JP6305555B2 - 血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物及びその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、インスリンやエクセナチド等の血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物及びその製造方法に関する。

インスリンは、何十年も臨床で糖尿病の治療に用いられている。インスリンは膵臓に存在するランゲルハンス島のβ細胞より分泌され、ペプチドホルモンの一種であり、グルコース代謝の調節に関与し、血糖バランスを制御する。第一世代の動物インスリンは抗原性が比較的高く、哺乳動物におけるインスリンのアミノ酸配列及び構造は若干異なるが、ブタインスリンはヒトインスリンと最も類似している（非特許文献１）。第二世代のヒトインスリンは、分子量が５,８０８Ｄａであり、第一世代と比べて注入量を約３０％減らすことができ、安定性が高く、室温約２５℃で約一ヶ月保存可能であることが報告されており、一般的に食事の約３０分前に注射する。インスリンアナログは、第三世代のインスリンであり、人体の生理的な血糖降下動態モデルを模擬し、食直前に注射することができ、食時インスリンとも超速効型インスリンともいわれる。

活性化されたランゲルハンス島のβ細胞から、まず８４アミノ酸からなるプロインスリン(Ｐｒｏｉｎｓｕｌｉｎ)が分泌され、次に、プロインスリン変換酵素（ＰＣ１及びＰＣ２）及びカルボキシペプチダーゼＥにより、プロインスリンのＣ鎖が切断され、そしてＣ末端のＡ鎖とＮ末端のＢ鎖がジスルフィド結合で結合することにより、インスリンとなる。インスリンは、ランゲルハンス島のβ細胞中の分泌小胞に貯蔵され、亜鉛イオンとともに６量体を形成する。インスリンは、グルコース、ラクトース、リボース、アルギニン及びグルカゴン等の刺激により、分泌小胞から血液中に放出されるとともに、その生理的役割を果たす。空腹時血糖値を維持できるインスリンは、基礎インスリンと呼ばれる。また、食後血糖値を正常に維持するため、食後血糖値を下げるインスリンは、食時インスリンと呼ばれる。食時インスリンは、肝臓における内因性グルコースの生成を抑制し、食後血糖値上昇の程度と時間を制御する（非特許文献２）。それにより、血糖値が通常空腹時血糖値に近いレベルに制御され、また食後血糖値が５.５ｍｍｏｌ/Ｌを超える時間を３０分以内に制御している（非特許文献３）。１型糖尿病患者においては、ランゲルハンス島のβ細胞が自己免疫を破壊し、食時インスリンと基礎インスリンの分泌低下を招く。一方、２型糖尿病の患者においては、ランゲルハンス島のβ細胞の機能が異常に低下し、インスリンの分泌量が減少する（非特許文献４）とともに、インスリン抵抗性が見えるため、空腹時血糖値が正常値になるが、食後血糖値が高い状態が数時間又は次の食事まで続く（非特許文献５）。現在、２型糖尿病の治療において、インスリン製剤及びインスリンアナログ製剤であるノボリンＮ、アスパルトなどが使用されている。１型糖尿病の治療は、空腹時血糖値を正常に保つため、インスリンを持続的に注入するパルス式インスリンポンプが用いられている。ライフスタイルを考慮し、経口血糖降下薬によっても、目標の血糖コントロールが得られない場合は、基礎インスリンアナログであるインスリンデテミルが多く使われている。

エクセナチド(Ｂｙｅｔｔａ／Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ)は、強力なインスリン分泌促進薬であり、２型糖尿病の血糖値制御に使用されている。特に、メトホルミン、スルホニル尿素薬、メトホルミンとスルホニル尿素薬の併用での治療効果が不十分な２型糖尿病患者に用いられる。エクセナチドは、タンパク質分解酵素ＩＶ（ジペプチドラクタマーゼＩＶ）による分解に対して抵抗性を示し、その半減期が約２分であり、哺乳動物のグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）より長い（非特許文献６）；ＧＬＰ−１とアミノ酸配列で５３％の相同性を有し（非特許文献７）；またＧＬＰ−１受容体を活性化させ、糖尿病の治療効果がＧＬＰ−１受容体との結合に関与し、作用はＧＬＰ−１と類似している。エクセナチドは、グルコース依存的にインスリン分泌を促進し、グルコース依存的に異常に高くなるグルカゴン分泌を抑制し、胃からの内容物排出速度の低下（非特許文献８）、食欲を抑制、β細胞の再生・増殖を促し、脂肪蓄積の減少、インスリン抵抗性を改善する（動物モデルで）。アメリカドクトカゲ由来のエクセナチドー４は長時間血糖降下作用を持つ（非特許文献９）が、０.２μｇ／ｋｇ又はそれ以上投与量を皮下注射の場合、嘔吐、悪心、頭痛などの副作用を起こす（非特許文献１０）。

エクセナチド徐放性製剤の開発において、初期血中濃度のコントロール、初期放出制御は大きな課題の一つである。特許文献１〜３においては、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体（ＰＬＧＡ）を利用し、相分離法によるエクセナチドを含有する脂質ゲルナノカプセルの製造方法が公開されている。その製造方法は、相分離法、噴霧乾燥法などが挙げられる。そのほかにも、特許文献４においては、二重エマルション溶媒蒸発法による多小胞リポソームの製造方法が公開されている。その製造方法では、エクセナチド含有多小胞リポソームを一回の皮下注射後、ラットにおいて、正常な血糖値を七日間保つが、有機溶剤の使用と複雑な処方による皮膚刺激性を起こす可能性がある。一般に、多小胞リポソームの粒子径は５〜５０μｍである。Ｊ.Ｓｅｎｉｏｒら（非特許文献１１）は、リポソームの粒子径が大きいほど薬物の皮下放出速度が遅いと指摘した。一方、多小胞リポソームの粒子径が大きすぎると、静脈内投与が不可能であり、貯蔵期間中の沈降と凝集問題が未だに解決されてないため、製剤の安定性に影響与えるおそれがある；これまでの多小胞リポソーム製品は懸濁液であるため、貯蔵及び輸送が容易ではない；多小胞リポソームの製造設備では厳しい生産条件が要求され、大量生産に向いていないため、開発が制限されると報告されている（非特許文献１２）。２０１２年１月２７日に、２型糖尿病の補助治療に際して、週１回注射投与するエクセナチドの徐放性注射剤（Ｂｙｄｕｒｅｏｎ／Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）が、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）において、承認されたが、ＦＤＡは、重度の低血糖症リスク、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）及び急性膵炎について、連続症例登録システムの制定と、米国で当該薬品による年発癌率を１５年以上評価するとともに、リスク評価とリスク緩和戦略（ＲＥＭＳ）についても実施するよう、製薬会社（アミリン社）に求めた。

インスリンポンプには、インスリン量の調節用ポンプ以外に、インスリンカニューレ、チューブ、特殊注射針、及び接着材料などが必要であり、感染や閉塞を防ぐため、注射針とチューブの交換は常に行う必要がある。また、インスリンポンプは、高価なものであり、医療保険の給付対象になっていないため、全額自己負担になる。インスリンポンプに用いられるインスリンの濃度は１００ユニット/ｍｌであり、ヒトインスリンのカートリッジ製品の濃度と同じである。インスリンポンプによりインスリン及びインスリンアナログを皮下注射後の吸収速度及び曲線は、通常の注射器で注射後の結果と類似する。溶液中のインスリンにおいて、６量体から単量体への解離速度は比較的遅いが、２量体の超速効型インスリンアナログは単量体への解離速度が速い。低血糖を避けるため、インスリンポンプには、基礎インスリンの２４時間投与量及び追加インスリン投与量の注入と、注入量を常に調整することが必要である。食事の摂取量と時間に応じて、インスリンの追加投与量を調整、また、内分泌代謝科専門医やインスリンポンプ取り扱い専門医によるインスリンポンプの検査及びインスリン投与量の調節することも必要である。Ｊｏｓｅ ＭＢ.ら（非特許文献１３）はプルロニック・ハイブリッド・ハイドロゲル（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ ｈｙｂｒｉｄ ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ）のＰＦ１２７を利用して、皮下注射の徐放性インスリン製剤を製造した。しかし、この製剤では、ラットでの血中濃度及び血糖濃度を１２時間しか保持できないため、徐放性効果が良いとは言えない。そして、徐放性効果を向上させるため、単にＰＦ１２７の濃度を増加させると皮膚刺激が起こりやすくなる。

米国特許第７,１６４,００５号明細書 米国特許出願公開第２００５／０２７１７０２号明細書 中国特許出願公開第１０１６４６４２４Ａ号明細書 中国特許出願公開第１０２２７４１８２Ａ号明細書

Ｂａｋｅｒ, ＥＮ, Ｂｌｕｎｄｅｌｌ, ＴＬら、 Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｚｎ２＋ ｐｉｇ ｉｎｓｕｌｉｎ ｃｒｙｓｔａｌｓ ａｔ １.５ Ａ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ. Ｐｈｉｌｏｓ.Ｔｒａｎｓ.Ｒ.Ｓｏｃ.Ｌｏｎｄ. Ｂ Ｂｉｏｌ.Ｓｃｉ. １９８８. ３１９:３６９−４５６ Ｍｉｔｒａｋｏｕ Ａ, Ｋｅｌｌｅｙ Ｄ, Ｖｅｎｅｍａｎ Ｔら、Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｂｎｏｒｍａｌ ｍｕｓｃｌｅ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｔｏｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ ｉｎ ＮＩＤＤＭ. Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９０; ３９:１３８１−９０ Ｂｏｅｈｍ Ｂ, Ｈｏｍｅ Ｐ, Ｂｅｈｒｅｎｄ Ｃら、Ｐｒｅｍｉｘｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｓｐａｒｔ ３０ vｓ. ｐｒｅｍｉｘｅｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ３０／７０ ｔｗｉｃｅ ｄａｉｌｙ:ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｔｒｉａｌ ｉｎ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ. Ｄｉａｂｅｔ Ｍｅｄ ２００２；１９: ３９３−３９９ Ｂｅｌｌ ＤＳ. Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ. Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｊ ２００１; ９４: ８０４−９ Ｐｏｌｏｎｓｋｙ ＫＳ, Ｇｉｖｅｎ ＢＤ, Ｈｉｒｓｃｈ ＬＪら、Ａｂｎｏｒｍａｌ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎ ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ. Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９８８; ３１８: １２３１−９ Ｐｒｉｄａｌら, Ｅｕｒ. Ｊ. Ｄｒｕｇ. Ｍｅｔａｂ. Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ., ２１: ５１−５９, １９９６；Ｄｅａｃｏｎら, Ｄｉａｂｅｔｅｓ, ４７: ７６４−７６９，１９９８ Ｇｏｋｅら, Ｊ. Ｂｉｏｌ. Ｃｈｅｍ. , ２６８: １９６５０−１９６５５，１９９３ Ｓｃｈｉｒａら、 Ｊ. Ｃｌｉｎ. Ｉｎｖｅｓ ｔ., ９７:９２−１０３, １９９６ Ｇｒｅｉｇら, Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４２: ４５−５０, １９９９ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, ５３: ２６０−２６７,２００１ Ｊ. Ｓｅｎｉｏｒ, Ｍ. Ｒａｄｏｍｓｋｙ, Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ, １ｓｔ ｅｄ., Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ／ＣＲＣ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, ２０００ 陳亭亭、陸偉根，多小胞リポソームの応用状況。臨床医薬学；２００７（２８）１７０−１７３ Ｊｏｓｅ ＭＢ., Ｍａｒｉｋｏ Ｍ., Ｋｏｚｏ Ｔ. ら、 Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｆｒｏｍ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７ ｇｅｌｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ. Ｉｎｔ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ. １９９９(１８４):１８９−１９８

上記のように、インスリン依存性糖尿病の患者にとって、安全、有効性及びコンプライアンスを実現するために、安価で、安定的な、皮膚への低刺激性かつ大量生産しやすい持続徐放性製剤を開発することが非常に望まれている。

上記のような要望から、一つもしくはそれ以上の要望を満たすため、本発明は、インスリンやエクセナチドなどの血糖降下作用の有効成分を有する、生体適合性の持続徐放性リポソームゲル組成物を提供する。このリポソームゲル組成物は、高い生物学的利用能を有する皮下注射用の徐放性製剤であり、血糖降下作用の有効成分であるインスリンやエクセナチドなどの放出を効果的に制御できる。また、本発明は、皮下注射用の徐放性製剤の製造方法も提供する。

本発明に係る皮下注射用の徐放性製剤であるリポソームゲル組成物は、ヒトに投与されたあとに、高い生物学的利用能、より低い初期血中濃度、高速の放出作用を有するとともに、一回皮下注射されたあとに、血糖降下作用の有効成分であるインスリンや、エクセナチドなどの体内血中濃度を２〜７日もしくはそれ以上まで効果的に持続させる。本発明に係る徐放性組成物は、治療的に有効な量の血糖降下作用の有効成分、脂質、熱可逆性ゲル、及び水系分散媒を有する。熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体、及びそれらを組み合わせたものから選ばれる。

本発明の一実施形態によれば、本発明は、治療的に有効な量の血糖降下作用の有効成分、脂質、熱可逆性ゲル（ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体から選ばれた１種又はそれ以上で構成されたもの）、水系分散媒を含む注射用持続徐放性リポソームゲル組成物を提供する。

本発明の一態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマーと、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体から選ばれた１種又はそれ以上で構成される。本発明の別の態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸の組み合わせか、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン及びヒアルロン酸の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ヒアルロン酸及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。

本発明の一態様によれば、ポロキサマーハイドロゲルは、ポロキサマーＦ１２７又はＰ１２３である。

本発明の一態様によれば、組成物に対する熱可逆性ゲルの含有量の重量割合は、０.０５〜５０％、０.５〜３５％、１〜２０％、５〜１５％又は１０〜１２％であることができる。

本発明の一態様によれば、熱可逆性ゲルがポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマーと、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体から選ばれた１種又はそれ以上で組み合わせる場合において、組成物に対する両者の含有量の重量割合は、それぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％、１５〜２５％及び０.０８〜１％、１８〜２０％及び０.１〜０.５％、又は２０％及び０.１％でもよい。本発明の一態様によれば、組成物に対するポロキサマーハイドロゲルとゼラチン、ヒアルロン酸、又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の含有量の重量割合は、それぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％、１５〜２５％及び０.０８〜１％、１８〜２０％及び０.１〜０.５％、又は２０％及び０.１％でもよい。

本発明の一態様によれば、脂質は、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセリド及び脂溶性ビタミンから選ばれる。本発明に係る組成物において、組成物に対する脂質の含有量の重量割合は、０.０５〜５０％、０.７〜３０％、１〜２０％、１〜１０％又は２〜５％でもよい。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、血糖降下作用のある有効成分は、インスリン、エクセナチド、リラグルチド、プラムリンチドのうち、１種又はそれ以上である。本発明の別の態様によれば、インスリンは、インスリンアナログ、ヒトインスリン、動物インスリンから選ばれた１種又はそれ以上であってもよい。エクセナチドは、エクセナチド−３、エクセナチド−４、そのＣ末端アミド化されたエクセナチドアナログ、非置換のエクセナチドアナログ、及びそれらの薬学的に許容される塩から選ばれた１種又はそれ以上である。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、血糖降下作用のある有効成分の含有量は、組成物の重量に対して０.０１〜２.５％である。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、水系分散媒は、注射用純水、アミノ酸類緩衝液、ペプチド類緩衝液、及びｐＨ緩衝液から選ばれる。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、脂質は、５０ｎｍ〜２０μｍの粒子径を有する脂質小胞のゲル、リポソームの懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を形成する。血糖降下作用のある有効成分は脂質に担持又は脂質中に分散された後、熱可逆性ゲルに担持されている。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、血糖降下作用のある有効成分の血中濃度が２〜７日又はこれ以上の期間、効果的に持続する。

本発明の一実施形態によれば、本発明は、血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物の製造方法を提供する。その製造方法は以下に示すステップである：前述した血糖降下作用の有効成分を担持又は分散されている脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を調製するために、治療的に有効な量の血糖降下作用のある有効成分、脂質、及び水系分散媒を混合する混合ステップと、
リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを形成するために、前述した脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を、熱可逆性ゲル（ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体、及びそれらの組み合わせから選ばれた）の水溶液に加えて乳化させる乳化ステップである。

本発明の一態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマーと、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の３つから選ばれた１種又はそれ以上で構成される。本発明の別の態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸の組み合わせか、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン及びヒアルロン酸の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ヒアルロン酸及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。本発明の別の態様によれば、この熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の組み合わせでもよい。

本発明の一態様によれば、ポロキサマーハイドロゲルは、ポロキサマーＦ１２７又はＰ１２３である。

本発明の一態様によれば、熱可逆性ゲルの含有量は、組成物の重量に対して０.０５〜５０％、０.５〜３５％、１〜２０％、５〜１５％又は１０〜１２％でもよい。

本発明の一態様によれば、熱可逆性ゲルがポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマーと、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の３つから選ばれた１種又はそれ以上から組み合わせる場合において、組成物に対する両者の含有量の重量割合はそれぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％、１５〜２５％及び０.０８〜１％、１８〜２０％及び０.１〜０.５％、又は２０％及び０.１％でもよい。本発明の一態様によれば、組成物に対するポロキサマーハイドロゲルとゼラチン、ヒアルロン酸、又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の含有量の重量割合はそれぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％、１５〜２５％及び０.０８〜１％、１８〜２０％及び０.１〜０.５％、又は２０％及び０.１％でもよい。

本発明の一態様によれば、脂質は、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセリド及び脂溶性ビタミンから選ばれる。本発明に係る組成物において、脂質の含有量は、組成物の重量に対して０.０５〜５０％、０.７〜３０％、１〜２０％、１〜１０％又は２〜５％でもよい。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、血糖降下作用のある有効成分は、インスリン、エクセナチド、リラグルチド、プラムリンチドから選ばれた１種又はそれ以上のものである。本発明の別の態様によれば、インスリンは、インスリンアナログ、ヒトインスリン、動物インスリンから選ばれた１種又はそれ以上でもよい。エクセナチドは、エクセナチド−３、エクセナチド−４、そのＣ末端アミド化されたエクセナチドアナログ、非置換のエクセナチドアナログ、及びそれらの薬学的に許容される塩から選ばれた１種又はそれ以上である。

本発明の一態様によれば、血糖降下作用のある有効成分の含有量は、組成物の重量に対して０.０１〜２.５％である。

本発明の一態様によれば、本発明に係る組成物において、水系分散媒は、注射用純水、アミノ酸類緩衝液、ペプチド類緩衝液、及びｐＨ緩衝液から選ばれる。

本発明の一態様によれば、本発明に係る製造方法では、血糖降下作用のある有効成分を有するリポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルの粉剤を形成するため、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルの固化ステップが提供される。本発明の別の態様によれば、この固化ステップは、相分離法、噴霧乾燥法または凍結乾燥法により行われる。

本発明の一実施形態によれば、本発明は、本発明の製造方法により得られた、血糖降下作用の有効成分を有するリポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルの粉剤が提供される。

血糖降下作用の有効成分であるインスリン（図１ａ）又はエクセナチド（図１ｂ）の脂質小胞のゲル（ＶＬＧ）が脱水された脂質小胞の電子顕微鏡観察写真。 イン・ビトロにおけるインスリンの放出速度を示す。 インスリンを含有する異なる製剤を用いたラットの血中濃度の変化を示す。 エクセナチドを含有する製剤が、同じ濃度の脂質、同じ濃度の熱可逆性ゲルの保護中での、ラットの血中濃度の変化を示す。

以下に、本発明及び本発明の様々な付加的な利点をより明確にするため、本発明はその実施の形態に基づいて詳述する。

本発明は、血糖降下作用の有効成分を有する皮下注射用の持続徐放性リポソームゲル組成物に関する。この持続徐放性リポソームゲル組成物は、ヒトに投与された後に、高い生物学的利用能、より低い初期血中濃度を有する。本発明の持続徐放性リポソームゲル組成物は、室温で良い流動性を示すため、皮下注射に用いられる。

本発明で用いられている血糖降下作用の有効成分は、インスリン、エクセナチド、リラグルチド、プラムリンチド及びそれらの組み合わせから選ばれる。

本発明におけるインスリンは、インスリンアナログであるインスリンアスパルト、インスリンアスパルト３０、インスリンデテミルなど、ヒトインスリンであるノボリン類などの動物インスリンから選ばれた１種又はそれ以上である。これらのインスリンは、作用時間の特性により、速効型インスリンアナログ、短時間作用型インスリン、中間作用型インスリン、長時間作用型インスリン（長時間作用型インスリンアナログを含む）、予混合インスリン（予混合インスリンアナログを含む）に分類される。

エクセナチドは、エクセナチド−３、エクセナチド−４、その機能的断片、誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩から選ばれた１種又はそれ以上である。本発明で使用される、治療上有効量という用語は、治療を受けていない被験者に比べて、障害の改善または疾患の治療、癒合、予防又は緩和、副作用の軽減、疾患や障害の進行を遅らせる役割を果たす任意の量であることを意味する。本発明の一態様によれば、本発明に係る血糖降下作用の有効成分の含有量は、例えば、インスリンやエクセナチドの持続徐放性リポソームゲル組成物の場合では、血糖降下作用の有効成分が組成物の重量に対して０.０１〜２.５％であり、例えば０.０２〜２.０％、０.０５％、０.１％、０.２％、０.３％、０.４％、０.５％、０.６％、０.７％、 ０.８％、０.９％、１.０％、１.１％、１.２％、１.３％、１.４％、１.５％、１.６％、１.７％、１.８％、１.９％、２.０％、２.１％、２.２％、２.３％、２.４％、２.５％である。血糖降下作用の有効成分の治療上有効量は本領域の技術員により確定できる。

本発明の一態様によれば、本発明で使用される脂質はこれらに限定されないが、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ビスホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリンなどのリン脂質が挙げられ、ホスファチジルコリンが好ましい；例えば、セレブロシド、ガングリオシド、グルコセレブロシド（Ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ）及び他のスフィンゴ糖脂質、グリセロ糖脂質などの糖脂質；例えば、β−シトステロール、カンペステロールなどのステロール；例えば、ラウリル酸モノグリセライド、ステアリン酸モノグリセライドなどのモノグリセライド、１−パルミトイル−２−オレオイル−グリセロールなどのジグリセライドといったエステル；脂溶性ビタミン（ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ及びＫなど）等が挙げられる。それらの物質は、人体に無害であり、注射されると、ゆっくりと吸収、分解、そして排泄される。本発明の一態様によれば、本発明は、脂質小胞ゲル（ＶＬＧ）法によって調整される。本方法には、以下のステップを含む。高濃度の有効成分の水溶液（例えば、ＶＬＧ組成物の重量に対して０.１％〜３０％、０.１〜２０％）を等量の脂質とともに、高圧（例えば１００〜１０,０００ｐｓｉ、例えば５００、１,０００、５,０００、８,０００、１０,０００ｐｓｉ）、高速（例えば２,０００〜２０,０００ｒｐｍ、例えば５，０００、１０,０００、１５,０００ｒｐｍ）下で、せん断均質化し、均一なペースト脂質小胞のゲルを得て；当該脂質小胞のゲルを水性媒体で希釈して、脂質体を得る。この脂質体は、単一成分、小さい粒径、均一さを持つので、ナノ範囲に制御されることができる（Ｍ. Ｂｒａｎｄｌ, Ｕ. Ｍａｓｓｉｎｇ, Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｇｅｌｓ, ｉｎ:Ｖ.Ｐ. Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ, Ｖ. Ｗｅｉｓｓｉｇ (Ｅｄｓ.), Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ, ２ｎｄ ｅｄ., Ｏｘｆｏｒｄ Ｐｒｅｓｓ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, ２００３, ｐｐ. ３５３−３７２）。そのため、リポソーム懸濁液の良い薬物放出効果と良好な物理的安定性が保証される。本発明の一実施形態によれば、本発明で注射用の徐放性製剤リポソームゲル組成物は、重量にして、０.５〜５０％、０.７〜３０％、１〜２０％、１〜１０％、２〜５％の脂質を含む。本発明の一実施形態によれば、脂質はホスファチジルコリンであることが好ましい。本発明の一実施形態によれば、脂質としては、例えば、大豆レシチンなどのリン脂質の混合物、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）などの精製されたリン脂質、またはそれらの組み合わせでもよい。

本発明の一態様によれば、本発明で好適に使用される熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル(プルロニック又はプルロニック・ハイブリッド・ハイドロゲルとしても知られている)の例えばＦ１２７、Ｐ１２３などでもよい。当該熱可逆性ゲルは、室温また室温以下で透明の水溶液であるが、３７℃の体温になると、薬剤を蓄えて徐放するように、半固体ゲルを形成する。本発明で好適に使用される熱可逆性ゲルは、チオール基で末端化／チオール末が覆われたポロキサマー（例えば、１−チオールポロキサマー）、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ヒアルロン酸−ドーパミン複合体（Ｌ−ＤＮ−ＨＡ）などでもよい。また本発明で使用される熱可逆性ゲルは、それらの組み合わせでもよい。本発明の一態様によれば、本発明で注射用徐放持続性リポソームゲル組成物は、組成物の重量に対して０.０５〜５０％、０.５〜３５％、１〜２０％、５〜１５％、１０〜１２％の熱可逆性ゲルを含む。本発明の一態様によれば、本発明の熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル（例えばＦ１２７）とゼラチンとの組み合わせである。本発明の一態様によれば、ポロキサマーハイドロゲルとゼラチンと含有量は、組成物に対する重量割合が、それぞれ１０〜３０％と０.０５〜２％であり、１５〜２５％と０.０８〜１％であることが好ましく、１８〜２０％と０.１〜０.５％であることがより好ましく、２０％と０.１％であることがさらに好ましい。本発明の一態様によれば、組成物に対するポロキサマーハイドロゲルとゼラチンの含有量の重量割合は、それぞれ２０％と０.１％である。理論により縛られるものではないが、１−チオール−といったチオール末端は、相転移温度を調節するために使用される。本発明に用いられる熱可逆性ゲルは無害物質であり、体内注射後ゆっくりと吸収、分解され、そして排泄される。

本発明の一態様によれば、本発明で使用される水系分散媒は、注射用純水、アミノ酸類緩衝液、ペプチド類緩衝液、ｐＨ緩衝液から選ばれる。本発明に使用される水性分散煤は、無害な物質であり、注射された後、ゆっくりと吸収、分解、最後に排泄される。本発明の一態様によれば、本発明において、注射用徐放持続性リポソームゲル組成物は、組成物の重量に対して約４０〜９０％、例えば、５０〜８０％、６０〜７０％、６５％の水系分散媒を含む。

本発明の一態様によれば、本発明は、治療的に有効量が含まれた血糖降下作用の有効成分、組成物の重量に対して１％〜１０％の脂質（ホスファチジルコリンが好ましい）、１８〜２０％のポロキサマーハイドロゲルと０.１〜０.５％のゼラチンとを組み合わせた熱可逆性ゲル、水系分散媒を含む注射用持続徐放性リポソームゲル組成物が提供された。

本発明の一実施形態によれば、本発明は、血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物の製造方法が提供される。その製造方法は以下に示すステップである：前述した血糖降下作用の有効成分が担持又は分散されている脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を調製するように、治療的に有効な量の血糖降下作用のある有効成分、脂質、及び水系分散媒を混合するステップと、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを形成するように、前述した脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を、熱可逆性ゲル（ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体、及びそれらの組み合わせから選ばれた）の水溶液に加えて、乳化させるステップである。

本発明の一態様によれば、本発明は、血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物の製造方法を提供する。その製造方法は以下に示すステップである：組成物の重量に対して０.０１〜２.５％の血糖降下作用のある有効成分、０.０５〜５０％の脂質、水系分散媒を混合するステップと、２０〜４０℃で、粒子径が５０ｎｍ〜２０μＭの範囲になるように、脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を調製するステップと、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを形成するように、０〜２５℃で、前述した脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物又は均一混合物を、組成物の重量に対して０.０５〜５０％含まれる熱可逆性ゲルの水溶液に加えて乳化させるステップである。本発明の一態様によれば、粒子径を５０ｎｍ〜２０μＭの範囲にするように、脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を、脂質小胞のゲル（ＶＬＧ）の方法により製造する。

上述した熱可逆性ゲルは、室温以下では透明の水溶性の液体であるが、体温である３７℃になると、薬剤をゆっくりと放出するように、半固体ゲルを形成する。本発明の一態様によれば、熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体、又はそれらの組み合わせから選ばれる。さらに、本発明の一態様によれば、熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル及び／又はチオール基で末端化されたポロキサマーと、ゼラチン、ヒアルロン酸及び低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との組み合わせであることが好ましい。

本発明の一態様によれば、本発明は、血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物の製造方法が提供される。その製造方法は以下に示すステップである：前述した血糖降下作用の有効成分が担持又は分散されている脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を調製するように、治療的に有効量の血糖降下作用のある有効成分、組成物の重量に対して０.０５〜５０％を含まれる脂質、水系分散媒を混合するステップと、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを形成するように、前述した脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を、組成物の重量に対して０.０５〜５０％を含まれる熱可逆性ゲルの水溶液に加えてそれを乳化させるステップと、血糖降下作用のある有効成分のインスリンやエクセナチドを含むリポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルの粉剤を形成するように、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを固化させるステップである。

本発明の一態様によれば、上述した熱可逆性ゲルは、ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体、又はそれらの組み合わせから選ばれる。本発明の別の態様によれば、この固化ステップは、相分離法、噴霧乾燥法または凍結乾燥法により行われる。本発明での放性リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルは、緻密な表面を持つので、徐放性の特徴を有する。当該カプセルは粒子径が５０ｎｍ〜２０μＭの範囲にある。理論により限定されるものではないが、血糖降下作用の有効成分であるインスリンやエクセナチドは、リポソームから放出された後、ゲルから放出されるという二つの障壁によって制御される。

本発明で血糖降下作用のある有効成分、例えばインスリンやエクセナチドを含む組成物は、皮下注射で投与されることができるが、非経口投与であればこれに限定されない。本発明に係る組成物は、非経口経路によって投与されることが好ましく、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内の投与経路などが挙げられる。本発明の投与経路において、血糖降下作用のある有効成分、例えばインスリンやエクセナチドを含む組成物は、分散注射液によって投与するのが好ましい。

本発明に係る組成物又は血糖降下作用のある有効成分の治療的に有効量は、被験者の年齢、血糖値及び糖尿病の重症度に応じて調整することができる。本発明の一実施形態によれば、本発明に係る組成物に含まれる血糖降下作用のある有効成分について、投与量は０.０１〜１００μｇ／ｋｇ／日でよく、特に０.０５〜１０μｇ／ｋｇ／日であれば好ましい。この投与量は、単回投与でも複数回投与でもよい。

理論により限定されるものではないが、本発明の好ましい態様によれば、本発明に係る注射用持続徐放性リポソームゲル組成物においては、ポロキサマーハイドロゲル、チオール基で末端化されたポロキサマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体から選ばれた熱可逆性ゲルであり、協同効果より、有効成分がリポソームゲル組成物から放出するのを減らすとともに、室温で良い流動性を持つ。以下の実施例で実証される。

以下、実施例により本発明を詳しく説明する。これらの実施例は単に説明するためであり、本発明の範囲を限定するものではない。なお、特に指定のない限り、試薬や機器は全部市販されている。含有量は重量基準で表される。

実施例１ インスリン又はエクセナチドの脂質小胞のゲル（ＶＬＧ）の調製
表１に示すように、１６ｍｇ（０．１重量％）のエクセナチド（遼寧科泰バイオ医薬品会社）またはインスリン（シグマアルドリッチ、セントルイス、ミズーリ州）をＨＣｌ水溶液（０.０１Ｍ、６９.５％）に溶解した。それにリン脂質（例えば混合リン脂質、４．３７ｇ、０．１重量％）を加え、４０℃の水浴で１時間水和した。次に、せん断乳化機により、水和液を１２,０００ ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、乳化させた乳白色の半固体状のＶＬＧを得た。それを−２０℃の冷蔵庫に保存した。或いは、図１の電子顕微鏡写真のように、ＶＬＧを凍結乾燥して、脱水して、乾燥された脂質小胞を得た。乾燥された脂質小胞は、水性注射用媒体を加えたあと、リポソーム小胞の懸濁液となった。
表１：ＶＬＧの組成及びイン・ビトロ放出速度（なお、イン・ビトロ放出は、イン・ビボ放出効果を模擬し、剤形が異なる製剤の放出速度を決定できる。）

実施例２ エクセナチド／インスリンのリポソーム懸濁液の調製
実施例１で得られたエクセナチド／インスリンのＶＬＧ(１.４１２０ｇ)を８.５５８ｇの水性媒体（ＰＢＳ、ｐＨ＝７．４／０．０１Ｍ ＨＣｌ、ｐＨ＝４．０１）に希釈し、約１０ｍｌのエクセナチド／インスリンを有するリポソーム懸濁液を調製した。

実施例３ エクセナチド／インスリンのリポソームの封入率及び粒子径の測定
高速遠心分離法により、４℃で、１８,０００ ｒｐｍ、３０ｍｉｎ遠心し、リポソームを沈殿させた。１０倍量のエタノールでリポソームの沈殿やリポソーム懸濁液を解乳化及び希釈して、透明な液体を得た。沈殿に含まれるエクセナチド／インスリンの含有量をＬＣ−ＭＳにより、測定して、封入率を８９.３９±２.２４％と算出した。粒子径をＢｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒ ＤｅｌｓａＴＭ Ｎａｎｏ ＨＣ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒの測定し、５０５±９.４ ｎｍであった。

実施例４ ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７のゲル溶液、及びＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ１２７とゼラチン、ヒアルロン酸、又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体とのゲル液の調製

表２に従って、Ｆ１２７、又はＦ１２７と、ゼラチン、ヒアルロン酸又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の混合物を秤取して、０．０１Ｍ ＨＣｌ（ｐＨ＝４．０１）／ＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）に完全に溶解するように、４℃で２４時間ゆっくりと攪拌して、ポロキサマー(Ｐｌｕｒｏｎｉｃ)Ｆ１２７及びそれとゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との混合物のゲル液（８.５５８ｇ）を得た。表２には、Ｆ１２７とゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との混合比を示す。

実施例５ リポソームゲルの調製
実施例１で得られたＶＬＧ１.４１２０ｇを、表２に従って実施例４記載の方法で得られたポロキサマー(Ｐｌｕｒｏｎｉｃ)Ｆ１２７及びそれとゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との混合物のゲル液８.５５８ｇに入れて、続いて実施例２の手順に従って水性溶媒に加えて、有効成分がインスリン／エクセナチドであるリポソームゲル懸濁液を、１０ｍｌ調製した。有効成分であるインスリン／エクセナチドの含有量は、実施例１〜２及び４〜５の手順に従って、算出される。

それぞれ、等量のＦ１２７又はＦ１２７混合物、ゼラチン、ヒアルロン酸、低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との混合物から、等量のインスリン／エクセナチドを溶解した水性媒体（０．０１Ｍ ＨＣｌ（ｐＨ＝４．０１）／ＰＢＳ（ｐＨ＝７．４））のゲル液を１０ｍｌ調製して、完全に溶解するように、４℃で２４時間ゆっくり攪拌し、対照として、インスリン／エクセナチドのゲルを形成した。

得られたインスリン／エクセナチドのゲル及びリポソームゲル組成物について、それぞれ、１時間、４８時間にイン・ビトロ放出速度を測定した。表２には、表１に示すＶｍｉ−２の組成で算出されたインスリンの放出速度のパーセント値を示す。他の組成でも同様の結果を得ることができる（表中に省略する）。得られたリポソームゲル懸濁液は、室温で良好な流動性を持つ。

表２：Ｆ１２７／Ｆ１２７とゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎ、Ｇ）、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ、Ｈｙ）または低置換度ドーパミン（Ｄｏｐａｍｉｎｅ）−ヒアルロン酸複合体（ＬＤＨ）との混合物の量（グラム）及び有効成分の放出速度（この量（グラム）は、１０ｍｌ最終のゲルとリポソームゲル懸濁液とに含まれている熱可逆性ゲルの量（グラム）である。）

表３には、インスリン（０.２重量％）、ＤＳＰＥ（２重量％）、Ｆ１２７（２０重量％）、ゼラチン（０.１重量％）、及びＰＢＳ溶液（ｐＨ＝７．４、７７.７％）を含むリポソームのゲル液において、イン・ビボ及びイン・ビトロでの経時変化を示す。当該リポソームのゲル液は、室温で良好な流動性を示すが、３０℃以上では完全にゲル状固体となる。Ｆ１２７を１５重量％、２０重量％又は２５重量％と、ゼラチンを０.０５重量％又は１重量％、あるいはヒアルロン酸又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体を０.０５重量％、０.１重量％又は１重量％と組み合わせて含むリポソームゲルも、同様のイン・ビトロ放出、イン・ビボの血中濃度、及び流動性の結果を示す（表中、データは省略）。
表３：インスリンを含むリポソームのゲル液のイン・ビトロ、イン・ビボでの経時変化

エクセナチドを有効成分として有するリポソームゲルは、同様な結果を得た。以下に実験結果の一部を示す。
エクセナチドＤｅ１の組成：エクセナチド５０ｍｇ（０.２％）、ＰＢＳ溶液１６ｇ（９９.８％）の場合に、６時間の放出率が９３％である。
エクセナチドＤｅ２の組成：エクセナチド５０ｍｇ（０.３％）、ＳＰＣ １ｇ（６.２％）、ＰＢＳ溶液１５ｇ（９３.５％）の場合に、４８時間の放出率が５．３％である。

エクセナチドＤｅ３処方：エクセナチド５０ｍｇ（０.３％）、ＳＰＣ １ｇ（６.２％）、Ｆ１２７ゲル３.２ｇ（１９.９％）、ＰＢＳ溶液１１．８ｇ（７３.５％）の場合に、４８時間の放出率が２．５％である。

実施例６ イン・ビボ放出の分析
２ｍＬのエクセナチドのＰＢＳ溶液（ｐＨ＝７．４）／インスリンの水溶液（０．０１Ｍ ＨＣｌ、ｐＨ＝４．０１）（有効成分であるエクセナチド／インスリンの含有量は組成で算出される。）、実施例２で得られたエクセナチド／インスリンのリポソーム懸濁液、実施例５で得られたエクセナチド／インスリンのゲル／実施例５で得られたリポソームゲルを、分画分子量が１０００ｋＤである透析用バッグに入れた。透析用バッグを密封してから、３０ｍＬの０．０１Ｍ ＰＢＳ溶液（ｐＨ＝７．４）／０．０１Ｍ ＨＣｌ溶液（ｐＨ＝４．０１）に入れて、３６℃の水浴シェーカーにて５０ｒｐｍ／ｍｉｎで振とうした。一定時間間隔で、薬物放出した媒体から１ｍＬのサンプルを採取し、１ｍＬの同じ溶液を加えた。採取されたサンプル媒体をＬＣ−ＭＳにより、測定した。得られた結果を表２及び図２に示す（ＳＯＬがインスリンのゲル液に、２０％のＰＦ１２７がＤｉ１４ インスリンのゲル液に、ＬＩＰがＤｉ０インスリンのゲル液に、２０％のＰＦ１２７−ＬＩＰがＤｉ１４ インスリンのゲル液に、対応する）。薬物放出したサンプル媒体に含まれる薬物の濃度が低いほど、該製剤から放出した薬物の累積がより少ないことを証明し、薬物の放出がより遅くなることが分かる。

実施例７ ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
イン・ビボでのデータは、全部ＵＰＬＣ（Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ; Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）及びＭＳ／ＭＳ（ＭｉｃｒｏＴＯＦ−Ｑ; Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）により得られた。カラムはＣ１８であり、カラム温度は４０℃である。移動相は０．１％のギ酸／脱イオン水であり、流量は０．２ｍＬ／ｍｉｎである。

実施例８ インスリンの薬物動態の分析
ラット（香港中文大学の実験動物センターから購入、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）種、雄、体重は１８０ ± ２０ｇである）を１５匹無作為に５匹あたりの３群に分け、それらを１４時間絶食させて、水を自由に与えた。ラットの体重測定後、１ ＩＵ／ｋｇ／日×１０日の投与量で、それぞれウシインスリン群、リポソーム群、２０％ Ｆ１２７＋リポソーム群を皮下注射により与えた。インスリン溶液群では、１ ＩＵ／ｋｇ／日×１ 日の投与量で皮下注射した。投与する前に、０時間のデータとして眼窩静脈から血液を採取した。一定時間間隔で、眼窩静脈から血液を採取し、ヘパリンナトリウムで洗浄された遠心分離管に入れ、４,５００ｒｐｍ、４ｍｉｎで遠心分離を行い、血漿を分離した。ラットの血漿に含まれるウシインスリンの含有量は、ウシインスリンのＥＬＩＳＡキットにより測定した。時間に対する血漿濃度の変化は図３に示す。ここで、インスリン溶液群（ＳＯＬ群）が表２のＤｉ０ インスリンのゲル液に、リポソーム群（ＬＩＰ群）が表２のＤｉ０ インスリンのリポソームゲルに、Ｆ１２７＋リポソーム群が表２のＤｉ１４ インスリンのリポソームゲルに対応する。

実施例９ エクセナチドの薬物動態の分析
ラット（香港中文大学の実験動物センターから購入、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）種、雄、体重は１８０ ± ２０ｇである）を１５匹無作為に５匹あたりの３群に分け、それらを１４時間絶食させて、水を自由に与えた。ラットの体重を測定後、３ｍｇ／ｍｌの投与量で、エクセナチドの溶液群、リポソーム群、２０％ Ｆ１２７＋リポソーム群を皮下注射により与えた。投与する前に、０時間のデータとして眼窩静脈から血液を採取した。一定時間間隔で、眼窩静脈から血液を採取し、ヘパリンナトリウムで洗浄された遠心分離管に入れ、４,５００ｒｐｍ、４ｍｉｎで遠心分離を行い、血漿を分離した。ラットの血漿に含まれるエクセナチドの含有量は、ウシインスリンのＥＬＩＳＡキットにより測定した。時間に対する血漿濃度の変化は図４に示す。ここで、エクセナチド溶液群が実施例５でのエクセナチド Ｄｅ１組成に、リポソーム群が実施例５でのエクセナチド Ｄｅ２組成に、エクセナチドのリポソームゲルが実施例５でのエクセナチド Ｄｅ３組成に対応する。

以上の実施例で説明したように、本発明は、新たな薬物送達システムを提供することより、インスリンや、エクセナチドを安定的に貯蔵し、イン・ビボでの放出を維持できるとともに、単回皮下注射より、血糖降下作用の有効成分であるインスリンや、エクセナチドなどの体内に血中濃度が２〜７日又はそれ以上までに効果的に持続させる。また、毎日数回皮下注射のインスリンや血糖降下薬と比べ、痛み、不便さ、刺激性などの副作用を低減できる。さらに、インスリンや、エクセナチドを感温性ポリマーゲルに封入したあと、皮下注射することにより、毎日複数回投与による患者の依存性を克服することができる。

Claims (17)

1. 治療的に有効な量が含まれた血糖降下作用の有効成分と、
   脂質と、
   ポロキサマーハイドロゲルと、ゼラチン、ヒアルロン酸又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との組み合わせで構成された熱可逆性ゲルと、
   水系分散媒と、
   を含み、
   前記ポロキサマーハイドロゲルとゼラチン、ヒアルロン酸、又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体の含有量が、組成物の重量に対してそれぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％であり、
   前記脂質が５０ｎｍ〜２０μｍの粒子径を有する脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を形成し、血糖降下作用の有効成分を担持又は分散している前記脂質が、前記熱可逆性ゲルに担持されていることを特徴とする注射用持続徐放性リポソームゲル組成物。
2. 脂質の含有量が、組成物の重量に対して０.０５〜５０％である、請求項１に記載のリポソームゲル組成物。
3. 血糖降下作用の有効成分が、インスリン、エクセナチド、リラグルチド、プラムリンチド及びそれらの組み合わせから選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリポソームゲル組成物。
4. ポロキサマーハイドロゲルがプルロニックＦ１２７又はＰ１２３である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
5. 脂質がリン脂質、糖脂質、ステロール、グリセリド及び脂溶性ビタミンから選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
6. 水系分散媒が注射用純水、アミノ酸類緩衝液、ペプチド類緩衝液、ｐＨ緩衝液から選ばれる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
7. 血糖降下作用の有効成分の含有量が組成物の重量に対して０.０１〜２.５％である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
8. インスリンが、インスリンアナログ、ヒトインスリン、動物インスリンから選ばれる１種又はそれ以上である、請求項１〜７のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
9. エクセナチドが、エクセナチド−３、エクセナチド−４、そのＣ末端アミド化されたエクセナチドアナログ、非置換のエクセナチドアナログ、及びそれらの薬学的に許容される塩から選ばれる１種又はそれ以上である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
   
10. 組成物が、血糖降下作用のある有効成分の血中濃度が２〜７日又はこれ以上の期間効果的に持続する、請求項１〜９のいずれか１項に記載のリポソームゲル組成物。
11. 血糖降下作用のある有効成分を担持又は分散されている脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を調製するように、治療的に有効な量の血糖降下作用のある有効成分、脂質、及び水系分散媒を混合するステップと、
    リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを形成するように、前述した脂質小胞のゲル、リポソーム懸濁液、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション又は均一混合物を、ポロキサマーハイドロゲルと、ゼラチン、ヒアルロン酸又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との組み合わせで構成された熱可逆性ゲルの水溶液に加えて、それを乳化させるステップと、
    を含み、ポロキサマーハイドロゲルとゼラチン、ヒアルロン酸、又は低置換度ドーパミン−ヒアルロン酸複合体との含有量が、組成物の重量に対してそれぞれ、１０〜３０％及び０.０５〜２％である、血糖降下作用の有効成分を含む持続徐放性リポソームゲル組成物の製造方法。
12. 脂質の含有量が、組成物の重量に対して０.０５〜５０％である、請求項１１に記載の製造方法。
13. ポロキサマー・ハイドロゲルが、プルロニックＦ１２７又はＰ１２３であることを特徴とする請求項１１又は１２に記載の製造方法。
14. 脂質が、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセリド及び脂溶性ビタミンから選ばれる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の製造方法。
15. 血糖降下作用の有効成分の含有量が、組成物の重量に対して０.０１〜２.５％である、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の製造方法。
16. さらに、リポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルの粉剤を形成するように、形成されたリポソームのゲルマイクロカプセル又はナノカプセルを硬化させるステップを含む、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の製造方法。
17. 硬化が、相分離法、噴霧乾燥法又は凍結乾燥法により行われる、請求項１６に記載の製造方法。