JP6816015B2 - タンパク質またはペプチド伝達用の溶解性マイクロニドル - Google Patents

Description

本発明は、溶解性マイクロニドルに関し、タンパク質またはペプチドを安定的に皮膚に伝達できる皮膚投与システムに関し、より詳しくは、不安定なタンパク質またはペプチドの安定性を改善した皮膚投与システムに関する。

本出願は、２０１５年４月６日出願の韓国特許出願第１０−２０１５−００４８４６２号、２０１５年１１月１３日出願の韓国特許出願第１０−２０１５−０１５９９６６号、２０１５年４月６日出願の韓国特許出願第１０−２０１５−００４８４７１号及び２０１５年１０月１６日出願の韓国特許出願第１０−２０１５−０１４４８７３号に基づく優先権を主張し、該当出願の明細書及び図面に開示された内容は、すべて本出願に援用される。

最近、皮膚状態（例えば、しわ、弾力など）の改善のために成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）、ヒト成長ホルモン（ｈｕｍａｎ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ；ＨＧＨ）、形質転換成長因子α及びβ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ α ａｎｄ β；ＴＧＦ−α，ＴＧＦ−β）、線維芽細胞増殖因子１及び２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ａｎｄ ２；ＦＧＦ−１，ＦＧＦ−２）、ケラチノサイト成長因子（Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＫＧＦ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＰＤＧＦ）］などを含む多様なタンパク質及びペプチドが開発されつつあり、このようなタンパク質及びペプチドを含む多様な化粧品が開発されて市販されている。

例えば、ＥＧＦは、人体の自然的な傷治癒過程で肉芽（肉芽組織）を生えらせ、血管を再生する体内の傷治癒物質であって、老化現象に効果を発揮することから、最近ＥＧＦ成分を含む化粧品開発が盛んでいる。

しかし、特にこれらの成長因子は、短い生物学的な半減期及び持続的安定性の不足によって通常の化粧品剤形に含まれる際に変性してしまい、その効果を発揮しにくい場合がよく報告されている。このような不安定なタンパク質の安定性を改善するために、マイクロパーチクル（ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ）またはリポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）などのようなカプセル化（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）方法を用いる場合がある。しかし、このような方法は、パーチクル及びリポソームの大きさが大きいため（数十〜数百ｎｍまたは数μｍ以上）、皮膚塗布だけでは皮膚内に直接吸収されにくいという短所がある。
次に、このような皮膚状態の改善のためのタンパク質は、含有量の増加だけでは目的の効果を増大させにくい場合がほとんどである。即ち、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ヒト成長ホルモンなどは、活性タンパク質成分の一種であって、含有量よりは活性度がさらに重要となり、いくら含有量を増加させるとしても活性度がない場合は目的とする効果を奏し難い。
また、皮膚に有益かつ有用な物質が実際製品として効能を現すためには、製品使用時、角質層を通して表皮層から真皮層まで浸透すればこそその効果を奏することができ、皮膚全体に均一に伝達可能な方法が必要である。既存において界面活性剤などを用いて透過性を向上させる方法が存在するが、透過向上効果が僅かであり、皮膚障壁を軟化するという短所があった。

皮膚を介して薬物を伝達することは、使用の便利性から多様な分野及び形態で用いられている。このような皮膚を通過する薬物は、主に皮膚を介して体循環系（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）に伝達するためのものであるが、外にもアトピー治療剤、美白またはしわ改善用の化粧品などの薬物は皮膚自体の器官に伝達しようとする目的として用いられることもある。このような便利性及び機能性にもかかわらず、皮膚の構造上、薬物を皮膚を介して伝達するには多くの困難が存在し、皮膚を通過する薬物を開発することが容易でない。皮膚の角質層は、ケラチンが豊かな角質細胞からなるブリック（ｂｒｉｃｋ）構造と、このような角質細胞の間をセラマイド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）、脂肪酸（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ）またはワックス（ｗａｘ）などのような脂質が満たしたモルタル（ｍｏｒｔａｒ）構造からなる。このような構造は、障壁として働き、物質透過性が非常に低い特性を有する。５００Ｄａ以下の低分子構造の成分のみが拡散方式によって皮膚内に伝達され得、脂質親和性に優れた物質のみが皮膚を通過することができる。

このような皮膚構造の特性によって脂質親和性の低いペプチドは、ペプチドの脂質親和性を高めるために、一定長さのアルキル鎖を導入して皮膚内への吸収を増加させようと努力している。

しかし、この場合、ペプチドの分子量が大きくなり、皮膚内への吸収が実質的に向上しにくいという問題が発生する。

このことから、本発明の発明者は、皮膚の改善効果を奏し得る多様なペプチド、タンパク質成分を皮膚に伝達可能であり、効果を増大させることができる方案を研究するのに至った。

韓国特許出願第１０−２０１５−００４８４６２号 韓国特許出願第１０−２０１５−０１５９９６６号 韓国特許出願第１０−２０１５−００４８４７１号 韓国特許出願第１０−２０１５−０１４４８７３号

本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、皮膚状態の改善のための多様なタンパク質成分、特に、成長因子を安定的に皮膚内に伝達できるタンパク質投与システム及びこのようなシステムの製造方法、このようなシステムを用いて皮膚内へタンパク質（特に、成長因子）を投与する方法を提供することを目的とする。
また、本発明は、ペプチドの脂質親和度を向上させるながらも、分子量が大きいことから皮膚透過が困難であった、ペプチドの皮膚伝達における問題点を解消することを他の目的とする。

皮膚状態の改善のための多様なペプチドを皮膚内に伝達できるペプチド投与システム及びこのようなシステムの製造方法、このようなシステムを用いて皮膚内へ脂質親和度が低いペプチドを投与する方法を提供する。

上記の課題を達成するため、本発明は、タンパク質またはペプチドを含むマイクロニドルを提供し、より望ましくは、前記マイクロニドルを形成する物質は皮膚内で溶解され、マイクロニドルの皮膚適用時にマイクロニドルが溶解または崩壊されることでペプチドを安定的に皮膚に伝達できるようになる。

本発明者は、多様な投与システムを研究したが、いかなるシステムも上述のように、脂質親和度が低いペプチドの脂質親和度を向上させながら、分子量が大きくなっても安定的に皮膚を透過できるペプチド伝達システムを構想することが容易でなかった。本発明者は、鋭意研究の末、皮膚内溶解性（ｓｏｌｕｂｌｅ）のマイクロニドル内に、Ｎ−末端にアルキル鎖を有するペプチドまたはペプチド誘導体を含有することで、効果的に皮膚内に伝達できるという驚くべき発明を完成した。

ポリペプチドは、数多いアミノ酸の連結体であって、相異なるアミノ酸がペプチド結合という化学結合によって長く連結されたことを意味し、前記ポリペプチドは、単にペプチドと呼ぶこともある。

上記の課題を達成するために、マイクロニドルは、皮膚内において溶解性でなければならず、溶解性マイクロニドルを形成するために、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｎａ−ＣＭＣ，Ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ビニルピロリドン−ビニルアセテート共重合体、ポリビニルアルコール（Ｐｏｌｙ ｖｉｎｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）及びポリビニルピロリドン（Ｐｏｌｙ ｖｉｎｙｌ ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）などの水溶性高分子；キシロース（Ｘｙｌｏｓｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、マルトース（Ｍａｌｔｏｓｅ）、ラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）、トレハロース（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）などの糖類；またはこれらの混合物を用いることができる。特に、マイクロニドルの皮膚透過強度、皮膚内における溶解速度などを総合的に考慮すれば、ヒアルロン酸（Ｏｌｉｇｏ−Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｎａ−ＣＭＣ，Ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、及び糖類（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）（より望ましくは、トレハロース（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ））の混合物が望ましく、後述のグリセリン（Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ）まで混合したものがさらに望ましい。望ましくは、本発明によるマイクロニドルは、マイクロニドルを形成する前述の成分に加え、可塑剤、界面活性剤、保存剤、抗炎剤などをさらに含むことができる。

前記可塑剤（ｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒ）としては、例えば、エチレングリコール（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、プロピレングリコール（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ジプロピレングリコール（Ｄｉｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌｅ）、ブチレングリコール（Ｂｕｔｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、グリセリン（Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ）などのポリオールを単独または混合して用いることができる。

望ましくは、本発明のマイクロニドルは、ペプチドをマイクロニドル製造溶液の総重量に対し０．０１〜２０重量％を含み、より望ましくは０．１〜５重量％を含む。
本発明において使用可能なペプチドは、アミノ酸が３〜１０個で構成されたペプチドであり得、望ましくは、前記アミノ酸のＮ−末端に炭素数１０〜２０のアルキル基を有するペプチドであり得る。前記ペプチドは、ゲル浸透クロマトグラフィーで測定した分子量が２００〜３，０００Ｄａであり得る。

望ましくは、前記ペプチドは、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、パルミトイルトリペプチド（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ）、ミリストイルテトラペプチド（ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ）、カプロイルテトラペプチド（Ｃａｐｒｏｏｙｌ ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ）、ミリストイルペンタペプチド（ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ ｐｅｎｔａｐｅｐｔｉｄｅ）、パルミトイルペンタペプチド（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｐｅｎｔａｐｅｐｔｉｄｅ）、ミリストイルヘキサペプチド（ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ ｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ）、パルミトイルヘキサペプチド（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ）、パルミトイルヘプタペプチド（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｈｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅ）またはこれらの混合物からなる群より選択されたいずれか一種であり得る。

例えば、前記パルミトイルトリペプチドは、望ましくはパルミトイルトリペプチド−５（Ｐａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＯＨ）であり得、ミリストイルテトラペプチドは、ミリストイルテトラペプチド−１２（Ｍｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＮＨ_２）であり得、カプロイルテトラペプチドは、カプロイルテトラペプチド−３（Ｃａｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ）、ミリストイルペンタペプチドは、ミリストイルペンタペプチド−１７（Ｍｙｒ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ_２）であり得、パルミトイルペンタペプチドは、パルミトイルペンタペプチド−４（Ｐａｌ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−ＯＨ）であり得、ミリストイルヘキサペプチドは、ミリストイルヘキサペプチド１６（Ｍｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ）であり得、パルミトイルヘキサペプチドは、パルミトイルヘキサペプチド−１２（Ｐａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ）であり得、パルミトイルヘプタペプチドは、パルミトイルヘプタペプチド−１８（Ｐａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ）であり得る。

また、本発明は、前記マイクロニドルが付着しているペプチド投与用（伝達用）マイクロニドルパッチ（ｐａｔｃｈ）システムを提供する。

本発明は、また、（Ｓ１）前記ペプチド及び皮膚内溶解性物質を含む溶液を製造する段階と、（Ｓ２）前記溶液をマイクロニドルモールドに注入する段階と、（Ｓ３）乾燥及び前記モールドからマイクロニドルを分離する段階と、を含む、ペプチドまたはペプチド誘導体を含有するマイクロニドルの製造方法を提供する。

望ましくは、前記マイクロニドルは、２００〜３，０００Ｄａを有するペプチドまたはペプチド誘導体を含み得る。また、本発明は、本発明によるマイクロニドルを用いることを特徴とするペプチドの皮膚透過効率が向上したペプチド皮膚投与方法を提供する。
また、本発明は、分子量が大きいペプチドを含有するマイクロニドルのしわ改善用途を提供する。

本発明のさらに他の実施例は、タンパク質またはペプチドが含有されたマイクロパーチクルを含むマイクロニドルを提供し、より望ましくは、マイクロニドルを形成する物質が皮膚内で溶解され、マイクロニドルの皮膚適用時、マイクロニドルが溶解または崩壊することで、マイクロニドルの内部に含まれていたマイクロパーチクルが迅速に皮膚内へ出ることができる。

内部に含まれたマイクロパーチクルは、疎水性コア高分子を含んでいるため、タンパク質またはペプチドを安定的に皮膚に伝達できる。

本明細書において用いられる「タンパク質またはペプチド」は、必ずしも使い分けることではなく、アミノ酸重合体を包括する意味で広く用いられた。

通常、タンパク質は、ペプチドよりも分子量が大きいアミノ酸重合体をいい、アミノ酸が５０個以下に重合されたものをペプチドとすることと知られている。しかし、本明細書においては、必ずしもアミノ酸の重合数に限定して解釈されない。

本発明者は、多様な投与システムの鋭意研究の末、溶解性マイクロニドル内に、タンパク質を含むマイクロパーチクルを含浸させることで、タンパク質またはペプチドを効果的に皮膚内に伝達できるという驚くべき発明を完成した。タンパク質の封入されたマイクロパーチクルを溶解性マイクロニドルに含浸して皮膚に適用すれば、微細針によって痛みなく皮膚内にタンパク質が透過され、微細針が皮膚内の水分によって溶解しながらタンパク質成分の封入されたマイクロパーチクルが皮膚内へ伝達される。

本発明において用いられる「タンパク質が封入されたマイクロパーチクル」とは、マイクロパーチクルの内部にタンパク質が位置している状態を意味し、タンパク質がマイクロパーチクルによって完全に囲まれた状態をいう。例えば、タンパク質が封入されたマイクロパーチクルの断面は、本明細書における図６のような形態を有し得るが、これは、単に例示にすぎない。

「含浸」とは、含まれている状態を意味し、マイクロニドルの内部に位置して外部環境と完全に遮断された状態のみならず、マイクロパーチクルの一部がマイクロニドルの表面に露出した状態も含み得る。「マイクロニドルに含浸」という意味は、マイクロニドルの内部に完全に含まれる状態のみならず、マイクロニドルを皮膚に処理する際、マイクロニドルとマイクロパーチクルとが共に投与できる状態でマイクロニドルに含まれる全ての形態を含む概念として理解できる。

皮膚内へ伝達されたマイクロパーチクルから、タンパク質成分、特に、成長因子が放出されることで効果的に皮膚内に伝達できる。本明細書において用いられた成長因子は、ヒト成長ホルモンを含み得る。

上記の課題を達成するために、マイクロニドルは、皮膚内において溶解性でなければならず、溶解性マイクロニドルを形成するために、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｎａ−ＣＭＣ，Ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ビニルピロリドン−ビニルアセテート共重合体、ポリビニルアルコール（Ｐｏｌｙ ｖｉｎｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）及びポリビニルピロリドン（Ｐｏｌｙ ｖｉｎｙｌ ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）などの水溶性高分子；キシロース（Ｘｙｌｏｓｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、マルトース（Ｍａｌｔｏｓｅ）、ラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）、トレハロース（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）などの糖類；またはこれらの混合物を用いることができる。特に、マイクロニドルの皮膚透過強度、皮膚内における溶解速度などを総合的に考慮すれば、ヒアルロン酸（Ｏｌｉｇｏ−Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｎａ−ＣＭＣ，Ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、及び糖類（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）（より望ましくは、トレハロース（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ））の混合物が望ましく、後述のグリセリン（Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ）まで混合したものがさらに望ましい。望ましくは、本発明によるマイクロニドルは、タンパク質、特に成長因子を含有するマイクロパーチクル及びマイクロニドルを形成する前述の成分に加え、可塑剤、界面活性剤、保存剤、抗炎剤などをさらに含むことができる。前記可塑剤、界面活性剤、保存剤、抗炎剤などは、本明細書で言及した成分のみならず、業界において通常使用される成分を全て含めて用いることができる。

本発明において、前記タンパク質と共にマイクロパーチクルを形成する物質は、マイクロニドルの製造過程においてタンパク質の構造変形を誘発することなく安定して包接可能な物質でなければならない。特に、前記マイクロパーチクルを形成する物質は、疎水性コアが形成可能であることでタンパク質の構造変形なく安定性が提供できなければならない。
このようなマイクロパーチクルを形成する物質としては、疎水性コアが形成できる高分子を用いることができ、このような高分子としては、ポリ（ラクタイド）、ポリ（グリコライド）、ポリ（ラクタイド−コ−グリコライド）、ポリアンハイドライド、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、モノ−メトキシポリエチレングリコール−ポリカプロラクトン（ＭＰＥＧ−ＰＣＬ）、ポリエステルアミド、ポリ（ブチル酸）、ポリ（バレリアン酸）、ポリウレタン、またはこれらの共重合体のような生分解性高分子；及びポリアクリレート、エチレン−ビニルアセテート重合体、アクリル置換セルロースアセテート、非分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリビニルクロライド、ポリビニルフルオライド、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン（ｃｈｌｏｒｏｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ ｐｏｌｙｏｌｅｆｉｎｓ）、ポリエチレンオキサイド、またはこれらの共重合体のような非生分解性高分子を単独または混合して用いることができるが、本発明はこれらに限定されない。

タンパク質、特に成長因子の安定化及び皮膚内における放出性などを総合的に考慮すれば、前記疎水性コア形成高分子としては、ポリ（ラクタイド）、ポリ（グリコライド）及びポリ（ラクタイド−グリコライド）のいずれか一つ以上と、モノ−メトキシポリエチレングリコール−ポリカプロラクトン（ＭＰＥＧ−ＰＣＬ）との混合物であることがさらに望ましい。

このようなマイクロパーチクルは、本発明の目的が達成できれば、マトリクス（ｍａｔｒｉｘ）タイプであってもよく、リザーバー（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）タイプであってもよい。

本発明において使用可能なマイクロパーチクルとしては、本発明が属した分野における多様な公知の方法で製造できる。例えば、溶媒交換法（Ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｍｅｔｈｏｄ）、溶媒蒸発法（Ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）、メンブレン透過法（Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ）、噴霧乾燥法（Ｓｐｒａｙ ｄｒｙｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ）などを用いて本発明で使用可能なマイクロパーチクルが製造できる。例えば、非特許文献Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ７０（２００１）、１−２０及びＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＰｈａｒｍＴｅｃｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３（２０１１）、１２４２−１２５４に記載の方法を用いることができる。望ましくは、通常の乳化及び溶媒蒸発法 （ｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）によって製造することができる。

望ましくは、本発明によるマイクロパーチクルの直径は、０．０１〜１０μｍである。パーチクルのサイズが１０μｍ超過であれば、マイクロニドルへの含浸時、ニドルの強度が弱くなり皮膚透過が困難となる。本発明によるマイクロパーチクルの直径は、レーザー光散乱法（ＬＬＳ）によって測定され、例えば、Ｍａｌｖｅｒｎ社製のＺｅｔａｓｉｚｅｒ ２０００^ＴＭを用いて測定できる。

望ましくは、本発明のマイクロパーチクルは、タンパク質またはペプチドをマイクロパーチクルの総重量に対し０．０１〜２０重量％を含み、より望ましくは０．１〜５重量％を含み得る。また、本発明のマイクロニドルはこのようなマイクロパーチクルを、マイクロニドルの総重量に対し０．０５〜１０重量％を含むことが望ましく、さらに望ましくは、０．１〜５重量％を含むことができる。

本発明において使用可能なタンパク質は、特に、成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）またはヒト成長ホルモン（ｈｕｍａｎ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）が望ましい。前記成長因子またはヒト成長ホルモンは、細胞の成長、増殖及び分化に関与するタンパク質であって、特に、選択的な組織または臓器の適合性と、伝達過程におけるタンパク質構造の変性誘発などから、適切な伝達体または伝達方法が必要であった。本発明タンパク質のうち、特に成長因子及び／またはヒト成長ホルモンの伝達にマイクロパーチクルをマイクロニドルに適用することで成長因子及びヒト成長ホルモンの伝達に効果的であることを鋭意研究の末に確認できた。

前記成長因子は、骨形成タンパク質（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ；ＢＭＰ）、線維芽細胞成長因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）、血管内皮増殖成長因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＶＥＧＦ）、神経成長因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＮＧＦ）、上皮成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ;ＩＧＦ）、形質転換成長因子α及びβ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ α ａｎｄ β；ＴＧＦ−α，ＴＧＦ−β）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ；ＢＤＮＦ）、血小板由来成長因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ； ＰＤＧＦ）、胎盤成長因子（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＰｌＧＦ）、肝細胞成長因子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子１及び２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ａｎｄ ２；ＦＧＦ−１，ＦＧＦ−２）、ケラチノサイト成長因子（Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＫＧＦ）及びこれらの類似体からなる群より選択されたいずれか一種であり得る。

本明細書において用いられた類似体は、前記タンパク質と８０％の配列相同性を有する場合を含むことができ、望ましくは、８５％の配列相同性、より望ましくは９０％の配列相同性を有するタンパク質類似体を含み得る。

また、本発明は、前記マイクロニドルが付着されているタンパク質投与用（伝達用）マイクロニドルパッチ（ｐａｔｃｈ）システムを提供する。望ましくは、本発明の一実施例は、タンパク質またはペプチドの化粧学的皮膚投与方法を提供する。
本発明は、（Ｓ１）前記ペプチドまたはタンパク質と、皮膚内溶解性物質とを含む溶液を製造する段階と、（Ｓ２）前記溶液をマイクロニドルモールドに注入する段階と、（Ｓ３）乾燥及び前記モールドからマイクロニドルを分離する段階と、を含む、ペプチドまたはタンパク質含有マイクロニドルの製造方法であって、前記（Ｓ１）段階において、ペプチドまたはタンパク質をマイクロパーチクル内に封入する段階をさらに含み、前記ペプチドまたはタンパク質をマイクロパーチクル内に封入する段階は、疎水性コア形成高分子を用いてペプチドまたはタンパク質をマイクロパーチクルの内部に含ませる、タンパク質の構造の不安定性またはタンパク質の凝縮による形態変形の可能性が改善したタンパク質含有マイクロニドルの製造方法を提供する。

また、本発明は、本発明によるマイクロニドルを用いることを特徴とする、皮膚透過量が高く、かつ安定性に優れたタンパク質の皮膚投与方法を提供する。
また、本発明は、タンパク質、望ましくは成長因子またはヒト成長ホルモン、より望ましくは、ＥＧＦ、ＴＧＦ−βまたはＨＧＨを含有するマイクロパーチクルを含むマイクロニドルのしわ改善用途を提供する。

本発明の一実施例は、分子量２００〜３，０００Ｄａのペプチドが含まれたマイクロニドルを皮膚に付着することで前記ペプチドを皮膚に投与する方法を提供する。

本発明の一実施例は、分子量２００〜３，０００Ｄａのペプチドが含まれたマイクロニドルの皮膚しわ改善の用途を提供する。

本発明の一実施例は、成長因子が封入されたマイクロパーチクルが含まれたマイクロニドルを皮膚に付着することで前記成長因子を皮膚に投与する方法を提供する。

本発明の一実施例は、成長因子が封入されたマイクロパーチクルが含まれたマイクロニドルの皮膚しわ改善の用途を提供する。

本発明は、分子量が大きいペプチドの皮膚透過効率を増加させたマイクロニドルを提供する。

また、本発明は、皮膚透過効率が増加したペプチドを含む皮膚投与用のマイクロニドルを提供する。本発明は、このようなマイクロニドルを用いることを特徴とするペプチドの皮膚投与方法を提供する。

本発明は、タンパク質、特に、成長因子の安定性が確保され、かつ皮膚透過量が向上したタンパク質の皮膚投与用のマイクロニドルを提供する。また、本発明は、タンパク質の構造変形を誘発することなく安定的に皮膚に伝達できる皮膚投与用のマイクロニドルを提供する。

本発明は、通常の化粧料剤形に含ませる際に誘発し得るタンパク質同士の凝縮が発生せず、安定的に皮膚内へタンパク質を伝達できるタンパク質の皮膚伝達システムを提供する。
また、本発明は、このようなマイクロニドルを用いることを特徴とする成長因子の皮膚投与方法を提供する。

本明細書に添付される次の図面は、本発明の望ましい実施例を例示するものであり、発明の詳細な説明とともに本発明の技術的な思想をさらに理解させる役割をするため、本発明は図面に記載された事項だけに限定されて解釈されてはならない。

本発明によるマイクロニドルを製造する多くの方法の一例を示す図である。溶解性マイクロニドルは、溶液キャスト法（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃａｓｔｉｎｇ）により製造することができ、溶液をモールドにキャストして真空及び／または遠心回転（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）により微細モールドに液を満たした後、乾燥させることで製造することができる。マイクロニドル構造体を形成する材料としては、通常の合成及び天然水溶性高分子を用いることができる。 本発明によるマイクロニドルの薬物の放出挙動を評価するためのフランツ型拡散セル（Ｆｒａｎｚ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｅｌｌ）を示す。 豚皮膚を載置したフランツ型拡散セルを用いて評価した、マイクロニドルからのＥＧＦ放出の評価結果を示すグラフである。 本発明によるＥＧＦ溶液が含浸されたマイクロニドル（ＥＧＦマイクロニドル）及びＥＧＦマイクロパーチクルが含浸されたマイクロニドル（ＥＧＦ−ＭＰマイクロニドル）を目じりに長期間使用した後に現われるしわの改善程度を示す実験結果である。 ＥＧＦ安定性分析（ＳＥＣ，Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を施した結果を示すグラフである。図５ａは、ＥＧＦ標準物質のＳＥＣデータを示す。 ＥＧＦ安定性分析（ＳＥＣ，Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を施した結果を示すグラフである。図５ｂは、マイクロニドルから放出されたＥＧＦのＳＥＣデータを示す。 マイクロパーチクルを例示的に示した概略図である。 豚皮膚を載置したフランツ型拡散セルを用いて評価した、マイクロニドルからのペプチドの放出評価結果を示すグラフである。 本発明によるペプチド溶液が含浸されたマイクロニドル（ペプチドマイクロニドル）及びペプチドが含浸されたマイクロニドル（ペプチドマイクロニドル）を目じりにしわに長期間使用した後に現われるしわの改善程度を示す実験結果である。

以下、本発明を具体的な実施例を挙げて説明する。しかし、本発明による実施例は多くの他の形態に変形されることができ、本発明の範囲が後述する実施例に限定されると解釈されてはならない。本発明の実施例は当業界で平均的な知識を有する者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。

＜タンパク質含浸付加マイクロパーチクルの製造＞
Ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ，ＰＬＧＡ） １ｇを１０ｍＬのメチレンクロライドに溶かした。２ｍＬの精製水に２００ｍｇのポリペプチド（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）を溶かした水溶液をＰＬＧＡ溶液に徐々に添加しながら、一次Ｗ／Ｏエマルションを製造した。０．２％ポリビニルアルコール水溶液（１００ｍＬ）に撹拌と共に一次で製造したＷ／Ｏエマルション溶液を添加した。このように製造されたＷ／Ｏ／Ｗ二重エマルションを２４時間室温で撹拌しながら、有機溶媒であるメチレンクロライドを蒸発させ、ＥＧＦ含浸マイクロパーチクルを製造した。ロータリーエバポレーター（Ｒｏｔａｒｙ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて残留するメチレンクロライドを完全に除去し、ＥＧＦ含量が全体の０．２％となるように有機溶媒と共に水を蒸発させて濃縮した。ＥＬＩＳＡキットで分析した結果、ＥＧＦの含量は０．２１％と確認され、粒径分析器で分析した結果、マイクロパーチクルの平均サイズは３５０ｎｍであった。

＜ＥＧＦマイクロパーチクル含浸マイクロニドルの製造＞
下記の表１のように、ＥＧＦ（溶液形態で添加される）またはＥＧＦが含浸された溶解性マイクロニドル（ｓｏｌｕｂｌｅ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ）を製造した。下記の表１の含量は、重量％で示した。

具体的に、ＥＧＦが含浸された溶解性マイクロニドルは、次のように製造した。Ｏｌｉｇｏ−ＨＡ、Ｎａ−ＣＭＣ及びトレハロースを精製水に溶解した後、グリセリン、ＨＣＯ−４０及びＥＧＦを添加し、ＥＧＦ溶液を製造した。製造した溶液をシリコーンマイクロニドルモールドにキャストした後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心回転して微細モールドに溶液を充填した。溶液の充填後、乾燥オーブン（７０℃）で３時間乾燥し、接着フィルムを用いてマイクロニドルをシリコーンモールドから型抜きした。

具体的に、ＥＧＦマイクロパーチクルが含浸された溶解性マイクロニドルは、次のように製造した。Ｏｌｉｇｏ−ＨＡ、Ｎａ−ＣＭＣ及びトレハロースを精製水に溶解した後、グリセリン、ＨＣＯ−４０及びＥＧＦマイクロパーチクル（ＥＧＦ０．２％）を添加し、ＥＧＦ溶液を製造した。製造した溶液をシリコーンマイクロニドルモールドにキャストした後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心回転して微細モールドに溶液を充填した。溶液の充填後、乾燥オーブン（７０℃）で３時間乾燥し、接着フィルムを用いてマイクロニドルをシリコーンモールドから型抜きした。

＜ＥＧＦ水中油（Ｏｉｌ−ｉｎ−Ｗａｔｅｒ）剤形のクリーム＞
マイクロニドルに含浸されたＥＧＦの皮膚透過量と比べるために、比較例として通常の水中油剤形のクリームにＥＧＦを含浸して比較した。下記の含量は、重量％で示した。

＜薬物の放出挙動＞
豚皮膚を載置したフランツ型拡散セルを用いて、前記製造したマイクロニドルからのＥＧＦの放出を評価した（図２参照）。受容体溶液（ａｃｃｅｐｔｏｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）としては、３０重量％のＤＰＧが含有されたＰＢＳ溶液を用いた。フランツ型拡散セルを用いて、時間の経過による豚皮膚組織及び受容体溶液のＥＧＦの含量をＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。豚皮膚にＥＧＦクリームを塗布するか、ＥＧＦまたはＥＧＦ−ＭＰが含浸されたマイクロニドルを付着し、時間の経過によるペプチドの皮膚透過量を比較した。マイクロニドルを豚皮膚内へ浸透させて溶かした後（付着時間：２時間、温度：３２℃）、マイクロニドルを除去した。マイクロニドルによってＥＧＦが吸収された豚皮膚をフランツ型拡散セルに入れ、ＥＧＦが時間の経過につれ豚皮膚から受容体溶液に放出される挙動を確認した。その結果を図３に示した。

図３に示したように、マイクロニドルに含浸されたＥＧＦ及びＥＧＦ−ＭＰは、ニドルによって皮膚に直接透過し、その透過量が１μｇ以上であって、クリームに比べて約５００倍以上の高い皮膚透過量を示した。

＜しわの改善効果＞
ＥＧＦクリームと、ＥＧＦ及びＥＧＦ−ＭＰが含浸されたマイクロニドルを目じりのしわに１２週間毎日処理した後、しわの改善程度をシリコーン模写板（ｓｉｌｉｃｏｎｅ ｒｅｐｌｉｃａ）及びしわの画像分析方法により確認した（Ｎ＝２０）。その結果を図４に示した。ＥＧＦクリームに比べ、ＥＧＦが含浸されたマイクロニドルにて優れた改善効果が奏され、特に、ＥＧＦ−ＭＰが含浸されたマイクロニドルにて優れたしわの改善効果が奏された。これは、ＥＧＦ−ＭＰが含浸されたマイクロニドルによってＥＧＦが皮膚内へ効果的に伝達された結果であり、また、皮膚内に伝達されたＥＧＦ−ＭＰからＥＧＦが安定した構造で放出されることで、しわの改善効果が高く現われたことと判断される。

＜ＥＧＦの安定性分析（ＳＥＣ）＞
粒径分析器（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＳＥＣ）を用いて、マイクロニドルに含浸されたＥＧＦが放出されたとき、ＥＧＦ構造が変性したかを確認した。

ＥＧＦ自体をマイクロニドルに含浸して皮膚に伝達する場合、ＥＧＦの構造の凝縮による変性から、凝縮ピーク（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｐｅａｋ）が相対的に増加したが、マイクロパーチクルに安定して封入してマイクロニドルに含浸する場合、皮膚に伝達した後も凝縮せず、その構造が標準物質に類似な結果を現わした。

かくして、ＥＧＦのようなポリペプチドやタンパク質の場合、安定的に封入したマイクロパーチクルをマイクロニドルに含浸して皮膚に伝達することで、高い皮膚伝達とともに安定した構造で皮膚に伝達できることを確認した。

＜ペプチドマイクロニドルの製造＞
下記の表３のように、ペプチド（溶液形態で添加される）またはペプチドが含浸された溶解性マイクロニドルを製造した。下記の表３の含量は、重量％で示した。

具体的に、ペプチド（ミリストイルテトラペプチド−６）が含浸された溶解性マイクロニドルは、次のように製造した。

Ｏｌｉｇｏ−ＨＡ、Ｎａ−ＣＭＣ及びトレハロースを精製水に溶解した後、グリセリン、ＨＣＯ−４０及びペプチド溶液（ペプチド１０％，ＤＰＧ９０％）を添加し、ペプチドが分散した溶液を製造した（ＤＰＧ：ジプロピレングリコール）。製造したペプチド分散溶液をシリコーンマイクロニドルモールドにキャストした後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心回転して微細モールドに溶液を充填した。溶液の充填後、乾燥オーブン（７０℃）で３時間乾燥し、接着フィルムを用いてマイクロニドルをシリコーンモールドから型抜きした。

＜ペプチド水中油（ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）剤形のクリーム＞
マイクロニドルに含浸されたペプチドの皮膚透過量と比較するために、比較例として通常の水中油剤形のクリームにペプチドを含浸して比較した。下記の含量は重量％で示した。

＜薬物の放出挙動＞
豚皮膚を載置したフランツ型拡散セルを用いて、前記製造したマイクロニドルからの時間の経過によるペプチドの皮膚透過量を比較した（図２参照）。受容体溶液としては、３０重量％のＤＰＧが含有されたＰＢＳ溶液を用いた。
即ち、フランツ型拡散セルを用いて、時間の経過による豚皮膚組織及び受容体溶液のペプチド含量を液体クロマトグラフィーを用いて測定した。

豚皮膚にペプチドクリームを塗布するか、またはペプチドが含浸されたマイクロニドルを付着し、時間の経過によるペプチドの皮膚透過量を比較した。マイクロニドルを豚皮膚内へ浸透させて溶かした後（付着時間：２時間、温度：３２℃）、マイクロニドルを除去した。マイクロニドルによってペプチドが吸収された豚皮膚をフランツ型拡散セルに入れ、ペプチドが時間の経過につれ豚皮膚から受容体溶液に放出される挙動を確認した。その結果を図７に示した。

図７に示したように、ペプチドを含むクリームは、皮膚を介して透過する量が約１μｇであってその量が僅かであったが、マイクロニドルに含浸されたペプチドはニドルによって皮膚に直接透過してその透過量が１５μｇ以上となり、クリームに対して約１００倍以上の高い皮膚透過量を示した。

＜しわの改善効果＞
ペプチドクリームと、ペプチドが含浸されたマイクロニドルを目じりのしわに１２週間毎日処理した後、しわの改善程度をシリコーン模写板及び画像分析方法により確認した（Ｎ＝２０）。

ペプチドクリームに比べ、ペプチドが含浸されたマイクロニドルから５倍以上の優れた改善効果を奏し、これは、ペプチドがマイクロニドルによって皮膚内へ効果的に浸透することでしわの改善効果が高いことを確認した。

本発明は、皮膚のしわ改善のための化粧品、薬学用途に用いることができる。
本発明のマイクロニドルは、優れた皮膚のしわ減少効果を奏する。

Claims (14)

1. （ｉ）疎水性コアを形成する高分子及び（ｉｉ）ペプチドまたはタンパク質を含有するマイクロパーチクルを含む水溶性マイクロニドルであって、
   前記疎水性コアを形成する高分子は、前記ペプチドまたはタンパク質が構造変形されることなく前記マイクロパーチクルの内部に安定して包接されるようにし、
   前記ペプチドは、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、パルミトイルトリペプチド、ミリストイルテトラペプチド、カプロイルテトラペプチド、ミリストイルペンタペプチド、パルミトイルペンタペプチド、ミリストイルヘキサペプチド、パルミトイルヘキサペプチド及びパルミトイルヘプタペプチドからなる群より選択された一つ以上であり、
   前記タンパク質が、上皮成長因子（ＥＧＦ）であることを特徴とする、マイクロニドル。
2. 前記ペプチドが、分子量２００〜３，０００Ｄａであることを特徴とする請求項１に記載のマイクロニドル。
3. 前記マイクロニドルを形成する物質が、皮膚内で溶解されることを特徴とする請求項１に記載のマイクロニドル。
4. 前記マイクロニドルを形成する物質が、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ビニルピロリドン−ビニルアセテート共重合体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、糖類またはこれらの混合物であることを特徴とする請求項３に記載のマイクロニドル。
5. 前記マイクロニドルが、マイクロニドルを形成する物質に加え、可塑剤をさらに含むことを特徴とする請求項３に記載のマイクロニドル。
6. 前記疎水性コア形成高分子が、ポリ（ラクタイド）、ポリ（グリコライド）、ポリ（ラクタイド−コ−グリコライド）、ポリアンハイドライド、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、モノ−メトキシポリエチレングリコール−ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリ（ブチル酸）、ポリ（バレリアン酸）、ポリウレタン、またはこれらの共重合体からなる群より選択されたいずれか一種以上の生分解性高分子；及びポリアクリレート、エチレン−ビニルアセテート重合体、アクリル置換セルロースアセテート、非分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリビニルクロライド、ポリビニルフルオライド、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリエチレンオキサイド、またはこれらの共重合体からなる群より選択されたいずれか一種以上の非生分解性高分子、からなる群より選択されたいずれか一種単独または混合物であることを特徴とする請求項１に記載のマイクロニドル。
7. 前記疎水性コア形成高分子が、ポリ（ラクタイド）、ポリ（グリコライド）及びポリ（ラクタイド−コ−グリコライド）のうちいずれか一種以上と、モノ−メトキシポリエチレングリコール−ポリカプロラクトンとの混合物であることを特徴とする請求項６に記載のマイクロニドル。
8. 前記マイクロパーチクルが、マトリクスタイプまたはリザーバータイプであることを特徴とする請求項１に記載のマイクロニドル。
9. 前記マイクロパーチクルの直径が、０．０１〜１０μｍであることを特徴とする請求項１に記載のマイクロニドル。
10. （Ｓ０）ペプチドまたはタンパク質を、疎水性コア形成高分子を用いてマイクロパーチクルの内部に含ませることによって、（ｉ）疎水性コアを形成する高分子及び（ｉｉ）ペプチドまたはタンパク質を含むマイクロパーチクルを形成する段階と、
    （Ｓ１）前記形成したマイクロパーチクルと、皮膚内溶解性物質と、を含む溶液を製造する段階と、
    （Ｓ２）前記溶液をマイクロニドルモールドに注入する段階と、
    （Ｓ３）乾燥及び前記モールドからマイクロニドルを分離する段階と、を含む、請求項１に記載の水溶性マイクロニドルの製造方法。
    （ここで、前記ペプチドは、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、パルミトイルトリペプチド、ミリストイルテトラペプチド、カプロイルテトラペプチド、ミリストイルペンタペプチド、パルミトイルペンタペプチド、ミリストイルヘキサペプチド、パルミトイルヘキサペプチド及びパルミトイルヘプタペプチドからなる群より選択された一つ以上であり、
    前記タンパク質が、上皮成長因子（ＥＧＦ）である。）
11. 前記皮膚内水溶性物質が、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ビニルピロリドン−ビニルアセテート共重合体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、糖類またはこれらの混合物であることを特徴とする請求項１０に記載の製造方法。
12. 前記疎水性コア形成高分子が、ポリ（ラクタイド）、ポリ（グリコライド）、ポリ（ラクタイド−コ−グリコライド）、ポリアンハイドライド、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、モノ−メトキシポリエチレングリコール−ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリ（ブチル酸）、ポリ（バレリアン酸）、ポリウレタン、またはこれらの共重合体からなる群より選択されたいずれか一種以上の生分解性高分子；及びポリアクリレート、エチレン−ビニルアセテート重合体、アクリル置換セルロースアセテート、非分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリビニルクロライド、ポリビニルフルオライド、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリエチレンオキサイド、またはこれらの共重合体からなる群より選択されたいずれか一種以上の非生分解性高分子、からなる群より選択されたいずれか一種単独または混合物であることを特徴とする請求項１０に記載の製造方法。
13. 前記マイクロニドルは、皮膚に付着して使用するためのものである、請求項１に記載のマイクロニドル。
14. 前記マイクロニドルは、皮膚しわ改善の用途に使用するためのものである、請求項１に記載のマイクロニドル。
    （ここで、前記ペプチドまたはタンパク質は、上皮成長因子（ＥＧＦ）及びミリストイルテトラペプチドから選択されるいずれか一つ以上である。）

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