JP5999724B2 - Ｈｄａｃ阻害剤及びステロイドを含む医薬組成物及びその使用 - Google Patents

Description

本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤、その薬学的に許容される酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物、並びに他の処置に先んずる前処置としてがんを処置するための前記医薬組成物の使用に関する。前記ＨＤＡＣ阻害剤又はステロイドは、選択肢として、追加の処置の前に別々に投与することができる。

がんとは、細胞の異常な成長と定義することができ、増殖の抑制が効かず、プログラム細胞死が妨害されるという徴候を呈する。伝統的な見解によると、一連の遺伝的事象が悪性転換を引き起こし、他の細胞及び組織の統合性を尊重しない細胞クローンが生じ、ついには転移することがある。がんは身体のいずれの組織にも発生し、各身体領域に多くの異なる形態がありうる。

悪性リンパ腫とは、造血系のリンパ細胞の悪性転換と定義することができる。リンパ腫は侵攻性リンパ腫と緩慢性リンパ腫とに分類することができる。侵攻性リンパ腫は迅速な成長パターンを特徴とし、その臨床像は劇的でありうる。しかし、侵攻性リンパ腫は、化学治療、放射線治療及びモノクローナル抗体での処置によって完全治癒に至らせることができる。対照的に、緩慢性リンパ腫（例えば濾胞性リンパ腫）の成長パターンは緩慢で、通常、臨床症状はより控えめである。なお、緩慢性リンパ腫は、標準的なリンパ腫処置では完全治癒に至らせることができないが、同種幹細胞移植によって治癒する場合がありうる。濾胞性リンパ腫の生存期間中央値は８〜１０年である。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及びホジキンリンパ腫は侵攻性リンパ腫の群に属し、一方、濾胞性リンパ腫及び慢性リンパ性白血病は緩慢性リンパ腫である。骨髄腫は悪性転換した形質細胞からなる。これは緩慢性リンパ腫に関係しているが、通常、それ自体の独自体と考えられている。生存期間中央値は５〜７年で、予後は悲観的である。

びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌａｒｇｅ Ｂ−ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＤＬＢＣＬ）は、スウェーデンにおける発生率が約５００症例／年で、最も多い悪性リンパ腫の亜型である。ＤＬＢＣＬは侵攻性リンパ腫の群の６０〜７０％を占める。診断時の年齢中央値は７０歳であり、ＤＬＢＣＬは女性より男性にやや多い。ＤＬＢＣＬの標準的な一次処置はシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ， ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ， ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ａｎｄ ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ：ＣＨＯＰ）の組合せからなる化学治療である。近年、ＣＤ２０抗体リツキシマブの追加が国際的な臨床基準となり（Ｒ−ＣＨＯＰ）、無増悪、無再発、無病の全生存期間が向上している（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ，２００８；８（１０）：ｐｐ．１６５１−１６５８）。しかしなお、４５％もの患者がこの疾患で死亡しているため、ＤＬＢＣＬ患者における無増悪生存期間を増加させる臨床的な必要性が際立っている。

ＤＮＡ転写の制御は複雑で、これに関わる機序は部分的にしか知られていない。ヒストン脱アセチル化酵素（Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ：ＨＤＡＣ）は腫瘍抑制遺伝子の発現及びがんの開始と進行の双方に関与する転写因子の活動を制御することができる。ＨＤＡＣはヒストン脱アセチル化によるＤＮＡ又はクロマチンの構造成分の変質によって作用し、従って、ＤＮＡの配列を変化させたり分断したりせずに、その３次元構造に影響を及ぼす（後成的修飾）。ＨＤＡＣはクロマチン構造の調節によってＤＮＡ損傷化学治療に対する感受性を変化させる場合があることが示唆されてもいる。この線に沿って、いくつかのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験により、ＨＤＡＣ阻害剤が化学治療と協同可能であることが示唆されている。

近年、多数のＨＤＡＣ阻害剤が開発されている。これらは４つの種類、ヒドロキサム酸／カルバミン酸、環状ペプチド、脂肪族系酸及びベンズアミドに分類される。例えば、ボリノスタット及びロミデプシンは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫リンパ腫の処置用として米国食品医薬品局（ＦＤＡ）に承認され、目下、他の悪性腫瘍の処置において評価中である。

臨床的に最もよく知られている阻害剤は抗痙攣バルプロ酸であり、１９７０年代からてんかんの処置において利用されている。バルプロ酸は阻害剤の脂肪族系酸の種類に属する。

欧州特許第１４２７４０３号明細書は、照射処置と組み合わせてヒトのがんを処置するための薬剤の製造にバルプロ酸（ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ：ＶＰＡ）及びその薬学的に許容される塩を使用することを開示しており、この場合、ヒトのがんとは、乳がん、結腸がん、頭頸部がん、小細胞肺癌及び血液細胞のがんからなる群から選択される。欧州特許第１６０２３７１号明細書によると、ＶＰＡは、互いに著しく異なる機序を標的とする１つ又は複数の他の抗がん処置との組合せ治療において使用することも可能である。他の抗がん処置とは、化学治療試薬及び細胞傷害性試薬、分化誘導試薬（例えばレチノイン酸、ビタミンＤ、サイトカイン）、ホルモン治療、免疫学的な手法、並びに最近では、抗血管新生の手法及び遺伝子治療の開発などである。

米国特許出願公開第２００８／０１９４６９０号明細書は、がんを含む複数の疾患の処置のために、ＨＤＡＣ阻害剤、即ちベリノスタット（ＰＸＤ１０１）などの特定のカルバミン酸化合物を、シクロデキストリン、アルギニン又はメグルミンと組み合わせて使用することを開示しており、ＨＤＡＣ阻害剤の溶解性は、シクロデキストリン、アルギニン又はメグルミンのうち１つ又は複数を添加することによって高められる。

本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤をステロイドと一緒にした組合せによって、リンパ腫などのがんに罹患している患者の生存期間が向上するという独自の発見に関する。この化合物は薬学的に許容される化合物であり、少なくとも前処置としてさらなる処置に先んじて投与されることになる。物質は一緒に又は別々に投与され、薬学的に許容される化合物として投与される。

ステロイドを利用すると、ＨＤＡＣ阻害剤で処置したときの患者の反応を高め、傾眠などの副作用を低減することができることがわかった。

第１の態様において、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤、その酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその塩を含む医薬組成物に関する。

第２の態様において、本発明は、がんの処置のための上記で定義した組成物の使用に関する。

従って、かかる医薬組成物又はかかる組成物の使用を提供することによって、リンパ腫などのがんに罹患している人の生存率が向上し、更に、有効性を維持しながら低用量の化学治療を必要とする高齢者を処置することが初めて可能になる。

第３の態様において、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤、その酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその塩を含む、少なくとも１つの医薬組成物を含むキットに関する。

第４の態様において、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤、その酸若しくは塩又はその混合物を含む少なくとも１つの好適な容器又は好適な包装と、ステロイド又はその塩を含む少なくとも１つの好適な容器又は好適な包装とを含むキットに関する。

かかるキットを提供することによって、がんに罹患しているヒトが、病院での追加の処置に先んずる前処置をすることが容易になるであろう。

第５の態様において、本発明は、
ａ．ＷＳＵ−ＮＨＬ、Ｋａｒｐａｓ−４２２、ＵＬＡ、ＳＵ−ＤＨＬ−５及びＳＵ＿ＤＨＬ−８からなる群から選択される細胞株を用意するステップと、
ｂ．シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの組合せを添加するステップと、
ｃ．評価対象の物質を各細胞株に添加するステップと、
ｄ．細胞の生存率を評価するステップと、
を含む、細胞株のＣＨＯＰ感受性に対する物質の効果の評価方法に関する。

最後の態様における、ＨＤＡＣ阻害剤、その酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその塩を含む医薬合成を投与することによるがんに罹患しているヒトの処置方法。この医薬組成物は、化学治療、イミュノセラフィー（ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ）を含む１種又は複数種の他の処置と組み合わせて使用することができる。化学治療は、例えばＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ， ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ， ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ａｎｄ ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ））とすることができ、免疫治療はＣＤ２０抗体とすることができる。

ＨＤＡＣ及びステロイド
第１の態様において、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤、その酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその塩を含む医薬組成物に関する。ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒドロキサム酸／カルバミン酸、環状ペプチド、脂肪族系酸又はベンズアミド化合物、例えば、ボリノスタット、ロミデプシン、バルプロ酸、アスパノビノスタット（ａｓｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）、ベリノスタット、エンチノスタット及びレスミノスタットとすることができ、これらのうち一部には商標が使用されている。更に、ＨＤＡＣ阻害剤は、バルプロ酸、例えばバルプロ酸ナトリウム若しくはバルプロ酸マグネシウム又はその混合物とすることができる。例として、ボリノスタット（米国にて商標Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標）で上市）、ロミデプシン（米国にて商標Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標）で上市）、パノビノスタットが含まれる。バルプロ酸の１つの形態は、バルプロ酸ナトリウムと混合され、即ち、酸及び塩の混合物（バルプロ酸セミナトリウム）の形態で、種々の商標名、Ｄｅｐａｋｏｔｅ、Ｄｅｐａｋｏｔｅ ＥＲ、Ｄｅｐａｋｅｎｅ、Ｄｅｐａｃｏｎ、Ｄｅｐａｋｉｎｅ、Ｖａｌｐａｒｉｎ、Ｓｔａｖｚｏｒ及びＥｒｇｅｎｙｌで上市される場合である。バルプロ酸ナトリウムは、スウェーデンにおいてＡｂｓｅｎｏｒ、Ｄｅｐａｋｉｎｅ、Ｏｒｆｉｒｉｌとして上市されている。バルプロ酸は、スウェーデンにおいてＥｒｇｅｎｙｌ及びＤｅｐａｋｉｎｅとして上市されている。

本発明において使用されることになるステロイドは、グルココルチコイドの中から選択することができ、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン及びベタメタゾンを含む。１つの例では、ＨＤＡＣ阻害剤は、バルプロ酸であり、ステロイドはプレドニゾンである。

追加の成分
上記で定義した医薬組成物は、１種又は複数種の他の薬学的に許容される薬剤成分、例えば薬学的に許容される希釈剤、担体、添加剤及び緩衝剤を更に含むことができる。「薬学的に許容される」とは、活性成分の生物学的活性の効力を減少させない無毒性の化合物を意味する。かかる薬学的に許容される添加物、希釈剤、緩衝剤、担体又は添加剤は当該技術分野において周知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０）及びｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｋｉｂｂｅ，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい。

用語「緩衝剤」とは、ｐＨを安定させるための、酸−塩基の混合物を含有する水溶液を意味するものである。緩衝剤の例には、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去水、等張食塩水、リンガー液、エチルアルコール、ｐＨ緩衝溶液、ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ無水物、並びに医薬製剤に使用される他の無毒性の適合性物質がある。

用語「希釈剤」とは、医薬製剤において化合物を希釈するための水溶液又は非水溶液を意味するものである。希釈剤は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール又はエタノールのうち１つ又は複数とすることができる。

添加剤は、炭水化物、界面活性剤、ポリマー、脂質及びミネラルのうち１つ又は複数とすることができる。炭水化物の例には、ラクトース、スクロース、マンニトール及びシクロデキストリンが含まれ、これらは、例えば凍結乾燥を容易にするために組成物に添加される。ポリマーの例は、デンプン、セルロースエーテル、セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギネート、カラゲナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、加水分解度の異なるポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、及びポリビニルピロリドンであり、全て分子量が異なり、これらは、例えば粘度を制御するため、生体付着を実現するため、又は化学分解及びタンパク質分解から脂質を保護するために、組成物に添加される。脂質の例は、脂肪酸、リン脂質、モノ−、ジ−、及びトリグリセリド、セラミド、スフィンゴ脂質及び糖脂質、全てアシル鎖長が異なり、飽和であり、卵レシチン、ダイズレシチン、水素添加卵レシチン並びに水素添加ダイズレシチンであり、これらは、ポリマーと同じ理由で組成物に添加される。ミネラルの例は、タルク、酸化マグネシウム、酸化亜鉛及び酸化チタンであり、これらは、液体蓄積の低減又は好都合な顔料特性などの有益性を得るために、組成物に添加される。

本発明の医薬組成物に使用することができる好適な水性担体及び非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びこれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆材料の使用、分散系の場合は必要とされる粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。

これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの補助剤を含有することもできる。主題の化合物に対する微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実なものにすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含めることも望ましい場合がある。更に、注射可能な医薬形態の吸収を長時間化することは、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの、吸収を遅延させる作用剤を含めることによって実現することができる。

投与形態
本発明による医薬製剤は、局所的にも全身的にも投与することができる。投与経路には、局所、経眼、経鼻、プルモナー（ｐｕｌｍｏｎａｒ）、頬側、非経腸（静脈内、皮下及び筋肉内）、経口、経腟及び経直腸が含まれる。最も広く使用されるのは経口投与である。

医薬組成物は患者に薬学的有効量で投与されることになる。「薬学的有効量」とは、投与される状態に関して所望の効果を生むのに十分な用量を意味する。正確な用量は、投与方法、障害の性質及び重症度に依拠する。患者の総体的な健康、性別、年齢及び体重によって、異なる用量が必要となる場合がある。用量の投与は、個別の用量単位又は複数のより少ない用量単位の形態での単回投与と、特定の間隔を置いた、細分した用量の複数回投与の両方によって実施することができる。活性化合物又は活性物質は、投与形態によって、一緒に、又は別々に投与することもできる。

好適な製剤形態は、例えば顆粒剤、散剤、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル剤、微粒剤、発泡性の散剤若しくは顆粒剤、坐剤、アンプル形態の注射可能な溶液剤及び活性化合物の遅延性放出製剤でもあり、その製剤中で、添加剤、希釈剤又は担体が、通常上記の通り使用される。他の製剤は、当業者に周知の活性成分の種々の放出特性を生じさせるものとすることができる。その例には、持続放出、持続作用、徐放、時間放出若しくは持効性放出、制御放出、調節放出、又は継続的放出が含まれる。持続放出錠剤又はカプセル剤の利点は、同一の薬物の速放性製剤より少ない頻度で投与すればよい場合が多いこと、及び血流中に維持される薬物レベルがより安定していることである。今日では、ほとんどの時間放出薬物は、活性成分が不溶性の物質のマトリックス（いくつかのアクリル、キチンまでもなど様々であり、これらの物質は特許を取得していることが多い）中に埋め込まれるように製剤され、このため、溶解している薬物はマトリックスの孔を通過して出口を見つけなければならない。１つの側にレーザードリル孔、もう一方の側に多孔性膜のあるポリマーベースの錠剤に収められている薬物もある。胃酸が多孔性膜を突き抜け、それによって薬物をレーザードリル孔から外に押し出す。経時で薬物用量の全体が系内に放出され、一方ポリマーの容器はそのまま残るが、後に通常の消化によって排出されることになる。一部の製剤では、薬物はマトリックス中に溶解し、マトリックスが物理的に膨潤してゲルを形成し、薬物がゲルの外表面から外に出られるようにする。マイクロカプセル化は、複雑な溶解特性を生み出すためのより完全な技術と考えられてもいる。不活性コアの周囲に活性医薬成分を被覆し、それを不溶性の物質で層にしてマイクロスフェアを形成することによって、より堅実で再現可能な溶解速度を得ることが可能である。これらは皆、当業者に周知である。

製剤形態の１つの例は発泡性生成物である。
発泡とは、二酸化炭素を生成する酸と塩基の反応（水中）である。この反応において使用される酸の例は、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、酸シトレート（ａｃｉｄ ｃｉｔｒａｔｅ）、コハク酸及びこれらの混合物である。クエン酸が最も広く使用され、生成物に柑橘類様の風味を付与する。発泡反応において使用される塩基の例は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸マグネシウム、ナトリウムグリコカーボネート（ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｃａｒｂｏｎａｔｅ）、カルボキシリシン及びこれらの混合物である。炭酸水素ナトリウムが発泡性の処方においてきわめてよく使用される。

化合物は発泡性生成物中に一緒に混合しても、或いは互いに分離してもよい。１つの例は、２つの活性物質が互いに別々にカプセル化され、得られた発泡性生成物が、２つの活性物質／成分について異なる放出特性を生じる場合である。

エフェヴァヴェセント（ｅｆｆｅｖｅｒｖｅｓｃｅｎｔ）生成物は、散剤形態でも錠剤としてもよい。
生成物が錠剤の場合、以下を含む群から選択される少なくとも１つの添加物を含めることができる。結合剤、滑沢剤、乳化剤、充填剤、界面活性剤（例えばポリソルベート８０及びラウリル硫酸ナトリウム）、香味剤、香気剤（風味を付与する成分の例）（例えばオレンジ、レモン、ベルガモン（ｂｅｒｇａｍｏｎ）、グレープフルーツ、バナナ、アプリコット及びイチゴ）及び天然又は合成のものを含む着色剤、ビタミン、甘味料（風味を付与する成分の例）（アセスルファムカリウム、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、ステビア（ｓｔｅｖｉａ）及びスルカロース（ｓｕｒｃａｌｏｓｅ））、栄養添加物（例えば酸化防止剤、ペプチド）、並びにこれらの混合物。

発泡性組成物に、風味、色又は抗酸化特性を付与する物質は、ブルーベリー、クランベリー、ブドウ及び茶の葉など、天然源由来の植物ポリフェノールとすることができる。

更に、錠剤は、組成物中に使用するのに好適な、水分散性、水溶性、水不溶性の滑沢剤及びこれらの組合せを含む種々の滑沢剤を含有することができる。有用な水溶性の滑沢剤の例には、安息香酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、Ｌ−ロイシン、アジピン酸及びこれらの組合せが含まれる。

錠剤には、例えば、ステアリン酸塩（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸亜鉛）、油（例えば、ミネラル油、水素添加及び部分水素添加植物油、及び綿実油）及びこれらの組合せを含む、水不溶性の滑沢剤を含めることもできる。発砲剤にはビタミン及びミネラルを含めることもできる。

発泡性生成物の生成のための製造プロセスは、当業者に周知の製剤中及び製造中に慎重に取り組まれる必要のあるいくつかの重大なステップを伴う。発泡性生成物の生成は、きわめて湿度の低い場所で実施されなければならない。発泡性生成物を生成する最良の方法は、湿度が厳密に制御されている環境で行うことである。

「打錠」又は「圧縮」として知られる錠剤の製造プロセスには、混合、造粒及び打錠のように、当業者に周知の粉末の医薬添加剤の添加が必要である。錠剤の製造において、造粒後に滑沢剤を添加することは常識であり、最も広く使用されている物質はステアリン酸マグネシウムである。発泡生成中に、ステアリン酸マグネシウムなどの物質は、水に不溶性であるために問題を発生させる恐れがあり、そうなると、錠剤が溶解した後、水の表面にフィルムが形成される。この問題を克服する方策は、水溶性の他の滑沢剤、例えば噴霧乾燥したＬ−ロイシンとポリエチレングリコールとの混合物を使用することである。或いは、滑沢剤を一切使用しなければ、ブレンドするステップを回避するという利点があるが、製造には特別な要求であるという不利点がある。

量及び用量
ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害剤が使用されることになる場合に依拠する種々の量で投与されることになろう。これは当業者に周知である。同様のことがステロイドに適用される。活性成分の投与は、一緒にでも、別々にでも可能である。しかし、以下に、利用することが可能な量のいくつかの例を挙げる。

投与の例は、１日当たり２０〜２００ｍｇ、例えば５０〜２００、１００〜１５０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０又は２００ｍｇの量でのプレドニゾン又はプレドニゾロンの投与を含む。ベタメタゾンは、１日当たり４〜３２ｍｇ、例えば１０〜２５、１０〜２０、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１又は３２ｍｇの量で投与することができる。デキサメタゾンは、１日当たり１０〜８０ｍｇ、例えば２０〜７０、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０ｍｇの量で投与することができる。プレドニゾンは、単回投与又は必要な場合複数回投与として投与することができる。

バルプロ酸などのＨＤＡＣ阻害剤は、１日当たり約５００ｍｇ〜約１５０００ｍｇ、例えば１日当たり約４０００ｍｇ〜約１５０００ｍｇ、例えば１日当たり約４００ｍｇ〜約３０００ｍｇの範囲で、経口投与又は静脈内投与することができる。例えば、経口投与量は、１日当たり約８００、約１６００、約２４００、約３０００、約６０００、約９０００、約１５０００ｍｇとすることができる。１日当たりの合計量は単回投与で投与することができ、又は複数回投与で、例えば１日につき２回、３回、４回又は５回投与することができることが理解される。

ベリノスタットなどのＨＤＡＣ阻害剤は、１日当たり約６ｍｇ〜約３０００ｍｇ、例えば１日当たり約４０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、例えば１日当たり約４００ｍｇ〜約３０００ｍｇの範囲で経口投与することができる。例えば、経口投与量は、１日当たり約４、約４０、約４００、約８００、約１６００、約２４００、約２８００又は約３０００ｍｇとすることができる。１日当たりの合計量は単回投与で投与することができ、又は複数回投与で、例えば１日につき２回、３回又は４回投与することができることが理解される。

ＨＤＡＣ阻害剤又はその薬学的に許容される塩、ステロイド又はその薬学的に許容される塩の投与の１つの例は、これらを単独で、又は組み合わせて、少なくとも１日１回を例えば午前中に、約５〜８回を午前に投与するものとすることができる。しかし、これらの物質のうち何れかを、毎日１回、２回、３回、４回又は５回まですらも投与することができる。投与の例には、ＨＤＡＣ阻害剤の投与を１日３回及びプレドニゾンを１日１回というものが含まれる。通常、ステロイドは、製剤の特性及び活性薬の放出特性によって、１日１〜２回投与される。ＨＤＡＣ阻害剤及びステロイドの投与は、前記免疫及び／又は化学治療の少なくとも２４〜７２時間前、例えば免疫及び／又は化学治療の３０〜６０時間前、４０〜５０時間前又は４８時間前とすることができ、ステロイド及びＨＤＡＣ阻害剤は、同時又は順次に投与することができる。なお、投与は、化学治療及び又は免疫治療での処置の前にすることができるが、処置中又は処置後にも投与することができる。しかし、処置前の投与は必須である。

キット
１つの態様において、本発明は、好適な容器又は包装に入れた上記の医薬組成物を含むキットに関する。

別の態様において、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤又はその薬学的に許容される酸若しくは塩又はその混合物、及びステロイド又はその薬学的に許容される塩若しくはその混合物を含むキットに関する。

キットは、ＨＤＡＣ阻害剤及びステロイドの個別の容器を含有することができる。キットはＣＤ２０に結合する抗体、モノクローナル抗体又はその機能性断片を更に含むことができる。キットは、使用説明書、例えば化合物又は組成物をいつどのように投与するかについて書面にした説明書も含有することができる。

例えば、キットは、複数の錠剤又は粒剤を含有する１つ又は複数のブリスターを含有することができる。活性化合物は、錠剤又は粒剤中に混合する、又は異なる錠剤又は粒剤中に分離する、更に、錠剤又は粒剤中に、被覆されるなどの遮断物によって分離することができる。化合物又は医薬組成物は、キット中の同一の又は別々の異なるパウチの中に保管することもできる。

キットは、例えば、適切な希釈用溶液（例えば生理的食塩水、グルコース溶液など）、試薬（例えばｐＨ調整用）、及びアセンブリー及び使用（例えば製剤の調製及びそれに続く投与での）のための器具（例えばバッグ、チューブ、シリンジ、針、移送セット）を含む、追加のパーツを含むことができる。

書面にした説明書には、１種又は複数種の化合物の投与の仕方とともに、製剤（例えばその中のＨＤＡＣｉ）の処置が好適な適応症のリストも含めることができる。

処置及び使用の方法
本発明は処置方法にも関し、上記で定義した組成物又は化合物が、ヒトのがんの処置、例えば肉腫、悪性黒色腫、皮膚がん、エストロゲン受容体依存性及び非依存性乳がん、卵巣がん、前立腺がん、腎がん、結腸及び結腸直腸がん、膵がん、頭頸部がん、小細胞及び非小細胞肺癌、及び血液細胞のがんからなる群からの疾患の処置に利用される。例として、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫及びホジキンリンパ腫からなる群から選択される疾患の処置が含まれる。

用語「処置」は、状態を処置する文脈で使用され、所望の治療効果がいくらか達成されるヒトの処置及び治療に、一般的に関係がある。

処置という用語には、２種以上の処置が、例えば同時に又は順次に組み合わされる、他の種類の処置又は治療も含まれる。例えばステロイド及びＨＤＡＣ阻害剤を同時に又は順次に投与することができる。例えば、本明細書に記載する化合物は、単独で、又は組み合わせて、且つ例えば細胞傷害性薬などの他の薬剤と一緒に使用することができる。例として、化学治療（開示する化合物又はＣＨＯＰなどの活性薬の投与）が含まれる。ＣＨＯＰはシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンの組合せであり、７５０＋／−１０％ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミド、５０＋／−１０％ｍｇ／ｍ^２のドキソルビシン、１．４＋／−１０％ｍｇ／ｍ^２のビンクリスチン及び５０＋／−１０％ｍｇ／ｍ^２のプレドニゾンという量で投与することができる。免疫治療は、抗体、モノクローナル抗体又はその機能性断片、例えばリツキシマブ、オファツムマブ、ＧＡ１０１、トシツムマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｕｍａｂ）、イブリツムマブ（ｉｂｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、オクラルズマブ（ｏｃｒａｌｕｚｕｍａｂ）、ベルツズマブ、エプラツズマブ、ＦＴＢＡ０５、ＡＭＥ−１３３Ｖ又はＲ６０３を含む。上記の抗体は全て、Ｂ細胞に存在するＣＤ２０に結合する。抗体は、３７５＋／−１０％ｍｇ／ｍ^２の量で投与することができる。他の例は、プロドラッグ、手術、照射及び遺伝子治療である。

抗体は本発明の方法において治療薬として含まれ、その機能性断片を含む。本明細書で使用する「抗体」とは、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、キメラ、一本鎖及びヒト化抗体、並びにＦａｂフラグメントを含み、Ｆａｂ又は他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生成物を含む。本発明において使用する抗体という用語は、目的のタンパク質のエピトープの決定基に結合することができる、無傷の分子及びその断片、例えばＦａｂ及びＦ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２、Ｆｖ及びＳＣＡフラグメントを含むことが意図されている。一本鎖抗体（「ＳＣＡ」）とは、好適な可動性ポリペプチドリンカーで連結したＬ鎖の可変領域及びＨ鎖の可変領域を含有する、遺伝子操作した一本鎖分子である。

本発明はヒトに関係する。従って、方法はヒトの治療に適用される。

次の実施例は本発明を説明することを意図するものであるが、いかなる流儀、形状、形態でも、明示的にも黙示的にも本発明を限定することを意図するものではない。

生物学的評価
本発明の発明者らは、ＣＤ２０抗体−ＣＨＯＰ誘導細胞死に対する感受性の異なる５種のＤＬＢＣＬ細胞株に基づいて（Ａｇｅｂｅｒｇ、Ｒｙｄｓｔｒｏｅｍ、Ｌｉｎｄｅｎ、Ｌｉｎｄｅｒｏｔｈ、Ｊｅｒｋｅｍａｎ ａｎｄ Ｄｒｏｔｔ；Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｍａｙ １；３１７（８）：１１７９−９１）、ＣＤ２０抗体−ＣＨＯＰ抵抗性（ＣＤ２０抗体をリツキシマブとして）の細胞株ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを樹立した。このモデルにおいて、薬理学的な濃度のバルプロ酸で処置すると、ＣＨＯＰ仲介の細胞死に対して高い感作効果を示す。これは、ウエスタンブロット解析で測定したヒストンＨ３のアセチル化における増加と相関している。また、ＤＬＢＣＬ細胞株にバルプロ酸とプレドニゾロンとの組合せで４８時間の前処置をすると、ＣＨＯＰ誘導細胞死に対する細胞株の感受性を更に増加させた。加えて、ヒドロキサム酸／カルバミン酸ＨＤＡＣ阻害剤トリコスタチンＡ及びベリノスタットでの前処置でも、ＤＬＢＣＬ細胞株をＣＨＯＰ誘導細胞死に対して感作し、効果はプレドニゾロンの添加によって増強された。更に、ステロイドのデキサメタゾンも、バルプロ酸単独で誘導するＣＨＯＰ誘導細胞死に対する感作効果を増強した。まとめると、この結果は、ＨＤＡＣ阻害剤とステロイドとの組合せが、Ｂ細胞リンパ腫細胞株をＣＨＯＰ誘導細胞死に対して感作することを示している。これは、ＨＤＡＣ阻害剤及びステロイドの組合せ治療が、リンパ腫処置における化学治療又は免疫化学治療に対する反応を高めるであろうということを示す。

実施例１
バルプロ酸（ＶＰＡ）はＤＬＢＣＬ細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。
ＤＬＢＣＬ細胞株ＷＳＵ−ＮＨＬ、Ｋａｒｐａｓ−４２２、ＵＬＡ、ＳＵ−ＤＨＬ−５及びＳＵ−ＤＨＬ−８細胞を、３種の異なる濃度（それぞれ０．１ｍＭ、２ｍＭ及び１０ｍＭ）のバルプロ酸（ＶＰＡ）単独で、又はＣＨＯＰと組み合わせて７２時間処置した。全ての実施例において使用するＣＨＯＰレジメンは、１０μＭのシクロホスファミド一水和物、２０ｎＭのドキソルビシン塩酸塩、２ｎＭの硫酸ビンクリスチン及び２０μｇ／ｍｌのプレドニゾロンからなる（Ａｇｅｂｅｒｇ、Ｒｙｄｓｔｒｏｅｍ、Ｌｉｎｄｅｎ、Ｌｉｎｄｅｒｏｔｈ、Ｊｅｒｋｅｍａｎ ａｎｄ Ｄｒｏｔｔ；Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｍａｙ １；３１７（８）：１１７９−９１）。

細胞生存率を７２時間後にトリパンブルー排除によって評価し、０日目（播種）の未処置の対照細胞を標準とした。データを平均±ＳＥＭ、ｎ＝３で示す。

表１に示す通り、バルプロ酸を添加すると、全てのリンパ腫細胞株においてＣＨＯＰ処置に反応した細胞死が増加し、バルプロ酸とＣＨＯＰとの組合せはリンパ腫患者に対して有益である可能性があることを示している。

実施例２
生理学的に適切な濃度のバルプロ酸（ＶＰＡ）はＤＬＢＣＬ細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。
ＤＬＢＣＬ細胞株ＳＵ−ＤＨＬ−８（表２Ａ）及びＷＳＵ−ＮＨＬ（表２Ｂ）を０．５ｍＭ又は１．５ｍＭのＶＰＡ単独で、又はＣＨＯＰと組み合わせて７２時間処置した。０．５ｍＭのＶＰＡ濃度を選択した理由は、これがてんかんの患者における継続的ＶＰＡ処置中の正常な血清濃度であるからである。１．５ｍＭのＶＰＡ濃度を選択した理由は、これが発明者によって認められたコンパッショネートユースでの５日間のＶＰＡ処置中の最大耐血清濃度であるからである。

細胞生存率を０時間後（１日目）、２４時間後（２日目）、４８時間後（３日目）及び７２時間後（４日目）にそれぞれトリパンブルー排除によって評価し、未処置の対照細胞を標準とした。データを平均、ｎ＝３で示す。

生存率に対する処置効果を、ＣＨＯＰ処置単独での効果に対して試験した。有意差を、スチューデントの対応のないｔ検定を使用して評価した。全ての検定を両側とした。効果は、Ｐ＜０．０５（^＊）及びＰ＜０．０１（^＊＊）で統計学的に有意であると考えられるものであった。

生存率（１日目の対照細胞に対する％）を表２Ａ（ＳＵ−ＤＨＬ−８）及び表２Ｂ（ＷＳＵ−ＮＨＬ、ｎ＝３）にそれぞれ示す。

表２に示す通り、生理学的に適切な濃度のＶＰＡは、リンパ腫細胞株においてＣＨＯＰ処置に反応した細胞死を増加させ、生理学的に適切な用量のバルプロ酸とＣＨＯＰとの組合せは、リンパ腫患者に対して有益である可能性があることを示している。

実施例３
バルプロ酸（ＶＰＡ）はリツキシマブ仲介の細胞傷害性に干渉しない。
ＣＤ２０抗体のリツキシマブによって誘導される抗体依存性細胞障害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ−ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＡＤＣＣ）に対するＶＰＡの影響を評価する為。
ＷＳＵ−ＮＨＬ細胞（表３Ａ及び３Ｂ）又はＳＵ−ＤＨＬ−８細胞（表３Ｃ及び３Ｄ）をＰＫＨ２６で標識し、未処置のまま、又は１．５ｍＭのＶＰＡで２４時間インキュベートしてから、０、０、１、又は１０μｇ／ｍｌでリツキシマブを添加した。

ＮＫ細胞をエフェクターとして標的細胞に１０：１の比で添加し、次いで、細胞を更に２０時間インキュベートした。死滅標的細胞を、ＰＫＨ２６及び７−ＡＡＤに二重陽性であるとして特定し、アッセイの読み取り値として使用した。示したデータは死滅細胞のパーセンテージを表し、２種の別個の実験を表すものである。日付はＶＰＡがリツキシマブによって誘導されるＡＤＣＣに悪影響を及ぼさず、リンパ腫の患者においてＣＤ２０抗体と一緒にＶＰＡを使用しても問題がないことを示している。

実施例４：バルプロ酸（ＶＰＡ）単独での前処置は、ＤＬＢＣＬ細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。ＶＰＡとプレドニゾロンとの組合せでの前処置は、ＶＰＡ単独での前処置と比較して、細胞死を有意に増加させる。
ＣＨＯＰに先んじたＶＰＡでの前処置は、ＤＮＡ損傷の誘導によって、ＣＨＯＰ治療に対する反応性を理論的に高めることができる。しかしＶＰＡ処置によって、患者に傾眠などの症状が出る可能性がある。このような症状は、プレドニゾロンとの同時処置によって抑制できる可能性がある。ＣＨＯＰに先んじたＶＰＡ及びプレドニゾロンでの前処置の効果を試験するために、ＷＳＵ−ＮＨＬ細胞を、下に例示した通りのＶＰＡ、プレドニゾロン（Ｐ、２０μｇ／ｍｌ））及びＣＨＯＰの種々の組合せで処置した。生存率を、示した時点で（ｎ＝３）トリパンブルー排除によって評価した。有意差を、スチューデントの対応のないｔ検定を使用して評価した。全ての検定を両側とした。効果は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１で、統計学的に有意と考えられるものであった。

表４に示す通り、ＶＰＡ単独での前処置は、リンパ腫細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。更に、プレドニゾロンを添加すると、ＶＰＡ単独での前処置と比較して、ＣＨＯＰ誘導細胞死を更に有意に増加させる。これらのデータは、ＣＨＯＰ治療に先んじたＶＰＡとプレドニゾロンとの組合せでの前処置が、リンパ腫患者にとって有益となるであろうことを示している。

実施例５：ＶＰＡとステロイドのデキサメタゾンとの組合せでの前処置は、ＶＰＡ単独での前処置と比較して、ＣＨＯＰ誘導細胞死を有意に増加させる。
プレドニゾロン以外のステロイドがＶＰＡ及びＣＨＯＰによって誘導される細胞死に対して感作しうるかどうかを試験するために、ＷＳＵ−ＮＨＬ細胞を、下に例示した通りのＶＰＡ、ステロイドのデキサメタゾン（Ｄ、１μＭ）及びＣＨＯＰの種々の組合せで処置した。生存率を、示した時点で（ｎ＝３）トリパンブルー排除によって評価した。有意差を、スチューデントの対応のないｔ検定を使用して評価した。全ての検定を両側とした。効果は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１で、統計学的に有意と考えられるものであった。

表５に示す通り、デキサメタゾンでのプレトリーメント（ｐｒｅｔｒｅａｍｅｎｔ）は、ＶＰＡ単独での前処置と比較して、ＶＰＡ−ＣＨＯＰ誘導細胞死を更に増加させる。これらのデータは、ＣＨＯＰ治療に先んじたＶＰＡとデキサメタゾンなどの他のステロイドとの組合せでの前処置が、リンパ腫患者にとって有益となるであろうことを示している。

実施例６：ＨＤＡＣ阻害剤トリコスタチン（Ｔｒｉｃｏｓｔａｔｉｎ）Ａ又はベリノスタットでの前処置は、ＤＬＢＣＬ細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。トリコスタチンＡとプレドニゾロンとの組合せでの前処置は、トリコスタチンＡ又はベリノスタット単独での前処置と比較して、ＣＨＯＰ誘導細胞死を有意に増加させる。
ＨＤＡＣ阻害剤の他の亜群からのＨＤＡＣ阻害剤での前処置もＣＨＯＰ誘導細胞死に対する感作効果があったかどうかを試験するために、ＷＳＵ−ＮＨＬ細胞を、下に例示した通りのヒドロキサム／カルバミン酸ＨＤＡＣ阻害剤トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）及びベリノスタット、プレドニゾロン（Ｐ、２０μｇ／ｍｌ）及びＣＨＯＰの種々の組合せで処置した。生存率を、示した時点で（ｎ＝３）トリパンブルー排除によって評価した。有意差を、スチューデントの対応のないｔ検定を使用して評価した。全ての検定を両側とした。効果は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１で、統計学的に有意と考えられるものであった。

表６に示す通り、トリコスタチンＡ単独での前処置は、リンパ腫細胞株をＣＨＯＰ処置に対して感作する。更に、プレドニゾロンを添加すると、ＶＰＡ単独での前処置と比較して、ＣＨＯＰ誘導細胞死を有意に増加させる。これらのデータは、ヒドロキサム／カルバミン酸群からのＨＤＡＣ阻害剤も、ＣＨＯＰ治療に先んじてプレドニゾロンと一緒に組み合わせて前処置をすると、リンパ腫患者にとって有益となるであろうことを示している。

ベリノスタットは類似の結果を示した（データは示さず）。

Claims (6)

1. シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソンの組合せ（ＣＨＯＰ）、若しくは、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニソン、及びＣＤ２０抗体リツキシマブの組合せ（Ｒ−ＣＨＯＰ）を用いたびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療の前治療に使用する医薬組成物が、
   ａ．バルプロ酸又はバルプロ酸セミナトリウム、バルプロ酸ナトリウム若しくはバルプロ酸マグネシウムからなる群から選択されたヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、その薬学的に許容される酸若しくは塩又はその混合物、及び
   ｂ．プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン又はベタメタゾンからなる群から選択されたステロイド又はその薬学的に許容される塩
   を含むことを特徴とする医薬組成物。
2. 請求項１に記載の医薬組成物において、前記ＨＤＡＣ阻害剤がバルプロ酸であり、前記ステロイドがプレドニゾンであることを特徴とする医薬組成物。
3. 請求項１又は２に記載の組成物において、前記物質ａ）及びｂ）が粒剤、散剤、錠剤、被覆錠剤、マイクロカプセル剤、微粒剤又は発泡性の各形態であることを特徴とする組成物。
4. 請求項１又は２に記載の組成物において、前記物質ａ）及びｂ）が器具に含まれており、当該器具が、バイアル、アンプル、パウチ又は注入バッグからなる群から選択されることを特徴とする組成物。
5. 請求項１又は２に記載の組成物において、前記物質ａ）及びｂ）がキットに含まれており、当該物質ａ）及びｂ）が個別の容器及び／又はパッケージに、使用説明書と共に含まれていることを特徴とする組成物。
6. 請求項５に記載の組成物において、前記キットがＣＤ２０に結合する抗体、モノクローナル抗体又はその機能性断片を更に含むことを特徴とする組成物。