JP6427497B2

JP6427497B2 - 眼疾患の治療剤又は予防剤

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Inventors: 沖上　裕美; 裕美沖上; 達治黒瀬; 幸史藤澤; 千奈美吉川
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Description

本発明は、3-[(3S,4R)-3-Methyl-6-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1,6-diazaspiro[3.4]octan-1-yl]-3-oxopropanenitrile（以下、化合物Ａと表す）の新規医薬用途に関する。より詳細には、本発明は、化合物Ａ又はその製薬上許容される塩を含有する、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障等といった眼疾患の治療剤又は予防剤に関する。

化合物Ａは特許文献１に記載されている。しかしながら、化合物Ａが血管内皮増殖因子（Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ。以下、ＶＥＧＦと略す）の機能を阻害するということは知られていない。

化合物Ａは、下記化学構造式：

で示される。

化合物Ａは、特許文献１に記載の方法に従い製造することができる。

ＶＥＧＦは、脈管形成（内皮前駆細胞からの分化による血管の新規形成）及び血管新生（既に存在する脈管構造からの血管の形成）を促す成長因子のサブファミリーである。また、ＶＥＧＦは血管透過性を増加させ、浮腫を誘発することが知られている。

VEGF遺伝子発現の増加が、滲出型加齢黄斑変性、糖尿病網膜症及び網膜中心静脈閉塞症などの血管疾患の特徴である、血管透過性増加や浮腫（非特許文献１）及び血管新生（非特許文献２）に関与していることが知られている。

ＶＥＧＦの硝子体内注射により網膜血管透過性を増加させた動物モデルが知られており、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症などに対する薬剤候補の評価に汎用されている（非特許文献３及び４）。

一般名ラニビズマブは、日本国薬事法１４条の規定に基づく医薬品等の製造販売の承認を受けた医薬品である（承認番号：22100AMX00399000）。ラニビズマブは、ヒト化マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体Ｆａｂ断片であり、中心窩下脈絡膜新生血管を伴う加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞症に伴う黄斑浮腫及び病的近視における脈絡膜新生血管の治療に有効であることが知られている。
一般名アフリベルセプトは、日本国薬事法１４条の規定に基づく医薬品等の製造販売の承認を受けた医薬品である（承認番号：番号：22400AMX01389）。アフリベルセプトは、ヒトＶＥＧＦ受容体１及び２の細胞外ドメインをヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに結合した組換え融合糖蛋白質である。アフリベルセプトは、可溶性のデコイ受容体として、ＶＥＧＦ−Ａ及びＰＩＧＦに結合することで、これらの作用を阻害し、中心窩下脈絡膜新生血管を伴う加齢黄斑変性の治療に有効であることが知られている。
一般名ペガプタニブは、日本国薬事法１４条の規定に基づく医薬品等の製造販売の承認を受けた医薬品である（承認番号：番号：22000AMX01705）。ペガプタニブは、ＶＥＧＦ−Ａ_１６５に対して選択的かつ高い親和性で結合しその活性を阻害するＰＥＧ化オリゴヌクレオチドであり、中心窩下脈絡膜新生血管を伴う加齢黄斑変性の治療に有効であることが知られている。

上記から、ＶＥＧＦの機能を阻害し、網膜血管透過性増加及び脈絡膜からの血管新生を抑制することが、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障等の眼疾患の治療又は予防に有効であることが示唆される。

加齢黄斑変性は加齢に伴って黄斑部に生じる疾患である。加齢黄斑変性は、脈絡膜新生血管の有無で滲出型と萎縮型に分類される。滲出型加齢黄斑変性は、新生血管型黄斑変性とも呼ばれ、黄斑部に伸展した脈絡膜由来の新生血管からの出血や滲出が黄斑に浮腫を生じさせるものである。萎縮型加齢黄斑変性は、脈絡膜血管新生が関与せず、網膜色素上皮細胞や脈絡膜毛細管板が萎縮し、網膜が障害されていくものである。

糖尿病網膜症は糖尿病の３大合併症の一つで、近年成人の失明原因の第一位を占める疾患である。糖尿病網膜症は網膜血管病であり、毛細管レベルの細小血管症として始まる。血管症の初期病変は単純糖尿病網膜症、病変が進行し毛細血管の閉塞が進行している状態は前増殖糖尿病網膜症、血管の閉塞が拡大し網膜虚血が進行し、網膜や硝子体に血管新生が認められる状態は増殖糖尿病網膜症と呼ばれる。

黄斑浮腫は網膜の一部である黄斑に浮腫が生じる状態をいう。糖尿病黄斑浮腫は、糖尿病網膜症の単純糖尿病網膜症から増殖糖尿病網膜症までの各病期に生じ、視力低下の原因となる。

網膜静脈閉塞症は、高血圧、動脈硬化等を原因とする網膜血管閉塞症である。網膜静脈の根元が閉塞した場合は網膜中心静脈閉塞症となり、網膜全体に出血する。網膜静脈の分枝が閉塞すると網膜静脈分枝閉塞症となり、中枢の耳側静脈が閉塞された場合に視力障害をもたらす黄斑浮腫が発症する。

血管新生黄斑症は、新生血管により黄斑部の構造が破壊されてしまうため、視力が不可逆的に低下してしまう疾患である。

血管新生緑内障は、糖尿病網膜症が増殖糖尿病網膜症にまで進行し、新生血管が虹彩や隅角に発生し、線維血管性増殖膜が房水の出口である隅角を閉塞して、眼圧が上昇することで起こる疾患である。

特開２０１１−４６７００号公報

CRAWFORD, Y et al. VEGF inhibition: insights from preclinical and clinical studies. Cell Tissue Res. Jan 2009, Vol.335, No.1, pages 261-269. DVORAK, HF et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor and the significance of microvascular hyperpermeability in angiogenesis. Curr Top Microbiol Immunol. 1999, Vol.237, pages 97-132. XU, Q et al. Sensitive blood-retinal barrier breakdown quantitation using Evans blue. Invest Ophthalmol Vis Sci. Mar 2001, Vol.42, No.3, pages 789-794. EDELMAN, JL et al. Corticosteroids inhibit VEGF-induced vascular leakage in a rabbit model of blood-retinal and blood-aqueous barrier breakdown. Exp Eye Res. Feb 2005, Vol.80, No.2, pages 249-258.

発明が解決しようとする課題は、化合物Ａの新規医薬用途を提供することである。

本発明者らは、化合物Ａの新規医薬用途を開発するために鋭意研究を重ねた結果、化合物ＡがＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加を抑制すること、上記抑制によりＶＥＧＦが関与する様々な眼疾患に対して化合物Ａが有効であること及び化合物Ａが血液網膜関門を通過することを初めて見出し、本発明を完成させた。

本発明は、以下の態様を含む。
［１］
下記化学構造式：

で示される化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される眼疾患の治療剤又は予防剤。

［２］加齢黄斑変性が滲出型加齢黄斑変性である、［１］に記載の治療剤又は予防剤。

［３］黄斑浮腫が糖尿病黄斑浮腫又は網膜静脈分枝閉塞症に伴う黄斑浮腫である、［１］に記載の治療剤又は予防剤。

［４］網膜静脈閉塞症が網膜中心静脈閉塞症である、［１］に記載の治療剤又は予防剤。

［５］治療剤又は予防剤が経口投与される、［１］に記載の治療剤又は予防剤。

［６］治療剤又は予防剤が眼に投与される、［１］に記載の治療剤又は予防剤。

［７］投与部位が硝子体である、［６］に記載の治療剤又は予防剤。

［８］剤形が注射剤である、［６］又は［７］に記載の治療剤又は予防剤。

化合物Ａは、ＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加を抑制するので、ＶＥＧＦが関与する様々な眼疾患の治療剤又は予防剤として有効である。

ラットＶＥＧＦ誘発網膜血管透過性増加モデルにおける化合物Ａの経口投与による網膜血管透過性抑制を示した図である。（実施例１）ラットＶＥＧＦ誘発網膜血管透過性増加モデルにおける化合物Ａの硝子体内注射による網膜血管透過性抑制を示した図である。（実施例２）

本明細書における用語の定義は以下のとおりである。

「製薬上許容される塩」とは、化合物Ａと無毒の塩を形成するものであればいかなる塩でもよく、無機酸との塩、有機酸との塩、アミノ酸との塩等が挙げられる。

無機酸との塩として、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等との塩が挙げられる。
有機酸との塩として、シュウ酸、マレイン酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、アスコルビン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。

アミノ酸との塩として、アスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。

公知の方法に従って、化合物Ａと無機酸、有機酸又はアミノ酸とを反応させることにより、各々の塩を得ることができる。

「医薬組成物」とは、医薬品として利用可能な組成物を意味する。
本発明の医薬組成物は、医薬製剤の技術分野において公知の方法に従って、化合物Ａ又はその製薬上許容される塩を、少なくとも１種以上の製薬上許容される担体等と、適宜、適量混合等することによって、製造される。該医薬組成物中の化合物Ａ又はその製薬上許容される塩の含量は、剤形、投与量等により異なる。

「医薬組成物」は、経口的又は非経口的に投与することができる。投与形態としては、経口投与、眼への局所投与（点眼投与、結膜嚢内投与、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射等）、静脈内投与、経皮投与等が挙げられる。経口投与に適した剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられ、非経口投与に適した剤形としては外用剤、坐剤、注射剤、点眼剤、眼軟膏、貼布剤、ゲル、挿入剤、経鼻剤、経肺剤等が挙げられる。これらは、製剤の技術分野において公知の方法に従って、調製することができる。また、化合物Aはこれらの製剤の他に眼内インプラント用製剤やマイクロスフェアー等のドラッグデリバリー化された製剤にすることもできる。

「製薬上許容される担体」としては、製剤素材として慣用の各種有機又は無機担体物質が挙げられ、固形製剤における賦形剤、崩壊剤、結合剤、流動化剤、滑沢剤等、又は液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が挙げられる。更に必要に応じて、保存剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の添加物が用いられる。

「賦形剤」としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、トウモロコシデンプン、デキストリン、微結晶セルロース、結晶セルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム等が挙げられる。
「崩壊剤」としては、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、結晶セルロース等が挙げられる。
「結合剤」としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、結晶セルロース、白糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、カルメロースナトリウム、アラビアゴム等が挙げられる。
「流動化剤」としては、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。
「滑沢剤」としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク等が挙げられる。

「溶剤」としては、精製水、エタノール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油等が挙げられる。
「溶解補助剤」としては、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
「懸濁化剤」としては、塩化ベンザルコニウム、カルメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、ポビドン、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。
「等張化剤」としては、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。
「緩衝剤」としては、リン酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
「無痛化剤」としては、ベンジルアルコール等が挙げられる。

「保存剤」としては、パラオキシ安息香酸エチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸等が挙げられる。
「抗酸化剤」としては、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸等が挙げられる。
「着色剤」としては、食用色素（例えば食用赤色２号又は３号、食用黄色４号又は５号等）、β−カロテン等が挙げられる。
「甘味剤」としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム等が挙げられる。

注射剤は、塩化ナトリウム等の等張化剤、リン酸ナトリウム等の緩衝化剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート等の界面活性剤、メチルセルロース等の増粘剤等から必要に応じて選択して用い、調製することができる。

点眼剤は、塩化ナトリウム、濃グリセリンなどの等張化剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどの緩衝化剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン等の防腐剤等から必要に応じて選択して用い、調製することができ、ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、通常４〜８の範囲内が好ましい。

眼軟膏は、白色ワセリン、流動パラフィン等の汎用される基剤を用い、調製することができる。

挿入剤は、生体適合性ポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸等の生体適合性ポリマーを化合物Aとともに粉砕混合し、この粉末を圧縮成型することにより、調製することができ、必要に応じて、賦形剤、結合剤、安定化剤、ｐＨ調整剤を用いることができる。眼内インプラント用製剤は、生体分解性ポリマー、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸共重合体等の生体分解性ポリマーやヒドロキシプロピルセルロース等の生体適合性ポリマーを用い、調製することができる。

本発明の医薬組成物は、ヒト以外の哺乳動物（マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル等）及びヒトに対しても、経口的又は非経口的（直腸投与、静脈内投与、或いは、点眼、眼軟膏の塗布又は硝子体内注射等の眼への局所投与等）に投与することができる。投与量は、投与対象、疾患、症状、剤形、投与ルート等により異なるが、例えば、成人の患者（体重約６０ｋｇ）に経口投与する場合、１日あたり、有効成分である化合物Ａの約１ｍｇ〜１ｇを１回乃至数回に分けて投与することができる。注射剤は、例えば、成人の患者（体重約６０ｋｇ）に、一日あたり０．０００１〜２０００ｍｇを１回乃至数回に分けて投与することができる。また、点眼剤又は挿入剤は、例えば、成人の患者（体重約６０ｋｇ）に、１日あたり有効成分である化合物Ａ濃度が通常約０．０００１％〜０．１％（ｗ／ｖ）のものを１回乃至数回に分けて投与することができる。

ヒトＶＥＧＦには、ヒトＶＥＧＦ−Ａ₁₂₁、ヒトＶＥＧＦ−Ａ₁₄₅、ヒトＶＥＧＦ−Ａ₁₆₅、ヒトＶＥＧＦ−Ａ₁₈₉、ヒトＶＥＧＦ−Ａ₂₀₆、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ₁₆₇、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ_186、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ，ヒトＶＥＧＦ−Ｄ、ヒトＰＩＧＦ−１及びヒトＰＩＧＦ−２等のアイソフォームが存在し、量的及び質的に主要なサブタイプはヒトＶＥＧＦ−Ａ₁₆₅である。本明細書における「ＶＥＧＦ」には、上記アイソフォームが含まれる。

ラットＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦよりも１アミノ酸短い。ラットＶＥＧＦには、ヒトＶＥＧＦと同様にさまざまなアイソフォームが存在し、量的及び質的に主要なサブタイプはラットＶＥＧＦ₁₆₄である。本明細書における「ＶＥＧＦ」には、上記アイソフォームが含まれる。

「ＶＥＧＦの機能を阻害する」とは、ＶＥＧＦの機能を阻害してその活性を消失又は減弱することを意味し、ＶＥＧＦのシグナルカスケードの下流に位置する一つ又は二つ以上の分子の機能を阻害することを意味する。「ＶＥＧＦの機能を阻害する」は、好ましくは「ヒトＶＥＧＦの機能を阻害する」である。機能の阻害ないし活性の消失又は減弱は、好ましくはヒトの臨床的適応で行われる。

本明細書において「治療」とは、症状の改善、重症化の防止、寛解の維持、再燃の防止、さらには再発の防止も含む。本明細書において「予防」とは、症状の発症を抑制することを意味する。

化合物Ａ又はその製薬上許容される塩は、ＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加を抑制するので、ＶＥＧＦが関与する眼疾患の治療剤又は予防剤の有効成分として用いることができる。

ＶＥＧＦが関与する眼疾患として好ましくは、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障等である。

黄斑浮腫として好ましくは、糖尿病黄斑浮腫又は網膜静脈分枝閉塞症に伴う黄斑浮腫である。

加齢黄斑変性として好ましくは、滲出型加齢黄斑変性である。加齢黄斑変性としてより好ましくは、中心窩下脈絡膜新生血管を伴う加齢黄斑変性である。

網膜静脈閉塞症として好ましくは、網膜中心静脈閉塞症である。

本発明の実施の一態様として、治療上有効量の化合物Ａ又はその製薬上許容される塩を哺乳動物に投与することからなる、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される眼疾患の治療方法又は予防方法が挙げられる。

本発明の実施の一態様として、化合物Ａ又はその製薬上許容される塩及び製薬上許容される担体を含む、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される眼疾患の治療のための医薬組成物が挙げられる。

本発明の実施の一態様として、治療上有効量の化合物Ａ又はその製薬上許容される塩を哺乳動物に投与することからなる、ＶＥＧＦの機能の阻害方法が挙げられる。

本発明の実施の一態様として、治療上有効量の化合物Ａ又はその製薬上許容される塩を哺乳動物に投与することからなる、ＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加の抑制方法が挙げられる。

哺乳動物とは、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル等であり、好ましくはヒトである。

本発明の実施の一態様として、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される眼疾患の治療又は予防のための化合物Ａ又はその製薬上許容される塩の使用が挙げられる。

本発明の実施の一態様として、ＶＥＧＦの機能阻害のための化合物Ａ又はその製薬上許容される塩の使用が挙げられる。

本発明の実施の一態様として、ＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加の抑制のための化合物Ａ又はその製薬上許容される塩の使用が挙げられる。

本発明として好ましくは、化合物Ａ又はその製薬上許容される塩、及び製薬上許容される担体を含む、医薬組成物である。

実験１．ラットＶＥＧＦ誘発網膜血管透過性増加モデルにおける化合物Ａの経口投与による網膜血管透過性抑制
ラットＶＥＧＦ誘発網膜血管透過性増加モデルを用いて、化合物Ａの網膜血管透過性増加抑制作用を評価した。動物モデルは、非特許文献３等を基に適宜の改変を加えて作成した。
実験動物は、８週齢の雄性ＢｒｏｗｎＮｏｒｗａｙラット（日本チャールス・リバー株式会社）を用いた。
ラット両眼の硝子体内に、ラットＶＥＧＦ_１６４（４００ｎｇ/ｅｙｅ、Ｒ&ＤＳｙｓｔｅｍｓ社）を注射した（ＶＥＧＦ投与群）。正常対照群のラット両眼の硝子体内には、Ｄ−ＰＢＳ（−）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を硝子体内注射した。各群の例数は４匹（８眼）であった。
１％（ｗ／ｖ）メチルセルロース水溶液に懸濁した化合物Ａを１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇで、ＶＥＧＦ硝子体内注射の１時間前、４時間後及び２０時間後に経口投与した（化合物Ａ投与群）。基剤投与群には、１％（ｗ／ｖ）メチルセルロース水溶液を上記化合物Ａ投与群と同容量で、ＶＥＧＦ硝子体内注射の１時間前、４時間後及び２０時間後に経口投与した。
ＶＥＧＦ硝子体内注射２４時間後に、ラットを安楽死させた後、ラットの眼球を血液が混入しないように摘出した。眼球摘出後、視神経乳頭付近を手術用メスで小さく切開し、速やかに硝子体を摘出した。採取した硝子体中蛋白質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄ法で測定した。
網膜血管透過性増加抑制率は、下記式Ｘに従い、算出した。
［式Ｘ］
網膜血管透過性増加抑制率（％）＝（Ｐ_Ｂ−Ｐ_Ｘ）／（Ｐ_Ｂ−Ｐ_Ａ）×１００
Ｐ_Ａ：正常対照群の硝子体中蛋白質濃度
Ｐ_Ｂ：基剤投与群の硝子体中蛋白質濃度
Ｐ_Ｘ：化合物Ａ投与群の硝子体中蛋白質濃度
化合物Ａの評価結果を図１に示した。

実験２．ラットＶＥＧＦ誘発網膜血管透過性増加モデルにおける化合物Ａの硝子体内注射による網膜血管透過性抑制
実験動物は、８週齢の雄性ＢｒｏｗｎＮｏｒｗａｙラット（日本チャールス・リバー株式会社）を用いた。
ラットＶＥＧＦ_１６４（４００ｎｇ/ｅｙｅ、Ｒ&ＤＳｙｓｔｅｍｓ社）と、基剤で溶解または懸濁させた化合物Ａ（１０μｇ／ｅｙｅ、３０μｇ／ｅｙｅ又は１００μｇ／ｅｙｅ）の混合液をラット両眼の硝子体内に注射した（化合物Ａ投与群）。基剤投与群のラット両眼の硝子体内には、ラットＶＥＧＦ_１６４と上記化合物Ａ投与群と同容量の基剤との混合液を注射した。基剤には水性の基剤を使用した。正常対照群のラット両眼の硝子体に、Ｄ−ＰＢＳ（−）（ＳＩＧＭＡ社）を注射した。各群の例数は４匹（８眼）であった。
ＶＥＧＦ硝子体内注射２４時間後に、ラットを安楽死させた後、ラットの眼球を血液が混入しないように摘出した。眼球摘出後、視神経乳頭付近を手術用メスで小さく切開し、速やかに硝子体を摘出した。採取した硝子体中蛋白質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄ法で測定した。網膜血管透過性増加抑制率は、下記式Ｘに従い、算出した。
［式Ｘ］
網膜血管透過性増加抑制率（％）＝（Ｐ_Ｂ−Ｐ_Ｘ）／（Ｐ_Ｂ−Ｐ_Ａ）×１００
Ｐ_Ａ：正常対照群の硝子体中蛋白質濃度
Ｐ_Ｂ：基剤投与群の硝子体中蛋白質濃度
Ｐ_Ｘ：化合物Ａ投与群の硝子体中蛋白質濃度
化合物Ａの評価結果を図２に示した。

実験３．経口投与又は硝子体内注射した化合物Ａの眼組織分布ならびに全身暴露
実験動物は、８週齢の雄性Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ラット（日本チャールス・リバー株式会社）を用いた。
１％（ｗ／ｖ）メチルセルロース水溶液に懸濁した化合物Ａを１００ｍｇ／ｋｇで、ラットに経口投与した。経口投与から０．５、１、２、４、６及び２４時間後に血漿及び神経網膜を採取し、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ法）で化合物Ａの血漿中及び神経網膜中濃度を定量した。
ラット両眼の硝子体内に、基剤で溶解または懸濁させた化合物Ａをそれぞれ１０μｇ／ｅｙｅで注射した。硝子体内注射から１、２、４及び２４時間後に神経網膜を採取し、ＬＣ−ＭＳ法で化合物Ａの神経網膜中濃度を定量した。各群の例数は２〜３匹（４〜６眼）であった。
経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）した化合物Ａの血漿中濃度推移を表１に、経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）した化合物Ａの神経網膜中濃度推移を表２に、硝子体内注射（１０μｇ／ｅｙｅ）した化合物Ａの神経網膜中濃度推移を表３に示した。

本発明は、化合物Ａの眼疾患を対象疾患とする新規医薬用途を提供する。

Claims

下記化学構造式：

で示される化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される眼疾患の治療剤又は予防剤。
加齢黄斑変性が滲出型加齢黄斑変性である、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
黄斑浮腫が糖尿病黄斑浮腫又は網膜静脈分枝閉塞症に伴う黄斑浮腫である、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
網膜静脈閉塞症が網膜中心静脈閉塞症である、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
治療剤又は予防剤が経口投与される、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
治療剤又は予防剤が眼に投与される、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。
投与部位が硝子体である、請求項６に記載の治療剤又は予防剤。
剤形が注射剤である、請求項６又は７に記載の治療剤又は予防剤。
下記化学構造式：

で示される化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、血管新生黄斑症及び血管新生緑内障からなる群から選択される、ＶＥＧＦにより誘発される網膜血管透過性増加を伴う眼疾患の治療剤又は予防剤。
加齢黄斑変性が滲出型加齢黄斑変性である、請求項９に記載の治療剤又は予防剤。
黄斑浮腫が糖尿病黄斑浮腫又は網膜静脈分枝閉塞症に伴う黄斑浮腫である、請求項９に記載の治療剤又は予防剤。
網膜静脈閉塞症が網膜中心静脈閉塞症である、請求項９に記載の治療剤又は予防剤。
治療剤又は予防剤が経口投与される、請求項９に記載の治療剤又は予防剤。
治療剤又は予防剤が眼に投与される、請求項９に記載の治療剤又は予防剤。
投与部位が硝子体である、請求項１４に記載の治療剤又は予防剤。
剤形が注射剤である、請求項１４又は１５に記載の治療剤又は予防剤。