JP6875747B2 - 生薬成分を含む肺高血圧症の予防又は治療剤 - Google Patents

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［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１６年６月１７日に出願された、日本国特許出願第２０１６−１２０９０１号明細書（その開示全体が参照により本明細書中に援用される）に基づく優先権を主張する。本発明は、肺高血圧症の予防又は治療剤に関する。

肺高血圧症は、心臓から肺に血液を送る肺動脈の血圧が高くなり心臓及び肺の機能に障害をもたらす疾患であり、一般に「高血圧」と言われる症状とは全く異なる疾患である。また、肺高血圧症は致死性の高い重篤な疾患であるため、その治療法の開発が急がれている。

従来、肺高血圧症の治療としては、カテーテルで血管を広げる治療、血栓を取り除く外科手術等の処置がされているが、より侵襲性の低い治療法が望まれている。また、投薬治療としては、血管拡張剤等が知られているが（非特許文献１等）、かかる治療法で救えない患者は依然として多く、さらなる肺高血圧症治療剤の開発が強く望まれている。

J Clin Invest. 2012;122(12): 4306-4313 Am J Emerg Med. 15,447,1997 J Urol. 2014 Feb;191(2):502-9 Biochem Pharmacol. 2010 May 1;79(9):1272-80 American Thoracic Society International Conference Abstracts 2012, B63, A3406

本発明が解決すべき課題は、これまで肺高血圧症の治療効果について知られていなかった化合物を有効成分とする新規の肺高血圧症予防又は治療剤を提供することにある。

かかる状況の下、本発明者らは数千種類の化合物について検討した結果、生薬成分であるエメチンが、肺高血圧症の原因の一つと言われる、肺動脈平滑筋細胞の異常増殖を抑制すること、及び肺高血圧症の予防治療効果を有することを見出した。本発明は、かかる新規の知見に基づくものである。

従って、本発明は、以下の項を提供する：
項１．エメチン又はその塩を含有する、肺高血圧症の予防又は治療剤。

項２．１日の投与量が、エメチンの投与量として、８ｍｇ以下である、項１に記載の肺高血圧症の予防又は治療剤。

項３．経口投与剤である、項１又は２に記載の肺高血圧症の予防又は治療剤。

項４−１．エメチン又はその塩の有効量を投与することを含む、肺高血圧症を予防又は治療する方法。

項４−２．１日の投与量が、エメチンの投与量として、８ｍｇ以下である、項４−１に記載の方法。

項４−３．エメチン又はその塩が経口投与される、項４−１又は項４−２に記載の方法。

項５−１．肺高血圧症の予防又は治療に使用するためのエメチン又はその塩。

項５−２．１日の投与量が、エメチンの投与量として、８ｍｇ以下である、項５−１に記載のエメチン又はその塩。

項５−３．肺高血圧症の予防又は治療がエメチン又はその塩の経口投与により行われる、項５−１又は項５−２に記載のエメチン又はその塩。

項６−１．肺高血圧症の予防又は治療剤を製造するための、エメチン又はその塩の使用。

項６−２．１日の投与量が、エメチンの投与量として、８ｍｇ以下である、項６−１に記載の使用。

項６−３．前記肺高血圧症の予防又は治療剤が経口投与剤である、項６−１又は項６−２に記載の使用。

本発明によれば、これまで肺高血圧症の治療効果について知られていなかった化合物であるエメチン又はその塩を有効成分として用いることによって、新規の肺高血圧症の予防又は治療剤を提供することができる。

ここで、本発明の有効成分であるエメチン（Emetine）を含むトコン（吐根）は、ブラジルの原住民が古くよりアメーバ赤痢の治療薬として経験的に使用していた歴史がある。また以前には、株式会社ツムラより、エメチン及びその代謝物であるセファエリンを含有する生薬トコンの抽出液がトコンシロップという商品名で催吐薬として発売されたことがあり、欧米で３００万人以上の患者に投与され、正しく使用した場合は安全性の高い薬剤とされる（非特許文献２）。現在は、消化管障害などの副作用のため販売中止となっている。また、エメチンについて抗癌薬としての作用を示した論文が報告されている（非特許文献３）。しかし、エメチンが肺高血圧症の予防又は治療効果を有することはこれまで一切報告されていない。従って、上記本発明の驚くべき効果は、従来技術から予想し得ないものである。

実施例１におけるIn vitro試験の結果を示す。 実施例２におけるモノクロタリン誘発肺高血圧症モデルに対するエメチンの影響を示す。 実施例２におけるSU5416/ Hypoxiaモデルに対するエメチンの影響を示す。

肺高血圧症の予防又は治療剤
本発明は、エメチン又はその塩を含有する、肺高血圧症の予防又は治療剤を提供する。本発明の有効成分であるエメチン［ＣＡＳ Ｎｏ．４８３−１８−１、（２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＳ）−２−（（（Ｒ）−６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−１−イル）メチル）−３−エチル−９，１０−ジメトキシ−３−メチル−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン（(2S,3R,11bS)-2-(((R)-6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-1-yl)methyl)-3-ethyl-9,10-dimethoxy-3-methyl-1,3,4,6,7,11b-hexahydro-2H-pyrido[2,1-a]isoquinoline）］は、下記構造を有する公知の物質である：

本発明の有効成分であるエメチンの塩は、酸付加塩と塩基との塩を包含する。酸付加塩の具体例として、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機酸塩、及びグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等の酸性アミノ酸塩が挙げられる。塩基との塩の具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩又はカルシウム塩のようなアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩、ピリジン塩、トリエチルアミン塩のような有機塩基との塩、リジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げられる。

本発明の有効成分であるエメチン及びその塩は、水和物又は溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物及び溶媒和物もまた本発明の有効成分である化合物に包含される。

溶媒和物を形成する溶媒としては、エタノール、プロパノール等のアルコール、酢酸等の有機酸、酢酸エチル等のエステル類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類、アセトン等のケトン類、ＤＭＳＯ等が例示される。これらの溶媒は、１種単独で、又は２種以上を混合溶媒として用いることができる。

本発明においては、本発明の有効成分であるエメチン又はその塩そのものを肺高血圧症の予防又は治療剤として用いても、薬学的に許容される各種担体（例えば、等張化剤、キレート剤、安定化剤、ｐＨ調節剤、防腐剤、抗酸化剤、溶解補助剤、粘稠化剤等）と組み合わせた医薬組成物として用いてもよい。

等張化剤としては、例えば、グルコース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、ソルビトール等の糖類、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール類、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等の無機塩類等が挙げられる。これらの等張化剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

キレート剤としては、例えば、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、エデト酸四ナトリウム、エデト酸カルシウム等のエデト酸塩類、エチレンジアミン四酢酸塩、ニトリロ三酢酸又はその塩、ヘキサメタリン酸ソーダ、クエン酸等が挙げられる。これらのキレート剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

安定化剤としては、例えば、亜硫酸水素ナトリウム等が挙げられる。

ｐＨ調節剤としては、例えば、塩酸、炭酸、酢酸、クエン酸等の酸が挙げられ、さらに水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩又は炭酸水素塩、酢酸ナトリウム等のアルカリ金属酢酸塩、クエン酸ナトリウム等のアルカリ金属クエン酸塩、トロメタモール等の塩基等が挙げられる。これらのｐＨ調節剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

防腐剤としては、例えば、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等の第４級アンモニウム塩、アルキルポリアミノエチルグリシン、クロロブタノール、ポリクォード、ポリヘキサメチレンビグアニド、クロルヘキシジン等が挙げられる。これらの防腐剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸水素ナトリウム、乾燥亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、濃縮混合トコフェロール等が挙げられる。これらの抗酸化剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

溶解補助剤としては、例えば、安息香酸ナトリウム、グリセリン、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、プロピレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。これらの溶解補助剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

粘稠化剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等が挙げられる。これらの粘稠化剤は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

また、上記医薬組成物は、エメチン又はその塩以外に、肺高血圧症の予防又は治療作用を有するとされている化合物をさらに含んでいてもよい。肺高血圧症の予防又は治療作用を有することが知られている化合物としては、例えば、プロスタサイクリン製剤（エポプロステノール等）、PDE5阻害薬（タダラフィル等）、エンドセリン受容体拮抗薬（ボセンタン等）が挙げられる。これらの化合物は、１種単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

また、本発明においては、生薬トコンの抽出液自体又は当該抽出液に上記各種担体を加えた組成物を肺高血圧症の予防又は治療剤として用いてもよい。一方で、本発明における肺高血圧症の予防又は治療剤は、エメチン又はその塩を有効成分とするため、生薬トコンの抽出液のエメチン以外の成分である、セファエリンを配合していなくてもよい。

医薬組成物の実施形態において、組成物中のエメチン又はその塩の含有量は特に限定されず、エメチンの含有量換算で、例えば、９０質量％以上、７０質量％以上、５０質量％以上、３０質量％以上、１０質量％以上、５質量％以上、１質量％以上等の条件から適宜設定できる。

製剤形態は、特に限定されず、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤（静脈注射、筋肉注射、局所注射等）、含嗽剤、点滴剤、外用剤（軟膏、クリーム、貼付薬、吸入薬）、座剤等の非経口投与剤等の各種製剤形態を挙げることができる。上記製剤形態のうち、好ましいものとしては、例えば、経口投与剤（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等）、外用剤（吸入薬、軟膏、クリーム、貼付薬等）等が挙げられる。

本発明において、エメチン又はその塩の投与量は、投与経路、患者の年齢、体重、症状等によって異なり一概に規定できないが、エメチンの投与量として、成人に対する１日投与量が通常、約５０００ｍｇ以下、好ましくは約１０００ｍｇ以下になる量とすればよい。また、本発明によれば、エメチンは低用量でも効果を奏するため、エメチンの投与量として、成人に対する１日投与量が、約１００ｍｇ以下、約１０ｍｇ以下、約８ｍｇ以下、約５ｍｇ以下等であってもよい。エメチン又はその塩の投与量の下限も特に限定されず、例えば、エメチンの投与量として、成人に対する１日投与量が通常、０．１ｍｇ以上、好ましくは０．５ｍｇ以上の範囲で適宜設定できる。１日１回投与する場合は、１製剤中にこの量が含まれていればよく、１日３回投与する場合は、１製剤中にこの３分の１量が含まれていればよい。

本発明の肺高血圧症の予防又は治療剤は、哺乳動物等の患者に投与される。哺乳動物としては、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ等が挙げられる。

本発明の肺高血圧症の予防又は治療剤は、少なくとも肺動脈平滑筋細胞の異常増殖を抑制することにより肺高血圧症を予防、治療緩和する。従って、本発明は、エメチン又はその塩を含む肺動脈平滑筋細胞の増殖抑制剤も提供する。尚、本発明の有効成分であるエメチンは、胚及び神経発達、細胞増殖、アポトーシス、免疫応答、ならびに炎症等に関与する転写因子ＮＦ−κＢを阻害することが知られている（非特許文献４）。また、従来、IMD-0354（N-[3,5-Bis(trifluoromethyl)phenyl]-5-chloro-2-hydroxybenzamide）という特定の化合物についてＮＦ−κＢ阻害作用を有し、肺動脈平滑筋細胞の増殖を抑制し、そして肺高血圧症治療効果を有する可能性があるとの報告がされている（非特許文献５）。しかし、本発明の有効成分であるエメチンは、上記IMD-0354とは全く構造の異なる化合物である。さらに、本発明者らは、ＮＦ−κＢ阻害作用を有することが知られている化合物として、Ｎ−ｐ−トシル−Ｌ−フェニルアラニンクロロメチルケトン（N-p-Tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone）、コーヒー酸フェネチルエステル（Caffeic acid phenethyl ester）及びＮα−ｐ−トシル−Ｌ−リジン−クロロメチルケトン塩酸塩（Nα-p-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone hydrochloride）について、これらの化合物を最終濃度５μＭとなるように添加する以外、後述する実施例１に記載の方法と同様にして肺高血圧症患者由来の肺動脈平滑筋細胞の増殖抑制効果を調べたところ、十分な肺動脈平滑筋細胞の増殖抑制は得られなかった（データ示さず）。かかる点からも本発明におけるエメチンによる肺動脈平滑筋細胞の異常増殖抑制効果及び肺高血圧症の予防又は治療効果は従来技術から予想し得ないものである。尚、肺動脈平滑筋細胞の異常増殖抑制剤の有効成分、製剤形態、投与量等は、肺高血圧症の予防又は治療剤と同様である。

以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。

実施例１
肺高血圧症患者由来の肺動脈平滑筋を１ｎｍｏｌ／Ｌ〜５μｍｏｌ／Ｌのエメチン溶液（エメチン溶液の調製は、蒸留水により行った。）で治療し、０時間、４８時間培養後MTT assayを行い細胞増殖率を評価した。具体的には、平滑筋細胞を５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに播種し、２４時間後にエメチンを添加し、最終濃度が１ｎｍｏｌ／Ｌ〜５μｍｏｌ／Ｌになるように調整した。結果を図１に示す。

図１に示すように、エメチンは濃度依存性に肺動脈性肺高血圧症の患者由来の肺動脈血管平滑筋を抑制する結果であった。

実施例２
エメチンについて肺高血圧症モデル動物を用いたin vivo試験を行った。具体的には、まず、モノクロタリン誘発肺高血圧症モデルに対しエメチンの影響を検討した。肺高血圧症モデルの作製に用いたモノクロタリン溶液の調製は、塩酸１ｍｏｌ／Ｌで溶解後、ｐＨメーターを用い水酸化ナトリウム１ｍｏｌ／Ｌで滴定しｐＨ７．４に調整し使用した。エメチン溶液の調製は、蒸留水により行った。モノクロタリン誘発肺高血圧症モデルは、６週齢ラット（SDラット、ｎ＝１３）に対して６０ｍｇ／ｋｇ のモノクロタリンを皮下注射することで作製した。モノクロタリン皮下注射後、３週間連日０．０１ｍｇ／ｋｇ又は０．０５ ｍｇ／ｋｇのエメチンを経口で毎日投与した。Vehicle 群については、蒸留水を投与した３週間後に殺処分し、Mikro-Tip Catheter transducers 2F (Millar社)により右室収縮期圧を測定した。また、ホルマリン固定後に右室と左室を切り分けることにより右室／（左室＋中隔）重量比を測定した。そしてこれらの結果から、肺高血圧症の程度を評価した。結果を図２に示す。

図２に示すように、エメチン治療群はコントロール群に比べ、右室収縮気圧と右室／（左室+中隔）重量比の増悪を抑制し、モノクロタリン誘発肺高血圧症の発症の抑制を示唆する結果であった。

また、SU5416/ Hypoxia モデルを用いたin vivo試験も行った。具体的には、まず、モデル作製に用いたSU5416（セマキサニブ（Semaxanib））の調製は、CMC(Carboxy methyl Cellulose)を用い溶解することにより行った。エメチン溶液の調製は、上記と同様に行った。

６週齢ラット（SDラット、ｎ＝９）に対して２０ｍｇ／ｋｇのSU5416を投与後、低酸素発生装置を用い低酸素状態のチャンバーで飼育することによって３週間低酸素状態（Hypoxia、酸素濃度８−１２％）にした後、normoxiaとした。そして、SU5416投与後８週目の初日から１１週目の最終日の間、エメチン０．０１ｍｇ／ｋｇ又は０．０５ｍｇ／ｋｇを経口で毎日投与し、１１週目の最終日で殺処分し、モノクロタリン誘発肺高血圧症モデルと同様に肺高血圧症の程度を評価した。結果を図３に示す。

図３に示すように、エメチン治療群はコントロール群に比べ、右室収縮気圧と右室／（左室+中隔）重量比の上昇を改善し、SU5416/hypoxia誘発肺高血圧症を改善する結果であった。

Claims (5)

1. エメチン又はその塩を含有する、肺高血圧症の予防又は治療剤。
2. １日の投与量が、エメチンの投与量として、８ｍｇ以下である、請求項１に記載の肺高血圧症の予防又は治療剤。
3. 経口投与剤である、請求項１又は２に記載の肺高血圧症の予防又は治療剤。
4. 前記肺高血圧症が肺動脈性肺高血圧症である、請求項１〜３のいずれかに記載の肺高血圧症の予防又は治療剤。
5. 肺高血圧症の予防又は治療剤を製造するための、エメチン又はその塩の使用。

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