JP6829565B2 - 尿臭抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、尿臭抑制剤に関する。

近年、下水道整備の向上により、トイレにおける便と尿が長期間接触することにより発生する強烈なアンモニア臭の問題は減少傾向にある。その反面、近年では、臭いの強度は弱いものの、トイレに飛び散った尿や、使用済みおむつから発する尿臭が問題にされている。

特許文献１には、飛び散って乾燥した尿や、使用後放置したおむつから発する尿臭に対する最も寄与の高い成分がｐ−クレゾールであることが記載されている。また特許文献１には、ｐ−クレゾールと、それ以外の炭素数６〜１０のフェノール化合物、例えば、フェノール、ジメチルフェノール、メトキシフェノール、メトキシビニルフェノール、ジヒドロキシベンゼンとの組成物により、当該尿臭を再現できることが記載されている。また、菌が産生するβ−グルクロニダーゼが尿に作用すると、フェノール、ｐ−クレゾール、４−ビニル−２−メトキシ−フェノール、４−ビニルフェノール、２−メトキシ−１，３−ベンゼンジオール、１，４−ベンゼンジオール、１，３−ベンゼンジオール、インドール等の成分が尿中に増加し、尿臭強度を顕著に増加させることが知られている（特許文献２）。これらの成分は尿臭に寄与の高い成分であると考えられている。

最近、標的とする悪臭に対する嗅覚受容体の活性を特異的に阻害することによって、該悪臭を抑制する方法が提供された（例えば、特許文献３）。こうしたアンタゴニスト物質による受容体活性阻害に基づくにおいの抑制または変調のメカニズムは、嗅覚受容体アンタゴニズムと呼ばれる。嗅覚受容体アンタゴニズムによるにおいの抑制または変調は、香水や芳香剤等の別の強いにおいを付加することによる消臭方法と異なり、標的とする悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の強いにおいによる不快感が生じることもないことから、好ましい消臭手段である。

特許文献３には、尿臭原因物質であるｐ−クレゾールまたは２−メトキシ−４−ビニルフェノールに応答する嗅覚受容体として、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ４Ｓ２、ＯＲ５Ｋ１、ＯＲ５Ｐ３、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ９Ｑ２、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７が開示され、これらの嗅覚受容体の応答を抑制することによって、尿臭を抑制することができることが記載されている。

アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルは香り物質である。特許文献４、５には、香料の混合物を悪臭抑制に用いることができ、その中にアルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ等の揮発性アルデヒドやメチルセドリルエーテルを加えてもよいことが開示されている。特許文献６には、チモールがスカトール臭またはインドール臭を抑制することが開示されている。特許文献７には、チモールを含有するタイム粉末を含むタバコフィルタがタバコ特有の臭いを減少させたことが開示されている。しかし、現在まで、これらの物質がｐ−クレゾール、２−メトキシ−４−ビニルフェノール等の尿臭原因物質の臭いを抑制したという報告はない。

特許５３６８６９６号公報 国際公開公報第２００９／０３７８６１号 特開２０１５−２１１６６７号公報 特許５８６６１７０号公報 特許５３６２１９９号公報 特許５７９８３８２号公報 特許５３２３０６４号公報

本発明は、尿臭またはその原因物質による臭いの抑制剤を提供することに関する。

本発明者は、尿臭受容体であるＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１の応答を抑制する物質が、尿臭原因物質２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールによる臭いを抑制することができることを見出した。

したがって、本発明は、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、尿臭抑制剤を提供する。
また本発明は、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤を提供する。
また本発明は、メチルセドリルエーテルを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤を提供する。

本発明により提供される尿臭抑制剤は、尿臭原因物質２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体の応答を抑制することで、これらの物質の臭いを抑制することができる。

種々の濃度の２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体発現細胞の応答。ｎ＝３〜４、エラーバー＝±ＳＥ。 嗅覚受容体発現細胞の尿臭原因物質応答に対する試験物質の抑制効果。横軸に試験物質の濃度を、縦軸に臭い物質（２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール）単独刺激への応答強度を１００％として、臭い物質と試験物質とを併用したときの受容体発現細胞の応答（％）を表す。ｎ＝２〜３、エラーバー＝±ＳＤ。 試験物質の２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール臭抑制効果の官能評価（ｎ＝７〜９）。Ｃｏｎｔｒｏｌ：２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールのみ、Ｖｅｈｉｃｌｅ：ミネラルオイルのみ。

本明細書において、「嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制」とは、目的の臭い分子と他の分子をともに適用することにより、当該他の分子によって目的の臭い分子に対する受容体活性を阻害し、結果的に個体に認識される臭いを抑制する手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制は、同様に他の分子を用いる手段であっても、芳香剤による消臭のように、目的の臭いを香料の香気によって隠蔽する手段とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制の一例は、アンタゴニスト等の嗅覚受容体の活性を阻害する物質を使用するケースである。特定の臭いをもたらす臭い分子の受容体にその活性を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該臭い分子に対する活性が抑制されるため、最終的に個体に知覚される臭いを抑制することができる。

本明細書において、「尿臭」とは、好適には、放尿もしくは採尿後時間が経った尿または飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、あるいは使用後放置したおむつから発せられる尿の臭いである。これらの尿中には、その中に含まれる菌が持つ酵素βグルクロニダーゼの作用によって生成された２−メトキシ−４−ビニルフェノールおよびｐ−クレゾールが含まれている。また好適には、本明細書における「尿臭」は、βグルクロニダーゼ処理された尿またはその抽出物の臭いである。

本明細書において、「２−メトキシ−４−ビニルフェノールによる臭い（または２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭）」および「ｐ−クレゾールによる臭い（またはクレゾール臭）」とは、各々、２−メトキシ−４−ビニルフェノールおよびｐ−クレゾールによりもたらされる臭いである。２−メトキシ−４−ビニルフェノールおよびｐ−クレゾールは、放尿もしくは採尿後時間が経った尿、またはβグルクロニダーゼ処理された尿に含有されている。

本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体またはそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。

本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ ｓｉｚｅ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。

本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。

ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７およびＯＲ２Ｗ１は、いずれもヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。ＯＲ１０Ｇ４は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５２３１７１７１として登録されている。ＯＲ１０Ｇ４は、配列番号１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ１０Ｇ７は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５２２１８８２９として登録されている。ＯＲ１０Ｇ７は、配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ２Ｗ１は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：１６９２３４７８８として登録されている。ＯＲ２Ｗ１は、配列番号５で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。

後述の実施例に示すとおり、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７は、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対して濃度依存的な活性化を示す、２−メトキシ−４−ビニルフェノールの受容体である（図１）。また、嗅覚受容体ＯＲ２Ｗ１は、ｐ−クレゾールに対して濃度依存的な活性化を示す、ｐ−クレゾールの受容体である（図１）。

したがって、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１の応答を抑制する物質は、２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対するこれらの嗅覚受容体の応答の抑制に基づく嗅覚受容体アンタゴニズムにより、個体の尿臭の認識に変化を生じさせ、尿臭を抑制することができる。好適には、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７応答を抑制する物質は、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対するこれらの嗅覚受容体の応答の抑制に基づく嗅覚受容体アンタゴニズムにより、個体の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の認識に変化を生じさせ、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制することができる。また好適には、ＯＲ２Ｗ１の応答を抑制する物質は、ｐ−クレゾールに対する当該受容体の応答の抑制に基づく嗅覚受容体アンタゴニズムにより、個体のｐ−クレゾール臭の認識に変化を生じさせ、ｐ−クレゾール臭を抑制することができる。

したがって、一態様において、本発明は、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１に対するアンタゴニストを有効成分とする、尿臭の抑制剤を提供する。

別の一態様において、本発明は、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７に対するアンタゴニストを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制剤を提供する。

別の一態様において、本発明は、ＯＲ２Ｗ１に対するアンタゴニストを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭の抑制剤を提供する。

本発明で使用されるＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストとしては、下記の化合物が挙げられる：
アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ（Ａｌｄｅｈｙｄｅ Ｃ−１２ ＭＮＡ［２−Ｍｅｔｈｙｌｕｎｄｅｃａｎａｌ］）；
ベンゾイン シアム（Ｂｅｎｚｏｉｎ Ｓｉａｍ）；
チモール（Ｔｈｙｍｏｌ［５−Ｍｅｔｈｙｌ−２−（１−ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）−ｐｈｅｎｏｌ］）；および
メチルセドリルエーテル（Ｍｅｔｈｙｌ Ｃｅｄｒｙｌ Ｅｔｈｅｒ［（３Ｒ，３ａＳ，６Ｓ，７Ｒ，８ａＳ）−Ｏｃｔａｈｙｄｒｏ−６−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，６，８，８，−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１Ｈ−３ａ，７−ｍｅｔｈａｎｏａｚｕｌｅｎｅ］）。

より詳細には、上記の化合物は、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７、ＯＲ２Ｗ１、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニストである。本明細書において「ＯＲ１０Ｇ４と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。また本明細書において「ＯＲ１０Ｇ７と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。また本明細書において「ＯＲ２Ｗ１と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。

本発明で使用されるＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドのアンタゴニストとしては、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールが挙げられる。好ましくは、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡまたはベンゾイン シアムは、ＯＲ１０Ｇ７またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドのアンタゴニストとして使用され得、チモールは、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドのアンタゴニストとして使用され得る。本発明で使用されるＯＲ２Ｗ１またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドのアンタゴニストとしては、メチルセドリルエーテルが挙げられる。

上記に挙げたアンタゴニスト化合物は、これまで香料素材として知られていたが、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１に対するアンタゴニスト作用により該受容体の尿臭原因物質応答を抑制することや、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭を選択的に抑制する機能があることは知られていなかった。

上記に挙げたアンタゴニスト化合物は、いずれも市販のものを購入することができる（「合成香料 化学と商品知識」増補改訂版、印藤元一著、化学工業日報社、２００５年３月発行を参照）。例えば、上記アンタゴニスト化合物は、Ｐａｙａｎ Ｂｅｒｔｒａｎｄ Ｓ．Ａ．、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ、花王株式会社 などから入手することが可能である。あるいは、化学合成によって、該市販品と同一物質またはそれを含む組成物を製造することが可能である。

本発明の一態様において、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストは、尿臭を抑制するための有効成分として使用され得る。したがって、本発明の尿臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する。例えば、本発明の尿臭抑制剤の有効成分は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種、例えばいずれか単独もしくはいずれか２種以上の組み合わせであり得る。あるいは、本発明の尿臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種の化合物から本質的に構成され得る。

好ましい態様において、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストは、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制するための有効成分として使用され得る。したがって、本発明の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する。例えば、本発明の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤の有効成分は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種、例えばいずれか単独もしくはいずれか２種以上の組み合わせであり得る。あるいは、本発明の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種の化合物から本質的に構成され得る。

別の好ましい態様において、上記に挙げたＯＲ２Ｗ１アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭を抑制するための有効成分として使用され得る。したがって、本発明のｐ−クレゾール臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ２Ｗ１アンタゴニストを有効成分として含有する。あるいは、本発明のｐ−クレゾール臭抑制剤は、上記に挙げたＯＲ２Ｗ１アンタゴニストから本質的に構成され得る。

一実施形態において、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニスト（以下、本発明のアンタゴニストともいう）は、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭を抑制するための化合物もしくは組成物に、該臭いを抑制するための有効成分として含有され得る。あるいは、本発明のアンタゴニストは、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制剤の製造のため、あるいは尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭を抑制するための化合物もしくは組成物の製造のために使用することができる。尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭を抑制するための化合物もしくは組成物の例としては、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤などが挙げられる。

一実施形態において、本発明のアンタゴニストは、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制が所望されるあらゆる化合物もしくは組成物に対して、あるいは尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制が所望されるあらゆる環境下において、該臭いの抑制のための有効成分として使用され得る。あるいは、本発明のアンタゴニストは、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制のための有効成分として、該臭いの抑制が所望される化合物または組成物の製造のために使用することができる。尿臭、２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制が所望される化合物または組成物の例としては、おむつ、尿パッド、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。

上記尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制剤、および当該臭いの抑制が所望される化合物または組成物は、本発明のアンタゴニストに加えて、他の消臭効果を有する成分を、その目的に応じて適宜含有していてもよい。当該消臭効果を有する他の成分としては、尿において２−メトキシ−４−ビニルフェノールやｐ−クレゾールを発生させる酵素βグルクロニダーゼを阻害する成分であるＣｙｃｌｏｈｅｘａｄｅｃ−８−ｅｎ−１−ｏｎｅ（グロバノン（登録商標））などが挙げられる。さらに、上記臭い抑制剤および臭いの抑制が所望される化合物または組成物は、消臭剤や防臭剤に一般的に添加される任意の成分を含んでいてもよい。

さらなる態様として、本発明は、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭と、本発明のアンタゴニストとを共存させる工程を含む、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制方法を提供する。

上記本発明の方法の一実施形態においては、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の存在下で、対象に、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つを適用することにより、該臭いと該アンタゴニストとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１と該アンタゴニストとが結合して、該臭いに対する該嗅覚受容体の応答が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭が抑制される。

上記本発明の方法の別の一実施形態においては、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の存在下で、対象に、上記に挙げたＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種を適用することにより、該臭いと該アンタゴニストとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７と該アンタゴニストとが結合して、該臭いに対する該嗅覚受容体の応答が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭が抑制される。

上記本発明の方法の別の一実施形態においては、ｐ−クレゾール臭の存在下で、対象に、上記に挙げたＯＲ２Ｗ１アンタゴニストを適用することにより、該臭いと該アンタゴニストとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ２Ｗ１と該アンタゴニストとが結合して、該臭いに対する該嗅覚受容体の応答が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって、ｐ−クレゾール臭が抑制される。

上記本発明の方法において、対象としては、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制を必要とする対象、好ましくは嗅覚受容体アンタゴニズムによる尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制を必要とする対象が挙げられる。当該対象は、哺乳動物であれば特に限定されないが、好ましくはヒトである。より詳細には、本発明の方法における、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の抑制を必要とする対象の例としては、病人、おむつを装着するヒト、病人または高齢者の介護従事者、清掃員、ごみの収集作業に従事するヒトなどが挙げられる。

上記本発明の方法の一実施形態において、本発明のアンタゴニストは、尿臭、または２−メトキシ−４−ビニルフェノールもしくはｐ−クレゾール臭の発生する可能性のある環境下に予め適用される。それにより、当該環境下で該臭いが発生した場合、対象に対して該臭い存在下で本発明のアンタゴニストが適用されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって該臭いは抑制される。

上記本発明の方法の一実施形態において、本発明のアンタゴニストは、２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールを含有する化合物または組成物に配合される。これによって、当該化合物または組成物に含まれる２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体の活性を低下させ、対象における２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール臭の認識を抑制し、結果として当該臭いを抑制する。また別の実施形態において、本発明のアンタゴニストは、２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールを発生する可能性のある化合物または組成物に配合される。これによって、該アンタゴニストは当該化合物または組成物から発生した２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体の活性を低下させ、対象における２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール臭の認識を抑制し、結果として当該臭いを抑制する。２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールを発生する可能性のある化合物または組成物の例としては、尿、おむつ、尿パッド、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。したがって、本発明のなお別の態様として、上記ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有する、おむつ、尿パッド、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、または、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤が提供される。

本発明の例示的実施形態として、さらに以下の物質、製造方法、用途、方法等を本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。

〔１〕アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、尿臭抑制剤。

〔２〕尿臭抑制のための、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択されるいずれか１種の化合物の使用。

〔３〕尿臭抑制剤の製造のための、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択されるいずれか１種の化合物の使用。

〔４〕尿臭の抑制を必要とする対象に、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアム、チモールおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択されるいずれか１種の化合物を適用することを含む、尿臭抑制方法。

〔５〕アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤。

〔６〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制のための、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物の使用。

〔７〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤の製造のための、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物の使用。

〔８〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制を必要とする対象に、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を適用することを含む、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制方法。

〔９〕メチルセドリルエーテルを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤。

〔１０〕ｐ−クレゾール臭抑制のための、メチルセドリルエーテルの使用。

〔１１〕ｐ−クレゾール臭抑制剤の製造のための、メチルセドリルエーテルの使用。

〔１２〕ｐ−クレゾール臭の抑制を必要とする対象にメチルセドリルエーテルを適用することを含む、ｐ−クレゾール臭の抑制方法。

〔１３〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれか１項において、好ましくは、上記尿臭は、放尿または採尿後時間が経った尿から発せられる臭い、飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、使用後放置したおむつから発せられる尿の臭い、またはβグルクロニダーゼ処理した尿もしくはその抽出物の臭いである。

〔１４〕アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択されるいずれか１種の化合物を有効成分とする、ＯＲ１０Ｇ７またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤。

〔１５〕ＯＲ１０Ｇ７またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤としての、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択されるいずれか１種の化合物の使用。

〔１６〕チモールを有効成分とする、ＯＲ１０Ｇ４またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤。

〔１７〕ＯＲ１０Ｇ４またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤としての、チモールの使用。

〔１８〕メチルセドリルエーテルを有効成分とする、ＯＲ２Ｗ１またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤。

〔１９〕ＯＲ２Ｗ１またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤としての、メチルセドリルエーテルの使用。

〔２０〕上記〔１４〕〜〔１９〕のいずれか１項において、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ４は、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ４と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ７は、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ７と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ２Ｗ１は、配列番号６で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ２Ｗ１と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである。

以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。

本実施例で用いた尿臭原因物質および試験物質を下記表１に示す。

実施例１ 尿臭原因物質受容体の同定
１）嗅覚受容体発現細胞の作製
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。また、培養細胞内で作られた嗅覚受容体タンパク質を細胞膜表面へ移行するタンパク質であるヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を別のｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組込んだ。
表２に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（２×１０⁵細胞／ｃｍ²）を１００μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ₂を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として、嗅覚受容体を発現させない細胞（Ｍｏｃｋ）を用意した。

２）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究での尿臭原因物質応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
上記１）で作製した培養物から、培地を取り除き、新しい培地で調製した尿臭原因物質（２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール）を所定の濃度で含む溶液を７５μＬ添加した。細胞をＣＯ₂インキュベータ内で４時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定には、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ^ＴＭｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、製品の操作マニュアルに従って測定を行った。尿臭原因物質刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値を尿臭原因物質刺激を行わない細胞での発光値で割った値を、ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅとして算出し、応答強度の指標とした。

３）結果
３８７種類の嗅覚受容体それぞれを発現させた細胞について２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールに対する応答を測定した結果、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対して活性化する嗅覚受容体としてＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７が、ｐ−クレゾールに対して活性化する嗅覚受容体としてＯＲ２Ｗ１が見出された。ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する応答、ＯＲ２Ｗ１発現細胞のｐ−クレゾールに対する応答は、いずれも濃度依存的であった（図１）。これらの結果から、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７を２−メトキシ−４−ビニルフェノールを認識する２−メトキシ−４−ビニルフェノール受容体として、ＯＲ２Ｗ１をｐ−クレゾールを認識するｐ−クレゾール受容体として、それぞれ同定した。

実施例２ 尿臭原因物質受容体アンタゴニストの同定
１）ルシフェラーゼアッセイ
実施例１と同様の手順で、ＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１発現細胞を用いたルシフェラーゼアッセイにより、ＯＲ１０Ｇ４発現細胞およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答に対する試験物質の影響、ならびにＯＲ２Ｗ１発現細胞のｐ−クレゾール応答に対する試験物質の影響を調べた。２−メトキシ−４−ビニルフェノールの濃度は３００μＭ、ｐ−クレゾールの濃度は１０００μＭとした。嗅覚受容体発現細胞の応答強度は以下のとおり算出した。各種刺激条件について、ホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃを算出した。尿臭原因物質（２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール）単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ）を、同じ受容体を導入し刺激を行わなかった細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、尿臭原因物質単独刺激による受容体活性Ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ（Ｘ／Ｙ）を求めた。同様に、尿臭原因物質（２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾール）と試験物質との混合物での刺激によるｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ）を、刺激を行わない細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）を求めた。以下の計算式により、尿臭原因物質単独刺激による受容体活性（Ｘ／Ｙ）に対する試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）の割合を算出し、試験物質存在下での応答強度（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ％）を求めた。独立した実験を２〜３回行い、各回の実験の平均値を得た。
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）＝（Ｚ／Ｙ）／（Ｘ／Ｙ）×１００

２）結果
アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡおよびベンゾイン シアムは、濃度依存的にＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答を抑制し、ＯＲ１０Ｇ７アンタゴニストであると判断された。メチルセドリルエーテルは、濃度依存的にＯＲ２Ｗ１発現細胞のｐ−クレゾール応答を抑制し、ＯＲ２Ｗ１アンタゴニストであると判断された。チモールは、濃度依存的にＯＲ１０Ｇ４発現細胞およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答を抑制し、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７アンタゴニストであると判断された（図２）。

実施例３ 尿臭原因物質受容体アンタゴニストによる２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭およびｐ−クレゾール臭抑制能
実施例２で同定されたＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１のアンタゴニストによる２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭およびｐ−クレゾール臭抑制効果を、官能試験により確認した。
２−メトキシ−４−ビニルフェノールおよびｐ−クレゾールは、蒸留水の１％（ｖ／ｖ）水溶液を調製した。実施例２で同定した４つのアンタゴニスト化合物は、ミネラルオイル（Ｓｉｇｍａ）に溶解させて０．１％（ｖ／ｖ）溶液を調製し、試験物質溶液として用いた。
２０ｍＬ容のガラス瓶（マルエム、Ｎｏ．６）に２つの綿球を入れ、１つの綿球には２−メトキシ−４−ビニルフェノール水溶液またはｐ−クレゾール水溶液３０μＬを、もう１つの綿球にはいずれか一種の試験物質溶液３０μＬを染み込ませた。綿球を入れたガラス瓶は蓋をして３７℃で１時間静置した後、試験サンプルとして試験に用いた。基準サンプル（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として２−メトキシ−４−ビニルフェノールまたはｐ−クレゾールのみ、対照サンプル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）としてミネラルオイルのみを準備した。

官能試験は、７〜９名の評価者により単盲式にて行った。試験は、匂いの拡散を防ぐため、ドラフト付近で行った。匂いへの順応の影響を排除するため、試験中には適宜、基準サンプルからの悪臭の認知強度を確認させ、必要であれば休憩をとった。評価するサンプルはランダムに提示し、４つの試験物質の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭またはｐ−クレゾール臭抑制効果を評価した。試験サンプルの評価では、次の５段階の基準「対象の悪臭が、１：わからない、２：弱く感じる、３：楽にわかる、４：強く感じる、５：耐えられないほど強く感じる」を設定し、基準サンプルでの悪臭強度を３としたときの各試験サンプルの悪臭強度を、１．０から０．５刻みで５．０までの９段階で評価した。

各評価者による官能試験の評価結果を図３に示す。実施例２で同定した４つのアンタゴニスト化合物は、いずれも２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭またはｐ−クレゾール臭抑制効果を示した。２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に関しては、９人の被験者のうち、アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡは７人に、ベンゾイン シアムは５人に、チモールは８人に対して、２−メトキシ−４−ビニルフェノールを単独で嗅いだ場合と比較して弱い２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭強度（スコア３未満）を回答させるという抑制効果を示した。また、ｐ−クレゾール臭に関しては、７人の被験者のうち、メチルセドリルエーテルは４人に対して、ｐ−クレゾールを単独で嗅いだ場合と比較して弱いｐ−クレゾール臭強度（スコア３未満）を回答させるという抑制効果を示した。本実施例の結果から、同定された４種のＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７またはＯＲ２Ｗ１アンタゴニスト化合物が、いずれも２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭またはｐ−クレゾール臭の抑制に有効であることが示された。

Claims (6)

1. ベンゾイン シアムおよびメチルセドリルエーテルからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、尿臭抑制剤。
2. ベンゾイン シアムを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤。
3. メチルセドリルエーテルを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤。
4. アルデヒドＣ−１２ ＭＮＡ、ベンゾイン シアムおよびチモールからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分とする、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ７またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤であって、
   該嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ７と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである、
   受容体拮抗剤。
5. チモールを有効成分とする、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤であって、
   該嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである、
   受容体拮抗剤。
6. メチルセドリルエーテルを有効成分とする、嗅覚受容体ＯＲ２Ｗ１またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤であって、
   該嗅覚受容体ＯＲ２Ｗ１と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである、
   受容体拮抗剤。