JP6032261B2 - マイクロチップの試料処理装置 - Google Patents

Description

本発明は、微細な成分、例えば遺伝子の抽出・分析等に用いられる複数の反応容器及び試薬容器を有し、さらに反応容器及び試薬容器の間を微細な流路で連接したマイクロチップの試料処理装置に関する。

近年、特開２００３−２４８００８号公報（特許文献１）や特開２００６−５５０２５号公報（特許文献２）に記載されているように、遺伝子や核酸の抽出・分析において、微量容器内に充填された試料や反応液を攪拌する機構が開発されている。

また、マイクロチップと称される極微量である数μＬの試料を反応させ分析する技術が、Branejerg et al., "Fast Mixing by Lamination", Proc. IEEE Micro Electro Mech. Syst. Conf. (MEMS '96), pp. 441-446, (1996).（非特許文献１）、 Mengeaud et al., "Mixing Processes in a Zigzag Microchannel: Finite Element Simulations and Optical Study", Analytical Chemistry, vol. 74, no. 16, pp. 4279-4286, (2002).（非特許文献２）、Jia-Kun et al., "Electroosmotic flow mixing in zigzag microchannels", Electrophoresis, vol. 28. no. 6. pp. 975-983, (2007)．（非特許文献３）に記載されている。

具体的には、上記特許文献１は、「反応溶液中に含まれる磁気ビーズに反応容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌する」として反応容器上に複数の電磁石を周回させ、順次励磁させ磁力により反応容器内の磁気ビーズを巡回・移動し、その結果反応容器内の反応液を攪拌、混合せしめる機構となっている。さらに、特許文献１には、実施例として「反応容器は約２０ｍｍ×６０ｍｍ、その厚みは約０．２ｍｍであり、容量は約２５０μＬである」と記載されている。

また、上記特許文献２には、「微小反応容器中に設けられた微小ヒータを連続的にパルス加熱し、発生したバブルの膨張、凝縮により反応液を攪拌」と記載されている。

特開２００３−２４８００８号公報 特開２００６−５５０２５号公報

Branejerg et al., "Fast Mixing by Lamination", Proc. IEEE Micro Electro Mech. Syst. Conf. (MEMS '96), pp. 441-446, (1996). Mengeaud et al., "Mixing Processes in a Zigzag Microchannel: Finite Element Simulations and Optical Study", Analytical Chemistry, vol. 74, no. 16, pp. 4279-4286, (2002). Jia-Kun et al., "Electroosmotic flow mixing in zigzag microchannels", Electrophoresis, vol. 28. no. 6. pp. 975-983, (2007)．

しかしながら、上記特許文献１に示される従来技術は、複数の電磁石を反応容器上に設置しなければならず、反応容器が数μＬという極微量な反応容器には設置不可能である。さらに、特許文献１に示された従来技術は、複数の電磁石を順次励磁させる複雑な制御機構を必要とし、マイクロチップ内の反応容器を攪拌する手段としては大型化されると共に、消費電力も多くなるという問題点がある。

また、上記特許文献２に示される従来技術は、反応容器内に設けたヒータにより反応液内にバブルを発生せしめ、バブルの膨張・凝縮によって生じる力の作用により反応液を攪拌せしめるものである。しかるに、バブルとして発生する空気や、ヒータによる温度上により試料や反応液の機能が低下したり、バブルの発生量をコントロールするという難しい制御が必要であるなどの問題があった。さらに、数μＬという極微量な反応容器内に収納するヒータや、適正な温度制御を行う制御機構を必要とし、装置が複雑で、大型化されるという問題点がある。

また、非特許文献１に示される従来技術では、２種類の溶液が流れる２本の流路を立体的に交差配置し、溶液の混合と分離を繰り返すことにより、溶液を攪拌している。しかるに、立体的に２本の流路を立体的に精度高く配置することは、容易では無い。また、充分に攪拌するためには、立体的に交差配置の部分を数多く設置する必要があり、空間的に大きくなってしまう。加えて、交差配置された流路を流れ終わった後に、攪拌物が生成されるので、流す試料が有る程度以上必要となってしまう。

また、非特許文献２に示される従来技術では、２種類の溶液が流れる２本の流路を１本にまとめ、その後にジグザグ形状の流路を通すことにより、溶液を攪拌している。しかるに、充分に攪拌するためには、ジグザグ形状流路の部分を長距離通過する必要があり、空間的に大きくなってしまう。また、ジグザグ形状流路を流れ終わった後に、攪拌物が生成されるので、流す試料が有る程度以上必要となってしまう。加えて、溶液の粘性やジグザグの形状にしたがって、流路を流す速度を調整しないと、望んだ攪拌が得ることが出来ないので、流速の高精度な制御が必要となる。

また、非特許文献３に示される従来技術では、非特許文献２に示される従来技術と同様のものであるが、攪拌の効率を向上させ、ジグザグ形状流路の部分が有る程度短くするために、ジグザグ形状流路の途中を、２００μｍから２５μｍの流路と絞り込んでいる。しかるに、２５μｍの流路を精度高く配置することは容易ではない。

そこで、本発明は、上記従来技術の問題点に鑑みて成されたものであり、その目的は、構造が簡単でしかもコンパクトで、かつ極めて小型・安価で信頼性の高いマイクロチップの試料処理装置を提供することにある。

上記目的を達成するために、本発明のマイクロチップの試料処理装置は、
試料を充填するための試料容器と、
試料容器と流路を介して連接されかつ試料を順次移送充填して混合せしめる反応容器とを有し、
試料容器と反応容器との間で流路を介して試料の移送を繰り返し行うことにより、試料を攪拌し混合させる。

本発明によれば、マイクロチップの試料処理装置の機構が簡易化、小型化される。さらに、微量な試料においても高効率で微細な成分の抽出が可能となり、高価な試料の消費が減少でき分析コストの低減となる。さらに、移送（送液）および抽出時間の短縮が可能となり、作業の大幅な効率向上が可能となる。

本発明のマイクロチップの試料処理装置の構成を示す斜視図および論理回路図である。 本発明におけるマイクロチップの機構構成を示す斜視図である。 本発明における初期状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第１段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第２段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第４段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第５段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第６段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第７段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第８段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第９段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第１０段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第１２段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面斜視図である。 本発明における第１２段階の動作状態を示すマイクロチップの一部の断面図である。 本発明の動作を示すフローチャートである。 本発明における他のマイクロチップの機構構成を示す斜視図である。

以下、本発明のマイクロチップの試料処理装置の実施例について図面を用いて詳細に説明する。

図１は本発明におけるマイクロチップを使用し、マイクロチップを用いた解析装置で試料を反応・抽出させる機構の構成を示す斜視図である。また、空気圧回路部はＪＩＳ論理記号で示してある。

機枠１にはテーブル３が支柱２を介し設けられ、さらにテーブル３には、Ｏリング６に周囲をシールされた廃棄穴５が設けられている。また，廃棄穴５は、廃棄電磁弁７、チューブ７ａを介し機枠１上に設けられた廃棄槽８に接続されている。また、テーブル３の上面にはマイクロチップ５０に設けられたピン穴５５ａ、５５ｂと合致し所定の位置に案内するためのピン１０ａ、１０ｂが凸状に設置されている。さらに、テーブル３にはヒンジ９を介し、締結ネジ２５と、周囲をOリング２６でシールされ貫通した加圧穴２２ａ、２２ｂ、２２ｃ、２２ｄ、２２ｅおよび周囲をＯリング２７でシールされたシャッタ加圧穴２３ａ、２３ｂ、２３ｃ、２３ｄ、２３ｅ、２３ｆおよび同様にＯリング２７でシールされた空気供給穴２４を有するカバー２０が、Ａ及びＢ方向に回動可能に設けられている。さらに、テーブル３上の一端には締結ネジ２５と一致する位置にネジ穴４が設けられている。

さらに、カバー２０を貫通する状態で設けられた加圧穴２２ａ、２２ｂ、２２ｃ、２２ｄ、２２ｅは、それぞれチューブ１７ａ、１７ｂ、１７ｃ，１７ｄ、１７ｅにより加圧電磁弁１６ａ、１６ｂ、１６ｃ、１６ｄ、１６ｅの二次側に導接されている。さらに、シャッタ加圧穴２３ａ、２３ｂ、２３ｃ、２３ｄ、２３ｅ、２３ｆは、それぞれチューブ１９ａ、１９ｂ、１９ｃ、１９ｄ、１９ｅ、１９ｆによりシャッタ電磁弁１８ａ、１８ｂ、１８ｃ、１８ｄ、１８ｅ、１８ｆの二次側に、また空気供給穴２４はチューブ２９により空気供給電磁弁２８の二次側に接続されている。加圧電磁弁１６ａ、１６ｂ、１６ｃ、１６ｄ、１６ｅおよびシャッタ電磁弁１８ａ、１８ｂ、１８ｃ、１８ｄ、１８ｅ、１８ｆおよび空気供給電磁弁２８の一次側は蓄圧器１１に接続され、蓄圧器１１にはモータ１３により駆動されるポンプ１２と内部圧力を検出する圧力センサ１４が接続されている。また、テーブル３にはマイクロチップ５０の所定部を下面から所定の温度に制御する温度調整ユニット３０が設けられている。

一方、あらかじめ設定されたプログラムを実行するコントローラ１５には加圧電磁弁１６ａ、１６ｂ、１６ｃ、１６ｄ、１６ｅおよび廃棄電磁弁７、シャッタ電磁弁１８ａ、１８ｂ、１８ｃ、１８ｄ、１８ｅ、１８ｆおよび空気供給電磁弁２８が動作制御可能に接続されている、さらに、コントローラ１５には蓄圧器１１内の圧力を所定圧に制御可能なようにポンプ１２を駆動するモータ１３および蓄圧器１１内の圧力を検出しフィードバックを行う圧力センサ１４が接続されている。以上の構成によりコントローラ１５からの指令により蓄圧器１１内の圧力は常に所定の圧力に保たれている。また、温度調整ユニット３０も同様にコントローラ１５に接続され、あらかじめプログラムされた温度制御を行う構成となっている。

ここでは、圧力を介する媒体として、空気を一例として説明しているが、圧力を媒介できる物質(例えば気体、液体、ゲル)であれば、同様な効果を得ることが可能であり本発明は圧縮空気に限定されるものではない。

図２はマイクロチップ５０の詳細を示す斜視図である。

マイクロチップ５０は多層構造を成し、それぞれ伸縮性樹脂からなるメインプレート５１ａ、第２プレート５１ｂ、第３プレート５１ｃ、第４プレート５１ｄを貼り合わせた構成となっている。

マイクロチップ５０上には、メインプレート５１ａ、第２プレート５１ｂを貫通し凹状を成し、予め試料を充填する試料槽５２ａ、５２ｂ、５２ｃおよび空気供給口５４が設けられ、さらにメインプレート５１ａを貫通し凹状をなす反応槽５２ｄ、抽出槽５２ｅ、ＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃが設けられている。また、マイクロチップ５０上には、メインプレート５１ａ、第２プレート５１ｂ、第３プレート５１ｃを貫通し凹状を成すシャッタ口５３ａ、５３ｂ、５３ｃ、５３ｄ、５３ｅ、５３ｆが設けられている。さらに、チップ廃棄穴５６は第２プレート５１ｂ、第３プレート５１ｃ、第４プレート５１ｄを下方向に貫通するように設けられている。

また、図１で示すテーブル３上にマイクロチップ５０を搭載し、カバー２０をＢ方向へ回動し締結ネジ２５とネジ穴４によりマイクロチップ５０をテーブル３とカバー２０で挟持した際には、試料槽５２ａ、５２ｂ、５２ｃは加圧穴２２ａ、２２ｂ、２２ｃと、反応槽５２ｄは加圧穴２２ｄと、抽出槽５２ｅは加圧穴２２ｅと、シャッタ口５３ａ、５３ｂ、５３ｃ、５３ｄ、５３ｅ、５３ｆはシャッタ加圧穴２３ａ、２３ｂ、２３ｃ、２３ｄ、２３ｅ、２３ｆと合致した位置で搭載される構成となっている。

さらに、試料槽５２ａ、５２ｂ、５３ｃ、反応槽５２ｄ、抽出槽５２ｅ、ＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃ、空気供給口５４は、メインプレート５１ａと第２プレート５１ｂの間で構成される流路６１ａ、６１ｂ、６１ｃ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｆ、６１ｇ、６１ｈ、６１ｉで連接されている。また、シャッタ口５３ａ、５３ｂ、５３ｃ、５３ｄ、５３ｅ、５３ｆは、第２プレート５１ｂと第３プレート５２ｃの間で構成されるシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃ、６２ｄ、６２ｅ、６２ｆと連接されると共に、その先端は該流路６１ａ、６１ｂ、６１ｃ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｆ、６１ｇ、６１ｈ、６１ｉと第３プレート５１ｃを仲介し交差するように設けられている。

また、流路６１ａ、６１ｂ、６１ｃ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｆ、６１ｇ、６１ｈ、６１ｉは、第２プレート５１ｂと第３プレート５１ｃを接着する際に、流路となるべき部分を接着せず剥離可能な状態で構成されている。同様にシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃ、６２ｄ、６２ｅ、６２ｆは、第３プレート５１ｃと第４プレート５１ｄを接着する際に、流路となるべき部分を接着せず剥離可能な状態で構成されている。

また、反応槽５２ｄ及び抽出槽５２ｅの凹状容器内部の第２プレート５１ｂと第３プレート５１ｃ間も同様に接着はされておらず、流路６１ａ、６１ｂ、６１ｃ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｆ、６１ｇ、６１ｈ、６１ｉと連接される構成となっている。また、反応槽５２ｄの内部の第２プレート５１ｂと第３プレート５１ｃとの間で構成される非接着部には、所望する微細な成分を抽出するための吸着部材６０が固相されている。

次に、動作の説明を図３から図１３および図１５のフローチャートを参照して説明する。

図３は動作の初期状態（図１５、ステップ１６０）を示す斜視図であり、マイクロチップ５０がテーブル３上に搭載され、図１で示すカバー２０をＢ方向に回動させ挟持された状態を示す。

図３は動作の説明をするために、図１で示すカバー２０、Ｏリング２６、２７は省略していると共に一部断面を表示している。初期状態では加圧電磁弁１６a、１６ｂ、１６ｃ、１６ｄ、１６ｅおよびシャッタ電磁弁１８ａ、１８ｂ、１８ｃ、１８ｄ、１８ｅ、１８ｆ、供給電磁２８、廃棄電磁弁７はＯＦＦの状態である。すなわち、チューブ１７ａ、１７ｂ、１７ｃ、１７ｄ、１７ｅ、チューブ２９、チューブ１９ａ、１９ｂ、１９ｃ、１９ｄ、１９ｅ、１９ｆには加圧空気が供給されない。その結果、試料槽５２ａ、５２ｂ、５２ｃおよび反応槽５２ｄ、抽出槽５２ｅは上部から加圧されていない状態にあり、さらに、シャッタ口５３ａ、５３ｂ、５３ｃ、５３ｄ、５３ｅ、５３ｆおよびシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃ、６２ｄ、６２ｅ、６２ｆも同様に加圧空気が供給されていない。また、空気供給口５４も同様に上部から加圧されていない状態にある。一方、廃棄穴５からチューブ７ａを介し廃棄槽８へ接続している回路も、廃棄電磁弁７により遮断されている。

さらに、試料槽５２ａ、５２ｂ、５２ｃには試料５７ａ、５７ｂ、５７ｃが充填されている。さらに、反応槽５２ｄ内には伸縮性を有する第２プレート５１ｂと第３プレート５１ｃ間の非接着部である反応室７０が形成されており、反応室７０内には吸着部材６０が固相されている。反応室７０の大きさはほぼ反応槽５２ｄの径と一致している。

次に、第１段階の工程（図１５、ステップ１６１）を図４を参照して説明する。

第１段階は試料槽５２ａに充填された試料５７ａを反応槽５２ｄに移送（送液）することを目的とする。初期状態から加圧電磁弁１６ａをＯＮにすると、圧縮空気はチューブ１７ａを介して試料槽５２ａの上部に導かれる。その結果、試料５７ａは流路６１ａを押し広げＣ方向へ押出される。さらに、試料５７ａは連接された流路６１ｃ、６１ｂ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｆにも流入する。また、シャッタ電磁弁１８ｂ、１８ｃがＯＮされると圧縮空気がチューブ１９ｂ、１９ｃ、シャッタ口５３ｂ、５３ｃを介し流路６２ｂおよび６２ｃに導かれる。流路６２ｂ、６２ｃは流路６１ｄ、６１ｅの下部に導かれＥ、Ｆ部で交差している。

よって、流路６２ｂ、６２ｃに導かれた圧縮空気は交差部Ｅ，Ｆで流路６１ｄ、６１ｅを閉鎖せしめ、流路６１ｃに流入した試料５７ａは試料槽５２ｂ、５２ｃへ流入することはない。また、流路６１ｆへ流入した試料５７ａは、空気供給電磁弁２８がＯＦＦされ、チューブ２９、空気供給口５４に蓄積された空気の逃げ場がないために閉鎖されている。さらに、流路６１ａに流入した試料５７ａは反応槽５２ｄの二次側流路６１ｇ、６１ｈへも流入する。しかし、シャッタ電磁弁１８ｄ、１８ｅがＯＮされ、チューブ１９ｄ、１９ｅ、シャッタ口５３ｄ、５３ｅを介してシャッタ流路６２ｄ、６２ｅに圧縮空気が導入されるため、流路６１ｇ、６１ｈとの交差部Ｈ、Ｊにおいて流路６１ｇ、６１ｈを閉鎖せしめる。

その結果、試料槽５２ａから押出された試料５７ａは、反応槽５２ｄ内の反応室７０に蓄積される。すなわち、反応室７０の上部は伸縮性材料からなる第２プレート５１ｂで構成されるため、風船状に膨れ試料５７ａが蓄積される。

反応槽５２ｄ内の反応室７０にはあらかじめ吸着部材６０が固相されており、試料５７ａに含まれる所望する微細な成分を吸着する。しかし、一般的に反応室７０の内部では、強制的な攪拌動作が行われないため吸着効率は低い状態である。

次に、第２段階の工程（図１５、ステップ１６２）を図５を参照して説明する。

第２段階は、第１段階で反応槽５２ｄ内の反応室７０へ移送・充填された試料５７ａを、元の試料槽５２ａへ戻すことを目的とする。第１段階終了後、加圧電磁弁１６ａをＯＦＦにするとチューブ１７ａを介し、試料槽５２ａは大気に開放される。さらに、加圧電磁弁１６ｄをＯＮとするとチューブ１７ｄを介して、反応槽５２ｄが加圧される。その結果、反応室７０内の試料５７ａは、流路６１ｂ、６１ａ、６１ｃ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｇ、６１ｈへ押出される。しかし第１段階の動作で説明したように、流路６１ｄ、６１ｃ、６１ｅ、６１ｇ、６１ｈは交差部Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｊ部にて閉鎖され、さらに空気供給電磁弁２８がＯＦＦされチューブ２９内の空気が閉ざされているため、押出された試料５７ａは唯一大気に開放されている流路６１ａをＫ方向に導かれ試料槽５２ａへ戻る。

次に、第３段階の工程（図１５、ステップ１６３）について説明する。

第３段階は試料５７ａを試料槽５２ａと反応槽５２ｄ内の反応室７０の間で往復させることを目的とする。第１段階と第２段階の繰り返し数は図１で示すコントローラ１５と、図１５で示すフローチャートに示すようにあらかじめプログラムされている。第３段階は、図４で説明した第１段階と図５で説明した第２段階を繰り返す。その結果、所望する微細成分を含む試料５７ａが往復する度に、反応室７０に固相されている吸着部材６０と試料５７ａと何度も攪拌され、吸着部材６０には効率よく所望する微細な成分が付着する。第３段階で所定の繰り返しを終了した状態は図４で示した状態に戻る。

次に、第４段階（図１５、ステップ１６４）の工程を図６を参照して説明する。

第４段階は図４で示される第３段階が終了した状態から反応室７０内の試料５７ａを排出することを目的とする。第３段階の工程を終了した後の動作を図６で示す。

シャッタ電磁弁１８ａおよび加圧電磁弁１６ｄ、廃棄電磁弁７をＯＮする。その結果、圧縮空気はチューブ１７ｄを介し反応槽５２ｄへ導かれ、反応室７０の上部を加圧し充填されていた試料５７ａを、Ｋ及びＧ方向へ押出す。押出された試料５７ａの一方は流路６１ｂ、６１ｃへ流入するが、シャッタ電磁弁１８ａがＯＮされ、チューブ１９ａ、シャッタ口５３ａを介しシャッタ流路６２ａに圧縮空気が導かれていると共に、すでにシャッタ電磁弁１８ｂ、１８ｃがＯＮされているため、チューブ１９ｂ、１９ｃ、シャッタ口５３ｂ、５３ｃを介しシャッタ流路６２ｂ、６２ｃは圧縮空気が供給されている。さらに、流路６１ａ、６１ｄ、６１ｅとシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃとの交差部Ｌ、Ｅ、Ｆで流路６１ｃへ流入した試料５７ａは遮断される。 また、空気供給電磁弁２８がＯＦＦされているため、チューブ２９、空気供給口５４は閉鎖された回路となっている。その結果、流路６１ｃをＤ方向に導かれた試料５７ａは閉鎖された状態にある。一方、流路６１ｇのＧ方向へ導かれた試料５７ａは、すでにシャッタ電磁弁１８ｅがＯＮされており、チューブ１９ｅ、シャッタ口５３ｅを介しシャッタ流路６２ｅに圧縮空気が導入されているため、流路６１ｇはシャッタ流路６２ｅとの交差部Ｊで遮断されている。また、流路６１ｇと分岐している流路６１ｈのＩ方向に導かれた試料５７ａは、シャッタ電磁弁１８ｄがＯＦＦされ、チューブ１９ｄ、シャッタ口５３ｄ、シャッタ流路６２ｄが大気に開放されるため、流路６１ｈとシャッタ流路６２ｄの交差部Ｈは流路６１ｈを開放している。さらに、廃棄電磁弁７がＯＮされるため、流路６１ｈはテーブル３を貫通した廃棄穴５、チューブ７ａを介し廃棄槽８に開放される。

以上の構成により、反応槽５２ｄ内の反応室７０から押出された試料５７ａは、流路６１ｇ、６１ｈ、廃棄穴５、廃棄電磁弁７、チューブ７ａを経由してＭ方向へ導かれ廃棄槽８へ廃棄される。その結果、反応室７０内には、試薬５７ａに含まれた所望する微細成分を吸着した吸着部材６０と、不純物を含んだ試料５７ａの一部が残留する。

次に、第５段階の工程（図１５、ステップ１６５）を図７を参照して説明する。

第５段階は、図２で示す一般的に有機溶剤が用いられる試料５７ｂを反応室７０内へ送液し、試料５７ａの中に含まれる不純物（特に所望する以外の成分）を、次の第６段階の工程と共に、外部へ排出することを目的とする。

第４段階終了後、加圧電磁弁１６ｂ、シャッタ電磁弁１８ｄをＯＮすると共に、シャッタ電磁弁１８ｂ、廃棄電磁弁７をＯＦＦにする。その結果、シャッタ流路６２ｂは大気に開放され流路６１ｄとシャッタ流路６２ｂの交差するＥ部が開放された状態となる。また、加圧電磁弁１６ｂがＯＮされ、圧縮空気はチューブ１７ｂを介し試料槽５２ｂへ導かれ、充填されていた試料５７ｂを流路６１ｄのＰ方向へ押出す。流路６１ｄへ押出された試料５７ｂは連接する流路６１ｃをＤ及びＮ方向へ流入せしめる。しかし、Ｄ方向はシャッタ電磁弁１８ｃがＯＮされチューブ１９ｃ、シャッタ口５３ｃを介しシャッタ流路６２ｃに圧縮空気が導かれ流路６１ｅとの交差部Ｆを閉鎖すると共に、流路６１ｃと連接する流路６１ｆは空気供給電磁弁２８がＯＦＦされチューブ２９、空気供給口５４内の空気が密閉されるため、試料５７ｂはＤ方向へは流入しない。

また、Ｎ方向へ押出された試料５７ｂは、連接した流路６１ａおよび６１ｂへ押出されるが、流路６１ａはシャッタ電磁弁１８ａがＯＮされ、シャッタ口５３ａ、シャッタ流路６２ａに圧縮空気が導かれ、流路６１ａとの交差部Ｌで閉鎖されている。よって、流路６１ｃに導かれた試料５７ｂは唯一開放されている流路６１ｂをＣ方向へ導かれ、反応槽５２ｄ内の反応室７０へ流入する。一方、試料５７ｂは反応室７０に連接されている流路６１ｇ、６１ｈへもＧ及びＩ方向へ導かれるが、流路６１ｇと連接されている流路６１ｈはシャッタ電磁弁１８ｄ、チューブ１９ｄ、シャッタ口５３ｄ、シャッタ流路６２ｄにより交差部Ｈで閉鎖されると共に、シャッタ電磁弁１８ｅがＯＮされチューブ１９ｅ、シャッタ口５３ｅを介しシャッタ流路６２ｅへ圧縮空気が導かれ流路６１ｇとの交差部Ｊを閉鎖しているため流入はしない。

その結果、第１段階と同様に、試料槽５２ｂから押出された試料５７ｂは、反応槽５２ｄ内の反応室７０の膨張により蓄積される。

次に、第６段階の工程（図１５、ステップ１６６）を図８を参照して説明する。

第６段階は第５段階で反応室７０に蓄積された試料５７ｂを廃棄することを目的とする。第５段階終了後、加圧電磁弁１６ｄ、廃棄電磁弁７をＯＮし、加圧電磁弁１６ｂ、シャッタ電磁弁１８ｄをＯＦＦにする。その結果、加圧電磁弁１６ｄ、チューブ１７ｄに圧縮空気が導かれ、試料５７ｂが充填されていた反応槽５２ｄ内の反応室７０を圧縮し押出す。また、すでに流路６１ａ、６１ｄ、６１ｅ、６１ｇとシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃ、６２ｅとの交差部Ｌ、Ｅ、Ｆ、Ｊ部が閉ざされていると共に、空気供給電磁弁２８がＯＦＦされ空気供給口５４、流路６１ｆの空気の逃げ場が閉ざされている。また、流路６１ｈは、シャッタ電磁弁１８ｄがＯＦＦされチューブ１９ｄ、シャッタ口５３ｄ内の空気が大気に開放されている。その結果、反応室７０に充填されていた試料５７ｂは、唯一シャッタ流路６２ｄの交差部Ｈが開放された流路６１ｈをＩ方向に導かれる。さらに、廃棄電磁弁７がＯＮされているために試料５７ｂは流路６１ｈ、廃棄穴５、廃棄電磁弁７、チューブ７ａを介しＭ方向へ、すなわち廃棄槽８へ廃棄される。

以上の結果、一般的に有機溶剤が用いられる試薬５７ｂにより流路６１ｂ、６１ｃ、６１ｈ及び反応室７０に残留していた不純物（例えば、所望以外の微細成分）を洗い流す。また、反応室７０内の吸着部材６０に付着した所望の微細成分は残される。

次に、第７段階の工程（図１５、ステップ１６７）を図９を参照して説明する。

一般的に、第６段階で廃棄された試料５７ｂは有機溶剤が用いられ、次工程での吸着部材６０に付着した所望の遺伝子（ＤＮＡ）を溶解抽出する際に不具合を引き起こすことが知られている。第７段階の工程は、試料５７ｂが付着した流路６１ｂ、６１ｃ、６１ｆ、６１ｇ、６１ｈを揮発・乾燥させることを目的とする。

第７段階の動作を図９で説明する。

第６段階終了後、加圧電磁弁１６ｂ、１６ｄをＯＦＦし、空気供給電磁弁２８をＯＮすると、圧縮空気は空気供給電磁弁２８、チューブ２９、空気供給口５４を介し流路６１ｆをＱ方向へ導かれる。また、流路６１ａ、６１ｄ、６１ｅとシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃとの交差部Ｌ、Ｅ、Ｆおよび流路６１ｇとシャッタ流路６２ｅの交差部Ｊは閉鎖され、流路６１ｈとシャッタ流路６２ｄの交差部Ｈは前述した第６段階の工程で開放されている。そのため、流路６１ｆをＱ方向に導かれた圧縮空気は唯一開放されている回路すなわち流路６１ｆ、６１ｃ、６１ｂ、反応室７０、流路６１ｇ、６１ｈをそれぞれＱ、Ｎ、Ｇ、Ｉ方向へと導かれ、さらにＭ方向すなわち廃棄穴５およびすでにＯＮとなっている廃棄電磁弁７、チューブ７ａを介し、廃棄槽８へ導かれる。

以上の動作により、第６段階において流路６１ｃ、６１ｂ、反応室７０、流路６１ｇ、６１ｈに付着していた試料５７ｂは揮発・乾燥される。

次に、第８段階の工程（図１５、ステップ１６８）を図１０を参照して説明する。

第８段階は図１で示す試料槽５２ｃに充填された試料５７ｃを反応室７０へ移送し吸着部材６０に付着した所望の微細な成分を溶解・抽出することを目的とする。第７段階の工程を終了した後、シャッタ電磁弁１８ｃ、空気供給電磁弁２８、廃棄電磁弁７をＯＦＦし、加圧電磁弁１６ｃ、シャッタ電磁弁１８ｄをＯＮする。加圧電磁弁１６ｃがＯＮされるとチューブ１７ｃを介し圧縮空気が試料槽５２ｃへ導かれ流路６１ｅへ試料５７ｃをＲ方向に押出し、さらに連接された流路６１ｃ、６１ｆへ導く。一方、流路６１ｆは空気供給電磁弁２８がＯＦＦされ、チューブ２９、空気供給口５４内の空気は密閉されているので流路６１ｆには流入しない。また、流路６２ａ、６２ｄはシャッタ電磁弁１８ａ、１８ｂがＯＮされ、チューブ１９ａ、１９ｂ、シャッタ口５３ａ、５３ｂ、シャッタ流路６２ａ、６２ｂへ圧縮空気が供給されているため、流路６１ａ、６１ｄとの交差部Ｌ、Ｅが閉鎖されているため流路６１ｃに導かれた試料５７ｃは唯一開放されている流路６１ｂをＣ方向へ流入する。

一方、流路６１ｇ及び流路６１ｈはシャッタ電磁弁１８ｄ、１８ｅがＯＮされており、チューブ１９ｄ、１９ｅ、シャッタ口５３ｄ、５３ｅ、シャッタ流路６２ｄ、６２ｅに圧縮空気が供給されているため、流路６１ｇ及び流路６１ｈとの交差部Ｈ、Ｊ部で閉鎖されている。さらに、加圧電磁弁１６ｄがＯＦＦされ反応室７０の上が大気開放されているため、流路６１ｂ導かれた試料５７ｃは反応室７０を膨張させ流入する。流入した試料５７ｃは反応室７０内で吸着部材６０に吸着された所望する微細な成分を溶解する。

次に、第９段階の工程（図１５、ステップ１６９）を図１１を参照して説明する。

第９段階は第８段階において反応室７０に充填された試料５７ｃを、抽出槽５２ｅへ送液する工程である。第８段階の終了後、加圧電磁弁１６ｄ、シャッタ電磁弁１８ｃ、１８ｆをＯＮ、シャッタ電磁弁１８ｅをＯＦＦする。加圧電磁弁１６ｄがＯＮされると、チューブ１７ｄを介し反応槽５２ｄ内の反応室７０上部に圧縮空気が供給される。その結果、反応室７０内の試料５７ｃは押出されるが、すでに第８段階において流路６１ａ、６１ｄ、６１ｅとシャッタ流路６２ａ、６２ｂ、６２ｃとの交差部Ｌ、Ｅ、Ｆが閉鎖されており、流路６１ｆの空気が密閉されていると共に、流路６１ｈとシャッタ流路６２ｄとの交差部Ｈも閉鎖されている。また、シャッタ電磁弁１８ｅがＯＦＦされ、チューブ１９ｅ、シャッタ口５３ｅを介し、シャッタ流路６２ｅが大気開放され、流路６１ｇとシャッタ流路６２ｅの交差部Ｊが開放される。さらに、シャッタ電磁弁１８ｆがＯＮされると、チューブ１９ｆ、シャッタ口５３ｆ、シャッタ流路６２ｆに圧縮空気が導かれ、流路６１ｉとシャッタ流路６２ｆの交差部Ｕが閉鎖される。

その結果、試料５７ｃは唯一開放されている流路６１ｇをＧ方向へ導かれる。さらに、反応室７０と同構成を持つ抽出槽５２ｅの上部は、加圧電磁弁１６ｅがＯＦＦされ、チューブ１７ｅを介し大気開放されている。その結果、反応室７０内で所望の微細な成分を溶解した試料５７ｃは抽出槽５２ｅを風船状に膨張させ内部に流入・充填される。

次に、第１０段階の工程（図１５、ステップ１７０）を図１２を参照して説明する。

前述した第９段階で抽出槽５２ｅに得られた所望する微細な成分が溶解した試料５７ｃを、図２で示す次工程のためのＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへ移送することも可能である。しかし、一般的に第８段階で示した吸着部材６０と試料５７ｃを接触させたのみでは、吸着部材６０に吸着させた所望の微細成分を効率良く溶解できない。そのため、第１０段階は、第２段階と同じように抽出槽５２ｅに充填された試料５７ｃを再度反応室７０へ戻し、試料５７ｃと吸着部材６０の接触機会を増加して、所望の微細成分の溶出（溶解）効率を高めることを目的とする。

第９段階が終了した後、加圧電磁弁１６ｄをＯＦＦし、１６ｅをＯＮにすると、圧縮空気はチューブ１７ｅを介して抽出槽５２ｅを加圧すると共に、反応槽５２ｄ上部がチューブ１７ｄを介し大気開放され、抽出槽５２ｅ内部の試料５７ｃを流路６１ｇのＳ方向へ押出す。また、第９段階ですでにシャッタ流路６２ｅと流路６１ｇの交差部Ｊは開放され、シャッタ流路６２ｆと流路６１ｉの交差部Ｕは閉鎖されている。その結果、試料５７ｃは第９段階と同様に反応室７０を風船状に膨らませ戻る。以上の結果により、流路６１ｇをＳ方向、すなわち反応室７０に戻った試料５７ｃは、再度吸着部材６０と接触し、再度所望の成分を溶出（溶解）する。

以上のように、第９段階の動作と第１０段階の動作を繰り返すことにより、吸着部材６０に吸着された所望の微細成分を効率よく試料５７ｃ内に溶解させることが可能となる。

次に、第１１段階の工程（図１５、ステップ１７１）を説明する。

第１１段階の工程は、図１１で示される第９段階の動作と、図１２で示される第１０段階の動作を繰り返し行うことにより、吸着部材６０に吸着された所望する微細成分を効率よく溶解することを目的とする。繰り返し試料５７ｃを反応室７０内の吸着部材６０と攪拌しながら往復するため、より効率的なＤＮＡの溶出（溶解）が可能となる。また第１１段階は図１１で示される状態で終了する。

次に、第１２段階の工程（図１５、ステップ１７２）を図１３を参照して説明する。

第１２段階の工程は、第１１段階が終了した状態すなわち図１１で示す抽出槽５２ｅ内に充填された所望の成分を溶出した試料５７ｃを、図２で示す次工程を行うＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへ送液することを目的とする。

第１２段階の動作を図１３で説明する。

図１１で示される第１１段階の終了状態から、加圧電磁弁１６ｅ、シャッタ電磁弁１８ｅをＯＮし、さらにシャッタ電磁弁１８ｆをＯＦＦする。その結果、加圧電磁弁１６ｅはチューブ１７ｅを介し、抽出槽５２ｅの上部に圧縮空気を供給し、抽出槽５２ｅ内に充填された試料５７ｃを流路６１ｇ、６１ｉへ押出す。一方、シャッタ電磁弁１８ｅがＯＮされチューブ１９ｅ、シャッタ口５３ｅを介して、シャッタ流路６２ｅへ圧縮空気が供給されるため、流路６１ｇとシャッタ流路６２ｅの交差部Ｊは遮断されていると共に、シャッタ電磁弁１８ｆがＯＦＦされチューブ１９ｆ、シャッタ口５３ｆを介し、シャッタ流路６２ｆが大気開放され、流路６１ｉの交差部Ｕが開放される。

その結果、抽出槽５２ｅ内の試料５７ｃは唯一開放されている流路６１ｉをＴ方向へ押出される。すなわち、流路６１ｉへ導かれた試料５７ｃは、図２で示す次工程を行うＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへ移送される。

さらに、第１２段階の工程（図１５、ステップ１７２）の詳細を図１４を参照して説明する。

図１４は説明の便宜上断面図で表示し、さらにマイクロチップ５０の同一平面上に設けられているＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃの断面図は上方に併記して示す。また、流路６１ｇ、６１ｉ、シャッタ流路６２ｅ、６２ｆは構成上第２プレート５１ｂ、第３プレート５１ｃ、第４プレート５１ｄの接着面の一部を非接着構造で構成しているが、説明の便宜上、溝状の巾を持たせた図で表示している。前述したように第１２工程では抽出槽５２ｅの上部からＶ１方向に圧縮空気が供給される。その結果、内部の所望の微細成分が溶出した試料５７ｃは押出される。また、流出する一端の流路６１ｇはシャッタ流路６２ｅに圧縮空気が供給されているため、シャッタ流路６２ｅを構成する伸縮性を有する第３プレート５１ｃを凸状に持ち上げ交差部Ｊで閉鎖している。また、流出する他端の流路６１ｉはシャッタ流路６２ｆが大気に開放されている。その結果、抽出槽５２ｅ内の試薬５７ｃは唯一開放されている流路６１ｉをＴ方向に押出される。さらに、流路６１ｉと連接している抽出槽５２ｅと同構成を持つＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへと導かれる。また、抽出槽５２ｅ内の試料５７ｃを押出す力Ｖ１は、上方から供給された圧縮空気の圧力Ｖ１と抽出槽５２ｅが構成する伸縮性を有する第２プレート５１ｂの収縮力Ｗ１との和（Ｖ１＋Ｗ１）となる。

また、流路６１ｉを経由し試料５７ｃがＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃを膨らませ流入しようとする力Ｖ２は、ＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃを構成する第伸縮性を有する第２プレート５１ｂの径ΦＸが膨らむ反力Ｗ２に依存する。ここで、（Ｖ１＋Ｗ１）＞Ｗ２であるならば、論理的に試薬５７ｃはＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃにＶ２の力で風船状に膨らませながら流入する。さらに、ＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃを成す径ΦＸが等しければ、各々に流入する力が等しく、同じ膨らみ量となる。すなわち、ＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへ流入する量は均一となる。一般的に、ＰＣＲ増幅において２〜数μＬで増幅される。その結果、試料５７ｃは微小量が均等にＰＣＲ増幅槽５８ａ、５８ｂ、５８ｃへ分注される。

このようにして、すべての工程が終了する（図１５、ステップ１７３）。

次に、他のマイクロチップの構成を図１６で説明する。

図１６で示すマイクロチップ１５０は、前記で説明した廃液をマイクロチップ１５０自体の内部に蓄積する構成を示したものである。

Ｕ方向に向かって廃棄される廃液は、流路１６１ｈを経由して廃棄口１５６へ導かれる。さらに、前述した廃棄工程と同様にＭ方向へ廃棄電磁弁７、チューブ７ａを介し廃棄槽８へ吸引される。マイクロチップ１５０の流路１６１ｈは、流路方向に吸引部材１５１の面に開放されているため、流路１６１ｈを流れる廃液は、Ｕ方向に向きが変化するため吸着部材１５１に当接し吸引される。その結果、廃棄電磁弁７、チューブ７ａを介し気体のみが廃棄槽８へ吸引される。マイクロチップ１５０内に蓄積された廃液はマイクロチップ１５０が廃棄処理されると同時に廃棄されるため、廃棄工程が簡略化される。

以上説明したように、本発明の実施例では、連続した第１段階工程から第１２段階工程を動作させること、すなわち試料の攪拌動作を伴う吸着部材への吸着動作、不純物の除去動作、および微細な成分抽出に障害を及ぼす試料の圧縮空気供給による乾燥動作、さらに繰り返し行う攪拌動作を伴う微細な成分の溶出動作により、所望する微細な成分が高い効率で抽出できる。

さらに、本発明の本発明の実施例では、機構が簡易化・小型化される。

さらに、本発明の実施例では、微量な試料においても高効率で微細な成分の抽出が可能となり、高価な試料の消費が減少でき分析コストの低減となる。

さらに、本発明の実施例では、微量な試料においても高効率な微細な成分の抽出が可能となり、送液および抽出時間の短縮が可能となり、作業の大幅な効率向上をもたらす。

さらに、本発明の実施例では、目的以外の微細な成分の混入が少なく、次工程すなわち微細な成分の増幅工程や分析工程の信頼性を向上することが出来る。

さらに、本発明の実施例では、簡単な機構で、単一の容器から複数の微小な容器へ均一量の分注が可能で、装置の小型化・制御の簡略化を図ることができる。

上述のように、本発明のマイクロチップの試料処理装置は、
試料を充填するための試料容器と、
試料容器と流路を介して連接されかつ試料を順次移送充填して混合せしめる反応容器とを有し、
試料容器と反応容器との間で流路を介して試料の移送を繰り返し行うことにより、試料を攪拌し混合させることを特徴とする。

好ましくは、前記試料の移送は、前記試料中に含まれる微細な成分を抽出するために繰り返し行われる。

好ましくは、前記反応容器には、前記微細な成分を抽出するための吸着部材が設けられており、前記試料容器と前記反応容器との間で前記試料の移送を繰り返し行う間に、前記試料は前記吸着部材で繰り返し攪拌されて前記吸着部材に前記微細な成分が吸着する。

好ましくは、前記反応容器または前記流路内に媒体を供給することにより、前記反応容器または前記流路内の前記試料を廃棄する。

前記反応容器内には、例えば、不純物を含んだ前記試料の一部が残留する。

好ましくは、前記試料処理装置は、第２の試料を充填するための第２の試料容器をさらに有し、前記第２の試料を前記第２の流路を介して前記反応容器に移送することにより、前記不純物を外部に排出すると共に、前記反応容器内に蓄積された前記第２の試料を廃棄する。

好ましくは、少なくとも前記第２の流路及び前記反応容器に付着した前記第２の試料を揮発・乾燥させる。

例えば、前記第２の試料は有機溶剤であり、前記第２の試料の揮発・乾燥は圧縮空気を用いて行われる。

好ましくは、前記試料処理装置は、第３の試料を充填するための第３の試料容器をさらに有し、前記第３の試料を第３の流路を介して前記反応容器に移送することにより、前記吸着部材に吸着した微細な成分を前記第３の試料内に溶解させる。

好ましくは、前記試料処理装置は、抽出容器をさらに有し、前記第３の試料内に溶解した微細な成分は、前記抽出容器に移送される。

好ましくは、前記抽出容器に移送された前記第３の試料を前記反応容器に戻して、前記吸着部材と再度接触させることにより、前記微細な成分を前記第３の試料内に再度溶解させる。

好ましくは、前記微細な成分の前記抽出容器への移送動作と前記抽出容器に移送された前記第３の試料の前記反応容器への戻し動作を繰り返し行う。

好ましくは、前記試料処理装置は、所望の処理を行う増幅容器をさらに有し、前記抽出容器に移送された微細な成分は、前記増幅容器にさらに移送される。

好ましくは、前記増幅容器は複数個設けられかつ前記抽出容器から分岐した流路で連接され、外部より媒体を供給することにより、前記微細な成分は前記複数の増幅容器に分割して移送される。

好ましくは、前記試料処理装置は廃棄容器をさらに有し、前記廃棄された試料は前記廃棄容器に収容される。あるいは、前記廃棄された試料は前記マイクロチップ内に収容される。

例えば、前記反応容器、前記抽出容器及び前記増幅容器は、伸縮自在な風船状形態を成す。また、前記微細な成分は、例えば、遺伝子である。

以上、本発明の実施例に基づき本発明を具体的に説明したが、本発明は上述の実施例に制限されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で種々の変更を施すことができ、これらの変更例も本願に含まれることはいうまでもない。

上記本発明の実施例では、説明の便宜上、試料槽、反応槽、抽出槽等、その有する機能上の名称を用いて説明したが、これらの名称に限定されるものではない。例えば、連接された流路上に設けられた凹状および風船状の試料充填槽を用いても同様の結果が得られる。この風船状の試料充填槽は、例えば、米国特許04065263号公報に示されているようなものである。

また、本発明の実施例では、圧縮空気を用いて説明したが、圧力を媒介できる物質(例えば、気体、液体、ゲル)であれば、同様な効果を得ることが可能であり、本発明は圧縮空気に限定されるものではない。また、加圧媒体を加温すれば、より高い効率で対象を乾燥させることが可能である。

本願は、２００７年９月１０日出願の日本国特許出願２００７−２３３５７４を基礎とするものであり、同特許出願の開示内容は全て本願に組み込まれる。

Claims (3)

1. 試料を充填する試料容器と、
   前記試料に含まれる微細な成分を吸着する吸着部材を備える反応容器と、
   前記試料容器の下部と前記反応容器の下部とを連接する流路を備え、
   前記反応容器から前記流路への前記試料の移送方向に対して垂直方向における前記反応容器の断面積は、前記反応容器から前記流路への前記試料の移送方向に対して垂直方向における前記流路の断面積よりも大きく構成されたマイクロチップの試料処理装置であって、
   前記試料容器から前記反応容器に移送された前記試料は、試料移送前から前記反応容器内にある前記吸着部材と前記反応容器で混ざり、
   圧力媒体の作用により、前記試料が少なくとも前記流路を介して、前記試料容器と前記反応容器との間を繰り返し移送されることにより、試料を攪拌して吸着部材と混合させることを特徴とするマイクロチップの試料処理装置。
2. 前記反応容器内の前記試料に圧力を与えることにより、前記試料に含まれる微細な成分を吸着した前記吸着部材を前記反応容器に残しながら前記試料を廃棄することを特徴とする請求項１に記載のマイクロチップの試料処理装置。
3. 抽出容器と、
   前記反応容器と前記抽出容器を連接する第２の流路と、をさらに備え、
   第２の試料を前記反応容器に移送することにより、吸着部材に吸着した微細な成分を第２の試料内に溶解させ、
   前記反応容器から前記第２の流路への前記試料の移送方向に対して垂直方向における前記反応容器の断面積は、前記反応容器から前記第２の流路への前記試料の移送方向に対して垂直方向における第２の流路の断面積よりも大きく、
   圧力媒体の作用により、前記第２の試料が少なくとも前記第２の流路と前記反応容器との間を繰り返し移送されることにより、微細な成分を第２の試料内に溶解させることを特徴とする請求項２に記載のマイクロチップの試料処理装置。

Images