JP6367233B2 - 抗ｐｄｇｆｒ−ベータ抗体及びそれらの使用 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータに特異的な抗体、及びその抗原結合フラグメント、並びにそれらの使用に関する。

背景
血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）は、４つの異なるアイソフォームサブユニット：Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤから構成される５つの異なる二量体構造として存在する強力なマイトジェンである。ＰＤＧＦの５つの異なる二量体形態は、ＡＡ、ＢＢ、ＡＢ、ＣＣ及びＤＤであり、これらは対応する個々のＰＤＧＦモノマーのジスルフィド連結により形成される。ＰＤＧＦリガンドは、ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）とのそれらの相互作用により生物学的効果を生じる。ＰＤＧＦＲは、アルファ（α）受容体鎖（ＰＤＧＦＲ−アルファ）及び／又はベータ（β）受容体鎖（ＰＤＧＦＲ−ベータ）のヘテロ二量体又はホモ二量体会合から構成される１回（ｓｉｎｇｌｅ−ｐａｓｓ）膜貫通型チロシンキナーゼ受容体である。従って、活性ＰＤＧＦＲは、αα、ββ又はαβ受容体鎖対合からなり得る。ＰＤＧＦＲは、５つの細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）ループ、膜貫通ドメイン、及びスプリット（ｓｐｌｉｔ）細胞内チロシンキナーゼ（ＴＫ）ドメインを含む共通のドメイン構造を共有する。二量体ＰＤＧＦリガンドとＰＤＧＦＲとの間の相互作用は、受容体鎖二量体化、受容体自己リン酸化及び細胞内シグナル伝達をもたらす。ββ受容体はＰＤＧＦ−ＢＢ及び−ＤＤにより活性化されるが、αβ受容体はＰＤＧＦ−ＢＢ、−ＣＣ、−ＤＤ及び−ＡＢにより活性化され、そしてαα受容体はＰＤＧＦ−ＡＡ、−ＢＢ、−ＣＣ及び−ＡＢにより活性化されるということがインビトロで実証されてきた（非特許文献１を参照のこと）。

ＰＤＧＦシグナル伝達は、病的血管新生、血管及び線維性疾患、腫瘍増殖及び眼疾患に関連する疾患を含む様々なヒト疾患において関連があるとされてきた。従って、ＰＤＧＦシグナル伝達の阻害剤は、様々な治療設定における使用について示唆されてきた。例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータの阻害剤は、様々な疾患及び障害を処置する際の使用について提案されてきた（非特許文献１）。ＰＤＧＦＲ−ベータ阻害剤としては、非特異的小分子チロシンキナーゼ阻害剤、例えばメシル酸イマチニブ、リンゴ酸スニチニブ及びＣＰ−６７３４５１に加えて、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体が挙げられる（例えば、特許文献１；特許文献２；特許文献３；及び特許文献４）。抗リガンドアプタマー（例えば、抗−ＰＤＧＦ−Ｂ）もまた、治療適用について提案されてきた。それにもかかわらず、ＰＤＧＦシグナル伝達の新しい高度に特異的でかつ有効な阻害剤についての当該分野における必要性が存在する。

米国特許第７，０６０，２７１号 米国特許第５，８８２，６４４号 米国特許第７，７４０，８５０号 米国特許出願公開第２０１１／０１７７０７４号

Ａｎｄｒａｅ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ ２２（１０）：１２７６−１３１２

発明の要旨
本発明は、ヒト血小板由来増殖因子受容体ベータ（「ＰＤＧＦＲ−ベータ」）に結合する抗体を提供する。本発明の抗体は、とりわけ、ＰＤＧＦＲ−ベータ媒介シグナル伝達を阻害するため、並びにＰＤＧＦＲ−ベータ活性及び／又はシグナル伝達により引き起こされるか若しくはこれらと関連する疾患及び障害を処置するために有用である。本発明の抗体はまた、それらの表面上に高レベルのＰＤＧＦＲ−ベータを発現する細胞において細胞死を誘導するのために有用である。

本発明の抗体は全長（例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体）であってもよく、又は抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂又はｓｃＦｖフラグメント）のみを含んでいてもよく、そして機能性に影響を及ぼすように、例えば残留エフェクター機能を排除するように、改変され得る（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．、２０００、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。

本発明は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、及び３２２からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、及び３３０からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、及び３２２／３３０からなる群から選択されるＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列対を含む、抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、及び３２８からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン；並びに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、及び３３６からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。

特定の実施態様において、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントは、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、及び３２８／３３６からなる群より選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。

本発明はまた、配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、及び３２４からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、及び３２６からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、及び３３２からなる群より選択されるアミノ酸配列、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン；並びに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、及び３３４からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメインをさらに含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。

本発明の特定の非限定的な例となる抗体及び抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４−６−８−１２−１４−１６（例えば、Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ）；２０−２２−２４−２８−３０−３２（例えば、Ｈ１Ｍ３３０５Ｎ）；３６−３８−４０−４４−４６−４８（例えば、Ｈ１Ｍ３３１０Ｎ）；５２−５４−５６−６０−６２−６４（例えば、Ｈ１Ｍ３３６１Ｎ）；６８−７０−７２−７６−７８−８０（例えば、Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ）；８４−８６−８８−９２−９４−９６（例えば、Ｈ２Ｍ３３６５Ｎ）；１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２（例えば、Ｈ２Ｍ３３６８Ｎ）；１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８（例えば、Ｈ２Ｍ３３７３Ｎ）；１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４（例えば、Ｈ２Ｍ３３７４Ｎ）；１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０（例えば、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ）；１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６（例えば、Ｈ４Ｈ３０９５Ｓ）；１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２ （ｅ．ｇ．、Ｈ４Ｈ３０９６Ｓ）；１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８（例えば、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ）；２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４（例えば、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ）；２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０（例えば、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ）；２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６（例えば、Ｈ４Ｈ３１０２Ｓ）；２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２（例えば、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ）；２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８（例えば、Ｈ４Ｈ３１０４Ｓ）；２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４（例えば、Ｈ４Ｈ３１０５Ｓ）；３０８−３１０−３１２−３１６−３１８−３２０（例えば、Ｈ４Ｈ３１０６Ｓ）；及び３２４−３２６−３２８−３３２−３３４−３３６（例えば、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ）からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。

関連する実施態様において、本発明は、ＰＤＧＦＲ−ベータに特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを含み、ここで抗体又はフラグメントは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、及び３２２／３３０からなる群より選択される重鎖及び軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列内に含有される重鎖及び軽鎖ＣＤＲドメインを含む。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法及び技術は当該分野で周知であり、そして本明細書に開示される特定のＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用され得る。ＣＤＲの境界を同定するために使用され得る例となる慣習としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、及びＡｂＭ定義が挙げられる。おおまかに言えば、Ｋａｂａｔ定義は配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造的ループ領域の位置にもとづき、そしてＡｂＭ定義はＫａｂａｔアプローチとＣｈｏｔｈｉａアプローチとの折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」 Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８ （１９９７）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８−９２７２ （１９８９）を参照のこと。公開データベースもまた抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。

別の局面において、本発明は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子を提供する。本発明の核酸を保有する組み換え発現ベクター、及び上記ベクターが導入された宿主細胞もまた本発明に包含され、抗体の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養し、そして産生された抗体を回収することにより抗体を製造する方法もまた同様に包含される。

一実施態様において、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、及び３２１からなる群より選択される核酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＶＲを含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、及び３２９からなる群より選択される核酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＶＲを含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、及び３２７からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ３ドメイン；並びに配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、及び３３５からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。

本発明はまた、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、及び３２３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、及び３２５からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、及び３３１からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、及び３３３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。

特定の実施態様によれば、抗体又はそのフラグメントは、配列番号１及び９（例えば、Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ）、１７及び２５（例えば、Ｈ１Ｍ３３０５Ｎ）、３３及び４１（例えば、Ｈ１Ｍ３３１０Ｎ）、４９及び５７（例えば、Ｈ１Ｍ３３６１Ｎ）、６５及び７３（例えば、Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ）、８１及び８９（例えば、Ｈ２Ｍ３３６５Ｎ）、９７及び１０５（例えば、Ｈ２Ｍ３３６８Ｎ）、１１３及び１２１（例えば、Ｈ２Ｍ３３７３Ｎ）、１２９及び１３７（例えば、Ｈ２Ｍ３３７４Ｎ）、１４５及び１５３（例えば、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ）、１６１及び１６９（例えば、Ｈ４Ｈ３０９５Ｓ）、１７７及び１８５（例えば、Ｈ４Ｈ３０９６Ｓ）、１９３及び２０１（例えば、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ）、２０９及び２１７（例えば、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ）、２２５及び２３３（例えば、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ）、２４１及び２４９（例えば、Ｈ４Ｈ３１０２Ｓ）、２５７及び２６５（例えば、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ）、２７３及び２８１（例えば、Ｈ４Ｈ３１０４Ｓ）、２８９及び２９７（例えば、Ｈ４Ｈ３１０５Ｓ）、３０５及び３１３（例えば、Ｈ４Ｈ３１０６Ｓ）、又は３２１及び３２９（例えば、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ）の核酸配列によりコードされる重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列を含む。

本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。いくつかの適用において、望ましくないグリコシル化部位を除去する改変、又は例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増大させるために、オリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠失した抗体（Ｓｈｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００２） ＪＢＣ ２７７：２６７３３を参照のこと）が有用であり得る。他の適用において、ガラクトシル化の改変が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために行われ得る。

別の局面において、本発明は、ＰＤＧＦＲ−ベータに特異的に結合する組み換えヒト抗体又はそのフラグメント及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。関連する局面において、本発明は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と第二の治療剤との組わせである組成物を特徴とする。一実施態様において、第二の治療剤は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と有利に組み合わせられるいずれかの薬剤である。抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と有利に組み合わせられ得る例となる薬剤としては、限定することなく、ＰＤＧＦＲ−ベータ活性を阻害する他の薬剤（他の抗体又はその抗原結合フラグメント、ペプチド阻害剤、小分子アンタゴニストなどを含む）及び／又はＰＤＧＦＲ−ベータに直接結合しないが、それにもかかわらずＰＤＧＦＲ−ベータ媒介シグナル伝達と相互作用するか、遮断するか、若しくは減弱させる薬剤が挙げられる。本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含むさらなる組み合わせ治療及び同時処方（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）は本明細書の他所に開示される。

さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又は抗体の抗原結合部分を使用してＰＤＧＦＲ−ベータ活性を阻害するための治療方法を提供し、ここで治療方法は、治療有効量の、本発明の抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む。処置される障害は、ＰＤＧＦＲ−ベータ活性又はシグナル伝達の除去、阻害又は減少により改善されるか、寛解されるか、抑制されるか又は予防されるいずれかの疾患又は状態である。本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又は抗体フラグメントは、ＰＤＧＦＲ−ベータとＰＤＧＦＲ−ベータ結合パートナー（例えば、ＰＤＧＦリガンド）との間の相互作用を遮断するか、又はそうでなければＰＤＧＦＲ−ベータのシグナル伝達活性を阻害するように機能し得る。

本発明はまた、患者においてＰＤＧＦＲ−ベータ活性と関連するかそれにより引き起こされる疾患又は障害の処置のための医薬の製造における、本発明の抗ＰＤＧＦＲベータ抗体又は抗体の抗原結合部分の使用を含む。

他の実施態様は、以下の詳細な説明の検討により明らかとなるだろう。

図１は、ＰＤＧＦＲ−ベータがバイオセンサー表面上に捕捉され、そして様々な本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又は対照抗体で処理した後にＰＤＧＦリガンド（ＢＢ、ＤＤ又はＡＢ）が表面に適用された、ＰＤＧＦリガンド遮断アッセイの結果を示す柱状グラフである。結果をＲＵとして示す。 図２は、第一の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（ｍＡｂ＃１）をＰＤＧＦＲ−ベータ被覆センサーチップに適用し、続いて第二の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（ｍＡｂ＃２）で処理した抗体交差競合アッセイの結果を示すマトリックスである。試験された各抗体の組み合わせについての結合応答（数値 −０．０１〜０．３６）を示す。黒いフォントの薄い灰色の枠は、自己競合についての結合応答を表す。抗原結合の順序にかかわらず、両方の方向で競合する抗体は、白色フォントの黒い枠で強調した。個別の結合領域を示唆する競合の無いものは、黒色フォントの白色枠として表す。

詳細な説明
本発明を記載する前に、当然のことながら、記載される特定の方法及び実験条件は変化し得るので、本発明はこのような方法及び条件に限定されない。また当然のことながら、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される用語は、特定の実施態様を記載する目的のためのみであり、限定することを意図されない。

別に定義されていなければ、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。特定の列挙される数値に関連して使用される場合、本明細書で使用される用語「約」は、その数値が列挙される値よりも１％以下だけ変動し得るということを意味する。例えば、本明細書で使用される表現「約１００」は、９９及び１０１並びにそれらの間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。

本明細書に記載されるものに類似するか等価ないずれの方法及び材料も本発明の実施又は試験において使用され得るが、好ましい方法及び材料はここで記載される。

定義
本明細書で使用される表現「血小板由来増殖因子受容体ベータ」、「ＰＤＧＦＲβ」、「ＰＤＧＦＲ−ベータ」、「ＰＤＧＦＲｂ」などは、配列番号３４１（ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０９６１９も参照のこと）のアミノ酸配列を有するヒトＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質を指す。本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド及びタンパク質フラグメントへの全ての言及は、非ヒト種由来であると（例えば、「マウスＰＤＧＦＲ−ベータ」、「サルＰＤＧＦＲ−ベータ」など）明確に特定されていなければ、それぞれのタンパク質、ポリペプチド又はタンパク質フラグメントのヒトバージョンを指すことを意図される。

本明細書で使用される「ＰＤＧＦＲ−ベータに結合する抗体」又は「抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体」は、ＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質の可溶性フラグメント（例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外ドメインの全て又は一部）及び／又は細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータに結合する抗体、及びその抗原結合フラグメントを含む。表現「細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータ」は、ＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質の少なくとも一部（例えば、配列番号３４１のアミノ酸３３〜５３２）が細胞膜の細胞外側に露出されて、抗体の抗原結合部分にアクセス可能であるように、インビトロ又はインビボで細胞の表面上に発現されるＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質又はその部分を意味する。「細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータ」は、ββ受容体ホモ二量体の文脈でのＰＤＧＦＲ−ベータ分子、さらにはαβヘテロ二量体の文脈でのＰＤＧＦＲ−ベータ分子を含む。可溶性ＰＤＧＦＲ−ベータ分子は、例えば、本明細書実施例３に記載される単量体及び二量体ＰＤＧＦＲ−ベータ構築物（例えば、「ＰＤＧＦＲｂ．ｍｍｈ」、配列番号３３７［単量体］、「ＰＤＧＦＲｂ．ｍＦｃ」、配列番号３３８［二量体］及び「ＰＤＧＦＲｂ．ｈＦｃ」、配列番号３３９［二量体］）、又はそれらと実質的に類似した構築物を含む。

本明細書で使用される用語「抗体」は、特定の抗原（例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータ）に特異的に結合するか相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むいずれかの抗原結合分子又は分子複合体を意味する。用語「抗体」は、ジスルフィド結合で相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、さらにはそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶ_Hと略す）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメイン、Ｃ_H１、Ｃ_H２及びＣ_H３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶ_Lと略す）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（Ｃ_L１）を含む。Ｖ_H及びＶ_L領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域を組み入れられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。各Ｖ_H及びＶ_Lは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施態様において、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列に同一であってもよく、又は天然で若しくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ又はそれ以上のＣＤＲの対照分析（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）に基づいて定義され得る。

本明細書で使用される用語「抗体」はまた、完全抗体分子の抗原結合フラグメントも含む。本明細書で使用される用語抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、抗原に特異的に結合して複合体を形成する天然に存在するか、酵素により入手可能か、合成的又は遺伝的に操作されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、タンパク質分解消化、又は抗体の可変ドメイン及び場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を含む組換え遺伝子操作技術のようないずれかの適切な標準的技術を使用して完全抗体分子から誘導され得る。このようなＤＮＡは公知であり、かつ／又は例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、又は合成され得る。ＤＮＡは、例えば、１つもしくはそれ以上の可変及び／もしくは定常ドメインを適切な構成へと配置するため、又はコドンを導入するか、システイン残基を生成するか、アミノ酸を改変、付加もしくは欠失させるなどのために、化学的に、又は分子生物学技術を使用して配列決定及び操作され得る。

抗原結合フラグメントの非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣したアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、又は拘束性（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の操作された分子、例えばドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、三特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、四特異性抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインもまた本明細書で使用される表現「抗原結合フラグメント」内に包含される。

抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、いずれのサイズ又はアミノ酸組成のものでもよく、一般的には、１つ又はそれ以上のフレームワーク配列に隣接するかそれらとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_Lドメインに付随してＶ_Hドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、Ｖ_H及びＶ_Lドメインは、互いに対していずれかの適切な配置で位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり得、Ｖ_H−Ｖ_H、Ｖ_H−Ｖ_L又はＶ_L−Ｖ_L二量体を含有し得る。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体Ｖ_H又はＶ_Lドメインを含有し得る。

特定の実施態様において、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結された少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内に見られ得る可変ドメイン及び定常ドメインの非限定的な例となる構成としては、以下が挙げられる：（ｉ） Ｖ_H−Ｃ_H１；（ｉｉ） Ｖ_H−Ｃ_H２；（ｉｉｉ） Ｖ_H−Ｃ_H３；（ｉｖ） Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｖ） Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉ） Ｖ_H−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉｉ） Ｖ_H−Ｃ_L；（ｖｉｉｉ） Ｖ_L−Ｃ_H１；（ｉｘ） Ｖ_L−Ｃ_H２；（ｘ） Ｖ_L−Ｃ_H３；（ｘｉ） Ｖ_L−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｘｉｉ） Ｖ_L−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｘｉｉｉ） Ｖ_L−Ｃ_H２−Ｃ_H３；及び（ｘｉｖ）
Ｖ_L−Ｃ_L。上に列挙した例となる構成のいずれかを含む、可変ドメイン及び定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接連結されていても、完全又は部分的なヒンジ又はリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変及び／又は定常ドメイン間に可動性又は半可動性の連結を生じる少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）アミノ酸からなり得る。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いと、及び／又は１つもしくはそれ以上の単量体Ｖ_HもしくはＶ_Lドメインと非共有結合した（例えば、ジスルフィド結合により）、上に列挙された可変ドメイン及び定常ドメインの構成のいずれかのホモダイマー又はヘテロダイマー（又は他の多量体）を含み得る。

完全抗体分子のように、抗原結合フラグメントは単一特異性でも多選択性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）（例えば二重特異性）でもよい。抗体の多選択性抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、ここで各可変ドメインは別々の抗原に、又は同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例となる二重特異性抗体形式を含めて、いずれの多選択性抗体形式も、当該分野で利用可能な通常の技術を使用して、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの状況における使用のために適合され得る。

本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）により機能し得る。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下での本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異性細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上の結合した抗体を認識し、そしてそれにより標的細胞の溶解をもたらす細胞媒介反応を指す。ＣＤＣ及びＡＤＣＣは、当該分野で周知かつ利用可能なアッセイを使用して測定され得る。（例えば、米国特許第５，５００，３６２号及び同第５，８２１，３３７号、並びにＣｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ） ９５：６５２−６５６を参照のこと）。抗体の定常領域は、補体を固定し、そして細胞依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力において重要である。従って、抗体のアイソタイプは、抗体が細胞傷害を媒介するために望ましいかどうかに基づいて選択され得る。

本発明の特定の実施態様において、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はヒト抗体である。本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図される。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲにおいて、及び特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム若しくは部位特異的変異誘発により、又はインビボで体細胞変異により導入される変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフト化されている抗体を含むことを意図されない。

本発明の抗体は、いくつかの実施態様において、組換えヒト抗体であり得る。本明細書で使用される用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段により製造、発現、作製又は単離される全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞へトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下でさらに記載される）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下でさらに記載される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックな動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照のこと）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含むいずれかの他の手段により製造、発現、作製もしくは単離された抗体を含むことを意図される。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する。しかし、特定の実施態様において、このような組換えヒト抗体はインビトロ変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）を受け、それ故、組換え抗体のＶ_H及びＶ_L領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列Ｖ_H及びＶ_L配列から誘導されかつヒト生殖系列Ｖ_H及びＶ_L配列に関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しないかもしれない。

ヒト抗体は、ヒンジ異質性に関連する２つの形態で存在し得る。１つの形態において、免疫グロブリン分子は約１５０〜１６０ｋＤａの安定な４つの鎖の構築物を含み、ここで二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合により結合される。第二の形態において、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、そして共有結合でカップリングされた軽鎖及び重鎖から構成される約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態は、アフィニティー精製後でさえ分離することが非常に困難であった。

様々なインタクトなＩｇＧアイソタイプにおける第二の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的差異に起因するがこれに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観察されるレベルまで、第二の形態の出現を有意に減少させ得る（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１０５）。本発明は、ヒンジ、Ｃ_H２、又はＣ_H３領域に１つ又はそれ上の変異を有する抗体を包含し、これは例えば、所望の抗体形態の収量を改善するために製造において望ましいかもしれない。

本発明の抗体は、単離された抗体であり得る。本明細書で使用される「単離された抗体」は、同定され、そしてその天然環境の少なくとも１つの構成要素から分離されかつ／又は回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの構成要素から、又は抗体が天然に存在するかもしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離又は取り出された抗体は、本発明の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体はまた、組換え細胞内のインサイチュの抗体を含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製又は単離工程を受けた抗体である。特定の実施態様によれば、単離された抗体は他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まないものであり得る。

本発明は、中和及び／又は遮断抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。本明細書で使用される「中和」又は「遮断」抗体は、ＰＤＧＦＲ−ベータへのその結合が：（ｉ） ＰＤＧＦＲ−ベータ若しくはＰＤＧＦＲ−ベータフラグメントとＰＤＧＦリガンド（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＰＤＧＦ−ＡＢなど）との間の相互作用を妨げ；（ｉｉ）ββ及び／若しくはαβ受容体二量体の形成を妨げ；かつ／又は（ｉｉ）ＰＤＧＦＲ−ベータの少なくとも１つの生物学的機能の阻害を生じる抗体を指すことを意図される。ＰＤＧＦＲ−ベータ中和又は遮断抗体により引き起こされる阻害は、それが適切なアッセイを使用して検出可能である限り完全である必要はない。ＰＤＧＦＲ−ベータ阻害を検出するための例となるアッセイは、本明細書の実施例において記載される。

本明細書に開示される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、抗体が由来する対応する生殖系列配列と比較して、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域及び／又はＣＤＲ領域中に１つ又はそれ以上のアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失を含み得る。このような変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより容易に確認され得る。本発明は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれか由来の抗体及びその抗原結合フラグメントを含み、ここで１つもしくはそれ以上のフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の１つ又はそれ上のアミノ酸は、その抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基、又は別のヒト生殖系列配列の対応する残基、又は対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換へと変異される（このような配列変化は本明細書で集合的に「生殖系列変異」と呼ばれる）。当業者は、本明細書に開示される重鎖及び軽鎖可変領域配列から始めて、１つ又はそれ以上の個々の生殖系列変異又はそれらの組み合わせを含む多数の抗体及び抗原結合フラグメントを容易に製造することができる。特定の実施態様において、Ｖ_H及び／又はＶ_Lドメイン内のフレームワーク及び／又はＣＤＲ残基は全て、その抗体が由来した元の生殖系列配列において見られる残基へと逆変異される。他の実施態様において、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８つのアミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８つの残基内に見られる変異した残基のみ、又はＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に見られる変異した残基のみが元の生殖系列配列へと逆変異される。他の実施態様において、フレームワーク及び／又はＣＤＲ残基の１つ又はそれ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、その抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基へと変異される。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の２つ又はそれ以上の生殖系列変異のいずれかの組み合わせを含有し得、例えばここで特定の個々の残基は特定の生殖系列配列の対応する残基へと変異されるが、元の生殖系列配列と異なる特定の他の残基は維持されるか、又は異なる生殖系列配列の対応する残基へと変異される。一旦得られれば、１つ又はそれ以上の生殖系列変異を含む抗体及び抗原結合フラグメントは、改善された結合特異性、増加した結合親和性、改善されたか又は増強されたアンタゴニスト又はアゴニスト生物学的特性（場合によって）、減少した免疫原性などのような１つ又はそれ上の所望の特性について容易に試験され得る。この一般的なやり方で得られる抗体及び抗原結合フラグメントは、本発明内に包含される。

本発明はまた、１つ又はそれ以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して例えば、１０又はそれ以下、８又はそれ以下、６又はそれ以下、４又はそれ以下などの保存的アミノ酸置換を含むＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。

用語「エピトープ」は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が１つより多くのエピトープを有し得る。従って、異なる抗体は抗原上の異なる領域に結合し得、そして異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは立体構造的（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）又は線状のいずれでもよい。立体構造的エピトープは、線状ポリペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に近接したアミノ酸により生じる。線状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接したアミノ酸残基により生じるものである。特定の状況において、エピトープは抗原上に糖類、ホスホリル基、又はスルホニル基の部分を含み得る。

核酸又はそのフラグメントに言及する場合の用語「実質的同一性」又は「実質的に同一」は、別の核酸（又はその相補鎖）と、適切なヌクレオチドの挿入又は欠失を伴って最適に整列された場合に、以下に考察されるように、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧａｐのような配列同一性のいずれかの周知のアルゴリズムにより測定して、少なくとも約９５％、そしてより好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％のヌクレオチド塩基においてヌクレオチド配列同一性があるということを示す。参照核酸分子に対して実質的同一性を有する核酸分子は、特定の場合において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じか又は実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。

ポリペプチドに適用される用語「実質的な類似性」又は「実質的に類似の」は、例えばデフォルトギャップ重みを使用してプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴにより最適に整列された場合に、少なくとも９５％の配列同一性、なおより好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有する２つのペプチド配列を意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、類似した化学特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基でアミノ酸残基が置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ又はそれ以上のアミノ酸配列が保存的置換で互いに異なる場合、配列同一性パーセント又は類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上方調節され得る。この調節を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸のグループの例としては以下が挙げられる：（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリン及びスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、そして（７）硫黄含有側鎖はシステイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換グループは：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負でない値を有するいずれかの変化である。

ポリペプチドの配列類似性（配列同一性とも呼ばれる）は、典型的には配列解析ソフトウエアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウエアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失及び他の改変に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似した配列を照合する。例えば、ＧＣＧソフトウエアは、異なる生物種由来の相同ポリペプチドのような密接に関連したポリペプチド間、又は野生型タンパク質とそのムテインとの間の配列相同性又は配列同一性を決定するための、デフォルトパラメーターと共に使用され得るＧａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔのようなプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムである、デフォルト又は推奨パラメータを使用するＦＡＳＴＡを使用して比較され得る。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と検索配列との間のベストオーバーラップの領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上記参照）。異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと本発明の配列を比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用する、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。

ｐＨ依存性結合
本発明は、ｐＨ依存性結合特徴を有する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。例えば、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおいてＰＤＧＦＲ−ベータへの減少した結合を示し得る。あるいは、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおいて抗原に対する増強された結合を示し得る。表現「酸性ｐＨ」は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５，９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０又はそれ以下のｐＨ値を含む。本明細書で使用される表現「中性ｐＨ」は約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、及び７．４のｐＨ値を含む。

場合によっては、「中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおいてＰＤＧＦＲ−ベータへの減少した結合」は、中性ｐＨでのＰＤＧＦＲ−ベータへの抗体の結合のＫ_D値に対する、酸
性ｐＨでのＰＤＧＦＲ−ベータへの抗体の結合のＫ_D値の比で表される（又は逆も同様）。例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はその抗原結合フラグメントが約３．０又はそれ以上の酸性／中性Ｋ_D比を示す場合に、本発明の目的のために「中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおいてＰＤＧＦＲ−ベータへの減少した結合」を示すとみなされ得る。特定の例となる実施態様において、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントについての酸性／中性Ｋ_D比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０．２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０又はそれ以上であり得る。

ｐＨ依存性結合特徴を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて特定の抗原への減少した（又は増強された）結合について抗体集団をスクリーニングすることにより得られ得る。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変により、ｐＨ依存性特徴を有する抗体が得られ得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えばＣＤＲ内）の１つ又はそれ以上のアミノ酸をヒスチジン残基と置換することにより、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで減少した抗原結合を有する抗体が得られ得る。

Ｆｃ変異体を含む抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体
本発明の特定の実施態様によれば、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体への抗体の結合を増強するか又は減少させる１つ又はそれ以上の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣ_H２又はＣ_H３領域に変異を含む抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含み、ここで変異は、酸性環境（例えば、ｐＨが約５．５から約６．０の範囲に及ぶエンドソームにおいて）におけるＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。このような変異は、動物に投与された場合の抗体の血清半減期の増加を生じ得る。このようなＦｃ改変の非限定的な例としては、例えば、位置２５０（例えば、Ｅ又はＱ）；２５０及び４２８（例えば、Ｌ又はＦ）；２５２（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ又はＴ）、２５４（例えば、Ｓ又はＴ）、及び２５６（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ又はＴ）での改変；又は位置４２８及び／若しくは４３３（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ又はＫ）及び／若しくは４３４（例えば、Ｈ／Ｆ又はＹ）での改変；又は位置２５０及び／若しくは４２８での改変；又は位置３０７もしくは３０８（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、及び４３４での改変が挙げられる。一実施態様において、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）及び４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、及び３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）及び４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変；２５２、２５４、及び２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、及び２５６Ｅ）の改変；２５０Ｑ及び４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ）；並びに３０７及び／又は３０８の改変（例えば、３０８Ｆ又は３０８Ｐ）を含む。

例えば、本発明は：２５０Ｑ及び２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ及び４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ）；並びに４３３Ｋ及び４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆ）からなる群より選択される変異の１つ又はそれ上の対又はグループを含むＦｃドメインを含む、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異、及び本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内に考慮される。

抗体の生物学的特徴
本発明は、可溶性単量体又は二量体ＰＤＧＦＲ−ベータ分子に高親和性で結合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書の実施例３において規定されるアッセイ形式を使用して、表面プラズモン共鳴により測定して、約３０ｎＭ未満のＫ_Dで単量体ＰＤＧＦＲ−ベータに（例えば、２５℃又は３７℃で）結合する抗体及び抗体の抗原結合フラグメントを含む。特定の実施態様において、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書の実施例３において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似したアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定して、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＫ_Dで単量体ＰＤＧＦＲ−ベータに結合する。

本発明はまた、例えば、本明細書の実施例３において規定されるアッセイ形式を使用して、表面プラズモン共鳴により測定して、約２５０ｐＭ未満のＫ_Dで二量体ＰＤＧＦＲ−ベータに（例えば、２５℃又は３７℃で）結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。特定の実施態様において、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書の実施例３において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似したアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定して、約２４０ｐＭ未満、約２３０ｐＭ未満、約２２０ｐＭ未満、約２１０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１９０ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１７０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、又は約１００ｐＭ未満のＫ_Dで二量体ＰＤＧＦＲ−ベータに結合する。

本発明はまた、１つ又はそれ以上のＰＤＧＦリガンド（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ、−ＡＢ、−ＣＣ、又は−ＤＤ）のＰＤＧＦＲ−ベータへの結合を遮断する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書の実施例４（Ａ）において規定されるアッセイ形式、又は実時間バイオアッセイを使用して、例えば実施例４（Ｂ）において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似したアッセイを使用して、ＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイにより測定して、インビトロで約３００ｐＭ未満のＩＣ₅₀値で単量体ＰＤＧＦＲ−ベータへのＰＤＧＦ−ＢＢの結合を遮断する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体抗体を含む。特定の実施態様において、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書の実施例４（Ａ）において規定されるアッセイ形式、若しくは実時間バイオアッセイを使用して、例えば実施例４（Ｂ）において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似したアッセイを使用して、ＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイにより測定して、約２８０ｐＭ未満、約２６０ｐＭ未満、約２４０ｐＭ未満、約２２０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ、又は約７５ｐＭ未満のＩＣ₅₀値でインビトロで単量体ＰＤＧＦＲ−ベータへのＰＤＧＦ−ＢＢの結合を遮断する。

本発明はまた、細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータのＰＤＧＦリガンド媒介活性化を阻害する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書の実施例６において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似のアッセイを使用して、細胞ベースの遮断バイオアッセイにおいて測定して、約５００ｐＭ未満のＩＣ₅₀値で、細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータのＰＤＧＦ−ＢＢ媒介又はＰＤＧＦ−ＤＤ媒介活性化を阻害する、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。特定の実施態様において、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書の実施例６において規定されるアッセイ形式、又は実質的に類似したアッセイを使用して、細胞ベースの遮断バイオアッセイにおいて測定して、約４００ｐＭ未満、約３５０ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、又は約３０ｐＭ未満のＩＣ₅₀値で細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータのＰＤＧＦ−ＢＢ又はＰＤＧＦ−ＤＤ媒介活性化を遮断する。

本発明はまた、ＰＤＧＦＲ−ベータを発現する細胞に内部移行される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、本明細書の実施例７において規定される細胞ベースの抗体内部移行アッセイ、又は実質的に類似したアッセイを使用して測定して、ＰＤＧＦＲ−ベータを発現する細胞中に効率的に内部移行される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。

本発明の抗体は、上述の生物学的特徴の１つ若しくはそれ以上、又はそれらのいずれかの組み合わせを有し得る。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書の実施例を含む本開示の検討から当業者に明らかとなるだろう。

エピトープマッピング及び関連技術
本発明は、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外ドメイン内（例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外ドメインのＩｇドメイン１、２、３、４及び／又は５）に見いだされる１つ又はそれ以上のアミノ酸と相互作用する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。Ｉｇドメイン１〜３（例えば、配列番号３３７のアミノ酸１〜２７７）はリガンド結合に関与することが公知である。本発明は、Ｉｇドメイン１（例えば、配列番号３３７のアミノ酸１〜８８）、Ｉｇドメイン２（例えば、配列番号３３７のアミノ酸９７〜１７８）及び／又はＩｇドメイン３（例えば、配列番号３３７のアミノ酸１８２〜２７７）内に見いだされる１つ又はそれ以上のアミノ酸と相互作用し、そしてそれにより受容体／リガンド相互作用を有効に遮断する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。本発明の特定の例となる実施態様において、Ｉｇドメイン２（例えば、配列番号３３７のアミノ酸９７〜１７８内；例えば、実施例８を参照のこと）と特異的に相互作用する抗体が提供される。抗体が結合するエピトープは、ＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外ドメイン内に位置する３又はそれ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上）のアミノ酸の単一の連続した配列からなり得る。あるいは、エピトープはＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外ドメイン内に位置する複数の不連続アミノ酸（又はアミノ酸配列）からなり得る。

当業者に公知の様々な技術が、抗体がポリペプチド又はタンパク質の「１つ又はそれ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定するために使用され得る。例となる技術としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．、ＮＹ）記載のような所定の交差ブロッキング（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイ、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ、２００４、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３−４６３）、及びペプチド切断分析が挙げられる。さらに、エピトープ切除、エピトープ抽出及び抗原の化学修飾のような方法が使用され得る（Ｔｏｍｅｒ、２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用され得る別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。おおまかに言えば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質の重水素標識、その後の重水素で標識されたタンパク質への抗体の結合を含む。次に、タンパク質／抗体複合体を、水に移して、抗体により保護されている残基（これらは重水素標識されたままである）を除いて全ての残基において水素−重水素交換させる。抗体の解離後、標的タンパク質は、プロテアーゼ切断及び質量分析にかけられ、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識された残基が明らかとなる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ （１９９９） Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２−２５９；Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ （２００１） Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照のこと。

本発明はさらに、本明細書に記載される特定の例となる抗体（例えば、Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ、Ｈ１Ｍ３３０５Ｎ、Ｈ１Ｍ３３１０Ｎ、Ｈ１Ｍ３３６１Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６５Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６８Ｎ、Ｈ２Ｍ３３７３Ｎ、Ｈ２Ｍ３３７４Ｎ、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ、Ｈ４Ｈ３０９５Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９６Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０２Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０４Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０５Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０６Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓなど）のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。同様に、本發明はまた、本明細書に記載される特定の例となる抗体（例えば、Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ、Ｈ１Ｍ３３０５Ｎ、Ｈ１Ｍ３３１０Ｎ、Ｈ１Ｍ３３６１Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６５Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６８Ｎ、Ｈ２Ｍ３３７３Ｎ、Ｈ２Ｍ３３７４Ｎ、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ、Ｈ４Ｈ３０９５Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９６Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０２Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０４Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０５Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０６Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓなど）のいずれかと、ＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について競合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書の実施例５において規定される「瓶（Ｂｉｎ）１」の１つ又はそれ以上の抗体（例えば、Ｈ４Ｈ３３６５Ｎ、Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ及びＨ４Ｈ３０９４Ｐ）と、ＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について交差競合（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅ）する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。本発明はまた、本明細書実施リ５において規定される「瓶（Ｂｉｎ）２」の１つ又はそれ以上の抗体（例えば、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ、Ｈ４Ｈ３３０５Ｎ及びＨ４Ｈ３３１０Ｎ）と、ＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について交差競合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。

抗体が参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と同じエピトープに結合するか否か、又はそれらと結合について競合するか否かは、当該分野において公知であり、本明細書において例示される通常の方法を使用することにより容易に決定することができる。例えば、本発明の参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と同じエピトープに試験抗体が結合するかどうかを決定するために、参照抗体をＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質（例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータ細胞ガイドメインの可溶性部分又は細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータ）に結合させる。次に、ＰＤＧＦＲ−ベータ分子に結合する試験抗体の能力を評価する。参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体との飽和結合の後に試験抗体がＰＤＧＦＲ−ベータに結合する事が出来る場合、試験抗体は参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方で、参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体との飽和結合の後に試験抗体がＰＤＧＦＲ−ベータ分子と結合できない場合、試験抗体は、本発明の参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体により結合されるエピトープと同じエピトープに結合するかもしれない。次いで、さらなる通常の実験（例えば、ペプチド変異及び結合分析）を行って、観察された試験抗体の結合の欠如が、実際に参照抗体と同じエピトープへの結合に起因するかどうか、又は立体的遮断（又は別の現象）が観察された結合の欠如の原因なのかどうかを確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー又は当該分野で利用可能ないずれかの他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して行われ得る。本発明の特定の実施態様によれば、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０又は１００倍過剰の一方の抗体タンパク質が、競合結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５−１５０２を参照のこと）において測定して、他方の結合を少なくとも５０％だけ、しかし好ましくは７５％、９０％又は９９％さえも阻害する場合、２つの抗体は同じ（又は重なった）エピトープに結合する。あるいは、一方の抗体の結合を減少又は排除する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が他方の結合を減少又は排除する場合、２つの抗体は、同じエピトープに結合するとみなされる。一方の抗体の結合を減少又は排除するアミノ酸変異のサブセットのみが他方の結合を減少又は排除する場合、２つの抗体は「重なった（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）エピトープ」を有するとみなされる。

抗体が参照抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と結合について競合する（又は結合について交差競合する）かどうかを決定するために、上記の結合方法論を２つの方向で行った：第一の方向では、参照抗体を、飽和条件下でＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質（例えば、ＰＤＧＦＲ−ベータ細胞外ドメインの可溶性部分又は細胞表面発現ＰＤＧＦＲ−ベータ）に結合させ、続いて試験抗体のＰＤＧＦＲ−ベータ分子への結合を評価する。第二の方向では、試験抗体を、飽和条件下でＰＤＧＦＲ−ベータ分子と結合させ、続いて参照抗体のＰＤＧＦＲ−ベータ分子への結合を評価する。両方の方向において、最初の（飽和）抗体のみがＰＤＧＦＲ−ベータ分子に結合できる場合、試験抗体及び参照抗体がＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について競合すると結論づけられる（例えば、本明細書の実施例５に記載されるアッセイ形式を参照のこと、ここでは可溶性ＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質はセンサーチップ上に捕捉され、そしてＰＤＧＦＲ−ベータ被覆センサーチップを参照抗体［ｍＡｂ＃１］そして試験抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体［ｍＡｂ＃２］で連続して、かつ両方の結合順序で処理する）。当業者には当然のことながら、参照抗体と結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合しないかもしれないが、重なるか又は隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的にブロックし得る。

ヒト抗体の製造
完全ヒトモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体を生成するための方法は当該分野で公知である。いずれかのこのような公知の方法が本発明の状況において、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータに特異的に結合するヒト抗体を作製するために使用され得る。

例えばＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ^TM技術、又は完全ヒトモノクローナル抗体を生成するためのいずれかの他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有するＰＤＧＦＲ−ベータに対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。以下の実験項におけるように、抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む所望の特徴について特徴付け及び選択する。必要な場合、マウス定常領域を、所望のヒト定常領域、例えば野生型又は改変ＩｇＧ１又はＩｇＧ４で置き換えて、完全ヒト抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を生成する。選択された定常領域は特定の用途に従って変化し得るが、高親和性抗原結合及び標的特異性特徴は可変領域に存在する。場合によっては、完全ヒト抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を抗原陽性Ｂ細胞から直接単離する。

生物学的同等性
本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及び抗体フラグメントは、記載される抗体と異なるアミノ酸配列を有するがヒトＰＤＧＦＲ−ベータに結合する能力を保持するタンパク質を包含する。このような変異体抗体及び抗体フラグメントは、親配列と比較した場合に１つ又はそれ以上の付加、欠失、又は置換を含むが、記載された抗体の生物学的活性と本質的に同等の生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示された配列と比較した場合にヌクレオチドの１つ又はそれ以上の付加、欠失、又は置換を含むが、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又は抗体フラグメントと本質的に生物学的に同等な抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又は抗体フラグメントをコードする配列を包含する。このような変異体アミノ酸及びＤＮＡ配列の例は上で考察される。

２つの抗原結合タンパク質、又は抗体は、例えば、それらが、それらの吸収の速度及び程度が同様の実験条件下で同じモル用量で単回用量又は複数回用量のいずれかで投与された場合に有意な差異を示さない薬学的同等物又は薬学的代替物である場合に、生物学的に同等とみなされる。いくつかの抗体は、それらがそれらの吸収の程度において等価であるが、それらの吸収速度においては等価でない場合に同等物又は薬学的代替物とみなされ、吸収速度におけるこのような差異は意図的であり、かつラベルに示されており、例えば、慢性使用での効果的な身体薬物濃度の達成に必須ではなく、そして研究されている特定の薬品に関して医学的に重要でないと考えられるので、なお生物学に同等であるとみなされ得る。

一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度、及び効力において臨床的に意味のある差異がない場合に生物学的に同等である。

一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、切り替えなしに継続された治療と比較して、免疫原性、又は減少した有効性における臨床的に有意な変化を含む、有害作用の危険性における期待される増加なく、参照製品と生物学的製品との間で患者が１回又はそれ以上切り替え得る場合に、生物学的に同等である。

一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、そのような機序が知られている程度まで、使用の条件（単数又は複数）の共通の作用機序（単数又は複数）によりそれらが両方とも作用する場合に生物学的に同等である。

生物学的同等性は、インビボ及びインビトロの方法により実証され得る。生物学的同等性の尺度としては、例えば、（ａ）抗体又はその代謝物の濃度が、血液、血漿、血清又は他の生物学的流体において時間の関数として測定される、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；（ｂ）ヒトインビボバイオアベイラビリティデータと相関しており、かつ合理的に予測されるインビトロ試験；（ｃ）抗体（又はその標的）の適切な急性薬理作用が時間の関数として測定される、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；及び（ｄ）抗体の安全性、有効性もしくはバイオアベイラビリティ又は生物学的同等性を確立する十分に管理された臨床試験におけるものが挙げられる。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の生物学的に同等な変異体は、例えば、残基もしくは配列の様々な置換を行うことにより、又は生物学的活性に必要ない末端もしくは内部の残基もしくは配列を除去することにより構築され得る。例えば、システイン残基は生物学的活性に必須ではなく、再生の際に不必要又は不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために除去されるか又は他のアミノ酸と置き換えられ得る。他の状況において、生物学的に同等な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を改変するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を排除又は除去する変異を含む抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の変異体を含み得る。

種選択性及び種交差反応性
特定の実施態様によれば、本発明は、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータに結合するが他の種由来のＰＤＧＦＲ−ベータには結合しない抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を提供する。本発明はまた、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ及び１つ又はそれ以上の非ヒト種由来のＰＤＧＦＲ−ベータに結合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む。例えば、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータに結合し得、かつ場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、プレーリードッグ（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）、マーモセット、アカゲザル又はチンパンジーのＰＤＧＦＲ−ベータのうちの１つ又はそれ以上に結合してもしなくてもよい。本発明の特定の例となる実施態様によれば、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ（例えば、単量体及び／又は二量体ｈＰＤＧＦＲ−ベータ構築物）及びカニクイザル（例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＰＤＧＦＲ−ベータ（例えば、単量体及び／又は二量体ｍｆＰＤＧＦＲ−ベータ構築物）に特異的に結合する抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体が提供される（例えば、本明細書の実施例３を参照のこと）。

免疫複合体
本発明は、細胞毒、化学療法薬、免疫抑制剤又は放射性同位体のような治療部分に結合された抗ＰＤＧＦＲ−ベータモノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。細胞傷害性薬は、細胞に有害な薬剤を含む。免疫複合体を形成するために適した細胞傷害性薬及び化学療法剤の例は当該分野で公知である（例えば、ＷＯ０５／１０３０８１）。

多選択性（Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体
本発明の抗体は、単一特異性でも、二重特異性でも、多選択性でもよい。多選択性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であっても、１つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含んでいてもよい。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．、２００４、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照のこと。本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、別の機能分子、例えば、別のペプチド又はタンパク質に連結されても、同時発現されてもよい。例えば、抗体又はそのフラグメントは、（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有会合又はその他の方法により）、１つ又はそれ以上の他の分子実体、例えば、別の抗体又は抗体フラグメントに機能的に連結されて、第二の結合特異性を有する二重特異性又は多選択性抗体を生じ得る。例えば、本発明は、免疫グロブリンの１つのアームがヒトＰＤＧＦＲ−ベータ又はそのフラグメントに特異的であり、かつ免疫グロブリンの他方のアームが第二の治療標的に特異的であるか、又は治療部分に結合されている二重特異性抗体を含む。

本発明の状況において使用され得る例となる二重特異性抗体形式は、第一の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｃ_H３ドメイン及び第二のＩｇＣ_H３ドメインの使用を含み、ここで第一及び第二のＩｇ Ｃ_H３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸が互いと異なり、そしてここで少なくとも１つのアミノ酸差異は、アミノ酸差異の無い二重特異性抗体と比較して、プロテインＡに対する二重特異性抗体の結合を減少させる。一実施態様において、第一のＩｇ Ｃ_H３ドメインはプロテインＡに結合し、そして第二のＩｇ Ｃ_H３ドメインは、Ｈ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる；ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）のようなプロテインＡ結合を減少させるか又は消失させる変異を含有する。第二のＣ_H３は、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。第二のＣ_H３内に見出され得るさらなる改変としては：ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２）；並びにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上記の二重特異性抗体形式での変異は、本発明の範囲内に考慮される。

本発明の状況において使用され得る他の例となる二重特異性形式としては、限定することなく、例えば、ｓｃＦｖベースの、又は二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）二重特異性形式、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブと穴（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通の軽鎖（例えば、ノブと穴を有する共通の軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、及びＭａｂ²二重特異性形式（前述の形式のレビューについては、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２、ｍＡｂｓ ４：６、１−１１、及びそこに引用される参考文献を参照のこと）が挙げられる。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸結合を使用して構築され得、例えば、ここで直交（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して部位特異的抗体−オリゴヌクレオチド結合体を生成し、次いでこれが自己集合して規定された組成、原子価及び配置を有する多量体複合体となる。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ： Ｄｅｃ．４、２０１２］を参照のこと）。

治療製剤及び投与
本発明は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、適切な担体、添加剤、及び改善された輸送、送達、耐性などを提供する他の薬剤と共に製剤化される。多数の適切な製剤は、全ての薬剤師に公知の処方集に見出され得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ^TM、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ））、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油及び油中水乳剤、カーボワックス乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｃａｒｂｏｗａｘ）（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、及びカーボワックスを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」 ＰＤＡ （１９９８） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１も参照のこと。

患者に投与される抗体の用量は、患者の年齢及びサイズ、標的疾患、状態、投与経路などによって変わり得る。好ましい用量は、典型的には体重又は体表面積に従って計算される。本発明の抗体が成人患者においてＰＤＧＦＲ−ベータ活性に関連する状態又は疾患を処置するために使用される場合、本発明の抗体を、通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、又は約０．０５〜約３ｍｇ／体重ｋｇの単回用量で静脈内投与することが有利であり得る。状態の重症度によって、処置の頻度及び期間は調整され得る。抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を投与するための有効投薬量及びスケジュールは経験的に決定され得；例えば、患者の進行は、定期的な評価によりモニタリングされ得、そしてそれに従って用量が調整される。さらに、投薬量の種間スケーリングは当該分野で周知の方法を使用して行われ得る（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．、１９９１、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。

様々な送達系が公知であり、そして本発明の医薬組成物を投与するために使用され得、例えば、リポソーム封入、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、本発明の抗体又は他の治療タンパク質を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシスである（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）。本発明の抗体及び他の治療活性成分もまた、遺伝子治療技術により送達され得る。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。組成物は、いずれかの都合の良い経路、例えば、注入又はボーラス注射により、上皮又は粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸管粘膜など）を通した吸収により投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は全身でも局所でもよい。

本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器を用いて皮下又は静脈内に送達され得る。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達において容易に有用性を有する。このようなペン型送達デバイスは再利用可能であるか又は使い捨てであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、一般的には、医薬組成物を含む交換式カートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与されてカートリッジが空になると、この空のカートリッジは容易に廃棄され得、そして医薬組成物を含む新しいカートリジに置き換えられ得る。次いでペン型送達デバイスは再使用され得る。使い捨てペン型送達デバイスでは交換式カートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスはデバイス内のリザーバー中に保持される医薬組成物で予め充填されている状態である。リザーバから医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。

多数の再利用可能なペン型自動注入送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達において有用性を有する。例としては、限定されないが、少数を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ^TM（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ^TMペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５^TM ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＯＧ^TMペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０^TMペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ^TM Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ^TM（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ^TMペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ^TM、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ^TM、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ^TM、並びにＯＰＴＩＣＬＩＫ^TM（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達において有用性を有する使い捨てペン型送達デバイスの例としては、限定されないが、少数を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ^TMペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ^TM（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ^TM（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ^TM自動注入器（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ^TM（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、及びＨＵＭＩＲＡ^TMペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ ＩＬ）が挙げられる。

特定の状況において、医薬組成物は徐放（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）系で送達され得る。一実施態様において、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、前出；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと）。別の実施態様において、ポリマー材料が使用され得る；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．）、１９７４、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照のこと。さらに別の実施態様において、徐放系が組成物の標的に近接して配置され得、それ故全身用量の一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、前出、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５−１３８）。他の徐放系はＬａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３による概説において考察される。

注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内及び筋内注射、点滴などのための投薬形態を含み得る。これらの注射用製剤は、公知の方法により製造され得る。例えば、注射用製剤は、例えば、上記の抗体又はその塩を、注射のために従来使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に溶解、懸濁又は乳化させることにより製造され得る。注射のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤含有する等張液などがあり、これらはアルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］などのような適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが使用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このようにして製造された注射剤は、好ましくは適切なアンプル中に充填される。

有利には、上記の経口又は非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に適合するのに適している単位用量で投薬形態へと製造される。このような単位用量での投薬形態としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含有される前述の抗体の量は、一般的には、単位用量で投薬形態あたり約５〜約５００ｍｇであり；特に注射剤の形態では、前述の抗体が約５〜約１００ｍｇで含有され、そして他の投薬形態については約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。

抗体の治療上の使用
本発明の抗体は、とりわけ、ＰＤＧＦＲ−ベータの発現、シグナル伝達、若しくは活性に関連するか若しくは媒介されるか、又はＰＤＧＦＲ−ベータとＰＤＧＦＲ−ベータリガンド（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＰＤＧＦ−ＡＢなど）との間の相互作用を遮断するか若しくはそれでなければＰＤＧＦＲ−ベータ活性及び／若しくはシグナル伝達を阻害することにより処置可能ないずれかの疾患又は障害の処置、予防及び／又は寛解のために有用である。例えば、本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（又は抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含む医薬組成物）を、そのような処置を必要とする患者に投与することにより、眼疾患、線維性疾患（線維症）、血管疾患及び／又は癌（腫瘍増殖阻害）を処置するための方法を提供する。本明細書に記載される処置方法の状況において、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）、又は１つ若しくはそれ以上のさらなる治療剤（その例は本明細書の他所に記載される）と組み合わせて投与され得る。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を投与することにより処置可能な例となる眼疾患としては、加齢黄斑変性（例えば「滲出型（ｗｅｔ）」ＡＭＤ）、滲出性（ｅｘｕｄａｔｉｖｅ）ＡＭＤ、糖尿病性網膜症（例えば、増殖性糖尿病性網膜症）、網膜静脈閉塞性疾患、例えば、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、虹彩血管新生、血管新生緑内障、緑内障における術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、脈絡膜新生血管、視神経乳頭血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、硝子体血管新生、パンヌス、翼状片、黄斑浮腫、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、血管性網膜症、網膜変性症、ぶどう膜炎、及び眼の炎症性疾患が挙げられる。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を投与することにより処置可能な例となる線維性疾患としては、肺線維症（例えば、特発性肺線維症、ブレオマイシン誘発肺線維症、アスベスト誘発肺線維症、及び閉塞性細気管支炎症候群）、慢性喘息、急性肺損傷及び急性呼吸促迫に関連する線維症（例えば、細菌性肺炎誘発線維症、外傷誘発線維症、ウイルス性肺炎誘発線維症、人工呼吸器誘発線維症、非肺敗血症誘発線維症（ｎｏｎ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｅｐｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）及び吸引誘発線維症）、珪肺症、放射線誘発線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、眼線維症（例えば、眼線維性瘢痕）、皮膚線維症（例えば、強皮症）、肝線維症（例えば、硬変症、アルコール誘発肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、胆管損傷、原発性胆汁性（ｂｉｌａｒｙ）肝硬変、感染又はウイルス誘発肝線維症［例えば、慢性ＨＣＶ感染］、自己免疫性肝炎）、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）（腎（ｒｅｎａｌ））線維症、心筋線維症、アテローム性動脈硬化症、ステント再狭窄、及び骨髄線維症が挙げられる。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を投与することにより処置可能な例となる血管疾患としては、血管増殖性疾患、肺動脈性肺高血圧症、再狭窄、血管瘢痕などが挙げられる。

本発明はまた、本明細書に記載される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を、このような処置を必要とする患者に投与することにより、癌を処置、腫瘍増殖を阻害、腫瘍退縮を促進、転移を阻害、かつ／又は病的血管新生（例えば、腫瘍増殖に関連する血管新生）を阻害するための方法を含む。例えば、本発明の抗体及び抗原結合フラグメントは、例えば、脳及び髄膜、中咽頭、肺及び気管支樹、胃腸管、雄性及び雌性生殖器系、筋肉、骨、皮膚、及び付属器、結合組織、脾臓、免疫系、造血細胞及び骨髄、肝臓及び尿管、並びに眼のような専門（ｓｐｅｃｉａｌ）感覚器官において生じる原発性及び／又は転移性腫瘍を処置するために使用され得る。特定の実施態様において、本発明の抗体及び抗原結合フラグメントは、以下の癌の１つ又はそれ以上を処置するために使用され得る：腎細胞癌、膵癌、乳癌、頭頸部癌（例えば、脳、口腔、中咽頭、上咽頭、下咽頭、鼻腔、副鼻腔、喉頭、口唇などの癌）、前立腺癌、膀胱癌、悪性神経膠腫、骨肉腫、骨芽細胞腫、骨軟骨腫、結腸直腸癌、胃癌（例えば、ＭＥＴ増幅を伴う胃癌）、悪性中皮腫、星状細胞腫、神経膠芽腫、髄芽腫、網膜芽細胞腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、滑膜肉腫、甲状腺癌、結合組織新生物、カポジ肉腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、又は黒色腫。

組み合わせ治療及び製剤
本発明は、１つ又はそれ以上のさらなる治療活性成分と組み合わせて、本明細書に記載される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体のいずれかを含む組成物及び治療製剤、並びにそれを必要とする被験体に上記組み合わせを投与することを含む処置方法を含む。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、アフリベルセプトのような「ＶＥＧＦ−ｔｒａｐ」又はＵＳ ７，０８７，４１１に示されるような他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体若しくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ）、ＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ又はパゾパニブ）、又は抗ＶＥＧＦ受容体抗体と組み合わせて同時処方されるか、かつ／又は組み合わせて投与され得る。抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はまた、ＰＤＧＦリガンドアンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＧＦ−ＢＢ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＤＤ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＡＢ抗体、又は他のＰＤＧＦリガンドアンタゴニスト、例えばアプタマー［例えば、Ｆｏｖｉｓｔａ^TM、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪのような抗ＰＤＧＦ−Ｂアプタマー］、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）又はＰＤＧＦリガンドに特異的な抗体フラグメント）と組み合わせられ得る。他の実施態様において、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ＥＧＦＲアンタゴニスト（例えば、抗ＥＧＦＲ抗体［例えば、セツキシマブ又はパニツムマブ］又はＥＧＦＲの小分子阻害剤［例えば、ゲフィチニブ又はエルロチニブ］）、Ｈｅｒ２／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３若しくはＥｒｂＢ４のような別のＥＧＦＲファミリーメンバーのアンタゴニスト（例えば、抗ＥｒｂＢ２、抗ＥｒｂＢ３若しくはＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３若しくはＥｒｂＢ４活性の抗ＥｒｂＢ４抗体又は小分子阻害剤）、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的なアンタゴニスト（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的に結合する抗体）、ｃＭＥＴアンタゴニスト（例えば、抗ｃＭＥＴ抗体）、ＩＧＦ１Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＧＦ１Ｒ抗体）、又はＢ−ｒａｆ阻害剤（例えば、ベムラフェニブ、ソラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０）と同時処方されるか、かつ／又は組み合わせて投与され得る。場合によっては、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ＰＤＧＦＲ−アルファ阻害剤（例えば、抗ＰＤＧＦＲ−アルファ抗体）、ＤＬＬ４アンタゴニスト（例えば、ＲＥＧＮ４２１のようなＵＳ ２００９／０１４２３５４に開示される抗ＤＬＬ４抗体）、Ａｎｇ２アンタゴニスト（例えば、Ｈ１Ｈ６８５ＰのようなＵＳ ２０１１／００２７２８６に開示される抗Ａｎｇ２抗体）などと混合されるか、同時処方されるか、かつ／又は組み合わせて投与される。本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と組み合わせて有利に投与され得る他の薬剤としてはサイトカイン阻害剤が挙げられ、これには、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８のようなサイトカイン又はそれらのそれぞれの受容体に結合する小分子サイトカイン阻害剤及び抗体が含まれる。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はまた、抗ウイルス薬、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド、ステロイド薬、酸素、抗酸化剤、金属キレート化剤、ＩＦＮ−ガンマ、及び／又はＮＳＡＩＤと組み合わせて投与されるか、かつ／又は同時処方され得る。本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はまた、（例えば、癌の処置又は腫瘍増殖の阻害の方法の状況において）放射線処置及び／又は従来の化学療法も含む処置計画の一部として投与され得る。

上述のさらなる治療活性成分のいずれも、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与が有益であるいずれかの疾患又は障害（例えば、本明細書にて言及される眼疾患、線維性疾患、血管疾患及び／又は癌のいずれかを含む）の処置のために本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体のいずれかと組み合わせて投与され得る。例えば、眼疾患（例えば、滲出型ＡＭＤ、糖尿病性網膜症、ＣＲＶＯ、又は本明細書に記載される他の眼疾患のいずれか）の処置の状況において、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、例えばアフリベルセプトのような「ＶＥＧＦ−ｔｒａｐ」又はＵＳ ７，０８７，４１１に示されるような他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質、又は抗ＶＥＧＦ抗体若しくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、又はラニビズマブ）と同時処方されるか、かつ／又は組み合わせて投与され得る。

本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体がＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのようなＶＥＧＦ ｔｒａｐ）と組み合わせて投与される（抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びＶＥＧＦアンタゴニストを含む同時処方（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）の投与を含む）例となる実施態様において、個々の成分は、様々な投薬組み合わせを使用して被験体に投与され得るか、かつ／又は同時処方され得る。例えば、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．５ｍｇ、５．０ｍｇ、及び５．５ｍｇからなる群より選択される量で被験体に投与され得るか、かつ／又は同時処方で含有され得；そしてＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのようなＶＥＧＦ ｔｒａｐ）は、１．０ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２．０ｍｇ、２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ及び３．０ｍｇからなる群より選択される量で被験体に投与され得るか、かつ／又は同時処方に含有され得る。本発明の例となる抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体／アフリベルセプト投薬組み合わせとしては、例えば：（ｉ） ０．２ｍｇ抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体＋２ｍｇアフリベルセプト；（ｉｉ） ０．５ｍｇ 抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体＋２ｍｇアフリベルセプト；（ｉｉｉ） １ｍｇ抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体＋２ｍｇアフリベルセプト；（ｉｖ） ３ｍｇ抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体＋２ｍｇアフリベルセプト；及び（ｖ） ４ｍｇ 抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体＋２ｍｇアフリベルセプトが挙げられる。組み合わせ／同時処方は、例えば、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回などを含む、本明細書の他所に開示される投与計画のいずれかに従って被験体に投与され得る。

さらなる治療活性成分は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与前に被験体に投与され得る。例えば、第一の成分が第二の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、又は１分未満前に投与される場合、第一の成分は、第二の成分の「前に」投与されるとみなされ得る。他の実施態様において、さらなる治療活性成分は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与後に被験体に投与され得る。例えば、第一の成分が第二の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与される場合に、第一の成分は第二の成分の「後に」投与されるとみなされ得る。さらに他の実施態様において、さらなる治療活性成分は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与と同時に被験体に投与され得る。「同時」投与は、本発明の目的のために、例えば、単一投薬形態（例えば、同時処方される）、又は互いに約３０分以内に被験体に投与される別々の投薬形態での、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びさらなる治療活性成分の投与を含む。別々の投与形態で投与される場合、各投薬形態は、同じ経路により投与され得（例えば、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びさらなる治療活性成分が両方とも硝子体内、皮下などに投与され得る）；あるいは、各投薬形態は、異なる経路により投与され得る（例えば、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は硝子体内投与され得、そしてさらなる治療活性成分は全身投与され得る）。いずれにしても、単一投与形態、同じ経路で別々の投与形態、又は異なる経路で別々の投与形態での成分の投与は、全て本開示の目的のために「同時投与」とみなされる。本開示の目的のために、さらなる治療活性成分の「前」、さらなる治療活性成分と「同時」、又はさらなる治療活性成分の「後」（本明細書の上で定義されたそれらの用語のとおり）の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与は、さらなる治療活性成分「と組み合わせた」抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与とみなされる。

本発明は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体が本明細書の他所で記載されるさらなる治療活性成分の１つ又はそれ以上と同時処方されている医薬組成物を含む。

本発明はまた、ＰＤＧＦアンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストの組み合わせを含むさらなる治療組成物を含む。本発明の局面に従うＰＤＧＦアンタゴニストは、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、さらにはＰＤＧＦリガンドアンタゴニストを含む。同様に、本発明のこの局面に従うＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、さらにはＶＥＧＦリガンドアンタゴニストを含む。

投与計画
本発明の特定の実施態様によれば、複数回用量の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（又は抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及び本明細書に記述されるさらなる治療活性薬剤のいずれかの組み合わせを含む医薬組成物）は規定された時間経過にわたって被験体に投与され得る。本発明のこの局面に従う方法は、複数回用量の本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を被験体に連続して投与することを含む。本明細書で使用される「連続的に投与すること」は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の各用量が、異なる時点で、例えば所定の間隔（例えば、時間、日、週又は月）だけ離れた異なる日に被験体に投与されることを意味する。本発明は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の単回初期用量、続いて抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の１つ又はそれ以上の二次用量、そして場合により続いて抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の１つ又はそれ以上の三次用量を患者に連続的に投与することを含む方法を含む。

用語「初期用量」、「二次用量」、及び「三次用量」は、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投与の時系列を指す。従って、「初期用量」は処置計画の初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも呼ばれる）；「二次用量」は初期用量の後に投与される用量であり；そして「三次用量」は二次用量の後に投与される用量である。初期、二次、及び三次用量は全て、同じ量の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を含有していてもよいが、一般的には投与頻度の点から互いに異なり得る。しかし、特定の実施態様において、初期、二次及び／又は三次用量に含有される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の量は、処置の過程で互いに変わる（例えば、適宜上方又は下方に調整される）。特定の実施態様において、２つ又はそれ以上（例えば、２、３、４、又は５）の用量が、処置計画の初めに「負荷投与量」として投与され、続いてより低い頻度で投与される後続用量（例えば、維持量）が投与される。

本発明の特定の例となる実施態様において、二次用量及び／又は三次用量はそれぞれ、直前の投薬の１〜２６週間後（例えば、１、１¹／₂、２、２¹／₂、３、３¹／₂、４、４¹／₂、５、５¹／₂、６、６¹／₂、７、７¹／₂、８、８¹／₂、９、９¹／₂、１０、１０¹／₂
、１１、１１¹／₂、１２、１２¹／₂、１３、１３¹／₂、１４、１４¹／₂、１５、１５¹／₂、１６、１６¹／₂、１７、１７¹／₂、１８、１８¹／₂、１９、１９¹／₂、２０、２０¹／₂、２１、２１¹／₂、２２、２２¹／₂、２３、２３¹／₂、２４、２４¹／₂、２５、２５¹／₂、２６、２６¹／₂、週間又はそれ以上後）に投与される。本明細書で使用される句「直前の投薬」は、一連の複数回投与で、投薬を介在させずに、その順番で次の用量の投与の前に患者に投与される抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の投薬を意味する。

本発明のこの局面に従う方法は、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の任意の数の二次用量及び／又は三次用量を患者に投与することを含み得る。例えば、特定の実施態様において、単回二次用量のみが患者に投与される。他の実施態様において、２つ又はそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の二次用量が患者に投与される。同様に、特定の実施態様において、単回の三次用量のみが患者に投与される。他の実施態様において、２つ又はそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の三次用量が患者に投与される。

複数回二次用量を含む実施態様において、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各二次用量は、直前の投薬の１〜２週間後又は１〜２ヶ月後に患者に投与され得る。同様に、複数回三次用量を含む実施態様において、各三次用量は他の三次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各三次用量は、直前の投薬の２〜１２週後に患者に投与され得る。本発明の特定の実施態様において、二次用量及び／又は三次用量が患者に投与される頻度は、処置計画の間に変化し得る。投与頻度はまた、臨床検査後に個々の患者の必要性に依存して医師による処置の過程の間に調整され得る。

本発明は、２〜６の負荷用量を第一の頻度で（例えば、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回、２ヶ月に１回など）患者に投与し、続いて、より低い頻度で２つ又はそれ以上の維持用量を患者に投与する投与計画を含む。例えば、本発明のこの局面によれば、負荷用量が例えば月に１回の頻度で投与される場合（例えば、２、３、４、又はそれ以上の負荷用量が月に１回投与される）、維持用量は、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、１０週間に１回、１２週間に１回などで患者に投与され得る。

抗体の診断上の使用
本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はまた、例えば診断目的のために、サンプル中のＰＤＧＦＲ−ベータ、又はＰＤＧＦＲ−ベータを発現する細胞を検出及び／又は測定するために使用され得る。例えば、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体、又はそのフラグメントは、ＰＤＧＦＲ−ベータの異常な発現（例えば、過剰発現、過小発現、発現の欠如など）により特徴づけられる状態又は疾患を診断するために使用され得る。ＰＤＧＦＲ−ベータについての例となる診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体と接触させることを含み得、ここで抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、検出可能な標識又はレポーター分子で標識される。あるいは、非標識抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を、それ自体検出可能に標識される二次抗体と組み合わせて診断適用において使用することができる。検出可能な標識又はレポーター分子は、放射性同位体、例えば³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、もしくは¹²⁵Ｉ；蛍光性もしくは化学発光性の部分、例えばフルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミン；又は酵素、例えばアルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼであり得る。サンプル中のＰＤＧＦＲ−ベータを検出又は測定するために使用され得る具体的な例となるアッセイとしては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）が挙げられる。

本発明に従うＰＤＧＦＲ−ベータ診断アッセイにおいて使用され得るサンプルは、患者から入手可能ないずれかの組織又は流体のサンプルを含み、正常又は病理的状態下で検出可能な量のＰＤＧＦＲ−ベータタンパク質又はそのフラグメントを含有する。一般に、健常患者（例えば、異常なＰＤＧＦＲ−ベータレベル又は活性に関連する疾患又は状態に罹患していない患者）から得られた特定のサンプル中のＰＤＧＦＲ−ベータのレベルは、最初にＰＤＧＦＲ−ベータのベースライン、又は標準的なレベルを確立するために測定される。次いでＰＤＧＦＲ−ベータのこのベースラインレベルを、ＰＤＧＦＲ−ベータ関連疾患又は状態を有することが疑われる個体から得られたサンプルにおいて測定されたＰＤＧＦＲ−ベータレベルと比較し得る。

以下の実施例は、本発明の方法及び組成物を製造及び使用する方法の完全な開示及び記載を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明者らが彼らの発明とみなすものの範囲を限定することは意図されない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関して正確さを確実にするために努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差が占めるはずである。そうではないと示されていなければ、部数は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、そして圧力は大気圧又は大気圧付近である。

実施例１．ＰＤＧＦＲ−ベータに対するヒト抗体の生成
ＰＤＧＦＲ−ベータ エクトドメインを含む免疫原を、ヒト免疫グロブリン重鎖及びカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ^(R)マウスに、免疫応答を刺激するためにアジュバントを用いて直接投与した。抗体免疫応答を、ＰＤＧＦＲ−ベータ特異的イムノアッセイによりモニタリングした。所望の免疫応答が達成された場合、脾細胞を採取し、そしてそれらの生存能を保存しそしてハイブリドーマ細胞株を形成するためにマウス骨髄腫細胞と融合させた。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして、ＰＤＧＦＲ−ベータ特異的抗体を産生する細胞株を同定するために選択した。この技術を使用して、いくつかの抗ＰＤＧＦＲ−ベータキメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びマウス定常ドメインを有する抗体）を得た；この方法で生成された例となる抗体を以下のように指定した：Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ、Ｈ１Ｍ３３０５Ｎ、Ｈ１Ｍ３３１０Ｎ、Ｈ１Ｍ３３６１Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６５Ｎ、Ｈ２Ｍ３３６８Ｎ、Ｈ２Ｍ３３７３Ｎ及びＨ２Ｍ３３７４Ｎ。続いてキメラ抗体由来のヒト可変ドメインを、ヒト定常ドメイン上にクローンして、本明細書に記載される完全ヒト抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を作製した。

抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を、ＵＳ ２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されるように、骨髄腫細胞に融合することなく抗原陽性Ｂ細胞からも直接単離した。この方法を使用して、いくつかの完全ヒト抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びヒト定常ドメインを有する抗体）を得た；この方法で生成された例となる抗体を以下のように指定する：Ｈ４Ｈ３３９４Ｐ、Ｈ４Ｈ３０９５Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９６Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０２Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０４Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０５Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０６Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ。

この実施例の方法に従って生成された例となる抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の特定の生物学的特性を以下に示される実施例において詳細に記載する。

実施例２．重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列
表１は、選択された抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列対並びにそれらの対応する抗体識別子を示す。

抗体は、典型的には、本明細書において以下の命名に従って言及される：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」、「Ｈ４Ｈ」など）、続いて数値識別子（例えば、表１に示されるような「３２９９」、「３３６３」又は「３０９４」など）、続いて「Ｐ」、「Ｎ」又は「Ｓ」の接尾辞。従って、この命名法によれば、抗体は本明細書において、例えば、「Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ」、「Ｈ２Ｍ３３６３Ｎ」、「Ｈ４Ｈ３０９４」などと呼ばれ得る。本明細書で使用される抗体名称での Ｈ１Ｍ、Ｈ２Ｍ及びＨ４Ｈの接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、一方で「Ｈ４Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有する。当業者には当然のことながら、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換され得るが（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体へと変換され得るなど）、いずれにしても、可変ドメイン（ＣＤＲを含む） − 表１に示される数値識別子により示される − は同じままであり、そしてＦｃドメインの性質にかかわらず結合特性は同一であるか実質的に同様であると期待される。

以下の実施例において使用される対照構築物
抗ＰＤＧＦＲ−ベータ対照抗体を、比較目的のために以下の実施例に含めた。対照抗体を、本明細書では対照Ｉと指定する：ＵＳ ７，７４０，８５０に示される「２Ｃ５」の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を有するヒト抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体。

実施例３．表面プラズモン共鳴により決定したヒトＰＤＧＦＲ−ベータへの抗体結合
選択された精製抗ヒトＰＤＧＦＲ−ベータモノクローナル抗体への抗原結合についての結合親和性及び速度定数を、実時間表面プラズモン共鳴バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）アッセイを使用して２５℃及び３７℃で決定した。マウスＦｃ（接頭辞Ｈ１Ｍ；Ｈ２Ｍ）又はヒトＦｃ（接頭辞Ｈ４Ｈ）のいずれかとして表される抗体を、それらのそれぞれの抗Ｆｃセンサー表面上に捕捉した（Ｍａｂ捕捉形式）。異なる濃度の可溶性単量体ＰＤＧＦＲ−ベータ構築物（ｈＰＤＧＦＲｂ．ｍｍｈ ［配列番号３３７］、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＰＤＧＦＲｂ．ｍｍｈ ［配列番号３４０］）又は二量体ＰＤＧＦＲ−ベータ構築物（ヒトＰＤＧＦＲｂ．ｍＦｃ［配列番号３３８］又はヒトＰＤＧＦＲｂ．ｈＦｃ［配列番号３３９］）を、抗ＰＤＦＲ−ベータモノクローナル抗体捕捉表面上に５０μＬ／分の流量で注入した。動力学的結合（ｋ_a）及び解離（ｋ_d）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０カーブフィッティングソフトウエアを使用して１：１結合モデルに対してデータを処理及びフィッティングすることにより決定した。結合解離平衡定数（Ｋ_D）及び解離半減期（ｔ_1/2）を、動力学的速度定数から以下のように計算した： Ｋ_D（Ｍ）＝ｋ_d／ｋ_a；及びｔ_1/2（分）＝（ｌｎ２／（６０＊ｋ_d）。様々な抗ＰＤＧＦＲ−ベータモノクローナル抗体についての動力学的結合パラメーターを表２〜５に示す。（ＮＢ＝使用された条件下で観察された結合無し；ＮＴ＝未試験）。

表２〜５に示されるように、本発明のいくつかの抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、ヒト及びカニクイザル（Ｍ．ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＰＤＧＦＲ−ベータ構築物に対するサブナノモル（ｓｕｂ−ｎａｎｏｍｏｌａｒ）親和性を示した。さらに、いくつかのクローンは、ＰＤＧＦＲ−ベータ構築物に対して参照（対照１）抗体より密接な（より低いＫ_D）結合を示した。

実施例４．抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はＰＤＧＦＲ−ベータへのＰＤＧＦリガンドの結合を遮断する
Ａ．ＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイを使用して評価された受容体／リガンド遮断
そのリガンドＰＤＧＦ−ＢＢへの受容体結合を遮断する本発明の特定の抗ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の能力を、最初にＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイを用いて評価した。手短には、プレートをヒトＰＤＧＦ−ＢＢ（２μｇ／ｍＬ）で被覆した。別々に、２５０ｐＭのビオチン化可溶性ｈＰＤＧＦＲ−ベータ．ｍｍｈ（「ｂｉｏｔ−ｈＰＤＧＦＲ−ベータ−ｍｍｈ」、配列番号３３７）を段階希釈した抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（０〜１００ｎＭ）と１時間室温（２５℃）で前もって混合した。平衡化ＰＤＧＦＲ−ベータ／抗体溶液をリガンド被覆プレートに加え、１時間インキュベートさせて洗浄した。結合したｂｉｏｔ−ｈＰＤＧＦＲ−ベータ．ｍｍｈのレベルを、ＨＲＰ結合ストレプトアビジンを使用して検出した。Ｐｒｉｓｍソフトウエアを使用してデータを分析し、そしてＩＣ₅₀値を、リガンドに結合したｈＰＤＧＦＲ−ベータ−ｍｍｈの５０％減少を達成するために必要な抗体の量として計算した。最大遮断値もまた計算し、ベースラインと比較した遮断する抗体の能力を示す。用量曲線で一定量の２５０ｐＭ ｂｉｏｔ−ｈＰＤＧＦＲ−ベータ−ｍｍｈで測定された吸光度を０％遮断、そしてＰＤＧＦＲ−ベータを加えない吸光度を１００％と規定した。最も高い抗体濃度を含有するウェルの吸光度により最大遮断パーセントを決定した。結果を表６に示す。（「Ｅ」は抗体がエンハンサーであること、すなわちシグナルが抗体の存在しない場合よりもいくらかの濃度の抗体の存在下でより高かったということを示す）。

表６に示されるように、本発明のいくつかの抗体は、約７．６ｎＭ（Ｈ１Ｍ３２９９Ｎ）〜約６６ｐＭ（Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ）の範囲にわたるＩＣ₅₀値で、その天然リガンドＰＤ
ＧＦ−ＢＢとのＰＤＧＦＲ−ベータの相互作用を強く遮断し、そして特定の抗体は受容体−リガンド相互作用を増強した（例えば、Ｈ４Ｈ３０９７Ｓ、Ｈ４Ｈ３０９８Ｓ及びＨ４Ｈ３１０２Ｓ）。

Ｂ．実時間バイオセンサーアッセイを使用して評価した受容体／リガンド遮断
ヒトＰＤＧＦＲ−ベータに対するリガンド（ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＤＤ及びＰＤＧＦ−ＡＢ）結合を遮断する選択した抗ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の能力もまた実時間ＳＰＲバイオセンサーアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００）を使用して評価した。

手短には、４００ＲＵの可溶性ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ．ｍＦｃ（配列番号３３８）を、ポリクローナルウサギ抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で誘導体化した（共有結合でカップリングした）Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面上に捕捉した。捕捉した表面を、３００ｎＭの選択された抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体で４分間飽和させ、続いてさらに４分間２５℃で３０ｎＭのリガンド（ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＤＤ又はＰＤＧＦ−ＡＢ）を注入した。実時間結合応答をアッセイの間中モニタリングし、そしてＰＤＧＦリガンドを捕捉された抗体の存在しない場合に誘導体化捕捉対照表面上に適用した場合に測定した結合応答と比較した。結果を図１に示す。

図１に見られるように、全ての抗体がＰＤＧＦ−ＢＢ及びＰＤＧＦ−ＡＢリガンドを遮断する能力を示し、より少ない抗体は、抗体対照のない場合と比較してＰＤＧＦ−ＤＤの有効な遮断が可能であった。リガンドがＢｉａｃｏｒｅセンサー表面上に適用された場合に最も少ない量のＲＵ応答を示した抗体Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ、Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ、及び対照Ｉが注目すべきものであった。

実施例５．抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の交差競合分析
交差競合アッセイを、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について互いに競合する選択された抗体の能力を評価するために行った。手短には、可溶性ヒトＰＤＧＦＲ−ベータ．ｍｍｈ（配列番号３３７）を、ａｎｔｉ−Ｐｅｎｔａ−ｈｉｓ Ｏｃｔｅｔセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）上に捕捉した。各ＰＤＧＦＲ−ベータ．ｍｍｈ被覆センサーチップを、５分間第一の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（Ｍａｂ ＃１；５０μｇ／ｍＬ）で飽和させた。次に、各センサーチップを、第二の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（Ｍａｂ ＃２）の溶液で飽和させた。次いで、Ｍａｂ ＃１と予め複合体化させた（ｐｒｅ−ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ）ＰＤＧＲ−ベータ．ｍｍｈへのＭａｂ ＃２結合の実時間応答をモニタリングした。全てのアッセイを、２５℃で流量１０００ｒｐｍでＯｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４バイオセンサー上でＯｃｔｅｔ ＨＢＳＴ緩衝液中で製造者の指示書に従って（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）行った。結果を図２に示す。

０．１ｎＭ未満の結合応答を、図２において黒色又は灰色の陰影で示し、これらは対応する抗体対がＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について互いに競合するということを示す。０．２ｎＭより大きな結合応答（図２において白い枠で示される）は、ＰＤＧＦＲ−ベータへの結合について互いに競合しない抗体対を示す。

この実施例の結果は、本発明の抗ＰＤＧＦＲベータ抗体が、エピトープ結合特徴に基づいて２つの別個の「瓶（ｂｉｎｓ）」に分類され得るということを示す：瓶１は、対照Ｉ、Ｈ４Ｈ３３６５Ｎ、Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ、Ｈ４Ｈ３１０３Ｓ及びＨ４Ｈ３０９４Ｐを含む。瓶２は、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ、Ｈ４Ｈ３１０７Ｓ、Ｈ４Ｈ３３０５Ｎ及びＨ４Ｈ３３１０Ｎを含む。この実施例の結果は、瓶１の抗体が、瓶２の抗体とＰＤＧＦＲ−ベータ上の異なる領域に結合するということを示唆する。

実施例６．抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を用いたリガンド媒介受容体活性化及びＭＡＰＫシグナル伝達の阻害
本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体をさらに特徴づけするために、ＰＤＧＦＲ−ベータその公知の結合リガンドのうちの２つ、ＰＤＧＦ ＢＢ及びＤＤによるＰＤＧＦＲ−ベータの活性化を検出するためにバイオアッセイを開発した。受容体とそのリガンドとの間の相互作用は、増殖、生存、遊走及び形態形成を含む様々な細胞プロセスの誘導のために必要である（Ｈｏｃｈ ａｎｄ Ｓｏｒｉａｎｏ、２００３、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １３０：５７６９−４７８４）。ＰＤＧＦ受容体は受容体チロシンキナーゼであり、そしてＰＤＧＦ ＢＢ及びＤＤによる活性化の際のアルファ及びベータ受容体のホモ又はヘテロ二量体化により形成される。活性化の際に、自己リン酸化が誘導され、そしてＲａｓ−ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）経路を含むいくつかのシグナル伝達経路カスケードが誘発される。

ＰＤＧＦＲベータへのリガンド結合を介するＭＡＰＫシグナル伝達経路の活性化を検出するために、安定なＨＥＫ２９３細胞株を、ルシフェラーゼレポーター（血清応答エレメント［ＳＲＥ−ルシフェラーゼ］）と一緒に全長ヒトＰＤＧＦＲ−ベータを発現するために生成した。ＨＥＫ２９３／ｈＰＤＧＦＲ−ベータ細胞を９６ウェルプレートに播種し、そして０．１％ ＦＢＳを含有する低血清培地中に終夜維持した。インキュベーション後に、段階希釈した（１：３）ＰＤＧＦ ＢＢ又はＤＤを１００ｎＭ〜０．００２ｎＭの範囲に及ぶ濃度で細胞に加えて、用量応答を測定した。リガンド活性化ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードの阻害を調べるために、抗体を１：３で段階希釈し、そして１００ｎＭ〜０．００２ｎＭの範囲に及ぶ濃度で細胞に加えた。ＰＤＧＦ ＢＢ及びＤＤ濃度はそれぞれ２５０ｐＭ及び４００ｐＭのままで一定にし、ルシフェラーゼ活性を５．５時間後に検出した。ＰＤＧＦ ＢＢ及びＤＤはヒトＰＤＧＦＲｂをそれぞれ０．０４〜１．１１ｎＭ及び０．３４〜１．８２ｎＭのＥＣ₅₀で活性化した。ＰＤＧＦＲ−ベータ媒介シグナル伝達を５０％阻害するために必要な抗体濃度（ＩＣ₅₀）を各抗体について決定した。結果を表７にまとめる。（ＮＢ＝遮断無し；アイソタイプ１＝マウスＩｇＧネガティブコントロール無関係抗体；アイソタイプ２＝ヒトＩｇＧネガティブコントロール無関係抗体）。

表７に示されるように、本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体のいくつかは、サブナノモル範囲のＩＣ₅₀でリガンド依存性ＰＤＧＦＲ−ベータ活性化を強く遮断した。さらに、マウスＩｇＧ（アイソタイプ１）及びヒトＩｇＧ（アイソタイプ２）のネガティブコントロールは両方共受容体のリガンド活性化を遮断しなかった。

実施例７．ＰＤＧＦＲ−ベータを発現する細胞での抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の内部移行
抗体媒介受容体内部移行を調べるために、ヒトＰＤＧＦＲ−ベータを発現するように操作された細胞（ＨＥＫ２９３／ＳＲＥ−ｌｕｃ／ＰＤＧＦＲｂ細胞）を使用して実験を行った。手短には、２０，０００個のＨＥＫ２９３／ＳＲＥ Ｌｕｃ／ＰＤＧＦＲｂ細胞／ウェルを終夜完全培地（ＤＭＥＭ中１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ／Ｇｌｕｔ、ＮＥＡＡ、及びＧ４１８）中でプレーティングし、そして抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体で１０μｇ／ｍｌで３０分間４℃で染色した。細胞を２回洗浄し、そしてＤｙｌｉｇｈｔ ４８８結合Ｆａｂヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（１０μｇ／ｍＬ；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を用いて３０分間４℃で染色した。次に、細胞を３７℃で２時間インキュベートして受容体を内部移行させた。Ａｌｅｘａ−４８８蛍光を、洗浄した細胞を抗Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）と共に４５分間４℃でインキュベートすることにより消光し、内部移行した抗体と表面結合抗体を区別した。画像をＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ Ｍｉｃｒｏ ＸＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で撮影し、そしてスポット分析をＣｏｌｕｍｂｕｓソフトウエア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して行った。相対的内部移行を、各抗体の消光された染色（すなわち、内部移行した抗体）を対照１抗体と比較することにより計算した。結果を表８にまとめる。

表８に示されるように、試験した全ての抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体は、このアッセイ形式において強い内部移行を示し、様々な治療状況においてＰＤＧＦＲ−ベータ発現細胞を効率的に標的化する抗体の潜在能力を示した。

実施例８．抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はＰＤＧＦＲ−ベータ上の異なるドメイン内に結合する
ＰＤＧＦＲ−ベータの細胞外部分は、Ｄ１〜Ｄ５と呼ばれる５つのＩｇ様Ｃ２型ドメインからなる。Ｄ１〜Ｄ３は高親和性リガンド結合に必要である。この実施例において、本発明の特定の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体がどの細胞外ドメインと相互作用するかを決定するために実験を行った。

この実験のために、４つの異なるＰＤＧＦＲ−ベータ細胞外ドメイン構築物を使用した：Ｄ１（配列番号３４２）、Ｄ１−Ｄ２（配列番号３４３）、Ｄ１−Ｄ３（配列番号３４４）、及びＤ１−Ｄ４（配列番号３４５）、さらに全長ＰＤＧＦＲ−ベータ。４つの異なる抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）により様々な構築物への結合について試験した。手短には、１５０−２００ ＲＵの抗ＰＤＧＦＲベータ抗体を、抗ヒトＦｃ ＣＭ５チップを介して捕捉した。次に、個々のドメイン構築物、又は全長ＰＤＧＦＲベータを、５０ｎＭの濃度で抗体結合表面上に適用した。様々なドメイン構築物に結合する様々な抗体の能力を測定した。結果を表９に示す。（−）＝結合は観察されなかった；（＋）＝結合が観察された；ＮＤ＝未測定。

表９にまとめられるように、全ての抗体が全長ＰＤＧＦＲ−ベータに結合した。２つの抗体、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ及びＨ４Ｈ３３７４Ｎはドメイン２に結合すると決定された。興味深いことに、これらの２つの抗体はまた、ＥＬＩＳＡイムノアッセイに基づいてリガンド遮断剤であり、ドメイン２がリガンド（ＰＤＧＦ−ＢＢ）結合に重要であることを裏付けた。試験した２つの他の例となる抗体、Ｈ４Ｈ３０９９Ｓ及びＨ４Ｈ３３０５Ｎは、ドメイン構築物のいずれにも結合せず、これらの抗体が、ドメイン４と５との間及び／又はドメイン５自体のアミノ酸を高親和性結合に必要とするかもしれないということを示唆した。

実施例９．抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体はインビボ網膜モデルにおける周皮細胞を枯渇させる
２つの例となる抗ＰＤＧＦＲベータ抗体、Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ及びＨ４Ｈ３０９４Ｐを、インビボ網膜周皮細胞枯渇モデルにおいて試験した。周皮細胞は、ＰＤＧＦＲ−ベータを発現する平滑筋様細胞である。内皮細胞で発現されるＰＤＧＦ−Ｂは、新しく形成される血管への周皮細胞の動員において役割を果たし、従って血管新生及び血管構造の樹立を促進する。しかし、周皮細胞と内皮との相互作用、及びＰＤＧＦ−Ｂ／ＰＤＧＦＲ−ベータシグナル伝達は、病的血管新生の間に崩壊し、制御されない血管形成に寄与する。眼の疾患において、この血管新生は視覚病的状態及び失明をもたらし得る。

第一の実験において、ヒト化ＰＤＧＦＲ−ベータマウス仔に、３ｍｇ／ｋｇ Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ、対照Ｉ（２Ｃ５）又はヒトＦｃ（ｈＦｃ）を皮下（ｓ．ｃ．）注射し、新しく形成する血管におけるＰＤＧＦ−Ｂ／ＰＤＧＦＲ−ベータシグナル伝達を遮断する効果を見た。手短には、出生２日後（Ｐ２）のヒト化ＰＤＧＦＲ−ベータ仔に、３ｍｇ／ｋｇのｈＦｃ対照又はＰＤＧＦＲ−ベータ抗体を皮下注射した。出生５日後に仔を屠殺した。両眼を採取し、そして４％ Ｐ．Ｆ．Ａ中で１時間固定した。眼をＰＢＳで３回洗浄し、そして硝子体血管を除去して網膜を解剖した。網膜を抗体希釈血清（ＡＤＳ；ＰＢＳ中０．０５％ Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００中１％ ＢＳＡ）中で調製されたウサギ抗ＮＧ２コンドロイチン硫酸一次抗体で終夜（Ｏ／Ｎ）室温にて染色した。インキュベーション後に、全ての網膜をＰＢＳ中で３回１５分間洗浄し、ついでフルオレセイン標識グリフホニアシンプリシホリア（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ）レクチン及びＡＤＳ中で調製されたヤギ抗ウサギａｌｅｘａ ５９４標識二次で終夜４℃にて染色した。インキュベーション後に、全ての網膜を再びＰＢＳ中で３回１５分間洗浄した。網膜をスライド上にフラットマウントし（ｆｌａｔ−ｍｏｕｎｔｅｄ）、そしてＤＡＰＩを用いずにＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ^TMを使用してカバーガラスで挟んだ。

網膜をＮｉｋｏｎ ８０ｉ蛍光顕微鏡を使用して画像化した。画像をＡｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ及びＦｏｖｅａを使用して解析した。ｈＦｃに対して正規化した平均ＮＧ２陽性面積を、各処置群について測定した。画像化及び解析の両方を盲検法で行った。統計分析を、１要因（ｏｎｅ−ｗａｙ）ＡＮＯＶＡを使用してｐｒｉｓｍソフトウエアで行った。結果を表１０〜１１にまとめる。

表１０〜１１に示されるように、平均網膜ＮＧ２陽性面積は、ｈＦｃと比較して抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体で処置されたマウスにおいて減少した。ＮＧ２陽性面積は、ｈＦｃと比較して抗体Ｈ４Ｈ３３７４Ｎ及びＨ４Ｈ３０９４Ｐについて有意に減少した（ｐ＜０．００１）。さらに、Ｈ４Ｈ３３７４Ｎは、Ｈ４Ｈ３０９４Ｐ及び対照Ｉ抗体の両方と比較した場合に、ＮＧ２陽性面積の最も大きな減少を示した。

実験の別の組において、Ｃ５７Ｂｌ／６マウス仔に、５０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは６．２５ｍｇ／ｋｇの用量の抗マウスＰＤＧＦＲ−ベータ抗体「ｍＡｂ３９」（ＡＰＢ５と称される抗体の可変領域を有する、Ｕｅｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００２；１１０（１１）：１６１９−１６２８を参照のこと）、又は対照として５０ｍｇ／ｋｇでＦｃを、Ｐ２に皮下（ＳＣ）注射した（試験１）。周皮細胞被覆に対する効果をＰ５にウサギ抗ＮＧ２コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４一次抗体を使用して評価した。発達する網膜血管において、全ての用量のｍＡｂ３９≧１２．５ｍｇ／ｋｇは血管周皮細胞被覆を阻害した。

別の試験（試験２）において、Ｐ２仔に２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ３９又は対照を皮下注射した。網膜をＰ５に採取し、そしてグリフホニアシンプリシホリア（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ）レクチン（「ＧＳ Ｌｅｃｔｉｎ Ｉ」、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）で染色した。２５ｍｇ／ｋｇ用量で、ｍＡｂ３９は、対照と比較して、血管新生化網膜面積及び血管密度を穏やかに減少させた。

別の組の実験において（試験３）、仔の左眼に、ｍＡｂ３９ ５μｇ（０．５μｌ）又は対照をＰ４に硝子体内（ＩＶＴ）注射し、そしてＰ６に採取した。単回硝子体内抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体投与は、ほとんど完全に壁細胞を枯渇させ、そして網膜血管分化及び形態に対する顕著な効果、例えば、不規則な血管内径を生じた。成体マウスの眼にけるＰＤＧＦＲ−ベータ中和の効果を調べるためにさらなる実験を行った。詳細には、成体マウスの左目に、ｍＡｂ３９（５μｇ又は１０μｇ）又は対照（５μｇ又は１０μｇ）をＩＶＴ注射した。４８時間後に眼を採取し、そして抗ＮＧ２及びＧＳレクチンＩで染色した。成体マウスにおいて、ｍＡｂ３９は周皮細胞損失又は血管形態変化の証拠を生じなかった。

これらの結果は、ＰＤＧＦＲ−ベータの選択的薬理学的中和が周皮細胞枯渇において効果的であり、そして発達する網膜新血管における血管形態変化及び成長に寄与するということを集合的に実証する。対照的に、この同じ阻害は、成体マウス網膜における樹立された血管における成熟周皮細胞及び血管に対してはいずれの効果も有していないようである。

実施例１０．加齢黄斑変性を有する患者における抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及びＶＥＧＦアンタゴニストを含む組み合わせ製剤のフェーズ１臨床試験
試験概要
フェーズ１臨床試験を、硝子体内（ＩＶＴ）アフリベルセプトと併用した（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）、新生血管加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）を有する患者において硝子体内注射により送達される本発明の抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の安全性を試験するために行った。アフリベルセプト（ＶＥＧＦＲ１Ｒ２−ＦｃΔＣ１（ａ）としても知られる）のアミノ酸配列、さらにはそれをコードする核酸配列は、例えばＷＯ２０１２／０９７０１９に示される。

この試験の主目的は、新生血管ＡＭＤを有する患者における硝子体内（ＩＶＴ）抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体の安全性を調べることである。副次的目的は、新生血管ＡＭＤを有する患者における角膜血管新生（ＣＮＶ）に対するＩＶＴ抗ＰＤＧＦＲ−ベータの解剖学的効果を調べること、並びにヒトにおける抗ＰＤＧＦＲ−ベータ及びアフリベルセプトの薬物動態を決定することである。この試験の別の目的は、これらの薬剤で処置された被験体における抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体及び／又はアフリベルセプトに対する抗体の存在を決定することである。

標的集団
この試験の標的集団は、新生血管ＡＭＤを有する５０歳及びそれより高齢の男性及び女性である。およそ３〜６人の患者が４つの計画されたコホートに登録される。合計１５〜２４人の患者が計画される。６人の患者が、確認される場合は、最大耐量（ＭＴＤ）、又は最も高い用量レベルで登録される。

主要な組み入れ／除外基準
この試験の主要な組み入れ基準は以下のとおりである：（１）５０歳又はそれ以上の男性又は女性；及び（２）眼研究においてＦＡにより明らかなように中心窩に影響を及ぼす傍中心窩（ｊｕｘｔａｆｏｖｅａｌ）病変を含む、ＡＭＤに続発する活性中心窩下ＣＮＶ。

主要な除外基準は以下のとおりである：（１） 試験開始（１日目）の８週以内に眼試験におけるＩＶＴ抗ＶＥＧＦ治療；（２）ＰＤＧＦ又はＰＤＧＦＲ阻害剤でのいずれかの事前の処置；（３）眼試験における２５ｍｍＨｇより高いか又は２５ｍｍＨｇに等しい眼内圧；（４）いずれかの眼における感染性眼瞼炎、角膜炎、強膜炎、又は結膜炎の証拠；（５）スクリーニング来院の３ヶ月以内にいずれかの眼における眼内炎症／感染症；（６）眼試験におけるスクリーニング評価時に明らかな進行中の虹彩血管新生、硝子体出血、又は牽引性網膜剥離；（７）いずれかの眼におけるＡＭＤ以外のいずれかの原因に起因するＣＮＶの証拠；（８）いずれかの眼における糖尿病性網膜症又は糖尿病黄斑浮腫の証拠；（９）例えば、中膜混濁、フルオレセイン色素に対するアレルギー又は静脈アクセスの欠如に起因して、ＣＮＶを記録するための写真、ＦＡ又はＯＣＴを得ることができない；及び（１０）１日目の６週間以内に全身（ＩＶ）抗ＶＥＧＦ投与。

試験設計
患者は、１日目／ベースライン（来診２）の２週間前までのスクリーニング来診時に試験適格性について評価される。１日目／ベースライン（来診２）に、患者は治験薬の最初の投薬を受ける前に安全性評価を受ける。

適格患者は、登録の余地がある現在の（ｃｕｒｒｅｎｔ）コホートに登録される。初期コホートには、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ／アフリベルセプト（０．２ｍｇ：２ｍｇで同時処方）を投与する。１日目及び２９日目（±３日）に、患者に抗ＰＤＧＦＲ−ベータ／アフリベルセプト注射を投与する。

抗ＰＤＧＦＲ−ベータ／アフリベルセプトの用量は、事前コホートの間に評価された安全性及び認容性に基づいて増大される（最初の患者、最初の用量から開始して２週間まで、その後、そのコホートにおける最後の患者の第二の用量、又は約６週目）。また、各コホートに登録される最初の患者は、さらなる患者に投薬する前に最初の用量の後少なくとも１週間観察される。次の用量コホートへの増大は、データが検討されれば行われる。患者内用量増大は許可されない。

患者は、試験来診時に眼及び全身の安全性（眼部検査、臨床評価（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ）などを含む）並びに有効性（ＯＣＴ、ＦＡ／ＦＰ、ＣＮＶ面積、古典的ＣＮＶサイズ、総病変サイズ、斑体積、画像化、及び４−メートルＥＴＤＲＳプロトコルを使用したＢＣＶＡ）について評価され、そして２４週目まで続く。

治験薬処置
４つの異なる抗ＰＤＧＦＲ−ベータ／アフリベルセプト同時処方が患者に投与される。同時処方を表１２にまとめる。

各処方は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２、０．０３％（質量／体積）ポリソルベート２０、５％（質量／体積）スクロース、及び４０ｍＭ塩化ナトリウムからなる。

様々な抗ＰＤＧＦＲ−ベータ／アフリベルセプト同時処方をＩＶＴ注射により送達し、そして注射体積は５０μｌである。上記のように、患者は同時処方の２つの別々の投与を受ける。第一の投与は１日目であり、そして第二の投与は２９日目である。

主要及び副次的評価項目（Ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ）
試験の主要評価項目は治験薬の安全性である。副次的評価項目は：（１）８週目及び１２週目におけるベースラインからの中央網膜厚さ（ＯＣＴにより測定）の変化；（２））８週目及び１２週目における網膜液の完全な消散（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＯＣＴにより測定）を有する患者の比率；（３）８週目及び１２週目におけるベースラインからのＣＮＶ面積の変化（ＯＣＴにより測定）；（４）８週目及び１２週目におけるベースラインからのＣＮＶサイズの変化（ＦＡにより測定）；（５）８週目及び１２週目におけるベースラインからの漏出面積の変化（ＦＡにより測定）；（６）ベースラインからのＢＣＶＡの変化；並びに（７）抗薬物抗体の薬物動態及び開発である。

本発明は、本明細書に記載される特定の実施態様による範囲に限定されるべきではない。実際に、本明細書に記載されたものに加えて本発明の様々な改変は、前述の記載及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

Claims (6)

1. ヒト血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１３２、１３４及び１３６を含む３つの重鎖の相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）；並びに、それぞれ配列番号１４０、１４２及び１４４を含む３つの軽鎖の相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）；を含む、上記抗体又はその抗原結合フラグメント。
2. 配列番号１３０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１３８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
3. 表面プラズモン共鳴アッセイにおいて３７℃にて測定して２００ｐＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ _D ）で、ヒト血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１３２、１３４及び１３６を含む３つの重鎖の相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）；並びに、それぞれ配列番号１４０、１４２及び１４４を含む３つの軽鎖の相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）；を含む、上記抗体又はその抗原結合フラグメント。
4. 配列番号１３０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１３８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
5. 表面プラズモン共鳴アッセイにおいて３７℃にて測定して２００ｐＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ _D ）で、ヒト血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１３２、１３４及び１３６を含む３つの重鎖の相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）；並びに、それぞれ配列番号１４０、１４２及び１４４を含む３つの軽鎖の相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）；を含む、上記抗体又はその抗原結合フラグメント；
   アフリベルセプト、ベバシズマブ、又はラニビズマブからなる群より選択されるＶＥＧＦアンタゴニスト；並びに
   薬学的に許容しうる担体又は希釈剤；
   を含む、医薬組成物。
6. 抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１３０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１３８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項５に記載の医薬組成物。