JP6490997B2 - Ａｔｐ増加作用を呈するジェウェノールａ誘導体及びその製造方法 - Google Patents

Description

この発明はＡＴＰ増加作用を呈するジェウェノールＡ誘導体及びその製造方法に関するものである。

ＡＴＰは細胞のエネルギー源であり、細胞の維持、細胞の補強、物質の細胞内輸送、原形質流動、遺伝子発現、細胞内情報伝達などを調整する低分子リン酸化合物である。脂質、糖質、たんぱく質から細胞質またはミトコンドリア内で酵素を介して産生される。

ＡＴＰは皮膚、肝臓、消化管、神経、筋肉などの上皮細胞内にも認められ、これらの上皮細胞もＡＴＰを利用して細胞機能を発揮している。

ＡＴＰはｃＡＭＰの原料でもあり、細胞内情報伝達にも関与している。ＡＴＰの減少は細胞機能の低下を意味している。また、カロリーを代謝してＡＴＰを産生する作用が欠落することにより、カロリーが脂肪に変化して中性脂肪の蓄積や肥満をもたらす。

ＡＴＰを増加させることは細胞機能の亢進、細胞の機能性を高め、健康維持とダイエットにもつながるため、ＡＴＰを増加させる物質についていろいろな研究がなされている。トリカフェオイルキナ酸からなり神経細胞においてＡＴＰの産生を促進するためのＡＴＰ産生促進剤の発明（例えば、特許文献１参照。）があり、トリカフェオイルキナ酸のＡＴＰ産生が示されている。しかし、その程度は軽度であり、産業への利用は限定されている。

また、ＡＴＰ産生促進剤および表皮細胞賦活化剤（例えば、特許文献２参照。）があり、そこではウコン、ヒバマタ、カンゾウ、キナ、アンズ、マルメロ、クララ、クチナシ、サンシシ、クマザサ、グレープフルーツ、ゲンノショウコ、紅茶、緑茶、冬虫夏草、ゴボウ、コメヌカ、シイタケ、アカヤジオウ、シソ、ボダイジュ、ショウガ、ワレモコウ、ドクダミ、シラカバ、スギナ、セキセツソウ、タマサキツヅラフジ、クワ、トウキンセンカ、ダイダイ、マツホド、ブッチャーズブルーム、プルーン及びマロニエからなる群から選ばれる１種又は２種以上の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＡＴＰ産生促進剤が提示されているが、活性の程度は軽度である。

特許第５４０３５８２号 特願２００８−１０９３７２

既存の物質によるＡＴＰ増加作用は軽度であり、産業上への利用が限定されるという課題があり、また、化学合成された物質では安全性に問題があり、利用が限られている。

そこで、副作用が弱く優れたＡＴＰ増加作用を呈する天然物及びそれを効率良く製造する製造方法が望まれている。

上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は下記の式（１）で示されるＡＴＰ増加作用を有するジェウェノールＡ誘導体に関するものである。

上記の目的を達成するために、請求項２に記載の発明はＡＴＰ増加作用を有するジェウェノールＡ誘導体の製造方法に関するものである。

この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。

請求項１に記載のジェウェノールＡ誘導体はＡＴＰ増加作用に優れている。

請求項２に記載の製造方法によれば、効率良くジェウェノールＡ誘導体を製造することができる。

以下、この発明を具体化した実施形態について詳細に説明する。

ＡＴＰ増加作用を呈するジェウェノールＡ誘導体とは、下記の式（１）で示される構造からなるものである。

前記の式（１）のようにジェウェノールＡの１分子とフロログルシノールの２分子からなる。これらの結合はすべて天然型であり、水酸基の酸素を介した結合である。

ジェウェノールＡはジテルペンに分類される天然物であり、類似体としてジェウェノールＢがある。このジェウェノールＡの分子式はＣ２０Ｈ３４Ｏ４であり、分子量は３３８．４９である。フロログルシノールとはポリフェノールの一種であり、植物に存在して抗酸化作用と抗菌作用を発揮する。また、医薬品としても利用され、鎮痙作用を発揮する。分子式はＣ６Ｈ６Ｏ３であり、分子量は１２６．１１である。

このジェウェノールＡ誘導体はジェウェノールＡのアルコール性水酸基にフロログルシノールのフェノール性水酸基が結合した形状を示す。水酸基を４個有しており、強い抗酸化作用を呈する。また、水、アルコール、油や有機溶媒にも溶解しやすく、産業上利用しやすい。

このジェウェノールＡ誘導体は細胞膜、ミトコンドリア膜や核膜に浸透しやすく、細胞膜を安定化させる働きがある。特に、ミトコンドリア膜には親和性が高く、ミトコンドリアの酸化を防止し、かつ、ビタミン類の酸化も抑制することによりＡＴＰ産生を増加させる。

このジェウェノールＡ誘導体は少量であれば、化学的な合成経路により合成することも可能である。ジェウェノールＡとフロログルシノールの水酸基を保護しながら、有機合成できる。しかし、コストが高く、溶媒の影響も生じやすいことからこの製造方法は産業上の利用が限定される。しかし、標準物質の採取には利用できる。

このジェウェノールＡ誘導体は標準品の構造解析により同定され、化学合成された標準品の４００ＭＨｚのＨ−ＮＭＲでは重水中でケミカルシフトは０．２８〜１．４、２．２２〜２．９０８、３．１３４、３．３０８、３．６４０、３．７７９、６．５４１、６．６１６、７．０２８などのｐｐｍであり、特徴的なピークを認める。

このジェウェノールＡ誘導体は筋肉細胞にも浸透しやすく、筋肉細胞でＡＴＰ産生を増加し、筋肉の活動を高める。カロリーが消費されることから糖質や脂肪を減少させ、ダイエット作用を呈する。

さらに、このジェウェノールＡ誘導体は皮膚上皮細胞のＡＴＰ産生を増加させ、皮膚の分化と増殖を促進する。皮膚上皮細胞のＡＴＰを増加させることによ、シワやタルミを抑制する。筋肉細胞の増強と皮膚上皮細胞の増殖により優れた美容作用を発揮する。

このジェウェノールＡ誘導体は神経細胞にも働き、ＡＴＰの増加を介して神経細胞を活性化することにより神経細胞の増殖と伝達を高める。この働きは認知症やアルツハイマー症、パーキンソン症にも適している。

このジェウェノールＡ誘導体は肝臓及び腎臓に存在するエステラーゼによりジェウェノールＡとフロログルシノールに分解され、代謝されることから、過剰量が摂取され、または、塗布された場合にも、過剰による副作用は少ない。

また、このジェウェノールＡ誘導体は自然界に存在する物質であり、その食経験や化粧品としての利用実績が豊富であることから安全性が確認されている。

さらに、このジェウェノールＡ誘導体は眼の角膜細胞、水晶体細胞、筋肉組織と視神経のＡＴＰを増加して構造を補強し、視力の回復に利用される。

これらのジェウェノールＡ誘導体によるＡＴＰ産生はミトコンドリア膜の安定化と抗酸化、ＮＡＤＨ、ＦＡＤと鉄などによる電子伝達系を増強させるメカニズムにより、他の医薬品や原料とも併用できる点は好ましい。

このジェウェノールＡ誘導体は天然にも存在しており、アカメガシワの葉などに極微量認められる。このジェウェノールＡ誘導体を精製により上記の植物から抽出することは可能である。

ただし、精製には大量の原料を必要とすることから、製造方法として産業上への利用は制限される。

このジェウェノールＡ誘導体はアカメガシワ葉などの植物から得ることが可能であるが、含有量が少ないことから、発酵法などにより増加させることは好ましい。発酵の方法として大豆と混合して納豆菌やベニコウジ菌により発酵させて得ることは食経験があり、増加量も多いことから好ましい。

得られたジェウェノールＡ誘導体を医薬品素材として利用する場合、目的とするジェウェノールＡ誘導体を分離精製することは、目的とするジェウェノールＡ誘導体の純度が高まり、不純物を除去できる点から好ましい。

医薬品として、注射剤または経口剤または塗布剤などの非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、塗布剤、ゲル剤、歯磨き粉等に配合されて利用される。

経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤は、シェラックまたは砂糖で被覆することもできる。

また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を添加することができる。

非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。

注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤がある。これは使用時、注射用蒸留水や生理食塩液等に無菌的に溶解して用いられる。

食品製剤としてＡＴＰ産生を増加することによる機能性をもたらすサプリメント、滋養強壮系の食品、皮膚の健康を維持する美容サプリメント、神経、肝臓や腎臓の機能を向上させる健康食品、筋肉を増強し、脂肪を分解するダイエットなどを目的とした健康食品、美容食品などに利用される。また、保健機能食品として、栄養機能食品や特定保健用食品に利用することは好ましい。

得られた食品製剤をイヌやネコなどのペットや家畜動物に利用する場合、ＡＴＰの増加による上皮組織や筋肉、骨細胞の強化を目的として飼料やサプリメントとして利用される。

化粧料として常法に従って界面活性化剤、溶剤、増粘剤、賦形剤等とともに用いることができる。例えば、クリーム、毛髪用ジェル、洗顔剤、美容液、化粧水等の形態とすることができる。

化粧料の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状または粉末状として用いることができる。

得られた化粧料は皮膚上皮細胞のＡＴＰを増加させることにより皮膚の構築を強固にし、シワを防止し、たるみを防ぐことは好ましい。

また、ジェウェノールＡ部分が抗菌作用を発揮することにより、歯磨き剤や入浴剤などに利用できる。

次に、アカメガシワの葉、大豆粉末と納豆菌を添加して発酵させた発酵液をベニコウジ菌で発酵する工程からなるＡＴＰ増加作用を呈するジェウェノールＡ誘導体の製造方法について説明する。

ここでいうジェウェノールＡ誘導体とはジェウェノールＡの１分子とフロログルシノールの２分子からなる物質であり、これらの結合はすべて天然型であり、水酸基の酸素を介した結合である。ジェウェノールＡ誘導体はミトコンドリア膜の安定化とビタミン類の抗酸化によりＡＴＰ産生を促進する。

このジェウェノールＡ誘導体のジェウェノールＡとフロログルシノールは天然に存在し、食経験も豊富であり、安全性が認められていることから好ましい。

この誘導体は皮膚や神経、骨、筋肉などの上皮細胞に働き、ＡＴＰを増加させ、組織を強化する。

この製造方法とはアカメガシワの葉、大豆粉末と納豆菌を添加して発酵させた発酵液をベニコウジ菌で発酵する工程からなる。

原料となる物質はアカメガシワの葉、大豆粉末、納豆菌及びベニコウジ菌である。

ここでいうアカメガシワは学名Ｍａｌｌｏｔｕｓ Ｊａｐｏｎｉｃｕｓであり、赤芽槲や赤芽柏とも表記される。トウダイグサ科アカメガシワ属の落葉高木であり、樹皮は医薬品原料としても利用されている。この葉は食用として利用され、和え物などになる。特に、若葉は食用として適している。

アカメガシワの葉には色素、ポリフェノールやジェウェノールＡが含有されていることからこのジェウェノールＡ誘導体を製造する原料として好ましい。

アカメガシワの葉は日本、中国、台湾、アメリカなどいずれの国の由来でも良い。特に、日本産で低農薬や減農薬で生産されたものは好ましい。

アカメガシワの葉は乾燥され、粉末化されることが好ましく、発酵の前にオートクレーブ滅菌されることは発酵をスムーズに行うることから好ましい。

３マイクロメーター以下の粒子サイズの粉末が発酵の工程を実施しやすくすることから好ましい。

原料となる大豆粉末は、日本産、中国産、アメリカ産、ロシア産などいずれの産地の大豆でも利用できるが、トレーサビリティーが確実であり、生産者が明確である日本産が好ましい。

このうち、有機栽培や無農薬で栽培された大豆は有害な農薬や金属を含有しないことから、さらに好ましい。

大豆は使用に際して、株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０、中山技術研究所製ＤＭ−６などの粉砕機で粉砕される。これにより発酵の工程が効率的に進行されやすい。

さらに、アカメガシワの葉と大豆は粉砕後、オートクレーブなどにより滅菌されることは雑菌の繁殖を防御できることから好ましい。

用いる納豆菌は学名バチルス サブチリスで日本では納豆の製造に汎用され、食経験が豊富で有用な食用菌である。沖縄や鹿児島などの日本産、中国や台湾の東南アジア原産の菌種が用いられる。

この納豆菌はアカメガシワの葉と大豆からなるジェウェノールＡとフロログルシノールの結合を促進する。

前記の発酵に関するそれぞれの添加量はアカメガシワの葉の乾燥粉末１重量に対し、大豆粉末は０．０５〜４重量及び納豆菌は０．００１〜０．０３重量が好ましい。納豆菌は発酵される前に、前培養することは、発酵の初発時間を短縮し、発酵時間が短縮されることから好ましい。

前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、滅菌された水道水により前記の材料を混合することは好ましい。

また、この発酵は３９〜４４℃に加温され、発酵は、２日間から３０日間行われる。目的とするジェウェノールＡ誘導体をＨＰＬＣやＴＬＣにより定量することならびに、菌体の増殖性を確認することにより、発酵の工程管理を実施することは好ましい。

前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、滅菌された水道水により前記の材料を混合することは好ましい。

この発酵の工程によってジェウェノールＡとフロログルシノールとが結合するものの、その結合が不安定であることから次のベニコウジ菌による発酵を行う。

用いるベニコウジ菌は学名Ｍｏｎａｓｃｕｃ ｐｕｒｐｕｒｅｕｓの糸状菌であり、古くから日本、中国や台湾において紅酒や豆腐ようなどの発酵食品に利用されている。また、沖縄や鹿児島などの日本産、中国や台湾の東南アジア原産の菌種が用いられる。

前記の発酵に関するそれぞれの添加量は前記の発酵物１重量に対してベニコウジ菌は０．０００１〜０．００４重量が好ましい。ベニコウジ菌は発酵される前に、前培養することは、発酵の初発時間を短縮し、発酵時間が短縮されることから好ましい。

前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、滅菌された水道水により前記の材料を混合することは好ましい。

また、この発酵は３７〜４２℃に加温され、発酵は１日間から１５日間行われる。この発酵の工程によってベニコウジ菌の還元作用によりジェウェノールＡとフロログルシノールとの結合が安定化される。

前記の発酵物は含水エタノールで抽出されることは、生成物を効率良く回収し、菌を滅菌でき、次の工程が実施しやすいことから、好ましい。また、得られた発酵物を超音波処理することは、生成物が分離しやすいことから、好ましい。また、凍結乾燥などにより、濃縮することは、以下の工程が短時間に実施できることから好ましい。

前記の還元反応物から、目的とするジェウェノールＡ誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。

例えば、分離用担体または樹脂により分離され、分取されることにより目的とするジェウェノールＡ誘導体が得られる。分離用担体または樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。

例えば、逆相担体または樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体または樹脂として利用される。

アフィニティ担体または樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体または樹脂は、シリカゲル（メルク社製）等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。

これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体または樹脂、分配性担体または樹脂、分子篩用担体または樹脂及びイオン交換担体または樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体または樹脂及び分配性担体または樹脂はより好ましい。

分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体または樹脂が用いられる。また、医薬品製造または食品製造に利用される担体または樹脂は好ましい。

これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン（三菱化学（株）社製）及びＸＡＤ−２またはＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）、分子篩用担体としてセファデックスＬＨ−２０（アマシャムファルマシア社製）、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。

これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスＬＨ−２０及びＤＭ１０２０Ｔはさらに好ましい。

得られた抽出物は、分離前に分離用担体または樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して１〜３０倍量が好ましく、４〜２５倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から６〜３２℃が好ましく、１０〜２２℃がより好ましい。

分離用溶媒には、水、または、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。

セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸またはそれらの混合液が好ましい。

ダイヤイオン及びＤＭ１０２０Ｔを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコールまたは低級アルコールと水の混合液が好ましい。

ジェウェノールＡ誘導体を含む画分を採取して乾燥または真空乾燥により溶媒を除去し、目的とするジェウェノールＡ誘導体を粉末または濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから、好ましい。

また、最終抽出を食用油や化粧料に用いる油脂で実施することは、得られるジェウェノールＡ誘導体が安定に維持されることから好ましい。例えば、大豆油、米ぬか油、グレープシード油、オリーブ油、ホホバ油で抽出することは好ましい。

また、このジェウェノールＡ誘導体を粉末化することは防腐の目的から好ましい。

以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。なお、これらは一例であり、素材、原料や検体の違いに応じて常識の範囲内で条件を変更させることが可能である。

長崎県で減農薬と有機肥料により栽培されたアカメガシワの葉を特定非営利活動法人對馬次世代協議会より購入して用いた。この葉を水道水で水洗後、天日で乾燥させ、粉砕機（株式会社奈良機械製作所製のスーパー自由ミル）にて粉砕し、アカメガシワの葉の乾燥粉末粉砕物を１．０ｋｇ得た。

北海道産の大豆をミキサー（クイジナート製）に供し、大豆の粉砕物１．７ｋｇを得た。前記のアカメガシワの葉と大豆の粉砕物をオートクレーブに供し、１２１℃、２０分間、滅菌した。

これらを清浄な発酵タンク（滅菌された発酵用丸形４０リットルタンク）に入れ、滅菌された水道水５ｋｇを添加し、攪拌した。

これとは別に、納豆本舗製の粉末納豆菌の１２ｇを小型発酵タンクに供し、滅菌した大豆粉末と前培養させた培養液を用意した。

前記の前培養した納豆菌の培養液とアカメガシワの葉の乾燥粉末と大豆とを入れた発酵タンクに添加し、攪拌後、４０〜４２℃の温度範囲で加温し、発酵させた。

発酵過程では、通気によりバブリングと攪拌を行いつつ、発酵液のサンプリングを行った。発酵終了後、発酵タンクより発酵物を取り出し、煮沸滅菌した。この発酵物を濾過布により濾過して、納豆菌による発酵液４．１ｋｇを得た。この発酵液１ｋｇに対して紅麹本舗製のベニコウジ菌の１２ｇを添加し、３７℃で２日間発酵させた。

この発酵物にエタノールを添加して煮沸滅菌した。これを濾過し、濾過液を目的とするジェウェノールＡ誘導体とした。これを検体１とした。

さらに、構造解析及び実験の目的で精製物を得た。つまり、前述の検体１のジェウェノールＡ誘導体の５０ｇに７％エタノール含有精製水の１Ｌを添加し、ダイアイオン（三菱化学製）５００ｇを７％エタノール液に懸濁して充填したガラス製カラムに供した。

これに２Ｌの７％エタノール液を添加して清浄し、さらに、６０％エタノール液を１Ｌ添加して目的とするジェウェノールＡ誘導体を溶出させ、濃縮して精製した。精製されたジェウェノールＡ誘導体を減圧蒸留により、エタノール部分を除去し、水溶液とした。これをジェウェノールＡ誘導体の精製物１３ｇを検体２とした。

以下に、ジェウェノールＡ誘導体の構造解析に関する試験方法及び結果について説明する。
（試験例１）

上記のように得られた検体２をエタノールに溶解し、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）で分析した。

させら、核磁気共鳴装置（４００ＭＨｚ、Ｈ−ＮＭＲ、ブルカー製）で解析した結果、検体２からジェウェノールＡ、フロログルシノールからなるジェウェノールＡ誘導体が検出された。

すなわち、Ｈ−ＮＭＲのケミカルシフトは、０．２８６、１．１４、２．２２７、２．５７３、２．９０８、３．１３４、３．３０８、３．６４、３．７７９、６．３３５、６．５４１、６．６１６、６．７５３、６．９０６、７．０２８及び７．１４１ｐｐｍのピークを呈した。

上記の解析結果は、化学的に合成した標準品と同一構造を呈することが判明したことから、検体２はジェウェノールＡ１分子とフロログルシノール２分子がエーテル結合したジェウェノールＡ誘導体であると確認できた。

以下にヒト皮膚上皮細胞を用いた確認試験について述べる。
（試験例２）

クラボウ株式会社より購入したヒト皮膚上皮細胞を用いた。培養液としては、５％牛胎児血清含有ＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ製）を用いて培養した、１０００個の細胞を３５ｍｍ培養シャーレに播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で培養した。これに、前記の実施例１で得られた検体１及び陽性対照としてＥＧＦ（フナコシ(株)、ヒトタイプ）を０．１ｍｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。これを４８時間培養した。

細胞を剥離後、細胞数を計数した後、細胞懸濁液を調整し、細胞内のＡＴＰ量を抗ＡＴＰ抗体（低分子、酸性タイプ）を用いたＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、シャーレは５枚を用いてその平均値を算出した。

その結果、検体１の０．１ｍｇ／ｍｌの添加により上皮細胞数が溶媒対照群に比して平均値として１６７％に増加した。また、検体２では２３３％に増加した。一方、ＥＧＦでは１６０％の増加であり、検体１及び検体２の方が優れていた。

ＡＴＰ量については検体１により溶媒対照群に比して２５４％に増加した。また、検体２の添加により溶媒対照の４２６％となった。ＥＧＦでは２３１％となり、検体１及び検体２のＡＴＰ産生量が著しかった。

以下にヒト肝臓細胞を用いた確認試験について述べる。
（試験例３）

クラボウ株式会社より購入したヒト肝臓細胞を用いた。培養液としては、専用の培養液を用いて培養した、１０００個の細胞を３５ｍｍ培養シャーレに播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で培養した。これに、１％のエタノールを添加してヒト肝臓細胞を弱らせた。

ここに、前記の実施例１で得られた検体１及び陽性対照としてＨＧＦ（フナコシ(株)、ヒトタイプ）を０．１ｍｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。これを４８時間培養した。

細胞を剥離後、細胞数を計数した後、細胞懸濁液を調整し、肝臓細胞内のＡＴＰ量を抗ＡＴＰ抗体（低分子、酸性タイプ）を用いたＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、シャーレは５枚を用いてその平均値を算出した。

その結果、検体１の０．１ｍｇ／ｍｌの添加により肝臓細胞数が溶媒対照群に比して平均値として１６６％に増加した。また、検体２では２２８％に増加した。一方、ＨＧＦでは１５５％の増加であり、検体１及び検体２の方が優れていた。

ＡＴＰ量については検体１により溶媒対照群に比して１７０％に増加した。また、検体２の添加により溶媒対照の３３８％となった。ＨＧＦでは１５６％となり、検体１及び検体２のＡＴＰ産生量が著しかった。

本発明で得られるジェウェノールＡ誘導体はＡＴＰの増加を介して上皮細胞と上皮組織を強化することから皮膚、肝臓、神経などの健康障害を軽減し、かつ、副作用が少ないことから、国民のＱＯＬを改善し、健康な労働人口を増加させ、かつ、医療費を削減できる。

本発明で得られるジェウェノールＡ誘導体は皮膚を改善する作用を有することから、化粧料としてシワ、たるみなどの肌トラブルに悩む方の肌の改善に貢献し、化粧品業界の発展に寄与する。

本発明で得られるジェウェノールＡ誘導体は食品としても利用できることから、食品業界の発展に寄与する。

Claims (2)

1. 下記の式（１）で示されるＡＴＰ増加作用を呈するジェウェノールＡ誘導体。
   
2. アカメガシワの葉、大豆粉末と納豆菌を添加して発酵させた発酵液をベニコウジ菌で発酵させる工程からなるＡＴＰ増加作用を呈するジェウェノールＡ誘導体の製造方法。