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JP6919091B2 - Ｇタンパク質共役受容体を標的化するキメラ抗原受容体およびその使用 - Google Patents

Ｇタンパク質共役受容体を標的化するキメラ抗原受容体およびその使用 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１４年１２月５日に出願された、米国仮特許出願第６２／０８８，２８６号の優先権を主張し、その内容全体が参照によって本明細書中に組み込まれ、それに対する優先権が主張される。
導入
本開示の主題は、がんを処置するための方法および組成物を提供する。本開示の主題は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ））を特異的に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、このようなＣＡＲを含む免疫応答性細胞、およびこのような細胞を、がん（例えば、多発性骨髄腫）を処置するために使用する方法に関する。
発明の背景
細胞ベースの免疫療法は、がんの処置に対する治癒潜在力を伴う治療である。抗原に対する人工的受容体または合成受容体であって、選択された抗原に特異的な、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と称する受容体をコードする遺伝子材料の導入を介して、腫瘍抗原を標的とするように、Ｔ細胞および他の免疫細胞を改変することができる。ＣＡＲを使用する、標的化Ｔ細胞療法は近年、血液悪性腫瘍の処置において、臨床的成功を示している。
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、２番目に一般的な血液学的悪性腫瘍である９。患者のうちのおよそ２５％は、２年未満の（ｌｅｓｓ ｔｈｅｎ）生存期間の中央値の前兆となる、高危険性の細胞遺伝学的特徴を有する１０、１１。細胞遺伝学的特徴に関わらず、近年大きな前進がなされているが、同種移植による、免疫療法的な移植片対骨髄腫（ＧｖＭ）効果以外では、疾患は、依然として難治性であると考えられている。しかし、同種移植は、不適格性ならびに移植関連の罹患率および死亡率の高比率により制約されている１２。ＧｖＭ効果と同様に、自家養子Ｔ細胞治療を介して、毒性を最小限として、潜在的に治癒的なＴ細胞効果を達成することができる。
骨髄腫は、養子Ｔ細胞療法を試験するのに理想的な疾患でありうる。第一に、上記で指し示した通り、同種移植は、非骨髄破壊的移植または移植後ドナーリンパ球注入の後など、併用化学療法が最小限であるか、またはこれを伴わない場合であってもなお、Ｔ細胞が、治癒的処置でありうることを裏付ける。第二に、前処置化学療法は、おそらく、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の枯渇機構を介して、養子Ｔ細胞療法の有効性を増強し５、１３、自家移植直後の期間は、それ自体、Ｔ細胞を投与するのに最適の時期である可能性があり、骨髄腫は、自家幹細胞移植が標準治療である、少数の疾患のうちの１つである。第三に、免疫調節薬であるレナリドマイドは、マウスにおいて示されている通り、ＣＡＲベースの治療を改善する可能性があり１４、レナリドマイドは一般に、ＭＭを処置するのに使用されている。第四に、養子Ｔ細胞療法は、充実性腫瘍または髄外ＣＬＬと比較して５、ＡＬＬなど、骨髄を主とする疾患において、最もよく働き７、８、ＡＬＬと同様に、骨髄腫は、骨髄の疾患である。
養子Ｔ細胞療法が、ＭＭにおいて十分に働きうると期待する多様な理由が存在するが、養子Ｔ細胞療法を、骨髄腫に拡張することはまた、固有の課題も提起する。他のＢ細胞性悪性腫瘍と異なり、ＣＤ１９発現は、骨髄腫患者のうちの２％だけにおいて見られる１５。さらに、ＣＤ１９と異なり、骨髄腫における、一般的な細胞外免疫表現型マーカー（ＣＤ１３８、ＣＤ３８、およびＣＤ５６）は全て、他の主要な細胞型上でも共発現し、これらの標的のうちのいずれかに対するＣＡＲであれば、許容不可能な「オフ腫瘍、オンターゲット」毒性７であって、ＨＥＲ２標的化ＣＡＲについての場合１６と同様、抗体が十分に忍容される標的内であってもなお、致死性でありうる毒性をもたらすことが予測される。これらの課題に取り組むために、本発明者らは、ＭＭ中で高発現し、主要な正常組織での発現が限定的であると予測される細胞外標的であって、ＭＭの養子Ｔ細胞療法に最適の標的でありうる細胞外標的を同定した。したがって、多発性骨髄腫を処置するために、ＭＭ細胞における発現が高度であり、正常組織における発現が限定されている抗原を標的とするＣＡＲをデザインする、新規の治療戦略であって、毒性および免疫原性を最小限としながら、強力な腫瘍の根絶を誘導することが可能な戦略が必要とされている。
本開示の主題は一般に、Ｇタンパク質共役受容体を特異的に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、このようなＣＡＲを含む免疫応答性細胞、ならびにこれらのＣＡＲおよび免疫応答性細胞の、多発性骨髄腫を処置するための使用を提供する。
本開示の主題は、ＣＡＲを提供する。非限定的な一例では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、細胞外抗原結合ドメインは、Ｇタンパク質共役受容体に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ｇタンパク質共役受容体は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）である。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄに、約１×１０−９Ｍ〜約３×１０−６Ｍの結合親和性（ＫＤ）で、特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、マウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、任意選択で架橋されるＦａｂである。ある特定の実施形態では、細胞外結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）２である。ある特定の実施形態では、前出の分子のうちのいずれかは、異種配列との融合タンパク質内に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成し得る。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域、および
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域
を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｎ）配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｏ）配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｐ）配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｑ）配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｒ）配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｓ）配列番号７３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｔ）配列番号７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｕ）配列番号８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）配列番号８５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｗ）配列番号８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）配列番号９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｙ）配列番号３０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｚ）配列番号３１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａａ）配列番号３２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｂ）配列番号３３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｃ）配列番号３５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｄ）配列番号３６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｅ）配列番号３７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３７５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｆ）配列番号３８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、前記重鎖および軽鎖の両方を含み、任意選択で、リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。例えば、ある特定の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
（ｂ）配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９、ならびにその保存的改変からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２、ならびにその保存的改変からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８、ならびにその保存的改変からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１、ならびにその保存的改変からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４９記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。さらに別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３５またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４６またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７１またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２００に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。さらに別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１３５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１４７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１４８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１５９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１６８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１７１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１７５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１８０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１８３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１９２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１９５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１９９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２００に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２３５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２４７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２５９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３６８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３７９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３８０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３８８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３９１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３９２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。さらに別の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ヒトｓｃＦｖは、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチド、ならびにＨｉｓタグおよびＨＡタグを含む。ある特定の実施形態では、ＨｉｓタグおよびＨＡタグのアミノ酸配列は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
配列番号２７５をコードするヌクレオチド配列は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号２７６である。
ある特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１〜２７を含む、Ｎ末端領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９３を含む、ＥＣＬ１領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７を含む、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９を含む、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１６〜２３を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２３７を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域に結合する。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つまたは２つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
本開示の主題に従い、細胞外抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインに、共有結合によって結合される。細胞外抗原結合ドメインは、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合によって結合されたシグナルペプチドを含みうる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。
本開示の主題に従い、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのシグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、シグナル伝達領域は、共刺激シグナル伝達領域である。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、４−１ＢＢポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含み、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲを、組換えにより発現させる。ＣＡＲは、ベクターから発現させることができる。ある特定の実施形態では、ベクターは、γ−レトロウイルスベクター（γ−ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｒｅｃｔｏｒ）である。
本開示の主題はまた、上記で記載されたＣＡＲを含む単離された免疫応答性細胞も提供する。ある特定の実施形態では、単離された免疫応答性細胞は、ＣＡＲを形質導入されている、例えば、ＣＡＲを、免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現させる。ある特定の実施形態では、単離された免疫応答性細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドを発現させるように、少なくとも１つの共刺激リガンドをさらに形質導入されている。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドは、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびこれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、単離された免疫応答性細胞は、少なくとも１つのサイトカインを分泌するように、少なくとも１つのサイトカインをさらに形質導入されている。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、単離された免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系始源細胞、Ｔ細胞前駆細胞、および多能性幹細胞であってそれからリンパ系細胞が分化しうる多能性幹細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。
本開示の主題は、本開示のＣＡＲをコードする核酸分子、核酸分子を含むベクター、およびこのような核酸分子を発現する宿主細胞をさらに提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号３９７に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号３９８に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号３９９に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４００に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０１に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０２に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０３に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０６に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０７に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号４０８に記載の配列を有する核酸を含む。ある特定の実施形態では、ベクターは、γ−レトロウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞である。
さらに、本開示の主題は、上記で記載された免疫応答性細胞を、被験体における腫瘍負荷を軽減するために使用する方法を提供する。例えば、本開示の主題は、被験体における腫瘍負荷を軽減する（ｔｒｅａｔｉｎｇ ｒｅｄｕｃｉｎｇ）方法であって、有効量の、本開示の免疫応答性細胞を、被験体に投与し、これにより、被験体における腫瘍細胞死を誘導するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、腫瘍細胞の数（ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ）を低減させる。別の実施形態では、方法は、腫瘍サイズを低減させる。さらに別の実施形態では、方法は、被験体における腫瘍を根絶する。ある特定の実施形態では、被験体は、ヒトである。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、腫瘍は、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である。ある特定の実施形態では、腫瘍は、多発性骨髄腫である。
さらに、本開示の主題は、上記で記載された免疫応答性細胞を、新形成を有する被験体の生存を延長または延伸させるために使用する方法を提供する。例えば、本開示の主題は、新形成を有する被験体の生存を延長または延伸させる方法であって、有効量の、本開示の免疫応答性細胞を、被験体に投与し、これにより、被験体の生存を延長または延伸させるステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、方法は、被験体における腫瘍負荷を軽減または根絶する。
本開示の主題はまた、Ｇタンパク質共役受容体に結合する、免疫応答性細胞を作製するための方法も提供する。非限定的な一例では、方法は、免疫応答性細胞に、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、細胞外抗原結合ドメインが、Ｇタンパク質共役受容体に特異的に結合する、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を導入するステップを含む。ある特定の実施形態では、Ｇタンパク質共役受容体は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）である。非限定的な具体的実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
本開示の主題は、有効量の、本開示の免疫応答性細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、新形成を処置するための医薬組成物である。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫である。
本開示の主題は、新形成を処置するためのキットであって、本開示の免疫応答性細胞を含むキットをさらに提供する。ある特定の実施形態では、キットは、新形成を処置するための、免疫応答性細胞の使用についての指示書をさらに含む。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である。ある特定の実施形態では、新形成は、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、前記細胞外抗原結合ドメインが、Ｇタンパク質共役受容体に特異的に結合する、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
（項目２）
前記Ｇタンパク質共役受容体が、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）である、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３）
前記ＣＡＲの前記細胞外抗原結合ドメインが、ＧＰＲＣ５Ｄに、約１×１０ −９ Ｍ〜約３×１０ −６ Ｍの結合アフィニティー（Ｋ ｄ ）で結合する、項目２に記載のＣＡＲ。
（項目４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、マウスｓｃＦｖである、項目４に記載のＣＡＲ。
（項目６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、ヒトｓｃＦｖである、項目４に記載のＣＡＲ。
（項目７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、任意選択で架橋されるＦａｂである、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目８）
前記細胞外抗原結合ドメインがＦ（ａｂ） ２ である、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目９）
前記ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ） ２ のうちの１つまたは複数が、異種配列との融合タンパク質内に含まれて、前記細胞外抗原結合ドメインを形成する、項目２から８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目１から９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１から１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１２に記載のＣＡＲ。
（項目１４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１２に記載のＣＡＲ。
（項目１５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１２に記載のＣＡＲ。
（項目１６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１２に記載のＣＡＲ。
（項目１７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む、項目１２に記載のＣＡＲ。
（項目１８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１から１７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域を含む、項目１から１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目２０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目２１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２０に記載のＣＡＲ。
（項目２２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２０に記載のＣＡＲ。
（項目２３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２０に記載のＣＡＲ。
（項目２４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２０に記載のＣＡＲ。
（項目２５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２０に記載のＣＡＲ。
（項目２６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１から２５のいずれか一項に記載のＣＡＲのＣＡＲ。
（項目２７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１から２６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目２８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１から２７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目２９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｎ）配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｏ）配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｐ）配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｑ）配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｒ）配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｓ）配列番号７３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｔ）配列番号７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｕ）配列番号８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）配列番号８５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｗ）配列番号８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）配列番号９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｙ）配列番号３０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ｚ）配列番号３１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａａ）配列番号３２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｂ）配列番号３３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｃ）配列番号３５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｄ）配列番号３６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｅ）配列番号３７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３７５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域；
（ａｆ）配列番号３８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および
配列番号３８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域
を含む、項目２８に記載のＣＡＲ。
（項目３０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２９に記載のＣＡＲ。
（項目３１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２９に記載のＣＡＲ。
（項目３２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２９に記載のＣＡＲ。
（項目３３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２９に記載のＣＡＲ。
（項目３４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域；および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目２９に記載のＣＡＲ。
（項目３５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、該細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間にリンカーを含む、項目１から３４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目３６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
（ｂ）配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１から３５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目３７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに
（ｂ）配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２
を含む、項目３６に記載のＣＡＲ。
（項目３８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；ならびに
（ｂ）配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１
を含む、項目３６または３７に記載のＣＡＲ。
（項目３９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１から３８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目４０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１から３９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目４１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４０に記載のＣＡＲ。
（項目４２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４０に記載のＣＡＲ。
（項目４３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４０に記載のＣＡＲ。
（項目４４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４０に記載のＣＡＲ。
（項目４５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４０に記載のＣＡＲ。
（項目４６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１３５またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４６またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７１またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１９５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２００に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１から４５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目４７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４６に記載のＣＡＲ。
（項目４８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４６に記載のＣＡＲ。
（項目４９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４６に記載のＣＡＲ。
（項目５０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４６に記載のＣＡＲ。
（項目５１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目４６に記載のＣＡＲ。
（項目５２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号１２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１３５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１３６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１４７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１４８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１５９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１６０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号１６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１６８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１７１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号１７２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１７５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号１７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１７９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１８０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１８３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号１８４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１８８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号１９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１９２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号１９５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号１９６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号１９７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号１９９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２００に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｐ）配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｒ）配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号２３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２３５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号２３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２４７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２４８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号２５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｗ）配列番号２５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２５９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｙ）配列番号３０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号３２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３３２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｂ）配列番号３４０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３４３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３４４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｃ）配列番号３５２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３５５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３５６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｄ）配列番号３６４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３６７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３６８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ａｅ）配列番号３７６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３７９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３８０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ａｆ）配列番号３８８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号３９１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号３９２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号３９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
を含む、項目１から５１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、該細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合によって結合されたシグナルペプチドを含む、項目１から５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５９）
前記ＧＰＲＣ５Ｄが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、項目２から５８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１〜２７を含む、Ｎ末端領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９３を含む、ＥＣＬ１領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７を含む、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９を含む、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのエピトープ領域に結合する、項目５９に記載のＣＡＲ。
（項目６１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１６〜２３を含むエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目６２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域に結合する、項目６１に記載のＣＡＲ。
（項目６３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域に結合する、項目６１に記載のＣＡＲ。
（項目６４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目６５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域に結合する、項目６４に記載のＣＡＲ。
（項目６６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目６７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目６８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域に結合する、項目６７に記載のＣＡＲ。
（項目６９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目７０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、項目６９に記載のＣＡＲ。
（項目７１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域に結合する、項目６９に記載のＣＡＲ。
（項目７２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、項目６９に記載のＣＡＲ。
（項目７３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目７４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目７３に記載のＣＡＲ。
（項目７５）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ３を含む、項目７３または項目７４に記載のＣＡＲ。
（項目７６）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目７７）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目７６に記載のＣＡＲ。
（項目７８）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ３を含む、項目７６または項目７７に記載のＣＡＲ。
（項目７９）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、または２つのエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目８０）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目７９に記載のＣＡＲ。
（項目８１）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ３を含む、項目７９または項目８０に記載のＣＡＲ。
（項目８２）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する、項目６０に記載のＣＡＲ。
（項目８３）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、項目８２に記載のＣＡＲ。
（項目８４）
前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｈ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ Ｌ ＣＤＲ３を含む、項目８２または項目８３に記載のＣＡＲ。
（項目８５）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含む、項目１から８４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目８６）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含む、項目８５に記載のＣＡＲ。
（項目８７）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、項目８５に記載のＣＡＲ。
（項目８８）
前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、項目１から８７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目８９）
前記細胞内ドメインが、少なくとも１つのシグナル伝達領域をさらに含む、項目１から８８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９０）
前記少なくとも１つのシグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含む、項目８９に記載のＣＡＲ。
（項目９１）
前記シグナル伝達領域が、共刺激シグナル伝達領域である、項目８９または項目９０に記載のＣＡＲ。
（項目９２）
前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含む、項目９１に記載のＣＡＲ。
（項目９３）
前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、項目９２に記載のＣＡＲ。
（項目９４）
前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、４−１ＢＢポリペプチドを含む、項目９２に記載のＣＡＲ。
（項目９５）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、項目８９から９３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９６）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記シグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢポリペプチドを含む、項目８９から９２および９４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９７）
組換えにより発現させた、項目１から９６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９８）
ベクターから発現させた、項目１から９７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９９）
前記ベクターが、γ−レトロウイルスベクターである、項目９８に記載のＣＡＲ。
（項目１００）
前記項目のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む単離された免疫応答性細胞。
（項目１０１）
前記ＣＡＲを形質導入された、項目１００に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０２）
前記ＣＡＲを、前記免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現させる、項目１００または１０１に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０３）
少なくとも１つの共刺激リガンドを発現させるように、該少なくとも１つの共刺激リガンドがさらに形質導入された、項目１００から１０２のいずれか一項に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０４）
前記少なくとも１つの共刺激リガンドが、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目１０３に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０５）
少なくとも１つのサイトカインを分泌するように、該少なくとも１つのサイトカインがさらに形質導入された、項目１００から１０４のいずれか一項に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０６）
前記少なくとも１つのサイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目１０５に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０７）
Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系始源細胞、Ｔ細胞前駆細胞、および多能性幹細胞であってそれからリンパ系細胞が分化しうる多能性幹細胞からなる群から選択される、項目１００から１０６のいずれか一項に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０８）
Ｔ細胞である、項目１０７に記載の単離された免疫応答性細胞。
（項目１０９）
項目１から９９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子。
（項目１１０）
配列番号３９７に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１１）
配列番号３９８に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１２）
配列番号３９９に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１３）
配列番号４００に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１４）
配列番号４０１に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１５）
配列番号４０２に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１６）
配列番号４０３に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１７）
配列番号４０６に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１８）
配列番号４０７に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１１９）
配列番号４０８に記載の配列を有する核酸を含む、項目１０９に記載の単離された核酸分子。
（項目１２０）
項目１０９から１１９のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
（項目１２１）
前記ベクターが、γ−レトロウイルスベクターである、項目１２０に記載のベクター。
（項目１２２）
項目１０９から１１９のいずれか一項に記載の核酸分子を発現する宿主細胞。
（項目１２３）
Ｔ細胞である、項目１２２に記載の宿主細胞。
（項目１２４）
被験体における腫瘍負荷を軽減する方法であって、有効量の、項目１００から１０８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞を該被験体に投与し、これにより、該被験体における腫瘍細胞死を誘導するステップを含む方法。
（項目１２５）
腫瘍細胞の数を低減させる、項目１２４に記載の方法。
（項目１２６）
腫瘍サイズを低減させる、項目１２４に記載の方法。
（項目１２７）
前記被験体における前記腫瘍を根絶する、項目１２４に記載の方法。
（項目１２８）
前記腫瘍が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、項目１２４から１２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２９）
前記腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目１２８に記載の方法。
（項目１３０）
前記被験体が、ヒトである、項目１２４から１２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３１）
前記免疫応答性細胞が、Ｔ細胞である、項目１２４から１３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３２）
新形成を有する被験体の生存を延長または延伸させる方法であって、有効量の、項目１００から１０８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞を、該被験体に投与し、これにより、該被験体の生存を延長または延伸させるステップを含む方法。
（項目１３３）
前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、項目１３２に記載の方法。
（項目１３４）
前記新形成が、多発性骨髄腫である、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
前記方法が、前記被験体における腫瘍負荷を軽減または根絶する、項目１３２から１３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３６）
Ｇタンパク質共役受容体に結合する、免疫応答性細胞を生成するための方法であって、
該免疫応答性細胞に、
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、該細胞外抗原結合ドメインが、Ｇタンパク質共役受容体に特異的に結合する、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列
を導入するステップを含む方法。
（項目１３７）
前記Ｇタンパク質共役受容体が、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）である、項目１３６に記載の方法。
（項目１３８）
有効量の、項目１００から１０８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目１３９）
新形成を処置するためのものである、項目１３８に記載の医薬組成物。
（項目１４０）
前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、項目１３９に記載の医薬組成物。
（項目１４１）
前記新形成が、多発性骨髄腫である、項目１４０に記載の医薬組成物。
（項目１４２）
多発性骨髄腫を処置するためのキットであって、項目１００から１０８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞を含むキット。
（項目１４３）
新形成を有する被験体を処置するための、前記免疫応答性細胞の使用についての指示書をさらに含む、項目１４２に記載のキット。
（項目１４４）
前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、項目１４２または１４３に記載のキット。
（項目１４５）
前記新形成が、多発性骨髄腫である、項目１４４に記載のキット。
以下の詳細な説明は、例として示しているが、本発明を記載される特定の実施形態に限定する意図はなく、添付の図面と併せて理解され得る。
図１は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧタンパク質共役受容体を標的とするキメラ抗原受容体を示す。
図２は、正常な組織およびヒトがん細胞株におけるヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現を示す。
図３は、ヒトＴ細胞上での本開示のＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲの発現を示す。
図４は、ＧＰＲＣ５Ｄを過剰発現する３Ｔ３細胞について本開示のＧＰＲＣ５Ｄの殺滅活性を示す。
図５は、ヒトの多発性骨髄腫細胞株について本開示のＧＰＲＣ５Ｄの殺滅活性を示す。
図６は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄを標的とするキメラ抗原受容体を示す。
図７は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲをコードする核酸分子を示す。
図８は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲをコードする核酸分子を示す。
図９は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲをコードする核酸分子を示す。
図１０は、ヒト多発性骨髄腫細胞株のＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害性を示す。
図１１は、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌の誘導を示す。
図１２は、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示す。
図１３Ａおよび図１３Ｂは、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の殺滅活性を示す。（Ａ）は、０時点でのＧＦＰ＋腫瘍株のパーセントを示す。（Ｂ）は、３６時間の時点でのＧＦＰ＋腫瘍株の殺滅パーセントを示す。 図１３Ａおよび図１３Ｂは、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の殺滅活性を示す。（Ａ）は、０時点でのＧＦＰ＋腫瘍株のパーセントを示す。（Ｂ）は、３６時間の時点でのＧＦＰ＋腫瘍株の殺滅パーセントを示す。
図１４は、ＣＬＩＰＳ技術を図示する。ＣＬＩＰＳ反応は、ＣＬＩＰＳスキャフォールドのブロモ基と、システインのチオール側鎖との間で生じる。この反応は速く、温和な条件下で特異的である。この洗練された化学反応を使用して、天然のタンパク質配列を、ある範囲の構造を有するＣＬＩＰＳ構築物に形質転換する。左から右に以下である：２つの異なる単一Ｔ２ループ、Ｔ３二重ループ、コンジュゲートされたＴ２＋Ｔ３ループ、安定化されたベータシート、および安定化されたアルファらせん（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００７年；２０巻：２８３〜２９頁）。
図１５は、コンビナトリアルクリップスライブラリースクリーニングを図示する。不連続の高次構造エピトープを含有する標的タンパク質（左）を、マトリクスライブラリー（中央）に変換する。コンビナトリアルペプチドを、独自のミニカード上で合成し、空間的に規定されたＣＬＩＰＳ構築物（右）に化学的に変換する。
図１６は、Ｔ３ループになったＣＬＩＰＳＴＭ構築物を示す。
図１７Ａ〜図１７Ｄは、ヒートマップ技術を図示する。（Ａ）「ループ１」および「ループ２」として示される２つの小配列を有する、組み合わせたペプチドの表。（Ｂ）マトリクスとして示されたＡ由来のデータ。（Ｃ）ヒートマップ描写についてのカラーバーでの提示。（Ｄ）Ａ由来のデータのヒートマップ可視化。
図１８は、ＥＴ１５０−２に関して記録された強度プロファイルを示す。単一のペプチドについてシグナルが記録される高さに対するそのペプチドの出発残基から終わりの残基まで線が引かれている。
図１９は、高ストリンジェンシー条件下でＥＴ１５０−５について記録されたデータのヒートマップ解析を示す。
図２０は、ＥＴ１５０−１８について記録された強度プロファイルを示す。
図２１は、ＥＴ１５０−８について記録された強度プロファイルを示す。
図２２は、７回膜貫通らせん（ＴＭ）および３つの細胞外領域（ＥＣＬ）を含有するＧＰＣＲの模式図を示す。色つきの矢印によって、各々の抗体についての結合部位を示す。
図２３は、各々の試料について記録した全てのデータの散布図（ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔ）解析を示す。統計学的データ分布は対角線上にある。
図２４は、抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体のＦＡＣＳ解析を示す。
図２５は、抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体のＦＡＣＳ解析を示す。
図２６は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲをコードする核酸分子を示す。
図２７は、本開示の主題の１つの非限定的な実施形態に従うＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲをコードする核酸分子を示す。
発明の詳細な説明
本開示の主題は一般に、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ））を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。非限定的な一例では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、細胞外抗原結合ドメインは、Ｇタンパク質共役受容体に特異的に結合する。本開示の主題はまた、Ｇタンパク質共役受容体を標的とするＣＡＲを発現する免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系始源細胞、Ｔ細胞前駆細胞、および多能性幹細胞であってそれからリンパ系細胞が分化しうる多能性幹細胞）、およびこのような免疫応答性細胞を、がん、例えば、多発性骨髄腫を処置するために使用する方法も提供する。
Ｉ．定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味を有する。以下の参考文献：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２版、１９９４年）； Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ編、１９８８年）； Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、５版、Ｒ． Ｒｉｅｇｅｒら（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１年）；ならびにＨａｌｅおよびＭａｒｈａｍ、Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１年）は、当業者に、本発明で使用される用語の多くについての、一般的な定義を与える。本明細書で使用される以下の用語は、そうでないことが指定されない限りにおいて、下記でそれらの帰せられる意味を有する。
本明細書で使用される「約」または「およそ」という用語は、当業者により決定される、特定の値についての、許容可能な誤差範囲内であって、部分的に、値がどのようにして測定または決定されるのか、すなわち、測定系の限界に依存する誤差範囲内を意味する。例えば、「約」は、当技術分野における慣行に従い、３もしくは３超の標準偏差内を意味し得る。代替的に、「約」は、所与の値の、最大で２０％、好ましくは、最大で１０％、より好ましくは、最大で５％の範囲を意味することも可能であり、より好ましくは、さらに最大で１％の範囲も意味し得る。代替的に、特に、生物学的系または生物学的過程に関して、用語は、値の１桁以内、好ましくは、５倍以内を意味することも可能であり、より好ましくは、２倍以内も意味し得る。
本明細書で使用される「細胞集団」という用語は、同様であるかまたは異なる表現型を発現する少なくとも２つの細胞の群を指す。非限定的な例では、細胞集団は、同様であるかまたは異なる表現型を発現する、少なくとも約１０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００個の細胞を含みうる。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、完全抗体分子だけでなく、また、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味する。当技術分野ではまた、このような断片も周知であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても、日常的に用いられている。したがって、本明細書で使用される「抗体」という用語は、完全免疫グロブリン分子だけでなく、また、周知の活性の断片である、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂも意味する。完全抗体からＦｅ断片を欠くＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片は、循環からより急速に消失し、非特異的組織結合が、完全抗体より少ない可能性がある（Ｗａｈｌら、Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．、２４巻：３１６〜３２５頁（１９８３年）。本発明の抗体は、天然の全抗体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、および非従来型抗体を含む。
本明細書で使用される「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するように、共有結合によって連結された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）は、直接結合されるか、またはペプチドをコードするリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５アミノ酸）であって、ＶＨのＮ末端を、ＶＬのＣ末端と接続するか、またはＶＨのＣ末端を、ＶＬのＮ末端と接続するリンカーにより結合される。リンカーは通例、可撓性のためにグリシンに富むほか、可溶性のためにセリンまたはトレオニンにも富む。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを連結し得る。リンカーの非限定的な例は、それらの内容が参照によりそれらの全体において本明細書によって組み込まれる、Ｓｈｅｎら、Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．、８０巻（６号）：１９１０〜１９１７頁（２００８年）およびＷＯ２０１４／０８７０１０において開示されている。ある特定の実施形態では、リンカーは、Ｇ４Ｓリンカーである。
非限定的な例では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号８９７に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、配列番号２８４のアミノ酸配列をコードする核酸配列を、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号２８５に示す。
別の非限定的な例では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、配列番号９８のアミノ酸配列をコードする核酸配列を、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号９９に示す。
定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８５巻：５８７９〜５８８３頁、１９８８年）により記載されている通り、ＶＨコード配列およびＶＬコード配列を含む核酸から発現させることができる。また、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、および同第４，９５６，７７８号；ならびに米国特許出願公開第２００５０１９６７５４号および同第２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有する、アンタゴニスト性ｓｃＦｖについては、記載されている（例えば、Ｚｈａｏら、Ｈｙｒｂｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）、２００８年、２７巻（６号）：４５５〜５１頁；Ｐｅｔｅｒら、Ｊ Ｃａｃｈｅｘｉａ Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ Ｍｕｓｃｌｅ、２０１２年８月１２日；Ｓｈｉｅｈら、Ｊ Ｉｍｕｎｏｌ、２００９年、１８３巻（４号）：２２７７〜８５頁；Ｇｉｏｍａｒｅｌｌｉら、Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ、２００７年、９７巻（６号）：９５５〜６３頁；Ｆｉｆｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｓｔ、２００６年、１１６巻（８号）：２２５２〜６１頁；Ｂｒｏｃｋｓら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９７年、３巻（３号）：１７３〜８４頁；Ｍｏｏｓｍａｙｅｒら、Ｔｈｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９５年、２巻（１０号）：３１〜４０頁を参照されたい）。刺激活性を有する、アゴニスト性ｓｃＦｖについては、記載されている（例えば、Ｐｅｔｅｒら、Ｊ Ｂｉｏｉ Ｃｈｅｒｎ、２００３年、２５２７８巻（３８号）：３６７４０〜７頁；Ｘｉｅら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１９９７年、１５巻（８号）：７６８〜７１頁；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９７年、１７巻（５〜６号）：４２７〜５５頁；Ｈｏら、ＢｉｏＣｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、２００３年、１６３８巻（３号）：２５７〜６６頁を参照されたい）。
本明細書で使用される「Ｆ（ａｂ）」は、抗体構造の断片であって、抗原に結合するが、一価であり、Ｆｃ部分を有さない断片を指し、例えば、酵素であるパパインにより消化された抗体は、２つのＦ（ａｂ）断片およびＦｃ断片（例えば、重（Ｈ）鎖定常領域；抗原に結合しないＦｃ領域）をもたらす。
本明細書で使用される「Ｆ（ａｂ’）２」は、全ＩｇＧ抗体のペプシン消化により生成する抗体断片を指し、この断片は、２つの抗原結合Ｆ（ａｂ’）（二価）領域を有し、各Ｆ（ａｂ’）領域は、抗原への結合のためのＳ−Ｓ結合により連結されたＨ鎖の一部および軽（Ｌ）鎖である、２つの個別のアミノ酸鎖を含み、残りのＨ鎖部分は、一緒に連結される。「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、２つの個々のＦａｂ’断片に分割することができる。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、ウイルス、ビリオンなど、任意の遺伝子エレメントであって、適正な制御エレメントと会合すると、複製が可能であり、遺伝子配列を、細胞に移し得る遺伝子エレメントを指す。こうして、用語は、クローニングビヒクルおよび発現ビヒクルのほか、ウイルスベクターおよびプラスミドベクターも含む。
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、組換え核酸配列、すなわち、所望のコード配列と、特定の宿主生物における、作動可能に連結されたコード配列の発現に必要である、適切な核酸配列とを含有する組換えＤＮＡ分子を指す。原核生物における発現に必要な核酸配列は通例、しばしば、他の配列と共に、プロモーター、オペレーター（任意選択）、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー、ならびに終結シグナルおよびポリアデニル化シグナルを活用することが公知である。
本明細書で使用される「ＣＤＲ」は、抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列であって、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域であるアミノ酸配列と規定される。例えば、ＫａｂａｔらのＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、４版、Ｕ． Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７年）を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域内に、３つの重鎖ＣＤＲもしくは重鎖ＣＤＲ領域および３つの軽鎖ＣＤＲもしくは軽鎖ＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗体の、抗原またはエピトープへの結合のための接触残基の大部分をもたらす。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域について、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号）を使用して詳述する。
本明細書で使用される「アフィニティー」という用語は、結合強度の尺度を意味する。理論に束縛されずに述べると、アフィニティーは、抗体の結合部位と抗原決定基との間の立体化学的適合の緊密さ、それらの間の接触面積の大きさ、ならびに帯電基および疎水性基の分布に依存する。アフィニティーはまた、可逆性の複合体の形成の後における、抗原−抗体間の結合の強度を指す、「アビディティー」という用語も含む。当技術分野では、抗体の、抗原に対するアフィニティーを計算するための方法であって、アフィニティーを計算する結合実験の使用を含む方法が公知である。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性は、また、抗体アフィニティーも反映する。抗体およびアフィニティーは、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して、表現型的に特徴づけ、比較することができる。
本発明の方法において有用な核酸分子は、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子を含む。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一である必要はなく、実質的な同一性を呈示することが典型的である。内因性配列に対する「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは典型的に、二本鎖核酸分子のうちの、少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、多様なストリンジェンシー条件下において、相補的なポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書で記載される遺伝子）、またはそれらの部分の間で対合して、二本鎖分子を形成することを意味する（例えば、Ｗａｈｌ， Ｇ． Ｍ．およびＳ． Ｌ． Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２巻：３９９頁；Ｋｉｍｍｅｌ， Ａ． Ｒ．（１９８７年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２巻：５０７頁を参照されたい）。
例えば、ストリンジェントな塩濃度は通例、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、好ましくは、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、より好ましくは、約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムである。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得ることができるのに対し、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミドの存在下で得ることができ、より好ましくは、少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件は通例、少なくとも約３０℃、より好ましくは、少なくとも約３７℃の温度を含み、最も好ましくは、少なくとも約４２℃の温度を含む。当業者には、ハイブリダイゼーション時間、洗浄剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、およびキャリアＤＮＡの組入れまたは除外など、さらなるパラメータを変動させることも周知である。必要に応じて、これらの多様な条件を組み合わせることにより、多様なレベルのストリンジェンシーが達せられる。好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中、３０℃で生じる。より好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で生じる。最も好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中、４２℃で生じる。当業者には、これらの条件における、有用な変動がたやすく明らかである。
大半の適用では、ハイブリダイゼーションに後続する洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーにおいて変動する。洗浄のストリンジェンシー条件は、塩濃度によりおよび温度により規定することができる。上記の通り、洗浄のストリンジェンシーは、塩濃度を減少させることにより増大させることもでき、温度を上昇させることにより増大させることもできる。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり、最も好ましくは、約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムである。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件は通例、少なくとも約２５℃、より好ましくは、少なくとも約４２℃の温度を含み、なおより好ましくは、少なくとも約６８℃の温度を含む。好ましい実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、２５℃で生じる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、４２℃で生じる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、６８℃で生じる。当業者には、これらの条件における、さらなる変動がたやすく明らかである。当業者には、ハイブリダイゼーション法が周知であり、例えば、ＢｅｎｔｏｎおよびＤａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９６巻：１８０頁、１９７７年）；ＧｒｕｎｓｔｅｉｎおよびＲｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、７２巻：３９６１頁、１９７５年）；Ａｕｓｕｂｅｌら（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年）；ＢｅｒｇｅｒおよびＫｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１９８７年、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；ならびにＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載されている。
「実質的に同一な」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書で記載されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または参照核酸配列（例えば、本明細書で記載される核酸配列のうちのいずれか１つ）に対する、少なくとも５０％同一性を呈示する、ポリペプチドまたは核酸分子を意味する。好ましくは、このような配列は、アミノ酸レベルまたは核酸において、比較のために使用される配列と、少なくとも６０％、より好ましくは、８０％、または８５％同一であり、より好ましくは、９０％、９５％、なおまたは９９％同一である。
配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴプログラム、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム、ＧＡＰプログラム、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定することが典型的である。このようなソフトウェアは、相同性の程度を、多様な置換、欠失、および／または他の改変に割り当てることにより、同一な配列または同様の配列をマッチさせる。同一性の程度の決定のための例示的な手法では、ｅ−３〜ｅ−１００の間の確率スコアが近縁の配列を指し示すＢＬＡＳＴプログラムを使用することができる。
本明細書で使用される「類似体」という用語は、参照ポリペプチドまたは参照核酸分子の機能を有する、構造的に類縁のポリペプチドまたは核酸分子を指す。
本明細書で使用される「リガンド」という用語は、受容体に結合する分子を指す。特に、リガンドは、別の細胞上の受容体に結合し、細胞間の認識および／または相互作用を可能とする。
本明細書で使用される「疾患」という用語は、細胞、組織、または臓器の正常な機能を損傷させるか、またはこれに干渉する、任意の状態または障害を指す。疾患の例は、新形成または細胞の病原体感染を含む。
本明細書で使用される「有効量」という用語は、治療効果を有するのに十分な量を指す。ある特定の実施形態では、「有効量」とは、新形成の持続的な増殖、成長、または転移（例えば、浸潤または遊走）を停止させるか、改善するか、または阻害するのに十分な量である。
本明細書で使用される「異種核酸分子または異種ポリペプチド」という用語は、正常では、細胞にまたは細胞から得られた試料に存在しない、核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ分子、ＤＮＡ分子、またはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを指す。この核酸は、別の生物に由来する場合もあり、例えば、正常では、細胞または試料において発現しないｍＲＮＡ分子の場合もある。
本明細書で使用される「免疫応答性細胞」という用語は、免疫応答において機能する細胞、またはその前駆細胞もしくは子孫細胞を指す。
本明細書で使用される「〜をモジュレートする」という用語は、正または負に変更することを指す。例示的なモジュレーションは、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、または約１００％の変化を含む。
本明細書で使用される「〜を増大させる」という用語は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％正に変更することを含むがこれらに限定されない、少なくとも約５％正に変更することを指す。
本明細書で使用される「〜を低減させる」という用語は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、または約１００％負に変更することを含むがこれらに限定されない、少なくとも約５％負に変更することを指す。
本明細書で使用される「単離された細胞」という用語は、細胞に天然に付随する、分子構成成分および／または細胞構成成分から分離された細胞を指す。
本明細書で使用される「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、材料であって、その天然の状態で見出される通り、通常それに付随する構成成分が、様々な程度で非含有である材料を指す。「単離する」とは、元の供給源または環境からのある程度の分離を表す。「精製する」とは、単離より高度な程度の分離を表す。「精製」タンパク質または「生物学的に純粋な」タンパク質は、任意の不純物が、タンパク質の生物学的特性に、実質的に影響を及ぼさないか、または他の有害な帰結を実質的に引き起こさないように、他の材料が十分に非含有である。すなわち、本発明の核酸またはペプチドは、細胞材料、ウイルス材料、または、組換えＤＮＡ法により作製される場合の、培養培地、または、化学合成する場合の、化学的前駆体もしくは他の化学物質が実質的に非含有である場合、精製されている。純度および均質性は、分析化学法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定することが典型的である。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲル内で、本質的に１つのバンドを生じさせることを表し得る。改変、例えば、リン酸化またはグリコシル化に供されうるタンパク質では、異なる改変は、個別に精製されうる、異なる単離されたタンパク質を生じさせうる。
本明細書で使用される「分泌された」という用語は、小胞体、ゴルジ装置を経由し、細胞膜に一過性に融合して細胞の外側にタンパク質を放出する小胞としての分泌経路を介して、細胞から放出されるポリペプチドを意味する。
本明細書で使用される「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「〜に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」または「特異的に標的とする」という用語は、目的の生物学的分子（例えば、ポリペプチド）を認識し、これに結合するが、天然において本発明のポリペプチドを含む試料中、例えば、生物学的試料中の他の分子は実質的に認識せず、これに実質的に結合しない、ポリペプチドまたはその断片を意味する。
本明細書で使用される「処置すること」または「処置」という用語は、処置される個体または細胞の疾患経過を変更しようとする試みにおける臨床介入を指し、予防のために実施することもでき、臨床病態の経過中に実施することもできる。処置の治療効果は、限定なしに述べると、疾患の発生または再発の防止、症状の軽減、疾患の、任意の直接的または間接的な病理学的帰結の縮減、転移の防止、疾患進行の速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解または予後の改善を含む。疾患または障害の進行を防止することにより、処置は、罹患被験体もしくは診断を受けた被験体または障害を有することが疑われる被験体における障害に起因する増悪を防止し得るが、処置はまた、障害の危険性があるか、または障害を有することが疑われる被験体における、障害または障害の症状の発症も防止し得る。
本明細書で使用される「被験体」という用語は、ヒト、非ヒト霊長動物、齧歯動物など（例えば、特定の処置のレシピエントとなる動物、または細胞が採取される動物）を含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。
ＩＩ．Ｇタンパク質共役受容体
７回膜貫通ドメイン受容体、７ＴＭ受容体、七重螺旋受容体、セルペンチン受容体、およびＧタンパク質連結受容体としてもまた公知の、Ｇタンパク質共役受容体（「ＧＰＲ」）は、細胞の外部の分子を感知し、内部のシグナル伝達経路を活性化させ、最終的に、細胞応答を活性化させる、受容体の一大タンパク質ファミリーを構成する。ＧＰＣＲは、配列相同性および機能的類似性に基づき、６つのクラス：クラスＡ（ロドプシン様）、クラスＢ（セクレチン受容体ファミリー）、クラスＣ（代謝調節型グルタメート／フェロモン）、クラスＤ（真菌交配フェロモン受容体）、クラスＥ（サイクリックＡＭＰ受容体）、およびクラスＦ（Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／Ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ）に類別することができる。ある特定の実施形態では、ＧＲＰは、クラスＣのＧＲＰである。ある特定の非限定的な実施形態では、クラスＣのＧＲＰは、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤである。
Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）は、ヒトにおいて公知のリガンドまたは機能を伴わない、オーファン受容体である。ＧＰＲＣ５Ｄとは、レチノイン酸誘導性Ｇタンパク質共役受容体のファミリーのメンバーである。ＧＰＲＣ５Ｄは、図２に示される通り、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞内で過剰発現するが、良性または悪性の、他の任意の細胞型では、発現しないか、または有意に低レベルで発現する。いくつかのグループが、初代ＭＭ細胞の遺伝子発現プロファイリングによって、この遺伝子を、正常組織１または他の血液悪性腫瘍２〜４と比較する場合に、高度に差次的に発現する遺伝子であると同定している。高度なｍＲＮＡ発現は、全生存の不良と相関することが示されている１。ＭＭを有する患者からの骨髄吸引物についての表面染色は、形質細胞特異的な染色を明らかに示す４。本発明者らの知る限りでは、これは、ＧＰＲＣ５Ｄが、任意の治療法によって標的化された、初めてのことである。加えて、本発明者らの知る限りでは、これは、任意のＧタンパク質共役受容体を標的とするＣＡＲが生成された、初めてのことでもある。
ある特定の非限定的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列またはその断片を有する、ヒトＧＰＲＣ５Ｄである。
配列番号９７を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
ヒトＧＰＲＣ５ＤのＮ末端領域は、配列番号９７のアミノ酸１〜２７を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ１（ＥＣＬ１）領域は、配列番号９７のアミノ酸８５〜９３を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ２（ＥＣＬ２）領域は、配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ３（ＥＣＬ３）領域は、配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９を有する。
ＩＩＩ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、目的の特異性を、免疫エフェクター細胞に移植または付与する、操作された受容体である。ＣＡＲを使用して、モノクローナル抗体の特異性を、Ｔ細胞に移植することができ、それらのコード配列の移入は、レトロウイルスベクターにより容易とされ得る。
３つの世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」のＣＡＲは、Ｔ細胞受容体鎖の細胞質／細胞内ドメインに融合させた膜貫通ドメインに融合させた、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ））から構成されることが典型的である。「第１世代」のＣＡＲは、ＣＤ３ζ鎖に由来する細胞内ドメインであって、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要な伝達物質である、細胞内ドメインを有することが典型的である。「第１世代」のＣＡＲは、デノボの抗原認識をもたらすことが可能であり、ＨＬＡ介在性抗原提示に依存しない、単一の融合分子内の、それらのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こし得る。「第２世代」のＣＡＲは、多様な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）に由来する細胞内ドメインを、ＣＡＲの細胞質テールに付加して、Ｔ細胞へのさらなるシグナルをもたらす。「第２世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４−１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）の両方をもたらすＣＡＲを含む。前臨床研究は、「第２世代」のＣＡＲが、Ｔ細胞の抗腫瘍活性を改善し得ることを指し示している。例えば、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を有する患者におけるＣＤ１９分子を標的とする臨床試験では、「第２世代」のＣＡＲで改変されたＴ細胞の頑健な有効性が裏付けられた。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４−１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）をもたらすＣＡＲを含む。
本開示の主題に従い、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、細胞外抗原結合ドメインは、Ｇタンパク質共役受容体に結合する。ある特定の実施形態では、Ｇタンパク質共役受容体は、ＧＰＲＣ５Ｄである。非限定的な具体的実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。非限定的な具体的実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、任意選択で架橋されるＦａｂである。非限定的な具体的実施形態では、細胞外結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）２である。非限定的な具体的実施形態では、前出の分子のうちのいずれかは異種配列との融合タンパク質内に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成し得る。
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に対する高い結合特異性のほか、高い結合アフィニティーを有する。例えば、このような実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはその類似体により具体化される）は、ＧＰＲＣ５Ｄに、約３×１０−６Ｍまたはこれ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１×１０−６Ｍもしくはこれ未満、約１×１０−７Ｍもしくはこれ未満、約１×１０−８Ｍもしくはこれ未満、または約１×１０−９Ｍもしくはこれ未満、約１×１０−１０Ｍもしくはこれ未満、または約１×１０−１１Ｍもしくはこれ未満である。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１×１０−８Ｍまたはこれ未満である。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、約１×１０−１０Ｍ〜約１×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−８Ｍ、約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、または約１×１０−７Ｍ〜約１×１０−６Ｍ、または約１×１０−６Ｍ〜約３×１０−６Ｍなど、約１×１０−１１Ｍ〜約３×１０−６Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−８Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１×１０−９Ｍ〜約１．５×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約１．２×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約４×１０−９Ｍ〜約５×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約５×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約４．８×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約８×１０−９Ｍ〜約９×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約８×１０−９Ｍである。ある特定の実施形態では、ＫＤは、約８．１×１０−９Ｍである。
本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはその類似体における実施形態）の、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウェスタンブロットアッセイにより確認することができる。これらのアッセイの各々は一般に、目的の複合体に特異的な標識試薬（例えば、抗体、またはｓｃＦｖ）を用いることにより、特に目的となるタンパク質−抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖは、放射性標識し、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ， Ｂ．、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８６年３月を参照されたい）。放射性同位元素は、γカウンターまたはシンチレーションカウンターなどの手段の使用により検出することもでき、あるいはオートラジオグラフィーにより検出することもできる。ある特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化細胞外抗原結合ドメインを、蛍光マーカーで標識する。非限定的な蛍光マーカーの例は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、およびｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）を含む。ある特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ヒトｓｃＦｖを、ＧＦＰで標識する。
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。具体的な一実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するヒトｓｃＦｖを含む。別の具体的な実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するマウスｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する細胞（例えば、３Ｔ３細胞）を用いてｓｃＦｖファージライブラリーをスクリーニングすることにより同定する。
ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、および９３からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、および９３のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、それぞれ、配列番号３、７、１１、１５、１９、２３、２７、３１、３５、３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、７５、７９、８３、８７、９１、および９５である。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、および９４からなる群から選択される配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、および９４のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、それぞれ、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、および９６である。配列番号１〜９６の配列を、以下の表１〜２４に記載する。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、本明細書で記載され、表１〜２４に開示されているアミノ酸配列と相同なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号 １、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むが、限定を目的とするものではない。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、
（ａ）配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、３０２、３１４、３２６、３３８、３５０、３６２、３７４、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、３０３、３１５、３２７、３３９、３５１、３６３、３７５、および３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
本開示の主題は、本明細書の表１〜２４に開示されている、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をさらに提供する。ＣＤＲ領域については、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．ら（１９９１年）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号）を使用して詳述されている。本開示の主題は、本明細書で開示される抗体配列の保存的改変を含む、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をさらに提供する。例えば、本開示の主題の細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含むが、限定を目的とするものではなく、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数は、本明細書で開示される、指定されたアミノ酸配列、またはその保存的改変を含み、細胞外抗原結合ドメインは、所望の機能的特性を保持する。
ある特定の実施形態では、本開示の主題は、重鎖可変領域を含む、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を提供するが、重鎖可変領域は、
（ａ）配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ２；ならびに
（ｃ）配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ３
を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、
（ａ）配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ２；ならびに
（ｃ）配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含むＣＤＲ３
を含む。
本開示の主題は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
（ａ）重鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、１９８、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４、２４０、２４６、２５２、２５８、２６４、３０６、３１８、３３０、３４２、３５４、３６６、３７８、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、１５９、１６５、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１、２３７、２４３、２４９、２５５、２６１、２６７、３０９、３２１、３３３、３４５、３５７、３６９、３８１、および３９３からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変
を含み、細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、ヒトＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２５、１３１、１３７、１４３、１４９、１５５、１６１、１６７、１７３、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３、２３９、２４５、２５１、２５７、２６３、３０５、３１７、３２９、３４１、３５３、３６５、３７７、および３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５８、１６４、１７０、１７６、１８２、１８８、１９４、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０、２３６、２４２、２４８、２５４、２６０、２６６、３０８、３２０、３３２、３４４、３５６、３６８、３８０、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含み、細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、ヒトＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２４、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、１６０、１６６、１７２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２、２３８、２４４、２５０、２５６、２６２、３０４、３１６、３２８、３４０、３５２、３６４、３７６、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５７、１６３、１６９、１７５、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５、２４１、２４７、２５３、２５９、２６５、３０７、３１９、３３１、３４３、３５５、３６７、３７９、および３９１からなる群から選択されるアミノ酸配列、ならびにその保存的改変を含み、細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、ヒトＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５３ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−３ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１に示される通りの、配列番号１２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６６ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１６ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号１３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２に示される通りの、配列番号１３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１３２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１３３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１３４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１３５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１７０ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２０ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号１３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号１３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３に示される通りの、配列番号１３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１３９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１７１ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２１ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表４に示される通りの、配列番号１４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１４４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１４５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１４６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１４７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１７５ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２５ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号１８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表５に示される通りの、配列番号１４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１５１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５４ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−４ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号２２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号２１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号１５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号１５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表６に示される通りの、配列番号１５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１５５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１５６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１５９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５６ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−６ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号２５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号２６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号１６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号１６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表７に示される通りの、配列番号１６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１６３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１６４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５７ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−７ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号２９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号３０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号１６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号１６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表８に示される通りの、配列番号１６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１６７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１６８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５９ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−９ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号３３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号３３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号３４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号３４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号３３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号１７２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１７４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号１７５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表９に示される通りの、配列番号１７２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１７４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１７５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１７４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１７５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１７６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１７７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６０ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１０ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号３７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号３８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号１７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号１８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１０に示される通りの、配列番号１７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１８０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１８１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６１ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１１ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号４２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号４１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号４１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号４２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号４２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号４１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号４２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号１８４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１８５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１８６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号１８７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１１に示される通りの、配列番号１８４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１８５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１８６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１８７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１８４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１８５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１８６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１８７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１８８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１８９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６２ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１２ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号４５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号４５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号４６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号４６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号４５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号４６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号１９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号１９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１９４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１９５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１２に示される通りの、配列番号１９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１９４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１９５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１９２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１９３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１９４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１９５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６３ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１３ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号４９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号４９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号５０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号４９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号１９６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１９８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号１９９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２００に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１３に示される通りの、配列番号１９６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１９８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１９９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２００に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１９７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１９８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号１９９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２００に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５１ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号５３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号５４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号２０２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号２０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１４に示される通りの、配列番号２０２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２０４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２０５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２０６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２０７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５２ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号５７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号５８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５に示される通りの、配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５５ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−５ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦＶである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６に示される通りの、配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１５８ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−８ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号６５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号６６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される通りの、配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６８ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１８ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号６９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号７０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８に示される通りの、配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６４ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１４ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号７３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号７３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号７４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号７４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号７３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号７４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号２３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号２３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１９に示される通りの、配列番号２３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２３４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２３５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２３４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２３５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６５ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１５ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号７７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号７７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号７８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号７８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号７７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号７８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号２３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号２４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２０に示される通りの、配列番号２３８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２３９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２４０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２４１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６７ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１７ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号８１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号８１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号８２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号８２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号８１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号８２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号２４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号２４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２１に示される通りの、配列番号２４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２４６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２４７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２４４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２４５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２４６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２４７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１６９ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１９ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号８５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号８５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号８６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号８６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号８５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号８６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号２５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号２５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２２に示される通りの、配列番号２５０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２５２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２５３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２５５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１７２ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２２ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号８９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号８９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号９０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号９０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号８９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号９０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号２５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号２５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２３に示される通りの、配列番号２５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２５８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２５９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２５６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２５９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−１７３ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−２３ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号９３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号９３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号９４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号９４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号９３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号９４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号２６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号２６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２４に示される通りの、配列番号２６２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２６３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２６３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２６４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２６５ ｆに記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２６７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０１のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０２４ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１７４ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３０３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３０３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２５に示される通りの、配列番号３０４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３０５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３０６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３０７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３０５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３０６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３０７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３０８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３０９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１３のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０２６ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１７６ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３１５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２６に示される通りの、配列番号３１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３１９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３２５のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０２８ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１７８ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３２６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３２７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２７に示される通りの、配列番号３２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３３２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３３３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３３２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３３３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０２９ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１７９ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３８に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３３９に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３３８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３３９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３３９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３３８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３３９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２８に示される通りの、配列番号３４０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３４１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３４２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３４３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３４４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３４５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３４１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３４２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３４３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３４４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３４５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４９のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０３０ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１８０ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５０に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３５１に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３５１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表２９に示される通りの、配列番号３５２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３５３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３５４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３５５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３５６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３５７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３５３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３５４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３５５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３５６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６１のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０３１ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１８１ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３６３に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６３に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３６３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３０に示される通りの、配列番号３６４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３６５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３６６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３６７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３６８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３６９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３６７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３６８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７３のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０３２ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１８２ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７４に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３７５に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７４に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３７５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３８０記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３１に示される通りの、配列番号３７６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３７７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３７８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３７９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３８０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３８１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３７７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３７８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３７９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３８０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３８１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
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ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８５のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド（例えば、配列番号９７のアミノ酸配列、またはその断片を有する、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチド）に特異的に結合するｓｃＦｖであって、ＥＴ１５０−０３３ ｓｃＦｖ（「ＥＴ１５０−１８３ ｓｃＦｖ」ともまた称する）と呼ぶｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号３８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴うｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号３８７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表３２に示される通りの、配列番号３８８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３８９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３９０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３９１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３９２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３９３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３８９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３９０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３９１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３９２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３９３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
Figure 0006919091
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上記の配列のＶＨ領域およびＶＬ領域に対する、高度な（すなわち、８０％、またはこれを超える）相同性を有する、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、変異誘発（例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介変異誘発）に続き、本明細書で記載される結合アッセイを使用して、コードされた変更ｓｃＦｖを、保持された機能（すなわち、結合アフィニティー）について調べることにより得ることができる。ある特定の実施形態では、少なくとも約８０％（ａｔ ｌｅａｓｔ ９ａｂｏｕｔ ８０％）、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の相同性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べた置換（例えば、配列の保存的改変を生ずる保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、この配列を含む細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチドに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の相同性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べた置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、この配列を含む細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＧＰＲＣ５Ｄポリペプチドに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、本開示の配列内の、合計約１〜約１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、かつ／または欠失している。例えば、ＶＨ領域またはＶＬ領域は、改変および／または置換された、最大で約１つ、最大で約２つ、最大で約３つ、最大で約４つ、最大で約５つ、最大で約６つ、最大で約７つ、最大で約８つ、最大で約９つ、または最大で約１０のアミノ酸残基を有し得るが、限定を目的とするものではない。保存的改変の非限定的な例は、下記の、例えば、表３３中に提示される。
本明細書で使用される「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含む本開示のＣＡＲ（例えば、細胞外抗原結合ドメイン）の結合特徴に、有意に影響を及ぼしたり、該特徴を有意に変更したりしないアミノ酸改変を指す。このような保存的改変は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含む。部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発など、当技術分野で公知の標準的な技法により、本開示の主題のヒトｓｃＦｖに改変を導入することができる。アミノ酸は、電荷および極性など、それらの物理化学的特性に従い、群に分類することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基を、同じ群内のアミノ酸で置きかえる、アミノ酸置換である。例えば、アミノ酸は、電荷により分類することができる：正に荷電したアミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジンを含み、負に荷電したアミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸を含み、中性電荷アミノ酸は、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンを含む。加えて、アミノ酸は、極性により分類することができる：極性アミノ酸は、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンを含み；非極性アミノ酸は、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含む。こうして、ＣＤＲ領域内の、１または複数のアミノ酸残基を、同じ群に由来する他のアミノ酸残基で置きかえることができ、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、変更された抗体を、保持された機能（すなわち、上記の（ｃ）から（ｌ）に記載の機能）について調べることができる。ある特定の実施形態では、指定された配列内またはＣＤＲ領域内の、１つ以下の、２つ以下の、３つ以下の、４つ以下の、５つ以下の残基を変更する。例示的な保存的アミノ酸置換を、表３３に示す。
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ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを接続するリンカーを含みうる。本明細書で使用される「リンカー」という用語は、２つまたはこれを超える、ポリペプチドまたは核酸を、それらが互いと接続されるように、共有結合によって結合させる官能基（例えば、化学物質またはポリペプチド）を指す。本明細書で使用される「ペプチドリンカー」とは、２つのタンパク質を一緒にカップリングするのに（例えば、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをカップリングするのに）使用される、１または複数のアミノ酸を指す。ペプチドリンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎら、Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．、８０巻（６号）：１９１０〜１９１７頁（２００８年）およびＷＯ２０１４／０８７０１０に開示されている。
非限定的な一例では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＧ４Ｓリンカーである。ある特定の実施形態では、配列番号９８のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号９９に明示する。非限定的な一例では、リンカーは、配列番号２８４に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３０７のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号２８５に明示する。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２８６に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２８７に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２８８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２８９に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９０に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９１に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９２に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９３に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９４に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９５に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９６に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９７に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２９９に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
加えて、細胞外抗原結合ドメインは、新生タンパク質を、小胞体に誘導する、リーダーまたはシグナルペプチドを含みうる。シグナルペプチドまたはリーダーは、ＣＡＲを、グリコシル化および細胞膜にアンカリングさせようとする場合に必須でありうる。シグナル配列またはリーダーは、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（約５、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０アミノ酸長）であって、それらの、分泌経路への進入を誘導するペプチド配列でありうる。非限定的な例では、シグナルペプチドは、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に、共有結合によって結合されている。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２６８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＣＤ８ポリペプチドを含む。
配列番号２６８のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号２６９に明示する。
ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
配列番号２８２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号２８３に明示する。
ある特定の実施形態では、ヒトｓｃＦｖは、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチド、ならびにＨｉｓタグおよびＨＡタグを含む。ある特定の実施形態では、Ｈｉｓ−タグおよびＨＡ−タグのアミノ酸配列は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号４０９にのアミノ酸配列を含む。
配列番号４０９をコードするヌクレオチド配列は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される配列番号４１０である。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、ヒトＧＰＲＣ５Ｄポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｎ末端領域（配列番号９７のアミノ酸１〜２７）、ＥＣＬ１領域（配列番号９７のアミノ酸８５〜９３）、ＥＣＬ２領域（配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７）、およびＥＣＬ３領域（配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９）のうちの、１つ、２つ、３つ、または４つに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１６〜２３を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域を含むがこれらに限定されない、Ｎ末端領域内のエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、Ｎ末端領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含む。ある特定の実施形態では、Ｎ末端領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含む。ある特定の実施形態では、Ｎ末端領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含む。ある特定の実施形態では、Ｎ末端領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域を含むがこれらに限定されない、ＥＣＬ１領域内のエピトープ領域に結合する。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域を含むがこれらに限定されない、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含む。ある特定の実施形態では、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２３７を含むエピトープ領域を含むがこれらに限定されない、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域に結合する。ある特定の実施形態では、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含む。ある特定の実施形態では、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含む。ある特定の実施形態では、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域は、配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１５から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５８に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ＥＴ１５０−２ ｓｃＦｖ（またはＥＴ１５０−１５２ ｓｃＦｖ）である。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１６から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２１５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２１７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２１８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ＥＴ１５０−１５５ ｓｃＦｖ（またはＥＴ１５０−５ ｓｃＦｖ）である。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、または２つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１７に示される配列番号６６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２２に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２３に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２４に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ＥＴ１５０−８ ｓｃＦｖ（またはＥＴ１５０−１５８ ｓｃＦｖ）である。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、または３つのエピトープ領域に結合する。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択で、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーペプチドを伴う。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、表１８から選択されるＶＨ領域およびＶＬ領域またはＣＤＲを伴う、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質または全長ヒトＩｇＧである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７０に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ、および配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列またはその保存的改変を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２２７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２２８に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２９に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３０に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ＥＴ１５０−１８ ｓｃＦｖ（またはＥＴ１５０−１６８ ｓｃＦｖ）である。
ＣＡＲの膜貫通ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも部分にわたる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性を結果としてもたらす。抗原認識の後、受容体がクラスタリングすると、シグナルが、細胞に伝達される。本開示の主題に従い、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含みうる。
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号Ｐ１０７４７もしくはＮＰ＿００６１３０（配列番号２７０）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。非限定的な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０であり、最大で２２０アミノ酸の長さである、配列番号２７０の連続部分であるアミノ酸配列を有し得る。代替的に、または加えて、多様な非限定的実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２７０のアミノ酸１〜２２０、１〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、または２００〜２２０のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインに含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０のアミノ酸配列を有する。
配列番号２７０を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＣＤ２８核酸分子」とは、ＣＤ２８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン（例えば、共刺激シグナル伝達領域）に含まれる、ＣＤ２８ポリペプチド（配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０）をコードするＣＤ２８核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２７１に記載の配列を有する核酸を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。ＣＤ８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＡＡＨ２５７１５（配列番号４０４）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。非限定的な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、または少なくとも７０、または少なくとも１００、または少なくとも１５０、または少なくとも２００であり、最大で２３５アミノ酸の長さである、配列番号４０４の連続部分であるアミノ酸配列を有し得る。代替的に、または加えて、多様な非限定的実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号４０４のアミノ酸１〜２３５、１〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、１３０〜２１０、または２００〜２３５のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドは、配列番号４０４のアミノ酸１３７〜２０７のアミノ酸配列を有する。
配列番号２２６を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＣＤ８核酸分子」とは、ＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれる、ＣＤ８ポリペプチド（配列番号４０４のアミノ酸１３７〜２０７）をコードするＣＤ８核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号４０５に記載の配列を有する核酸を含む。
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合ドメインを、膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域も含みうる。スペーサー領域は、抗原結合ドメインが、異なる方向に配向することを可能として、抗原認識を容易とするのに十分な程度に可撓性でありうる。スペーサー領域は、ＩｇＧ１に由来するヒンジ領域、または免疫グロブリンのＣＨ２ＣＨ３領域、およびＣＤ３の部分でありうる。
ＣＡＲの細胞内ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化させることが可能であるか、または刺激し得る、ＣＤ３ζポリペプチドを含みうる。ＣＤ３ζは、３つのＩＴＡＭを含み、抗原が結合した後で、活性化シグナルを、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）に伝える。ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２７２に記載の配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。非限定的な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０であり、最大で１６３アミノ酸の長さである、配列番号２７２の連続部分であるアミノ酸配列を有し得る。代替的に、または加えて、多様な非限定的実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２７２のアミノ酸１〜１６３、１〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、または１５０〜１６３のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３のアミノ酸配列を有する。
配列番号２７２を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＣＤ３ζ核酸分子」とは、ＣＤ３ζポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内ドメインに含まれる、ＣＤ３ζポリペプチド（配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３）をコードするＣＤ３ζ核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号２７３に記載の配列を有する核酸を含む。
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、少なくとも１つのシグナル伝達領域をさらに含む。少なくとも１つのシグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答と関連するタンパク質に基づかない）、またはこれらの組合せを含みうる。
ある特定の実施形態では、シグナル伝達領域は、共刺激シグナル伝達領域である。ある特定の実施形態では、共刺激領域は、最適のリンパ球活性化をもたらし得る、少なくとも１つの共刺激分子を含む。本明細書で使用される「共刺激分子」とは、抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子であって、リンパ球の、抗原に対する効率的な応答に必要とされる細胞表面分子を指す。少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含みうる。共刺激分子は、共刺激リガンドに結合し得る。共刺激リガンドは、細胞表面上で発現するタンパク質であって、その受容体に結合すると、共刺激応答、すなわち細胞内応答を生じ、その細胞内応答は、抗原がそのＣＡＲ分子に結合するときに提供される刺激に影響を及ぼす。共刺激リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびＰＤ−Ｌ１を含むがこれらに限定されない。例として述べると、４−１ＢＢリガンド（すなわち、４−１ＢＢＬ）は、ＣＡＲシグナルと組み合わせてＣＡＲ＋Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する細胞内シグナルをもたらすために、４−１ＢＢ（「ＣＤ１３７」としてもまた公知である）と結合し得る。４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＤＡＰ−１０を含む、共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内ドメインを含むＣＡＲは、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｕ．Ｓ．７，４４６，１９０において開示されている（例えば、Ｕ．Ｓ．７，４４６，１９０では、４−１ＢＢをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１５に明示され、ＩＣＯＳをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１６に明示され、ＤＡＰ−１０をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１７に明示されている）。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、２つの共刺激分子：ＣＤ２８および４−１ＢＢまたはＣＤ２８およびＯＸ４０を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
４−１ＢＢは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドとして作用し得、刺激活性を有し得る。４−１ＢＢポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号Ｐ４１２７３もしくはＮＰ＿００１５５２（配列番号２７４）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドは、配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５のアミノ酸配列を有する。配列番号２７４を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「４−１ＢＢ核酸分子」とは、４−１ＢＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内ドメインに含まれる、４−１ＢＢポリペプチド（配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５）をコードする４−１ＢＢ核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される通り、配列番号３００に記載の配列を有する核酸を含む。
ＯＸ４０ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号Ｐ４３４８９もしくはＮＰ＿００３３１８（配列番号２７５）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２７５を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＯＸ４０核酸分子」とは、ＯＸ４０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３６２２４（配列番号２７６）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２７６を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＩＣＯＳ核酸分子」とは、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＣＴＬＡ−４とは、活性化Ｔ細胞によって発現される阻害性受容体であって、その対応するリガンド（それぞれ、ＣＤ８０およびＣＤ８６；Ｂ７−１およびＢ７−２）が係合すると、活性化Ｔ細胞の阻害またはアネルギーを媒介する阻害性受容体である。前臨床研究および臨床研究のいずれにおいても、全身への抗体注入によるＣＴＬＡ−４の遮断は、内因性の抗腫瘍応答を増強したが、臨床状況では、予測できなかった（ｕｎｆｏｒｅｓｅｅｎ）、明らかな毒性を伴った。
ＣＴＬＡ−４は、細胞外Ｖドメイン、膜貫通ドメイン、細胞質テールを含有する。異なるアイソフォームをコードする、代替的なスプライス変異体が特徴づけられている。膜結合型アイソフォームが、ジスルフィド結合で相互接続されたホモ二量体として機能するのに対し、可溶性アイソフォームは、単量体として機能する。細胞内ドメインは、内因性の触媒活性を有さず、ＰＩ３Ｋ、ＰＰ２Ａ、およびＳＨＰ−２に結合することが可能な、１つのＹＶＫＭモチーフと、ＳＨ３を含有するタンパク質に結合することが可能な、１つのプロリンリッチモチーフとを含有するという点で、ＣＤ２８の細胞内ドメイン同様である。Ｔ細胞応答の阻害におけるＣＴＬＡ−４の１つの役割は、ＣＤ３およびＬＡＴなど、ＴＣＲ近位のシグナル伝達タンパク質の、ＳＨＰ−２およびＰＰ２Ａによる脱リン酸化を介する、直接的なものであるようである。ＣＴＬＡ−４はまた、ＣＤ２８との、ＣＤ８０／８６への結合についての競合を介して、シグナル伝達に、間接的にも、影響を及ぼし得る。ＣＴＬＡ−４はまた、ＰＩ３Ｋ、ＣＤ８０、ＡＰ２Ｍ１、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａに結合し、かつ／またはこれらと相互作用することも示されている。
本開示の主題に従い、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ参照番号Ｐ１６４１０．３（配列番号２７７）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり（本明細書において、相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定され得る）、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２７７を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＣＴＬＡ−４核酸分子」とは、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ＰＤ−１は、内因性マクロファージ上および内因性樹状細胞上で発現する、その対応するリガンドである、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２と係合すると、活性化Ｔ細胞の負の免疫調節因子となる。ＰＤ−１とは、２６８アミノ酸のＩ型膜タンパク質である。ＰＤ−１は、Ｂ７ファミリーのメンバーである、２つのリガンドである、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を有する。タンパク質の構造は、細胞外ＩｇＶドメインに続き、膜貫通領域および細胞内テールを含む。細胞内テールは、ＰＤ−１が、ＴＣＲシグナルを負に調節するように、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｍｏｔｉｆ）内および免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ ｓｗｉｔｃｈ ｍｏｔｉｆ）内に位置する、２つのリン酸化部位を含有する。ＳＨＰ−１ホスファターゼおよびＳＨＰ−２ホスファターゼは、リガンドが結合すると、ＰＤ−１の細胞質テールに結合する。ＰＤ−Ｌ１の上方調節は、腫瘍細胞が、宿主免疫系を回避し得る、１つの機構である。前臨床試験および臨床試験では、アンタゴニスト性抗体によるＰＤ−１の遮断から、宿主の内因性免疫系を介して媒介される抗腫瘍応答が誘導された。
本開示の主題に従い、ＰＤ−１ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００５００９．２（配列番号２７８）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２７８を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＰＤ−１核酸分子」とは、ＰＤ−１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
リンパ球活性化タンパク質３（ＬＡＧ−３）とは、免疫細胞に対する、負の免疫調節因子である。ＬＡＧ−３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属し、４つの細胞外Ｉｇ様ドメインを含有する。ＬＡＧ３遺伝子は、８つのエクソンを含有する。配列データ、エクソン／イントロン構成、および染色体内の局在化はいずれも、ＬＡＧ３の、ＣＤ４との近縁の関係を指し示す。ＬＡＧ３はまた、ＣＤ２２３（分化クラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）２２３）とも呼ぶ。
本開示の主題に従い、ＬＡＧ−３ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ参照番号Ｐ１８６２７．５（配列番号２７９）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２７９を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＬＡＧ−３核酸分子」とは、ＬＡＧ−３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（２Ｂ４）は、ＮＫ細胞における、およびＴ細胞のサブセットにおける、非ＭＨＣ拘束型細胞殺滅を媒介する。現在のところ、２Ｂ４の機能は、いまだ探索途上であるが、２Ｂ４−Ｓアイソフォームは、免疫細胞の活性化受容体であると考えられるが、２Ｂ４−Ｌアイソフォームは、免疫細胞に対する、負の免疫調節因子であると考えられている。２Ｂ４は、その高アフィニティーリガンドであるＣＤ４８に結合すると、係合状態となる。２Ｂ４は、該タンパク質が多様なホスファターゼと会合することを可能とする分子スイッチである、チロシンベースのスイッチモチーフを含有する。２Ｂ４はまた、ＣＤ２４４（分化２４４のクラスター）とも呼ばれている。
本開示の主題に従い、２Ｂ４ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ参照番号Ｑ９ＢＺＷ８．２（配列番号２８０）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２８０を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「２Ｂ４核酸分子」とは、２Ｂ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
Ｂリンパ球およびＴリンパ球アテニュエーター（Ｂ− ａｎｄ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）の発現は、Ｔ細胞の活性化の間に誘導され、ＢＴＬＡは、Ｔｈ１細胞上の発現は維持するが、Ｔｈ２細胞上の発現は維持しない。ＰＤ１およびＣＴＬＡ４と同様に、ＢＴＬＡは、Ｂ７の相同体であるＢ７Ｈ４と相互作用する。しかし、ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４と異なり、ＢＴＬＡは、腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦ−Ｒ）との相互作用を介するＴ細胞阻害を示すが、細胞表面受容体のＢ７ファミリーとの相互作用を介するＴ細胞阻害は示さない。ＢＴＬＡは、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒ）（ＨＶＥＭ）としてもまた公知の、腫瘍壊死因子（受容体）スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）のリガンドである。ＢＴＬＡ−ＨＶＥＭ複合体は、Ｔ細胞による免疫応答を、負に調節する。ＢＴＬＡの活性化は、ヒトＣＤ８＋がん特異的Ｔ細胞の機能を阻害することが示されている。ＢＴＬＡはまた、ＣＤ２７２（分化クラスター２７２）とも呼ばれている。
本開示の主題に従い、ＢＴＬＡポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ参照番号Ｑ７Ｚ６Ａ９．３（配列番号２８１）を有する配列、またはその断片と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であり、かつ／または、任意選択で、最大で１つ、もしくは最大で２つ、もしくは最大で３つの保存的アミノ酸置換を含みうるアミノ酸配列を有し得る。
配列番号２８１を、下記：
Figure 0006919091
 に提供する。
本開示の主題に従い、「ＢＴＬＡ核酸分子」とは、ＢＴＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、図１に示される通り、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する細胞外抗原結合領域、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含む。図１に示される通り、ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合によって結合された、シグナルペプチドまたはリーダーも含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、図６に示される通り、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する細胞外抗原結合領域、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ζポリペプチドおよび４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含む。図６に示される通り、ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合によって結合された、シグナルペプチドまたはリーダーも含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２８２に記載の配列を有するアミノ酸を含む。
一部の実施形態では、本開示の主題のＣＡＲは、ヒト細胞内で核酸配列を発現させるための、誘導性プロモーターをさらに含みうる。ＣＡＲ遺伝子の発現における使用のためのプロモーターは、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターなどの構成的プロモーターでありうる。
本開示の主題はまた、本明細書で記載される、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲまたはその機能的部分をコードする単離された核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、単離された核酸分子は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とする、本開示のＣＡＲであって、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメインを含むＣＡＲをコードする。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、マウスｓｃＦｖである。具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号３９７に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号３９８に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号３９９に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４００に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０１に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０２に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０３に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０６に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
Figure 0006919091
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０７に記載の配列を有する核酸を含む。
具体的な非限定的一例では、単離された核酸分子は、下記：
Figure 0006919091
Figure 0006919091
Figure 0006919091
 に提示される、配列番号４０８に記載の配列を有する核酸を含む。
配列番号４０６のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含み、ここで、ＣＤ２８領域を含む膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達領域が配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ１と呼ぶ）をコードする。
配列番号３９７のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含み、ここで、ＣＤ２８領域を含む膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達領域が配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ２と呼ぶ）をコードする。
配列番号３９８のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含み、ここで、ＣＤ２８領域を含む膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達領域が配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ５と呼ぶ）をコードする。
配列番号３９９のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含み、ここで、ＣＤ２８領域を含む膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達領域が配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ８と呼ぶ）をコードする。
配列番号４００のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよびＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内ドメイン、を含み、ここで、ＣＤ２８領域を含む膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達領域が配列番号２７０のアミノ酸１１４〜２２０を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ１８と呼ぶ）をコードする。
配列番号４０１のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号５３に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号５４に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、配列番号４０４の１３７〜２０７を有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよび配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５を有する４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ＢＢｚ ＣＡＲ１と呼ぶ）をコードする。配列番号４０１のヌクレオチド配列６〜８５６は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０１のヌクレオチド配列８６４〜１０７６は、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードする。配列番号４０１のヌクレオチド配列１０７７〜１２０２は、細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドをコードする。配列番号４０１のヌクレオチド配列１２０３〜１５４１は、細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドをコードする。配列番号４０１の他の部分を、表３４に示す。
Figure 0006919091
配列番号４０７のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号５７に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号５８に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、配列番号４０４の１３７〜２０７を有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよび配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５を有する４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ＢＢｚ ＣＡＲ２と呼ぶ）をコードする。配列番号４０２のヌクレオチド配列５〜８５５は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０７のヌクレオチド配列１５〜８１２は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０７のヌクレオチド配列８５２〜１０６４は、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードする。配列番号４０７のヌクレオチド配列１０６５〜１１９０は、細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドをコードする。配列番号４０７のヌクレオチド配列１１９１〜１５２９は、細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドをコードする。配列番号４０７の他の部分を、表４１に示す。
Figure 0006919091
配列番号４０２のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６１に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号６２に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、配列番号４０４の１３７〜２０７を有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよび配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５を有する４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ＢＢｚ ＣＡＲ５と呼ぶ）をコードする。配列番号４０２のヌクレオチド配列５〜８５５は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０２のヌクレオチド配列８６３〜１０７５は、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードする。配列番号４０２のヌクレオチド配列１０７６〜１２０１は、細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドをコードする。配列番号４０２のヌクレオチド配列１２０２〜１５４０は、細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドをコードする。配列番号４０２の他の部分を、表３５に示す。
Figure 0006919091
配列番号４０８のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６５に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、配列番号４０４の１３７〜２０７を有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよび配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５を有する４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ＢＢｚ ＣＡＲ８と呼ぶ）をコードする。配列番号４０８のヌクレオチド配列１５〜８２４は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０８のヌクレオチド配列８６４〜１０７６は、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードする。配列番号４０８のヌクレオチド配列１０７７〜１２０２は、細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドをコードする。配列番号４０８のヌクレオチド配列１２０３〜１５４１は、細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドをコードする。配列番号４０８の他の部分を、表４２に示す。
Figure 0006919091
配列番号４０３のヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子は、配列番号６９に記載の配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、配列番号７０に記載の配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、および配列番号９８のアミノ酸配列を有するリンカーであって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間に配置されるリンカーを含むヒトｓｃＦｖ、配列番号４０４の１３７〜２０７を有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２７２のアミノ酸５２〜１６３を含むＣＤ３ζポリペプチドおよび配列番号２７４のアミノ酸２１４〜２５５を有する４−１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ（ＧＲＰＣ５Ｄ ＢＢｚ ＣＡＲ１８と呼ぶ）をコードする。配列番号４０３のヌクレオチド配列６〜８５６は、ヒトｓｃＦｖをコードする。配列番号４０３のヌクレオチド配列８６４〜１０７６は、膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ポリペプチドをコードする。配列番号４０３のヌクレオチド配列１０７７〜１２０２は、細胞内ドメインに含まれる４−１ＢＢポリペプチドをコードする。配列番号４０３のヌクレオチド配列１２０３〜１５４１は、細胞内ドメインに含まれるＣＤ３ζポリペプチドをコードする。配列番号４０３の他の部分を、表３６に示す。
Figure 0006919091
ある特定の実施形態では、単離された核酸分子は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とする、本開示のＣＡＲの機能的部分をコードする。本明細書で使用される「機能的部分」という用語は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とする、本開示のＣＡＲの、任意の部分、一部、または断片であって、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲ（親ＣＡＲ）の生物学的活性を保持する部分、一部、または断片を指す。例えば、機能的部分は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とする、本開示のＣＡＲの部分、一部、または断片であって、標的細胞を認識する能力、疾患、例えば、多発性骨髄腫を処置する能力を、親ＣＡＲと同様の程度に、同じ程度に、なおまたはより高い程度に保持する部分、一部、または断片を包摂する。ある特定の実施形態では、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とする、本開示のＣＡＲの機能的部分をコードする単離された核酸分子は、親ＣＡＲのうちの、例えば、約１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、および９５％、またはこれを超えるＣＡＲを含むタンパク質をコードし得る。
ＩＩＩ．免疫応答性細胞
本開示の主題は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含むＣＡＲを発現する免疫応答性細胞を提供し、ここで細胞外抗原結合ドメインは、上記のように、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する。免疫応答性細胞は、細胞がＣＡＲを発現するように本開示のＣＡＲで形質導入してもよい。本開示の主題はまた、腫瘍、例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）の処置のためにかかる細胞を使用する方法を提供する。本開示の主題の免疫応答性細胞は、リンパ系列の細胞であってもよい。リンパ系列は、Ｂ細胞、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含み、抗体の産生、細胞性の免疫系の調節、血液中の外来因子の検出、宿主に対して外来の細胞の検出、などを提供する。リンパ系列の免疫応答性細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、胚性幹細胞、および多能性幹細胞（例えば、リンパ系細胞が分化され得る細胞）が挙げられる。Ｔ細胞は、胸腺中で成熟し、かつ細胞媒介性免疫を主に担うリンパ球であり得る。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本開示の主題のＴ細胞は、任意の種類のＴ細胞、例としては、限定するものではないが、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（例としては、セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）、および２種のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）、調節性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδＴ細胞であってもよい。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現して、Ｔ調節性表現型を達成して維持する。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部であり、かつ先天性免疫応答の間に作用するリンパ球であってもよい。ＮＫ細胞は、標的細胞に対してそれらの細胞毒性効果を果たすのに、事前の活性化は必要とされない。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導し得るＴリンパ球のサブセットである。
本開示の主題の免疫応答性細胞は、多発性骨髄腫の処置のための、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦＶ、任意選択で架橋されるＦａｂ、またはＦ（ａｂ）２）を発現し得る。このような免疫応答性細胞は、多発性骨髄腫の処置のために、投与を必要とする被験体（例えば、ヒト被験体）に投与され得る。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞であっても、またはＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
本開示の免疫応答性細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドでさらに形質導入されてもよく、それによって、免疫応答性細胞は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲおよび少なくとも１つの共刺激リガンドを共発現するか、または共発現するように誘導される。Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲと少なくとも１つの共刺激リガンドとの間の相互作用は、免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）の完全な活性化に重要な非抗原特異的シグナルを提供する。共刺激リガンドとしては、限定するものではないが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーリガンド、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドのメンバーが挙げられる。ＴＮＦは、全身の炎症に関与し、かつ急性期反応を刺激するサイトカインである。その主な役割は、免疫細胞の調節にある。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、多数の共通の特徴を共有する。ほとんどのＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、短い細胞質断片および比較的長い細胞外領域を含有する、ＩＩ型膜貫通タンパク質（細胞外Ｃ末端）として合成される。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーとしては、限定するものではないが、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤ１５４、ＣＤ１３７Ｌ／４−１ＢＢＬ、ＴＮＦ−α、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦβ）／リンホトキシンアルファ（ＬＴα）、リンホトキシンベータ（ＬＴβ）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）／Ｂｌｙｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａｌｌ−１、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられる。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合もしくは接着プロセスに関与する細胞表面タンパク質および可溶性タンパク質の大きなグループである。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと構造特徴を共有する（それらは、免疫グロブリンドメイン（折り畳み）を有する）。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドとしては、限定するものではないが、ＣＤ８０、およびＣＤ８６（ともに、ＣＤ２８のリガンド）、ＰＤ−Ｌ１／（Ｂ７−Ｈ１）（ＰＤ−１のリガンド）が挙げられる。一部の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドが、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＰＤ−Ｌ１、およびそれらの組合せからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、４−１ＢＢＬである１つの共刺激リガンドで形質導入される。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、４−１ＢＢＬおよびＣＤ８０である、２つの共刺激リガンドで形質導入される。少なくとも１つの共刺激リガンドで形質導入されたＣＡＲは、その全体が参照によって援用される、米国特許第８，３８９，２８２号に記載される。
さらに、本開示の免疫応答性細胞は、免疫応答性細胞が、少なくとも１つのサイトカインを分泌し、同様に、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲを発現するように、少なくとも１つのサイトカインでさらに形質導入されてもよい。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、およびＩＬ−２１からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。
Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ヒトリンパ球またはＧタンパク質共役受容体を標的とするヒトリンパ球、例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．ら、２００３年 Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ３巻：３５〜４５頁（ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）において、Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．ら、２００６年 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４巻：１２６〜１２９頁（αおよびβヘテロ二量体を含む全長腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）において、Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．ら、２０００年 Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４巻：４９５〜５０４頁；Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．ら、２０００年 Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４巻：４３８２〜４３９２頁（腫瘍生検において腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）由来のリンパ球培養物を開示する）において、ならびにＤｕｐｏｎｔ，Ｊ．ら、２００５年 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６５巻：５４１７〜５４２７頁；Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｇ．Ａ．ら、２００３年 Ｂｌｏｏｄ １０２巻：２４９８〜２５０５頁（人工の抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）またはパルス樹状細胞を用いるｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖した抗原特異的末梢血白血球を選択的に開示する）において、開示されるものは、末梢ドナーリンパ球で用いられ得る。免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自家であっても、自家でなくても（例えば、同種であっても）、または操作された前駆体もしくは幹細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導されてもよい。
ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、１細胞あたり約１〜約４、約２〜約４、約３〜約４、約１〜約２、約１〜約３、または約２〜約３ベクターコピー数の本開示のＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）を標的とするＣＡＲを発現する。
ＣＴＬの未精製の供給源は、骨髄、胎児、新生児もしくは成人、または他の造血系細胞供給源、例えば、胎児肝臓、末梢血または臍帯血などの当該分野で公知のいずれであってもよい。細胞を分離するには種々の技術が用いられ得る。例えば、ネガティブ選択方法は、非ＣＴＬを最初に除去し得る。モノクローナル抗体が、特定の細胞系列に関連するマーカーならびに／またはポジティブ選択およびネガティブ選択の両方について分化の段階を同定するために特に有用である。
大きな割合の終末分化細胞が、比較的粗い分離によって最初に除去され得る。例えば、磁気ビーズ分離を使用して、多数の無関係の細胞を最初に除去し得る。好ましくは、少なくとも約８０％、通常は少なくとも７０％の総造血細胞が、細胞単離の前に除去される。
分離の手順としては、限定するものではないが、密度勾配遠心分離；リセッティング（ｒｅｓｅｔｔｉｎｇ）；細胞密度を改変する粒子へのカップリング；抗体でコーティングした磁気ビーズでの磁気分離；アフィニティークロマトグラフィー；補体および細胞毒素を含むがこれに限定されない、ｍＡｂに連結されるか、またはｍＡｂと組み合わせて使用される細胞毒性剤；ならびに固体マトリクス、例えば、プレート、チップに結合された抗体によるパンニング、エラトリエーションまたは任意の他の便利な技術が挙げられる。
分離および分析のための技術としては、限定するものではないが、種々の程度の洗練度、例えば、複数のカラーチャネル、低角および鈍角の光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルを有し得る、フローサイトメトリーが挙げられる。
細胞は、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）などの死細胞に会合する色素を用いることによって、死んだ細胞に対して選択され得る。好ましくは、細胞を、２％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）もしくは０．２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む培地、または任意の他の適切な、好ましくは無菌の等張性培地中に収集する。
ＩＶ．ベクター
免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞、ＣＴＬ細胞、ＮＫ細胞）の遺伝子改変は、実質的に均一な細胞組成物を、組換えＤＮＡ構築物または組換えＲＮＡ構築物で形質導入することによって達成され得る。ベクターは、宿主細胞ゲノムへのＤＮＡ構築物またはＲＮＡ構築物の導入のために用いられる、レトロウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター）であってもよい。例えば、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクター中にクローニングされてもよく、発現は、その内因性プロモーターから駆動されても、レトロウイルス長末端反復から駆動されても、または別の内部プロモーターから駆動されてもよい。
非ウイルスベクターまたはＲＮＡも同様に使用されてもよい。ランダム染色体組み込み、または標的化組み込み（例えば、ヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、および／または規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ：ＣＲＩＳＰＲ）を使用する）、または導入遺伝子発現（例えば、天然のもしくは化学改変されたＲＮＡを使用する）を使用してもよい。
Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲ発現細胞を提供するための細胞の最初の遺伝子改変のために、レトロウイルスベクターが、一般に、形質導入のために使用されるが、任意の他の適切なウイルスベクターまたは非ウイルス送達システムが使用されてもよい。細胞を引き続いて遺伝子改変して、少なくとも２つの共刺激リガンドを含む抗原提示複合体を含む細胞を提供するために、レトロウイルス遺伝子移入（形質導入）は、同様に有効であると判明している。レトロウイルスベクターおよび適切なパッケージング株の組合せもまた適切であり、ここでキャプシドタンパク質は、ヒト細胞に感染させるために機能性である。種々の広宿主性ウイルス生成細胞株が公知であり、これには限定するものではないが、ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒら（１９８５年）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５巻：４３１〜４３７頁）；ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒら（１９８６年）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６巻：２８９５〜２９０２頁）；およびＣＲＩＰ（Ｄａｎｏｓら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５巻：６４６０〜６４６４頁）が挙げられる。非広宿主性粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープおよび当該分野で公知の任意の他のもので偽型化された粒子もまた適切である。
可能な形質導入法としてはまた、細胞とプロデューサー細胞との直接共培養（例えば、Ｂｒｅｇｎｉら（１９９２年）Ｂｌｏｏｄ ８０巻：１４１８〜１４２２頁の方法による）、または適切な成長因子およびポリカチオンの有無でのウイルス上清のみもしくは濃縮されたベクターストックとの培養（例えば、Ｘｕら（１９９４年）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔ．２２巻：２２３〜２３０頁；およびＨｕｇｈｅｓら（１９９２年）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８９巻：１８１７頁の方法による）が挙げられる。
形質導入するウイルスベクターは、免疫応答性細胞において共刺激リガンド（例えば、４−１ＢＢＬおよびＩＬ−１２）を発現するために使用してもよい。好ましくは、その選択されたベクターは、高い感染効率、ならびに安定な組み込みおよび発現を示す（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８巻：４２３〜４３０頁、１９９７年；Ｋｉｄｏら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５巻：８３３〜８４４頁、１９９６年；Ｂｌｏｏｍｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１巻：６６４１〜６６４９頁、１９９７年；Ｎａｌｄｉｎｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２巻：２６３ ２６７頁、１９９６年；およびＭｉｙｏｓｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４巻：１０３１９頁、１９９７年を参照のこと）。使用され得る他のウイルスベクターとしては、以下が挙げられる：例えば、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、もしくはヘルペスウイルス（例えば、エプスタイン・バーウイルス）（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １５〜１４頁、１９９０年；Ｆｒｉｅｄｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４巻：１２７５〜１２８１頁、１９８９年；Ｅｇｌｉｔｉｓら、Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６巻：６０８〜６１４頁、１９８８年；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １巻：５５〜６１頁、１９９０年；Ｓｈａｒｐ、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ３３７巻：１２７７〜１２７８頁、１９９１年；Ｃｏｒｎｅｔｔａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３６巻：３１１〜３２２頁、１９８７年；Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２６巻：４０１〜４０９頁、１９８４年；Ｍｏｅｎ、Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ １７巻：４０７〜４１６頁、１９９１年；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７巻：９８０〜９９０頁、１９８９年；Ｌｅ Ｇａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９巻：９８８〜９９０頁、１９９３年；およびＪｏｈｎｓｏｎ、Ｃｈｅｓｔ １０７巻：７７Ｓ〜８３Ｓ頁、１９９５年のベクターもまた参照のこと）。レトロウイルスベクターは、特に十分に開発されており、臨床状況において使用されてきた（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ３２３巻：３７０頁、１９９０年；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号）。
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のＧタンパク質共役受容体（例えばＧＰＲＣ５Ｄ）標的化ＣＡＲを発現するベクターは、レトロウイルスベクター、例えば、２９３ｇａｌｖ９レトロウイルスベクターである。
非ウイルスアプローチはまた、細胞中でのタンパク質の発現のために用いられ得る。例えば、核酸分子は、リポフェクション（Ｆｅｉｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４巻：７４１３頁、１９８７年；Ｏｎｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７巻：２５９頁、１９９０年；Ｂｒｉｇｈａｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９８巻：２７８頁、１９８９年；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １０１巻：５１２頁、１９８３年）、アシアロオロソムコイド−ポリリシンコンジュゲーション（Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３巻：１４６２１頁、１９８８年；Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６４巻：１６９８５頁、１９８９年）の存在下で核酸を投与することによって、または手術条件下でのマイクロインジェクション（Ｗｏｌｆｆら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４７巻：１４６５頁、１９９０年）によって、細胞に導入され得る。遺伝子移入のための他の非ウイルス手段としては、ｉｎ ｖｉｔｒｏでリン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、およびプロトプラスト融合を使用するトランスフェクションが挙げられる。リポソームはまた、ＤＮＡを細胞に送達するために潜在的に有益であり得る。被験体の罹患した組織への正常な遺伝子の移植はまた、正常な核酸を培養可能な細胞タイプ（例えば、自家もしくは異種の初代細胞もしくはその後代）にｅｘ ｖｉｖｏで移入することによって達成され得、その後、細胞（またはその子孫）は、標的とした組織に注射されるか、または全身に注射される。組換え受容体はまた、トランスポザーゼもしくは標的化ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＴＡＬＥヌクレアーゼ）を使用して誘導してもよいし、または得てもよい。一過性の発現は、ＲＮＡエレクトロポレーションによって得てもよい。
ポリヌクレオチド治療法における使用のためのｃＤＮＡ発現は、任意の適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、もしくはメタロチオネインプロモーター）から誘導されてもよく、任意の適切な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１αエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節されてもよい。例えば、所望の場合、特定の細胞タイプにおいて遺伝子発現を優先的に誘導することが公知のエンハンサーを、核酸の発現を誘導するために使用してもよい。使用されるエンハンサーとしては、限定するものではないが、組織特異的エンハンサーまたは細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものが挙げられ得る。あるいは、ゲノムクローンを治療用構築物として使用する場合、調節は、コグネイト調節配列によって媒介されてもよいし、または望ましい場合、異種供給源に由来する調節配列（上記のプロモーターもしくは調節エレメントのうちのいずれかを含む）によって、媒介されてもよい。
得られた細胞は、改変されていない細胞についての条件と類似の条件下で成長させてもよく、それによって、改変された細胞が増大させられて、種々の目的のために用いられ得る。
Ｖ．ポリペプチドおよび類似体およびポリヌクレオチド
また、本開示の主題には、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）２）、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２８など、ポリペプチドまたはその断片、およびそれらをコードするポリヌクレオチド（免疫応答性細胞で発現される場合、それらの抗腫瘍活性を増強する方法で改変される）も含まれる。本開示の主題は、配列中で変更を生じることによってアミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法を提供する。このような変更は、ある特定の変異、欠失、挿入または翻訳後修飾を含んでもよい。本開示の主題はさらに、本開示の主題の任意の天然に存在するポリペプチドの類似体をさらに含む。類似体は、本開示の主題の天然に存在するポリペプチドとは、アミノ酸配列の差異によって、翻訳後修飾によって、またはその両方によって異なり得る。本開示の主題の類似体は、一般に、本開示の主題の天然に存在するアミノ酸配列のうちの全てまたは一部と少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはより高い同一性を示し得る。配列比較の長さは、少なくとも５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、７５個、１００個またはより多くのアミノ酸残基である。繰り返すと、同一性の程度を決定する例示的なアプローチにおいて、ｅ−３〜ｅ−１００の間の確率スコアが密接に関連した配列を示すＢＬＡＳＴプログラムを使用し得る。改変には、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの化学的誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、もしくはグリコシル化を含み；このような改変は、ポリペプチド合成もしくはプロセシングの間に、または単離改変酵素での処理の後に、生じ得る。類似体はまた、本開示の主題の天然に存在するポリペプチドとは、一次配列における変化によって異なり得る。これらとしては、天然および誘導性（例えば、照射もしくはエタンメチルスルフェートへの曝露によるか、またはＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、１９８９年、もしくはＡｕｓｕｂｅｌら、（前出）に記載されるとおりの部位特異的変異誘発による、ランダム変異誘発から生じる）の両方の遺伝子変異体が挙げられる。Ｌ−アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ−アミノ酸または天然に存在しないかもしくは合成のアミノ酸（例えば、ベータ（β）アミノ酸もしくはガンマ（γ）アミノ酸）を含む、環化ペプチド、分子、および類似体もまた、含まれる。
全長ポリペプチドに加えて、本開示の主題はまた、本開示の主題のポリペプチドもしくはペプチドドメインのうちのいずれか１つの断片を提供する。断片は、少なくとも５個、１０個、１３個、または１５個のアミノ酸であり得る。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも２０個の連続したアミノ酸、少なくとも３０個の連続したアミノ酸、または少なくとも５０個の連続したアミノ酸である。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも６０〜８０個、１００個、２００個、３００個またはより多くの連続したアミノ酸である。本開示の主題の断片は、当業者に公知の方法によって生成されてもよいし、または正常なタンパク質プロセシング（例えば、生物学的活性にとって必要とされない新生ポリペプチドからのアミノ酸の除去または選択的ｍＲＮＡスプライシングもしくは選択的タンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）から生じてもよい。
非タンパク質類似体は、本発明のタンパク質の機能活性を模倣するように設計された化学構造を有する。このような類似体は、本開示の主題の方法に従って投与される。このような類似体は、元のポリペプチドの生理学的活性を超え得る。類似体設計の方法は、当該分野で周知であり、類似体の合成は、免疫応答性細胞において発現される場合に得られる類似体が、その元のポリペプチドの抗新生物活性を増大させるように化学構造を改変することによる、かかる方法に従って行ってもよい。これらの化学的改変としては、限定するものではないが、代替のＲ基に置換すること、および参照ポリペプチドの特定の炭素原子における飽和の程度を変化させることが挙げられる。タンパク質類似体は、ｉｎ ｖｉｖｏでの分解に比較的抵抗性であり得、投与の際により長期の治療効果を生じる。機能活性を測定するためのアッセイとしては、限定するものではないが、以下の実施例に記載されるものが挙げられる。
本開示の主題によれば、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）２）、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２８）をコードするポリヌクレオチドを、コドン最適化によって修飾してもよい。コドン最適化は、天然に存在する遺伝子配列および組換え遺伝子配列の両方を変更して、任意の所定の発現系で可能な最高レベルの生産性を達成し得る。種々の段階のタンパク質発現に関与する因子としては、コドン適合性、ｍＲＮＡ構造および種々のｃｉｓエレメント（転写および翻訳で）が挙げられる。当業者に公知の任意の適切なコドン最適化方法または技術を使用して、本開示の主題のポリヌクレオチドを改変してもよく、これには、限定するものではないが、ＯＰＴＩＭＵＭＧＥＮＥ（商標）、Ｅｎｃｏｒ最適化およびＢｌｕｅ Ｈｅｒｏｎが挙げられる。
ＶＩ．投与
本開示の主題のＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲおよびそれを発現する免疫応答性細胞は、新形成を処置または予防するために、被験体に全身に提供されても、または直接提供されてもよい。ある特定の実施形態では、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲおよびそれを発現する免疫応答性細胞は、目的の器官（例えば、新形成に冒されている器官）に直接注射される。あるいは、またはさらに、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲおよびそれを発現する免疫応答性細胞は、目的の器官に、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって、間接的に提供される。増殖および分化の因子は、細胞および組成物の投与の前、その間、もしくはその後に提供されて、Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの生成を増大し得る。
本開示の主題のＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲおよびそれを発現する免疫応答性細胞は、任意の生理学的に受容可能なビヒクル中で、通常は脈管内に投与されてもよいが、それらはまた、骨または他の都合の良い部位に導入されてもよく、ここで上記細胞は、再生および分化に適切な部位を見出し得る（例えば、胸腺）。通常、少なくとも１×１０５個の細胞が投与され、最終的には、１×１０１０またはそれ超に達する。Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞を含む細胞集団は、精製された細胞集団を含み得る。当業者は、種々の周知の方法（例えば、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ））を使用して、細胞集団中の免疫応答性細胞のパーセンテージを容易に決定し得る。Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する遺伝子改変された免疫応答性細胞を含む細胞集団における純度の範囲は、約５０％〜約５５％、約５５％〜約６０％、および約６５％〜約７０％、約７０％〜約７５％、約７５％〜約８０％、約８０％〜約８５％；約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５〜約１００％であり得る。投与量は、当業者によって容易に調節され得る（例えば、純度の低下は、投与量の増大を要し得る）。免疫応答性細胞は、注射、カテーテルなどによって導入されてもよい。必要に応じて、インターロイキン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ６、ＩＬ−１１、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ならびに他のインターロイキン、コロニー刺激因子、例えば、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン、例えば、γインターフェロンが挙げられるが、これらに限定されない因子もまた、含まれてもよい。
本開示の主題の組成物は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞および薬学的に受容可能なキャリアを含む医薬組成物を含む。投与は、自家であっても、非自家であってもよい。例えば、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、１人の被験体から得られてもよく、同じ被験体もしくは異なる適合性の被験体に投与されてもよい。本開示の主題の末梢血由来Ｔ細胞またはそれらの後代（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏ由来の）は、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を含め、局所注射を介して投与され得る。本開示の主題の医薬組成物（例えば、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、それは一般に、注射用単位剤形（液剤、懸濁剤、エマルジョン）に製剤化されてもよい。
ＶＩＩ．製剤
本開示の主題の一般的Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、選択されたｐＨに緩衝化され得る滅菌液体調製物（例えば、等張性水性溶液、懸濁物、エマルジョン、分散物、もしくは粘性組成物）として、都合良く提供され得る。液体調製物は通常、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物より調製しやすい。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するには、いくぶんさらに都合がよい。粘性組成物は、他方では、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体組成物もしくは粘性組成物は、溶媒もしくは分散媒（例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物を含む）であり得るキャリアを含んでもよい。
滅菌注射用溶液は、必要量の適切な溶媒の中に、望ましい場合には種々の量の他の成分とともに、本開示の主題の一般的にＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞を含む組成物を組み込むことによって調製され得る。このような組成物は、適切なキャリア、希釈剤、または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどと混合してもよい。組成物はまた、凍結乾燥されてもよい。組成物は、投与経路および所望の調製物に依存して、補助物質、例えば、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝化剤、ゲル化剤または粘度増強添加剤、保存剤、香味剤、着色剤などを含有してもよい。標準テキスト、例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ」、第１７版、１９８５年（参照により本明細書に組み込まれる）を参考にして、過度の実験なく適切な調製物を調製し得る。
上記組成物の安定性および滅菌性を増強する種々の添加剤、例としては、抗菌性保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤が、添加されてもよい。微生物の活動の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって保証され得る。注射用薬剤形態の長期の吸収は、吸収を遅らせる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム（ａｌｕｍ ｉｎｕｒｎ ｍｏｎｏｓｔｅａｒａｔｅ）およびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本発明によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤もしくは添加剤は、本開示の主題の一般にＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞と適合性でなければならない。
上記組成物は等張性であり得、すなわち、それらは、血液および涙液と同じ浸透圧を有し得る。本開示の主題の組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、または他の薬学的に受容可能な剤、例えば、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールまたは他の無機溶質もしくは有機溶質を使用して達成してもよい。塩化ナトリウムは、特にナトリウムイオンを含有する緩衝液にとって好ましい。
上記組成物の粘度は、望ましい場合、薬学的に受容可能な増粘剤を使用して選択したレベルで維持してもよい。メチルセルロースは、容易にかつ経済的に入手可能であり、扱いやすいことから用いられ得る。他の適切な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが挙げられる。上記増粘剤の濃度は、選択される剤に依存し得る。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、適切なキャリアおよび他の添加剤の選択は、正確な投与経路および特定の剤形、例えば、液体剤形（例えば、上記組成物が溶液、懸濁物、ゲルまたは別の液体形態、例えば、徐放形態または液体充填形態（ｌｉｑｕｉｄ−ｆｉｌｌｅｄ ｆｏｒｍ）に製剤化される予定かどうか）の性質に依存する。
当業者は、上記組成物の構成成分が化学的に不活性であるように、かつ本開示の主題に記載されるとおりの免疫応答性細胞の生存性もしくは効力に影響を与えないように選択されるべきであることを認識する。これは、化学および薬学の原理に熟練した者にとって何ら問題を提示せず、または問題は、標準テキストを参照することによって、もしくは単純な実験（過度な実験を要しない）によって、本開示および本明細書で引用される文書から容易に回避され得る。
本開示の主題の免疫応答性細胞の治療的用途に関する１つの懸念は、最適な効果を達成するために必要な細胞の量である。投与すべき細胞の量は、処置されている被験体によって変動する。ある特定の実施形態において、約１０４〜約１０１０、約１０５〜約１０９または約１０６〜約１０８個の本開示の主題の免疫応答性細胞が、被験体に投与される。より有効な細胞は、さらに少数で投与されてもよい。一部の実施形態では、少なくとも約１×１０８、約２×１０８、約３×１０８、約４×１０８、および約５×１０８個の本開示の主題の免疫応答性細胞が、ヒト被験体に投与される。有効用量であるとみなされるものの正確な決定は、各被験体に個別の因子（彼らのサイズ、年齢、性別、体重、および特定の被験体の状態を含む）に基づき得る。投与量は、本開示および当該分野の知識から、当業者によって容易に確認され得る。
当業者は、本開示の主題の組成物中の、および本開示の主題の方法において投与される予定の細胞および任意選択の添加物、ビヒクル、および／もしくはキャリアの量を容易に決定し得る。代表的には、任意の添加物（活性な細胞（複数可）および／もしくは剤（複数可）に加えて）は、リン酸緩衝食塩水中に約０．００１重量％〜約５０重量％の量の溶液で存在し、活性成分は、マイクログラムもしくはミリグラム程度、例えば、約０．０００１重量％〜約５重量％、約０．０００１重量％〜約１重量％、約０．０００１重量％〜約０．０５重量％、約０．００１重量％〜約２０重量％、約０．０１重量％〜約１０重量％、または約０．０５重量％〜約５重量％で存在する。動物もしくはヒトに投与される予定の任意の組成物に関して、および任意の特定の投与方法に関して、毒性は、適切な動物モデル、例えば、マウスなどの齧歯類において致死用量（ＬＤ）およびＬＤ５０を決定することによって；ならびに上記組成物（複数可）の投与量、その中の構成成分の濃度および上記組成物（複数可）を投与するタイミング（適切な応答を誘発する）を決定することなどによって決定すべきである。このような決定は、当業者の知識、本開示および本明細書で引用される文書からの過度な実験を要しない。そして逐次的な投与の時間は、過度な実験なしに確認され得る。
ＶＩＩＩ．処置の方法
腫瘍微小環境。腫瘍は、免疫認識および排除から自分自身を防御するために、悪性細胞による一連の機構を含む、宿主免疫応答に敵対する微小環境を有する。この「敵対的な腫瘍微小環境」は、種々の免疫抑制因子、例としては、浸潤性制御性ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、免疫抑制性サイトカイン、例としては、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−β、ならびに活性化Ｔ細胞によって発現される免疫抑制性受容体（ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１）に対して標的されたリガンドの発現を含む。免疫抑制のこれらの機構は、耐容性の維持、および不適切な免疫応答を抑制することに役割を果たすが、腫瘍微小環境内では、これらの機構は、有効な抗腫瘍免疫応答を妨げる。集合的に、これらの免疫抑制性の因子は、標的とされた腫瘍細胞との遭遇の際に、養子導入されたＣＡＲ修飾Ｔ細胞の著しいアネルギーまたはアポトーシスのいずれかを誘導し得る。
腫瘍免疫学における課題。有効な腫瘍免疫は、腫瘍抗原の認識、および免疫エフェクター細胞による対抗のない腫瘍排除を必要とする。腫瘍抗原は、腫瘍によって提示され、かつ特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識され得るペプチドエピトープを含有しなければならない。プライミングされたＣＴＬは、十分な数まで増殖して、腫瘍部位へ遊走しなければならず、ここでＣＴＬは、エフェクターに成熟して、エフェクター機能を果たし、その機能は、ヘルパーＴ細胞によって増強され、Ｔｒｅｇおよび阻害性マクロファージによって弱められる。
操作されたＴリンパ球による標的化Ｔ細胞療法。Ｔ細胞操作は、初期の免疫療法アプローチで以前に観察された多くの欠陥を潜在的に解決するための革新的なストラテジーである。過去１年以内に、研究者らは、規定の抗原（それぞれ、ＣＤ１９およびＮＹ−ＥＳＯ−１）に対して標的化された自家の末梢血Ｔ細胞で得られた、再発した１７、１８、化学療法不応答白血病および転移性黒色腫１９〜２１における、劇的な完全寛解を報告した。
遺伝子アプローチについて原理的説明：細胞遺伝子操作を使用して、Ｔ細胞を腫瘍抗原に再び向かわせること、およびＴ細胞機能を増強することができる。遺伝子的Ｔ細胞改変のための１つの推進力は、Ｔ細胞生存および増殖を増強して、Ｔ細胞死、アネルギーおよび免疫抑制をオフセットする潜在力である。Ｔ細胞の遺伝子標的化はまた、正常組織の望ましくない破壊を妨げるように洗練され得る。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：腫瘍特異的Ｔ細胞は、ＣＡＲをコードする遺伝子の移入によって生成され得る２２〜２７。第二世代のＣＡＲは、Ｔ細胞を活性化できる細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＴ細胞の効力および持続性を増強するように設計された共刺激ドメインに融合された腫瘍抗原結合ドメインを含む２８。したがって、ＣＡＲの設計は、２つの別の複合体（ＴＣＲヘテロ二量体およびＣＤ３複合体）によって生理学的に生まれる２つの機能である、抗原認識とシグナル伝達とを調和させ得る。ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは通常は、マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）由来、または受容体もしくはそれらのリガンド由来である。したがって、抗原認識は、ＭＨＣ拘束ではなく２９、３０、したがって、同じＣＡＲを使用して、標的抗原を発現する任意の患者に適用可能である。ＣＡＲによる抗原結合は、細胞内ドメインにおける免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリン酸化を誘発し、細胞溶解の誘導、サイトカイン分泌、および増殖に必要なシグナル伝達カスケードを開始する。抗原認識のＭＨＣ拘束は、迂回されるので、ＣＡＲ標的化Ｔ細胞の機能は、ＨＬＡ下方制御または抗原プロセシング機構の欠陥によって影響されない。
増殖および生存のためのＴ細胞の要件：腫瘍特異的Ｔ細胞の増殖は、ｅｘ ｖｉｖｏで必要であり、かつｉｎ ｖｉｖｏでほぼ間違いなく望ましい。Ｔ細胞増殖は、絶対的なＴ細胞増殖および持続を可能にするためＴ細胞生存を伴うはずである。抗原への応答で増殖するために、Ｔ細胞は、２つのシグナルを受けなければならない。１つは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に提示される抗原性ペプチド／ＭＨＣ複合体のＴＣＲ認識によって提供される２６。もう一方は、ＣＤ２８受容体または４−１ＢＢ受容体などのＴ細胞共刺激受容体によって提供される。Ｔ細胞の細胞溶解活性は、付随する共刺激を必要としないが、以前に実証されたように、養子移入されたＴ細胞の抗腫瘍機能を維持するために共刺激シグナルの提供が決定的に必要である２４、２８、３１〜３３。
免疫モニタリング：リンパ球は、注入後、ダイナミックに進化する効果を示す多機能性の「薬物」である。抗原に遭遇した際、腫瘍特異的Ｔ細胞は、腫瘍の殺滅、Ｔ細胞増殖および他の免疫細胞の動員または免疫調節を誘発し得る種々のタンパク質を活性化するか、および／または放出する。したがって、どのタンパク質がどの細胞から、どの量で、およびどの時点で分泌されるかを測定することで、特定の患者が応答するか応答しない理由について深い洞察が得られ、より有効な試験を設計するための重要なフィードバックが提供される。これらのアッセイ系によって、臨床的アプローチの直接的および意味のある比較が可能になり、これによって、合理的な次世代の治療ストラテジーを設計することが助けられる。
処置のために、投与される量は、所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量は、１回の投与または一連の投与の中で提供されてもよい。有効量は、ボーラスで提供されても、または連続灌流（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）によって提供されてもよい。
「有効量」（または「治療有効量」）とは、処置の際に有益なまたは所望の臨床的結果をもたらすために十分な量である。有効量は、１または複数の用量で被験体に投与され得る。処置に関して、有効量とは、上記疾患の進行を和らげるか、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）か、安定化するか、逆転する（ｒｅｖｅｒｓｅ）か、または遅らせるか、そうでなければ上記疾患の病理学的転帰を軽減するために十分な量である。有効量は、一般には、症例毎を基準に医師によって決定され、当業者の技術範囲内である。有効量を達成するために適切な投与量を決定する場合に、いくつかの要因が代表的には考慮される。これらの要因としては、被験体の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度ならびに投与される免疫応答性細胞の形態および有効濃度が挙げられる。
抗原特異的Ｔ細胞を使用する養子免疫療法のために、約１０６〜約１０１０個（例えば、約１０９個）の範囲の細胞用量が、代表的には注入される。上記免疫応答性の細胞を被験体に投与し、その後分化した際に、１つの特異的抗原（例えば、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ））に対して特異的に指向される免疫応答性細胞が誘導される。Ｔ細胞の「誘導」は、例えば、欠失またはアネルギーによる、抗原特異的Ｔ細胞の不活性化を含み得る。不活性化は、自己免疫障害などにおける耐容性を確立または再確立するために特に有用である。本開示の主題の免疫応答性細胞は、当該分野で公知の任意の方法によって投与されてもよく、方法としては、限定するものではないが、胸膜投与、静脈内投与、皮下投与、節内投与、腫瘍内投与、髄腔投与、胸腔内投与、腹腔内投与および胸腺への直接投与が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、必要とする被験体に静脈内投与される。
本開示の主題は、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用する種々の方法を提供する。例えば、本開示の主題は、被験体における腫瘍負荷を低減する方法を提供する。１つの非限定的な実施例では、腫瘍負荷を低減する方法は、被験体に対して有効量の本開示の免疫応答性細胞を投与し、それによって被験体における腫瘍細胞死を誘導することを含む。本開示の免疫応答性細胞は、腫瘍細胞の数を低減するか、腫瘍の大きさを低下させるか、および／または被験体における腫瘍を根絶し得る。適切な腫瘍の非限定的な例としては、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症が挙げられる。ある特定の実施形態では、腫瘍は多発性骨髄腫である。
本開示の主題はまた、新形成を有する被験体の生存を増大または延長する方法を提供する。１つの非限定的な実施例では、新形成を有する被験体の生存を増大または延長する方法は、有効量の本開示の免疫応答性細胞を被験体に投与し、それによって、その被験体の生存を増大または延長することを含む。方法は、被験体における腫瘍負荷を低減または根絶し得る。本開示の主題はさらに、被験体における新形成を処置または予防するための方法であって、本開示の免疫応答性細胞を被験体に投与することを含む方法を提供する。
本明細書において使用する場合、「新形成」という用語は、細胞または組織の病理学的な増殖によって特徴付けられる疾患、および他の組織もしくは臓器へのその引き続く遊走または浸潤を指す。新形成の成長は典型的には、制御されず、かつ進行性であり、正常な細胞の増殖を誘発しないか、またはその停止を生じる条件下で生じる。新形成は、種々の細胞種、組織または臓器に影響し得、これには限定するものではないが、膀胱、結腸、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、ファローピウス管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、胸膜、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮および膣、またはその組織もしくは細胞種からなる群より選択される臓器が挙げられる。新形成としては、がん、例えば、肉腫、癌、またはプラズマ細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）が挙げられる。
本開示の主題の免疫応答性細胞を使用して成長が阻害され得るがんは、免疫療法に対して典型的には応答性であるがんを含む。処置のためのがんの非限定的な例としては、多発性骨髄腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症が挙げられる。ある特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
さらに、本開示の主題は、被験体におけるがん細胞に応答して免疫活性化サイトカイン産生を増大する方法を提供する。１つの非限定的な実施例では、方法は、被験体に対して本開示の免疫応答性細胞を投与することを含む。免疫活性化サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、インターフェロン調節性因子７（ＩＲＦ７）、およびそれらの組合せであってもよい。ある特定の実施形態では、本開示の主題のＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、および／またはＴＮＦ−αの生成を増大する。
治療に適切なヒト被験体は、典型的には、臨床診断基準で識別され得る２つの処置群を含む。「進行性疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する被験体とは、臨床的に測定可能な腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）を保有する被験体である。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍塊に基づいて検出され得る腫瘍である（例えば、触診、ＣＡＴスキャン、ソノグラム、マンモグラムまたはＸ線による；それ自体にある正の生化学的または組織病理学的マーカーは、この集団を特定するには不十分である）。本開示の主題で実現される医薬組成物をこれらの被験体に投与して、彼らの状態を緩和する目的で、抗腫瘍応答を惹起する。理想的には、結果として腫瘍塊の減少が生じるが、任意の臨床的改善が利益を構成する。臨床的改善には、腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）の進行のリスクもしくは速度の低下またはその病理学的結果における低減を含む。
適切な被験体の第２の群は、「アジュバント群」として当該分野で公知である。これらは、新形成（例えば、多発性骨髄腫）の既往があるが、別の方式の治療には反応性であった個体である。前の治療は、外科的切除、放射線療法および伝統的な化学療法を含んでもよいがそれに制限されない。結果として、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有さない。しかし、彼らは、もとの腫瘍部位の付近で、または転移のいずれかによって、疾患の進行のリスクがあると疑われる。この群は、高リスクの個体および低リスクの個体にさらに小分割され得る。小分割は、最初の処置の前またはその後に観察された特徴に基づいて行う。これらの特徴は、臨床の分野では公知であり、各々の異なる新形成について適切に規定される。高リスクのサブグループに代表的な特徴は、腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）が近隣の組織に侵襲したか、リンパ節の関与を示すものである。別の群は、新形成（例えば、多発性骨髄腫）に対する遺伝的素因を有するが、新形成（例えば、多発性骨髄腫）の臨床的徴候の証拠はまだない。例えば、乳がんに関連する遺伝子変異が陽性であると試験されたが、まだ出産年齢である女性は、予防的手術を行うのに適切となるまでは、新形成の出現を妨げるために予防的な処置で、本明細書に記載の抗原結合断片の１つまたは複数を投与されることが望ましい場合がある。
被験体は、進行型の疾患（例えば、多発性骨髄腫）を有する場合があり、この場合、処置の目的としては、疾患進行の改善もしくは逆転、および／または副作用の改善が挙げられ得る。被験体は、彼らが既に処置されている、状態の病歴を有し得、その場合、治療目的は代表的には、再発リスクの低下または遅延を含む。
さらなる改変を、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入して、免疫学的合併症のリスク（「悪性Ｔ細胞形質転換」として公知）、例えば、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、または健康な組織が腫瘍細胞と同じ標的抗原を発現する場合、ＧｖＨＤと同様の転帰をもたらすことを回避するかまたは最小限にすることができる。この問題に対する潜在的な解決は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞へ自殺遺伝子を操作することである。適切な自殺遺伝子としては、限定するものではないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ−ｔｋ）、誘導性カスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ−９）、および短縮型ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによってＴ細胞排除を可能にし得る。ＥＧＦＲｔは、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲの細胞内ドメインの３’末端に共有結合で結合されてもよい。自殺遺伝子は、本開示のＧタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲをコードする核酸を含むベクター内に含まれてもよい。この方法では、自殺遺伝子（例えば、プロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ−９を活性化し得るＡＰ１９０３）を活性化するために設計したプロドラッグの投与は、悪性Ｔ細胞形質転換（例えば、ＧＶＨＤ）の間、自殺遺伝子活性化ＣＡＲ発現Ｔ細胞中でアポトーシスを誘導する。
ＩＸ．キット
本開示の主題は、新形成（例えば、多発性骨髄腫）の処置または予防のためのキットを提供する。ある特定の実施形態において、上記キットは、Ｇタンパク質共役受容体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ）特異的ＣＡＲを単位剤形で含む免疫応答性細胞の有効量を含有する治療用または予防用の組成物を含む。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドをさらに発現する。ある特定の実施形態では、キットは、治療用または予防用のワクチンを含有する滅菌容器を備え；こなどの容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック、または当該分野で公知の他の適切な容器形態であってもよい。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイル、または医薬を保持するために適した他の材料から作製され得る。
望ましい場合、上記免疫応答性細胞は、新形成（例えば、多発性骨髄腫）を有するかまたは発症するリスクのある被験体に、上記細胞を投与するための指示と一緒に提供される。指示は、一般に、新形成（例えば、多発性骨髄腫）の処置または予防のための組成物の使用についての情報を含む。他の実施形態では、上記指示は、以下のうちの少なくとも１つを含む：治療剤の説明；新形成（例えば、多発性骨髄腫）またはその症状の処置もしくは予防のための投与スケジュールおよび投与；予防措置；警告；適応症；禁忌；過剰投与情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；および／または参考文献。指示は、容器（存在する場合）に直接印刷されてもよいし、あるいは容器に貼付されるラベルとしてもしくは別個のシート、パンフレット、カードまたは上記容器の中にもしくは容器と一緒に供給されるフォルダとして印刷されてもよい。
本発明の実施は、別段示されなければ、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術（これらは、当業者の十分に技術範囲内である）を用いる。このような技術は、文献（例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、１９８９年）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ、１９８４年）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、１９８７年）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉｒ、１９９６年）；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ、１９８７年）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｕｂｅｌ、１９８７年）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」、（Ｍｕｌｌｉｓ、１９９４年）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎ、１９９１年））の中で詳細に説明されている。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用可能であり、よって、本発明の作製および実施にあたって考慮され得る。特定の実施形態のために特に有用な技術は、以下の節において考察される。
以下の実施例は、当業者に本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療法をどのように作製および使用するかの完全な開示および説明を提供するために示され、本発明者らがその発明として解釈するものの範囲を限定する意図はない。
（実施例１）
種々の組織におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現
ヒトＧＰＲＣ５Ｄの発現は、がん細胞株エンサクロペディアおよびＢｉｏＧＰＳなどのデータベース中で遺伝子発現プロファイルを調べることによって、種々の悪性および正常な組織において評価した。図２に示すとおり、ヒトＧＰＲＣ５Ｄは、多発性骨髄腫において高度に発現されたが、他の悪性組織ではそうではなかった。正常な発現は、形質細胞に限定されていたようであった。この正常な細胞種の潜在的なＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞根絶は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を用いた本発明者らの患者経験に基づいて有意な有害効果はない可能性がある。生理学的な抗体生成がないことは、静脈内免疫グロブリン処置で対処することができる。
（実施例２）
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的２８ｚ ＣＡＲの構築
ＧＰＲＣ５Ｄに対する多数の固有の完全ヒトｓｃＦｖを生成し、これらのｓｃＦｖに基づくＣＡＲを生成した。複数のｓｃＦｖを、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する３Ｔ３細胞で完全ヒトｓｃＦｖファージライブラリー（＞６×１０１０ｓｃＦｖ）をスクリーニングすることによって同定した。１２の異なるファージライブラリーによる４つの独立したパンニングを、ＧＰＲＣ５Ｄ過剰発現の３Ｔ３細胞に対して行って、８０個の陽性のクローンを同定した。ＦＡＣＳスクリーニングの８０のクローンから、７２個の陽性クローンを同定した；陽性クローン率は９０％であった。配列決定後、３２個の固有のおよびＧＰＲＣ５Ｄ−３Ｔ３陽性の結合クローンを、７２個の配列決定した陽性クローンから見出した；固有のクローン率は、４５％であった。
ＥＴ１５０−１５１ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−１ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５２ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−２ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５５ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−５ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５８（または「ＥＴ１５０−８ ｓｃＦｖ」）ｓｃＦｖ、およびＥＴ１５０−１６８ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−１８ ｓｃＦｖ」）を使用して、それぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ２、５、８、および１８を生成した。これらのＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲは、同様の構造を有し、例えば、各々が、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ξポリペプチドおよび共刺激シグナル伝達領域（ＣＤ２８ポリペプチドを含む）を含む細胞内ドメインを、図１に示すように有する。これらのＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲの各々を、レトロウイルスベクター中にクローニングした。次いで、これらのウイルスベクターをＨＥＫ２９３ｇａｌｖ９ウイルスパッケージング細胞中に形質導入して、ＣＡＲ＋Ｔ細胞の生成のための安定なパッケージング株を生成した。
ヒトＴ細胞（健常ドナー由来の未選択（ＣＤ４およびＣＤ８）ヒトＴ細胞）を、Ｔ細胞がこれらのＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲを発現するように、これらのＧＰＲＣ５Ｄ−標的化２８ｚ ＣＡＲの各々を用いて形質導入した。
ヒトＧＰＲＣ５Ｄへの結合を介してヒトＴ細胞上でＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ１８の細胞表面発現を評価し、細胞表面検出は、図３に示されるようにフローサイトメトリーによって検証した。
（実施例３）
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的２８ｚ ＣＡＲの活性
本開示のＧＰＲＣ５Ｄ特異的２８ｚ ＣＡＲの抗腫瘍活性を評価した。ｉｎ ｖｉｔｒｏのデータによって、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的ＣＡＲが、ＭＭ細胞株を含むＧＰＲＣ５Ｄ提示細胞を特異的に殺滅することが示された。例えば、図４に示されるとおり、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的２８ｚ ＣＡＲ１８を発現するＴ細胞は、ＧＰＲＣ５Ｄを過剰発現する３Ｔ３細胞を殺滅した（ただし、別の抗原を過剰発現する３Ｔ３は制御しない）。図５に示すとおり、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的２８ｚ ＣＡＲ２、５、８、および１８を発現するＴ細胞は、ヒトＭＭ細胞株を殺滅した。
（実施例４）
抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体についてのスクリーニングデータ
ＦＡＣＳスクリーニング：図２４は、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的ファージ抗体クローン（ＥＴ１５０−１、ＥＴ１５０−２、ＥＴ１５０−５、ＥＴ１５０−８、ＥＴ１５０−１８）のＦＡＣＳ分析を示す。ファージクローンを、３Ｔ３−ＧＰＲＣ５Ｄ細胞株とインキュベートし、次いで抗Ｍ１３マウス抗体とインキュベートした。最終的に、ＡＰＣ標識した抗マウスＩｇＧ二次抗体を、再度洗浄した後に反応物に添加した。結合は、ＦＡＣＳによって測定して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表した。Ｍ１３ Ｋ０７ヘルパーファージとともにインキュベートした細胞、および細胞のみを陰性対照として使用した。
（実施例５）
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的ＢＢｚ ＣＡＲの構築
ＧＰＲＣ５Ｄに対する多数の固有の完全ヒトｓｃＦｖを生成して、これらのｓｃＦｖに基づくＣＡＲを、実施例２に記載のとおり生成した。ＥＴ１５０−１５１ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−１ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５２ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−２ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５５ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−５ ｓｃＦｖ」）、ＥＴ１５０−１５８ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−８ ｓｃＦｖ」）、およびＥＴ１５０−１６８ ｓｃＦｖ（または「ＥＴ１５０−１８ ｓｃＦｖ」）を使用して、それぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＢＢｚ ＣＡＲ１、２、５、８、および１８を生成した。これらのＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＢＢｚ ＣＡＲは、同様の構造を有し、例えば、各々が図６に示されるようにＣＤ８ａポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ξポリペプチドおよび共刺激シグナル伝達領域（４−１ＢＢポリペプチドを含む）を含む細胞内ドメインを有する。これらのＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＢＢｚ ＣＡＲの各々を、図７〜９、２６および２７に示されるように、ＳＦＧレトロウイルスベクター中にクローニングした。
（実施例６）
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の活性
図１０に示すとおり、ＧＰＲＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ８は、無関係に標的された４ｈ１１−２８ｚ ＭＵＣ１６標的化ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、ヒトＭＭ細胞株Ｌ３６３、ＮＣＬ−Ｈ９２９、およびＵ２６６を溶解した。観察されたＧＰＲＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ８によって示される細胞毒性は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的であった。なぜなら、これは、図１０に示されるように、ＧＰＲＣ５Ｄ陰性のＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞株を溶解しなかったからである。
（実施例７）
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の誘導
ＧＰＲＣ５Ｄ ２８ｚ ＣＡＲ８ Ｔ細胞と特にＭＭ細胞株との共培養は、Ｔ細胞活性化と一致したサイトカイン分泌プロファイルを誘導した。図１１は、ヒト腫瘍細胞株とＣＡＲ Ｔ細胞との２４時間の共培養後のＩＬ−２分泌を示す（Ｅ：Ｔ比は１：１）。リンパ形質細胞性リンパ腫（ＣＤ１９＋ ＧＰＲＣ５Ｄ−）とＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞（陽性対照）、およびＭＭ細胞株とＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ８ Ｔ細胞のみが、サイトカイン産生の増大を示した。ＩＦＮｇ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、ｓＣＤ４０Ｌ、ＧＭ−ＣＳＦが全て、同様の分泌プロファイルを有した（データ示さず）。
（実施例８）
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ１８ Ｔ細胞は、抗骨髄腫免疫応答を媒介した。１×１０７個のＵ２６６ヒト骨髄腫細胞株の細胞を、０日目にＮＳＧマウスにＩＶ注射した。４日目に、１×１０６個のＧＰＲＣ５Ｄ標的化またはＣＤ１９標的化第二世代ＣＡＲ Ｔ細胞をＩＶ注射した。１１日目の画像化（７日目 ｓ／ｐ ＣＡＲ Ｔ細胞注射）によって、無関係の（ＣＤ１９）標的化ＣＡＲ Ｔ細胞と異なり；ＧＰＲＣ５Ｄ Ａ標的化２８ｚ ＣＡＲ１８ Ｔ細胞は、抗腫瘍応答を媒介し得ることが示される。図１２を参照のこと。
（実施例９）
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の活性
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞が、ヒト骨髄腫細胞株（ＨＭＣＬ）を特異的に溶解する能力を試験した。ＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞またはＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ８ Ｔ細胞を、ＧＦＰ発現腫瘍細胞株ＳＥＴ２（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ＣＤ１９−ＧＰＲＣ５Ｄ−）；ＢＣＷＭ１（リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、ＣＤ１９−ＧＰＲＣ５Ｄ−）；Ｌ３６３（多発性骨髄腫（ＭＭ）、ＣＤ１９−ＧＰＲＣ５Ｄ＋）とともにインキュベートした。０時点で、ＧＦＰ＋腫瘍株のパーセントを、図１３Ａに示す。３６時間で、陽性対照のＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＧＦＰ＋ＬＰＬ株を特異的に殺滅し、同様に、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化２８ｚ ＣＡＲ８ Ｔ細胞は、ＧＦＰ＋ＭＭ株を特異的に殺滅した。図１３Ｂを参照のこと。
（実施例１０）
抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体のエピトープマッピング
４つの抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体：ＥＴ１５０−２、ＥＴ１５０−５、ＥＴ１５０−８、およびＥＴ１５０−１８ ｍｌｇＧ１。全ての実施例で使用される「ｍＩｇＧ１」によって、可変領域が完全にヒトであり、かつＦｃ部分がマウスＩｇＧ１であることが示される。表３７を参照のこと。
Figure 0006919091
標的タンパク質は、配列番号９７に記載のアミノ酸を有するヒトＧＰＲＣ５Ｄである。ヒトＧＰＲＣ５ＤのＮ末端領域は、配列番号９７のアミノ酸１〜２７を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ１（ＥＣＬ１）領域は、配列番号９７のアミノ酸８５〜９３を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ２（ＥＣＬ２）領域は、配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７を有する。ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ループ３（ＥＣＬ３）領域は、配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９を有する。
方法
クリップス（ｃｌｉｐｓ）技術の原理 −− ＣＬＩＰＳ技術は、ペプチドを規定の三次元構造に構造的に固定する。この結果、最も複雑な結合部位でさえ機能性の模倣が得られる。ＣＬＩＰＳ技術は、一重、二重または三重のループ構造、ならびにシート様およびらせん様折り畳みにペプチドライブラリーを成形するために現在慣用的に用いられている（図１４）。
コンビナトリアルクリップス（ｃｌｉｐｓ）ライブラリースクリーニングの詳細 −− ＣＬＩＰＳライブラリースクリーニングは、コンビナトリアルマトリクスデザインを使用する、最大１０，０００個の重複するペプチド構築物のライブラリーへの標的タンパク質の変換で開始する。固体キャリア上で、直鎖ペプチドのマトリクスを合成し、これを引き続き、空間的に規定されたＣＬＩＰＳ構築物に成形する（図１５）。正確な高次構造における不連続エピトープの両方の部分に相当する構築物が、高い親和性で抗体に結合し、これが検出されて定量される。不完全なエピトープを提示する構築物は、低い親和性で抗体に結合するが、エピトープを含有しない構築物は、全く結合しない。親和性情報を反復性のスクリーニングで使用して、エピトープの配列および高次構造を詳細に規定する。
ヒートマップ解析 −− ヒートマップはデータのグラフ表示であって、ここで二次元マップ中の変数によって取られた値が色として示される。二重ループのＣＬＩＰＳペプチドのために、このような二次元マップは、第１ループおよび第２ループの独立した配列由来であり得る。例えば、図１７に示される１６のＣＬＩＰＳペプチドの配列は、ループ１中の４つの固有の小配列（図１６の青色）およびループ２中の４つの固有の小配列（図１６の緑色）の効率的な並べ替え（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）である。したがって、観察されたＥＬＩＳＡのデータ（図１７Ａの赤色）は、４×４のマトリクスでプロットしてもよく、ここで各々のＸ座標は、第１ループの配列に相当し、各々のＹ座標は、第２ループの配列に相当する。例えば、ＣＬＩＰＳペプチドＣＬＳＳＥＲＥＲＶＥＤＬＦＥＹＥＣＥＬＬＴＳＥＰＩＦＨＣＲＱＥＤＣで観察されるＥＬＩＳＡ値（図４Ａで矢印で示される）は、図１７Ｂの第３行、第３列で見出され得る（矢印および赤い四角で示される）。可視化をさらに容易にするために、ＥＬＩＳＡ値を、連続勾配からの色で置き換えてもよい。この場合、極端に低い値は、緑色にして、極端に高い値は、赤色にして、平均値は、黒色にする（図１７Ｃを参照のこと）。上述の例に関しては、平均値は０．７１である。このカラーマップを、図１７Ｂに示すデータマトリクスに適用したとき、カラーヒートマップが得られる（図１７Ｄを参照のこと、もとのデータは、特に明らかにするためにさらに示している）。
ペプチドの合成 −− 標的分子のエピトープを再構築するために、ペプチドのライブラリーを合成した。アミノ官能化ポリプロピレン支持体を、独自の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）親水性ポリマー製剤によるグラフトと、続いてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）とＮヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とを使用するｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）との反応、および引き続くトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用するＢｏｃ基の切断によって得た。標準的なＦｍｏｃ−ペプチド合成を使用して、カスタム改変ＪＡＮＵＳリキッドハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によってアミノ官能化固体支持体上でペプチドを合成した。構造的模倣物の合成は、Ｐｅｐｓｃａｎの独自の足場上の化学連結ペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ：ＣＬＩＰＳ）技術を使用して行った。ＣＬＩＰＳ技術は、ペプチドを単一ループ、二重ループ、三重ループ、シート様折り畳み、らせん様折り畳み、およびそれらの組合せに構築することを可能にする。ＣＬＩＰＳの鋳型は、システイン残基に連結される。ペプチド中の複数のシステインの側鎖は、１つまたは２つのＣＬＩＰＳ鋳型にカップリングされた。例えば、Ｐ２ ＣＬＩＰＳの０．５ｍＭ溶液（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）を、重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解した。この溶液をペプチドアレイ上に添加した。ＣＬＩＰＳの鋳型は、ペプチドアレイ（３μｌのウェルを有する４５５ウェルのプレート）の固相結合ペプチド中に存在する２つのシステインの側鎖に結合した。ペプチドアレイを、溶液中で完全に覆ったまま、３０〜６０分間溶液中で穏やかに振盪した。最終的にペプチドアレイを、過剰のＨ２Ｏで徹底的に洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に１％ＳＤＳ／０．１％ベータ−メルカプトエタノールを含有する破壊緩衝液中で、７０℃で３０分間、超音波処理し、続いてさらに４５分間Ｈ２Ｏ中で超音波処理した。Ｔ３ ＣＬＩＰＳ保持ペプチドを同様の方法で作製したが、この場合、３つのシステインを用いた。
ＥＬＩＳＡスクリーニング −− 合成されたペプチドの各々に対する抗体の結合を、ＰＥＰＳＣＡＮベースのＥＬＩＳＡで試験した。ペプチドアレイは、一次抗体溶液とともに（４℃で一晩）インキュベートした。洗浄後、ペプチドアレイを、１／１０００希釈の適切な抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ）とともに２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２μｌ／ｍｌの３パーセントのＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）−カメラおよび画像処理システムで定量した。
データ処理−ＣＣＤカメラから得られた値は、標準の９６ウェルプレートＥＬＩＳＡリーダーと同様に、０〜３０００ｍＡＵの範囲であった。結果を定量して、Ｐｅｐｌａｂデータベースに記憶した。時折、ウェルに気泡が含有され、その結果偽陽性の値が生じ、カードは手動で検査して、気泡で生じるいずれの値も０とスコア付けした。
合成の品質管理 −− 合成されたペプチドの品質を確証するために、別のセットの陽性対照および陰性対照のペプチドを並行して合成した。これらを、抗体５７．９を用いてスクリーニングした（Ｐｏｓｔｈｕｍｕｓら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９９０年、６４巻：３３０４〜３３０９頁参照）。
結果
スクリーニング
抗体結合は、抗体の濃度、ならびにＥＬＩＳＡ緩衝液中の競合するタンパク質の量および性質を含む要因の組合せに依存する。また、プレコート条件（実験試料とのインキュベーションの前のペプチドアレイの特定の処理）は、結合に影響した。これらの詳細は、表３８に要約する。Ｐｅｐｓｃａｎ緩衝液およびプレコンディショニング（Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）（ＳＱ）のために、数は、相対量の競合タンパク質を示す（ウマ血清およびオボアルブミンの組合せ）。
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抗体ＥＴ１５０−２
中程度ストリンジェンシー条件下で試験した場合、抗体ＥＴ１５０−２は、全てのセットからのペプチドに強烈に（ａｖｉｄｌｙ）結合した（図１８）。累積データ解析によって、抗体が、ペプチドストレッチ１６ＣＤＡＥＧＰＷＧＩＩ２５（Ｎ−ターム）、１５７ＭＦＶＮＭＴＰＣ１６４（ＥＣＬ２）および２２９ＰＱＦＱＲＱＰＱＷ２３７（ＥＣＬ３）から構成される不連続エピトープを認識し、ここでペプチドストレッチ１６ＣＤＡＥＧＰＷＧＩＩ２５および２２９ＰＱＦＱＲＱＰＱＷ２３７単独で結合には十分であることが示される。
抗体ＥＴ１５０−５
高ストリンジェンシー条件下で試験した場合、抗体ＥＴ１５０−５は、全てのセットからのペプチドに強烈に結合した（図１９）。累積データ解析によって、抗体が、ペプチドストレッチ５ＣＩＥＳＴＧＤＹＦＬＬＣＤ１７（Ｎ−ターム）、８５ＮＱＱＴＡＰＶＲＹＦＬ９５（ＥＣＬ１）および１５７ＭＦＶＮＭＴＰＣ１６４（ＥＣＬ２）から構成される不連続エピトープを認識し、ここでペプチドストレッチ５ＣＩＥＳＴＧＤＹＦＬＣＤ１７単独で、結合には十分であることが示される。
抗体ＥＴ１５０−１８
高ストリンジェンシー条件下で試験した場合、抗体ＥＴ１５０−１８は、構造的に制約されたペプチドを含有する、セット４およびセット７由来のペプチドに結合した。直鎖ペプチドを含有するセットで有意な結合は記録されなかった（図２０）。累積データ解析によって、抗体は、ストレッチ１０ＧＤＹＦＬＬＣＤ１７（Ｎ−ターム）、１５７ＭＦＶＮＭＴＰＣＱＬＮ１６７（ＥＣＬ２）および２２７ＧＮＰＱＦＱＲＱＰＱＷ２３７（ＥＣＬ３）から構成される不連続エピトープを認識することが示される。ペプチドストレッチ１０ＧＤＹＦＬＬＣＤ１７および２２７ＧＮＰＱＦＱＲＱＰＱＷ２３７は、エピトープコアに相当する。なぜなら両方のペプチドストレッチが結合について別々に十分であるからである。
抗体ＥＴ１５０−８
高ストリンジェンシー条件下で試験した場合、抗体ＥＴ１５０−８は、セット２を除いて全てのセット由来のペプチドに結合した（図２１）。累積データ解析によって、抗体が、ペプチドストレッチ１５ＬＣＤＡＥＧＰＷＧ２３（Ｎ−ターム）および２３０ＱＦＱＲＱＰＱＷＤＤＰＶＶＣ２４３（ＥＣＬ３）から構成される不連続エピトープを認識し、ここでペプチドストレッチ１５ＬＣＤＡＥＧＰＷＧ２３は、これ単独で結合に十分であるので、エピトープの主要部分であることが示される。さらに、セット１（直線）およびセット４（ループ）で得られた結果の比較によって、エピトープ模倣物に対する構造的制約の導入が、ペプチドの結合を、特に、配列２３０ＱＦＱＲＱＰＱＷＤＤＰＶＶＣ２４３を含むペプチドの場合に、増強することが示される。
結論
試験された全ての抗体が、Ｐｅｐｓｃａｎアレイを使用してマッピングされた、不連続エピトープを認識した。コアの仮定の（ｔｅｎｔａｔｉｖｅ）エピトープを表３９に列挙する。全ての抗体が１または２つのＥＣＬ由来の領域と組み合わせてタンパク質のＮ末端で重複する領域を共通して認識した。２つの抗体ＥＴ１５０−１８およびＥＴ１５０−８は、抗体結合を支持するための構造的制約の要件を示しており、これによって、これらの２つの抗体が、不連続エピトープを認識するだけでなく、高次構造エピトープも認識することが示唆される。抗体ＥＴ１５０−２およびＥＴ１５０−５は、直鎖ペプチドとループのペプチドとの間のペプチド結合において顕著な相違を示さなかった。
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図２２は、ＧＰＣＲの全体的な組織化に関する研究の結果の図示である。Ｎ末端は高度に可塑性であり、組織立っていないので、Ｎ末端は、ＥＣＬと一過性に相互作用して、不連続な免疫優勢領域を形成する可能性が高い。
ペプチド結合における相違および共通性は、図２３における散布図解析で図示され得る。上の左角および下の右角のデータポイントは、結合の相違を指す。有意なエピトープの重複にもかかわらず、個々の抗体のエピトープの微細な特異性は、かなりの程度まで異なる。
（実施例１１）
抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体の結合親和性
図２５は、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的ファージ抗体クローン（ＥＴ１５０−２、ＥＴ１５０−５、ＥＴ１５０−８、ＥＴ１５０−１８）のＦＡＣＳ解析を示す。各々の抗体（ＥＴ１５０−２、ＥＴ１５０−５、ＥＴ１５０−８、ＥＴ１５０−１８）を、３Ｔ３細胞または３Ｔ３−ＧＰＲＣ５Ｄ細胞とともに１０または１ｕｇ／ｍＬで、次いで、抗Ｍ１３マウス抗体とともにインキュベートした。最終的にＰＥ標識した抗マウスＩｇＧ二次抗体を反応物に添加した。結合は、ＦＡＣＳによって測定し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表した。二次抗体単独、ＥＴ９０１ ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照とインキュベートした細胞、および細胞のみを、陰性対照として用いた。
前述の本開示の主題は、理解の明確化の目的のために図および実施例によって幾分か詳細に記載してきたが、詳細な説明および実施例は、本開示の主題の範囲を制限すると解釈されるべきではない。本明細書で言及される全ての特許および科学文献の開示は、その全体が参照によって明確に援用される。
参考文献
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前述の説明から、本明細書で記載される発明を種々の使用法および条件に適合させるために、バリエーションおよび改変を行ってもよいことは、明らかである。このような実施形態はまた、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
本明細書で言及される受託番号または参照番号によって引用される全ての特許および刊行物および配列は、あたかも各独立した特許および刊行物および配列が、参照によって具体的にかつ個々に援用されると示されるのと同程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (96)

  1. Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号２０８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに、
    配列番号２１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
    を含む、ＣＡＲ。
  2. Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号２１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに、
    配列番号２１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
    を含む、ＣＡＲ。
  3. Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号２２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに、
    配列番号２２３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
    を含む、ＣＡＲ。
  4. Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号２２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに、
    配列番号２２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２３１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
    を含む、ＣＡＲ。
  5. 前記重鎖可変領域が、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含み；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  6. 前記重鎖可変領域が、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含み；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のＣＡＲ。
  7. 前記重鎖可変領域が、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含み；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号６６に記載のアミノ酸を含む、請求項３に記載のＣＡＲ。
  8. 前記重鎖可変領域が、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含み；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載のＣＡＲ。
  9. 前記細胞外抗原結合ドメインが、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域との間にリンカーを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  10. 前記細胞外抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１から９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  11. 前記細胞外抗原結合ドメインが、ヒトｓｃＦｖである、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  12. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、または配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０または１１に記載のＣＡＲ。
  13. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  14. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  15. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  16. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  17. 前記細胞外抗原結合ドメインが、任意選択で架橋されるＦａｂである、請求項１から９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  18. 前記細胞外抗原結合ドメインがＦ（ａｂ）２である、請求項１から９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  19. 前記ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ）２のうちの１つまたは複数が、異種配列との融合タンパク質内に含まれて、前記細胞外抗原結合ドメインを形成する、請求項１０から１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  20. 前記ＣＡＲの前記細胞外抗原結合ドメインが、ＧＰＲＣ５Ｄに、１×１０−９Ｍ〜３×１０−６Ｍの結合アフィニティー（Ｋｄ）で結合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  21. シグナルペプチドが、前記細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に共有結合によって結合される、請求項１から２０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  22. 前記ＧＰＲＣ５Ｄが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  23. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１〜２７を含む、Ｎ末端領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸８５〜９３を含む、ＥＣＬ１領域内のエピトープ領域、配列番号９７のアミノ酸１４５〜１６７を含む、ＥＣＬ２領域内のエピトープ領域、および配列番号９７のアミノ酸２２６〜２３９を含む、ＥＣＬ３領域内のエピトープ領域からなる群から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのエピトープ領域に結合する、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  24. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１６〜２３を含むエピトープ領域に結合する、請求項１、３、５、７、９から１３、１５、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  25. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５〜２３を含むエピトープ領域に結合する、請求項３、７、９から１２、１４、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  26. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１６〜２５を含むエピトープ領域に結合する、請求項１、５、９から１３、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  27. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１０〜１７を含むエピトープ領域に結合する、請求項２、４、６、８から１２、１４、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  28. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸５〜１７を含むエピトープ領域に結合する、請求項２、６、９から１２、１８、および２１から２７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  29. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸８５〜９５を含むエピトープ領域に結合する、請求項２、６、９から１２、１４、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  30. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６４を含むエピトープ領域に結合する、請求項１、２、４から６、８から１４、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  31. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸１５７〜１６７を含むエピトープ領域に結合する、請求項４、８から１２、および１６から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  32. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、請求項１、３から５、７から１３、および１５から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  33. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２２９〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、請求項１、４、５、８から１３、および２０から２７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  34. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２３０〜２４３を含むエピトープ領域に結合する、請求項３、７、９から１２、１５、および１７から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  35. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号９７のアミノ酸２２７〜２３７を含むエピトープ領域に結合する、請求項４、８から１２、および１６から２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  36. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド、またはこれらの組合せを含む、請求項１から３５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  37. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含む、請求項３６に記載のＣＡＲ。
  38. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、請求項３６に記載のＣＡＲ。
  39. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、請求項１から３８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  40. 前記細胞内ドメインが、少なくとも１つのシグナル伝達領域をさらに含む、請求項１から３９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  41. 前記少なくとも１つのシグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド、またはこれらの組合せを含む、請求項４０に記載のＣＡＲ。
  42. 前記少なくとも１つのシグナル伝達領域が、共刺激シグナル伝達領域である、請求項４０または請求項４１に記載のＣＡＲ。
  43. 前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ−１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含む、請求項４２に記載のＣＡＲ。
  44. 前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、請求項４２または請求項４３に記載のＣＡＲ。
  45. 前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、４−１ＢＢポリペプチドを含む、請求項４２または請求項４３に記載のＣＡＲ。
  46. （ａ）前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、または、（ｂ）前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢポリペプチドを含む、請求項４０から４５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  47. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢポリペプチドを含む、請求項４０から４３、４５および４６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  48. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢポリペプチドを含む、請求項４０から４３、および４５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  49. 組換えにより発現させた、請求項１から４８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  50. ベクターから発現させた、請求項１から４９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  51. 前記ベクターが、γ−レトロウイルスベクターである、請求項５０に記載のＣＡＲ。
  52. 前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項５０に記載のＣＡＲ。
  53. 請求項１から５２のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む免疫応答性細胞。
  54. 前記ＣＡＲを形質導入された、請求項５３に記載の免疫応答性細胞。
  55. 前記ＣＡＲを、前記免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現させる、請求項５３または請求項５４に記載の免疫応答性細胞。
  56. 少なくとも１つの共刺激リガンドを発現させるように、該少なくとも１つの共刺激リガンドがさらに形質導入された、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  57. 前記少なくとも１つの共刺激リガンドが、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項５６に記載の免疫応答性細胞。
  58. 少なくとも１つのサイトカインを分泌するように、該少なくとも１つのサイトカインがさらに形質導入された、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  59. 前記少なくとも１つのサイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項５８に記載の免疫応答性細胞。
  60. Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系始源細胞、Ｔ細胞前駆細胞、および多能性幹細胞であってそれからリンパ系細胞が分化しうる多能性幹細胞からなる群から選択される、請求項５３から５９のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  61. 請求項１から５２のいずれか一項に記載のＣＡＲを含むＴ細胞。
  62. 請求項１から５２のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸分子。
  63. 配列番号３９７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子
  64. 配列番号３９８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  65. 配列番号３９９に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  66. 配列番号４００に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  67. 配列番号４０２に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  68. 配列番号４０３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  69. 配列番号４０７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  70. 配列番号４０８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載の核酸分子。
  71. 請求項６２から７０のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。
  72. 前記ベクターが、γ−レトロウイルスベクターである、請求項７１に記載のベクター。
  73. 前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項７１に記載のベクター。
  74. 請求項６２から７０のいずれか一項に記載の核酸分子を発現する宿主細胞。
  75. Ｔ細胞である、請求項７４に記載の宿主細胞。
  76. 有効量の、請求項５３から６１のいずれか一項に記載の細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  77. 新形成を処置するためのものである、請求項７６に記載の医薬組成物。
  78. 前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、請求項７７に記載の医薬組成物。
  79. 前記新形成が、多発性骨髄腫である、請求項７８に記載の医薬組成物。
  80. 被験体における腫瘍負荷を軽減するための、請求項５３から６１のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
  81. 腫瘍細胞の数を低減させる、請求項８０に記載の組成物。
  82. 腫瘍サイズを低減させる、請求項８０に記載の組成物。
  83. 前記被験体における前記腫瘍を根絶する、請求項８０に記載の組成物。
  84. 前記腫瘍が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、請求項８０から８３のいずれか一項に記載の組成物。
  85. 前記腫瘍が、多発性骨髄腫である、請求項８４に記載の組成物。
  86. 前記被験体が、ヒトである、請求項８０から８５のいずれか一項に記載の組成物。
  87. 前記免疫応答性細胞が、Ｔ細胞である、請求項８０から８６のいずれか一項に記載の組成物。
  88. 新形成を有する被験体の生存を延長または延伸させるための、請求項５３から６１のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
  89. 前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、請求項８８に記載の組成物。
  90. 前記新形成が、多発性骨髄腫である、請求項８９に記載の組成物。
  91. 前記被験体における腫瘍負荷を軽減または根絶する、請求項８８から９０のいずれか一項に記載の組成物。
  92. Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）に結合する、免疫応答性細胞を生成するための方法であって、該免疫応答性細胞に、請求項１から５２のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を導入するステップを含む方法。
  93. 新形成を処置するためのキットであって、請求項５３から６１のいずれか一項に記載の細胞を含むキット。
  94. 前記新形成を処置するための、前記細胞の使用についての指示書をさらに含む、請求項９３に記載のキット。
  95. 前記新形成が、多発性骨髄腫またはワルデンストレームマクログロブリン血症である、請求項９３または請求項９４に記載のキット。
  96. 前記新形成が、多発性骨髄腫である、請求項９５に記載のキット。
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