JP6462030B2 - オキシトシン／バソプレッシンＶ１ａレセプターのアンタゴニストとしてのピロリジン誘導体を含有する医薬組成物 - Google Patents

Description

本発明は、オキシトシンレセプターおよび／またはバソプレッシンＶ１ａレセプターにアンタゴニスト作用を有する、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物、それらの調製のためのプロセス、それらを含有する医薬組成物、およびそれらの医薬における使用に関する。

オキシトシン（ＯＴ）は、アルギニンバソプレッシンレセプターに似たＧタンパク質共役レセプターの分類に属する細胞膜レセプターであるところの、オキシトシンレセプター（ＯＴ−Ｒ）の活性化を介して生理的活性を媒介する環状ノナペプチドである。オキシトシン（ＯＴ）の重要な作用の一つは、分娩中に哺乳類の子宮を収縮させることである。反復される規則的な協調性の子宮収縮は、子宮頸部の拡張、胎膜の破断を引き起こし、そして胎児の排出に至る。早産とは、これら収縮が正規の妊娠期間前に生ずる場合をいう。子宮活動の早期の増加は、早期分娩のもっとも一般的な兆候である。

早産は、望ましくない未熟児出産や、周産期死亡率と重大な罹患率、特に、満期産児よりも早産児においてはるかに多くみられる呼吸窮迫症候群、脳室内出血、気管支肺異形成症、および壊死性腸炎の、依然として主要な原因である深刻な健康問題に至る。脳性小児まひ、視力障害そして聴覚障害といった長期障害もまた、早産児により多くみられる。今日、早産は、先進国において相変わらず乳児の死亡と罹患の主要な原因であり、それらの国で、産科医療における目覚しい改善にもかかわらず、未熟児の新生児集中治療のための高いコストを引き起こしている。呼吸窮迫症候群、心臓病、脳性小児まひ、てんかん、重度の学習障害といった早産関連病のヘルスケア提供を考慮に入れると、実際のコストは社会にとってずっと高いものとなる。早期分娩の管理は、産科学分野における重要な課題を示す。

ＯＴ／ＯＴ−Ｒシステムは哺乳類、とりわけヒトにおいて陣痛の開始に重要な役割を果たしている。ＯＴ−Ｒの密度は、陣痛の始まり前とその最中に子宮筋層において著しく増加する。また、局所的なＯＴペプチドホルモン濃度も、ヒトにおいて分娩前に著しく増加すると考えられている。プロゲステロンの高い血中濃度は、子宮静止化を引き起こす一方で、子宮は収縮能を得る。出産予定日直前に、血漿中のプロゲステロン濃度は落ち、子宮内のＯＴ−Ｒ発現は著しく増加し、ＯＴが放出されて子宮収縮活動が増加する。分娩日には、収縮は次第に強くなり、２つの相互作用するポジティブフィードバックループの結果として出産という結果に至る。１つめは、局所的な子宮ループである：子宮自体内で、ＯＴと子宮収縮に応答して、収縮性のプロスタグランジンが生成されて放出される。これらプロスタグランジンは、子宮頸部の成熟と胎膜の弱化に更なる役割を果たし得る。２つめのループは視床下部に関する：子宮収縮と膣および子宮頸部の膨張に応じて、視床下部にある巨細胞性オキシトシンニューロンはその活動を増加させ、脳下垂体後葉にあるその軸索末端からのＯＴの放出へと至る。放出されたＯＴは子宮に作用して、プロスタグランジンのさらなる生産を刺激するとともに、子宮の収縮にさらに寄与する。

したがって、ＯＴ−Ｒに拮抗することでＯＴの効果を阻害することは、ＯＴ−Ｒ活性、とりわけ早期分娩に関連する疾病の治療に対する魅力的な療法となるかもしれない。

子宮収縮抑制薬、すなわち子宮弛緩剤は、早期分娩の医薬治療のための臨床研究において用いられてきた。これら薬剤の大半は、適応外に使用されている。それらは、もしあるとするならば、長期在胎における非常に限定的な有効性を示したが、新生児転帰の改善について明白な証拠があるわけではない。現在の子宮収縮抑制薬は、非常に多くの場合、女性、胎児、または新生児に対する望ましくない悪影響と関連している。そのような子宮収縮抑制薬は、ベータ−２−アドレナリンアゴニスト、プロスタグランジン合成阻害剤、硫酸マグネシウム、一酸化窒素ドナー、およびカルシウムチャネル阻害剤を含む。リトドリンまたはテルブタリンといったベータ−２−アドレナリンアゴニストは、母体頻脈、動悸、低血圧、甲状腺機能の変化、および胎児と新生児の血糖低下、頻脈を含めた、多数の心循環系と代謝系の副作用を引き起こす。リトドリンはもはやＦＤＡに認可されていない。カルシウムチャネル阻害剤であるニフェジピンもまた、収縮を止める試みに用いられる薬である。発生し得る副作用の中には、顔面紅潮、頭痛、吐き気、動悸、および頭部のふらふら感が含まれる。総合的なプロスタグランジン合成阻害剤（ＮＳＡＩＤ）であるインドメタシンが使用されてきた。それは、動脈管の収縮、肺高血圧、羊水過少を伴う腎機能低下、脳室内出血、高ビリルビン血症、壊死性腸炎といった、胎児に深刻な影響を与える可能性もある。母体側の副作用には、母体においての、腹部不快感、吐き気、嘔吐、鬱、そしてめまい発作が含まれる。別のＮＳＡＩＤはスリンダクであるが、これはインドメタシンに似た副作用プロファイルを持つ。硫酸マグネシウムに対して、メタ分析はそれを子宮収縮抑制剤として支持しなかった。女性たちは、顔面紅潮、無気力、頭痛、筋力低下、肺水腫、それに心拍停止といった重大な副作用を報告した。硫酸マグネシウムにさらされた新生児は、無気力、低血圧症、呼吸抑制、骨の問題、骨減少症および骨折を示す可能性がある。最近、ＦＤＡはヘルスケアの専門家に、早期分娩を止めようとして女性に５〜７日より長期にわたって硫酸マグネシウム注射を使用することのないようにアドバイスしている。

アトシバン、すなわちバソプレッシンＶ１ａレセプターとＯＴ−Ｒの双方に対するアンタゴニストは、ＥＵにおいて販売されており、収縮を止めて２、３日だけ早期出産を遅らせるために用いられている。アトシバンは、経口投与が可能ではなく、非経口的に投与されなくてはならないペプチドである。それは、循環中に酵素によって急速に分解され、その使用は最大４８時間までに限定されている。

さらに非ペプチドＯＴ−Ｒアンタゴニストは、異性体の混合物として、ピロリジン誘導体（国際公開０１／７２７０５、国際公開０２／１０２７９９、国際公開２００２／０７４７４１、国際公開２００４／００５２４９）のように開発されてきた。

ＯＴ−Ｒ活性、とりわけ早期分娩に関連する疾病治療のための効率的かつ経口の、選択的ＯＴ−Ｒアンタゴニストに対して、未だ対処されていない需要は相当に残されている。

本発明は、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を提供する。

本発明はまた、医薬および上記化合物を含有する医薬組成物としての使用のための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を提供する。

また、オキシトシンレセプター活性および／またはバソプレッシンＶ１ａレセプター活性と関連する疾患の治療および／または予防のための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を提供する。

本発明はさらに、実質的に純粋な形態で、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を、調製および分離する方法を提供する。

麻酔下にある出産間近の妊娠ラットにおける自発性の子宮収縮の抑制に対する、経口ルートにより投与されたＺ異性体の投与反応効果を示している。 麻酔下にある出産間近の妊娠ラットにおける自発性の子宮収縮の抑制に対する、経口ルートにより投与されたＥ異性体の投与反応効果を示している。

本発明は、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関し、当該化合物はＯ−メチルオキシム官能基におけるＺ異性体の立体配置にある。

式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物は、Ｏ−メチルオキシム官能基がＥ異性体の立体配置にある点で、本発明の化合物とは異なる。

本明細書で用いられる用語「その活性代謝物」は、特定の化合物、この場合においては、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの体内における代謝を通じて、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで生成される生産物を指し、それは（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムと同じ生物活性を示す。

（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの活性代謝物は、当該分野において知られているルーチン技術を用いて識別されてよく、それらの活性は本明細書で説明されるような試験を用いて決定されてよい。そのような代謝物は、例えば、投与されたＺ形態についての、酸化、グルクロン酸抱合あるいは他の結合、加水分解、還元等からもたらされ得る。従って、本発明の化合物を、その代謝産物を生じさせるのに十分な期間にわたって哺乳類に接触させることを備える工程によって生成される化合物を含めた、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの活性代謝物を含む。そのような代謝物は、対応する（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの酸化、還元、加水分解、グルクロン酸抱合あるいは他の抱合変換により、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成されてもよい。（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの活性代謝物の例は、以下に示される構造の化合物を含む：

受容者への投与にあたり、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／または、上述のようなその活性代謝物に変換可能な化合物は、"プロドラッグ"として知られる。例えば、プロドラッグは体内で、血中での加水分解等により、医学的効果を有する活性型に変換されてもよい。医薬的に許容されるプロドラッグは、Ｔ. Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ. Ｓｔｅｌｌａ, Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ, Ｖｏｌ. １４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ. Ｃ. Ｓ. Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ （１９７６）； "Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ" ｅｄ. Ｈ. Ｂｕｎｄｇａａｒｄ, Ｅｌｓｅｖｉｅｒ, １９８５； および ｉｎ Ｅｄｗａｒｄ Ｂ. Ｒｏｃｈｅ, ｅｄ., Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ, Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ, １９８７において説明されており、それらは参照により本明細書に組み込まれている。

本発明の化合物は、例えば、国際公開２００４／００５２４９と国際公開２００５／０８２８４８において開示されているような方法で生成される。しかしながら、上記化合物は、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムと、（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムとを含む、（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの異性体混合物において合成されて得られるものである。

したがって、本発明は、少なくとも８５％から１００％の、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物、好ましくは８５％から９９．９％、より好ましくは９０％から９９．９％、および更により好ましくは９５％から９９．９％の上記記化合物を有する、式（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

代わりに、本発明は、実質的に純粋な形態で提供される、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

本明細書で用いられる、用語「実質的に純粋な」は、実質的に他の化合物を含まない形態で与えられ化合物を指す。上記「他の化合物」の例には、（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オン、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オン−オキシム、（３Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−３−メトキシアミノ−ピロリジン、（３Ｓ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−３−メトキシアミノ−ピロリジン、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（Ｏ−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム、および（３Ｅ，５Ｓ）−５−（Ｏ−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムが含まれる。

もっとも好ましくは、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物が、式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物を実質的に含まない。

一層より好ましくは、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物の、実質的に純粋な形態の純度が、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、あるいは、少なくとも１００％であって、したがって、式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物が実質的に含まれず、すなわち４５％未満、３５％未満、２５％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、より好ましくは２％未満、一層より好ましくは１％未満である。

一層より好ましくは、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物の、実質的に純粋な形態の純度が、少なくとも８５％から１００％、好ましくは８５％から９９．９％、より好ましくは９０％から９９．９％、一層より好ましくは、９５％から９９．９％の範囲にあることである。

用いられる学名によっては、本発明の化合物"（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム"は、"（４Ｚ、２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル−カルボニル）］ピロリジン−４−オンＯ−メチルオキシム"としても定義されうる。

概ね、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物は、オキシトシンレセプターアンタゴニストである。

本明細書で用いられる用語「オキシトシンレセプターアンタゴニスト」は、オキシトシンレセプター（ＯＴ−Ｒ）を（部分的に、あるいは完全に）抑制し、または阻害して、これによりオキシトシンによるレセプターの活性化を妨げることによって機能を発揮する化合物をいう。

本発明は、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を提供するが、上記化合物は部分的なまたは完全なオキシトシンレセプターアンタゴニストであって、その阻害定数Ｋｉはおよそ１μＭ未満である。好ましくは上記阻害定数Ｋｉが、およそ０．１μＭ未満であって、より好ましくはおよそ０．０６μＭ未満である。

本発明はさらに、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物であって、上記化合物がオキシトシンレセプターアンタゴニストであり、その半数阻害濃度ＩＣ５０がおよそ１μＭ未満であるものを提供する。好ましくは、上記ＩＣ５０がおよそ０．１μＭ未満であり、より好ましくはおよそ０．０９μＭ未満である。

また概ね、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物は、バソプレッシンＶ１ａレセプターアンタゴニストである。

本明細書で用いられる用語「バソプレッシンＶ１ａレセプターアンタゴニスト」は、バソプレッシンＶ１ａレセプター（アルギニンバソプレッシンレセプター１Ａとしても知られる）を（部分的にまたは完全に）抑制し、あるいは阻害して、これによりバソプレッシンによるレセプターの活性化を妨げることにより、機能を発揮する化合物を指す。バソプレッシンＶ１ａレセプターは、ペプチドホルモンであるアルギニンバソプレッシンに対する３つの主要なレセプター型の１つであり、残り２つはＶ１ｂとＶ２レセプターである。

好ましくは、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物および／またはその活性代謝物が、バソプレッシンＶ１ａレセプターのアンタゴニストであって、その阻害定数Ｋｉがおよそ１μＭ未満である。もっとも好ましくは、上記阻害定数Ｋｉがおよそ０．５μＭ未満であって、さらにより一層好ましくはおよそ０．１５μＭ未満である。

本発明は、また、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物であって、オキシトシンレセプターのアンタゴニストであり、バソプレッシンＶ１ａレセプターのアンタゴニストでもあるものに関する。

通常、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物は、子宮収縮を抑制する。有利には、上記化合物は、投与してから２〜３０分の時間経過のうちに、好ましくは５〜２０分のうちに、子宮収縮を速やかに抑制する。

驚くべきことに、その抑制的な活性が、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム、および／またはその代謝物の、実質的に純粋なＺ形態に特有のものであることを本出願人らは明らかにした。実施例において示すように、式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの実質的に純粋なＥ形態は、子宮収縮を抑制しないのでなんら有効性を示さない。

本発明の化合物および／またはその活性代謝物に関する投与計画は、患者のタイプ、人種、年齢、体重、性別と健康状態；治療されるべき状態の深刻度；投与経路；患者の腎機能と肝機能；および使用される特定の化合物またはその活性代謝物を含めた様々な要素に応じて選択される。当業者である内科医は、状態の進行を妨げ、対抗し、または停止させるのに要する効果的な薬量を、容易に決定し処方することができる。

有利には、本発明の化合物および／またはその活性代謝物は、単回投与されてもよいし、あるいは、全薬用量を日に２回、３回または４回に分けて投与されてもよい。

好ましくは、本発明は、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を提供するが、上記化合物は５０ｍｇから９００ｍｇの単回投与量、より好ましくは１００ｍｇから６００ｍｇの単回投与量が対象に投与される。

本発明の化合物および／またはその活性代謝物は、薬剤中の単一の活性成分として使用されてもよい一方で、その化合物を、少なくとも１つまたは複数のさらなる活性化合物と組み合わせて用いることも可能である。そのようなさらなる活性化合物は、本発明に係るさらなる化合物であってよく、あるいは、カルシウムチャネル阻害剤、硫酸マグネシウム、選択的プロスタグランジンモジュレータ、ベータ−２−アドレナリンアゴニスト、ベータ−３−アドレナリンレセプターアゴニスト、および／またはコルチコステロイドを含む群から選ばれる他の活性化合物であってもよい。

代わりに、本発明の化合物および／またはその活性代謝物は、（ニフェジピンのような）カルシウムチャネル阻害剤、硫酸マグネシウム、（ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、ＥＰ４、またはＦＰレセプターの何れかのアゴニストあるいはアンタゴニストのような）プロスタグランジンレセプターモジュレータ、（インドメタシン、ニメスリド、スリンダク、ロフェコキシブ、セレコキシブといった）プロスタグランジン合成阻害剤、（リトドリン、テルブタリン、サルブタモールといった）ベータ−２−アドレナリンアゴニスト、ベータ−３−アドレナリンレセプターアゴニスト、（硝酸グリセリンのような）一酸化窒素ドナーおよび／または（デキサメタゾンやベタメサゾンといった）コルチコステロイドを含む群から選択される少なくとも１つの化合物と併用して、または別々に投与され得る。

本明細書で用いられる用語「併用」は、上記開示されている群から選択される、少なくとも１つの化合物の投与直前の、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物の投与を指す。

本明細書に用いられる用語「別々に（連続的なまたは引き続いての投与を包含する）」は、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物の投与であって、中断期間を挟んだのちに、上記開示されている少なくとも１つの化合物の投与が続くことをいう。

概ね、本発明の化合物は血漿中において安定である。本明細書で用いられる用語「安定」とは、投与後、対象の血漿中に式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物が存在し、上記化合物の異性体の相互変換が実質的に防げられていることを指す。

概ね、本発明において、それを必要とする対象は好ましくは哺乳類であり、より好ましくはヒトであり、いっそう好ましくは女性であり、最も好ましくは出産適齢期にあるヒトの女性である。

本発明はまた、医薬として使用される、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

また、本発明において、オキシトシンレセプター活性および／またはバソプレッシンＶ１ａレセプター活性と関連する疾患の治療および／または予防に使用するための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物が想定される。

オキシトシンレセプター活性および／またはバソプレッシンＶ１ａレセプター活性に関連する疾患は、早期分娩、未熟児出産、月経困難症、早漏、性的不全、子宮内膜症、子宮収縮による胚着床不全、不妊、良性前立腺過形成、神経精神障害、自閉症、社会的行動障害、心理社会的ストレス、および／または心血管障害を含む非限定的な群から選択される。

早産ともいわれる用語「早期分娩」は、正常な妊娠期間の終了前に、子宮から生存する乳児を排出すること、あるいはより詳細には、妊娠３７週前に子宮頸部の展退と拡張を伴う分娩が始まることを意味する。それは、膣からの出血あるいは破膜と関連してもよいし、しなくてもよい。

用語「月経困難症」は、排卵周期間の月経に伴う周期的疼痛によって特徴づけられる疾患を指す。その疼痛は、子宮収縮と虚血から生ずると考えられている。

用語「性的不全」とは、人間の性反応を特徴づける４つの段階−興奮期、平坦期、オーガスム期および消退期におけるいずれかの障害または変異をいう。

本明細書で用いられる用語「神経精神障害」は、例えばうつ病や強迫性障害およびその他といった神経系の疾病に起因する精神障害を指す。

本明細書で用いられる用語「社会的行動障害」は、情緒障害、行動や感情の不適切なタイプ、不幸感や鬱の蔓延するムード、および満足ゆく対人関係を築いたり維持したりすることの様々な知覚された困難性を指す。

本明細書で用いられる用語「心理社会的ストレス」は、社会的地位、社会的尊重、自尊心、集団内での敬意または受け入れに対する知覚された脅威に起因し、体内におけるストレス応答の進行と身体症状に至るコンディションを指す。

生殖補助医療は、不妊治療のためヒトに、および妊娠を引き起こすため動物に、適用される方法である。世界中でおよそ１０％の人間の男女ペアに影響を与えている不妊は、体外受精と胚移植（ＩＶＦ−ＥＴ）によって、あるいは複雑な場合でなければ人工受精によって治療され得る。概ね、胚移植が成功するか否かは、適切な着床と胚発達を司る最適条件を提供する子宮能力として定義されるものであるところの、子宮受容能にかかっている。子宮受容能の基本的な構成要素は、子宮収縮活動と子宮内膜のコンディションである。

胚移植中に発生する子宮収縮は、子宮から膣または卵管の方へと胚を排出するかもしれず、このことは、治療がうまくいかない原因となったり、あるいは後者の場合には、重篤であって潜在的に生命を脅かす合併症である子宮外妊娠の原因であったりする。

概ね、本発明は、生殖補助医療における使用のための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

例えば、本発明は、体外受精−胚移植（ＩＶＦ−ＥＴ）法による不妊治療のための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

本発明はまた、子宮収縮による胚着床不全の低減に用いられるための、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

また、本発明においては、胚移植中に発生する収縮の低減に用いられる、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物が想定される。

さらに、本発明は、オキシトシン誘発性の血管収縮、バソプレッシン誘発性の血管収縮、オキシトシン誘発性の筋収縮、バソプレッシン誘発性の筋収縮に関連する疾病の治療および／または予防に用いられる、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物に関する。

本発明はさらに、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物、および医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物に関する。

本明細書で用いられる「医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤」とは、生理的に活性な化学物質を患者に供給するために、当該分野においておおむね受け入れられている媒体である。当業者は、医薬組成物を製剤するに適切な、様々なキャリア、希釈剤または賦形剤について承知している（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ Ｅｄ. Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０、ｐｐ. １２８９−１３２９を参照）。キャリア、希釈剤、あるいは賦形剤は、その配合中の他の含有物と適合し、製剤処方可能でなければならず、その受容者に有害であってはならない。

従来使用されてきたキャリア、希釈剤または賦形剤とともに、本発明の化合物および／またはその活性代謝物は、医薬組成物とその単位剤形として製剤されてよい。そのような形態において、タブレットや充填カプセルといった固体として、または溶液、懸濁液、乳濁液、エリキシル剤あるいは上記を充填したカプセルといった液体として、すべて経口使用のために用いられてもよく、あるいは（皮下を含めた）非経口の使用のために滅菌された注射用の溶液の形態で用いられてもよい。そのような医薬組成物とその単位剤形は、追加の活性化合物または成分の有無を問わず、従来の比率において成分を含有してよく、そのような単位剤形は、採用される所期の１日用量の範囲に比例して、活性含有物質すなわち本発明の化合物の任意の適切な有効量を含んでもよい。

本発明の医薬組成物は、経口、経直腸、経膣、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および経鼻を含む様々な経路によって投与され得る。意図される供給経路次第では、それら化合物は、注射用または経口用組成物の何れかとして製剤化されることが好ましい。経口投与のための組成物は、バルク溶液または懸濁液、あるいは混合散剤という形態をとることができる。しかしながら、より一般的には、当該組成物は正確な投与を容易にするために単位剤形にて提供される。用語「単位剤形」は、被験者または他の哺乳類のための単一投与量として好適な物理的に離散したユニットを指し、各ユニットは、適切な医薬賦形剤と関連して所望される治療効果を生むために算出された予め定められた量の活性剤を含む。一般的な単位剤形は、液体組成物が充填されて予め量られたアンプルやシリンジ、あるいは固体組成物の場合におけるピル、タブレット、カプセルなどを含む。そのような組成物において、本発明の化合物は通常、微量成分であって（約０．１〜約５０重量％、または好ましくは約１〜約４０重量％）、残部は様々な媒剤またはキャリア、および所望される投与形態を成形するのに役立つ加工助剤である。

式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物、および医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物は、経口、経膣、または静注経路によって投与されることが好ましい。

経口投与に適した液体形態は、緩衝液、懸濁および分注剤、着色剤、フレーバー剤などとともに、適切な含水または非水の媒剤を含んでもよい。固体の形態は、例えば、下記成分や同類の性質を有する化合物のいずれをも含んでよい：微結晶性セルロース、トラガカントゴム、またはゼラチンといった結合剤；澱粉やラクトースといった賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチといった崩壊剤；マグネシウムステアリン酸塩のような潤滑剤；コロイド状の二酸化ケイ素のような滑剤；スクロースやサッカリンといった甘味料；ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料といった香味料。

注射用組成物は、通常、注射用の滅菌生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水、または当該分野において知られている他の注射用のキャリアをベースとする。

また、本発明の化合物は、持続性放出の形態において、または持続性放出の薬物供給システムから投与され得る。代表的な持続性放出の物質についての説明は、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ａ. Ｒ. ｅｔ ａｌ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１８ｔｈ ｅｄ. Ｅａｓｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５においてもまた見出される。

本発明はまた、下記段階を備え、実質的に純粋な形態で、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を、調製し分離するプロセスに関する。

ａ）式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を含有する粗製の異性体混合物を、ゲルクロマトグラフィーカラムに装填する。
ｂ）有機溶媒中で１％アルコールにより精製する。
ｃ）有機溶媒中で２％アルコールにより精製する。

本明細書で用いられる用語「粗製の異性体混合物」は、本明細書で説明される式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物の合成から結果として生じ、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物と、式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物と、を含む化合物の混合物を指す。

好ましくは、本発明は下記段階を備え、実質的に純粋な形態で、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を、調製および分離するプロセスに関する。

ａ）式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および／またはその活性代謝物を含有する粗製の異性体混合物を、シリカゲルクロマトグラフィーカラムに装填する。
ｂ）トルエン中にて１％メタノールで精製する。
ｃ）トルエン中にて２％メタノールで精製する。

好ましくは、シリカゲルクロマトグラフィーカラムは、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）Ｆｌａｓｈ １５０ ｆｌａｓｈクロマトグラフィーシステム、Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ−ＳＩＬ、Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ−Ｃ１８−ＨＳ、Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ−Ｃ１８−ＷＰ、Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ−Ｃ−ＷＰ、Ｂｉｏｔａｇｅ ＦＬＡＳＨ−ＷＡＣ ４００（Ｂｉｏｔａｇｅ ＡＢ、７５１ ０３ ウプサラ、スウェーデン）の中から選ばれる。他のゲルクロマトグラフィーカラムには、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｄｉａｉｏｎ（商標） ＨＰ２０またはＨＰ２０ＳＳ ＳＤＶＢレジン（三菱化学株式会社、東京１００−８２５１、日本）で充填されたカラムが含まれる。

実施例１：（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの精製

（１．１ （３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの合成）
本発明は、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムと、（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムと、を含む粗製の異性体混合物として得られる、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの合成および精製に関する。

本発明の化合物の合成経路は、例えば、国際公開２００４００５２４９と国際公開２００５０８２８４８に説明されているものである。

例えば、本発明の化合物（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムは、下記に記載されるステージ１から７の段階を踏んで調製され得る。

ステージ１：４−（２−メチルフェニル）安息香酸の調製

炭酸カリウム（０．９０８Ｋｇ、６．５７モル、２．０６重量）の水溶液（２．２０Ｌ、５．０容積）は、４−ブロモ安息香酸（０．４４１Ｋｇ、２．１９モル、１．０重量）の水溶液（４．４１Ｌ、１５．０容積）のスラリーに、１５〜２５℃で加えられた。結果として得られたスラリーは、１５〜２５℃で撹拌され、真空−窒素パージサイクルを用いて３回脱気された。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２２Ｋｇ、０．０１９モル、０．０５重量）が加えられ、真空−窒素パージサイクルが繰り返された。ｏ−トリルボロン酸（０．３１３Ｋｇ、２．３０モル、０．７０７重量）のメタノール溶液（３．５３Ｌ、８．０容積）が、真空−窒素パージサイクルを用いて３回脱気され、それから、１５〜２５℃で４−ブロモ安息香酸のスラリーに加えられた。反応混合物は７１〜７８℃まで加熱され、反応完了（９５％の転化率で反応が完了したとみなされる）まで、その温度で加熱還流を維持された。反応完了は^１Ｈ ＮＭＲ分析（ｄ６−ＤＭＳＯ）で判定され、通常１．５から２．５時間である。反応混合物は、４０〜４５℃の真空下で、１５容積まで濃縮された。トルエン（４．４１Ｌ、１０．０容積）とテトラヒドロフラン（４．４１Ｌ、１０．０容積）が残留物に加えられた。結果として得られた混合物は激しく撹拌され、塩酸（６Ｍ、２．００Ｌ、４．５容積）で、ｐＨ１まで酸性化された。その内容物は３０〜６０分にわたって激しく撹拌され、複数の層に分離された。トルエン（２．２０Ｌ、５．０容積）とテトラヒドロフラン（２．２０Ｌ、５．０容積）が水相に加えられ、その混合物は５〜１０分間撹拌された。複数の層に分離され、合一した有機相は濾過されて、３５〜４０℃の真空下で１０．０容積まで濃縮された。トルエン（４．４１Ｌ、１０．０容積）がその残留物に加えられ、その反応生成物は３５〜４０℃の真空下で濃縮された。結果として得られたスラリーのテトラヒドロフラン含有量は^１Ｈ ＮＭＲ分析（ｄ６−ＤＭＳＯ）によって決定された（パスレベル：トルエンに対して１．０％ｗ／ｗ以下のテトラヒドロフラン）。スラリーは０〜５℃まで冷却されて３０〜６０分間熟成され、固体は濾過によって収集され、濾過ケークはトルエン（２．２０Ｌ、５．０容積）で洗浄された。その固体を３５〜４０℃において真空オーブン内で乾燥させて、淡黄色の固体としての４−（２−メチルフェニル）安息香酸［０．４３８Ｋｇ、９４．１％ｔｈ、９９．３％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）で構造と一致］を得た。

ステージ２：４−（２−メチルフェニル）塩化ベンゾイルの調製

塩化チオニル（０．３００Ｌ、４．１１モル、０．６８５容積）が、１０〜２５℃で、トルエン（４．３５Ｌ、１０．０容積）中の、４−（２−メチルフェニル）安息香酸（０．４３５Ｋｇ、２．０５モル、１．０重量）のスラリーに加えられた。その混合物は７５〜８０℃まで加熱され、^１Ｈ ＮＭＲ分析（ｄ６−ベンゼン）によって完了するまで、通常４〜５時間、その温度で維持された。反応完了は、濁りのある溶液の形成を伴った。反応生成物は３５〜４５℃での減圧下で、トルエンの除去により５．０容積まで濃縮された。トルエン（２．１８Ｌ、５．０容積）が濃縮物に加えられ、その混合物は３５〜４５℃の減圧下で、トルエンの除去により４．０容積まで濃縮された。反応生成物はガラス繊維紙によって濾過され、濾過ケークはトルエン（０．４４Ｌ、１．０容積）で洗浄された。４−（２−メチルフェニル）塩化ベンゾイル［０．４３９Ｋｇ、９２．８％ｔｈ、１００．９％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ベンゼン）にて構造と一致］のトルエン溶液が、ステージ３において直接使用された。

ステージ３：（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４イル）−カルボニル］−Ｌ−プロリンの調製

炭酸カリウム（０．５２６Ｋｇ、３．８１モル、１．２重量）の水溶液（０．５７Ｌ、１．３容積）が、１５℃〜２５℃で、テトラヒドロフラン（２．２０Ｌ、５．０容積）と水（０．４４Ｌ、１．０容積）中の、４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（０．２７４Ｋｇ、２．０９モル、０．６２５重量）溶液に加えられたのち、水（０．４４Ｌ、１．０容積）でラインリンス（ｌｉｎｅ ｒｉｎｓｅ）が行われた。混合物は迅速に撹拌しつつ０〜５℃まで冷却され、４−（２−メチルフェニル）塩化ベンゾイル（０．４３８Ｋｇ、１．９０モル、１．０重量）のトルエン溶液（２．１９Ｌ、５．０容積）がその温度で加えられたのち、トルエン（０．４４Ｌ、１．０容積）でラインリンスが行われた。反応混合物は、１５〜２５℃まで１〜２時間にわたり温められ、ＴＬＣ分析による完了の判定がなされるまでこの温度で撹拌された。１５〜２５℃で水（２．２０Ｌ、５．０容積）が反応混合物に加えられ、複数の層に分離された。水相は、１５〜２５℃において、塩酸（６Ｍ、０．６６Ｌ、１．５容積）でｐＨ５〜６まで酸性化され、その後、塩酸（２Ｍ、０．８８Ｌ、２．０容積）でｐＨ１まで酸性化された。混合物は０〜５℃まで冷却されて、３０〜６０分間熟成された。沈殿した固体は濾過により収集され、濾過ケークは水（２ｘ１．７５Ｌ、２ｘ４．０容積）とトルエン（０．８８Ｌ、２．０容積）で洗浄され、１２〜２４時間、フィルタ上で吸引乾燥された。収集された固体は４０〜４５℃の真空下で、ＫＦによる含水量が０．２％ｗ／ｗ以下になるまで乾燥され、わずかに灰色がかった白色の固体としての（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−Ｌ−プロリン［０．５９９Ｋｇ、９７．０％ｔｈ、１３６．８％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）で構造と一致］が得られた。

ステージ４：１−（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル−４−オキソ−Ｌ−プロリンの調製

トリエチルアミン（１．８０Ｌ、１３．５６モル、３．０容積）が、１５〜２０℃で、ジメチルスルホキシド（４．４２Ｌ、７．４容積）中の（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−Ｌ−プロリン（０．５９８Ｋｇ、１．８４モル、１．０重量）溶液に加えられた。三酸化硫黄ピリジン錯体（０．８７９Ｋｇ、５．５２モル、１．４７重量）が１５〜２５℃で一部ずつ加えられ、ＴＬＣ分析によって反応完了が確認されるまで（通常１〜３時間）、反応混合物はその温度で撹拌された。反応は０〜３０℃で塩酸（３Ｍ、４．８０Ｌ、８．０容積）によりクエンチされ、テトラヒドロフラン（３．００Ｌ、５．０容積）とヘプタン（０．６０Ｌ、１．０容積）が加えらえた。複数の層が分離され、水相はテトラヒドロフラン（２ｘ３．００Ｌ、２ｘ５．０容積）で抽出された。合一した有機相は、塩酸（１Ｍ、２ｘ１．２０Ｌ、２ｘ２．０容積）と飽和塩化ナトリウム溶液（２ｘ１．２０Ｌ、２ｘ２．０容積）で洗浄され、水性の洗浄液は混ぜ合わされて、テトラヒドロフラン（２ｘ０．６０Ｌ、２ｘ１．０容積）で戻し抽出された。合一した有機物は、硫酸マグネシウム（１．７９４Ｋｇ、３．０重量）上で乾燥されて濾過され、濾過ケークはテトラヒドロフラン（０．６０Ｌ、１．０容積）で洗浄された。そのろ液を４０〜４５℃の真空下で濃縮して、薄茶色の泡状物質を得た。酢酸エチル（６．００Ｌ、１０．０容積）がその泡状物質に加えられ、溶解するまでその内容物は５〜１０分撹拌され、４０〜４５℃の真空下で溶媒が除去された。テトラヒドロフランが^１Ｈ ＮＭＲ分析（ｄ_６−ＤＭＳＯ）で検出されなくなるまで、酢酸エチル（６．００Ｌ、５．０容積）を用いてこれを繰り返した。残留物は酢酸エチル（４．８０Ｌ、８．０容積）でスラリーにされ、活性炭（０．０８４Ｋｇ、０．１４重量）が加えられてから、酢酸エチル（３．００Ｌ、５．０容積）でラインリンスされた。生じた結果物は７０〜８０℃まで加熱されて、そのまま２０〜３０分間維持され、４０〜５５℃まで冷却された後、ガラス繊維紙で濾過された。濾過ケークは酢酸エチル（１．５０Ｌ、２．５容積）で洗浄され、混ぜ合わされたろ液と洗浄液は、４０〜４５℃の真空下で２．５〜３．５容積まで濃縮された。濃縮中に結晶化が始まった。濃縮物は、酢酸エチル（０．３０Ｌ、０．５容積）のラインリンスとともに適切な容器に移されて、７０〜８０℃まで加熱された。溶解させるために必要な、追加の酢酸エチル（０．３０Ｌ、０．５容積）が加えられた。へプタン（１．８０Ｌ、３．０容積）が７０〜８０℃で加えられ、その内容物は１５℃と２５℃の間になるまで１〜２時間にわたり放冷された。そのスラリーはさらに０〜５℃まで冷却され、その温度で２〜３時間かけて熟成されてから濾過された。濾過ケークは、０〜５℃で酢酸エチル：ヘプタン（１：１、０．６０Ｌ、１．０容積）で洗浄され、引き続きヘプタン（３．０Ｌ、２．５容積）で洗浄された。収集された固体は４０〜４５℃の真空下で乾燥され、わずかに灰色がかった白色の固体である１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−４−オキソ−Ｌ−プロリン［０．４４４Ｋｇ、７４．７％ｔｈ、７４.２％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）で構造と一致］が得られた。

ステージ５：（４Ｚ／Ｅ）−４−メトキシイミノ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−Ｌ−プロリンの調製

トリエチルアミン（０．４０Ｌ、２．８５モル、０．９２容積）が、１０〜２５℃で、ジクロロメタン（４．４０Ｌ、１０．０容積）中の、１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−４−オキソ−Ｌ−プロリン（０．４３４Ｋｇ、１．３４モル、１．０重量）溶液に加えられ、続いてジクロロメタン（０．４３Ｌ、１．０容積）でラインリンスされた。メトキシルアミン塩酸塩（０．１３０Ｋｇ、１．５６モル、０．３０重量）が一部ずつ、１０〜２５℃で加えられから、ジクロロメタン（０．４３Ｌ、１．０容積）でラインリンスされ、その反応混合物は、ＴＬＣ分析（通常３〜５時間、ＴＬＣ溶出液：ジクロロメタン：メタノール：酢酸（９０：１０：１）；紫外線による視覚化）で反応完了が確認されるまで、１０〜２５℃で撹拌された。溶媒は３５〜４０℃の真空下で除去され、反応生成物は酢酸エチル（４．４０Ｌ、１０．０容積）に溶解されて、塩酸（１Ｍ、２ｘ２．２０Ｌ、２ｘ５．０容積）で洗浄された。酸性洗浄液は酢酸エチル（２．２０Ｌ、５．０容積）で戻し抽出された。合一した有機相は飽和塩化ナトリウム水溶液（３．１０Ｌ、７．０容積）で洗浄されてから、硫酸マグネシウム（０．３００Ｋｇ、０．６９重量）上で乾燥されて、濾過され、その濾過ケークは酢酸エチル（２．２０Ｌ、５．０容積）で洗浄された。ろ液と洗浄液は混ぜ合わされて、３５〜４０℃の真空下で濃縮され、わずかに灰色がかった白色の固体である、４−メトキシイミノ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−Ｌ−プロリン［０．４７６Ｋｇ、１００．６％ｔｈ、１０９．６％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で構造と一致］が得られた。

ステージ６：（４Ｚ／Ｅ、２Ｓ）−メチル−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）−カルボニル］−４−メトキシイミノピロリジン−２−カルボン酸塩の調製

炭酸カリウム（０．４７６Ｋｇ、３．４４モル、１．０重量）が、アセトン（４．７５Ｌ、１０．０容積）中の、４−メトキシイミノ−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］−Ｌ−プロリン（０．４７５Ｋｇ、１．３５モル、１．０重量）溶液に加えられ、その混合物は０〜１０℃まで冷却された。硫酸ジメチル（０．１２８Ｌ、１．３５モル、０．２７容積）が０〜１５℃で加えられて、その混合物は、ＴＬＣ分析により反応完了が確認されるまで、通常３〜１６時間、１５〜２５℃で撹拌された。溶媒は４０〜４５℃の真空下で除去され、反応生成物は酢酸エチル（３．８０Ｌ、８．０容積）と水（３．８０Ｌ、８．０容積）の間で分けられた。複数の層に分離し、有機相は飽和塩化ナトリウム水溶液（２．８５Ｌ、６．０容積）で洗浄され、硫酸ナトリウム（０．９５３Ｋｇ、２．０重量）上で乾燥され、その後濾過された。濾過ケークは酢酸エチル（０．４８Ｌ、１．０容積）で洗浄され、混ぜ合わされたろ液と洗浄液は４０〜４５℃の真空下で濃縮された。余分な酢酸エチルは、４０〜４５℃の真空下で、テトラヒドロフラン（２ｘ０．９５Ｌ、２ｘ２．０容積）との共沸蒸留により除去され、（４Ｚ／Ｅ、２Ｓ）−メチル−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）−カルボニル］−４−メトキシイミノピロリジン−２−カルボン酸塩［０．４９２Ｋｇ、９９．６％ｔｈ、１０３．６％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で構造と一致］が、粘性のある褐色油として得られた。

ステージ７：（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの調製

水素化ホウ素リチウム（０．０４９Ｋｇ、２．２６モル、０．１重量）が、一部ずつ、０〜３０℃の窒素下で、テトラヒドロフラン（２．３１Ｌ、４．７容積）とメタノール（２．３１Ｌ、４．７容積）中の、（４Ｚ／Ｅ、２Ｓ）−メチル−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）−カルボニル］−４−メトキシイミノピロリジン−２−カルボン酸塩（０．４９２Ｋｇ、１．３４モル、１．０重量）の撹拌溶液に加えられた。ＴＬＣ分析（溶出液：酢酸エチル；発色試薬：ニンヒドリン）で反応完了が確認されるまで、通常２時間から６時間、その混合物は１５〜２５℃で撹拌された。反応混合物は、１５〜２５℃で水（０．４０Ｌ、０．８容積）によりクエンチされ、１６〜２０時間かけて１５〜２５℃で撹拌された。反応生成物は４０〜４５℃の真空下で濃縮され、その残留物は水（２．４６Ｌ、５．０容積）と酢酸エチル（４．９２Ｌ、１０．０容積）との間で分けられた。複数の層に分離し、有機相は、塩酸（１Ｍ、２．４６Ｌ、５．０容積）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２．４６Ｌ、５．０容積）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２．４６Ｌ、５．０容積）で、連続して洗浄された。有機相は硫酸マグネシウム（０．９８５Ｋｇ、２．０重量）上で乾燥されてから濾過され、その濾過ケークは酢酸エチル（０．５０Ｌ、１．０容積）で洗浄された。混ぜ合わされたろ液と洗浄液は真空下で濃縮されて、粘性のある褐色油としての（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムと、（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム［０．３９５Ｋｇ、８６．９％ｔｈ、８０．３％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で構造と一致；ＨＰＬＣによる面積８２．０％、７１．４：２８．６のＺ／Ｅ比］と、を含有する粗製の異性体混合物が得られた。その油状物は、トルエン（生成物の重量に関して０．４０Ｌ、１．０容積）で溶解されて、必要となるまで保存された。

（１．２． 粗製の（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの乾式フラッシュクロマトグラフィー）
上述のプロトコルに従って得られた粗製の異性体混合物の乾式フラッシュクロマトグラフィー精製が、異なる溶出条件を用いて試みられた。乾燥するまで濃縮された（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの粗製混合物は、２容積のトルエン中で再溶解され、ＳｉＯ_２（５重量）のパッドに装填され、２５画分容積の溶出液で溶出された。
画分１〜５：純トルエンでの溶出
画分６〜１０：トルエン／ＭｅＯＨ１％ｖｏｌ／ｖｏｌでの溶出
画分１０〜１５：トルエン／ＭｅＯＨ２％ｖｏｌ／ｖｏｌでの溶出

ＺおよびＥ形態は網掛けによって示されている。画分８から１３までが混ぜ合わされて、乾燥するまで濃縮された。結果は７５％の回収率を示す。Ｅ／Ｚ比の改善はなかった。異性体混合物（Ｅ＋Ｚ）の純度におけるおよそ４％の領域のわずかな増加が、乾式フラッシュクロマトグラフィーの前後で見られた（表２）。

粗製の異性体混合物の乾式フラッシュクロマトグラフィーでは、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムは精製できない。乾式フラッシュの前後でのＥ／Ｚ比は、３０／７０から４０／６０の範囲のままである。

さらに、そのようなアプローチは、実施しなければならない作業の規模に基づいて検討されるべきである。２０Ｌの規模では、この作業は時間を節約する手法とはならないだろう。

（１．３． 粗製の異性体混合物からの、純粋なＺの結晶化に対する評価）
粗製混合物である（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムから、純粋な（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムを結晶化することに対する評価の最初のパートは、純粋な（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの溶解性と潜在的な結晶化条件を調べることであった。１５ｍｇ規模で実施された溶解性／結晶化試験の結果は下記の表３で説明される。

初期の溶解性スクリーニングは、純粋な（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム異性体が、さまざまな溶媒において溶解することを示した。

上記結果に基づき、貧溶媒の添加による結晶化が調べられ、その結果は表４に報告されている。貧溶媒がおよそ４０〜５０℃の温溶液に加えられて、室温で放冷された。

とりわけ、ＩＰＡ中の（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの温溶液（４０〜５０℃）に、混濁するまで水（貧溶媒）が加えられ、その混合物は室温まで放冷された。

ＩＰＡ／水の結晶化条件が粗製の異性体混合物に適用された。トルエン溶液は、最初に、乾燥するまで濃縮された後、ＩＰＡ（８容積）中で溶解され、水（１８容積）が加えられた。残念ながら、これは油状として物質非混合という結果に終わった。

別の実験では、粗製の（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム溶液（９０．４％面積純度、０．５％ｗ／ｗトルエンと３.７％ｗ／ｗ ＴＨＦを含有）に、貧溶媒が室温で混濁するまで加えられた。その混合物は室温で放置された（表５）。

調査のこの時点において、純粋な（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの結晶化、あるいは（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムを含有する固体の単離を可能とする、適切な条件は特定されなかった。

（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの粗製の異性体混合物を用いて、さらなる結晶化の試みが行われた。すべての場合において、溶媒量は以前に用いられたものより少なく、単一溶媒にのみ基づくものであった。本結晶化に用いられた粗製物質（Ｅ／Ｚ比３３：６７、純度（Ｅ＋Ｚ）面積７９．５２％）は、泡状物質となるまで濃縮された（表６）。

冷凍庫内での一晩かけた熟成を後に伴う酢酸エチルを用いた結晶化は、純粋な（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム材を用いた結晶化をもたらしたが、試料が温められるとすぐに再融解された。結晶種が加えられた時でさえ、酢酸エチルにおける粗製物質を用いての結晶は見られなかった。

冷蔵庫室内での熟成を後に伴うジエチルエーテルを使った結晶化は、粗製の（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム材を用いた結晶化をもたらした。固体は４１％の回収率で収集された。残念ながら収集された固体は、投入原材料よりも僅かに悪いＥ／Ｚ比と、僅かに高い化学純度を有していた。

純粋および粗製両方のＺに対する溶媒としてのＴＢＭＥは、冷凍庫内での熟成後にオイリング（ｏｉｌｉｎｇ）をもたらし、結晶種の有る無しにかかわらず冷蔵庫内での熟成後の溶液中にとどまった。

Ｚ／Ｅ比および異性体混合物（Ｅ＋Ｚ）の純度の改善を可能とする、粗製の異性体混合物の適切な結晶化条件は見出されなかった。

（１．４ （３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの実質的に純粋な形態）
（１．４．１ 小規模精製）
（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの実質的に純粋な形態における単離工程は、オキシムエステルの還元後に単離された粗製の異性体混合物（実施例１のステージ７）の、バイオタージシステム（Ｂｉｏｔａｇｅ ＡＢ、ＳＥ−７５１ ０３ ウプサラ、スウェーデン）を用いたクロマトグラフィーによって実施された。

粗製の異性体混合物の５つの別個のバッチ（Ｎｏ．０２０、１８０、０６２、０６８、０７６）がバイオタージクロマトグラフィーによって精製された。さらに、異なる条件がバッチＮｏ．０６８および０７６に関して用いられた。オキシムメチルエステルの５％ｗ／ｗスパイクが加えられ（Ｎｏ．０６８）、バイオタージカラムに装填され（Ｎｏ．０７６）た状態で、精製は実施された。

各クロマトグラフィーは、トルエンで事前に流されたバイオタージ４０Ｍカートリッジ（４０ｇシリカ）を用いて実行された。次にトルエン：ＭｅＯＨ（９９：１ ｖ／ｖ）が溶出されて１００ｍｌの画分（総容量４Ｌ）で収集され、トルエン：ＭｅＯＨ（９６：４ ｖ／ｖ）で流された。

画分はＴＬＣ（溶出液：酢酸エチル）で分析されて、どの画分を廃棄でき、どの画分がＺ異性体を含んでいるかが決定された。これらＺ画分は、次にＨＰＬＣで分析された。画分に対する判定基準は、９６％超のＺ異性体かつ１．２％未満のＥ異性体というものだった。

驚くべきことに、バイオタージクロマトグラフィーによる様々なバッチの精製は非常に効率がよく、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの実質的に純粋な形態は、９９．４％（バッチＮｏ.０２０、Ｎｏ.０６２、Ｎｏ.０６８）および９９．２％（バッチＮｏ.１８０、Ｎｏ.０７６）で精製される。とりわけ、オキシムエステルの存在下でのバイオタージクロマトグラフィーは、回収率や質を低下させることなく５％ｗ／ｗのオキシムエステルを除去し（バッチＮｏ.０６８）、およびバイオタージカラムの２５％過装填は、収率や質の減少を引き起こさない（バッチＮｏ.０７６）。

（１．４．２ 大量精製）
粗製の（３Ｚ／Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（０．３９２ｋｇ、１．１６モル、１．０重量）の様々なバッチが、およそ５０％ｗ／ｗのトルエン溶液としてバイオタージ１５０Ｌ ＳＩＭユニットに装填されて、１％メタノールのトルエン溶液（１５０Ｌ）、次に２％メタノールのトルエン溶液（５０Ｌ）で、分画サイズ５．０Ｌにて精製された。収集された画分はＴＬＣ^１５とＨＰＬＣ分析で適切に分析された。不純物を含まない（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（基準：Ｚ異性体が面積９６．００％以上、Ｅ異性体が面積１．２０％以下）を含むと考えられる画分は、混ぜ合わされて、４０〜４５℃の真空下で濃縮された。無水エタノール（２ｘ２Ｌ）が残留物に加えられ、その溶液は、泡状の固体を処理し得るまで、４０〜４５℃の真空下で濃縮された。所望された生成物、（３Ｚ，５Ｓ）−１−［（ビフェニル−４−イル−カルボニル）−５−ヒドロキシ−メチル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム
（０．０８９Ｋｇ、２２．７％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で構造と一致、ＨＰＬＣにて面積９９．３％、９８．４：０．９のＺ／Ｅ比）が、わずかに灰色がかった白色から薄茶色の固体として得られた。

バイオタージクロマトグラフィーから分離された（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（２．７１３ｋｇ、１．０重量）の適切なバッチは混ぜ合わされ、１５〜２５℃の無水エタノール（５．１６Ｌ、２．０容積）中で溶解され、ガラス繊維紙による濾過により浄化され、無水エタノール洗浄（０．５０Ｌ、０．２容積）がそのフィルタに適用された。混ぜ合わされたろ液は、４０〜４５℃の真空下で一部ずつ濃縮された。生成物は乾燥トレイに移されて、３０℃の真空下で２４時間、乾燥された。オーブン温度は次に、８０時間かけて３０℃から４０度まで徐々に高められた。残滓溶媒のレベルは^１Ｈ ＮＭＲ分析（ＣＤＣｌ_３）で決定され、それが１．０％ｗ／ｗ未満であると判定された場合、その固体は目開きが５００ｍｍのふるいにかけられた。その固体はオーブンに戻されて、溶媒レベルが０．４０％ｗ／ｗ以下となって（３Ｚ，５Ｓ）−１−［（ビフェニル−４−イル−カルボニル）−５−ヒドロキシ−メチル］−ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（２．６３３Ｋｇ、９７．１％ｗ／ｗ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣＩ_３）で構造と一致、ＨＰＬＣで面積９８．６５％）が得られるまで、４０〜４２℃で乾燥された。

組み合わせ処理は、下記に要約されている。
インプット：２．７１３ｋｇ
アウトプット：２．６３３ｋｇ
収量：９７．１％ｗ／ｗ

実施例２：（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの、ＯＴ−ＲとバソプレッシンＶ１ａレセプターへの結合

（ＯＴ−ＲとバソプレッシンＶ１ａレセプターへの結合）
ヒトオキシトシンレセプターへの競合的結合が、シンチレーション近接アッセイによりｉｎ ｖｉｔｒｏで測定された。

本アッセイにより、試験化合物のＯＴ−Ｒに対する親和性を決定することができる。ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ（ＯＴ−Ｒを発現している細胞）由来の膜組織が５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、５ｍＭ ＭｇＣ１_２および０．１％ＢＳＡ（ｗ／ｖ）を含む緩衝液中に懸濁された。その膜組織（２〜４μｇ）は、コムギ胚凝集素で被覆された０．１ｍｇのＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社のＷＧＡ−ＰＶＴ−ポリエチレンイミンビーズ）、および、０．２ｎＭの１２５放射性標識された［Ｉ］−ＯＶＴＡ（ＯＶＴＡはオルニチン血管作用性であって、すなわち競合的結合実験におけるＯＴの類似体）と混合された。非特定的結合は１μＭのオキシトシンの存在下で決定された。総アッセイ容量は１００μｌであった。プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＮＢＳプレート）は、室温で３０分間インキュベートされ、Ｍｉｂｒｏｂｅｔａ（登録商標）プレートシンチレーションカウンターでカウントされた。競合的結合は、本発明の化合物の存在下、次の濃度で実施された：３０μＭ、１０μＭ、１μＭ、３００ｎＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭ。競合的結合データは、反復型非線形曲線回帰プログラム"Ｐｒｉｓｍ"（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ）を用いて分析された。

ＯＴレセプターへのＩ−ＯＶＴＡの結合を抑制する本発明の化合物の能力は、上述のｉｎ ｖｉｔｒｏのバイオアッセイを用いて評価された。上記の実施例中の試験化合物の結合親和性は、阻害定数（Ｋｉ；ｎＭ）で示される。これらの値から、本発明に係る上記試験化合物は、オキシトシンレセプターへの著しい結合を示すことが導き出される。

（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの、オキシトシンレセプターに対する阻害定数ＫｉはＫｉ（ｎＭ）＝５２ｎＭであって、バソプレッシンＶ１ａレセプターに対してはＫｉ（ｎＭ）＝１２０ｎＭである。したがって、（３Ｚ、５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムは、オキシトシンレセプターに対して選択的である。

実施例３：（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムはＯＴ−Ｒアンタゴニストである。

ＯＴ−Ｒを遺伝子導入されたＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞における、オキシトシン誘発性Ｃａ２＋動員の阻害が、ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー）で測定された。

化合物（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムによる、ＯＴ／ＯＴ−Ｒ媒介性カルシウム動員の阻害が、このアッセイにより測定された。

ＦＬＩＰＲ（登録商標）は、同時照射用のレーザ（アルゴン−イオンレーザ）を使い、９６ウェルプレートの各ウェルを読み込む（冷却ＣＣＤカメラ）ことにより、多数の試料の迅速な測定をすることができる蛍光イメージング装置である。

プレートの調整：ＦＬＩＰＲプレートは、ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞（ＯＴ−Ｒを発現しているヒト胎児由来腎臓細胞）が付着するように、ＰＬＬ（ポリ−Ｌ−リシンｌ０μｇ／ｍｌ＋０．１％ゼラチン）でプレコートされ、３０分から２日間まで３７℃でインキュベートされた。細胞は９６ウェルプレートに播かれた（６００００細胞／ウェル）。

Ｆｌｕｏ−４による標識：５０μｇのＦｌｕｏ−４（Ｃａ２＋感受性蛍光染料）が、２０μｌのプルロニック酸（２０％ＤＭＳＯ溶液）で溶解された。溶解したｆｌｕｏ−４は次に、１０ｍｌのＤＭＥＭ（ダルベッコ最小必須培地）−Ｆ１２培養培地で希釈された。プレートはＤＭＥＭ−Ｆ１２培地で１回洗われた。Ｆｌｕｏ−４を含有する１００μｌのＤＭＥＭ−Ｆ１２培地が、この蛍光培地で１．５〜２時間にわたりインキュベートされたＨＥＫ細胞に加えられた。Ｆｌｕｏ−４は細胞の細胞質に取り込まれる。

緩衝液：１４５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、ｌｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１０ｍＭ グルコース、ＥＧＴＡ（エチレンビス オキシエチレンニトリロ テトラ酢酸）。ｐＨは７．４に調整された。

アッセイの実施：上記緩衝液（１ｘ）中の化合物（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（５ｘ）を、最低８０μｌ／ウェルとして用意された（９６ウェルプレート）。化合物（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムが、異なる濃度（３０μＭ、１０μＭ、１μＭ、３００ｎＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭ）で、９６ウェルプレートに加えられた。オキシトシン（ＯＴ）が、濃度４０ｎＭで加えられた。

次に、Ｆｌｕｏ−４（λｅｘ＝４８８ｎｍ、λｅｍ＝５９０ｎｍ）の相対蛍光は、化合物（３Ｚ、５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの存在または不存在を問わず、ＦＬＩＰＲによって測定される。そのマーカの蛍光はＣａ２＋の量に敏感なため、Ｃａ２＋の挙動が検出され得る。その結果、化合物（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムが有する、オキシトシンレセプター媒介性のオキシトシン誘発性細胞内Ｃａ２＋動員に拮抗する能力が判断され得る。

式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物は、ＯＴ−Ｒに対するオキシトシンの活性を、ＩＣ５０＝８１ｎＭで阻害する。

実施例４：麻酔下にある妊娠後期のラットにおける自発性の子宮収縮の抑制

（４．１ 実験プロトコル）
妊娠後期（妊娠１９−２１日目で認証）で体重が３５０〜４００ｇの、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ＣＤ（ＳＤ）ＢＲのメスのラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、カルコ、イタリア）が、ウレタン（１．０５ｇ／ｋｇ、腹腔内投与）で麻酔されて恒温の手術台におかれた。下腹部レベルでの正中切開がなされ、一の妊娠子宮角を露出させて、（卵巣近くの）その卵管端を外科用絹糸での結紮で閉じた。

卵巣に近い胎児に対応して、隣接する胎盤を傷つけないよう注意しながら子宮角壁が切開され、上部にラテックスバルーンを備えたＰＥ２４０チューブ（空時の長さ９ｍｍ、容量０．１ｍＬ；Ｒａｄｎｏｔｉ、Ｍｏｎｒｏｖｉａ、カリフォルニア、米国）が内腔に挿入されて、外科用絹糸で子宮壁に固定された。ラテックスバルーンの内部空洞を０．１ｍＬの滅菌生理食塩水で充填した後、Ｐ２３ＩＤ Ｇｏｕｌｄ−Ｓｔａｔｈａｍ圧力変換器を介して、増幅／記録システム（ＭａｃＬａｂ、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｔｙ Ｌｔｄ、キャッスルヒル、オーストラリア）に、カテーテルがつながれた。一の頸静脈が単離されて、経静脈投与のために、ＰＥ６０ポリエチレンカニューレでカニューレ処置された。手術準備後、３０分の静定時間をみたのち、本発明の化合物の投与（１０分間の静脈内点滴、静脈内または経口のボーラス投与）を増やすことの効果を、結果として生ずる子宮収縮を測定することによって評価した。

静脈内投与（点滴またはボーラス投与）に対し、１０分間の注入過程中にそのＡＵＣを算出することにより、子宮収縮活動は定量化された。各化合物の投与後に見られる自発性の子宮反応と比べたＡＵＣ値の百分率変化が、最初の投与前に記録された値（基底値）と比較して算出された。本発明の試験化合物の効果が、処置前と処置後の子宮内腔の圧力値により評価された。

経口投与に対し、同じ算出処理が処置後の異なる時点で適用された。各時点における処置群間の統計的な差は、一元配置分散分析とそれに続くテューキーの検定によって決定された。

（４．２ 結果）
図１ＡとＢは、麻酔下にある出産間近の妊娠ラット（妊娠日齢１９−２１）における自発性の子宮収縮の抑制に対する、経口ルートにより投与されたＺ異性体とＥ異性体の投与反応効果を示している。ｎ＝６〜８である動物のグループごとの平均±標準誤差としてのデータである。ｙ軸は、投与前を１００％として比べたときの％値として子宮収縮を表している。ｘ軸は分単位での投与後の時間を表している。収縮は連続的に記録され、１０分間隔ごとに曲線下面積（ＡＵＣ）が積分された。

図１Ａで示される結果が、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシム（Ｚ形態）は、ＮＰ３Ｓ（５％Ｎ−メチルピロリドン、２５％ポリエチレングリコール２００、３０％ポリエチレングリコール４００、２０％プロピレングリコール、２０％生理食塩水）の溶媒対照群と比較した場合、種々の投与量（１０、３０、６０ｍｇ／ｋｇ）で、麻酔下にある妊娠後期のラットにおける自発性の子宮収縮を急速に抑制することができることを実証する。実質的に純粋なＺ形態の投与から５〜１５分後に、１５％の子宮収縮抑制が観察された。４２％という高い効率の抑制が、上記化合物を投与してから１７０〜１８０分後に見られる。

対して、その１７０〜１８０分の観察中のどの時点においても、種々の投与量（１０、３０または６０ｍｇ／ｋｇ、Ｅ形態）の（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムでは、子宮収縮の抑制は何ら観察されなかった（図１Ｂ）。

驚くことに、式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムを有する実質的に純粋なＺ形態は子宮収縮を抑制する一方、実質的に純粋なＥ形態はなんら有効性を持たないことを、本発明は示している。したがって、本発明は、有利にも、実質的に純粋な形態における式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの生理活性化合物および／またはその代謝物であって、異性体混合物にて供される上記化合物と比較して、低投与量で投与され得るものに関する。

実施例５：（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムのｉｎ ｖｉｖｏ安定性

［^１４Ｃ］−（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの異性体相互変換が、８匹の健康なメスのラット（各投与ルートごとにｎ＝４）に対する、単回の経口投与および静脈内投与（名目３０ｍｇ／ｋｇ、２５μＣｉ／ラット）の後に調査された。

本研究で用いられた動物はＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）ＢＲシロネズミであった。全ての動物はＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＵＫ Ｌｔｄ（Ｍａｒｇａｔｅ、ケント、英国）により供給された。動物は体重が２００〜２６０ｇの範囲にあり、およそ生後２か月であった。ラットには、固有の識別番号が与えられ、ケージの場所に加えて固有のテールマーキングで識別された。

投与グループは次のとおりであった：４匹のメスは経口投与を受け、４匹のメスが静脈内投与を受けた。

［^１４Ｃ］−（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの経口投与および静脈内投与の剤型は、３０ｍｇ／ｋｇを至適用量レベルとする各投与段階と、約２５μＣｉ／ラットの放射性濃度とで、別々に用意された。投与剤型は適切な母材で調製された；静脈内投与はＮＰ３Ｓで調製され、一方、経口投与はＬａｂｒａｓｏｌ：水（１：１ｖ／ｖ）で調製された。

ＨＰＬＣを用いたクロマトグラフィー分析は、式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムのＥ異性体とコクロマトグラフィーを示す放射性成分は、投与前と投与後の何れにおいても、経口投与または静脈内投与の剤型には存在しないことを示した。従って、投薬準備または投与中の、（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムから、（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムへの相互転換は検出できなかった。式（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの［^１４Ｃ］−Ｅ異性体が、［^１４Ｃ］−（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムの経口または静脈内投与後６時間に至るまで採取された血漿中に存在することを示す証拠はなかった。

したがって、説明された方法を用いると、［^１４Ｃ］−（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムは、経口投与または静脈内投与後にｉｎ ｖｉｖｏにおいて検出可能な異性体の相互変換を経ない。

Claims (30)

1. 式１（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物
   ［式１］
   

   

   を合成するための方法であって、
   前記方法は、
   式２で表わされる前駆体のメチル−（２Ｓ，４Ｚ）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）−カルボニル］−４−メトキシイミノピロリジン−２−カルボン酸塩
   ［式２］
   

   

   を還元する段階を備え、
   これによって式１で表される前記化合物とそのジアステレオマー（３Ｅ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムとの混合体を生産し、
   その後、式１で表される前記化合物を、トルエン及びメタノールを含む混合物を溶離液として用いる液体クロマトグラフィ処置により、前記ジアステレオマーから分離し、前記トルエン及びメタノールを含む混合物は、トルエン：メタノール比率が９６：４（ｖ／ｖ）〜９９：１（ｖ／ｖ）であり、これにより式１で表される化合物を少なくとも８５％の純度で生成する、
   方法。
2. 式２で表わされる前記前駆体は、
   式２ａで表わされるジアステレオマーのメチル−（２Ｓ，４Ｅ）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）−カルボニル］−４−メトキシイミノピロリジン−２−カルボン酸塩
   ［式２ａ］
   

   

   を含む混合物中に存在する、
   請求項１に記載の方法。
3. 前記還元する段階は、
   式２で表わされる前記前駆体を、
   水素化ホウ素リチウムと、
   反応させる段階を有する、
   請求項１に記載の方法。
4. メタノールとテトラヒドロフランを含む溶媒中で、
   式２で表わされる前記前駆体を、
   前記水素化ホウ素リチウムと、
   反応させる段階を有する、
   請求項３に記載の方法。
5. 式３で表わされる前駆体
   ［式３］
   

   

   をＯ−メチル化する段階により、
   式２で表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
   請求項１に記載の方法。
6. 前記Ｏ−メチル化する段階は、
   式３で表わされる前記前駆体を、
   硫酸ジメチルと、
   反応させる段階を有する、
   請求項５に記載の方法。
7. 塩基の存在下で、
   式３で表わされる前記前駆体を、
   前記硫酸ジメチルと、
   反応させる段階を有する、
   請求項６に記載の方法。
8. 前記塩基は、炭酸カリウムである、
   請求項７に記載の方法。
9. 式４で表わされる前駆体
   ［式４］
   

   

   を、
   メトキシアミンまたはその塩と、
   反応させる段階により、
   式３で表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
   請求項５に記載の方法。
10. 式４で表わされる前記前駆体を、
    メトキシアミン塩酸塩と、
    反応させる段階を備える、
    請求項９に記載の方法。
11. 式５で表わされる前駆体
    ［式５］
    

    

    を酸化する段階により、
    式４で表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
    請求項９に記載の方法。
12. 前記酸化する段階は、
    式５で表わされる前記前駆体を、
    三酸化硫黄ピリジンと、
    反応させる段階を備える、
    請求項１１に記載の方法。
13. 式５で表わされる前記前駆体は、
    式５ａで表わされる前駆体
    ［式５ａ］
    

    

    である、
    請求項１１に記載の方法。
14. 式６で表わされる前駆体
    ［式６］
    

    

    を、
    式７で表わされる前駆体
    ［式７］
    

    

    と反応させる段階により、
    式５ａで表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
    請求項１３に記載の方法。
15. 炭酸カリウムの存在下で、
    式６で表わされる前記前駆体を、
    式７で表わされる前記前駆体と反応させる段階を備える、
    請求項１４に記載の方法。
16. 式８で表わされる前駆体
    ［式８］
    

    

    を、
    塩化チオニルと反応させる段階により、
    式７で表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
    請求項１４に記載の方法。
17. 鈴木反応条件下で、
    式９で表わされる前駆体
    ［式９］
    

    

    を、
    式１０で表わされる前駆体
    ［式１０］
    

    

    とカップリングさせる段階により、
    式８で表わされる前記前駆体を合成する段階を備える、
    請求項１６に記載の方法。
18. 前記カップリングさせる段階は、
    テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの存在下で、
    式９で表わされる前記前駆体を、
    式１０で表わされる前記前駆体と反応させる段階を備える、
    請求項１７に記載の方法。
19. 式１で表される前記化合物が少なくとも９０％の純度で生成される、
    請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
20. 式１で表される前記化合物が少なくとも９５％の純度で生成される、
    請求項１９に記載の方法。
21. 式１で表される前記化合物が９０％から９９．９％までの純度で生成される、
    請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
22. 式１で表される前記化合物が９５％から９９．９％までの純度で生成される、
    請求項２１に記載の方法。
23. 胚移植手順の対象者における胚着床不全の治療および予防の少なくとも一方に使用するための医薬組成物であって、
    前記医薬組成物は、活性成分として式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有し、
    前記化合物は、前記医薬組成物内に、少なくとも８５％から９９．９％の範囲にある純度で存在する、
    医薬組成物。
24. 体外受精−胚移植（ＩＶＦ−ＥＴ）法による不妊治療において使用するための医薬組成物であって、
    前記医薬組成物は、活性成分として式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有し、
    前記化合物は、前記医薬組成物内に、少なくとも８５％から９９．９％の範囲にある純度で存在する、
    医薬組成物。
25. 胚移植処置を受けている対象において、胚着床不全の可能性を低くするのに使用するための医薬組成物であって、
    前記医薬組成物は、活性成分として式（３Ｚ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−１−［（２′−メチル−１，１′−ビフェニル−４−イル）カルボニル］ピロリジン−３−オンＯ−メチルオキシムで表される化合物、および医薬的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有し、
    前記化合物は、前記医薬組成物内に、少なくとも８５％から９９．９％の範囲にある純度で存在する、
    医薬組成物。
26. 経口、経膣、または静脈内投与のために製剤される、
    請求項２３から２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
27. 前記化合物は少なくとも９０％の純度で前記医薬組成物中に存在する、
    請求項２３から２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
28. 前記化合物は少なくとも９５％の純度で前記医薬組成物中に存在する、
    請求項２７に記載の医薬組成物。
29. 前記化合物は９０％から９９．９％の純度で前記医薬組成物中に存在する、
    請求項２３から２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
30. 前記化合物は９５％から９９．９％の純度で前記医薬組成物中に存在する、
    請求項２９に記載の医薬組成物。

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