[go: up one dir, main page]

JP6039751B2 - フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用 - Google Patents

フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用 Download PDF

Info

Publication number
JP6039751B2
JP6039751B2 JP2015120269A JP2015120269A JP6039751B2 JP 6039751 B2 JP6039751 B2 JP 6039751B2 JP 2015120269 A JP2015120269 A JP 2015120269A JP 2015120269 A JP2015120269 A JP 2015120269A JP 6039751 B2 JP6039751 B2 JP 6039751B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
antibody
cancer
polypeptide
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2015120269A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2016000729A (ja
Inventor
アブ オリガ
アブ オリガ
タバース ダニエル
タバース ダニエル
ルイ リンギュン
ルイ リンギュン
パイン ギリアン
パイン ギリアン
エス． ゴールドマカー ビクター
エス． ゴールドマカー ビクター
Original Assignee
イミュノジェン， インコーポレイテッド
イミュノジェン， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by イミュノジェン， インコーポレイテッド, イミュノジェン， インコーポレイテッド filed Critical イミュノジェン， インコーポレイテッド
Publication of JP2016000729A publication Critical patent/JP2016000729A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6039751B2 publication Critical patent/JP6039751B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/537—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/303—Liver or Pancreas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/626—Diabody or triabody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

関連出願の相互参照
本出願は２０１０年２月２４日に出願された米国仮特許出願６１／３０７，７９７号、２０１０年５月２０日に出願された米国仮特許出願６１／３４６，５９５号、及び２０１０年１１月１２日に出願された米国仮特許出願６１／４１３，１７２号の優先権を主張し、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の分野は一般的にヒトフォレート受容体１に結合する抗体及びイムノコンジュゲート、並びに癌のような疾患の治療のための抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法に関する。
癌は先進国における代表的死亡原因の１つであり、合衆国では年間百万人超が癌と診断され、５０万の死亡例がある。全体として３人に１人以上がその寿命において何らかの形態の癌を発症することになる。癌には２００種類超の異なる型が存在し、そのうちの４種である乳癌、肺癌、結腸直腸癌及び前立腺癌は全新規症例の過半数に相当する（Jemal等、2003, Cancer J. Clin. 53:5-26）。
フォレート受容体（ＦＯＬＲ１）は別名フォレート受容体アルファ又はフォレート結合蛋白としても知られており、細胞の原形質膜上に発現されるＮ−グリコシル化蛋白である。ＦＯＬＲ１は葉酸に対し、そして数種の還元型葉酸誘導体に対して高親和性を有する。ＦＯＬＲ１は細胞内部への生理学的フォレート、即ち５−メチルテトラヒドロフォレートの送達を媒介する。
ＦＯＬＲ１は大部分の卵巣癌において、並びに多くの子宮癌、子宮内膜癌、膵臓癌、腎臓癌、肺癌及び乳癌において過剰発現されるが、正常組織上でのＦＯＬＲ１の発現は近位尿細管、肺胞、膀胱、精巣、脈絡叢、及び甲状腺における上皮細胞の先端膜に限定される（Weitman SD,等、Cancer Res 52: 3396-3401(1992); Antony AC, AnnuRev Nutr 16: 501-521 (1996); Kalli KR,等、Gynecol Oncol 108:619-626 (2008)）。ＦＯＬＲ１のこの発現パターンは、それをＦＯＬＲ１指向癌治療のための望ましい標的としている。
卵巣癌は典型的には進行期までは非徴候性であるため、それは後期になって診断される場合が多く、現在使用可能な手順、典型的には外科的減量の後の化学療法剤で治療した場合には不良な予後となる（von Gruenigen V等、Cancer 112: 2221-2227(2008); Ayhan A等、Am JObstet Gynecol 196: 81 e81-86(2007); Harry VN等、Obstet GynecolSurv 64: 548-560 (2009)）。即ち、卵巣癌のためのより有効な治療薬が医療上明らかに望まれている。
３種の抗ＦＯＬＲ１抗体が潜在的抗癌薬として検討されている。ネズミモノクローナル抗体Ｍｏｖ１８及びＭｏｖ１９は１９８０年代後期に単離され（Miotti S等、Int J Cancer 39: 297-303 (1987)）、ＦＯＬＲ１をターゲティングすることが確認され（ConeyLR等、Cancer Res 51: 6125-6132 (1991)）、そして細胞傷害リボソーム不活性化蛋白とのコンジュゲートとして抗原発現癌細胞を根絶するそれらの能力に関して前臨床試験において試験されている（CondeFP等、Eur J Biochem 178: 795-802 (1989)）。
Ｍｏｖ１９は細胞傷害Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞をターゲティングする二重特異性抗体として（MezzanzanicaD等、Int J Cancer 41: 609-615 (1988); Ferrini S等、IntJ Cancer Suppl 4: 53-55 (1989); Ferrini S等、Int J Cancer 48:227-233 (1991)）、そしてインビボにおけるインターロイキン−２とのＭｏｖ１９の単鎖Ｆｖの融合蛋白として（Melani C等、Cancer Res58: 4146-4154 (1998)）試験されている。キメラ（ネズミ可変／ヒト定常）抗ＦＯＬＲ１抗体Ｍｏｖ１８およびＭｏｖ１９はインビトロにおいてＦＯＬＲ１発現腫瘍の細胞傷害性免疫細胞依存性殺傷を媒介するそれらの能力に関して前臨床的に検討されており（ConeyLR等、Cancer Res 54: 2448-2455 (1994)）、そしてキメラＭｏｖ１８−ＩｇＥはＩｇＥ依存性免疫治療前臨床モデルにおいて試験されている（KaragiannisSN等、J Immunol 179: 2832-2843(2007); Gould HJ等、Eur J Immunol 29: 3527-3537(1999)）。
Ｍｏｖ１８は前臨床試験において、そしてその後１９９０年代初頭に臨床治験において（Zacchetti A等、Nucl Med Biol 36: 759-770 (2009)）種々の放射性核種とのコンジュ
ゲートの形態で研究され、それは如何なる薬物も臨床使用のために認可されずに終了している。
ＭＯＲＡｂ００３、即ち、ネズミモノクローナル抗ＦＯＬＲ１抗体ＬＫ２６のヒト化形態は非修飾抗体として（EbelW等、Cancer Immun 7:6 (2007)）、そして１１１Ｉｎ放射性核種とのコンジュゲートとして（Smith-JonesPM等、Nucl Med Biol 35: 343-351(2008)）前臨床的に評価されており、そして現在は非修飾抗体として臨床治験に付されている（D.K.Armstrong等、J. Clin. Oncol. 26: ２００８年５月２０日補遺;要約5500）。
Jemal等、2003,Cancer J.Clin. 53:5-26 WeitmanSD,等、CancerRes 52: 3396-3401 (1992) AntonyAC, Annu Rev Nutr 16: 501-521 (1996) Kalli KR,等、GynecolOncol 108: 619-626 (2008) vonGruenigen V等、Cancer112: 2221-2227 (2008) AyhanA等、Am J ObstetGynecol 196: 81 e81-86 (2007) HarryVN等、ObstetGynecol Surv 64: 548-560 (2009) MiottiS等、Int J Cancer39: 297-303 (1987) ConeyLR等、Cancer Res51: 6125-6132 (1991) Conde FP等、Eur JBiochem 178: 795-802 (1989) Mezzanzanica D等、IntJ Cancer 41: 609-615 (1988) Ferrini S等、Int JCancer Suppl 4: 53-55 (1989) Ferrini S等、Int JCancer 48: 227-233 (1991) Melani C等、Cancer Res58: 4146-4154 (1998) Coney LR等、Cancer Res54: 2448-2455 (1994) Karagiannis SN等、JImmunol 179: 2832-2843 (2007) Gould HJ等、Eur JImmunol 29: 3527-3537 (1999) Zacchetti A等、NuclMed Biol 36: 759-770 (2009) Ebel W等、Cancer Immun7:6 (2007) Smith-Jones PM等、NuclMed Biol 35: 343-351 (2008) D. K. Armstrong等、J.Clin. Oncol. 26: ２００８年５月２０日補遺;要約5500
本発明はヒトフォレート受容体１に結合する新規な抗体、これらの抗体を含むイムノコンジュゲート、及びそれらの使用方法を提供する。本発明は又、新規なポリペプチド、例えばヒトフォレート受容体１に結合する抗体、そのような抗体のフラグメント、及びそのような抗体に関連する他のポリペプチドを提供する。ポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド、並びにポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。本発明のポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドを含む細胞も提供される。新規なフォレート受容体１抗体又はイムノコンジュゲートを含む組成物（例えば医薬組成物）もまた提供される。更に又、新規なフォレート受容体１抗体又はイムノコンジュゲートを作成及び使用する方法、例えば腫瘍生育を阻害及び／又は癌を治療するための新規なフォレート受容体１抗体又はコンジュゲートの使用方法も提供される。
即ち、１つの側面において、本発明はヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで抗体は以下：（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；を含む。特定の実施形態においては、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体キメラＭｏｖ１９と実質的に同じ親和性でヒトフォレート受容体１に結合する。特定の実施形態においては、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖ＣＤＲ２配列ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む。
特定の実施形態においては、結合親和性はフローサイトメトリー、Ｂｉａｃｏｒｅ又はラジオイムノアッセイにより計測される。
別の実施形態においては、本発明は、抗体が以下：（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明は配列番号６の重鎖を含むヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態においては、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントは２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２、ＰＴＡ−１０７７３又は１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによりコードされる。
特定の実施形態において、本発明は、ＦＯＬＲ１への特異的結合に関して、（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；を含む抗体と競合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、ヒト化抗体は重鎖ＣＤＲ２配列ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む。
特定の実施形態においては、本発明は、配列番号４に少なくとも約９０％同一である重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９０％同一である軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントであるポリペプチドを提供する。別の実施形態においては、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは配列番号４に少なくとも約９５％同一である重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９５％同一である軽鎖可変ドメインを含む。その他の実施形態において、ヒト化抗体は
抗原結合フラグメントは配列番号４に少なくとも約９９％同一である重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９９％同一である軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態においては、ヒト化抗体は抗原結合フラグメントは配列番号４の重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態においては、本発明は配列番号８８〜１１９に少なくとも約９０％同一であるポリペプチド、抗体、又は抗原結合フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、本発明は配列番号８８〜１１９に少なくとも約９５％同一であるポリペプチド、抗体、又は抗原結合フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、本発明は配列番号８８〜１１９に少なくとも約９９％同一であるポリペプチド、抗体、又は抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明は、真核生物細胞においてｃｈＭｏｖ１９よりも少なくとも１０倍高値で発現されるヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、真核生物細胞はＨＥＫ−２９３Ｔ細胞である。
特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８を）含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含むヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含むヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含むヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明のポリペプチドは完全長抗体又は抗原結合フラグメントである。特定の実施形態においては、抗体又は抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ即ちｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディー、ＩｇＧ−ＣＨ２、ミニボディー、Ｆ（ａｂ'）３、テトラボディー、トリアボディー、ダイアボディー、単ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃである。
特定の実施形態においては、本発明の抗体又はポリペプチドは約１．０〜約１０ｎＭのＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する。１つの実施形態において抗体又はポリペプチドは約１．０ｎＭ又はそれより良好なＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する。特定の実施形態においては、結合親和性はフローサイトメトリー、Ｂｉａｃｏｒｅ又はラジオイムノアッセイにより計測される。
本発明は又、本発明の抗体を発現する細胞を培養すること；及び（ｂ）該培養細胞から抗体を単離することを含む、該抗体を作成する方法を提供する。特定の実施形態においては、細胞は真核生物の細胞である。
本発明は又、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）を有し、式中（Ａ）は本発明の抗体又は抗原結合フラグメント又はポリペプチドであり；（Ｌ）はリンカーであり；そして、（Ｃ）は細胞傷害剤であり；そして該リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
特定の実施形態においては、リンカーは切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸系リンカーよりなる群から選択される。その他の実施形態において、リンカーはＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）；及びＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、リンカーはＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である。
１つの実施形態において、イムノコンジュゲートはマイタンシノイド、マイタンシノイド類縁体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、ＣＣ−１０６５類縁体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類縁体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類縁体、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体又は該剤のプロドラッグよりなる群から選択される細胞傷害剤を含む。その他の実施形態において、細胞傷害剤はがマイタンシノイドである。別の実施形態においては、細胞傷害剤はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシンである。
１つの実施形態において、本発明は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
１つの実施形態において、本発明は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
１つの実施形態において、本発明は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
１つの実施形態において、本発明は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；及び、（Ｃ）；Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
１つの実施形態において、本発明は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；及び、（Ｃ）；Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを提供する。
本発明は又本発明の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲート及び製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態においては、医薬組成物は更に第１の抗癌剤を含む。
本発明は又、標識された本発明の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲートを含む診断試薬を提供する。１つの実施形態において、標識は放射標識、蛍光団、発色団、画像化剤及び金属イオンよりなる群から選択される。
本発明は又、本発明の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲートを含むキットを提供する。
本発明は又、対象に本発明の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド、イムノコンジュゲート又は医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、対象における腫瘍生育を阻害する方法を提供する。特定の実施形態においては、本発明は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）を有し、式中：（Ａ）はヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであり；（Ｌ）はリンカーであり；そして、（Ｃ）はマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体よりなる群から選択される細胞傷害剤であり；ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートの治療有効量を投与することを含み；ここでイムノコンジュゲートはＫＢ異種移植片モデルにおいて平均腫瘍体積を少なくとも２倍低減する、対象における腫瘍生育を阻害する方法を提供する。特定の実施形態においては、方法は（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；を含む抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む。その他の実施形態において、抗体はＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。
特定の実施形態においては、本発明は、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２、ＰＴＡ−１０７７３又は１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによりコードされる抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含む腫瘍生育を阻害するための方法を提供する。
別の実施形態においては、方法は配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含むイムノコンジュゲートを投与することを提供する。
別の実施形態においては、方法は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを投与することを提供する。
別の実施形態においては、方法は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；及び、（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；を含み；ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを投与することを提供する。
別の実施形態においては、方法は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；及び、（Ｃ）；Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；を含み；ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを投与することを提供する。
別の実施形態においては、方法は（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；及び、（Ｃ）；Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；を含み；ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートを投与することを提供する。
別の実施形態においては、方法は２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７５及びＰＴＡ−１０７７６を有するｈｕＦＲ−１−２１抗体を含むイムノコンジュゲートを投与することを含む。特定の実施形態においては、ｈｕＦＲ１−２１抗体は、以下：（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む。特定の実施形態においては、方法は（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、抗体がｈｕＦＲ１−４８抗体であるイムノコンジュゲートを投与することを含む。特定の実施形態においては、（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８を）含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、抗体がｈｕＦＲ１−４９抗体であるイムノコンジュゲートを投与することを含む。特定の実施形態においては、（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、抗体がｈｕＦＲ１−５７抗体であるイムノコンジュゲートを投与することを含む。特定の実施形態においては、（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、抗体がｈｕＦＲ１−６５抗体であるイムノコンジュゲートを投与することを含む。
１つの実施形態において、方法は卵巣腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、子宮腫瘍、子宮内膜腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、及び肺腫瘍の生育を阻害する。特定の実施形態においては、方法は卵巣腫瘍生育を阻害する。別の実施形態においては、本発明は肺腫瘍生育を阻害する。特定の実施形態においては、腫瘍生育の阻害は癌を治療するために使用される。その他の実施形態において、方法は第２の抗癌剤を対象に投与することを含む。特定の実施形態においては、第２の抗癌剤は化学療法剤である。
本発明は又、本発明の抗体、抗原結合フラグメント又はポリペプチドを生産する単離された細胞を提供する。
本発明は又、配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９０％同一である配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態においては、単離されたポリペプチドは、配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一である。別の実施形態においては、単離されたポリペプチドは、配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９９％同一である。本発明は又、配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７のポリヌクレオチドの何れかを含むベクターを提供する。別の実施形態においては、本発明は配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７のポリヌクレオチドを含有するベクターを含む宿主細胞を提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
抗体が下記：
（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２）
抗体キメラＭｏｖ１９と実質的に同じ親和性でヒトフォレート受容体１に結合する、項目１記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目３）
結合親和性がフローサイトメトリー、Ｂｉａｃｏｒｅ又はラジオイムノアッセイにより計測される、項目２記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目４）
重鎖ＣＤＲ２配列がＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む、項目１〜３の何れかに記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目５）
抗体が下記：
（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、
（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目６）
配列番号６の重鎖を含むヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目７）
２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２、ＰＴＡ−１０７７３又は１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによりコードされるヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目８）
ヒトフォレート受容体１への特異的結合に関して項目１〜７の何れかに記載の抗体と競合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目９）
配列番号４に少なくとも約９０％同一である重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９０％同一である軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目１０）
該重鎖可変ドメインが配列番号４に少なくとも約９５％同一であり、そして該軽鎖可変ドメインが配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９５％同一である、項目９記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目１１）
該重鎖可変ドメインが配列番号４に少なくとも約９９％同一であり、そして該軽鎖可変ドメインが配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９９％同一である、項目１０記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目１２）
該重鎖可変ドメインが配列番号４に同一であり、そして該軽鎖可変ドメインが配列番号１０又は配列番号１１に同一である、項目１１記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目１３）
該抗体が真核生物細胞においてｃｈＭｏｖ１９よりも少なくとも１０倍高値で発現される、項目１〜１２の何れか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目１４）
該真核生物細胞がＨＥＫ−２９３Ｔ細胞である、項目１３記載のヒト化抗体。
（項目１５）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号４に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド;及び／又は、
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目１６）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号４に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド;及び／又は、
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目１５記載のポリペプチド。
（項目１７）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号４に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド;及び／又は、
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目１６記載のポリペプチド。
（項目１８）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号４のポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１のポリペプチド；
を含む、項目１７記載のポリペプチド。
（項目１９）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号４のポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１のポリペプチド；
を含む、項目１８記載のポリペプチド。
（項目２０）
抗体が下記：
（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、
（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２１）
抗体が下記：
（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、
（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２２）
抗体が下記：
（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、
（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２３）
抗体が下記：
（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、
（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２４）
抗体が下記：
（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、
（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
（項目２５）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９７に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９６に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目２６）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９７に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９６に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目２５記載のポリペプチド。
（項目２７）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９７に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９６に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目２６記載のポリペプチド。
（項目２８）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９７のポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９６のポリペプチド；
を含む、項目２７記載のポリペプチド。
（項目２９）
該ポリペプチドが配列番号９７のポリペプチド及び配列番号９６のポリペプチドを含む、項目２８記載のポリペプチド。
（項目３０）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９９に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９８に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目３１）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９９に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９８に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目３０記載のポリペプチド。
（項目３２）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９９に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９８に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目３１記載のポリペプチド。
（項目３３）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号９９のポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号９８のポリペプチド；
を含む、項目３2記載のポリペプチド。
（項目３４）
該ポリペプチドが配列番号９９のポリペプチド及び配列番号９８のポリペプチドを含む、項目３３記載のポリペプチド。
（項目３５）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０１に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１００に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目３６）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０１に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１００に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目３５記載のポリペプチド。
（項目３７）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０１に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１００に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目３６記載のポリペプチド。
（項目３８）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１０１のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１００のポリペプチドを含む、項目３７記載のポリペプチド。
（項目３９）
該ポリペプチドが配列番号１０１のポリペプチド及び配列番号１００のポリペプチドを含む、項目３８記載のポリペプチド。
（項目４０）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０３に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１０２に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目４１）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０３に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１０２に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目４０記載のポリペプチド。
（項目４２）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１０３に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１０２に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目４１記載のポリペプチド。
（項目４３）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１０３のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１０２のポリペプチドを含む、項目４２記載のポリペプチド。
（項目４４）
該ポリペプチドが配列番号１０３のポリペプチド及び配列番号１０２のポリペプチドを含む、項目４３記載のポリペプチド。
（項目４５）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１３に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１２に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目４６）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１３に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１２に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目４５記載のポリペプチド。
（項目４７）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１３に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１２に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目４６記載のポリペプチド。
（項目４８）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１１３のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１１２のポリペプチドを含む、項目４７記載のポリペプチド。
（項目４９）
該ポリペプチドが配列番号１１３のポリペプチド及び配列番号１１２のポリペプチドを含む、項目４８記載のポリペプチド。
（項目５０）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１５に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１４に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目５１）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１５に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１４に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目５０記載のポリペプチド。
（項目５２）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１５に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１４に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目５１記載のポリペプチド。
（項目５３）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１１５のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１１４のポリペプチドを含む、項目５２記載のポリペプチド。
（項目５４）
該ポリペプチドが配列番号１１５のポリペプチド及び配列番号１１４のポリペプチドを含む、項目５３記載のポリペプチド。
（項目５５）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１７に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１６に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目５６）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１７に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１６に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目５５記載のポリペプチド。
（項目５７）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１７に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１６に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目５６記載のポリペプチド。
（項目５８）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１１７のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１１６のポリペプチドを含む、項目５７記載のポリペプチド。
（項目５９）
該ポリペプチドが配列番号１１７のポリペプチド及び配列番号１１６のポリペプチドを含む、項目５8記載のポリペプチド。
（項目６０）
ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１９に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１８に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するポリペプチド。
（項目６１）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１９に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１８に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目６０記載のポリペプチド。
（項目６２）
該ポリペプチドが下記：
（ａ）配列番号１１９に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は、
（ｂ）配列番号１１８に少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド；
を含む、項目６１記載のポリペプチド。
（項目６３）
該ポリペプチドが（ａ）配列番号１１９のポリペプチド；及び／又は、（ｂ）配列番号１１８のポリペプチドを含む、項目６２記載のポリペプチド。
（項目６４）
該ポリペプチドが配列番号１１９のポリペプチド及び配列番号１１８のポリペプチドを含む、項目６３記載のポリペプチド。
（項目６５）
抗体である項目２５〜６５の何れか１項に記載の抗体。
（項目６６）
完全長抗体である項目１〜２４の何れか１項に記載の抗体。
（項目６７）
抗原結合フラグメントである項目１〜２４の何れか１項に記載の抗体。
（項目６８）
該抗体又は抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ即ちｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディー、ＩｇＧ−ＣＨ２、ミニボディー、Ｆ（ａｂ'）３、テトラボディー、トリアボデ
ィー、ダイアボディー、単ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、項目６７記載の抗体。
（項目６９）
約１．０〜約１０ｎＭのＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する、項目１〜６８の何れか１項に記載の抗体又はポリペプチド。
（項目７０）
約１．０ｎＭ又はそれより良好なＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する、項目１〜６９の何れか１項に記載の抗体又はポリペプチド。
（項目７１）
結合親和性がフローサイトメトリー、Ｂｉａｃｏｒｅ又はラジオイムノアッセイにより計測される、項目６９又は７０記載の抗体。
（項目７２）
（ａ）項目１〜２４の何れか１項に記載の抗体を発現する細胞を培養すること；及び（ｂ）該培養細胞から抗体を単離することを含む該抗体を作成する方法。
（項目７３）
該細胞が真核生物の細胞である項目７２記載の方法。
（項目７４）
式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）を有し、式中：
（Ａ）は項目１〜７１の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント又はポリペプチドであり；
（Ｌ）はリンカーであり；そして、
（Ｃ）は細胞傷害剤であり；
そして該リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲート。
（項目７５）
該リンカーが切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸系リンカーよりなる群から選択される、項目７４記載のイムノコンジュゲート。
（項目７６）
該リンカーがＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）；及びＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）よりなる群から選択される、項目７５記載のイムノコンジュゲート。
（項目７７）
該リンカーがＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である、項目７５記載のイムノコンジュゲート。
（項目７８）
該リンカーがＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）である、項目７５記載のイムノコンジュゲート。
（項目７９）
該細胞傷害剤がマイタンシノイド、マイタンシノイド類縁体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、ＣＣ−１０６５類縁体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類縁体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類縁体、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体又は該剤のプロドラッグよりなる群から選択される、項目７４〜７８の何れか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目８０）
該細胞傷害剤がマイタンシノイドである、項目７９記載のイムノコンジュゲート。
（項目８１）
該細胞傷害剤がＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシンである、項目８０記載のイムノコンジュゲート。
（項目８２）
下記：
（Ａ）配列番号９７、９９、１０１又は１０３の重鎖可変ドメイン及び配列番号９６、９８、１００又は１０２の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８３）
下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８４）
下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８５）
下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８６）
下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８７）
下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；
を含み、ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
（項目８８）
第２の（Ｃ）を更に含む、項目７４〜８７の何れか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目８９）
第３の（Ｃ）を更に含む、項目８８記載のイムノコンジュゲート。
（項目９０）
第４の（Ｃ）を更に含む、項目８９記載のイムノコンジュゲート。
（項目９１）
２〜６個の（Ｃ）を含む、項目７４〜９０の何れか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目９２）
３〜４個の（Ｃ）を含む、項目７４〜９０の何れか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目９３）
項目１〜７１及び７４〜９２の何れか１項に記載の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲート及び製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
（項目９４）
イムノコンジュゲートが（Ａ）当たり平均で約３〜約４個の（Ｃ）を有する項目７４〜９２の何れか１項に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物。
（項目９５）
イムノコンジュゲートが（Ａ）当たり平均で約３．５±０．５個の（Ｃ）を有する、項目４７記載の医薬組成物。
（項目９６）
第２の抗癌剤を更に含む、項目９３〜９５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目９７）
標識されている項目１〜７１及び７４〜９２の何れか１項に記載の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲートを含む診断試薬。
（項目９８）
該標識が放射標識、蛍光団、発色団、画像化剤及び金属イオンよりなる群から選択される、項目９７記載の診断試薬。
（項目９９）
項目１〜７１及び７４〜９２の何れか１項に記載の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド又はイムノコンジュゲートを含むキット。
（項目１００）
対象に項目１〜７１及び７１〜９５の何れか１項に記載の抗体、抗原結合フラグメント、ポリペプチド、イムノコンジュゲート又は医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、対象における腫瘍生育を阻害する方法。
（項目１０１）
式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）を有し、式中：
（Ａ）はヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであり；
（Ｌ）はリンカーであり；そして、
（Ｃ）はマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体よりなる群から選択される細胞傷害剤であり；ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結するイムノコンジュゲートの治療有効量を投与することを含み；
ここでイムノコンジュゲートはＫＢ異種移植片モデルにおいて平均腫瘍体積を少なくとも２倍低減する、対象における腫瘍生育を阻害する方法。
（項目１０２）
該抗体又はその抗原結合フラグメントが下記：
（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１０３）
重鎖ＣＤＲ２配列がＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む、項目１０２記載の方法。
（項目１０４）
該抗体又はその抗原結合フラグメントが２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２、ＰＴＡ−１０７７３又は１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによりコードされる、項目１０１記載の方法。
（項目１０５）
該イムノコンジュゲートが下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１０６）
該イムノコンジュゲートが下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含み；
ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、項目１０１記載の方法。
（項目１０７）
該イムノコンジュゲートが下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン；
を含み；
ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、項目１０１記載の方法。
（項目１０８）
該イムノコンジュゲートが下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；
を含み；
ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、項目１０１記載の方法。
（項目１０９）
該イムノコンジュゲートが下記：
（Ａ）配列番号４の重鎖可変ドメイン及び配列番号１０又は配列番号１１の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体；
（Ｌ）Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；及び、
（Ｃ）Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；
を含み；
ここで（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、項目１０１記載の方法。
（項目１１０）
該抗体が２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７５及びＰＴＡ−１０７７６を有するｈｕＦＲ−１−２１抗体である、項目１０１記載の方法。
（項目１１１）
該抗体がｈｕＦＲ１−２１抗体であり、ここで該抗体が下記：
（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１１２）
該抗体がｈｕＦＲ１−４８抗体であり、ここで該抗体が下記：
（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１１３）
該抗体がｈｕＦＲ１−４９抗体であり、ここで該抗体が下記：
（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１１４）
該抗体がｈｕＦＲ１−５７抗体であり、ここで該抗体が下記：
（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１１５）
該抗体がｈｕＦＲ１−６５抗体であり、ここで該抗体が下記：
（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、
（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、項目１０１記載の方法。
（項目１１６）
腫瘍が卵巣腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、子宮腫瘍、子宮内膜腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、及び肺腫瘍よりなる群から選択される、項目１００〜１１５の何れか１項に記載の方法。
（項目１１７）
腫瘍が卵巣腫瘍である、項目１１６記載の方法。
（項目１１８）
腫瘍が肺腫瘍である、項目１１６記載の方法。
（項目１１９）
癌を治療するために腫瘍生育を阻害する、項目１００〜１１８の何れか１項に記載の方法。
（項目１２０）
対象に第２の抗癌剤を投与することをさらに含む、項目１１９記載の方法。
（項目１２１）
該第２の抗癌剤が化学療法剤である、項目１２０記載の方法。
（項目１２２）
項目１〜７１の何れか１項に記載の抗体、抗原結合フラグメント又はポリペプチドを生産する単離された細胞。
（項目１２３）
配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９０％同一である配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
（項目１２４）
該配列が配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一である、項目１２３記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目１２５）
該配列が配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列に少なくとも９９％同一である、項目１２４記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目１２６）
項目１２３〜１２５の何れか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目１２７）
項目１２６記載のベクターを含む宿主細胞。
図１はネズミ（ｍｕＭｏｖ１９）及びヒト化（ｈｕＭｏｖ１９）Ｍｏｖ１９に関する表面残基を示す。（Ａ）ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。＊７４位は表面位置ではないが、バージョン１．００におけるコンセンサスＮ連結グリコシル化部位を除去するために、この位置をスレオニンに変更し（この位置における最も一般的なヒト残基）、これによりバージョン１．６０とした。（Ｂ）ネズミ及びヒトＭｏｖ１９重鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９重鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。ＦＲ１−２１（Ｃ）及び（Ｄ）について同様の表面残基を与えている。 図１はネズミ（ｍｕＭｏｖ１９）及びヒト化（ｈｕＭｏｖ１９）Ｍｏｖ１９に関する表面残基を示す。（Ａ）ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。＊７４位は表面位置ではないが、バージョン１．００におけるコンセンサスＮ連結グリコシル化部位を除去するために、この位置をスレオニンに変更し（この位置における最も一般的なヒト残基）、これによりバージョン１．６０とした。（Ｂ）ネズミ及びヒトＭｏｖ１９重鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９重鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。ＦＲ１−２１（Ｃ）及び（Ｄ）について同様の表面残基を与えている。 図１はネズミ（ｍｕＭｏｖ１９）及びヒト化（ｈｕＭｏｖ１９）Ｍｏｖ１９に関する表面残基を示す。（Ａ）ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。＊７４位は表面位置ではないが、バージョン１．００におけるコンセンサスＮ連結グリコシル化部位を除去するために、この位置をスレオニンに変更し（この位置における最も一般的なヒト残基）、これによりバージョン１．６０とした。（Ｂ）ネズミ及びヒトＭｏｖ１９重鎖表面残基。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９重鎖可変領域フレーム表面残基及び位置数（Ｋａｂａｔシステム）を示す。元のネズミ配列とは異なるヒト残基には下線を付す。ＦＲ１−２１（Ｃ）及び（Ｄ）について同様の表面残基を与えている。 図２はキメラＭｏｖ１９及びｈｕＭｏｖ１９重鎖及び軽鎖の可変ドメイン及びｍｕＦＲ１−２１及びｈｕＦＲ１−２１重鎖及び軽鎖可変ドメインのアライメントを示す。Ｍｏｖ１９及びＦＲ１−２１可変領域のリサーフィシング配列とそれらのネズミ対応物とのアライメント。Ａ）及びＣ）軽鎖可変ドメイン；Ｂ）及びＤ）重鎖可変ドメイン。ダッシュ「−」はネズミ配列との同一性を示す。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ定義）には下線を付す。 図３はＨＥＫ細胞におけるキメラＭｏｖ１９とｈｕＭｏｖ１９の発現を示す。キメラ及びヒトＭｏｖ１９発現プラスミドを懸濁ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞内に一過性にトランスフェクトし、７日後に採取し、そして発現された抗体を定量的ＥＬＩＳＡにより測定した。軽鎖及び重鎖のプラスミドは３：１又は６：１のそれぞれのモル比でトランスフェクトした。 図４は抗ＦＯＬＲ１抗体の結合特異性を、それらのＦＯＬＲ１発現３００−１９細胞への結合により検出したものである。フローサイトメトリーによる３００−１９−ＦＯＬＲ１細胞へのｈｕＭｏｖ１９の結合。ＦＯＬＲ１を発現している３００−１９親細胞。グレー塗りつぶし部分は細胞外自己蛍光を示し；黒点線はＦＩＴＣにコンジュゲートした抗ヒト二次抗体と共にインキュベートした細胞を示し、黒実線はｈｕＭｏｖ１９抗体及びＦＩＴＣにコンジュゲートした抗ヒト二次抗体と共にインキュベートした細胞を示す。 図５は抗ＦＯＬＲ１抗体及びイムノコンジュゲートの結合親和性及びインビトロの細胞傷害活性を示す。ｈｕＭｏｖ１９及び種々のネズミ及びヒト化ＦＲ−１抗体の結合親和性をＳＫＯＶ３細胞において計測した。列挙した抗体のＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４コンジュゲートのインビトロの細胞傷害活性も又アッセイした。 図６はイムノコンジュゲートの抗体依存性細胞性細胞傷害を示す。ｈｕＭｏｖ１９、ｈｕＦＲ１−２１及びＭｏｒ００３のＡＤＣＣ活性をＩｇｒｏｖ１細胞に対してアッセイした。Ｉｇｒｏｖ１は標的：ＮＫ細胞比１：４の１５００細胞／ウェルとともにインキュベートした。 図７はＫＢ細胞におけるｈｕＦＲ１−２１−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４及びｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４の連続曝露の細胞傷害活性を示す。過剰量の非コンジュゲート抗体は、それらをＫＢ細胞の存在下に同時インキュベートした場合に、イムノコンジュゲートの活性を抑制し、細胞傷害活性が抗原依存性であることを示した。 図８はＫＢ異種移植片モデルにおけるｈｕＭｏｖ１９ターゲティングコンジュゲートのインビボの薬効を示す。ＦＯＬＲ１−ターゲティング切断可能コンジュゲートｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（Ｂ）を非ＦＯＬＲ１−ターゲティングｈｕＣ２４２−ＳＰＤＭ−ＤＭ４（Ｄ）と対比させながら、そして、切断不可能コンジュゲートｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４（Ｃ）をｈｕＣ２４２−ＰＥＧ４Mａｌ−ＤＭ４（Ｅ）と対比させながら、ＳＣＩＤマウスに皮下移植されたＫＢ細胞の樹立された異種移植片モデルを用いて試験した。ｈｕＭｏｖ１９によるＦＯＬＲ１のターゲティングは平均腫瘍体積の有意な低減をもたらした。 図９はＫＢ異種移植片モデルにおけるネズミＦＲ−１抗ＦＯＬＲ１抗体と比較した場合のｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４のインビボの薬効を示す。未コンジュゲート又はＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４とコンジュゲートしたＦＲ−１シリーズの抗体を、ＫＢ異種移植片腫瘍モデルにおいてｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４と比較しながら平均腫瘍体積を低減するそれらの能力に関して試験した。（Ａ）ＦＲ−１−９、（Ｂ）ＦＲ−１−１３、（Ｃ）ＦＲ−１−２２及び（Ｄ）ＦＲ−１−２３。 図１０はＫＢ異種移植片モデルにおけるｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４及びｈｕＦＲ１−２１−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４のインビボの薬効を示す。接種後第６日にｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４及びｈｕＦＲ１−２１−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４の１０ｍｇ／ｋｇの単回注射を行った。ｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４及びｈｕＦＲ１−２１−ＰＥＧ４−Mａｌ−ＤＭ４の両方が平均腫瘍体積の有意な低減を示した。「平均ＴＶ］とは平均腫瘍体積をさす。 図１１はｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４がＫＢ異種移植片モデルにおいて用量依存性の活性を示したことを表わしている。イムノコンジュゲートの用量依存性活性は試験した用量の範囲にわたってアッセイした。毎週投薬は抗腫瘍活性の向上をもたらした。高い薬物負荷のみが１０ｍｇ／ｋｇ用量群において活性を限定的に改善し、より低用量の群では活性は低減していた。３．４ＤＡＲとは抗体当たり３．７薬物分子を指す。 図１２は種々のリンカーを用いてＤＭ１及びＤＭ４にコンジュゲートしたｈｕＭｏｖ１９のインビボの薬効を示す。ｈｕＭｏｖ１９を、抗体当たり３．９薬物分子でＳＭＣＣ−ＤＭ１に、抗体当たり３．７薬物分子でスルホ−ｍａｌ−ＤＭ４に（Ｂ）、そして抗体当たり８．２３薬物分子でスルホ−ｍａｌ−ＤＭ４に（Ｃ）コンジュゲートし、そしてｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４と比較しながら種々の濃度において平均腫瘍体積を低減するそれらの能力についてアッセイした。 図１３は種々のリンカーを用いてＤＭ１及びＤＭ４にコンジュゲートしたｈｕＭｏｖ１９のインビボの薬効を示す。ｈｕＭｏｖ１９を、抗体当たり４．３薬物分子でＳＰＰ−ＤＭ１に、抗体当たり３．８薬物分子でスルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４に、抗体当たり３．８薬物分子でＳＰＤＢ−ＤＭ４に、そして抗体当たり６．８薬物分子でスルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４にコンジュゲートし、そして平均腫瘍体積を低減するそれらの能力についてアッセイした。マウスには５ｍｇ／ｋｇ（Ａ）及び２．５ｍｇ／ｋｇ（Ｂ）の上記したコンジュゲートの１つ、又はＰＢＳ単独を投与した。 図１４はＯＶＣＡＲ−３異種移植片腫瘍モデルにおけるｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のインビボの薬効を示す。マウスには２５、５０又は１００μｇ／ｋｇのｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、又はＰＢＳ単独を投与した。 図１５はＩＧＲＯＶ−１異種移植片腫瘍モデルにおけるｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のインビボの薬効を示す。マウスには２５、５０又は１００μｇ／ｋｇのｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、又はＰＢＳ単独を投与した。 図１６はＯＶ−９０異種移植片腫瘍モデルにおけるｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のインビボの薬効を示す。マウスには２５、５０又は１００μｇ／ｋｇのｈｕＭｏｖ１９−スルホＳＰＤＢ−ＤＭ４、又はＰＢＳ単独を投与した。 図１７はＫＢ異種移植片モデルにおけるイムノコンジュゲートの薬効に対する切断可能及び切断不可能なリンカーの作用を示す。 図１８は（Ａ）ＫＢ異種移植片モデル（Ｂ）ＯＶＣＡＲ−３異種移植片モデルにおけるイムノコンジュゲートの薬効に対する切断可能なリンカーの作用を示す。 図１９はＫＢ及び異種移植片腫瘍モデルにおけるｈｕＦＲ１−４８、ｈｕＦＲ１−４９、ｈｕＦＲ１−５７及びｈｕＦＲ１−６５−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のインビトロ及びインビボノ薬効を示す。マウスには２００μｇ／ｋｇの単回用量を投与した。
本発明はヒトフォレート受容体１（ＦＯＬＲ１）に結合するポリペプチド、例えば抗体及びイムノコンジュゲートを包含するがこれらに限定されない新しい剤を提供する。関連のポリペプチド及びポリヌクレオチド、ＦＯＬＲ１結合剤を含む組成物、及びＦＯＬＲ１結合剤を作成する方法も提供する。新しいＦＯＬＲ１結合剤を使用する方法、例えば腫瘍の生育を阻害する、及び／又は癌を治療する方法もまた提供する。
１．定義
本発明の理解を容易にするために、多くの用語及びフレーズを以下に定義する。
「ヒトフォレート受容体１」即ち「ＦＯＬＲ１」という用語は、本明細書において使用する場合、特段の記載が無い限り何れかのネイティブのひとＦＯＬＲ１を指す。「ＦＯＬＲ１」という用語は又、「完全長」の、未プロセシングのＦＯＬＲ１、並びに細胞内のプロセシングの結果生じる何れかの形態のＦＯＬＲ１を包含する。用語は又、天然に存在するＦＯＬＲ１変異体、例えばスプライス変異体、対立遺伝子変異体及びアイソフォームを包含する。本明細書に記載したＦＯＬＲ１ポリペプチドは種々の原料から、例えばヒト組織型から、又はその他の減量から単離するか、又は組み換え又は合成の方法により調製することができる。ＦＯＬＲ１配列の例は、ＮＣＢＩレファレンス番号Ｐ１５３２８、ＮＰ＿００１０９２２４２．１、ＡＡＸ２９２６８．１、ＡＡＸ３７１１９．１、ＮＰ＿０５７９３７．及びＮＰ＿０５７９３６．１を包含するがこれらに限定されない。
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内部の抗原認識部位少なくとも１つを介して、蛋白、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又はこれらの組み合わせのような標的を認識して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書において使用する場合、「抗体」という用語は未損傷のポリクローナル抗体、未損傷のモノクローナル抗体、抗体フラグメント（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）突然変異体、少なくとも２つの未損傷抗体から形成された二重特異性抗体のような多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合蛋白、及び、抗体が所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、抗原認識部位を含むいずれかの他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと称される自身の重鎖定常ドメインのアイデンティティーに基づいて、免疫グロブリンの５主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、又はそのサブクラス（アイソタイプ）（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）の何れかであることができる。異なるクラスの免疫グロブリンは異なる良く知られたサブユニット構造及び三次元配置を有する。抗体はネイキッドであるか、毒素、放射性同位体等のような他の分子にコンジュゲートされていることができる。
「ブロッキング」抗体又は「拮抗剤」抗体とはＦＯＬＲ１ような自身が結合する抗原の生物学的活性を阻害又は低減するものである。一部の実施形態においてはブロッキング抗体又は拮抗剤抗体は抗原の生物学的活性を実質的に、又は完全に阻害する。望ましくは生物学的活性は１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％までも低減することができる。
「抗ＦＯＬＲ１抗体」又は「ＦＯＬＲ１に結合する抗体」という用語はＦＯＬＲ１をターゲティングする場合において診断薬及び／又は治療剤として抗体が有用であるように、十分な親和性を持ってＦＯＬＲ１に結合することができる抗体を指す。未関連の非ＦＯＬＲ１蛋白への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により計測した場合にＦＯＬＲ１への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態においてはＦＯＬＲ１に結合する抗体は≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。
「抗体フラグメント」という用語は未損傷の抗体の一部分を指し、そして未損傷の抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、線状抗体、単鎖抗体、及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を包含するがこれらに限定されない。
「モノクローナル抗体」とは単一の抗原決定基、即ちエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均質な抗体集団を指す。これは種々異なる抗原決定基に対して指向された種々異なる抗体を典型的には包含しているポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は未損傷及び完全長のモノクローナル抗体、並びに抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）突然変異体、抗体部分を含む融合蛋白、及び抗原認識部位を含む何れかの他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。更に又、「モノクローナル抗体」とはハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、及びトランスジェニック動物による方法を包含するがこれらに限定されない態様の何れかにより作成された抗体を指す。
「ヒト化抗体」という用語は最小限の非ヒト（例えばネズミ）配列を含有する特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、又はそのフラグメントである非ヒト（例えばネズミ）抗体の形態を指す。典型的にはヒト化抗体は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種（例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲに由来する残基により、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が置き換えられているヒト免疫グロブリンである(Jones等、1986, Nature, 321:522-525; Riechmann等、1988, Nature,332:323-327; Verhoeyen等、1988,Science, 239:1534-1536)。一部の例においては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種由来抗体中の相当する残基で置き換えられている。ヒト化抗体は更に抗体の特異性、親和性及び／又は能力を精鋭化及び最適化するためにＦｖフレームワーク内及び／又は置き換えられた非ヒト残基内部における追加的残基の置換により修飾できる。一般的にヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに相当するＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てを含有する可変ドメイン少なくとも１つ、そして典型的には２つ又は３つの実質的に全てを含むことになり、一方ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は又、免疫グロブリン定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むこともできる。ヒト化抗体を形成するために使用される方法の例は米国特許５，２２５，５３９又は５，６３９，６４１号に記載されている。
抗体の「可変領域」とは単独又は組み合わせにおいて、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）よりなる。各鎖におけるＣＤＲはＦＲにより近接して共に保持されており、そして他の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。ＣＤＲを決定するためには少なくとも２つの手法、即ち：（１）種間の配列変動性に基づくアプローチ（即ちKabat等、Sequences of Proteins ofImmunological Interest, (5th 編、1991,National Institutesof Health, Bethesda Md.)）；及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づいたアプローチ（Al-lazikaniet al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)）が存在する。更に又、これらの２つのアプローチの組み合わせがＣＤＲを決定するために当該分野で使用される場合もある。
Ｋａｂａｔナンバリングシステムは一般的に可変ドメイン内の残基（概ね、軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を指す場合に使用される（例えばKabat等、Sequences of Immunological Interest.5th Ed. Public HealthService, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(1991)）。
Ｋａｂａｔの場合のアミノ酸位置のナンバリングはKabat等、Sequencesof Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md. (1991)における抗体のコンピレーションの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対して使用されるナンバリングシステムである。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短鎖化、又はそれへの挿入に相当する、より少数又は追加のアミノ酸を含有する場合がある。例えば、重鎖可変ドメインはＨ２の残基５２の後の単一のアミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えばＫａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃ等）を包含する場合がある。残基のＫａｂａｔナンバリングは「標準的」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列との、抗体の配列の相同性の領域におけるアライメントにより所定の抗体について決定することができる。Ｃｈｏｔｈｉａは代わりに構造ループの箇所を指している（Chothiaand Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。Ｋａｂａｔのナンバリング法を用いてナンバリングした場合のＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの終点はループの長さによりＨ３２とＨ３４の間で変動する（その理由はＫａｂａｔのナンバリング法はＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置いており；３５Ａと３５Ｂの何れも存在しない場合はループは３２で終点となり；３５Ａのみが存在する場合は、ループは３３で終点隣；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合は、ループは３４で終点となる）。ＡｂＭ超可変領域はＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループの間の妥協点を示しており、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウエアにより使用されている。
「ヒト抗体」という用語は、ヒトにより作成された抗体、又は当該分野で知られている何れかの手法を用いて人工的に生成された抗体に相当するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、未損傷又は完全長の抗体、そのフラグメント、及び／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／又は軽鎖のポリペプチドを含む抗体、例えばネズミ軽鎖及びヒト重鎖のポリペプチドを含む抗体を包含する。
「キメラ抗体」という用語は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種から誘導されている抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性及び能力を有する哺乳類の１種（例えばマウス、ラット、ウサギ等）から誘導された抗体の可変領域に相当し、そして、定常領域はその種における免疫応答を誘発することを回避するために別のもの（通常はヒト）から誘導された抗体中の配列に相同である。
「エピトープ」又は「抗原決定基」という用語は、本明細書においては互換的に使用され、そして特定の抗体により認識され、そして特異的に結合されることができる抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは蛋白の３次折り畳みにより並置された連続アミノ酸及び非連続アミノ酸の両方から形成できる。連続アミノ酸から形成されたエピトープは典型的には蛋白変性時に保持されるのに対し、３次折り畳みにより形成されるエピトープは典型的には蛋白変性時に消失する。エピトープは典型的には少なくとも３つ、そしてより普通には少なくとも５又は８〜１０個のアミノ酸をユニークな空間的コンホーメーションにおいて包含している。
「結合親和性」とは一般的に、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合相手（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の総計の強度を指す。特段の記載が無い限り、本明細書において使用する場合、「結合親和性」とは結合対のメンバー（例えば抗体と抗原）の間の１：１相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性は一般的に解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。親和性は本明細書に記載する者を含めて当該分野で知られている一般的方法により計測できる。低親和性の抗体は一般的に緩徐に抗原に結合し、そして容易に解離する傾向があるのに対し、高親和性の抗体は一般的に急速に抗原に結合し、そしてより長時間結合したままとなる傾向を有する。結合親和性を計測するための種々の方法が当該分野で知られており、それらのいずれも本発明の目的のために使用できる。特定の例示される実施形態は後述するとおりである。
「より良好」とは本明細書において使用する場合、分子とその結合相手との間のより強い結合を指す。「より良好」とは本明細書において使用する場合、より小さい数のＫｄ値により表されるより強い結合を指す。例えば、「０．６ｎMより良好」な抗原に対する親
和性を有する抗体について、その抗原に対する抗体の親和性は＜０．６ｎＭ、即ち０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭ、等、又は０．６ｎＭ未満の何れかの値である。
「実質的に同様」又は「実質的に同じ」というフレーズは、本明細書において使用する場合、当業者が２つの値の間の差が、その値（例えばＫｄ値）により計測される生物学的特性の範囲内において生物学的及び／又は統計学的な有意性を殆ど又は全く有さないと考えるような、２つの数値（一般的に１つは本発明の抗体に関連するものであり、もう１つはレファレンス／コンパレーター抗体に関連するもの）の間の十分高度な同様性を意味する。該２つの値の間の差は、レファレンス／コンパレーター抗体の値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満である。
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、自然界で観察されない形態となっているポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物はそれらが自然界で観察される形態にはそれらがもはやなりえない程度にまで精製されているものを包含する。一部の実施形態においては、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は実質的に純粋である。
本明細書において使用する場合、「実質的に純粋」とは少なくとも５０％純粋（即ち夾雑物が存在しない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、少なくとも９９％純粋である物質を指す。
「イムノコンジュゲート」又は「コンジュゲート」という用語は本明細書において使用する場合、細胞結合剤（即ち抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメント）に連結された化合物又はその誘導体を指し、そして包括的な式：Ｃ−Ｌ−Ａにより定義され、式中、Ｃ＝細胞傷害物質、Ｌ＝リンカー、そしてＡ＝細胞結合剤又は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗体フラグメントである。イムノコンジュゲートは又、逆順序の包括的な式：Ａ−Ｌ−Ｃによっても定義できる。
「リンカー」とは安定な共有結合の態様において抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントのような細胞結合剤に、通常はマイタンシノイドのような薬物を連結することができる何れかの化学的部分である。リンカーは化合物又は抗体が活性であり続けられる条件において、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に対して感受性であるか、又は実質的に抵抗性であることができる。適当なリンカーは当該分野で良く知られており、そして例えばジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安定基を包含する。リンカーは又本明細書に記載する、そして当該分野で知られている荷電リンカー、及びその親水性形態を包含する。
「癌」及び「癌性の」という用語は細胞集団が制御不可能な細胞生育を特徴とする哺乳類における生理学的状態を指すか、これを説明するものである。癌の例は癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病を包含するがこれらに限定されない。そのような癌のより特定的な例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌。肝細胞癌、胃腸の癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、及び種々の型の頭頚部の癌を包含する。
「腫瘍」及び「新生物」は前癌患部を包含する良性（非癌性）又は悪性（癌性）の何れかの過剰な細胞の生育又は増殖に起因する組織の何れかの塊を指す。
「癌細胞」、「腫瘍細胞」という用語及び文法的等価表現は、腫瘍細胞集団の塊状物を含む非腫瘍形成性細胞及び腫瘍形成性幹細胞（癌幹細胞）の両方を包含する腫瘍又は前癌性の患部から誘導された細胞の総集団を指す。本明細書において使用する場合、「腫瘍細胞」という用語は、癌幹細胞からそれらの腫瘍細胞を区別できるように更新及び分化する能力を欠いている腫瘍細胞のみを指す場合には、「非腫瘍形成性」という用語により修飾されることになる。
「対象」という用語は、特定の治療のレシピエントとなるべきヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類等を包含するがこれらに限定されない何れかの動物（例えば哺乳類）を指す。典型的には、「対象」及び「患者」という用語は、ヒト対象に言及する場合には本明細書においては互換的に使用される。
１つ以上の他の治療剤「と組み合わせた」投与とは、同時（並行）及び何れかの順序における連続投与を包含する。
「医薬品製剤」という用語は活性成分の生物学的活性を有効とする形態にあり、そして、製剤を投与する対象に対して許容できない程度毒性である追加的成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は滅菌されることができる。
本明細書に開示する抗体の「有効量」とは特に記載された目的を実施するために十分な量である。「有効量」は記載された目的に関連して、実験的に、そして定型的な態様において決定できる。
「治療有効量」という用語は対象又は哺乳類における疾患又は障害を「治療」するために有効な抗体又は他の薬物の量を指す。癌の場合は、薬物の治療有効量は癌細胞の数を低減し；腫瘍の大きさを低減し；周辺臓器内部への癌細胞の浸潤を阻害し（即ちある程度まで緩徐化、そして特定の実施形態においては停止させ）；腫瘍の転移を阻害し（即ちある程度まで緩徐化、そして特定の実施形態においては停止させ）；腫瘍の生育をある程度まで阻害し；及び／又は癌に関連する症状の１つ以上をある程度まで緩和することができる。本明細書における「治療すること」の定義を参照できる。薬物が既存の癌細胞の生育を防止できる限り、それらは細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であることができる。「予防有効量」とは所望の予防結果を達成するために、必要な投薬量において必要な期間に渡り、有効な量を指す。必然的にではないが典型的には、予防用量は疾患の前、又は早期の段階において対象において使用されるため、予防有効量は治療有効量より低値となる。
「標識」という用語は本明細書において使用する場合、「標識された」抗体を形成するべく抗体に直接又は間接的にコンジュゲートされる検出可能な化合物又は組成物を指す。「標識はそれ自体検出されることができる（例えば放射性同位体標識又は蛍光標識）か、又は、酵素標識の場合は、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的改変を触媒することができる。
「化学療法剤」とは作用機序に関わらず、癌の治療において有用な化学的化合物である。化学療法剤のクラスはアルキル化剤、代謝拮抗剤、紡錘毒植物アルカロイド、細胞傷害／抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光感作剤、及びキナーゼ阻害剤を包含するがこれらに限定されない。化学療法剤は「ターゲティング治療」及び従来の化学療法で使用される化合物を包含する。
「治療すること」又は「治療」又は「治療するため」又は「軽減すること」又は「軽減するため」等の用語は、１）診断された病理学的状態又は障害の症状の治癒、緩徐化、減少、及び／又は進行の停止を行う治療手段、及び２）ターゲティングされた病理学的状態又は障害の発症を防止及び／又は緩徐化する予防的又は防止的な手段の両方を指す。即ち、治療を必要とするものは、障害を既に有する者；障害を有し易い者；及び障害を防止すべき者を包含する。特定の実施形態においては、対象は患者が以下：癌細胞の数の減少又は完全な非存在；腫瘍の大きさの低減；例えば軟組織及び骨内部への癌の拡張を包含する周辺臓器内部への癌細胞の浸潤の阻害又は非存在；腫瘍転移の阻害又は非存在；腫瘍生育の阻害又は非存在；特定の癌に関連する症状１つ以上の緩解；罹患率及び死亡率の低減；クオリティーオブライフの向上；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、又は腫瘍形成能力の低減；腫瘍中の癌幹細胞の数又は頻度の低減；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化；又は作用の何らかの組み合わせの１つ以上を呈する場合に本発明の方法に従って癌に関して良好に「治療される。
本明細書において互換的に使用される「ポリヌクレオチド」又は「核酸」とは、何れかの長さのヌクレオチドの重合体を指し、そしてＤＮＡ及びＲＮＡを包含する。ヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類縁体、又はＤＮＡ又はＲＮＡポリメラーゼにより重合体内に取り込まれることができる何れかの基質であることができる。ポリヌクレオチドは修飾されたヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそれらの類縁体を含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は重合体の組み立ての前又は後に行うことができる。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分により中断されていることができる。ポリヌクレオチドは重合の後に、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより更に修飾されることができる。他の型の修飾は、例えば「キャップ」、天然に存在するヌクレオチド１つ以上の類縁体による置換、ヌクレオチド間修飾、例えば未荷電連結部（例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カーバメート等）及び荷電連結部（例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）を有するもの、例えば蛋白のような懸垂部分を含有するもの（例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジン等）、インターカレーターを有する者（例えばアクリジン、ソラレン等）、キレート形成剤を含有するもの（例えば金属、放射活性金属、ホウ素、酸化性金属等）、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結部を有するもの（例えばアルファアノマー核酸等）並びにポリヌクレオチドの未修飾の形態を包含する。更に又、糖に元から存在するヒドロキシル基の何れかを例えばホスホネート基、ホスフェート基で置き換えるか、標準的な保護基で保護するか、又は活性化して別のヌクレオチドへの別の連結部を調製することができ、又は固体支持体にコンジュゲートすることができる。５’及び３’末端のＯＨはホスホリル化するか、又は、アミン又は炭素原子１〜２０個の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化することができる。ポリヌクレオチドは又、当該分野で一般的に知られているリボース又はデオキシリボースの糖の類縁体型、例えば２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−又は２’−アジド−リボース、カルボキシル糖類縁体、アルファアノマー型糖、エピマー型糖、例えばアラビノース、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類縁体及び無塩基のヌクレオシド類縁体、例えばメチルリボーシドを含有できる。１つ以上のホスホジエステル連結部を代替の連結基で置き換えることができる。このような代替の連結基はホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（チオエート）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（ジチオエート）、（Ｏ）ＮＲ２（アミデート）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（ホルムアセタール）である実施形態を包含するがこれらに限定されず、式中各々のＲ又はＲ’は独立してＨ又は置換又は未置換の場合によりエーテル（−Ｏ−）連結部を含有するアルキル（１−２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルキルである。ポリヌクレオチド中の全ての連結部が必ずしも同一である必要はない。以上の記載はＲＮＡ及びＤＮＡを包含する本明細書において言及する全てのポリヌクレオチドに適用される。
「ベクター」という用語は宿主細胞中に１つ以上の遺伝子又は配列を送達及び発現することができるコンストラクトを意味する。ベクターの例はウィルスベクター、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン性縮合剤に会合したＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、リポソーム内にカプセル化されたＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、及び特定の真核生物の細胞、例えばプロデューサー細胞を包含するがこれらに限定されない。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「蛋白」という用語は本明細書においては何れかの長さのアミノ酸の重合体を指すために互換的に使用される。重合体は直鎖又は分枝鎖であることができ、修飾されたアミノ酸を含むことができ、そして非アミノ酸により中断されることができる。用語は又、天然に、又は介入、例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ホスホリル化、又は他の何れかの操作又は修飾、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されているアミノ酸重合体を包含する。同様に包含されるものは、例えばアミノ酸の類縁体１つ以上（例えば非天然のアミノ酸等を包含）並びに他の当該分野で知られている修飾を含有するポリペプチドである。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、特定の実施形態においては、ポリペプチドは単鎖又は会合している鎖として存在することができる。
２つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈における「同一」又はパーセント「同一性」という用語は、配列同一性の部分として如何なる保存的アミノ酸置換も考慮しない場合に、最大相応が得られるように比較してアライン（必要に応じてギャップを導入）した場合に、同じであるか、又は同じであるヌクレオチド又はアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。パーセント同一性は配列比較ソフトウエア又はアルゴリズムを用いながら、又は目視による検査により計測できる。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアライメントを得るために使用できる種々のアルゴリズム及びソフトウエアが当該分野で知られている。そのような配列アライメントアルゴリズムの非限定的な例は、Karlin等、1993, Proc. Natl. Acad. Sci.,90:5873-5877により変更され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム(Altschul等、1991,Nucleic Acids Res., 25:3389-3402)に組み込まれたKarlin等、1990, Proc. Natl. Acad. Sci.,87:2264-2268に記載されているアルゴリズムである。特定の実施形態においてはＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴをAltschul等、1997, NucleicAcids Res.25:3389-3402に記載の通り使用できる。ＢＬＡＳＴ−２、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２ (Altschul等、1996, Methodsin Enzymology, 266:460-480)、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２ (Genentech, South San Francisco,California)又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は配列をアラインするために使用できる別の好適に入手できるソフトウエアプログラムである。特定の実施形態においては、２つのヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウエアにおけるＧＡＰプログラムを用いながら（例えばＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス及びギャップウエイト４０、５０、６０、７０又は９０及びレングスウエイト１、２、３、４、５及び６を用いながら）求められる。特定の代替の実施形態においては、Needlemanand Wunsch (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970))のアルゴリズムを組み込んだＧＣＧソフトウエアパッケージにおけるＧＡ
Ｐプログラムを用いることにより２つのアミノ酸配列の間のパーセント同一性を求めることができる（例えばＢｌｏｓｓｕｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス及びギャップウエイト１６、１４、１２、１０、８、６又は４及びレングスウエイト１、２、３、４、５を用いる）。あるいは特定の実施形態においては、ヌクレオチド又はアミノ酸配列の間のパーセント同一性はMyersand Miller (CABIOS, 4:11-17 (1989))のアルゴリズムを用いながら求める。例えばパーセント同一性はＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を用いながら、そして、残基表を伴ったＰＡＭ１２０、ギャップレングスペナルティー１２及びギャップペナルティー４を用いながら、求めることができる。特定のアライメントソフトウエアによる最大のアライメントのための適切なパラメーターは当業者が決定できる。特定の実施形態においては、アライメントソフトウエアのデフォルトパラメーターを使用する。特定の実施形態においては、第１のアミノ酸配列の第２の配列に対するパーセンテージ同一性「Ｘ」は１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは第１及び第２の配列のアライメント（目視検査によるか特定の配列アライメントプログラムによりアラインした場合）における同一マッチとして採点されたアミノ酸残基の数であり、そしてＺは第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列より長い場合、第２の配列に対する第１の配列のパーセント同一性は第１の配列に対する第２の配列のパーセント同一性より長くなることになる。
非限定的な例として、何れかの特定のポリヌクレオチドが、レファレンス配列に対して特定のパーセント配列同一性を有する（例えば少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、そして一部の実施形態においては少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一）かは、特定の実施形態においては、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを用いて測定できる（Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix（登録商標）, GeneticsComputer Group, University Research Park, 575 ScienceDrive, Madison, WI 53711）。Ｆｅｓｔｆｉｔは２つの配列の間の相同性の最良セグメントを見つけるためにSmithand Waterman, Advances in Applied Mathematics 2: 482 489 (1981)のローカルホモロジーアルゴリズムを使用している。Ｂｅｓｔｆｉｔ及び何れかの他の配列アライメントプログラムを用いることにより本発明に従って特定の配列がレファレンス配列に対して例えば９５％同一であるかどうかを調べる場合、パラメーターは、同一性のパーセンテージがレファレンスヌクレオチド配列の完全長に渡って計算されるように、そしてレファレンス配列におけるヌクレオチドの総数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるように設定する。
一部の実施形態においては、本発明の２つの核酸又はポリペプチドは、配列比較アルゴリズムを用いるか、又は目視検査により計測した場合に最大相応が得られるように比較してアラインした場合に、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、そして一部の実施形態においては少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のヌクレオチド又はアミノ酸残基の同一性を有することを意味するべく、実質的に同一という。特定の実施形態においては、同一性は少なくとも約１０、約２０、約４０〜６０残基長の、又はその間の何れかの整数値である配列の領域に渡って、そして６０〜８０残基より長い領域、例えば少なくとも約９０〜１００残基に渡って存在し、或いは、配列は例えばヌクレオチド配列のコドン領域のように、比較される配列の完全長に渡って実質的に同一である。
「保存的アミノ酸置換」とは１つのアミノ酸残基が同様の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられているものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で定義されており、例えば、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、未荷電極性側鎖（例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばグリシン、アラニン、バアリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えばチロシン、ゲニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を包含する。例えば、チロシンに対するフェニルアラニンの置換は保存的置換である。特定の実施形態においては、本発明のポリペプチド及び抗体の配列における保存的置換は、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチド又は抗体の、ポリペプチド又は抗体が結合する抗原、即ちＦＯＬＲ１への結合を消失させない。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を識別するための方法は当該分野で良く知られている（例えばBrummell等、Biochem. 32: 1180-1 187 (1993);Kobayashi等、Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)；及びBurks等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA94:.412-417 (1997)を参照）。
本開示及び請求項において使用する場合、「ある〜」、そして「その〜」という単数標記は、特段の記載が無い限り複数標記も包含するものとする。
「含む」という表現で実施形態を本明細書に記載する場合は常時、「よりなる」及び／又は「より本質的になる」と言う用語において説明する別様の類似の実施形態も提供されるものと理解しなければならない。
本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等のフレーズにおいて使用する場合の「及び／又は」という用語は「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」の何れをも包含することを意図している。同様に「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」というフレーズにおいて使用する場合の「及び／又は」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ」；Ａｏｙｏｂｉ Ｂ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）の各々を包含することを意図している。
ＩＩ．ＦＯＬＲ１結合剤
本発明はヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する剤を提供する。これらの剤は本明細書においては、「ＦＯＬＲ１結合剤」と称する。ＦＯＬＲ１に関する完全長アミノ酸（ａａ）及びヌクレオチド（ｎｔ）配列は当該分野で知られており、そしてそれぞれ配列番号２５及び２６で示されるとおり、本明細書において提供される。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は抗体、イムノコンジュゲート又はポリペプチドである。一部の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤はネズミＭｏｖ１９抗体のヒト化バージョンである（可変重鎖及び軽鎖は配列番号１７及び１８にそれぞれ示す）。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は以下の作用、即ち：
腫瘍細胞の増殖の阻害、腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低減することによる腫瘍の腫瘍形成性の低減、腫瘍生育の阻害、生存率の増大、腫瘍細胞の細胞死のトリガー、腫瘍形成性細胞から非腫瘍形成性状態への分化、又は腫瘍細胞の転移の防止、の１つ以上を有する。
特定の実施形態においては、ヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合するイムノコンジュゲート又は他の剤は細胞傷害剤を介して細胞死をトリガーする。例えば、特定の実施形態においては、ヒトＦＯＬＲ１抗体に対する抗体は、蛋白内在化によりＦＯＬＲ１を発現している腫瘍細胞において活性化されるマイタンシノイドにコンジュゲートされる。特定の代替の実施形態においては、剤又は抗体はコンジュゲートされない。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は腫瘍生育を阻害することができる。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤はインビボで（例えば異種移植片マウスモデル及び／又は癌を有するヒトにおいて）腫瘍生育を阻害することができる。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤はヒトにおける腫瘍の生育を阻害することができる。
即ち、本発明はヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで抗体は以下：（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；を含む。特定の実施形態においては、抗体はＭｏｖ１９抗体であり、これは重鎖ＣＤＲ２であるＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む上記抗体である。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＭｏｖ１９のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
本発明は又、抗体が以下：（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体（ｈｕＦＲ１−２１）又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＦＲ１−２１のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＦＲ１−４８のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＦＲ１−４９のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＦＲ１−５７のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の実施形態においては、本発明はＣＤＲ当たり４つまで（即ち０、１、２、３又は４つ）の保存的アミノ酸置換を有するｈｕＦＲ１−６５のＣＤＲを含むＦＯＬＲ１に特異的に結合するヒト化抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。即ち、特定の実施形態においては、本発明は抗体が以下：（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は１、２、３又は４の保存的アミノ酸置換を含むその変異体；を含む、ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
本明細書に記載した個々の軽鎖又は重鎖の１つを含むポリペプチド、並びに軽鎖及び重鎖の両方を含むポリペプチド（例えば抗体）も提供する。配列番号４及び６のポリペプチドはそれぞれｈｕＭｏｖ１９の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＭｏｖ１９の重鎖を含む。配列番号１０〜１３のポリペプチドはそれぞれｈｕＭｏｖ１９の可変ドメイン軽鎖バージョン１．００、可変ドメイン軽鎖バージョン１．６０、軽鎖バージョン１．００、及び軽鎖バージョン１．６０を含む。配列番号４２及び４６のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−２１の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＦＲ１−２１の重鎖を含む。配列番号４１及び４５のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−２１の可変ドメイン軽鎖及び軽鎖を含む。配列番号９７及び１１３のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−４８の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＦＲ１−４８の重鎖を含む。配列番号９６及び１１２のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−４８の可変ドメイン軽鎖及び軽鎖を含む。配列番号９９及び１１５のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−４９の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＦＲ１−４９の重鎖を含む。配列番号９８及び１１４のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−４９の可変ドメイン軽鎖及び軽鎖を含む。配列番号１０１及び１１７のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−５７の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＦＲ１−５７の重鎖を含む。配列番号１００及び１１６のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−５７の可変ドメイン軽鎖及び軽鎖を含む。配列番号１０３及び１１９のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−６５の重鎖の可変ドメイン及びｈｕＦＲ１−６５の重鎖を含む。配列番号１０２及び１１８のポリペプチドはそれぞれｈｕＦＲ１−６５の可変ドメイン軽鎖及び軽鎖を含む。
同様に提供されるものは、（ａ）配列番号４又は６に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１０〜１３に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号４２又は４６に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号４１及び４５に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号９７又は１１３に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号９６及び１１２に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号９９又は１１５に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号９８及び１１４に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号１０１又は１１７に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１００及び１１６に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号１０３又は１１９に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１０２及び１１８に少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。特定の実施形態においては、ポリペプチドは配列番号４、６、１０〜１３、４１、４２、４５又は４６に少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。即ち、特定の実施形態においては、ポリペプチドは（ａ）配列番号４又は６に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１０〜１３に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドは（ａ）配列番号４２又は４６に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号４１及び４５に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号９７又は１１３に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号９６及び１１２に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号９９又は１１５に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号９８及び１１４に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号１０１又は１１７に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１００及び１１６に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。同様に提供されるものは、（ａ）配列番号１０３又は１１９に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１０２及び１１８に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。特定の実施形態においては、ポリペプチドは（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドは（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドは（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１２又は配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドはヒトフォレート受容体１に特異的に結合する抗体及び／又はポリペプチドである。特定の実施形態においては、ポリペプチドはヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体である。例えば、本発明は（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。特定の実施形態においては、配列番号４を含むポリペプチドは重鎖可変領域である。特定の実施形態においては、配列番号１０又は１１を含むポリペプチドは軽鎖可変領域である。本発明は又、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１２又は配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。本発明は又、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。本発明は又、（ａ）配列番号１１２のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。本発明は又、（ａ）配列番号１１４のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１１５のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。本発明は又、（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１１７のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。本発明は又、（ａ）配列番号１１８のアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び／又は（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むヒトＦＯＬＲ１に特異的に結合する抗体又はヒト化抗体を提供する。特定の実施形態においては、配列番号４、６、１０〜１３、４１、４２、４５、４６、９６〜１０３及び１１２〜１１９に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有するポリペプチドと、配列番号４、６、１０〜１３、４１、４２、４５、４６、９６〜１０３及び１１２〜１１９との相違点は保存的アミノ酸置換のみである。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤はｈｕＭｏｖ１９、ＦＲ−１−２１、ＦＲ１−４８、ＦＲ１−４９、ＦＲ１−５７、及びＦＲ１−６５抗体よりなる群から選択される抗ＦＯＬＲ１抗体を含むか、本質的にこれよりなるか、これよりなる。
特定の実施形態においては、ｈｕＭｏｖ１９抗体は２０１０年４月７日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２及びＰＴＡ−１０７７３又は１０７７４を有するプラスミドによりコードされる。
特定の実施形態においては、ＦＲ−１−２１抗体は２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、そしてＡＴＣＣ受託番号番号ＰＴＡ−１０７７５及びＰＴＡ−１０７７６を有するプラスミドによりコードされる。
特定の実施形態においては、ヒト化抗体は抗体キメラＭｏｖ１９と実質的に同じ親和性でＦＯＬＲ１に結合する。抗原に対する抗体の親和性又はアビディティーは当該分野で良く知られている何れかの適当な方法、例えばフローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、又は動態分析（例えばＢＩＡＣＯＲＥＴＭ分析）を用いながら実験的に測定できる。直接の結合アッセイ並びに競合的結合アッセイのフォーマットを容易に使用できる。（例えばBerzofsky等、"Antibody-AntigenInteractions," In FundamentalImmunology, Paul, W. E., 編、Raven Press: New York, N.Y. (1984); Kuby, JanisImmunology, W. H.Freeman and Company: New York, N.Y. (1992);及び本明細書に記載した方法を参照）。特定の抗体−抗原相互作用の計測される親和性は異なる条件下（例えば塩濃度、ｐＨ、温度）で計測されれば変動する場合がある。即ち、親和性及び他の抗原結合パラメーター（例えばＫＤ又はＫｄ、Ｋｏｎ，Ｋｏｆｆ）の計測は抗体及び抗原の標準溶液、及び当該分野で知られている、そして本明細書に記載した緩衝液のような標準的な緩衝液を用いて行われる。
１つの側面において、結合アッセイは表面にＦＯＬＲ１抗原を発現している細胞に対してフローサイトメトリーを用いながら実施できる。例えば、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％正常ヤギ血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地）中試料当たり１ｘ１０５細胞としながら種々の濃度の抗ＦＯＬＲ１抗体と共にＳＫＯＶ３のようなＦＯＬＲ１陽性細胞をインキュベートした。次に、細胞をペレット化し、洗浄し、そして１００μＬのＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗マウス又はヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手可能なもの、ＦＡＣＳ緩衝液中６μｇ／ｍｌ）と共に１時間インキュベートした。細胞を再度ペレット化し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、そして１％ホルムアルデヒド含有ＰＢＳ２００μＬ中に再懸濁した。試料は、例えばＨＴＳマルチウエルサンプラーを用いたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメトリーを用いながら獲得し、そしてＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏを用いて分析した（全ての入手元：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＵＳ）。各試料につき、ＦＬ１に関する平均蛍光強度（ＭＦＩ）をエキスポートし、そして片対数プロットで抗体濃度に対してプロットすることにより、結合曲線を作成した。ジグモイド型の用量応答曲線を結合曲線に対してフィットさせ、そしてデフォルトパラメーターを用いながらＧｒａｐｈＰａｄのＰｒｉｓｍのｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のようなプログラムを用いてＥＣ５０を計算する。ＥＣ５０値は各抗体に関する見かけの解離定数「Ｋｄ」又は「ＫＤ」の尺度として使用できる。
モノクローナル抗体はハイブリドーマ法、例えばKohler and Milstein (1975)Nature 256:495に記載のものを用いながら調製できる。ハイブリドーマ法を用いながら、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を上記した通り免疫化することにより免疫化抗原に特異的に結合するすることになる抗体のリンパ球による生産を誘発する。リンパ球はインビトロで免疫化することもできる。免疫化の後、リンパ球を単離し、そして例えばポリエチレングリコールを用いながら適当なミエローマ細胞系統と融合することによりハイブリドーマを形成し、これを次に未融合のリンパ球及びミエローマ細胞から選別する。免疫沈降、イムノブロッティングによるか、又はインビトロの結合試験（例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ））により決定される選択された抗原に対して特異的に指向されたモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマは、その後、インビトロの培養で標準的な方法を用いながら（Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, AcademicPress, 1986）又はインビボで動物中の腹水腫瘍として増殖され得る。次にモノクローナル抗体は、上記においてポリクローナル抗体に関して説明したとおり、培地又は腹水から精製されえる。
或いは、モノクローナル抗体は又、米国特許４，８１６，５６７に記載の通り組み換えＤＮＡ法を用いて作成することもできる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドを、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲ等により成熟Ｂ細胞又はハイブリドーマから単離し、そしてその配列を従来の操作法を用いながら決定する。次に重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを適当な発現ベクター内にクローニングし、そしてこれが、別様には免疫グロブリン蛋白を生産しないＥ・コリ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はミエローマ細胞のような宿主細胞内にトランスフェクトされた場合に、モノクローナル抗体が宿主細胞により形成される。更に又、所望の種の組み換えモノクローナル抗体又はそのフラグメントは記載された所望の種のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリから単離で切る（McCafferty等、1990, Nature, 348:552-554;Clackson等、1991, Nature,352:624-628；及びMarks等、1991, J. Mol. Biol.,
222:581-597）。
モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは更に、組み換えＤＮＡ技術を用いながら多くの種々異なる態様において修飾することにより代替の抗体を形成することができる。一部の実施形態においては、例えばマウスモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖の定常ドメインを、１）キメラ抗体を形成するために例えばヒト抗体のこれらの領域に対して、又は２）融合抗体を形成するために非免疫グロブリンポリペプチドに対して、置換することができる。一部の実施形態においては、定常領域をトランケーションするか除去することにより、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを形成する。可変領域の部位指向性又は高密度の突然変異誘発を用いることによりモノクローナル抗体の特異性、親和性等を最適化することができる。
一部の実施形態においては、ヒトＦＯＬＲ１に対するモノクローナル抗体はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、そのような抗体を治療上使用することにより、ヒト対象への投与時の抗原性及びＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答を低減する。
非ヒト及びヒト抗体を操作、ヒト化又はリサーフィシングするための方法もまた使用でき、そして当該分野で良く知られている。ヒト化、リサーフィシング、又は同様に操作された抗体は、非ヒト、例えば限定しないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類又は他の哺乳類である原料に由来するアミノ酸残基１つ以上を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、既知のヒト配列の「インポート」可変、定常又は他のドメインから典型的には取り出される「インポート」残基としばしば称される残基により置き換えられる。
このようなインポートされた配列は免疫原性を低減するため、又は、結合、親和性、オンレート、イフレート、アビディティ、特異性、半減期、又は当該分野で知られている何れかの他の適当な特性を低減、増強又は変調するために使用できる。一般的に、ＣＤＲ残基は、ＦＯＬＲ１結合への影響においては、直接、そして最も実質的に関与している。従って、非ヒト又はヒトＣＤＲ配列の一部又は全部が維持されつつ、可変及び定常領域の非ヒト配列がヒト又は他のアミノ酸により置き換えられることができる。
抗体は又、場合により、抗原ＦＯＬＲ１に対する高親和性、及びその他の望ましい生物学的特性を保持するように操作されたヒト化、リサーフィシング、操作又はヒト抗体であることができる。この目的を達成するために、親、操作及びヒト化配列の３次元モデルを用いた親配列及び種々の概念的なヒト化及び操作産物の分析の過程により、ヒト化（又はヒト）又は操作抗ＦＯＬＲ１抗体及びリサーフィシング抗体を場合により調製することができる。３次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、そして当該分野で良く知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定される３次元コンホーメーション構造を図示標示するコンピュータープログラムを使用できる。これらのディスプレイの検討により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の考えられる役割の分析、即ち、候補免疫グロブリンがＦＯＬＲ１のような自身の抗原に結合する能力に影響する残基の分析が可能になる。このようにして、フレームワーク（ＦＲ）残基を選択肢、コンセンサス及びインポート配列とから組み合わせることにより、標的抗原に対する増大した親和性のような所望の抗体特性を達成する。
本発明の抗体のヒト化、リサーフィシング又は操作は、何れかの知られた方法、例えば限定しないがWinter(Jones等、Nature 321:522 (1986); Riechmann等、Nature 332:323(1988); Verhoeyen等、Science239:1534 (1988)), Sims等、J. Immunol. 151: 2296(1993);Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter等、Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 89:4285 (1992); Presta等、J. Immunol. 151:2623(1993), 米国特許５，６３９，６４１，５，７２３，３２３；５，９７６，８６２；５，８２４，５１４；５，８１７，４８３；５，８１４，４７６；５，７６３，１９２；５，７２３，３２３；５，７６６，８８６；５，７１４，３５２；６，２０４，０２３；６，１８０，３７０；５，６９３，７６２；５，５３０，１０１；５，５８５，０８９；５，２２５，５３９；４，８１６，５６７；ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０；ＵＳ９６／１８９７８；ＵＳ９１／０９６３０；ＵＳ９１／０５９３９；ＵＳ９４／０１２３４；ＧＢ８９／０１３３４；ＧＢ９１／０１１３４；ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３；ＷＯ９０／１４４２４；ＷＯ９０／１４４３０；ＥＰ２２９２４６；７，５５７，１８９；７，５３８，１９５；及び７，３４２，１１０号に記載されているものを用いて実施でき、これらの各々はその引用文献を含めて参照により全体が本明細書に組み込まれる。
特定の代替の実施形態においては、ＦＯＬＲ１に対する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当該分野で知られている種々の手法を用いながら直接調製することができる。インビトロで免疫化された、又は標的抗原に対して指向された抗体を生産する免疫化個体から単離された不朽化ヒトＢリンパ球を形成できる（例えばCole等、Monoclonal Antibodies and CancerTherapy, Alan R. Liss, p. 77(1985); Boemer等、1991, J.Immunol., 147 (1):86-95;及び米国特許５，７５０，３７３参照）。更に又、ヒト抗体は例えばVaughan等、1996,Nat. Biotech., 14:309-314, Sheets等、1998,Proc. Nat’l. Acad. Sci., 95:6157-6162,Hoogenboom and Winter,1991, J. Mol. Biol., 227:381, and Marks等、1991,J.Mol.Biol., 222:581に記載のように、ファージライブラリがヒト抗体を発現するそのファージライブラリから選択できる。抗体ファージライブラリの形成及び使用のための手法は又、米国特許５，９６９，１０８，６，１７２，１９７，５，８８５，７９３，６，５２１，４０４；６，５４４，７３１；６，５５５，３１３；６，５８２，９１５；６，５９３，０８１；６，３００，０６４；６，６５３，０６８；６，７０６，４８４；及び７，２６４，９６３;及びRothe等、2007, J.Mol. Bio., doi:10.1016/j.jmb.2007.12.018にも記載されている（これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる）。アフィニティー成熟法及び鎖シャフリング法（Marks等、1992,Bio/Technology 10:779-783；参照により全体が本明細書に組み込まれる）が当該分野で知られており、そして高親和性のヒト抗体を形成するために使用できる。
ヒト化抗体は又、内因性免疫グロブリン生産の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを生産することが免疫化により可能であるヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスにおいて作成することができる。このアプローチは米国特許５，５４５，８０７；５，５４５，８０６；５，５６９，８２５；５，６２５，１２６；５，６３３，４２５；及び５，６６１，０１６に記載されている。
本発明は又ヒトフォレート受容体１を特異的に認識する二重特異性抗体も包含する。二重特異性抗体は少なくとも２つの異なるエピトープを特異的に認識して結合することができる抗体である。異なるエピトープは同じ分子（例えば同じヒトフォレート受容体１）内、又は、例えば抗体がヒトフォレート受容体１、並びに、例えば、１）Ｔ細胞受容体（例えばＣＤ３）又はＦｃ受容体（例えばＣＤ６４、ＣＤ３２又はＣＤ１６）のような白血球上のエフェクター分子、又は２）後に詳述する細胞傷害剤を特異的に認識して結合する両方の場合のように、異なる分子上にあることができる。
例示される二重特異性抗体は２つの異なるエピトープに結合することができ、その少なくとも１つは本発明のポリペプチド中で生じる。或いは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、Ｔ細胞受容体分子（例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８又はＢ７）又はＩｇＧに対するＦｃ受容体のような白血球上のトリガリング分子に結合するアームと組み合わせることにより特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機序を集中させることができる。二重特異性抗体は又特定の抗原を発現する細胞に細胞傷害剤を指向させるために使用できる。これらの抗体は抗原結合アーム及び細胞傷害剤又はＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ又はＴＥＴＡのような放射性各種キレート形成剤に結合するアームを保有している。二重特異性抗体を作成するための手法は当該分野で一般的である（Millstein等、1983, Nature 305:537-539; Brennan等、1985, Science 229:81;Suresh等、 1986, Methodsin Enzymol. 121:120; Traunecker等、1991, EMBOJ.10:3655-3659; Shalaby等、1992, J. Exp. Med.175:217-225; Kostelny等、1992, J.Immunol. 148:1547-1553;Gruber等、1994, J. Immunol. 152:5368;及び米国特許５，７３１，１６８）。２価より高価の抗体もまた意図される。例えば３重特異性抗体を調製できる（Tutt等、J.Immunol. 147:60 (1991)）。即ち、特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１に対する抗体は多重特異性である。
特定の実施形態においては、例えば腫瘍貫通性を増大させるための抗体フラグメントが提供される。抗体フラグメントの生産のための種々の手法が知られている。伝統的にはこれらのフラグメントは未損傷の抗体の蛋白分解性の消化を介して誘導される（例えばMorimoto等、1993, Journal of Biochemical andBiophysical Methods 24:107-117;Brennan
等、1985, Science, 229:81）。特定の実施形態においては、抗体フラグメントは組み換
えにより生産される。Ｆａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ抗体フラグメントは全てＥ・コリ又は他の宿主細胞中で発現され、これらより分泌されることができ、これによりこれらのフラグメントの大量の生産が可能となる。そのような抗体フラグメントは上記考察した抗体ファージライブラリから単離することもできる。抗体フラグメントは又例えば米国特許５，６４１，８７０に記載の通り線状抗体であることもでき、そして単一特異性又は二重特異性であることができる。抗体フラグメントの生産のための他の手法は当業者の知る通りである。
本発明によればヒトフォレート受容体１に特異的な単鎖抗体の生産のために手法を適合させることができる（米国特許４，９４６，７７８参照）。更に又、方法をＦａｂ発現ライブラリの構築（Huse,等、Science 246:1275-1281 (1989)）のために適合させることに
よりヒトフォレート受容体１に対して所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメント、その誘導体、フラグメント、類縁体又は相同体の迅速で効果的な識別が可能となる。抗体フラグメントは当該分野の手法により生産でき、例えば限定しないが（ａ）抗体分子のペプシン消化により生産されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｂ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより形成されるＦａｂフラグメント、（ｃ）パパイン及び還元剤による抗体分子の処理により形成されるＦａｂフラグメント、及び（ｄ）Ｆｖフラグメントが包含されるがこれらに限定されない。
特に抗体フラグメントの場合は、その血清中半減期を増大させるために抗体を修飾することが更に望ましい場合がある。これは例えば抗体フラグメントにおける適切な領域の突然変異による抗体フラグメント内へのサルベージ受容体結合エピトープの取り込みにより、又は、エピトープをペプチドタグ内に取り込み、次にこれを末端又は中央の何れかにおいて抗体フラグメントに融合させること（例えばＤＮＡ又はペプチド合成による）により達成できる。
ヘテロコンジュゲート抗体も又、本発明の範囲に包含される。ヘテロコンジュゲート抗体は２つの共有結合的に連結された抗体より成る。そのような抗体は例えば望ましくない細胞に免疫細胞をターゲティングするために提案されている（米国特許４，６７６，９８０）。合成蛋白化学における知られた方法、例えば架橋剤を使用するものを用いながらインビトロで抗体を調整することが可能であることも意図している。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、又はチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を構築することができる。この目的のための適当な試薬の例は、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデートを包含する。
本発明の目的のためには、修飾された抗体はヒトＦＯＬＲ１のポリペプチドとの抗体の会合をもたらす可変領域の何れかの型を含むことができることは当然である。この点に関し、可変領域は、体液性応答を生じさせ、そして所望の腫瘍会合抗原に対する免疫グロブリンを発生させるように誘導することができる哺乳類の何れかの型を含むか、これから誘導することができる。即ち、修飾された抗体の可変領域は例えば、ヒト、ネズミ、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル、マカク等）又はオオカミ起源のものであることができる。一部の実施形態においては、修飾された免疫グロブリンの可変領域及び定常領域の両方がヒトのものである。他の実施形態において、適合性抗体（通常は非ヒト原料から誘導）の可変領域を、操作又は特別調整することにより結合特性を向上させるか、又は分子の免疫原性を低減することができる。この点に関し、本発明において有用な可変領域はヒト化されるか、又は別様にインポートされたアミノ酸配列の包含を介して改変することができる。
特定の実施形態においては、重鎖及び軽鎖の両方における可変ドメインはＣＤＲ１つ以上の少なくとも部分的な置き換えにより、そして必要に応じて部分的なフレームワーク領域の置き換え及び配列変化により、改変される。ＣＤＲはフレームワーク領域の誘導元の抗体と同じクラス、更にはサブクラスの抗体から誘導できるが、異なるクラスの抗体から、そして特定の実施形態においては異なる種に由来する抗体から、ＣＤＲを誘導することも意図される。ある可変ドメインの抗原結合能力を別のものに転移させるためにドナーの可変領域由来の完全なＣＤＲでＣＤＲの全てを置き換えることが常時必要なわけではない場合がある。寧ろ、一部の場合においては、抗原結合部位の活性を維持するために必要な残基を転移させる必要があるのみの場合がある。米国特許５，５８５，０８９、５，６９３，７６１及び５，６９３，７６２に記載されている説明によれば、これは、定型的な実験を実施することによるか、又は、低減された免疫原性を有する機能的抗体を得るための試行錯誤の試験を行うことにより、当業者の能力の範囲内で十分行える。
可変領域の改変にも関わらず、当業者の知る通り、本発明の修飾された抗体は、ネイティブ又は未改変の定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比較した場合に増強された腫瘍局在化又は低減された血清中半減期のような所望の生化学的特性を提供できるように、定常領域ドメインの１つ以上の少なくとも部分が欠失又は別様に改変されている抗体（例えば完全長抗体又はその免疫反応性フラグメント）を含むことになる。一部の実施形態においては、修飾された抗体の定常領域はヒト定常領域を含むことになる。本発明と適合する定常領域への修飾は、１つ以上のドメインにおける１つ以上アミノ酸の付加、欠失又は置換を含む。即ち、本明細書に開示された修飾された抗体は３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の１つ以上に対する、及び／又は軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に対する改変又は修飾を含むことができる。一部の実施形態においては、１つ以上のドメインが部分的又は全体的に欠失している修飾された定常領域が意図される。一部の実施形態においては、修飾された抗体は全ＣＨ２ドメインが除去されているドメイン欠失のコンストラクト又は変異体を含むことになる（ΔＣＨ２コンストラクト）。一部の実施形態においては、省かれた定常領域ドメインは、非存在定常領域により典型的には付与される分子柔軟性の一部を与える短いアミノ酸スペーサー（例えば１０残基）により置き換えられることになる。
それらの配置の他に、定常領域は数種のエフェクター機能を媒介することも当該分野で知られている。例えば抗体への補体のＣ１成分の結合は補体系を活性化させる。補体の活性化は細胞病原体のオプソニン作用及び溶解において重要である。補体の活性化は又、炎症応答を刺激し、そして自己免疫過敏症に関与する場合もある。更に又、抗体はＦｃ領域を介して細胞に結合し、その際、細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する抗体Ｆｃ領域上にＦｃ受容体部位がある。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（イータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）及びＩｇＭ（ミュウ受容体）を包含する抗体の種々異なるクラスに対して特異的な多くのＦｃ受容体が存在する。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は多くの重要で多様な生物学的応答、例えば抗体被覆粒子の囲い込みと破壊、免疫複合体のクリアランス、抗体被覆標的細胞のキラー細胞による溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、即ちＡＤＣＣと称される）、炎症メディエーターの放出、胎盤転移及び免疫グロブリン生産の制御をトリガーする。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合抗体は改変されたエフェクター機能をもたらし、次にこれが投与された抗体の生物学的プロファイルに影響する。例えば定常領域ドメインの欠失又は不活性化（点突然変異又は他の手段を介する）は循環中の修飾された抗体のＦｃ受容体結合を低減し、これにより腫瘍の局在化を増強することができる。他の例においては、本発明と矛盾しない定常領域の修飾は補体結合を緩和し、そしてこれにより血清中半減期及びコンジュゲートした細胞毒の非特異的会合を低減してよい。定常領域の更に別の修飾は、増大した抗原特異性又は抗体柔軟性に起因する増強された局在化をもたらすジスルフィド連結部又はオリゴ糖部分を排除するために使用できる。同様に、本発明に従った定常領域の修飾は、当業者の知見の範囲内に十分含まれる良く知られた生化学的又は分子操作の手法を用いながら容易に作成できる。
特定の実施形態においては、抗体であるＦＯＬＲ１結合剤は１つ以上のエフェクター機能を有さない。例えば、一部の実施形態においては、抗体は抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さず、及び／又は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有さない。特定の実施形態においては、抗体はＦｃ受容体及び／又は補体因子に結合しない。特定の実施形態においては、抗体はエフェクター機能を有さない。
特定の実施形態においては、修飾された抗体は、それぞれの修飾された抗体のヒンジ領域に直接ＣＨ３ドメインを融合するように操作されることができることになる。別のコンストラクトにおいては、ヒンジ領域及び修飾されたＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの間にペプチドスペーサーを与えることが望ましい場合がある。例えば、適合性のあるコンストラクトはＣＨ２ドメインが欠失しており、そして残りのＣＨ３ドメイン（修飾又は未修飾）が５〜２０アミノ酸スペーサーでヒンジ領域に連結されているように発現させることができる。そのようなスペーサーは例えば定常ドメインの調節エレメントが使用可能な状態のままであること、又は、ヒンジ領域が柔軟性を維持していることを確保するために、付加させることができる。しかしながら、アミノ酸スペーサーは一部の場合においては免疫原性であることがわかっており、そしてコンストラクトに対する望ましくない免疫応答を誘発することに留意しなければならない。したがって、特定の実施形態においては、コンストラクトに付加された何れのスペーサーも、修飾された抗体の所望の生化学的品質を維持するために比較的非免疫原性となるか、又は全体が省略されることになる。
全定常領域ドメインの欠失のほかに、当然ながら、本発明の抗体は数個、更には単一のアミノ酸の部分的欠失又は置換により与えられる場合もある。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された区域内の単一のアミノ酸の突然変異がＦｃ結合を実質的に低減し、そしてこれにより腫瘍局在化を増強するために十分であってよい。同様に修飾すべきエフェクター機能（例えば補体Ｃ１Ｑ結合）を制御する定常領域ドメイン１つ以上の部分を単に欠失させることが望ましい場合がある。そのような定常領域の部分的欠失は抗体の選択された特性（血清中半減期）を向上させつつ、対象の定常領域ドメインに関連する他の所望の機能は未損傷のままとすることができる。更に又、前述の通り、開示された抗体の定常領域は結果として生じるコンストラクトのプロファイルを増強させる突然変異又はアミノ酸１つ以上の置換を介して修飾できる。この点に関し、保存された結合部位により与えられる活性（例えばＦｃ結合）を途絶しつつ、修飾された抗体の配置及び免疫原性プロファイルを実質的に維持してよい。特定の実施形態は、エフェクター機能の低下又は上昇のような所望の特性を増強するか、又はより多くの細胞毒又は炭水化物の結合を可能とするために、定常領域へのアミノ酸１つ以上の付加を含むことができる。そのような実施形態において、選択された定常領域ドメインから誘導される特定の配列を挿入又は複製することが望ましい場合がある。
本発明は更に本明細書に記載したキメラ、ヒト化及びヒトの抗体又はその抗体フラグメントに実質的に相同である変異体及び等価物を包含する。これらは例えば、保存的置換突然変異、即ち、アミノ酸１つ以上の同様のアミノ酸による置換を含むことができる。例えば保存的置換はあるアミノ酸の同じ一般的クラス内の別のものによる、例えばある酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸による
、ある塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸による、又は、ある中性アミノ酸の別の中性アミノ酸による置換を指す。保存的アミノ酸置換が意図するものは当該分野で良く知られている。
本発明のポリペプチドはヒトＦＯＬＲ１に対する抗体又はそのフラグメントを含む組み換えポリペプチド、天然ポリペプチド、又は合成のポリペプチドであることができる。当該分野で知られるとおり、本発明の一部のアミノ酸配列は蛋白の構造又は機能に大きく影響することなく変動させることができる。即ち、本発明は更にヒトフォレート受容体蛋白に対する抗体又はそのフラグメントの実質的な活性を示すか、又はその領域を含む、ポリペプチドの変形例も包含する。そのような突然変異体は欠失、挿入、反転、反復及び型置換を包含する。
ポリペプチド及び類縁体は更に、通常では蛋白の部分ではない追加的な化学部分を含有するように修飾できる。これらの誘導体化された部分は蛋白の溶解性、生物学的半減期、又は吸収を向上させることができる。部分は又、蛋白の何らかの望ましくない副作用等を低減又は排除することもできる。これらの部分の概説はREMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 20th 編、MackPublishing Co.,Easton, PA (2000)に記載されている。
本明細書に記載する単離されたポリペプチドは当該分野で知られている何れかの適当な方法により生産できる。そのような方法は直接の蛋白合成の方法から、単離されたポリペプチド配列をコードし、これらの配列を適当な形質転換宿主中で発現するＤＮＡ配列を構築することまで様々である。一部の実施形態においてはＤＮＡ配列は目的の野生型蛋白をコードするＤＮＡ配列を単離又は合成することにより組み換え技術を用いながら構築される。場合により、配列を部位特異的突然変異誘発により突然変異誘発することによりその機能的類縁体を得ることができる。例えばZoeller等、Proc. Nat’l.Acad. Sci. USA 81:5662-5066 (1984) 及び米国特許４，５８８，５８５を参照できる。
一部の実施形態においては目的のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はオリゴヌクレオチド合成器を用いた化学合成により構築される。そのようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて、そして目的の組み換えポリペプチドが生産されることになる宿主細胞にとって好都合なコドンを選択しながら、設計することができる。標準的な方法は目的の単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列を合成するために適用できる。例えば完全なアミノ酸配列を用いて戻し翻訳された遺伝子を構築できる。更に又、特定の単離されたポリペプチドに関してコードしているヌクレオチド配列を含有するＤＮＡオリゴマーを合成できる。例えば、所望のポリペプチドの部分に関してコードしている数種の小型のオリゴヌクレオチドを合成し、次にライゲーションすることができる。個々のオリゴヌクレオチドは典型的には相補的組み立てのための５’又は３’オーバーハングを含有する。
組み立て（合成、部位指向性突然変異誘発又は他の方法による）の後、目的の特定の単離されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を発現ベクター内に挿入し、そして所望の宿主中での蛋白の発現のために適切である発現制御配列に作動可能に連結することになる。適当な組み立ては、ヌクレオチド配列決定、制限マッピング、及び適当な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現により確認できる。当該分野で良く知られている通り、宿主中でのトランスフェクトされた遺伝子の高い発現レベルを得るためには、遺伝子は選択された発現宿主中で機能的である転写及び翻訳発現制御配列に作動可能に連結していなければならない。
特定の実施形態においては、組み換え発現ベクターはヒトＦＯＬＲ１に対する抗体又はそのフラグメントをコードするＤＮＡを増幅して発現させるために使用される。組み換え発現ベクターは哺乳類、微生物、ウィルス又は昆虫の遺伝子から誘導された適当な転写又は翻訳調節エレメントに作動可能に連結した抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントのポリペプチド鎖をコードする合成又はｃＤＮＡ誘導のＤＮＡフラグメントを有する複製可能なＤＮＡコンストラクトである。転写ユニットは一般的に、（１）遺伝子エレメント又は遺伝子発現において調節的役割を有するエレメント、例えば転写プロモーター又はエンハンサー、（２）ｍＲＮＡに転写され、そして蛋白に翻訳される構造又はコーディング配列、及び（３）以下に詳述する適切な転写及び翻訳の開始および終止配列の組み立て物を含む。そのような調節エレメントは転写を制御するためのオペレーター配列を包含できる。複製起点により通常は付与される宿主において複製するための能力、及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子もまた組み込まれる。ＤＮＡ領域はそれらが相互に機能的に関連している場合に作動可能に連結されている。例えばシグナルペプチド（分泌リーダー）に関するＤＮＡはそれがポリペプチドの分泌に参画する前駆体としてそれが発現される場合はポリペプチドに関するＤＮＡに作動可能に連結しており；プロモーターはそれが配列の転写を制御する場合はコーディング配列に作動可能に連結しており；或いは、リボソーム結合部位はそれが翻訳を可能とするように位置づけられていればコーディング配列に作動可能に連結している。コウボ発現系において使用するために意図された構造エレメントは宿主細胞による翻訳蛋白の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を包含する。或いは、リーダー又はトランスポート配列の非存在下で組み換え蛋白が発現される場合、それはＮ末端メチオニン残基を包含できる。この残基は場合により後に、発現された組み換え蛋白から切断されて、最終産物を与える。
発現制御配列及び発現ベクターの選択は宿主の選択に依存することになる。広範な種類の発現宿主／ベクターの組み合わせを使用できる。真核生物宿主のための有用な発現ベクターは、例えばＳＶ４０、ウシパピローマウィルス、アデノウィルス及びサイトメガロウィルスに由来する発現制御配列を含むベクターを包含する。細菌宿主のための有用な発現ベクターは、知られた細菌プラスミド、例えばエシェリシア・コリ由来のプラスミド、例えばｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びそれらの誘導体、広範宿主範囲のプラスミド、例えばＭ１３及びフィラメント様１本鎖ＤＮＡファージを包含する
ＦＯＬＲ１結合ポリペプチド又は抗体（又は抗原として使用するためのＦＯＬＲ１蛋白）の発現のための適当な宿主細胞は、適切なプロモーターの制御下の、原核生物、コウボ、昆虫及びより高等な真核生物の細胞を包含する。原核生物はグラム陰性又はグラム陽性の生物、例えばＥ・コリ又はバチルスを包含する。より高等な真核生物の細胞は後述するような哺乳類起源の樹立された細胞系統を包含する。無細胞翻訳系もまた使用される。細菌、カビ、コウボ、及び哺乳類細胞の宿主を用いた適切なクローニング及び発現ベクターはPouwels等、(Cloning Vectors: A LaboratoryManual, Elsevier, N.Y.,1985)により記載されており、その該当開示は参照により本明細書に組み込まれる。抗体生産を包含する蛋白生産の方法に関する別の情報は、例えば米国特許出願公開２００８／０１８７９５４、米国特許６，４１３，７４６及び６，６６０，５０１及び国際特許公開ＷＯ０４００９８２３に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
種々の哺乳類及び昆虫細胞の培養系も又、組み換え蛋白を発現させるために好都合に使用される。哺乳類細胞中の組み換え蛋白の発現は、そのような蛋白が一般的に正しく折り畳まれ、適切に修飾され、そして完全に機能することから、実施することができる。適当な哺乳類宿主細胞系統の例は、ＨＥＫ−２９３及びＨＥＫ−２９３Ｔ、Gluzman (Cell 23:175, 1981)により記載されているサル腎臓細胞のＣＯＳ−７系統、及び他の細胞系統、例えばＬ細胞、Ｃ１２７，３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ及びＢＨＫ細胞系統を包含する。哺乳類発現ベクターは非転写エレメント、例えば複製起点、発現すべき遺伝子に連結された適当なプロモーター及びエンハンサー、及び５’又は３’フランキング非転写配列、及び５’又は３’非翻訳配列、例えば必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、及び転写終止配列を含むことができる。昆虫細胞中の非相同蛋白の生産のためのバキュロウィルス系はLuckowand Summers, Bio/Technology 6:47 (1988)において考察されている。
形質転換された宿主により生産される蛋白は何れかの適当な方法に従って精製できる。そのような標準的な方法はクロマトグラフィー（例えばイオン交換、アフィニティー及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、又は何れかの他の標準的な蛋白精製手法を包含する。アフィニティータグ、例えばヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザ被膜配列及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼを蛋白に結合することにより、適切なアフィニティーカラム上を通過させることによる容易な精製が可能となる。単離された蛋白は又、蛋白分解、核磁気共鳴及びＸ線結晶分析のような手法を用いながら物理的に特性化することができる。
例えば、培地中に組み換え蛋白を分泌する系からの上澄みを先ず、市販の蛋白濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを用いながら濃縮することができる。濃縮工程の後、濃縮液を適当な精製マトリックスに適用することができる。或いは、アニオン交換樹脂、例えば懸垂ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックス又は基材を使用できる。マトリックスはアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース又は蛋白精製において一般的に使用されている他の型であることができる。或いは、カチオン交換皇帝を使用できる。適当なカチオン交換剤はスルホプロピル又はカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスを包含する。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば懸垂メチル又は他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いた１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程を用いてＦＯＬＲ１結合剤を更に精製することができる。種々の組み合わせににおける上記した精製工程の一部又は全てを用いて均質な組み換え蛋白を得ることもできる。
細菌培養物中に生産された組み換え蛋白は、例えば細胞ペレットからの初期抽出、その後の１回以上の濃縮、塩析、水性イオン交換又はサイズエクスクルージョンクロマトグラフィーの工程により単離できる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を最終精製工程のために使用できる。組み換え蛋白の発現において使用した微生物細胞は、何れかの好都合な方法、例えば凍結解凍のサイクリング、超音波処理、機械的破壊又は細胞溶解剤の使用により破壊できる。
抗体及び他の蛋白を精製するために当該分野で知られている方法は又、例えば米国特許出願公開２００８／０３１２４２５、２００８／０１７７０４８及び２００９／０１８７００５に記載されているものを包含し、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は抗体ではないポリペプチドである。蛋白標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを識別して生産するための種々の方法が当該分野で知られている。例えばSkerra, Curr. Opin.Biotechnol., 18:295-304 (2007),Hosse等、Protein Science,15:14-27 (2006), Gill等、Curr.Opin. Biotechnol., 17:653-658 (2006),Nygren, FEBS J., 275:2668-76 (2008), andSkerra, FEBS J., 275:2677-83 (2008)に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合ポリペプチドを識別／生産するためにファージディスプレイ技術が用いられている。特定の実施形態においては、ポリペプチドはプロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン、アンキリンコンセンサスリピートドメイン及びチオレドキシンよりなる群から選択される型の蛋白スカホールドを含む。
一部の実施形態においては、剤は非蛋白分子である。特定の実施形態においては、剤は小分子である。非蛋白ＦＯＬＲ１結合剤の識別において有用なコンビナトリアル化学ライブラリ及び手法は当該分野で知られている。例えばKennedy等、J. Comb. Chem, 10:345-354 (2008),Dolle等、 J. Comb. Chem.,9:855-902 (2007), andBhattacharyya, Curr. Med. Chem., 8:1383-404 (2001)を参照でき、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。特定の別の実施形態においては、剤は炭水化物、グリコサミノグリカン、糖蛋白、又はプロテオグリカンである。
特定の実施形態においては、剤は核酸アプタマーである。アプタマーは別の分子に結合する自身の能力に基づいて（例えばランダム又は突然変異誘発物質化プールから）選択されているポリヌクレオチド分子である。一部の実施形態においては、アプタマーはＤＮＡポリヌクレオチドを含む。特定の大体の実施形態においては、アプタマーはＲＮＡポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態においては、アプタマーは１つ以上の修飾された核酸残基を含む。蛋白への結合に関して核酸アプタマーを作成及びスクリーニングする方法は当該分野で良く知られている。例えば米国特許５，２７０，１６３、米国特許５，６８３，８６７、米国特許５，７６３，５９５、米国特許６，３４４，３２１、米国特許７，３６８，２３６、米国特許５，５８２，９８１、米国特許５，７５６，２９１、米国特許５，８４０，８６７、米国特許７，３１２，３２５、米国特許７，３２９，７４２、国際特許公開ＷＯ０２／０７７２６２、国際特許公開ＷＯ０３／０７０９８４、米国特許出願公開２００５／０２３９１３４、米国特許出願公開２００５／０１２４５６５及び米国特許出願公開２００８／０２２７７３５を参照でき、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
ＩＩＩ．イムノコンジュゲート
本発明は又、細胞傷害剤（薬物）又はプロドラッグに連結又はコンジュゲートされた本明細書に開示された抗ＦＯＬＲ１抗体、抗体フラグメント、機能的等価物、向上した抗体及びそれらの側面を含むコンジュゲート（本明細書においてはイムノコンジュゲートとも称する）に関する。即ち、特定の実施形態においては、本発明はヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを含むイムノコンジュゲートを提供し、ここで抗体は以下：（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号５６）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；ただしここで、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ及びＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ及びＲから選択され；そしてＸａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ及びＶから選択されるもの；を含む。特定の実施形態においては、抗体はｈｕＭｏｖ１９抗体であり、これは重鎖ＣＤＲ２であるＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）を含む上記抗体である。他の実施形態において、抗体はＦＲ１−２１であり、そして（ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び（ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。他の実施形態において、抗体はＦＲ１−４８であり、そして（ａ）ＴＮＹＷＭＱ（配列番号６０）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号６１）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＤＧＮＹＡＡＹ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ（配列番号５７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＡＡＴＮＬＡＤ（配列番号５８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＡＳＰＹＴ（配列番号５９）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む。他の実施形態において、抗体はＦＲ１−４９であり、そして（ａ）ＴＮＹＷＭＹ（配列番号６６）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＲＨＤＹＧＡＭＤＹ（配列番号６８）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＥＮＩＹＴＮＬＡ（配列番号６３）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＴＡＳＮＬＡＤ（配列番号６４）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＨＦＷＶＳＰＹＴ（配列番号６５）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む。他の実施形態において、抗体はＦＲ１−５７であり、そして（ａ）ＳＳＦＧＭＨ（配列番号７２）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＳ（配列番号７３）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＥＡＹＧＳＳＭＥＹ（配列番号７４）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＲＡＳＱＮＩＮＮＮＬＨ（配列番号６９）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＹＶＳＱＳＶＳ（配列番号７０）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＮＳＷＰＨＹＴ（配列番号７１）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む。他の実施形態において、抗体はＦＲ１−６５であり、そして（ａ）ＴＳＹＴＭＨ（配列番号７８）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＹＩＮＰＩＳＧＹＴＮ（配列番号７９）を含む重鎖ＣＤＲ２；及び／又はＧＧＡＹＧＲＫＰＭＤＹ（配列番号８０）を含む重鎖ＣＤＲ３；及び／又は、（ｂ）ＫＡＳＱＮＶＧＰＮＶＡ（配列番号７５）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号７６）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＹＮＳＹＰＹＴ（配列番号７７）を含む軽鎖ＣＤＲ３；を含む。
適当な薬物又はプロドラッグは当該分野で知られている。特定の実施形態においては、薬物又はプロドラッグは細胞傷害剤である。本発明の細胞傷害コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、細胞死をもたらすか、又は細胞死を誘導するか、又は一部の態様においては細胞の生存性を低下させる何れかの化合物であることができ、そして例えばマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５類縁体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類縁体、エネジイン、例えばカリケアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチン類縁体、例えばオーリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキセート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル及びモルホリノドキソルビシンを包含する。特定の実施形態においては、細胞傷害剤はマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体である。
そのようなコンジュゲートは抗体又は機能的等価物に薬物又はプロドラッグを連結するために連結基を用いることにより調製できる。適当な連結基は当該分野で良く知られており、そして、例えばジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安定基を包含する。
薬物又はプロドラッグは例えばジスルフィド結合を介して抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントに連結できる。リンカー分子又は架橋剤は抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントと反応することができる反応性の化学基を含む。特定の実施形態においては、細胞結合剤との反応のための反応性化学基はＮ−スクシンイミジルエステル及びＮ−スルホスクシンイミジルエステルである。更に又、リンカー分子は反応性の化学基、特定の実施形態においては薬物と反応してジスルフィド結合を形成できるジチオピリジル基、を含む。特定の実施形態においては、リンカー分子は、例えば−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えばＣａｒｌｓｓｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１７３：７２３−７３７（１９７８）参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば米国特許４，５６３，３０４参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）（米国特許公開２００９０２７４７１３参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）（例えばＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６参照）、２−イミノチオラン又は無水アセチルコハク酸を包含する。例えば、抗体又は細胞結合剤は架橋試薬で修飾することができ、そしてこのようにして誘導された遊離又は保護されたチオール基を含有する抗体又は細胞結合剤を次に、ジスルフィド又はチオール含有マイタンシノイドと反応させることによりコンジュゲートを生成する。コンジュゲートはクロマトグラフィー、例えば限定しないがＨＰＬＣ、サイズエクスクルージョン、吸着、イオン交換及びアフィニティーキャプチャー、透析又はタンジェンシャルフロー濾過により精製できる。特定の実施形態においては、抗ＦＯＬＲ１抗体はＳＰＤＢ又はスルホ−ＳＰＤＢリンカーを介して細胞傷害薬に連結される。特定の実施形態においては、ｈｕＭｏｖ１９抗体はＳＰＤＢ又はスルホ−ＳＰＤＢリンカーを介して細胞傷害物に連結される。
本発明の別の側面において、抗ＦＯＬＲ１抗体は、イムノコンジュゲートの力価、溶解性又は薬効を増強する場合に、ジスルフィド結合及びポリエチレングリコールを介して細胞傷害薬に連結される。そのような切断可能な親水性のリンカーはＷＯ２００９／０１３４９７６に記載されている。このリンカー設計の追加的な利点は、所望の高い単量体比及び最小限の抗体薬物コンジュゲート凝集である。この側面において得に意図されるものは、細胞結合剤のコンジュゲートであり、そして２〜８の薬物負荷の狭小な範囲を有するポリエチレングリコールスペーサー（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ＝１−１４）を担持するジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）を介して連結した薬物は、癌細胞に対して比較的高い強力な生物学的活性を示し、そして高いコンジュゲート州立及び高い単量体比と最小限の蛋白凝集という望ましい生化学的特性を有すると記載されている。
この側面において特に意図されるものは式（Ｉ）の抗ＦＯＬＲ１抗体薬物コンジュゲート又は式（Ｉ’）のコンジュゲート：
Ａ−［Ｘｌ−（−ＣＨ２−ＣＨ２Ｏ−）ｎ−Ｙ−Ｃ］ｍ （Ｉ）
［Ｃ−Ｙ−（−ＣＨ２−ＣＨ２Ｏ−）ｎ−Ｘｌ］ｍ−Ａ （Ｉ’）であり、
式中：
Ａは抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントを示し；
Ｃは細胞傷害薬を示し；
Ｘはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合剤に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し；
Ｙはジスルフィド結合を介して薬物に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し；
ｌは０又は１であり；
ｍは２〜８の整数であり；そして、
ｎは１〜２４の整数である。
一部の実施形態においては、ｍは２〜６の整数である。
一部の実施形態においては、ｍは３〜５の整数である。
更に又、特定の実施形態においては、ｎは２〜８の整数である。或いは、例えば米国特許６，４４１，１６３及び７，３６８，５６５に開示されている通り、細胞結合剤との反応に適する反応性エステルを導入するために先ず薬物を修飾することができる。活性化されたリンカー部分を含有するこれらの薬物の細胞結合剤との反応は、細胞結合剤薬物コンジュゲートを生成する別の方法を提供する。マイタンシノイドは例えば米国特許６，７１６，８２１に記載のＰＥＧ連結基を用いながら抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントに連結することもできる。これらのＰＥＧ切断不可能な連結基は水及び非水性の溶媒の両方に可溶であり、そして１つ以上の細胞傷害剤を細胞結合剤に連結するために使用できる。例示されるＰＥＧ連結基は、一端において官能性のスルヒドリル又はジスルフィド基、及び、他端において活性エステルを介してリンカーの両側末端で細胞傷害剤及び細胞結合剤と反応するヘテロ２官能性ＰＥＧリンカーを包含する。ＰＥＧ連結基を用いる細胞傷害コンジュゲートの合成の一般的例として、ここでも米国特許６，７１６，８２１を参照でき、これは参照により全体が本明細書に組み込まれる。合成の開始は反応性のＰＥＧ部分を担持している細胞傷害剤１つ以上の細胞結合剤との反応であり、これにより細胞結合剤のアミノ酸残基による各反応性ＰＥＧ部分の末端活性エステルの置き換えが起こり、これによりＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合下細胞傷害剤１つ以上を含む細胞傷害コンジュゲートが生じる。或いは、細胞結合剤を２官能性ＰＥＧ架橋剤で修飾することにより反応性のジスルフィド部分（例えばピリジルジスルフィド）を導入することができ、これを次にチオール含有マイタンシノイドで処理することによりコンジュゲートを得ることができる。別の方法においては、細胞結合を２官能性のＰＥＧ架橋剤で修飾することによりチオール部分を導入することができ、次にこれを反応性ジスルフィド含有マイタンシノイド（例えばピリジルジスルフィド）で処理することによりコンジュゲートを得ることができる。
切断不可能なの連結を有する抗体−マイタンシノイドコンジュゲートもまた調製できる。そのような架橋剤は当該分野で報告されており（ThermoScientific Pierce Crosslinking Technical Handbook及び米国特許公開２００５／０１６９９３３参照）、そして、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）、即ち、ＳＭＣＣの「長鎖」類縁体（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、β−マレイミドプロパン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＢＭＰＳ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレート（ＳＭＰＢ）、及びＮ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、及びＮ−スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）を包含するがこれに限定されない。特定の実施形態においては、抗体は、１〜１０個の反応性の基を導入するために文献記載の通り、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ又はスクシンイミジル−ヨードアセテートのような架橋剤で修飾される（Yoshitake等、Eur. J. Biochem., 101:395-399(1979); Hashida等、 J. Applied Biochem., 56-63(1984)；及びLiu等、 Biochem., 18:690-697 (1979)）。次に修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイド誘導体と反応させることによりコンジュゲートを生成する。コンジュゲートはＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５カラムを通したゲル濾過により、又は、透析又はタンジェンシャルフロー濾過により精製できる。修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイド（１〜２モル等量／マレイミド基）で処理し、そして、抗体−マイタンシノイドコンジュゲートをＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５カラムを通したゲル濾過、セラミックヒドロキシアパタイトカラム上のクロマトグラフィー、透析又はタンジェンシャルフロー濾過又はこれらの方法の組み合わせにより精製する。典型的には、抗体当たり平均で１〜１０個のマイタンシノイドを連結する。１つの方法はスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）で抗体を修飾することによりマレイミド基を導入し、その後、修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイドと反応させることによりチオエーテル連結コンジュゲートとする。ここでも抗体分子当たり１〜１０薬物分子を有するコンジュゲートが生じる。抗体、抗体フラグメント、蛋白ホルモン、蛋白成長因子及び他の蛋白のマイタンシノイドコンジュゲートを同じ態様において製造する。
本発明の別の側面においては、ＰＥＧスペーサーを間においた切断不可能な結合を介して薬物にＦＯＬＲ１抗体（例えばｈｕＭｏｖ１９、ＦＲ１−２１、ＦＲ１−４８、ＦＲ１−４９、ＦＲ１−５７又はＦＲ１−６５）を連結させる。薬物と抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントの間のリンカーを形成する親水性ＰＥＧ鎖を含む適当な架橋試薬は、当該分野で良く知られており、或いは、市販されている（例えばQuanta Biodesign, Powell, Ohio）。適当なＰＥＧ含有架橋剤は又、当該分野で知られている標準的合成化学手法を用いながら市販のＰＥＧ自体から合成することもできる。薬物を米国特許出願公開２００９０２７４７１３及びＷＯ２００９／０１３４９７６に詳述されている方法により２官能性ＰＥＧ含有架橋剤と反応させることにより次の式、即ちＺ−Ｘｌ−（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）ｎ−Ｙｐ−Ｄの化合物とし、次にこれを細胞結合剤と反応させることによりコンジュゲートとすることができる。或いは、細胞結合を２官能性ＰＥＧ架橋剤で修飾することによりチオール反応性基（例えばマレイミド又はハロアセトアミド）を導入し、次にこれをチオール含有マイタンシノイドで処理することによりコンジュゲートとすることができる。別の方法においては、細胞結合を２官能性ＰＥＧ架橋剤で修飾することによりチオール部分を導入し、次にこれをチオール反応性マイタンシノイド（例えばマレイミド又はハロアセトアミドを担持したマイタンシノイド）で処理することによりコンジュゲートとすることができる。
従って本発明の別の側面は式（ＩＩ）又は式（ＩＩ’）の抗ＦＯＬＲ１抗体薬物コンジュゲート：
Ａ−［Ｘｌ−（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）ｎ−Ｙｐ−Ｃ］ｍ （ＩＩ）
［Ｃ−Ｙｐ−（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）ｎ−Ｘｌ］ｍ−Ａ （ＩＩ’）
であり、式中、Ａは抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントを示し；
Ｃは薬物を示し；
Ｘはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合剤に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し；
Ｙはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合、アミン結合、炭素−炭素結合及びヒドラゾン結合よりなる群から選択される共有結合を介して薬物に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し；
ｌは０又は１であり；
ｐは０又は１であり；
ｍは２〜１５の整数であり；そして、
ｎは１〜２０００の整数である。
特定の実施形態においては、ｍは２〜８の整数であり；そして、
ｎは１〜２４の整数である。
特定の実施形態においては、ｍは２〜６の整数である。
特定の実施形態においては、ｎは２〜８の整数である。
特定の実施形態においては、ｍは３〜５の整数である。特定の実施形態においては、抗体はｈｕＭｏｖ１９である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ−１−２１である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ−１−４８である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ−１−４９である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ−１−５７である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ−１−６5である。適当なＰＥＧ含有リンカーの例は、抗
ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントとの反応のためのＮ−スクシンイミジルエステル又はＮ−スルホスクシンイミジルエステル、並びに化合物との反応のためのマレイミド−又はハロアセチル系の部分を有するリンカーを包含する。ＰＥＧスペーサーは、本明細書に記載する方法により当該分野で知られている何れかの架橋剤内に取り込まれることができる。
本明細書に開示するリンカーの多くは米国特許特許公開 ２００５０１６９９３３及び
２００９０２７４７１３、及びＷＯ２００９／０１３４９７６に詳述されており；その内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、約２〜約８個の薬物分子（「薬物負荷」）、例えばマイタンシノイドが抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントに連結しており、コンジュゲートの抗腫瘍採用が同じ細胞結合剤に連結した薬物の数が低値又は高値である薬物負荷と比較して遥かに効果的である側面を包含する。「薬物負荷」とは本明細書において使用する場合、細胞結合剤（例えば抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメント）に結合できる薬物分子（例えばマイタンシノイド）の数を指す。１つの側面において、細胞結合剤に結合することができる薬物分子の数は平均で約２〜約８個（例えば１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１個）であることができる。特定の実施形態においては、薬物はＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）又はＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）マイタンシン（ＤＭ４）である。即ち、特定の実施形態においては、抗体ｈｕＭｏｖ１９をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。別の実施形態においては、、抗体ＦＲ−１−２１をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。別の実施形態においては、抗体ＦＲ−１−４８をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。別の実施形態においては、抗体ＦＲ−１−４９をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。別の実施形態においては、抗体ＦＲ−１−５７をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。別の実施形態においては、抗体ＦＲ−１−６５をＤＭ１又はＤＭ４にコンジュゲートする。
即ち、１つの側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり１個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり２個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり３個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり４個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり５個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり６個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり７個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり８個のマイタンシノイドを含む。
１つの側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約１〜約８個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約２〜約７個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約２〜約６個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約２〜約５個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約３〜約５個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約３〜約４個のマイタンシノイドを含む。
１つの特徴において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり結合した薬物分子（例えばマイタンシノイド）を平均で約２〜約８個（例えば１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１個）有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約１〜約８個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約２〜約７個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約２〜約６個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約２〜約５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約３〜約５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約３〜約４個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約３．５〜約４個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。
１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり結合した薬物分子（例えばマイタンシノイド）を平均で約２±０．５個、約２．５±０．５個、約３±０．５個、約３．５±０．５個、約４±０．５個、約４．５±０．５個、約５±０．５個、約５．５±０．５個、約６±０．５個、約６．５±０．５個、約７±０．５個、約７．５±０．５個、又は約８±０．５個有する。１つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり平均で約３．５±０．５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）有する。
抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントは２官能性架橋試薬を抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントに反応させ、これにより抗ＦＯＬＲ１抗体又はそのフラグメントへのリンカー分子の共有結合を起こすことにより修飾できる。本明細書において使用する場合、「２官能性架橋試薬」とは本明細書に記載する薬物のような薬物に細胞結合剤を共有結合させる何れかの化学部分である。別の方法においては、連結部分の一部分は薬物により与えられる。この点に関し、薬物は薬物に細胞結合剤を連結するために使用されるより大きいリンカー分子の部分である連結部分を含む。例えば、マイタンシノイドＤＭ１を形成するためには、マイタンシンのＣ−３ヒドロキシル基における側鎖を遊離のスルヒドリル基（ＳＨ）を有するように修飾する。マイタンシンのこのチオール化された型は修飾された細胞結合剤と反応してコンジュゲートを形成できる。従って、再修理かは２つの成分から組み立てられ、その１つは架橋試薬から与えられ、もう１つはＤＭ１に由来する側鎖により与えられる。
薬物分子は血清アルブミンのような中間的担体分子を介して抗体分子に連結することができる。
本明細書において使用する場合、「細胞結合剤に連結した」又は「抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントに連結した」という表現は適当な連結基を介して細胞結合剤抗ＦＯＬＲ１抗体又はフラグメントに結合した少なくとも１つの薬剤誘導体を含むコンジュゲート又はその前駆体を指す。特定の実施形態においては、１つの連結基はＳＭＣＣである。
特定の実施形態においては、本発明において有用な細胞傷害剤はマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体である。適当なマイタンシノイドの例はマイタンシノールのエステル及びマイタンシノール類縁体を包含する。マイタンシノール及びマイタンシノール類縁体のように微小管形成を阻害し、そして哺乳類細胞に対して高度に毒性である如何なる薬物も包含される。
適当なマイタンシノールエステルの例は修飾された芳香族環を有するもの、及び他の位置における修飾を有するものを包含する。このような適当なマイタンシノイドは米国特許４，４２４，２１９；４，２５６，７４６；４，２９４，７５７；４，３０７，０１６；４，３１３，９４６；４，３１５，９２９；４，３３１，５９８；４，３６１，６５０；４，３６２，６６３；４，３６４，８６６；４，４５０，２５４；４，３２２，３４８；４，３７１，５３３；５，２０８，０２０；５，４１６，０６４；５，４７５，０９２；５，５８５，４９９；５，８４６，５４５；６，３３３，４１０；７，２７６，４９７及び７，４７３，７９６に開示されている。
特定の実施形態においては、本発明のイムノコンジュゲートは細胞傷害剤として、正式名称はＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシンであるチオール含有マイタンシノイド（ＤＭ１）を利用する。ＤＭ１は下記構造式（ＩＩＩ）により表わされる。
別の実施形態においては、本発明のコンジュゲートは細胞傷害剤として、チオール含有マイタンシノイドＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（例えばＤＭ４）を利用する。ＤＭ４は下記構造式（ＩＶ）により表わされる。
立体障害チオール結合を含有する側鎖を含む別のマイタンシノイドは下記構造式（Ｖ）で表わされるＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３と称する）である。
米国特許５，２０８，０２０及び７，２７６，４９７において教示されているマイタンシノイドの各々もまた、本発明におけるコンジュゲートにおいて使用できる。この点に関し、５，２０８，０２０及び７，２７６，６９７の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
マイタンシノイドの多くの位置が連結部分を化学的に連結するための位置として機能する。例えばヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシルで修飾されたＣ−１５位及びヒドロキシ基を有するＣ−２０位が全て有用であると期待される。特定の実施形態においては、Ｃ−３位を利用する。特定の実施形態においては、マイタンシノールのＣ−３位を利用する。
特定のコンジュゲートの構造図を以下に示す。






特定の実施形態においては、抗体はｈｕＭｏｖ１９である。別の実施形態においては、抗体はＦＲ１−２１である。
このような抗体マイタンシノイドコンジュゲートを生成するための幾つかの説明が米国特許６，３３３，４１０、６，４４１，１６３、６，７１６，８２１及び７，３６８，５６５に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
一般的に、水性緩衝液中の抗体の溶液を、反応性の基を担持したジスルフィド部分を有するマイタンシノイドのモル過剰量と共にインキュベートすることができる。過剰なアミン（例えばエタノールアミン、タウリン等）を添加することにより反応混合物をクエンチングできる。次にマイタンシノイド−抗体コンジュゲートをゲル濾過により精製できる。抗体分子当たりに結合しているマイタンシノイド分子の数は、２５２ｎｍ及び２８０ｎｍの吸光度の比を分光光学的に計測することにより求めることができる。平均で１〜１０個のマイタンシノイド分子／抗体を用い、そして特定の実施形態においては平均で２〜５個を使用する。マイタンシノイド分子／抗体の平均数は、例えば１〜１０、２〜５、３〜４、３．５〜４又は約３．５であることができる。１つの側面において、マイタンシノイド分子の平均数は約３．５±０．５である。１つの側面において、マイタンシノイド分子の平均数は約３．５〜４である。
マイタンシノイド薬物との抗体のコンジュゲートがインビトロで種々の望ましくない細胞系統の増殖を抑制する能力を評価することができる。例えば、ヒトＫＢ細胞系統のような細胞系統が、これらの化合物の細胞傷害性を評価するために容易に使用できる。評価すべき細胞を４〜５日間化合物に曝露し、そして細胞の生存割合を知られた方法により直接アッセイにおいて計測できる。次にＩＣ５０値をアッセイ結果から計算できる。
例えば米国特許出願２０１０／０２０３００７号に記載のベンゾジアゼピン化合物（例えばインドリノベンゾジアゼピン又はオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、それらの誘導体、それらの中間体もまた、抗ＦＯＬＲ１抗体フラグメント又はコンジュゲートを調製するために使用してよい。
有用なベンゾジアゼピンは下記式（ＸＩＶ）、（ＸＶ）及び（ＸＶＩ）：



［式中、ＮとＣとの間の二重線−−は単結合又は二重結合を示すが、ただしそれが二重結合の場合はＸは非存在であり、ＹはＨであり、そしてそれが単結合である場合はＸはＨであるか、又は化合物をプロドラッグに変換するアミノ保護部分であり；
Ｙは−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’で示されるエステル、−ＯＣＯＯＲ’で示されるカーボネート、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ”で示されるカーバメート、ＮＲ’Ｒ”で示されるヒドロキシルアミン、−ＮＲＣＯＲ’で示されるアミド、ＮＲＣＯＰで示されるペプチド、ただしここでＰはアミノ酸又は２〜２０個のアミノ酸単位を含有するペプチドであるもの、ＳＲ’で示されるチオエステル、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２−Ｒ’で示されるスルホン、−ＳＯ３で示されるスルファイト、−ＯＳＯ３で示されるビスルファイト、ハロゲン、シアノ、アジド、又はチオールから選択され、ここでＲ，Ｒ’及びＲ”は同じかまたは異なっていて、Ｈ、炭素原子１〜１０個を有する置換又は未置換の直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、炭素原子６〜１０個を有するアリール、炭素原子３〜１０個を有するヘテロ環、ただしここで置換基はＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ＮＯ２、ＮＲＣＯＲ’、ＳＲ１０から選択されるもの、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’で示されるスルホン、−ＳＯ３で示されるスルファイト、−ＯＳＯ３で示されるビスルファイト、ＳＯ２ＮＲＲ’で示されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１又はＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ただしここでＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の定義は上記において示したとおりであり、場合によりＲ”はＯＨであり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯ又はＳＯ２であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は各々独立してＨ、炭素原子１〜１０個を有する置換又は未置換の直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、又はハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、ＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ＮＯ２、ＮＲＣＯＲ’、ＳＲ１０、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’で示されるスルホン、スルファイト−ＳＯ３、ビスルファイト−ＯＳＯ３、ＳＯ２ＮＲＲ’で示されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１又はＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択される置換基から選択され、ここでＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は各々独立してＨ、炭素原子１〜１０個を有する置換又は未置換の直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、炭素原子６〜１０個を有するアリール、炭素原子３〜１０個を有するヘテロ環から選択され、場合によりＲ１０はＳＲ１３又はＣＯＲ１３であり、ここでＲ１３は炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、炭素原子６〜１０個を有するアリール、炭素原子３〜１０個を有するヘテロ環から選択され、場合によりＲ１１はＯＲ１４であり、ここでＲ１４はＲと同じ定義を有し、場合によりＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’，又はＲ４’の何れか１つは共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基であるか、又は、ポリピロロ、ポリインドリル、ポリイミダゾリル、ポリピロロイミダゾリル、ポリピロロインドリル又はポリイミダゾロインドリル単位であって場合により細胞結合剤への連結を可能にする連結基を担持しているものから選択され；
Ｚは（ＣＨ２）ｎただしｎが１、２又は３であるもの、ＣＲ１５Ｒ１６、ＮＲ１７、Ｏ又はＳから選択され、ここでＲ１５、Ｒ１６及びＲ１７は各々独立してＨ、炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるものから選択され；
Ｒ６はＯＲ、ＳＲ又はＮＲＲ’であり、ここでＲ及びＲ’は上記と同じ定義を有し；
Ｘ’はＣＨ２、ＮＲ、ＣＯ、ＢＨ、ＳＯ又はＳＯ２から選択され、ここでＲは上記と同じ定義を有し；
Ｙ’はＯ、ＣＨ２、ＮＲ又はＳであり、ここでＲは上記と同じ定義を有し；
Ｚ’はＣＨ２又は（ＣＨ２）ｎであり、ここでｎは２、３又は４であるが、ただしＸ’、Ｙ’及びＺ’は同時に全てＣＨ２であることはなく；
Ａ及びＡ’は同じかまたは異なっていて、そしてＯ、−ＣＲＲ’Ｏ、Ｓ、−ＣＲＲ’Ｓ、−ＮＲ１５又はＣＲＲ’ＮＨＲ１５から選択され、ここでＲ及びＲ’は上記と同じ定義を有し、そして、Ｒ１５はＲに関する上記と同じ定義を有し；
Ｄ及びＤ’は同じかまたは異なっていて、そして独立して炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニルであって場合によりハロゲン、ＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ＮＯ２、ＮＲＣＯＲ’、ＳＲ１０、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’で示されるスルホン、スルファイト−ＳＯ３、ビスルファイト−ＯＳＯ３、ＳＯ２ＮＲＲ’で示されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１又はＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２の何れか１つで置換されており、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の定義は上記の通りであるもの、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、から選択され；
Ｌは場合により置換されている任意のフェニル基又は炭素原子３〜１０個を有する複素環であり、ここで置換基は共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基であり、或いは、炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニルであって場合によりハロゲン、ＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ＮＯ２、ＮＲＣＯＲ’、ＳＲ１０、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’で示されるスルホン、スルファイト−ＳＯ３、ビスルファイト−ＯＳＯ３、ＳＯ２ＮＲＲ’で示されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１又はＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２の何れか１つで置換されており、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の定義は上記の通りであるもの、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、から選択され；場合によりＬそのものが共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基である］の化合物、又はそれらの製薬上許容しうる溶媒和物、塩、水和物、又は含水塩、それらの光学異性体、ラセミ混合物、ジアステレオマー、エナンチオマー又はこれらの化合物の多形結晶構造物を包含し、ここで２量体の化合物は場合により細胞結合剤への連結を可能にする連結基を担持するが；ただし、化合物は共有結合を介した細胞結合剤の連結を可能にする連結基を１つより多くは有さない。
１つの側面において、ＮとＣとの間の二重線−−は単結合又は二重結合を示すが、ただしそれが二重結合の場合はＸは非存在であり、ＹはＨであり、そしてそれが単結合である場合はＸはＨであるか、又は化合物をプロドラッグに変換するアミノ保護部分であり；
Ｙは−ＯＲ、ＮＲ’Ｒ”、スルファイト−ＳＯ３又はビスルファイト−ＯＳＯ３から選択され、ここでＲはＨ、炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、炭素原子６〜１０個を有するアリール、炭素原子３〜１０個を有するヘテロ環から選択され；
ＷはＣ＝Ｏ、ＣＨ２又はＳＯ２であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は各々独立してＨ、ＮＯ２又は共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基から選択され；
Ｒ６はＯＲ１８であり、ここでＲ１８はＲと同じ定義を有し；
Ｚは（ＣＨ２）ｎただしｎが１、２又は３であるもの、ＣＲ１５Ｒ１６、ＮＲ１７、Ｏ又はＳから選択され、ここでＲ１５、Ｒ１６及びＲ１７は各々独立してＨ、炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるものから選択され；
Ｘ’はＣＨ２又はＣ＝Ｏから選択され；
Ｙ’はＯ、ＮＲ又はＳであり、ここでＲは上記と同じ定義を有し；
Ｚ’はＣＨ２又は（ＣＨ２）２であり；
Ａ及びＡ’は各々Ｏであり；
Ｄ及びＤ’は同じかまたは異なっていて、そして独立して炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニルから選択され；
Ｌは場合により置換されている任意のフェニル基又は炭素原子３〜１０個を有する複素環であり、ここで置換基は共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基であり、或いは、炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニルであって場合によりハロゲン、ＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ＮＯ２、ＮＲＣＯＲ’、ＳＲ１０、ＳＯＲ’で示されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’で示されるスルホン、スルファイト−ＳＯ３、ビスルファイト−ＯＳＯ３、ＳＯ２ＮＲＲ’で示されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１又はＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２の何れか１つで置換されているもの、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、ただしここでｎは１〜２０００の整数であるもの、から選択され；場合によりＬそのものが共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基でありるもの；又はそれらの製薬上許容しうる溶媒和物、塩、水和物、又は含水塩、それらの光学異性体、ラセミ混合物、ジアステレオマー、エナンチオマー又はこれらの化合物の多形結晶構造物である。
別の特徴において、化合物は下記式（ＸＶＩＩ）：

［式中、ＮとＣとの間の二重線−−は単結合又は二重結合を示すが、ただしそれが二重結合の場合はＸは非存在であり、ＹはＨであり、そしてそれが単結合である場合はＸはＨであるか、又は化合物をプロドラッグに変換するアミノ保護部分であり、そしてＹはＯＨ、−ＯＲで示されるエーテル、スルファイト−ＳＯ３、又はビスルファイト−ＯＳＯ３から選択され、ここでＲは炭素原子１〜１０個を有する直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、アルケニル又はアルキニルから選択され；
Ｒ２、Ｒ３の１つは共有結合を介した細胞結合剤への連結を可能にする連結基であり、もう１つはＨであり；
Ｌ’、Ｌ”又はＬ’”の１つは細胞結合剤への連結を可能にする連結基であり、残余はＨであり；Ｌ’は連結基であることができ、そしてＧはＣＨ又はＮである］により表わされる。他の例は米国特許出願６１／１５０，２０１に記載されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。即ち、特定の実施形態においては、抗体ｈｕＭｏｖ１９を上記ＸＩＸ−ＸＸＩＩに示す構造を有するベンゾジアゼピンにコンジュゲートする。別の実施形態においては、抗体ＦＲ−１−２１を上記ＸＩＸ−ＸＸＩＩに示す構造を有するベンゾジアゼピンにコンジュゲートする。
ＩV．ポリヌクレオチド
特定の実施形態においては、本発明はＦＯＬＲ１に特異的に結合するポリペプチド、又はそのようなポリペプチドのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包含する。例えば、本発明はヒトＦＯＬＲ１に対する抗体をコードする、又はそのような抗体のフラグメントをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明のポリヌクレオチドはＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であることができる。ＤＮＡはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを包含し；そして２本鎖又は１本鎖であることができ、そして１本鎖である場合はコーディング鎖又は非コーディング（アンチセンス）鎖であることができる。
特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは単離されている。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。
本発明は配列番号４、１０、１１、４１、４２及び８８〜１０３よりなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。同様に提供されるものは配列番号４、１０、１１、４１、４２及び８８〜１０３に少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
ポリヌクレオチド配列番号５、１４及び１５はそれぞれｈｕＭｏｖ１９可変ドメイン重鎖、可変ドメイン軽鎖バージョン１．００及び可変ドメイン軽鎖バージョン１．６０に関するコーディング配列を含む。
本発明は又、配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７よりなる群から選択される配列を含むポリヌクレオチドを提供する。同様に提供されるものは配列番号５、１４、１５、３７、３８、４３、４４、４７、４８及び１２０〜１２７に少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドである。即ち、特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは（ａ）配列番号５に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド；及び／又は（ｂ）配列番号１４又は１５に少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を有するポリヌクレオチド；及び／又は（ｂ）配列番号１４又は配列番号１５のアミノ酸配列を有するポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは、例えば宿主細胞からのポリペプチドの発現及び分泌を支援する、ポリヌクレオチドに同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドに関するコーディング配列を含む（例えば細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）。リーダー配列を有するポリペプチドは、プレ蛋白であり、そして宿主細胞により切断されてポリペプチドの成熟型を形成するリーダー配列を有することができる。ポリヌクレオチドは又、成熟蛋白プラス追加５’アミノ酸残基であるプロ蛋白に対してもコードできる。プロ配列を有する成熟蛋白はプロ蛋白であり、そして蛋白の不活性型である。プロ配列が切断されると活性な成熟蛋白が残存する。
特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは例えばコードされたポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドに関するコーディング配列を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合はマーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を可能にするｐＱＥ−９ベクターにより与えられるヘキサヒスチジンタグであることができ、又は、哺乳類宿主（例えばＣＯＳ−７細胞）を使用する場合は、インフルエンザヘマグルチニン蛋白から誘導されたヘマグルチニン（ＨＡ）タグであることができる。
本発明は更に例えばフラグメント、類縁体及び誘導体をコードする上記下ポリヌクレオチドの変異体に関する。
ポリヌクレオチド変異体はコーディング領域、非コーディング領域、又は両方において改変を含有できる。一部の実施形態においては、ポリヌクレオチド変異体はサイレントな置換、負荷、又は欠失をもたらすが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を改変しない改変を含有する。一部の実施形態においては、ヌクレオチド変異体は遺伝子コードの縮重によるサイレントな置換により生成される。ポリヌクレオチド変異体は種々の理由のため、例えば特定の宿主に対してコドンの発現を最適化する（ヒトｍＲＮＡ中のコドンをＥ・コリのような細菌宿主により好まれるものに変える）ために生産することもできる。
本明細書に記載するポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。
Ｖ．使用方法及び医薬組成物
本発明のＦＯＬＲ１結合剤（抗体、イムノコンジュゲート及びポリペプチドを包含）は癌の治療のような施療的治療方法を包含するがこれに限定されない種々の用途において有用である。特定の実施形態においては、剤は腫瘍生育を阻害し、分化を誘導し、腫瘍体積を低減し、及び／又は腫瘍の腫瘍形成性を低減するために有用である。使用方法はインビトロ、エクスビボ、又はインビボの方法であってよい。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤又は抗体又はイムノコンジュゲート又はポリペプチドはそれが結合するヒトＦＯＬＲ１の拮抗剤である。
１つの側面において、本発明の抗ＦＯＬＲ１抗体及びイムノコンジュゲートは生物学的試料中のＦＯＬＲ１の存在を検出するために有用である。「検出する」という用語は本明細書において使用する場合、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の実施形態においては、生物学的試料は細胞又は組織を含む。特定の実施形態においては、そのような組織は、他の組織と相対比較してより高値のレベルでＦＯＬＲ１を発現する正常及び／又は癌性の組織、例えばＢ細胞及び／又はＢ細胞関連組織を包含する。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１の過剰発現は卵巣癌、肺癌、脳の癌、乳癌、子宮癌、腎臓癌又は膵臓癌の存在を検出する。
１つの側面において、本発明は生物学的試料中のＦＯＬＲ１の存在を検出する方法を提供する、特定の実施形態においては、方法は、ＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を可能にする条件下で抗ＦＯＬＲ１抗体に生物学的試料を接触させること、及び、抗ＦＯＬＲ１抗体とＦＯＬＲ１との間に複合体が形成されているかどうか検出することを含む。
１つの側面において、本発明はＦＯＬＲ１の増大した発現に関連する障害を診断する方法を提供する。特定の実施形態においては、方法は、抗ＦＯＬＲ１抗体に被験細胞を接触させること；ＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を検出することにより被験細胞によるＦＯＬＲ１の発現のレベルを（定量的又は定性的に）測定すること；及び被験細胞によるＦＯＬＲ１の発現のレベルを対照細胞（例えば被験細胞と同じ組織起源の正常細胞、又は、そのような正常細胞に匹敵するレベルでＦＯＬＲ１を発現している細胞）によるＦＯＬＲ１の発現のレベルと比較することを含み、ここで対照細胞と比較した場合に被験細胞によるより高レベルのＦＯＬＲ１の発現は、ＦＯＬＲ１の増大した発現に関連する障害の存在を示している。特定の実施形態においては、被験細胞はＦＯＬＲ１の増大した発現に関連する障害を有すると疑われる個体から得られる。特定の実施形態においては、障害は細胞増殖障害、例えば癌又は腫瘍である。
特定の実施形態においては、上記した者のような診断又は検出の方法は、細胞の表面上に発現されているか、又は自身の表面上にＦＯＬＲ１を発現している細胞から得られた膜調製物中の、ＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を検出することを含む。特定の実施形態においては、方法は、ＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を可能にする条件下で抗ＦＯＬＲ１抗体に細胞を接触させること、及び細胞表面上の抗ＦＯＬＲ１抗体とＦＯＬＲ１との間に複合体が形成されているかどうか検出することを含む。細胞表面に発現されたＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を検出するための例示されるアッセイは「ＦＡＣＳ」アッセイである。
特定の別の方法を用いてＦＯＬＲ１への抗ＦＯＬＲ１抗体の結合を検出することができる。そのような方法は、当該分野で良く知られている抗原結合試験、例えばウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着試験）。「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイ及び免疫組織化学（ＩＨＣ）を包含するがこれらに限定されない。
特定の実施形態においては、抗ＦＯＬＲ１抗体を標識する。標識は、直接検出される標識又は部分（例えば蛍光、発色団、電子稠密、化学ルミネセント、及び放射活性の標識）並びに例えば酵素的反応又は分子相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分を包含するがこれらに限定されない。
特定の実施形態においては、抗ＦＯＬＲ１抗体は不溶性マトリックス上に固定化される。固定化とは溶液中に遊離で残存する如何なるＦＯＬＲ１からも抗ＦＯＬＲ１抗体を分離することを意味する。これは従来より、水不溶性マトリックス又は表面に吸着することによる（Bennich等、米国特許３，７２０，７６０）か、又は共有結合カップリング（例え
ばグルタルアルデヒド架橋を用いる）による等して、アッセイ操作の前に抗ＦＯＬＲ１抗体を不溶化することによるか、又は例えば免疫沈降により抗ＦＯＬＲ１抗体とＦＯＬＲ１との間の複合体の形成の後に抗ＦＯＬＲ１抗体を不溶化することによるかの、いずれかにより達成される。
診断又は検出の上記した実施形態の何れも、抗ＦＯＬＲ１抗体の代わりに、又はそれに追加して、本発明のイムノコンジュゲートを使用しながら実施してよい。
特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤又は拮抗剤（例えばｈｕＭｏｖ１９抗体又はイムノコンジュゲート）で治療される疾患は癌である。特定の実施形態においては、癌はＦＯＬＲ１結合剤（例えば抗体）が結合する相手で
あるフォレート受容体１を発現する腫瘍により特徴付けられる。
本発明は対象（例えば治療を要する対象）にＦＯＬＲ１結合剤の治療有効量を投与することを含む癌の治療の方法を提供する。特定の実施形態においては、癌は結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、脳の癌、腎臓癌、前立腺癌、胃腸癌、黒色腫、子宮頸癌、膀胱癌、神経膠芽腫、及び頭頚部の癌よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、癌は卵巣癌である。特定の実施形態においては、癌は肺癌である。特定の実施形態においては、対象はヒトである。
本発明は更に本明細書に記載する抗体又は他の剤を用いた腫瘍生育を阻害するための方法を提供する。特定の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はインビトロでＦＯＬＲ１結合剤（例えば抗体）に細胞を接触させることを含む。例えば、ＦＯＬＲ１を発現する不朽化細胞系統又は癌細胞を培地中で培養し、これに抗体又は他の剤を添加して腫瘍生育を阻害する。一部の実施形態においては、患者試料、例えば生検組織、胸水又は血液試料から腫瘍細胞を単離し、培地中で培養し、これにＦＯＬＲ１結合剤を添加して腫瘍生育を阻害する。
一部の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はインビボでＦＯＬＲ１結合剤（例えば抗体）に腫瘍又は腫瘍細胞を接触させることを含む。特定の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤に腫瘍又は腫瘍細胞を接触させることは動物モデルにおいて行われる。例えば免疫無防備状態のマウス（例えばＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス）中で成育させておいた１つ以上のＦＯＬＲ１を発現する異種移植片にＦＯＬＲ１結合剤を投与することにより腫瘍生育を阻害することができる。一部の実施形態においては癌幹細胞を患者試料、例えば生検組織、胸水又は血液試料から単離し、免疫無防備状態のマウスに注射し、次にＦＯＬＲ１結合剤を投与することにより腫瘍細胞生育を阻害する。一部の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は動物内への腫瘍形成性細胞の導入と同時かその直後に投与することにより腫瘍生育を防止する。一部の実施形態においては、ＦＯＬＲ１結合剤は腫瘍形成性細胞が特定の大きさまで成育した後に治療薬として投与される。
特定の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はＦＯＬＲ１結合剤の治療有効量を対象に投与することを含む。特定の実施形態においては、対象はヒトである。特定の実施形態においては、対象は腫瘍を有するか、腫瘍を除去している。
特定の実施形態においては腫瘍はＦＯＬＲ１結合剤又は抗体が結合するフォレート受容体を発現する。特定の実施形態においては、腫瘍はヒトＦＯＬＲ１を過剰発現する。
特定の実施形態においては、腫瘍は脳の癌、結腸直腸腫瘍、膵臓腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸腫瘍、黒色腫、子宮頚部腫瘍、膀胱腫瘍、神経膠芽腫、及び頭頚部の腫瘍よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、腫瘍は卵巣腫瘍である。
更に又、本発明は対象にＦＯＬＲ１結合剤の治療有効量を投与することを含む対象中の腫瘍の腫瘍形成性を低減する方法を提供する。特定の実施形態においては、腫瘍は癌幹細胞を含む。特定の実施形態においては、腫瘍中の癌幹細胞の発生頻度は剤の投与により低減される。
即ち、特定の実施形態においては、本発明はｈｕＭｏｖ１９抗体及びイムノコンジュゲートを用いて癌を治療する方法を提供する。特定の実施形態においては、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートはｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４；ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＰ−ＤＭ１；ｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＰ−ＤＭ１；又はｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４−Ｍａｌ−ＤＭ４である。
本発明は更にＦＯＬＲ１結合剤に腫瘍形成性細胞を接触することを含む非腫瘍形成性細胞への腫瘍形成性細胞の文化の方法を提供する（例えば腫瘍形成性細胞を含む腫瘍を有するか、又はそのような腫瘍を除去している対象にＦＯＬＲ１結合剤を投与することによる）。特定の実施形態においては、腫瘍形成性細胞は卵巣腫瘍細胞である。
本発明は又、ＦＯＬＲ１結合剤、ポリペプチド又は抗体の有効量に固形腫瘍の支質を接触することを含むその支質における筋腺維芽細胞の活性化を低減する方法を提供する。
本発明は更に、本明細書に記載したＦＯＬＲ１結合剤の１つ以上を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態においては、医薬組成物は更に製薬上許容しうるベヒクルを含む。これらの医薬組成物はヒト患者において腫瘍生育を阻害し、そして癌を治療する場合に使用できる。
特定の実施形態においては、製剤は、製薬上許容しうるベヒクル（例えば担体、賦形剤）に本発明の精製された抗体又は剤を混合することにより保存及び使用のために調製される（Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th EditionMackPublishing,
2000）。適当な製薬上許容しうるベヒクルは
非毒性緩衝物質、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸;塩類、例えば塩化ナトリ
ウム；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン；保存料（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば約１０アミノ酸残基未満）；蛋白、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；炭水化物、例えば単糖類、２糖類、グルコース、マンノース、デキストリン；キレート形成剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えばＺｎ−蛋白複合体）；及びノニオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を包含するがこれらに限定されない。
本発明の医薬組成物は局所又は全身投与の何れかのために如何なる数の方法においても投与できる。投与は局所（例えば経膣及び肛門送達を包含する経粘膜）、例えば経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、座剤、スプレー、液体及び粉末；肺（例えば粉末又はエアロゾルの吸入又は吸収、例えばネブライザーによるもの；気管内、鼻内、表皮及び経皮）；経口;又は非経腸、例えば静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は筋
肉内の注射又は輸液；又は頭蓋内（例えば髄腔内又は脳室内）投与であることができる。
本発明のイムノコンジュゲートの抗体は、医薬複合製剤又は複合療法としての投薬法において、抗癌特性を有する第２の化合物と組み合わせることができる。医薬複合製剤又は投薬法の第２の化合物は好ましくはそれらが相互に悪影響を及ぼさないように複合物のＡＤＣに対して補完的活性を有する。ＦＯＬＲ１結合剤及び第２の抗癌剤を含む医薬組成物も提供される。
疾患の治療のためには、本発明の抗体又は剤の適切な用量は、治療すべき疾患の型、疾患の重症度及び経過、疾患の応答性、抗体又は剤が治療又は予防目的の何れで投与されるか、以前の治療、患者の病歴等に応じたものとなり、全て担当医の判断による。抗体又は剤は、１回、又は数日から数か月まで継続する一連の治療に渡り、或いは、治癒が成功するか、又は疾患の縮小（例えば腫瘍の大きさの減少）が達成されるまで投与することができる。最適な投薬計画は患者の身体における薬物の蓄積の計測から計算でき、そして個々の抗体又は剤の相対的力価に応じて変動することになる。投薬医師は最適な用量、投薬法および反復率を容易に決定できる。特定の実施形態においては、用量はｋｇ体重当たり０．０１μｇ〜１００ｍｇであり、そして毎日、毎週、毎月又は毎年１回以上投与できる。特定の実施形態においては、抗体又は他のＦＯＬＲ１結合剤を２週間に１回、又は３週間に１回投与する。特定の実施形態においては、抗体又は他のＦＯＬＲ１結合剤の用量はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。担当医は体液又は組織中の薬物の滞留時間及び濃度の計測値に基づいて投薬の反復率を推定できる。
複合療法は「相乗作用」をもたらすことができ、「相乗作用的」であることがわかっており、即ち、活性成分を共に使用した場合に達成される作用が、化合物を別個に使用した場合に得られる作用の総和より大きい。相乗作用は、活性成分が（１）共同製剤され、そして複合単位剤型において同時に投与又は送達されるか；（２）別個の製剤として交互又は並行して送達されるか；又は（３）何らかの他の投薬法による場合に、達成できる。交互治療において送達される場合、相乗作用は、化合物が逐次的に、例えば別個のシリンジにおける異なる注射により投与又は送達される場合に達成できる。一般的に、交互治療中は、各活性成分の有効用量を逐次的、即ち連続して投与するが、複合療法の場合は、２つ以上の活性成分の有効用量を共に投与する。
ＶＩ．ＦＯＬＲ１結合剤を含むキット
本発明は本明細書に記載した抗体、イムノコンジュゲート又は他の剤を含み、そして本明細書に記載した方法を実施するために使用できるキットを提供する。特定の実施形態においては、キットは容器１つ以上の中にヒトフォレート受容体１に対する精製された抗体少なくとも１つを含む。一部の実施形態においては、キットは対照、アッセイ実施のための説明書、及び結果の分析及び表示のための何れかの必要なソフトウエアの全てを含む検出アッセイを実施するために必要及び／又は十分な成分の全てを含有する。本発明の開示した抗体、イムノコンジュゲート及び他の剤は当該分野で良く知られている確立されたキットフォーマットの１つに容易に組み込むことができることが当業者の知る通りである。
更に提供されるものはＦＯＬＲ１結合剤（例えばＦＯＬＲ１結合抗体）並びに第２の抗癌剤を含むキットである。特定の実施形態においては、第２の抗癌剤は化学療法剤（例えばゲムシタビン又はイリノテカン）である。
本発明の実施形態は以下の非限定的な例を参照することにより更に明確化でき、これらは本開示の特定の抗体の調製及び本開示の抗体を用いるための方法を詳細に説明している。物質及び方法の両方に対する多くの変更が本開示の範囲から逸脱することなく実施できることは当業者の知る通りである。
本明細書に記載した実施例及び実施形態は説明を目的としているのみであり、そしてそれに基づく種々の改変または変更が当業者に示唆されることになり、そして本出願の精神及び範囲に包含されるべきであると理解しなければならない。
（実施例１）
ネズミモノクローナル抗体Ｍｏｖ１９のキメラ化
Ｍｏｖ１９の可変領域アミノ酸配列をＮＣＢＩデータベース（軽鎖（配列番号２４）に関してはアクセッションＣＡＡ６８２５３及び重鎖（配列番号２３）に対してはＣＡＡ６８２５２）から入手し、そして次にコドン最適化し、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより合成した。軽鎖可変領域はｐＡｂＫＺｅｏプラスミド中のＥｃｏＲＩ及びＢｓｉＷＩ部位にクローニングし、そして重鎖可変領域はｐＡｂＧ１ＮｅｏプラスミドのＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａ１部位にクローニングした。
（実施例２）
ネズミモノクローナル抗体Ｍｏｖ１９及びＦＲ１−２１のヒト化Ｍｏｖ１９抗体は以前に報告されているフレームワークリサーフィシング法（Roguska M.等、Proc.Natl.Acad. Sci.USA 1994 Feb;91:969-973)及び(Roguska等、Protein Eng.9(10):895-904 (1996)）に従ってヒト化した。要すれば、各可変領域フレームワーク残基に関する平均溶媒アクセス性をＰＤＢデータベースの緊密関連解明抗体構造(closely related solved antibody structure)を用いて計算し、そして３０％平均アクセス性より高値の位置を表面残基としてマークした（Pedersen J.T.等、J. Mol. Biol. 1994; 235: 959-973）。ヒト表面置き換え配列は、Ｋａｂａｔデータベースにおけるヒト抗体生殖細胞系統配列の相当する位置にネズミ抗体配列の表面位置をアラインすることにより選択した（Johnson,G. and Wu, T. T. (2001) Nucleic Acids Research,29:205-206）。最も相同なヒト軽鎖可変領域表面（クローンDPK19、Ｍｏｖ１９に関してはIMGT遺伝子座IGKV2D-30*01、そしてＦＲ１−２１に関してはIMGT遺伝子座IGKV1/OR2-0*01）及び最も相同なヒト重鎖可変領域表面（クローン8M27、Ｍｏｖ１８に関してはIMGT遺伝子座IGHV1-69*08、そしてＦＲ１−２１に関してはIMGT遺伝子座IGHV5-51*02 for FR1-21）を選択することによりネズミＭｏｖ１９フレームワーク表面位置を置き換え、６ＣＤＲ（表１）は未改変のままとした。ネズミ及びヒトＭｏｖ１９及びＦＲ１−２１の表面位置及び残基を図１Ａ〜Ｄに示す。
残基変化の何れも、Ｍｏｖ１９又はＦＲ１−２１のＣＤＲとフォレート受容体１上のそれらの標的エピトープとの相互作用に影響するという問題を生じさせず、従って表面の復帰突然変異は何れの抗体のヒト化配列に関しても考慮しなかった。しかしながらリサーフィシングされたＭｏｖ１９配列は軽鎖Ｎ７４においてコンセンサスＮ連結グリコシル化部位を導入しており（軽鎖バージョン１．００）、従ってこの部位を除去するために第２のヒト化軽鎖バージョンを作成した。Ｋａｂａｔのヒト軽鎖配列データベースを検討した所、スレオニンが軽鎖７４位において観察される最も一般的な残基であることがわかり、従って７４位にスレオニンを有するようにヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖バージョン１．６０を構築した。７４位は表面残基ではないため、この残基置換はリサーフィシングによるヒト化に影響しない。ネズミ及びヒト化Ｍｏｖ１９及びＦＲ１−２１の可変領域配列のアライメントを図２に示す。
ヒト化Ｍｏｖ１９及びＦＲ１−２１の可変領域配列をコドン最適化し、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより合成した。配列は単鎖哺乳類発現プラスミドにおける該当する定常配列とインフレームにクローニングし易くするための制限酵素部位によりフランキングされている。軽鎖可変領域をｐＡｂＫＺｅｏプラスミド中のＥｃｏＲＩ及びＢｓｉＷＩ部位にクローニングした。得られたｈｕＭｏｖ１９軽鎖をコードするプラスミドＤＮＡをＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７３及びＰＴＡ−１０７７４としてＡＴＣＣに寄託し、そして得られたＦＲ１−２１軽鎖をコードするプラスミドＤＮＡをＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７６として寄託した。重鎖可変領域はｐＡｂＧ１ＮｅｏプラスミドのＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａ１部位にクローニングした。得られたｈｕＭｏｖ１９重鎖をコードするプラスミドＤＮＡをＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７２としてＡＴＣＣに寄託し、そして得られたＦＲ１−２１重鎖をコードするプラスミドＤＮＡをＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７５として寄託した。次にこれらのプラスミドを実施例３に記載するとおりトランスフェクトすることによりｈｕＭｏｖ１９を作成した。何れかのｈｕＭｏｖ１９系さをコードするプラスミド（即ちＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０７７３及びＰＴＡ−１０７７４として寄託されたもの）をｈｕＭｏｖ１９重鎖をコードするプラスミドと対にすることにより、本明細書に記載する方法に従って、そして当該分野で良く知られている通り、ｈｕＭｏｖ１９抗体を作成することができる。
（実施例３）
組み換え抗体発現
キメラ及びヒト化抗体コンストラクトを標準的なリン酸カルシウム操作法を用いながら付着ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞において（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＣａｌＰｈｏｓ乳類トランスフェクションキット、カタログ番号６３１３１２）又は、ＰＥＩ変法を用いながら懸濁処理ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞において（Durocher Y, Perret S, Kamen A High-levelandhigh-throughputrecombinant protein production by transient transfection ofsuspension-growinghuman 293-EBNA1 cells. Nucleic Acids Res. 2002 Jan15;30(2):E9）スピナーフラスコ中で一過性に作成した。ＰＥＩ一過性トランスフェクションは、今回はＨＥＫ−２９３Ｔ細胞をＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で生育させ、そしてＰＥＩ−ＤＮＡ複合体添加後に培養容積を未希釈のままとした以外は、以前に報告されている通り実施した（Durocher,Y.等、Nucleic Acids Res. 30(2):E9(2002)）。付着及び懸濁物の一過性トランスフェクションの両方を１週間インキュベートし、そして次に清澄化された上澄みをプロテインＡカラム、ついでＣＭカラムイオン交換クロマトグラフィーにより後述するとおり精製した。図３に示す通り、ｈｕＭｏｖ１９の発現はトランスフェクトされた細胞においてキメラＭｏｖ１９の発現より少なくとも１０倍高値であった。
（実施例４）
抗体精製
抗体を例えばプロテインＡ又はＧクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐプロテインＡ又はＧＨＰ、１ｍＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のような標準的方法を用いながら清澄化細胞培養上澄みから精製した。要すれば、１／１０容量の１ＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ８．０を添加することにより上澄みをクロマトグラフィー用に調製した。ｐＨ調節上澄みを０．２２μｍのメンブレンフィルターで濾過し、そして結合緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．３）で平衡化したカラムにロードした。カラムは２８０ｎｍにおける吸光度が無く安定なベースラインが得られるまで結合緩衝液で洗浄した。０．５ｍＬ／分の流量を用いながら、０．１５ＭＮａＣｌを含有する０．１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ２．８で抗体を溶離した。約０．２５ｍＬの画分を採取し、１／１０容量の１ＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．０を添加することにより中和した。ピーク画分を１ｘＰＢＳに対して２回一夜透析し、０．２μｍのメンブレンフィルターを通して濾過することにより滅菌した。精製された抗体はＡ２８０の吸光度により定量した。
プロテインＡ精製画分は、更にカルボキシメチル（ＣＭ）クロマトグラフィーによるイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）を用いて最終精製した。要すれば、プロテインＡ精製からの試料を結合緩衝液（１０ｍＭリン酸カルシウム、１０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．５）に緩衝液交換し、そして０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。調製した試料を次に、１２０ｃｍ／ｈｒの流量で出発緩衝液で平衡化されたＣＭファーストフロー樹脂（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）上にロードした。カラムのサイズは試料中の全ての抗体に結合するために十分な容量を有するように選択した。次にカラムを２８０ｎｍにおける吸光度が無く安定なベースラインが得られるまで結合緩衝液で洗浄した。２０カラム容量（ＣＶ）中１０ｍＭから５００ｍＭの塩化ナトリウムの勾配を開始することにより抗体を溶離した。腫瘍ピークの５０ｍＡｕより高値のＵＶ読み取り値を有する画分を収集した。純度（単量体及び可溶性高分子量凝集物のパーセンテージ）はＡｇｉｌｅｎｔＨＰＬＣ１１００システム（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｌａ，ＣＡ）を用いながら、ＳＷＸＬガードカラム、６．０ｘ４０ｍｍ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を用いたＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ，７．８ｘ３００ｍｍ上のサイズエクスクルージョンクロマトグラフィー（ＳＥＣ）で評価した。所望の純度（＞９５％）を有する画分をプールし、ＴＦＦシステムを用いてＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換し、そして０．２μｍのメンブレンフィルターを通して濾過することにより滅菌した。精製された抗体を更にその純度に関してＳＥＣにより試験し、そして１．４７の消衰係数を用いながら２８０ｎｍにおける吸光度測定によりＩｇＧ濃度を求めた。必要に応じて希釈を行った。或いは、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）もまた良好な選択性でネズミ及びヒト化抗体の両方を最終精製するために使用できる。粒径４０μｍのＩＩ型ＣＨＴ樹脂（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）もＩＥＸクロマトグラフィーに関して記載したものと同様のプロトコルで抗体の最終精製に適用した。ＣＨＴの出発緩衝液は２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０とし、そして抗体は２０ＣＶに渡って２０〜１６０ｍＭリン酸ナトリウムの勾配により溶離した。
（実施例５）
ねずみ抗ＦＯＬＲ１抗体の開発
２種の異なる免疫化／スクリーニングのシリーズを用いた。第１のシリーズはＦＲ１−２１クローンの形成をもたらし、そして第２のシリーズはＦＲ１−４８、ＦＲ１−４９、ＦＲ１−５７及びＦＲ１−６５クローンの形成をもたらしている。第１のシリーズにおいては、マウスを約５ｘ１０６ＦＯＬＲ１発現ＫＢ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ−１７）で皮下免疫化した。第２のシリーズにおいては、自身の表面にヒトＦＯＬＲ１を発現する３００−１９細胞を用いてマウスを免疫化した。これらの細胞を作成するためにヒトＦＯＬＲ１アミノ酸配列をＮＣＢＩウエブサイト（アクセッションＮＰ＿０５７９３７）から入手し、次にそれをコドン最適化し、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより合成し、ＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ制限部位によりフランキングさせることによりｐＳＲａ哺乳類発現ベクター内へのクローニングを容易にした。３００−１９細胞、即ちＢａｌｂ／ｃマウスから誘導した前Ｂ細胞系統（Reth等、Nature, 317: 353-355 (1985)）をｐＳＲａ−ＦｏｌＲ１発現プラスミドでトランスフェクトすることにより細胞表面上にｈｕＦＯＬＲ１を高レベルで安定に発現させた。ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃにおいて使用されているもののような当該分野で知られている標準的な免疫化プロトコルを両方のシリーズに適用した。免疫化したマウスは、ハイブリドーマ形成のために屠殺する３日前に抗原でブーストした。マウスの脾臓を標準的動物プロトコルに従って、例えば２枚の滅菌フロスト処理顕微鏡用スライドの間で組織を磨砕することによりＲＰＭＩ−１６４０培地中の単細胞懸濁液を得た。脾細胞を遠心分離し、ペレット化し、洗浄し、ポリエチレングリコール−１５００（Ｒｏｃｈｅ７８３６４１）を用いることによりネズミミエローマ、例えばＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Kearney等、J Immunol,123: 1548-1550（1979））と融合させた。ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）（ＳｉｇｍａＨ−０２６２）を含有するＲＰＭＩ−１６４０選択培地に融合細胞を再懸濁し、そして３７℃５％ＣＯ２下に９６穴平底培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ３５９６、ウェル当たり細胞懸濁液０．２ｍＬ）中における生育に関して選択した。５日間インキュベートした後、培養上澄み０．１ｍＬを各ウェルから取り出し、ヒポキサンチン−チミジン（ＨＴ）補給物（ＳｉｇｍａＨ−０１３７）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地０．１ｍＬと置き換えた。ハイブリドーマクローンが抗体スクリーニングに使用できるようになるまで、３７℃５％ＣＯ２下にインキュベーションを継続した。免疫化及びハイブリドーマ作成の他の手法、例えばLangone等、(編集“Immunochemical Techniques,Part I”,Methods in Enzymology,Academic Press, volume 121,Florida)及びHarlow等、(“Antibodies: A Laboratory Manual”; Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York (1988))に記載されているものも使用できる。

（実施例６）
ハイブリドーマスクリーニング及び選択
ヒトＦＯＬＲ１でトランスフェクトしたＦＯＬＲ１−３００−１９細胞及びＫＢ細胞を第１及び第２のシリーズのスクリーニングにそれぞれ使用した。ＦＯＬＲ１陽性細胞、例えばＦＯＬＲ１発現３００−１９細胞又はＫＢ細胞には結合するがＦＯＬＲ１陰性細胞、例えば非トランスフェクトの３００−１９細胞には結合しないマウスモノクローナル抗体の分泌に関してフローサイトメトリーによりハイブリドーマの培養上澄みをスクリーニングした。ハイブリドーマ上澄み０．１ｍＬを０．１ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％正常ヤギ血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地）中ＦＯＬＲ１陽性細胞又は非トランスフェクトの３００−１９細胞（試料当たり１ｘ１０５個）の何れかと共に３時間インキュベートした。次に細胞を遠心分離し、ペレット化し、洗浄し、ＰＥコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙより入手可能、ＦＡＣＳ緩衝液中６μｇ／ｍｌ）０．１ｍＬと共に１時間インキュベートした。細胞を遠心分離し、再度ペレット化し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１％ホルムアルデヒド含有ＰＢＳ０．２ｍＬ中に再懸濁した。細胞会合蛍光をＨＴＳマルチウェルサンプラーを用いたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー又はＦＡＣＳアレイフローサイトメトリーを用いながら計測し、そしてＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ（全ての入手元はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎｄｉｅｇｏ，ＵＳ）を用いて分析した。陽性所見のハイブリドーマクローンを限界希釈によりサブクローニングした。フローサイトメトリーにより親細胞と同じＦＯＬＲ１に対する反応性を示した各ハイブリドーマから１つのサブクローンを選択して後の分析に付した。安定なサブクローンを培養し、各分泌抗ＦＯＬＲ１抗体のアイソタイプを市販のアイソタイピング試薬（Ｒｏｃｈｅ１４９３０２７）を用いて識別した。上記した通り清澄化されたハイブリドーマ培地からネズミ抗体をプロテインＡ精製した。これらの抗体をＦＲ−１抗体と表記した。
（実施例７）
ネズミモノクローナル抗体精製
抗体を例えばプロテインＡ又はＧクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐプロテインＡ又はＧＨＰ、１ｍＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のような標準的方法を用いながらハイブリドーマサブクローン上澄みから精製した。要すれば、１／１０容量の１ＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ８．０を添加することにより上澄みをクロマトグラフィー用に調製した。ｐＨ調節上澄みを０．２２μｍのメンブレンフィルターで濾過し、そして結合緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．３）で平衡化したカラムにロードした。カラムは２８０ｎｍにおける吸光度が無く安定なベースラインが得られるまで結合緩衝液で洗浄した。０．５ｍＬ／分の流量を用いながら、０．１５ＭＮａＣｌを含有する０．１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ２．８で抗体を溶離した。約０．２５ｍＬの画分を採取し、１／１０容量の１ＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．０を添加することにより中和した。ピーク画分を１ｘＰＢＳに対して２回一夜透析し、０．２μｍのメンブレンフィルターを通して濾過することにより滅菌した。精製された抗体はＡ２８０の吸光度により定量した。
（実施例８）
フローサイトメトリーによる結合の特性化
精製された抗体を用いながらフローサイトメトリーにより結合特異性を試験した。抗ＦＯＬＲ１のＦＯＬＲ１発現３００−１９細胞への結合及び親３００−１９細胞への結合が無いことを示すＦＡＣＳヒストグラムを図４に示す。０．１ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％正常ヤギ血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地）中のＦＯＬＲ１発現３００−１９細胞又は非トランスフェクト３００−１９細胞（試料当たり細胞１ｘ１０５個）の何れかと共に３時間、各抗体をインキュベートした。次に、細胞をペレット化し、洗浄し、０．１ｍＬのＦＩＴＣ−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手可能、ＦＡＣＳ緩衝液中６μｇ／ｍｌ）と共に１時間インキュベートした。細胞を再度ペレット化し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１％ホルムアルデヒド含有ＰＢＳ２００μＬ中に再懸濁した。試料はＨＴＳマルチウェルサンプラーを用いたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー又はＦＡＣＳアレイフローサイトメトリーを用いながら獲得し、そしてＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ（全ての入手元はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎｄｉｅｇｏ，ＵＳ）を用いて分析した。抗ＦＯＬＲ１抗体のＦＡＣＳヒストグラムは蛍光のシフトを示したが、親３００−１９細胞は示さなかった。細胞系統の何れもＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体単独のみとインキュベートした場合には有意な蛍光のシフトは検出されなかった。
（実施例９）
ｍｕＦＲ１−２１のＶＬ及びＶＨ領域のクローニング及び配列決定
製造元のプロトコルに従ってＲＮｅａｓｙキット（ＱＩＡｇｅｎ）を用いながら５ｘ１０６ハイブリドーマ細胞から全細胞ＲＮＡを調製した。その後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩｃＤＮＡ合成キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いながら全ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。ハイブリドーマ細胞から誘導したｃＤＮＡ上の第１ラウンドの変性ＰＣＲ反応のための操作法はWang等、((2000) J Immunol Methods. Jan 13;233(1-2):167-77) and Co等、((1992)J Immunol. Feb15;148(4):1149-54)に記載の方法に基づいた。ＶＨ配列は以下の変性プライマー：ＥｃｏＭＨ１ＣＴＴＣＣＧＧＡＡＴＴＣＳＡＲＧＴＮＭＡＧＣＴＧＳＡＧＳＡＧＴＣ（配列番号５０），ＥｃｏＭＨ２ＣＴＴＣＣＧＧＡＡＴＴＣＳＡＲＧＴＮＭＡＧＣＴＧＳＡＧＳＡＧＴＣＷＧＧ（配列番号５１）及びＢａｍＩｇＧ１ＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＧＣ（配列番号５２）を用いたＰＣＲにより増幅した。ＶＬ配列は以下の変性プライマー：ＳａｃＩＭＫＧＧＡＧＣＴＣＧＡＹＡＴＴＧＴＧＭＴＳＡＣＭＣＡＲＷＣＴＭＣＡ（配列番号５３）及びＨｉｎｄＫＬＴＡＴＡＧＡＧＣＴＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣ（配列番号５４）を用いたＰＣＲにより増幅した。（混合塩基は以下の通り、即ち：Ｎ＝Ｇ＋Ａ＋Ｔ＋Ｃ，Ｓ＝Ｇ＋Ｃ，Ｙ＝Ｃ＋Ｔ，Ｍ＝Ａ＋Ｃ，Ｒ＝Ａ＋Ｇ，Ｗ＝Ａ＋Ｔと定義した）。
次にＰＣＲ反応混合物を１％低融点アガロースゲル上で泳動させ、３００〜４００ｂｐバンドを切り出し、ＺｙｍｏＤＮＡミニカラムを用いて精製し、そして配列決定のためにＡｇｅｎｃｏｕｒｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓに送付した。それぞれの５’及び３’ＰＣＲプライマーを配列決定プライマーとして使用することにより両方の方向から可変領域ｃＤＮＡを形成した。ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列はＶｅｃｔｏｒＮＴＩソフトウエアを用いてＤＮＡ配列決定の結果を解釈することにより得た。
予備可変領域ｃＤＮＡ配列における５’末端プライマー配列決定の人工的要因を発見するために、ＮＣＢＩのＩｇＢｌａｓｔサイト（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/）を用いて抗体配列の誘導元のネズミ生殖細胞系統の配列に関して検索した。次に明確化された可変領域配列を特定の抗体の定常領域に関するＮＣＢＩのレファレンス配列と組み合わせることにより予測される完全長のネズミ抗体配列を組み立てた。次に予測されるネズミＦｒ１−２１軽鎖及び重鎖の分子量を計算し、そして、液体クロマトグラフィー／質量スペクトル分析（ＬＣ／ＭＳ）により計測した質量と比較した。ネズミＦＲ１−２１重鎖は計測された質量とマッチしたが、軽鎖は５’末端配列を調べるためにフォローアップの配列決定作業を必要とした。ネズミ抗体の生殖細胞系統連結リーダー配列にアニーリングするようにＣＤ３７−１ＬＣｌｅａｄ１ＰＣＲプライマー（ｔｔｔｔｇａａｔｔｃｇｃｃａｃｃａｔｇａａｇｔｔｔｃｃｔｔｃｔｃａａｃｔｔｃｔ）を設計し、これによりこの新しいＰＣＲ反応がプライマーにより改変されない完全な可変領域ｃＤＮＡを与えるようにした。ＰＣＲ反応、バンド精製、及び配列決定は上記した通り実施し、そして新しい完全な配列はＬＣ／ＭＳにより計測したＦｒ１−２１の軽鎖の分子量にマッチする軽鎖をコードしていた。
（実施例１０）
レファレンス抗体の発現
Morphotech抗FOLR1抗体、MorAb-003(Farletuzumab)、アミノ酸配列をWorld Health Organization (WHO) InternationalNonproprietary Namesfor Pharmaceutical Substances (INN) のリストから入手し、コドン最適化し、BlueHeronBiotechnologyにより合成した。単鎖哺乳類発現プラスミドにおけるそれぞれの定常配列とインフレームにクローニングするために、軽鎖可変領域配列はEcoRI及びBsiWI制限酵素部位によりフランキングされており、そして重鎖可変領域配列はHindIII及びApa1制限酵素部位によりフランキングされている。クローニング、発現及び精製は上記ヒト化Ｍｏｖ１９及びＦｒ１−２１に関して記載したとおり実施した。
（実施例１１）
ｈｕＭｏｖ１９のＡＤＣＣ活性
ラクテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）はエフェクター細胞としての新しく単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を用いた腫瘍細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を計測するために使用されている（例えばShields, J. Biol. Chem., 276(9):6591-6604 (2001)）。ＮＫ単離キットＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，１３０−０９１−１５２）に関する修正プロトコルを用いながら正常者ドナー由来のヒト血液（ResearchBlood Components, Inc., Brighton, MA）から最初に単離した。血液を１ｘＰＢＳで２倍希釈した。希釈血液２５ｍＬを５０ｍＬ三角試験管中の２５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ上に慎重に重層し、ＲＴで４５分間４００Ｇで遠心分離した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を界面から収集し、新しい５０ｍＬ三角試験管に移し、そして１ｘＰＢＳで１回洗浄した。ＰＢＭＣをＮＫ単離緩衝液（１ｘＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、２ｍＭＥＤＴＡ）２ｍＬ中に再懸濁し、次にビオチン抗体カクテル５００μＬを細胞懸濁液に添加した。ビオチン抗体カクテルは、ＮＫ細胞以外のリンパ球に結合してＮＫ細胞の負の選択をもたらすビオチニル化抗体を含有する。混合物を１０分間４℃でインキュベートし、次にＮＫ単離緩衝液１．５ｍＬ及び抗ビオチンマイクロビーズ１ｍＬを添加した。細胞−抗体混合物を４℃で更に１５分インキュベートした。次に、細胞を１回５０ｍＬのＮＫ単離緩衝液で洗浄し、３ｍＬのＮＫ単離緩衝液に再懸濁した。次にＭＡＣＳＬＣカラムを自動ＭＡＣＳ分離機（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）上に搭載し、ＮＫ単離緩衝液３ｍＬで予備洗浄した。細胞懸濁液を自動的にカラムにアプライし、洗浄し、そして未標識ＮＫ細胞を有する溶出画分を新しい５０ｍＬ容量の三角試験管に収集した。得られたＮＫ細胞を、一夜、完全ＲＰＭＩ培地（５％ウシ胎児血清、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、１ｍＭＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１％１００ＸＭＥＭ非必須アミノ酸溶液を添加したＲＰＭＩ−１６４０）３０ｍＬ中にプレーティングした。その後のアッセイ及び全ての希釈はＲＨＢＰ培地（２０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ及び１％ペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地）中で実施した。ＲＨＢＰ培地中の種々の濃度の抗体を丸底９６穴プレート中５０μＬ／ウェルで２連に分注した。標的細胞をＲＨＢＰ培地中１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、抗体希釈物を含有する各ウェルに１００μＬ／ウェルで添加した。標的細胞及び抗体希釈物を含有するプレートを３７℃で３０分間インキュベートした。次に５０μＬ／ウェルで標的細胞を含有するウェルにＮＫ細胞を添加した。典型的な比は３〜４ＮＫ細胞に対して１標的細胞とした。少なくとも以下の対照、即ち：ＮＫ細胞単独、標的細胞単独（自発的ＬＤＨ放出）、標的細胞とＮＫ細胞（抗体非依存性ＬＤＨ放出）、標的細胞と１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（最大ＬＤＨ放出）を各実験に対して設定した。混合物を４時間３℃でインキュベートすることにより細胞溶解を可能とした。プレートを１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄み１００μＬを慎重に新しい平底９６穴プレートに移した。細胞傷害検出キット（Ｒｏｃｈｅ １６４４７９３）から入手したＬＤＨ反応混合物（１００μＬ／ウェル）を各ウェルに添加し、５〜３０分間室温でインキュベートした。試料の光学密度を４９０ｎｍで計測した（ＯＤ４９０）。各試料のパーセント特異的溶解は、以下の式、即ち：パーセント特異的溶解＝（試料の値−自発的放出）／（最大放出−自発的放出）＊１００を用いて求めた。
ｈｕＭｏｖ１９とのインキュベーションはヒトＮＫエフェクター細胞の存在下のＩＧＲＯＶ−１細胞に対する良好なＡＤＣＣ活性をもたらす。ＩＧＲＯＶ−１に対するＡＤＣＣ活性をｈｕＭｏｖ１９、ｈｕＦＲ−１−２１、Ｍｏｒ００３及びｃｈＴＫ１（アイソタイプ対照）に関して比較した（図６）。０．９ｎｇ／ｍＬのｈｕＭｏｖ１９の投与は約３０％のＩＧＲＯＶ−１細胞溶解をもたらし、他の抗ＦＯＬＲ１抗体で観察された活性と同様であった。ｈｕＭｏｖ１９のＡＤＣＣ活性は０．２０ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有し、ｈｕＦＲ−１−２１は０．１１ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有し、Ｍｏｒ００３は０．１６ｎｇ／ｍＬであり、そしてｃｈＴＫ１はＩＧＲＯＶ−１細胞に対して如何なる活性も示さなかった。
（実施例１２）
抗ＦＯＬＲ１イムノコンジュゲートの調製
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の調製
例示される２−スルホ−ＳＰＤＢリンカーをＤＭＡ中に溶解した。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６抗体をｐＨ７．５において２５℃で約２時間２−スルホ−ＳＰＤＢリンカーの１２倍モル過剰量と共に８ｍｇ／ｍｌでインキュベートした。
５０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＥＤＴＡを含有する５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６．５で平衡化したＳＥＰＨＡＤＥＸＴＭＧ２５Ｆカラムを用いて反応混合物を精製した。マイタンシノイドＤＭ４をジメチルアセトアミド（ＤＭＡ、終濃度は５％）中に溶解し、リンカーと比較して１．７倍モル過剰量をスルホ−ＳＰＤＢ修飾抗体に滴下した。１ｍＨＥＰＥＳ緩衝液で反応混合物をｐＨ７．５に調節した。室温で一夜インキュベートした後、コンジュゲートした抗体を１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％スクロース、ｐＨ５．５で平行化したＳＥＰＨＡＤＥＸＴＭＧ２５Ｆ上のクロマトグラフィーにより精製した。
以前に報告されている抗体及びマイタンシノイドに関する消衰係数を用いながら抗体分子当たり連結したＤＭ４分子の数を求めた（Widdison, WC,等、J Med Chem, 49:4392-4408(2006)）。全遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージを上記した通り求めた。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６抗体当たり３．５〜５個のＤＭ４分子のコンジュゲートが得られ、＜１％が未コンジュゲートマイタンシノイドとして存在していた。
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６−ＳＰＰ−ＤＭ１の調製
例示されるＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）リンカーをエタノールに溶解した。５０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＥＤＴＡ、及び５％エタノールを含有する５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）中室温で約２時間、ＳＰＰリンカーの６．５〜６倍モル過剰量と共に８ｍｇ／ｍｌでｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６抗体をインキュベートした。ＳＰＰ修飾抗体をＰＢＳ、ｐＨ６．５中で２倍希釈し、そしてマイタンシノイドＤＭ１の１．５倍モル過剰による修飾を、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中のＤＭ１の濃溶液（１５〜３０ｍＭ）の添加により行った。ＤＭＡの濃度を５％に調節し、そして室温で一夜インキュベートした後、コンジュゲートした抗体を、１０ｍＭ、２５０ｍＭグリシン、１％スクロースｐＨ５．５で平衡化したＳＥＰＨＡＤＥＸＴＭＧ２５Ｆ上のクロマトグラフィーにより精製した。抗体及びＤＭ１に関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したＤＭ１分子の数を求めた（Liu等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93,8618-8623 (1996)）。コンジュゲート反応の後に存在す
る遊離のマイタンシノイドのパーセンテージは、１００ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ７．０中の２５％アセトニトリル中で平衡化されたＨｉＳｅｐＴＭカラム上に２０〜５０μｇのコンジュゲートを注入し、そしてアセトニトリル中に溶離することにより求めた。２５２ｎｍの波長にセットした吸光度検知器を用いて総遊離マイタンシノイド分子種（勾配溶離し、そして既知標準物質との溶離時間の比較により同定）のピーク面積を計測し、そして結合マイタンシノイド（カラムのフロースルー画分中コンジュゲートピーク中に溶離）に関連するピーク面積と比較することにより総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージを計算した。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６当たり３．５〜４個のＤＭ１分子を有するコンジュゲートが得られ、＜１％が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の調製
例示されるＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）リンカーをエタノールに溶解した。５０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＥＤＴＡ、及び３％エタノールを含有する５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）中室温で約２時間、ＳＰＤＢリンカーの５．５〜５倍モル過剰量と共に８ｍｇ／ｍｌでｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６抗体をインキュベートした。ＳＰＤＢ飾抗体をＰＢＳ、ｐＨ６．５中で２倍希釈し、そしてマイタンシノイドＤＭ４の１．５倍モル過剰による修飾を、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中のＤＭ４の濃溶液（１５〜３０ｍＭ）の添加により行った。室温で一夜インキュベートした後、コンジュゲートした抗体を、１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％スクロースｐＨ５．５で平衡化したＳＥＰＨＡＤＥＸＴＭＧ２５Ｆ上のクロマトグラフィーにより精製した。抗体及びマイタンシノイドに関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したＤＭ４分子の数を求めた（Widdison, WC,等、J Med
Chem, 49:4392-4408 (2006)）。総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージは上記した通り求めた。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．６抗体当たり３．５〜４個のＤＭ４分子を有するコンジュゲートが得られ、＜１％が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−スルホ−ｍａｌ−ＤＭ４の調製
ＮＨＳ−３−スルホ−ｍａｌリンカー及びＤＭ４をＤＭＡに別個に溶解した。
４０％２００ｍＭスクシネート緩衝液、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ５．０を含有するＤＭＡの溶液中でリンカー及びＤＭ４チオールを混合し、ＤＭ４のリンカーに対するモル比を１．６：１とし、そしてＤＭ４の終濃度を１０ｍＭとした。混合物を２５℃で２時間反応させた。４ｍｇ／ｍｌ抗体、９０％リン酸塩緩衝液／１０％ＤＭＡｐＨ７．５（ｖ／ｖ）の最終コンジュゲーション条件下でリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．５）中ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体の溶液に、抗体に対してリンカー９．６モル過剰の相当量が添加されるように、精製することなく反応混合物を添加した。室温で一夜インキュベートした後、コンジュゲーション混合物をＰＢＳｐＨ７．５中に平衡化したＳＥＰＨＡＤＥＸＧ２５上のクロマトグラフィーにより精製した。次にｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−スルホ−ｍａｌ−ＤＭ４を９．５５ｍＭリン酸塩、１３９．６ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ６．５を含有する緩衝液中に透析した。抗体及びマイタンシノイドに関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したＤＭ４分子の数を求めた（Widdison, WC,等、J Med Chem, 49:4392-4408(2006)）。総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージは上記した通り求めた。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体当たり３．５〜４個のＤＭ４分子を有するコンジュゲートが得られ、＜１％が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の調製
ＮＨＳ−スルホ−ＳＭＣＣリンカー及びＤＭ１をＤＭＡに別個に溶解した。
４０％２００ｍＭスクシネート緩衝液、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ５．０を含有するＤＭＡの溶液中でリンカー及びＤＭ１チオールを混合し、ＤＭ１のリンカーに対するモル比を１．２：１とし、そしてＤＭ１の終濃度を３．７５ｍＭとした。混合物を２０℃で７５分間反応させた。４ｍｇ／ｍｌ抗体、８８％５０ｍＭリン酸カルシウム、５０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．５／１２％ＤＭＡｐＨ７．５（ｖ／ｖ）の最終コンジュゲーション条件下でリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．５）中ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体の溶液に、抗体に対してリンカー６．４モル過剰の相当量が添加されるように、精製することなく反応混合物を添加した。２０℃で２時間インキュベートした後、コンジュゲーション混合物をＰＢＳｐＨ７．５中に平衡化したＳＥＰＨＡＤＥＸＧ２５上のクロマトグラフィーにより精製した。次にｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジンｐＨ５．５を含有する緩衝液中に透析した。抗体及びマイタンシノイドに関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したＤＭ１分子の数を求めた（Widdison, WC,等、J Med Chem, 49:4392-4408(2006)）。総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージは上記した通り求めた。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体当たり３．５〜４個のＤＭ１分子を有するコンジュゲートが得られ、＜２．８％が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。
ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ１の調製
ＮＨＳ−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ１の１ステップ試薬をＤＭＡに溶解した。５０ｍＭＫＰｉ、５０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．５及び容量で１０％のＤＭＡ中、２５℃で一夜、ＮＨＳ−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ１の５．７倍モル過剰量とともに５ｍｇ／ｍｌにおいてｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体をインキュベートした。ＰＢＳｐＨ７．５中に平行化したＳＥＰＨＡＤＥＸＧ２５カラムで反応混合物を精製した。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０−ＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ１を２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジンｐＨ５．５を含有する緩衝液中に透析した。抗体及びマイタンシノイドに関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したＤＭ１分子の数を求めた（Widdison, WC,等、J Med Chem, 49:4392-4408(2006)）。総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージは上記した通り求めた。ｈｕＭｏｖ１９ｖ１．０抗体当たり３．５〜４個のＤＭ１分子を有するコンジュゲートが得られ、＜１．１％が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。
（実施例１３）
抗体及びコンジュゲートの結合親和性
抗ＦＯＬＲ１抗体及びそのＳＰＤＢ−ＤＭ４、ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４、ＳＭＣＣ−ＤＭ１又は抗ＦＯＬＲ１−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートの結合親和性をフローサイトメトリーによりアッセイした。ＦＯＬＲ１発現ＳＫＯＶ３細胞を種々の濃度の抗ＦＯＬＲ１抗体及びそのコンジュゲートと共にインキュベートし、そして、フローサイトメトリー分析のために上記した通り処理した。データ分析はＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＵＳ）を用いながら実施し、そして各試料につき、ＦＬ１に関する平均蛍光強度（ＭＦＩ）をエキスポートし、そして片対数プロットで抗体濃度に対してプロットした。用量応答曲線を非直線回帰により作成し、そしてＳＫＯＶ３細胞への結合に関する被験試料の見かけの平衡解離定数（Ｋｄ）に関する値をＧｒａｐｈＰａｄのＰｒｉｓｍのｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて計算し、そして図５に示した。結果によれば、使用したリンカーの何れかを介した各ＤＭ１又はＤＭ４へのコンジュゲートは抗体の何れか（例えばｈｕＭｏｖ１９）の親和性を顕著には改変しなかったことを示している。
（実施例１４）
インビトロ細胞傷害アッセイ
例示されるｍｕＦＲ１−９、ｍｕＦＲ１−１３、ｍｕＦＲ１−２２、ｍｕＦＲ１−２３、ｈｕＦＲ１−２３、ｍｕＦＲ１−２１及びｈｕＦＲ１−２１コンジュゲートが細胞成育を阻害する能力をKovtun YV等、(Cancer Res 66: 3214-3221(2006)）に記載されている方法によるインビトロの細胞傷害アッセイを用いて計測した。完全ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、１％ゲンタマイシン、全試薬入手元Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）１００μＬ中ウェル当たり１０００細胞で９６穴プレート中ＦＯＬＲ１発現ＫＢ細胞に種々の濃度のＰＥＧ４−ｍａｌ−ＤＭ４コンジュゲートを添加した。３倍連続希釈により完全ＲＰＭＩ培地中に抗体及びコンジュゲートを希釈し、そして１００μＬをウェル当たり添加した。終濃度は典型的には３ｘ１０−８Ｍ〜４．６ｘ１０−１２Ｍとなった。細胞及び培地を含有するがコンジュゲートを含有しない対照ウェル及び培地のみを含有するウェルを各アッセイプレートに包含させた。５％ＣＯ２含有湿潤雰囲気下に３７℃で４〜６日間プレートをインキュベートした。次にＷＳＴ−８試薬、１０％ｖ／ｖ（DojindoMolecular Technologies, Gaithersburg, MD, US）をウェルに添加し、そしてプレートを２〜６時間３７℃でインキュベートした。ＷＳＴ−８は生細胞においてはデヒドロゲナーゼにより還元されて組織培地中可溶であるオレンジ色の最大ホルマザン産物をもたらす。生成されるホルマザン産物は生細胞の数に正比例する。マルチウエルプレートリーダーにおいて４５０ｎｍ（Ａ４５０）及び６５０ｎｍ（Ａ６５０）の吸光度を計測することによりプレートを分析した。先ず、細胞の不透明度のバックグラウンド（Ａ６５０）をＡ６５０から差し引いた。次に得られたＡ＊４５０を用いて細胞の生存割合を測定した。バックグラウンドＡ＊４５０吸光度は培地及びＷＳＴ−８のみを有するウェルの値である。生存割合は以下の通りの計算、即ち：パーセント生存性＝１００ｘ（Ａ＊４５０投与試料−Ａ＊４５０バックグラウンド）／（Ａ＊４５０未投与試料−Ａ＊４５０バックグラウンド）とした。各投与につき片対数プロットにおいて抗体又はコンジュゲートの濃度に対し生存割合の値をプロットした。次にこれらのデータよりＧｒａｐｈＰａｄのＰｒｉｓｍのｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いてＩＣ５０を求め、図５に示した。図５に示された結果によれば、全てのコンジュゲートはＦＯＬＲ１発現ＫＢ細胞に対するそれらの細胞傷害力価において同様に活性である。ＦＯＬＲ１に対する抗ＦＯＬＲ１マイタンシノイドコンジュゲートの特異性を更に確認するために、それらの活性をＫＢ細胞に対する過剰量の非コンジュゲート抗体の存在下に評価した。コンジュゲートへの競合する非コンジュゲート抗体の過剰量の添加は図７に示す通り、それらの細胞傷害を抑制した。これらのデータはコンジュゲートが抗原依存的な態様においてＫＢ細胞を殺傷することを示している。追加的なデータによれば、ｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４はインビトロアッセイにおいて、ＫＢ細胞のＧ２／Ｍ期において細胞周期停止を誘導している。
（実施例１５）
ＫＢ異種移植片モデルにおける同様の非ターゲティングコンジュゲートとの比較におけるｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４及びｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートのインビボの薬効ＳＣＩＤマウスに皮下移植されたＫＢ細胞の樹立された異種移植片モデルを用いながら、非ターゲティングｈｕＣ２４２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４との比較におけるＦＯＬＲ１ターゲティング切断可能コンジュゲートｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、及び非ターゲティングｈｕＣ２４２−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４との比較における切断不可能コンジュゲートｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４を試験した。マウスは体重により投与群に無作為に割りつけ、そして細胞接種後第３日において単回（ＳＰＤＢコンジュゲート）、又は、３回、毎週細胞接種後第３、１０、及び１７日において、５及び１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートを用いて投与した。種々異なる投与群のメジアン腫瘍体積を図８にプロットした。ｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＤＢ−ＤＭ４又はｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４の何れかの投与はＰＢＳ対照と比較してメジアン腫瘍体積の減少をもたらしたのに対し、対応する非ターゲティングコンジュゲートの何れかの投与は有意な作用をもたらさなかった。
（実施例１６）
ＫＢ異種移植片モデルにおける抗ＦＯＬＲ１−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４コンジュゲートのインビボの薬効ＳＣＩＤマウスに皮下移植されたＫＢ細胞の樹立された異種移植片モデルを用いながら、例示される抗ＦＯＬＲ１抗体、ｈｕＭｏｖ１９、ｍｕＦＲ−１−９、ｍｕＦＲ−１−１３、ｍｕＦＲ−１−２２、ｍｕＦＲ−１−２３及びｈｕＦＲ−１−２１のＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４コンジュゲートを試験した。マウスを体重により無作為に割り付け、そして細胞接種後第３日に１回、上記列挙したコンジュゲートの何れかを１０ｍｇ／ｋｇ、又はＰＢＳのみを投与した。ｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４Ｍａｌ-ＤＭ４はインビトロにおけるその細胞傷害力価においてｍｕＦＲ−１−９、ｍｕＦＲ−１−１３、ｍｕＦＲ−１−２２、ｍｕＦＲ−１−２３及びｈｕＦＲ−１−２１のＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４コンジュゲートと同様であることが解った。ｈｕＭｏｖ１９−ＰＥＧ４Ｍａｌ-ＤＭ４及びＦＲ−１−２１−ＰＥＧ４Ｍａｌ−ＤＭ４は他のコンジュゲートの何れよりもインビボで有意に高力価であり、メジアン腫瘍体積のより顕著な現象をもたらした（図９及び１０）。力価は又、用量依存性（図１１）であり、そしてリンカーの選択も同様に役割を果たしていることがわかった（図１２及び１３）。
（実施例１７）
異種移植片モデルにおける抗ＦＯＬＲ１−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートのインビトロ薬効
３種の卵巣漿液性腺癌異種移植片：ＯＶＣＡＲ−３、ＩＧＲＯＶ−１及びＯＶ−９０において抗ＦＯＬＲ１ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートを試験した。３種これらの異種移植片腫瘍の各々は、ホルマリン固定パラフィン包埋切片上のカリブレーションされた免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色法を用いて計測した場合、患者腫瘍に匹敵するＦＯＬＲ１発現レベルを示している。樹立された皮下異種移植片腫瘍を有するマウス（約１００ｍｍ３）に対し、１．２、２．５及び５．０ｍｇ／ｋｇにおいてｈｕＭｏｖ１９−ＳＰＰ−ＤＭ１コンジュゲートの単回静脈内注射により投与した（抗体濃度に基づく；図１４〜１６はμｇ／ｋｇにおけるマイタンシノイドコンジュゲートの濃度を示す）。コンジュゲートは評価した３種のモデルの全てにおいて活性であった。ＯＶＣＡＲ−３異種移植片においては、最小有効用量（ＭＥＤ）は１．２ｍｇ／ｋｇであった（図１４）。より高値の用量レベルは高度に活性であり、２．５及び５．０ｍｇ／ｋｇの投与群において、それぞれ、４／６及び２／６のマウスで完全後退（ＣＲ）をもたらした。コンジュゲートの投与はＩＧＲＯＶ−１及びＯＢ−９０異種移植片モデルの両方において強力な抗腫瘍活性をもたらし、単回注射で２．５ｍｇ／ｋｇのＭＥＤを有していた（図１５及び１６）。これらのデータは、患者腫瘍に匹敵するＦＯＬＲ１発現レベルを有する卵巣異種移植片腫瘍に対するｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の強力な抗腫瘍活性を示している。
（実施例１８）
イムノコンジュゲート薬効に対するリンカーの影響
抗ＦＯＬＲ１抗体ｈｕＭｏｖ１９をジスルフィド含有切断可能リンカーＳＰＰ、ＳＰＤＢ、又はスルホ−ＳＰＤＢを介して、又は切断不可能なリンカーＳＭＣＣを介して、ＤＭ１又はＤＭ４に連結した。ＫＢ、ＩＧＲＯＶ−１及びＪＥＧ−３細胞系統に対するこれらのコンジュゲートのインビトロの細胞傷害活性を検討した。ＦＡＣＳ分析によれば、ＫＢ（子宮頸癌）細胞は細胞当たり＞２，０００，０００抗体結合部位を有していた。ＩＧＲＯＶ−１（卵巣癌）細胞は細胞当たり２６０，０００抗体結合部位を有しており、そしてＪＥＧ−３（絨毛癌）細胞は細胞当たり４０，０００抗体結合部位を有していた。インビトロの細胞傷害の結果を以下の表２にまとめた。切断可能なコンジュゲートはＳＭＣＣコンジュゲートの場合と比較して顕著に高値のインビトロの活性を示していた。
ＦＯＬＲ１陽性ＫＢ及びＯＶＣＡＲ−３−腫瘍モデルにおけるコンジュゲートのインビボの活性も試験した。図１７に示す結果によれば、切断可能なＳＰＤＢ−ＤＭ４及びスルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートは切断不可能なＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートよりもインビボでより強力であった。更に又、切断可能なコンジュゲートのうち、ＳＰＰ−ＤＭ１コンジュゲートはＳＰＤＢ−ＤＭ４又はスルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートの何れよりも、両方の異種移植片モデルにおいて低活性であった（図１８）。後者の２つのコンジュゲートはＫＢ腫瘍に対して同様に活性であり、スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲートはＯＶＣＡＲ−３モデルに対してより活性であった。ＯＶＣＡＲ−３モデルを用いて得たデータを以下の表３にまとめた。
これらのデータによれば、切断可能なリンカーを含有するイムノコンジュゲートはインビトロ及びインビボの両方で上昇した薬効を示し、そしてスルホ−ＳＰＤＢを含有する抗ＦＯＬＲ１イムノコンジュゲートは腫瘍モデルにおいて高度に活性である。
（実施例１９）
ｈｕＦＲ１抗体ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートのインビトロ及びインビボの薬効
抗ＦＯＬＲ１ｈｕＦＲ１−４８、ｈｕＦＲ１−４９、ｈｕＦＲ１−５７、及びｈｕＦＲ１−６５をＳＭＣＣリンカー及びＤＭ１とコンジュゲートし、そしてＫＢ細胞に対する作用をインビボで上記異種移植片モデルを用いて上記した通り分析した。抗体の各々はＫＢ細胞モデルにおいて同様の薬効を示し、ｈｕＦＲ１−４８、ｈｕＦＲ１−４９、ｈｕＦＲ１−５７、及びｈｕＦＲ１−６５イムノコンジュゲートは、変動するが有意なインビボの薬効を、２００μｇ／ｋｇの用量において、異種移植片モデル系において示していた（表４及び図１９）。
本明細書において引用した全ての出版物、特許、特許出願、インターネットサイト、及び受託番号／データベースの配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチドの配列の両方を包含する）は、各々の出版物、特許、特許出願、インターネットサイト、及び受託番号／データベースの配列が特定的及び個別に参照により本明細書に組み込まれる場合と同等程度まで、全ての目的のために、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

Claims (47)

  1. ヒトフォレート受容体１に特異的に結合するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントが、
    （ａ）ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１アミノ酸配列；ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹ（配列番号３１）、またはＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＳＰＧＦＱＧ（配列番号３４）のＨＣ ＣＤＲ２アミノ酸配列；およびＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）のＨＣ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
    （ｂ）ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１アミノ酸配列；ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）のＬＣ ＣＤＲ２アミノ酸配列；およびＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）のＬＣ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    を含む、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. 前記ＶＨが、ＳＳＹＧＭＳ（配列番号３０）のＨＣ ＣＤＲ１アミノ酸配列、ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＳＰＧＦＱＧ（配列番号３４）のＨＣ ＣＤＲ２アミノ酸配列およびＤＧＥＧＧＬＹＡＭＤＹ（配列番号３２）のＨＣ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記ＶＬがＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ（配列番号２７）のＬＣ ＣＤＲ１アミノ酸配列、ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号２８）のＬＣ ＣＤＲ２アミノ酸配列およびＱＱＹＷＳＴＰＦＴ（配列番号２９）のＬＣ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. 配列番号４２のＶＨアミノ酸配列および配列番号４１のＶＬアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  4. 配列番号４６のＨＣアミノ酸配列および配列番号４５のＬＣアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  5. 前記ヒト化抗体が、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０７７５を有するプラスミドＤＮＡによってコードされるＨＣ、ならびに２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０７７６を有するプラスミドＤＮＡによってコードされるＬＣを含む、請求項１に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  6. １．０〜１０ｎＭのＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  7. ０．０６〜１．０ｎＭのＫｄでヒトフォレート受容体１に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  8. 完全長抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  9. 抗原結合フラグメントである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  10. 前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ即ちｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディー、ＩｇＧ−ＣＨ２、ミニボディー、Ｆ（ａｂ'）３、テトラボディー、トリアボディー、ダイアボディー、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃである、請求項９に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
  11. （ａ）前記ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを発現する細胞を培養する工程、および（ｂ）培養された細胞から該ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを単離する工程、を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法。
  12. 式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）を有するイムノコンジュゲートであって、
    （Ａ）は請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体又は抗原結合フラグメントであり；
    （Ｌ）はリンカーであり；
    （Ｃ）は細胞傷害剤であり；そして該リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する、イムノコンジュゲート。
  13. 前記リンカーが、親水性リンカー、又はジカルボン酸系リンカーである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  14. 前記リンカーが、切断不可能なリンカーである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  15. 前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である、請求項１４に記載のイムノコンジュゲート。
  16. 前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）である、請求項１４に記載のイムノコンジュゲート。
  17. 前記リンカーが切断可能なリンカーである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  18. 前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）である、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  19. 前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）である、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  20. 前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）；及びＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）よりなる群から選択される、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  21. 前記細胞傷害剤が、マイタンシノイド、マイタンシノイド類縁体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、ＣＣ−１０６５類縁体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類縁体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類縁体、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体よりなる群から選択されるか、又は該細胞傷害剤のプロドラッグである、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
  22. 前記細胞傷害剤がマイタンシノイドである、請求項２１に記載のイムノコンジュゲート。
  23. 前記細胞傷害剤が、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）である、請求項２２に記載のイムノコンジュゲート。
  24. さらに２〜６個の（Ｃ）を含む、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
  25. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体または請求項１２〜２４のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートならびに製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
  26. 前記イムノコンジュゲートが（Ａ）当たり平均で３〜４個の（Ｃ）を有するイムノコンジュゲートを含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、診断試薬。
  28. さらに標識を含む、請求項２７に記載の診断試薬。
  29. 前記標識が、放射標識、蛍光団、発色団、画像化剤及び金属イオンよりなる群から選択される、請求項２８に記載の診断試薬。
  30. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは請求項１２〜２４のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートを含む、キット。
  31. 腫瘍生育の阻害またはがんの治療における使用のための請求項２５または２６に記載の医薬組成物。
  32. 前記腫瘍またはがんが、卵巣、脳、乳房、子宮、子宮内膜、膵臓、腎臓、腹膜及び肺腫瘍またはがんからなる群より選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. 前記腫瘍またはがんが、卵巣腫瘍または卵巣がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
  34. 前記腫瘍またはがんが、肺腫瘍または肺がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
  35. 前記腫瘍またはがんが、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
  36. 前記腫瘍またはがんが、子宮腫瘍または子宮がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
  37. 前記腫瘍またはがんが、腹膜腫瘍または腹膜がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
  38. 腫瘍生育の阻害またはがんの治療のための医薬の製造における、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体、請求項１２〜２４のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート、あるいは請求項２５または２６に記載の医薬組成物の使用。
  39. 前記腫瘍またはがんが、卵巣、脳、乳房、子宮、子宮内膜、膵臓、腎臓、腹膜及び肺腫瘍またはがんからなる群より選択される、請求項３８に記載の使用。
  40. 前記腫瘍またはがんが、卵巣腫瘍または卵巣がんである、請求項３９に記載の使用。
  41. 前記腫瘍またはがんが、肺腫瘍または肺がんである、請求項３９に記載の使用。
  42. 前記腫瘍またはがんが、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がんである、請求項３９に記載の使用。
  43. 前記腫瘍またはがんが、子宮腫瘍または子宮がんである、請求項３９に記載の使用。
  44. 前記腫瘍またはがんが、腹膜腫瘍または腹膜がんである、請求項３９に記載の使用。
  45. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する、単離された細胞。
  46. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  47. 請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
JP2015120269A 2010-02-24 2015-06-15 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用 Active JP6039751B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30779710P 2010-02-24 2010-02-24
US61/307,797 2010-02-24
US34659510P 2010-05-20 2010-05-20
US61/346,595 2010-05-20
US41317210P 2010-11-12 2010-11-12
US61/413,172 2010-11-12

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012555146A Division JP5778700B2 (ja) 2010-02-24 2011-02-24 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016052044A Division JP2016153412A (ja) 2010-02-24 2016-03-16 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2016000729A JP2016000729A (ja) 2016-01-07
JP6039751B2 true JP6039751B2 (ja) 2016-12-07

Family

ID=44507210

Family Applications (8)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012555146A Active JP5778700B2 (ja) 2010-02-24 2011-02-24 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2015120269A Active JP6039751B2 (ja) 2010-02-24 2015-06-15 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2016052044A Withdrawn JP2016153412A (ja) 2010-02-24 2016-03-16 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2017181137A Withdrawn JP2018021069A (ja) 2010-02-24 2017-09-21 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2019109555A Active JP6860614B2 (ja) 2010-02-24 2019-06-12 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2021053225A Active JP7167228B2 (ja) 2010-02-24 2021-03-26 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2022171587A Active JP7515228B2 (ja) 2010-02-24 2022-10-26 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2024103680A Pending JP2024138308A (ja) 2010-02-24 2024-06-27 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012555146A Active JP5778700B2 (ja) 2010-02-24 2011-02-24 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用

Family Applications After (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016052044A Withdrawn JP2016153412A (ja) 2010-02-24 2016-03-16 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2017181137A Withdrawn JP2018021069A (ja) 2010-02-24 2017-09-21 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2019109555A Active JP6860614B2 (ja) 2010-02-24 2019-06-12 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2021053225A Active JP7167228B2 (ja) 2010-02-24 2021-03-26 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2022171587A Active JP7515228B2 (ja) 2010-02-24 2022-10-26 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2024103680A Pending JP2024138308A (ja) 2010-02-24 2024-06-27 フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用

Country Status (34)

Country Link
US (11) US8557966B2 (ja)
EP (3) EP3196212B1 (ja)
JP (8) JP5778700B2 (ja)
KR (11) KR20230044026A (ja)
CN (2) CN103037900B (ja)
AR (1) AR080301A1 (ja)
AU (1) AU2011220728B2 (ja)
BR (1) BR112012021296B1 (ja)
CA (3) CA2790412C (ja)
CY (1) CY1118668T1 (ja)
DK (1) DK2538976T3 (ja)
ES (2) ES2617283T3 (ja)
FI (1) FIC20250013I1 (ja)
FR (1) FR25C1008I1 (ja)
HR (1) HRP20170281T1 (ja)
HU (2) HUE030854T2 (ja)
IL (7) IL290617B2 (ja)
LT (2) LT2538976T (ja)
MX (4) MX340437B (ja)
MY (4) MY197016A (ja)
NL (1) NL301319I2 (ja)
NO (1) NO2025021I1 (ja)
NZ (4) NZ621938A (ja)
PL (1) PL2538976T3 (ja)
PT (1) PT2538976T (ja)
RS (1) RS55738B1 (ja)
RU (2) RU2610663C2 (ja)
SG (4) SG183144A1 (ja)
SI (1) SI2538976T1 (ja)
SM (1) SMT201700139T1 (ja)
TW (6) TWI672318B (ja)
UA (1) UA123257C2 (ja)
WO (1) WO2011106528A1 (ja)
ZA (1) ZA201508660B (ja)

Families Citing this family (162)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
IL282138B2 (en) 2005-08-24 2024-01-01 Immunogen Inc Process for preparing purified drug conjugates
CN104524590B (zh) 2008-04-30 2019-06-21 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
RS58810B1 (sr) 2009-06-03 2019-07-31 Immunogen Inc Metodi konjugacije
KR20230044026A (ko) 2010-02-24 2023-03-31 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
US10273294B2 (en) * 2010-10-11 2019-04-30 University Of Southern California Compositions and methods for treating HIF-1α over-expressing cancers
EP2675479B1 (en) 2011-02-15 2016-01-13 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
SMT201900114T1 (it) 2011-03-29 2019-02-28 Immunogen Inc Preparazione di coniugati maytansinoide-anticorpo mediante un processo a fase unica
UA125636C2 (uk) * 2011-04-01 2022-05-11 Іммуноджен, Інк. Способи ідентифікації раку, який може реагувати на анти-folr1 антитіло або анти-folr1 імунокон'югат
EA029797B1 (ru) 2011-06-21 2018-05-31 Иммуноджен, Инк. Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты
US8790651B2 (en) 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
WO2014031566A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
JP6293147B2 (ja) * 2012-08-31 2018-03-14 イミュノジェン， インコーポレイテッド 葉酸受容体１の検出のための診断分析およびキット
NZ707091A (en) 2012-10-04 2018-12-21 Immunogen Inc Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
US9598489B2 (en) 2012-10-05 2017-03-21 The Trustees Of The Univeristy Of Pennsylvania Human alpha-folate receptor chimeric antigen receptor
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
EP2930240B1 (en) * 2012-12-07 2018-08-01 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-folr1 antibody
TWI716339B (zh) 2012-12-21 2021-01-21 荷蘭商台醫（有限合夥）公司 親水性自消耗連接子及彼等之共軛物
JP6423804B2 (ja) 2013-02-28 2018-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
US20140302037A1 (en) * 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
RU2015149285A (ru) * 2013-05-14 2017-06-19 Иммьюноджен Инк. Схемы дозирования иммуноконъюгата anti-folr1
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
LT3038650T (lt) * 2013-08-30 2021-09-10 Immunogen, Inc. Antikūnai ir foliatų receptoriaus 1 nustatymo testai
WO2015054400A2 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
IL296754A (en) * 2013-12-27 2022-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A method for isolating an antibody with a low isoelectric point
WO2015142675A2 (en) 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
US20150297744A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-22 Immunogen, Inc. Anti-FOLR1 Immunoconjugate Dosing Regimens
AU2015276821A1 (en) 2014-06-20 2017-01-12 Abgenomics International Inc. Anti-folate receptor aplha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
EP3193915A1 (en) 2014-07-21 2017-07-26 Novartis AG Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
US20160058884A1 (en) * 2014-09-02 2016-03-03 Immunogen, Inc. Methods for formulating antibody drug conjugate compositions
TW201613930A (en) 2014-09-03 2016-04-16 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
TW202417447A (zh) 2014-09-03 2024-05-01 美商免疫原公司 細胞毒性苯并二氮呯衍生物
TW201609152A (zh) * 2014-09-03 2016-03-16 免疫原公司 包含細胞結合劑及細胞毒性劑之偶聯物
MA40934A (fr) 2014-11-19 2017-09-27 Immunogen Inc Procédé de préparation de conjugués agent de liaison cellulaire-agent cytotoxique
RS60615B1 (sr) 2014-11-20 2020-08-31 Hoffmann La Roche Zajednički laki lanci i postupci upotrebe
SG11201702976TA (en) 2014-11-20 2017-05-30 Hoffmann La Roche T cell activating bispecific antigen binding molecules agiant folr1 and cd3
ES2926673T3 (es) * 2014-11-20 2022-10-27 Hoffmann La Roche Politerapia de moléculas de unión a antígeno biespecíficas activadoras de linfocitos T y antagonistas de la unión al eje de PD-1
WO2016090034A2 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Novartis Ag Methods for b cell preconditioning in car therapy
EP3250611B1 (en) 2015-01-26 2021-04-21 The University of Chicago Car t-cells recognizing cancer-specific il 13r-alpha2
CN107683289B (zh) 2015-01-26 2021-08-06 芝加哥大学 IL13Rα2结合剂和其在癌症治疗中的用途
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
US12128069B2 (en) 2015-04-23 2024-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
CN106267225B (zh) * 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
PL3313845T3 (pl) * 2015-06-29 2021-01-11 Immunogen, Inc. Koniugaty przeciwciał modyfikowanych cysteiną
LT3313884T (lt) 2015-06-29 2021-03-10 Immunogen, Inc. Anti-cd123 antikūnai, konjugatai ir jų dariniai
EP3653628B1 (en) 2015-07-21 2022-09-14 ImmunoGen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
WO2017027392A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric cd3 receptor proteins
EP3349796A4 (en) * 2015-09-17 2019-05-29 ImmunoGen, Inc. THERAPEUTIC COMBINATIONS WITH ANTI-FOLR1 IMMUNOCONJUGATES
EP3380620B1 (en) 2015-11-23 2024-07-03 Novartis AG Optimized lentiviral transfer vectors and uses thereof
FI3380525T3 (fi) * 2015-11-25 2024-01-30 Immunogen Inc Lääkeformulaatioita ja niiden käyttömenetelmiä
SG11201805451TA (en) 2015-12-30 2018-07-30 Novartis Ag Immune effector cell therapies with enhanced efficacy
ES2880731T3 (es) 2016-01-08 2021-11-25 Altrubio Inc Anticuerpos anti-PSGL-1 tetravalentes y usos de los mismos
CN105542004B (zh) * 2016-01-12 2019-02-19 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 一种抗破伤风毒素的中和性单克隆抗体及其应用
EP3411077A1 (en) 2016-02-05 2018-12-12 ImmunoGen, Inc. Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
AU2017225733A1 (en) 2016-03-04 2018-09-27 Novartis Ag Cells expressing multiple chimeric antigen receptor (CAR) molecules and uses therefore
US11549099B2 (en) 2016-03-23 2023-01-10 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
IL262321B2 (en) 2016-04-15 2024-09-01 Novartis Ag Preparations and methods for selective protein expression
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
MX2019001469A (es) 2016-08-01 2019-10-02 Novartis Ag Tratamiento del cáncer usando un receptor de antígeno quimérico en combinación con un inhibidor de una molécula de macrófago pro- m2.
EP4052729A1 (en) 2016-08-12 2022-09-07 L.E.A.F Holdings Group LLC Alpha and gamma-d polyglutamated antifolates and uses thereof
WO2018031979A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha and gamma-d polyglutamated antifolates and uses thereof
WO2018031968A1 (en) * 2016-08-12 2018-02-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha and gamma-d polyglutamated antifolates and uses thereof
WO2018098258A2 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Immunogen, Inc. Selective sulfonation of benzodiazepine derivatives
WO2018111340A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Novartis Ag Methods for determining potency and proliferative function of chimeric antigen receptor (car)-t cells
CN118562004A (zh) 2016-12-16 2024-08-30 蓝鳍生物医药公司 抗-含cub结构域蛋白1(cdcp1)抗体、抗体药物缀合物及其使用方法
WO2018119425A2 (en) * 2016-12-22 2018-06-28 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Anti-lilrb3 antibodies and methods of use thereof
EP4043485A1 (en) 2017-01-26 2022-08-17 Novartis AG Cd28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
JP2020506700A (ja) 2017-01-31 2020-03-05 ノバルティス アーゲー 多重特異性を有するキメラｔ細胞受容体タンパク質を用いた癌の治療
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
IL298414B2 (en) 2017-02-28 2024-12-01 Immunogen Inc Maytansinoid derivatives with self-immolative peptide linkers and conjugates thereof
EP3589647A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Novartis AG Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
CN110709422B (zh) * 2017-04-19 2023-12-26 马伦戈治疗公司 多特异性分子及其用途
WO2018195243A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
WO2018209239A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
CN118078987A (zh) * 2017-05-16 2024-05-28 伊缪诺金公司 抗folr1免疫缀合物与抗pd-1抗体的组合
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
US10688247B2 (en) 2017-07-13 2020-06-23 Haselmeier Ag Injection device with flexible dose selection
IL272840B2 (en) * 2017-09-05 2025-01-01 Immunogen Inc Methods for detecting folate receptor 1 in a patient sample
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
CA3079407A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
KR20200069358A (ko) 2017-10-25 2020-06-16 노파르티스 아게 키메라 항원 수용체 발현 세포의 제조 방법
EP3700933A1 (en) 2017-10-25 2020-09-02 Novartis AG Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
WO2019089798A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
EP3706801A4 (en) 2017-11-08 2022-04-06 L.E.A.F Holdings Group LLC PLATINUM COMPLEXES AND USES THEREOF
EP3717069A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Purdue Pharma L.P. Humanized antibodies targeting human tissue factor
EP3732178A1 (en) 2017-12-28 2020-11-04 ImmunoGen, Inc. Benzodiazepine derivatives
US11274121B2 (en) 2018-01-12 2022-03-15 Immunogen, Inc. Methods for antibody drug conjugation, purification, and formulation
WO2019157129A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated pralatrexate and uses thereof
US12220431B2 (en) 2018-02-07 2025-02-11 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated antifolates and uses thereof
JP7490239B2 (ja) 2018-02-07 2024-05-27 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー ガンマポリグルタミン酸化ペメトレキセドおよびその使用
CN111936146A (zh) 2018-02-07 2020-11-13 L.E.A.F.控股集团公司 α聚谷氨酸化四氢叶酸及其用途
EP3749312A4 (en) 2018-02-07 2022-02-23 L.E.A.F Holdings Group LLC ALPHA-POLYGLUTAMATED LOMETREXOLE AND USES THEREOF
EP3749318A4 (en) 2018-02-07 2022-07-06 L.E.A.F Holdings Group LLC GAMMA-POLYGLUTAMATED RALTITREXED AND ITS USES
WO2019157138A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated pemetrexed and uses thereof
WO2019157133A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated raltitrexed and uses thereof
CN111867593A (zh) 2018-02-07 2020-10-30 L.E.A.F.控股集团公司 α聚谷氨酸化抗叶酸剂及其用途
CA3090384A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated aminopterin and uses thereof
WO2019157125A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated methotrexate and uses thereof
US12048767B2 (en) 2018-02-14 2024-07-30 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated pralatrexate and uses thereof
EP3755335A4 (en) 2018-02-14 2022-06-22 L.E.A.F Holdings Group LLC GAMMA POLYGLUTAMIC TETRAHYDROFOLATES AND THEIR USES
JP7462950B2 (ja) 2018-02-14 2024-04-08 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー ガンマポリグルタミン酸化メトトレキセートおよびその使用
EP3752157A4 (en) 2018-02-14 2022-07-06 L.E.A.F Holdings Group LLC GAMMA-POLYGLUTAMATED LOMETREXOLE AND USES THEREOF
US12350271B2 (en) 2018-02-14 2025-07-08 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated aminopterin and uses thereof
CN112040949A (zh) * 2018-02-23 2020-12-04 瑞美德生物医药科技有限公司 降钙素基因相关肽(cgrp)拮抗剂抗体
KR102808710B1 (ko) 2018-03-13 2025-05-15 페인스 테라퓨틱스 인코포레이티드 항-폴레이트 수용체 1 항체 및 이의 용도
KR102275930B1 (ko) * 2018-03-14 2021-07-12 (주)알테오젠 Folr1에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
CA3093539A1 (en) 2018-03-16 2019-09-19 Zoetis Services Llc Interleukin-31 monoclonal antibodies for veterinary use
EP3765069A1 (en) 2018-03-16 2021-01-20 Zoetis Services LLC Peptide vaccines against interleukin-31
WO2019210153A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Novartis Ag Car t cell therapies with enhanced efficacy
WO2019213282A1 (en) 2018-05-01 2019-11-07 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
WO2019227003A1 (en) 2018-05-25 2019-11-28 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
US20210123075A1 (en) 2018-06-08 2021-04-29 Novartis Ag Compositions and methods for immunooncology
CA3105415A1 (en) * 2018-07-09 2020-01-23 Multitude Inc. Antibodies specific to folate receptor alpha
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
CN113271945A (zh) 2018-12-20 2021-08-17 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案和药物组合
EP3924055B1 (en) 2019-02-15 2024-04-03 Novartis AG Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
JP7483732B2 (ja) 2019-02-15 2024-05-15 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソ－５－（ピペリジン－４－イル）イソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体及びその使用
KR20220022112A (ko) 2019-03-21 2022-02-24 이뮤노젠 아이엔씨 세포-결합 제제-약물 콘쥬게이트를 준비하는 방법
CN113661172A (zh) 2019-03-29 2021-11-16 伊缪诺金公司 用于抑制异常细胞生长或治疗增生性疾病的细胞毒性双苯并二氮杂䓬衍生物及其与细胞结合剂的缀合物
US20220251152A1 (en) 2019-04-24 2022-08-11 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
CN113766954B (zh) 2019-04-26 2024-09-24 伊缪诺金公司 喜树碱衍生物
TWI872065B (zh) 2019-04-29 2025-02-11 美商免疫遺傳股份有限公司 雙互補位ＦＲ－α抗體及免疫結合物
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
JP2022534808A (ja) * 2019-06-06 2022-08-03 ミシック セラピューティクス インコーポレイテッド 抗原結合タンパク質構築物およびその使用
CA3149914A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 L.E.A.F. Holdings Group Llc Processes of preparing polyglutamated antifolates and uses of their compositions
TW202135859A (zh) 2019-12-20 2021-10-01 瑞士商諾華公司 組合療法
US11890828B2 (en) 2019-12-30 2024-02-06 Idaho Forest Group, LLC Moisture extraction press and moisture removal from wood materials
KR20230024967A (ko) 2020-06-11 2023-02-21 노파르티스 아게 Zbtb32 억제제 및 이의 용도
KR20230027056A (ko) 2020-06-23 2023-02-27 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법
CN111690061B (zh) * 2020-06-28 2022-08-23 中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心 人源化抗鼠疫耶尔森菌抗原f1的抗体及应用
US20230271940A1 (en) 2020-08-03 2023-08-31 Novartis Ag Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
US20240165250A1 (en) * 2021-01-08 2024-05-23 Lycia Therapeutics, Inc. Bifunctional Folate Receptor Binding Compounds
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AU2022253902A1 (en) 2021-04-10 2023-11-02 Genmab A/S Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN112794911B (zh) * 2021-04-14 2021-08-03 上海偌妥生物科技有限公司 人源化抗叶酸受体1抗体及其应用
CA3215850A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 James Spicer Composition comprising an ige antibody
EP4330381A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Novartis AG Viral vector production system
EP4333889A4 (en) * 2021-05-04 2025-11-12 Immunorizon Ltd Anti-NKG2D antibodies and their uses
TW202320857A (zh) * 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
JP2024524614A (ja) 2021-07-14 2024-07-05 ライシア セラピューティクス， インコーポレイテッド Ａｓｇｐｒ細胞表面受容体結合化合物及びコンジュゲート
AU2023231442A1 (en) 2022-03-11 2024-09-26 Mablink Bioscience Antibody-drug conjugates and their uses
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
EP4551600A1 (en) * 2022-07-04 2025-05-14 Vib Vzw Blood-cerebrospinal fluid barrier crossing antibodies
KR102763885B1 (ko) 2022-08-29 2025-02-05 전남대학교산학협력단 Dlc 적층에 의한 금속 박막의 강화방법
EP4342488A1 (en) 2022-09-26 2024-03-27 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG Chimeric antigen receptor specific for folate receptor 1
AU2023369684A1 (en) 2022-10-26 2025-04-17 Novartis Ag Lentiviral formulations
CN120981456A (zh) 2023-05-24 2025-11-18 金橘生物科技公司 杂环化合物及其用途
US12319747B2 (en) 2023-07-03 2025-06-03 Medicovestor, Inc. Methods of using anti-SP17 immunotherapeutics
US12364777B2 (en) 2023-10-20 2025-07-22 Medicovestor, Inc. Homodimeric antibodies for use in treating cancers and methods of use
WO2025094146A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Immunogen Switzerland Gmbh Vasconstrictors for reducing ocular toxicity of antibody-maytansinoid conjugates
US12116410B1 (en) 2023-12-26 2024-10-15 Medicovestor, Inc. Methods of manufacturing dimeric antibodies
WO2025161939A1 (en) * 2024-01-31 2025-08-07 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Antibodies and uses thereof
US12240900B1 (en) 2024-02-02 2025-03-04 Medicovestor, Inc. Nucleic acids, vectors, and cells that encode antibodies and other proteins that bind folate receptor alpha
US12378314B1 (en) 2024-02-02 2025-08-05 Medicovestor, Inc. Proteins that bind folate receptor alpha including fully-human antibodies
US12258396B1 (en) 2024-02-02 2025-03-25 Medicovestor, Inc. Methods of using immunotherapeutics that bind folate receptor alpha
CN118549647B (zh) * 2024-04-02 2025-03-18 智泽童康(广州)生物科技有限公司 一种mmp7检测试剂盒、制备方法及其检测方法
CN120842412B (zh) * 2025-09-23 2025-12-05 合肥综合性国家科学中心大健康研究院 一种靶向人的叶酸受体α的单克隆抗体及其应用

Family Cites Families (182)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3720760A (en) 1968-09-06 1973-03-13 Pharmacia Ab Method for determining the presence of reagin-immunoglobulins(reagin-ig)directed against certain allergens,in aqueous samples
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
AU4434585A (en) 1985-03-30 1986-10-23 Marc Ballivet Method for obtaining dna, rna, peptides, polypeptides or proteins by means of a dna recombinant technique
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
US5681718A (en) 1986-03-14 1997-10-28 Celltech Limited Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5763192A (en) 1986-11-20 1998-06-09 Ixsys, Incorporated Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
WO1989006692A1 (en) * 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
GB8826530D0 (en) 1988-11-12 1988-12-14 Ped Capacitors Ltd Electrical capacitors
US20030229208A1 (en) * 1988-12-28 2003-12-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
EP0478627A4 (en) 1989-05-16 1992-08-19 William D. Huse Co-expression of heteromeric receptors
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5270163A (en) 1990-06-11 1993-12-14 University Research Corporation Methods for identifying nucleic acid ligands
US5496938A (en) 1990-06-11 1996-03-05 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligands to HIV-RT and HIV-1 rev
US6344321B1 (en) 1990-06-11 2002-02-05 Gilead Sciences, Inc. Nucleic acid ligands which bind to hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) or its receptor c-met
US5683867A (en) 1990-06-11 1997-11-04 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: blended SELEX
US5705337A (en) 1990-06-11 1998-01-06 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: chemi-SELEX
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6916605B1 (en) 1990-07-10 2005-07-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2095633C (en) 1990-12-03 2003-02-04 Lisa J. Garrard Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
US5840867A (en) 1991-02-21 1998-11-24 Gilead Sciences, Inc. Aptamer analogs specific for biomolecules
US5582981A (en) 1991-08-14 1996-12-10 Gilead Sciences, Inc. Method for identifying an oligonucleotide aptamer specific for a target
EP0605522B1 (en) 1991-09-23 1999-06-23 Medical Research Council Methods for the production of humanized antibodies
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
ATE249840T1 (de) 1991-12-13 2003-10-15 Xoma Corp Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
US5965132A (en) 1992-03-05 1999-10-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors
WO1993017715A1 (en) 1992-03-05 1993-09-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic and/or therapeutic agents, targeted to neovascular endothelial cells
US20030148406A1 (en) * 1992-03-17 2003-08-07 David John King Multivalent antigen-binding proteins
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US5756291A (en) 1992-08-21 1998-05-26 Gilead Sciences, Inc. Aptamers specific for biomolecules and methods of making
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
ES2176484T3 (es) 1995-08-18 2002-12-01 Morphosys Ag Bancos de proteinas/(poli)peptidos.
US6706484B1 (en) 1995-08-18 2004-03-16 Morphosys Ag Protein/(poly)peptide libraries
AU7378096A (en) 1995-09-28 1997-04-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Porcine cell interaction proteins
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US6596850B1 (en) * 1998-01-30 2003-07-22 Ixsys, Incorporated Anti-αv3β3 recombinant human antibodies, nucleic acids encoding same
US20060057573A1 (en) 2002-02-15 2006-03-16 Somalogic, Inc Methods and reagents for detecting target binding by nucleic acid ligands
EP1150688A4 (en) 1998-10-19 2004-06-16 Yeda Res & Dev TREATMENT OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS BY NEGATIVE REGULATION OF THE AUTO-IMMUNE RESPONSE TO AUTOANTIGENS
US20030054360A1 (en) 1999-01-19 2003-03-20 Larry Gold Method and apparatus for the automated generation of nucleic acid ligands
US20040031072A1 (en) 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
ES2353268T3 (es) 1999-07-02 2011-02-28 Morphosys Ag Generacion de elementos de union especifica que se unen a (poli)peptidos codificados por fragmentos de adn genomico o est.
US20020068066A1 (en) 1999-08-20 2002-06-06 Wenyuan Shi Method for the treatment and prevention of dental caries
IT1307309B1 (it) * 1999-12-30 2001-10-30 Enea Ente Nuove Tec Peptidi stabilizzanti, polipeptidi ed anticorpi che li comprendono.
EA005823B1 (ru) 2000-03-31 2005-06-30 Пердью Рисерч Фаундейшн Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген
RU2280650C2 (ru) * 2000-04-17 2006-07-27 Шанхай Фармко Рисерч, Инк. Комплекс фолиевой кислоты или производного фолиевой кислоты, фармацевтическая композиция и применение комплекса
DE10037759A1 (de) 2000-08-03 2002-07-04 Gruenenthal Gmbh Screeningverfahren
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
EP2322648A1 (en) 2000-09-26 2011-05-18 Duke University RNA aptamers and methods for identifying the same
EP1998266A3 (en) * 2001-02-19 2009-02-11 Merck Patent GmbH Method for identification of T-cell epitopes and use for preparing molecules with reduced immunogenicity
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
CN1635910A (zh) 2001-05-02 2005-07-06 普渡研究基金会 巨噬细胞介导的疾病的治疗和诊断
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
GB0202319D0 (en) 2002-02-01 2002-03-20 Calex Electronics Ltd Apparatus
US7314974B2 (en) * 2002-02-21 2008-01-01 Monsanto Technology, Llc Expression of microbial proteins in plants for production of plants with improved properties
WO2003074704A1 (fr) 2002-03-01 2003-09-12 Japan Envirochemicals, Ltd. Proteines capables de se lier aux hormones sexuelles feminines et procede de preparation
EP1497333A2 (en) * 2002-04-22 2005-01-19 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Antibodies, recombinant antibodies, recombinant antibody fragments and fusions mediated plant disease resistance against fungi
KR100480244B1 (ko) 2002-06-03 2005-04-06 삼성전자주식회사 레이저 모듈
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
GB0216648D0 (en) 2002-07-18 2002-08-28 Lonza Biologics Plc Method of expressing recombinant protein in CHO cells
WO2004043989A2 (en) 2002-11-07 2004-05-27 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to heparanase
HUE026914T2 (en) 2002-11-07 2016-08-29 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and a method of treating acute myeloid leukemia
US20050124565A1 (en) 2002-11-21 2005-06-09 Diener John L. Stabilized aptamers to platelet derived growth factor and their use as oncology therapeutics
EP1481993A1 (en) * 2003-05-28 2004-12-01 Xerion Pharmaceuticals AG Modulation of the poliovirus receptor function
US20050255114A1 (en) 2003-04-07 2005-11-17 Nuvelo, Inc. Methods and diagnosis for the treatment of preeclampsia
US20050025763A1 (en) 2003-05-08 2005-02-03 Protein Design Laboratories, Inc. Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
KR101412271B1 (ko) 2003-05-09 2014-06-25 듀크 유니버시티 Ｃｄ２０-특이적 항체 및 이를 이용한 방법
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CN1816356A (zh) 2003-05-14 2006-08-09 免疫原公司 药物缀合物组合物
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
ZA200510282B (en) 2003-07-02 2007-03-28 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7329742B2 (en) 2003-09-04 2008-02-12 The Regents Of The University Of California Aptamers and methods for their in vitro selection and uses thereof
CA2548942C (en) * 2003-12-05 2013-10-15 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Health Anti-sars monoclonal antibodies
AU2005214331B2 (en) 2004-02-12 2011-09-15 Eisai, Inc. Monoclonal antibodies that specifically bind to folate receptor alpha
WO2005075514A2 (en) 2004-03-10 2005-08-18 Lonza Ltd. Method for producing antibodies
FR2867784B1 (fr) 2004-03-17 2006-06-09 Commissariat Energie Atomique Aptameres selectionnes a partir de cellules vivantes tumorales et leurs applications
US20050239134A1 (en) 2004-04-21 2005-10-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Combinatorial selection of phosphorothioate single-stranded DNA aptamers for TGF-beta-1 protein
MXPA06012162A (es) 2004-04-27 2007-03-30 Galapagos Nv Metodos, agentes y ensayos de seleccion de compuestos para inducir diferenciacion de celulas de mamifero no diferenciadas, en osteoblastos.
US20080312425A1 (en) 2004-08-30 2008-12-18 Lonza Biologics Plc. Ion Exchange Chromatography and Purification of Antibodies
NZ554725A (en) * 2004-10-25 2009-10-30 Merck & Co Inc Anti-ADDL antibodies and uses thereof
WO2007044043A2 (en) 2004-12-21 2007-04-19 Monsanto Technology, Llc Transgenic plants with enhanced agronomic traits
MX2007008017A (es) 2004-12-31 2007-09-12 Genentech Inc Polipeptidos que se ligan a br3 y usos de los mismos.
CN101146554B (zh) * 2005-01-27 2012-10-10 加州大学评议会 中和肉毒杆菌神经毒素的治疗性单克隆抗体
EP1866339B8 (en) 2005-03-25 2021-12-01 GITR, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
US7608413B1 (en) 2005-03-25 2009-10-27 Celera Corporation Kidney disease targets and uses thereof
AU2006230219A1 (en) 2005-03-30 2006-10-05 Endocyte, Inc. Method for cancer prognosis using cellular folate vitamin receptor quantification
WO2006112584A1 (en) 2005-04-18 2006-10-26 Lg Electronics Inc. Music composing device
EP2172487A1 (en) * 2005-04-22 2010-04-07 Morphotek Inc. Antibodies with Immune Effector Activity that Internalize in Folate Receptor Alpha-Positive Cells
WO2006121207A1 (en) 2005-05-12 2006-11-16 Oncotherapy Science, Inc. Methods for damaging cells using effector function of anti-dsc2 antibody
US20090215165A1 (en) * 2005-05-20 2009-08-27 James Rance High-level expression of recombinant antibody in a mammalian host cell
AU2006250888A1 (en) * 2005-05-24 2006-11-30 Avesthagen Limited A method for the production of a monoclonal antibody to CD20 for the treatment of B-cell lymphoma
WO2007006041A2 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Purdue Research Foundation Imaging and therapeutic method using monocytes
US7521195B1 (en) 2005-07-21 2009-04-21 Celera Corporation Lung disease targets and uses thereof
EP1937720B1 (en) * 2005-08-18 2014-04-09 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Single chain antibodies against beta-amyloid peptide
US7906116B2 (en) 2005-09-01 2011-03-15 Parkash Gill Methods for using and identifying modulators of Delta-like 4
AU2006291990B2 (en) * 2005-09-13 2012-05-31 National Research Council Of Canada Methods and compositions for modulating tumor cell activity
US20070099251A1 (en) 2005-10-17 2007-05-03 Institute For Systems Biology Tissue-and serum-derived glycoproteins and methods of their use
EP1790664A1 (en) * 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
PT2532681E (pt) 2005-12-20 2014-12-23 Sbi Biotech Co Ltd Anticorpos anti-ilt7
US8486412B2 (en) 2006-06-01 2013-07-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Immunity to folate receptors
EP3231442B1 (en) 2006-06-23 2019-12-25 ADC Therapeutics SA Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer
US7910702B2 (en) * 2006-07-28 2011-03-22 The Governors Of The University Of Alberta Recombinant antibodies to sclerotinia antigens
AU2007284651B2 (en) 2006-08-09 2014-03-20 Institute For Systems Biology Organ-specific proteins and methods of their use
JP4711910B2 (ja) * 2006-08-24 2011-06-29 パナソニック株式会社 紙製包装箱
EP1900752A1 (en) 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
AU2007312367B2 (en) 2006-10-12 2012-09-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Diagnosis and treatment of cancer using anti-EREG antibody
AU2007332473B2 (en) 2006-12-14 2012-09-27 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Anti-Claudin-3 monoclonal antibody, and treatment and diagnosis of cancer using the same
BRPI0720565A2 (pt) 2006-12-20 2013-09-17 Mmr Information Systems Inc anticorpos e mÉtodos para a sua preparaÇço e seu uso
US20080227704A1 (en) 2006-12-21 2008-09-18 Kamens Joanne S CXCL13 binding proteins
US7691980B2 (en) 2007-01-09 2010-04-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers
EP2606911A1 (en) 2007-02-16 2013-06-26 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
US20100104626A1 (en) 2007-02-16 2010-04-29 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
CN101678124A (zh) * 2007-03-14 2010-03-24 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
WO2008145136A1 (en) 2007-05-30 2008-12-04 Aarhus Universitet Stat3 inactivation by inhibition of the folate receptor pathway
CN104383553A (zh) 2007-06-25 2015-03-04 恩多塞特公司 含有亲水性间隔区接头的共轭物
CN101139613B (zh) 2007-08-01 2011-06-08 姜荣锡 抗肿瘤二元多肽及其应用与制备方法
CN103805633B (zh) 2007-12-21 2016-09-07 诺华股份有限公司 有机化合物
AU2009203464A1 (en) * 2008-01-11 2009-07-16 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Anti-CLDN6 antibody
DE202008000527U1 (de) 2008-01-11 2009-03-05 Bucyrus Dbt Europe Gmbh Firstmeißelträgerverstellung und Sicherungselement hierfür
US8093364B2 (en) 2008-01-18 2012-01-10 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enhanced purification of antibodies and antibody fragments by apatite chromatography
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
WO2009132081A2 (en) 2008-04-24 2009-10-29 The Research Foundation Of State University Of New York Monoclonal antibody-based targeting of folate receptors
CN104524590B (zh) * 2008-04-30 2019-06-21 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
MX2010011808A (es) 2008-04-30 2011-03-04 Immunogen Inc Conjugados potentes y enlazadores hidrofilicos.
US8383351B2 (en) 2008-06-11 2013-02-26 Oxford Brookes University Antibody to inhibin/ activin β-B subunit
CA2737496A1 (en) 2008-09-17 2010-03-25 Endocyte, Inc. Folate receptor binding conjugates of antifolates
WO2010033913A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Icb International, Inc. Antibodies, analogs and uses thereof
CN101440130B (zh) 2008-11-21 2011-07-27 中国人民解放军第四军医大学 一种抗人IL-13Rα2单克隆抗体的重链和轻链的可变区
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
CN110470835A (zh) 2009-03-24 2019-11-19 生物概念股份有限公司 细胞捕获和分析的装置和方法
US20110011931A1 (en) 2009-07-14 2011-01-20 Fidelisoft Inc. One-Card Transaction Management System
ES2624835T3 (es) 2009-08-06 2017-07-17 Immunas Pharma, Inc. Anticuerpos que se unen específicamente a los oligómeros A beta y uso de los mismos
WO2011100398A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
KR20230044026A (ko) 2010-02-24 2023-03-31 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
WO2012061759A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Morphotek Inc. Folate receptor alpha as a diagnostic and prognostic marker for folate receptor alpha-expressing cancers
EP2691117A2 (en) 2011-03-29 2014-02-05 Immunogen, Inc. Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
SMT201900114T1 (it) 2011-03-29 2019-02-28 Immunogen Inc Preparazione di coniugati maytansinoide-anticorpo mediante un processo a fase unica
UA125636C2 (uk) 2011-04-01 2022-05-11 Іммуноджен, Інк. Способи ідентифікації раку, який може реагувати на анти-folr1 антитіло або анти-folr1 імунокон'югат
WO2012138749A1 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Immunogen, Inc. Methods for decreasing ocular toxicity of antibody drug conjugates
CA2841725C (en) 2011-07-15 2021-03-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-folate receptor alpha antibodies and uses thereof
JP6293147B2 (ja) 2012-08-31 2018-03-14 イミュノジェン， インコーポレイテッド 葉酸受容体１の検出のための診断分析およびキット
US20150306242A1 (en) 2012-10-04 2015-10-29 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
RU2015149285A (ru) 2013-05-14 2017-06-19 Иммьюноджен Инк. Схемы дозирования иммуноконъюгата anti-folr1
LT3038650T (lt) 2013-08-30 2021-09-10 Immunogen, Inc. Antikūnai ir foliatų receptoriaus 1 nustatymo testai
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
WO2015054400A2 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
US20150297744A1 (en) 2014-03-28 2015-10-22 Immunogen, Inc. Anti-FOLR1 Immunoconjugate Dosing Regimens
EP3349796A4 (en) 2015-09-17 2019-05-29 ImmunoGen, Inc. THERAPEUTIC COMBINATIONS WITH ANTI-FOLR1 IMMUNOCONJUGATES
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Also Published As

Publication number Publication date
IL247615B (en) 2018-04-30
KR20220017432A (ko) 2022-02-11
US20210032327A1 (en) 2021-02-04
TW201817746A (zh) 2018-05-16
PL2538976T3 (pl) 2017-08-31
TW202237659A (zh) 2022-10-01
KR20150031488A (ko) 2015-03-24
CN105777907B (zh) 2020-03-17
JP7167228B2 (ja) 2022-11-08
AU2011220728B2 (en) 2014-07-31
KR102028531B1 (ko) 2019-10-04
HUE030854T2 (en) 2017-06-28
WO2011106528A1 (en) 2011-09-01
EP3196212B1 (en) 2020-06-03
SMT201700139T1 (it) 2017-05-08
US20160060339A1 (en) 2016-03-03
US10301385B2 (en) 2019-05-28
KR20210098560A (ko) 2021-08-10
LTPA2025515I1 (ja) 2025-04-25
SI2538976T1 (sl) 2017-05-31
KR101759057B1 (ko) 2017-07-18
KR20240052894A (ko) 2024-04-23
PT2538976T (pt) 2017-03-08
JP7515228B2 (ja) 2024-07-12
ES2617283T3 (es) 2017-06-16
FR25C1008I1 (fr) 2025-04-25
EP2538976B1 (en) 2016-11-30
FIC20250013I1 (fi) 2025-03-03
CN103037900A (zh) 2013-04-10
KR20170085143A (ko) 2017-07-21
KR101580713B1 (ko) 2015-12-29
MX2022001086A (es) 2022-02-14
CN103037900B (zh) 2016-04-06
US9670280B2 (en) 2017-06-06
MY171234A (en) 2019-10-04
CA3014767C (en) 2023-08-29
JP2016000729A (ja) 2016-01-07
SG10201606573SA (en) 2016-10-28
TW202348631A (zh) 2023-12-16
EP2538976A1 (en) 2013-01-02
CA3206109A1 (en) 2011-09-01
CY1118668T1 (el) 2017-07-12
US20120009181A1 (en) 2012-01-12
NZ724971A (en) 2019-06-28
IL269530B (en) 2020-11-30
KR20190114019A (ko) 2019-10-08
UA123257C2 (uk) 2021-03-10
NZ709390A (en) 2016-11-25
RS55738B1 (sr) 2017-07-31
US9598490B2 (en) 2017-03-21
RU2017102988A (ru) 2019-01-17
JP6860614B2 (ja) 2021-04-14
KR20230044026A (ko) 2023-03-31
US20160096887A1 (en) 2016-04-07
TWI622402B (zh) 2018-05-01
KR102287474B1 (ko) 2021-08-06
KR20200106987A (ko) 2020-09-15
TWI672318B (zh) 2019-09-21
EP3760643A1 (en) 2021-01-06
CA2790412C (en) 2018-10-02
IL290617B2 (en) 2023-11-01
TW202012446A (zh) 2020-04-01
AR080301A1 (es) 2012-03-28
IL255013B (en) 2019-10-31
JP2024138308A (ja) 2024-10-08
US20190345248A1 (en) 2019-11-14
TWI781327B (zh) 2022-10-21
KR101637138B1 (ko) 2016-07-06
NZ621938A (en) 2015-07-31
US20240132585A1 (en) 2024-04-25
BR112012021296B1 (pt) 2021-06-15
SG10201801636QA (en) 2018-03-28
US9657100B2 (en) 2017-05-23
US8557966B2 (en) 2013-10-15
US20170327575A1 (en) 2017-11-16
ZA201508660B (en) 2017-11-29
EP2538976A4 (en) 2013-07-24
KR20130012117A (ko) 2013-02-01
MX2019009654A (es) 2019-10-07
CA3014767A1 (en) 2011-09-01
LT2538976T (lt) 2017-03-27
US20160083471A1 (en) 2016-03-24
NO2025021I1 (no) 2025-05-07
MY205540A (en) 2024-10-24
EP2538976B8 (en) 2017-05-24
IL269530A (en) 2019-11-28
CN105777907A (zh) 2016-07-20
IL221241A (en) 2017-05-29
IL255013A0 (en) 2017-12-31
NL301319I2 (nl) 2025-04-09
MX340437B (es) 2016-07-08
US20130295119A1 (en) 2013-11-07
US9670278B2 (en) 2017-06-06
US20160075781A1 (en) 2016-03-17
HUS2500015I1 (hu) 2025-04-28
IL290617A (en) 2022-04-01
KR102346223B1 (ko) 2022-01-03
RU2012135395A (ru) 2014-03-27
TW201138816A (en) 2011-11-16
SG10201501342UA (en) 2015-04-29
JP2016153412A (ja) 2016-08-25
TWI504408B (zh) 2015-10-21
MY197016A (en) 2023-05-20
DK2538976T3 (en) 2017-02-27
JP5778700B2 (ja) 2015-09-16
AU2011220728A1 (en) 2012-08-30
IL221241A0 (en) 2012-10-31
US9670279B2 (en) 2017-06-06
JP2018021069A (ja) 2018-02-08
JP2022191500A (ja) 2022-12-27
MY165151A (en) 2018-02-28
RU2610663C2 (ru) 2017-02-14
TW201607555A (zh) 2016-03-01
IL278658B (en) 2022-03-01
CA2790412A1 (en) 2011-09-01
RU2017102988A3 (ja) 2020-05-18
BR112012021296A2 (pt) 2017-09-19
US9133275B2 (en) 2015-09-15
JP2019213522A (ja) 2019-12-19
EP3196212A1 (en) 2017-07-26
SG183144A1 (en) 2012-09-27
TWI796132B (zh) 2023-03-11
ES2813549T3 (es) 2021-03-24
KR20180093131A (ko) 2018-08-20
KR20160083962A (ko) 2016-07-12
US20160096888A1 (en) 2016-04-07
IL303569A (en) 2023-08-01
JP2013524773A (ja) 2013-06-20
RU2740479C2 (ru) 2021-01-14
MX2012009754A (es) 2012-11-21
NZ601617A (en) 2014-03-28
JP2021100430A (ja) 2021-07-08
HRP20170281T1 (hr) 2017-04-21
IL290617B1 (en) 2023-07-01
MX367345B (es) 2019-08-15
US10752683B2 (en) 2020-08-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7515228B2 (ja) フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
AU2014203172B2 (en) Folate Receptor 1 Antibodies and Immunoconjugates and Uses Thereof
HK40043991A (en) Immunoconjugates comprising a folate receptor 1 antibody
HK1240606A1 (en) Immunoconjugates comprising a folate receptor 1 antibody

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20160219

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160316

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20160607

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160907

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20161006

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20161104

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6039751

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250