．５ｍＬに対して、ピペット５３を用いて手作業で回収した細胞懸濁液の液量が０．４８ｍＬであった。即ち、目標回収液量に対する細胞懸濁液の回収率は、９６％であった。

このように、濾過回収装置１Ａにおいては、０．５ｍＬのような少量の細胞懸濁液につても容易に回収することができる。

本発明は、添付図面を参照しながら好ましい実施形態に関連して充分に記載されているが、この技術の熟練した人々にとっては種々の変形や修正は明白である。そのような変形や修正は、添付した特許請求の範囲による本発明の範囲から外れない限りにおいて、その中に含まれると理解されるべきである。

本発明の濾過回収装置は、流体中の生物由来物質を高回収率で回収する用途に有用であり、再生医療産業や食品産業等への応用が効果的である。

１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１Ｅ 濾過回収装置
１０、１０Ａ 濾過フィルタ
１１ フィルタ部
１２ 枠部
１３ 貫通孔
１４ フィルタ基体部
２０ ホルダ
２０ａ 導入口
２０ｂ 排出口
２０ｃ 流路
２１ 第１ホルダ
２１ａ、２１ｂ 突起部
２１ａａ 第１本体部
２１ａｂ 上面
２２ 第２ホルダ
２２ａ フランジ
２２ｂ 取っ手
２２ａａ 第２本体部
２３ 液量指示部
２３ａ 溝
２４ 穴
３０ シャーレ
３１ 底面部
３２ 側壁部
４０ 遠沈管
５０ 液体
５１ 濾過対象物
５２ 回収用液体
５３ ピペット
６０ シャーレ
６１ 底面部
１０１Ａ、１０１Ｂ、１０１Ｃ 濾過回収装置
１１０Ａ、１１０Ｂ、１１０Ｃ 濾過フィルタ
１２０Ａ、１２０Ｂ、１２０Ｃ ホルダ
１２１ａ、１２２ａ、１２３ａ 導入口
１２１ｂ、１２２ｂ、１２３ｂ 排出口
１６０ シャーレ
１６１ 底面部

Claims (7)

1. 複数の貫通孔を有する濾過フィルタと、
   液体を導入する導入口、前記液体を排出する排出口、及び前記導入口と前記排出口とを連通する流路を有するホルダと、
   を備え、
   前記ホルダの内壁には、前記ホルダの内側に向かって突設する突起部が形成されており、
   前記ホルダは、
   前記突起部を有する筒状の第１ホルダと、
   前記第１ホルダに嵌め込まれる筒状の第２ホルダと、
   を有し、
   前記第１ホルダは、前記ホルダの前記導入口側に位置する第１端部および前記ホルダの前記排出口側に位置する第２端部を有する筒状の第１本体部を備え、
   前記第２ホルダは、前記ホルダの前記導入口側に位置する第３端部および前記ホルダの前記排出口側に位置する第４端部を有する筒状の第２本体部を備え、
   前記濾過フィルタは、前記複数の貫通孔を有するフィルタ部と、前記フィルタ部の外周を囲むように配置された枠部と、を備え、
   前記突起部は、前記第１本体部の前記第２端部に設けられており、
   前記第１本体部の内壁と前記第２本体部の外壁とが面接触し、
   前記濾過フィルタの前記枠部は、前記第２本体部の前記第４端部と、前記突起部の上面とで挟持され、
   前記濾過フィルタは、前記ホルダの前記導入口と前記排出口との間の前記流路に配置され、
   前記第２ホルダは、前記第２本体部の前記第３端部において、前記第２本体部の外壁から前記第２ホルダの外側に向かって延びるフランジを有し、
   前記フランジは、前記第１本体部の前記第１端部と接触する、濾過回収装置。
2. 前記濾過フィルタの前記枠部は、前記フィルタ部から前記枠部に向かう方向に連続して延びた状態で、前記第１ホルダの前記突起部と前記第２ホルダの前記第４端部とによって厚み方向に挟持される、請求項１に記載の濾過回収装置。
3. 前記ホルダの内壁には、前記排出口が塞がれた状態で前記ホルダ内部に保持される液体の液量を示す液量指示部が設けられている、請求項１又は２に記載の濾過回収装置。
4. 前記排出口が設けられている前記ホルダの一端は、フラット面に対して接触するように構成された、請求項１～３のいずれか一項に記載の濾過回収装置。
5. 前記濾過フィルタは、金属及び金属酸化物のうち少なくともいずれかを主成分とする、
   請求項１～４のいずれか一項に記載の濾過回収装置。
6. 更に、
   底面部、及び前記底面部の外縁に沿って形成されると共に前記底面部から上方に向かって延びる側壁部を有し、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端に着脱可能に取り付けられるシャーレを備え、
   前記シャーレの前記底面部は、前記排出口が設けられている前記ホルダの一端に配置され、
   前記シャーレの前記側壁部は、前記ホルダの外壁を囲っている、
   請求項１～５のいずれか一項に記載の濾過回収装置。
7. 前記シャーレの前記側壁部の内側壁は、前記ホルダの外壁に面接触している、請求項６に記載の濾過回収装置。

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