JP5778161B2 - 置換シクロアルケン誘導体の結晶 - Google Patents
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Description
本発明は、エンドトキシンにより引き起こされる、単球、マクロファージ、血管内皮細胞などの種々の細胞における細胞内シグナル伝達あるいは細胞活性化およびそれらに起因するＴＮＦ−αなどの炎症性メディエーターの産生を抑制する作用を有し、敗血症（敗血症性ショック、播種性血管内凝固症候群、多臓器不全など）など種々の疾患の予防及び／又は治療薬として有用な置換シクロアルケン誘導体の結晶に関する。
細菌の膜構成成分であるエンドトキシン（リポポリサッカライド：ＬＰＳ）は、単球、マクロファージ、血管内皮細胞などの細胞に作用し、ＴＮＦ−αなどの様々な炎症性メディエーターの過剰産生等を引き起こし、全身性の炎症反応に加え、急激な血圧低下、血液凝固異常、循環障害などを誘発し、敗血症を呈する（例えば、非特許文献２参照）。リボポリサッカライドおよびその部分構造に相当するリビドＡは、ＣＤ１４との結合を経て、細胞表面の機能的受容体であるＴＬＲ４（Ｔｏｌｌ−１ｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ４）を介して細胞内シグナル伝達を活性化する（例えば、非特許文献３参照）ことにより、炎症性メディエーター産生に代表される多様な細胞応答を開始させる。このため、エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達あるいは細胞活性化およびそれらに起因するＴＮＦ−αなどの炎症性メディエーターの過剰産生に代表される種々の細胞応答を抑制する物質が、敗血症の有効な予防および治療薬となり得ると考えられる（例えば、非特許文献３、非特許文献４、特許文献１、特許文献２参照）。
エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達あるいは細胞活性化およびそれに起因するＴＮＦ−αなどの炎症性メディエーターの過剰産生などの種々の細胞応答は、上述の敗血症に加え、虚血性脳障害、動脈硬化、冠動脈形成術後の予後不良、心不全、糖尿病、糖尿病性合併症、関節炎、骨粗紫症、骨減少症、自己免疫疾患、臓器移植後の組織障害および拒絶反応、細菌感染症、ウイルス感染症、胃炎、膵炎、腎炎、肺炎、肝炎、白血病など種々の疾患の発症や進展をもたらす（例えば、非特許文献５、特許文献３）。
本発明者らは、かかる問題を解決するために鋭意研究を進めた結果、置換シクロアルケン誘導体に目的の効果をもたらす化合物群が存在することを見出した（特許文献４）。しかし、置換シクロアルケン誘導体（フリー体）は、吸湿性を有するアモルファスであることから、薬理上許容される塩について検討したが、保存及び取扱安定性を有する結晶を見出すことは容易ではなく、工業化は極めて困難であった。
Iqbal et al．，Expert Opin．Emerging Drugs、第7巻、第111項、2002年
Hawkins et al．，Current Topics in Medicinal Chemistry、第4巻、第1147頁、2004年
Beutler、Nature、第430巻、第257−263頁、2004年
Kakutani et al．，Inflammation Research、第48巻、第461項、1999年
Donald N．Cook et al．，Nature Immunology、第5巻、第975−979頁、2004年
本発明の課題は、保存及び取扱安定性に優れた置換シクロアルケン誘導体の結晶を提供することにある。
すなわち、本発明は、
（１）下記式（１）
（１）下記式（１）
で表わされる、ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３ −ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド、
（２）下記式（２）
（２）下記式（２）
で表わされる、ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド、
（３）上記（１）に記載の化合物の結晶、
（４）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、図１に示すＸ線回折図を有する上記（３）に記載の結晶、
（５）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝３．８２、７．６４、１１．４８、１９．０６、２３．０８、２５．２２、及び２６．９８（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、上記（３）に記載の結晶、
（６）上記（２）に記載の化合物の結晶、
（７）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、図２に示すＸ線回折図を有する上記（６）に記載の結晶、
（８）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝７．６６、１５．３６、１９．０８、２３．７６、２５．２６、及び２７．０４（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、上記（６）に記載の結晶、
（９）上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物、
（１０）エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達又は細胞活性化に起因する炎症性メディエーターの産生を抑制するために用いられる、上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物、
（１１）上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する、敗血症の予防及び／又は治療薬、
（１２）上記（１）乃至（８）のいずれか１に記載の結晶を含有する医薬組成物、
（１３）エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−［Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラートの溶液又は懸濁液にポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物の酢酸エチル溶液を滴下することを特徴とする、上記（１）に記載の化合物の製造方法、又は、
（１４）ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物の酢酸エチル溶液に、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−［Ｎ−（２−ブロモ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラートを滴下することを特徴とする、上記（２）に記載の化合物の製造方法である。
（３）上記（１）に記載の化合物の結晶、
（４）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、図１に示すＸ線回折図を有する上記（３）に記載の結晶、
（５）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝３．８２、７．６４、１１．４８、１９．０６、２３．０８、２５．２２、及び２６．９８（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、上記（３）に記載の結晶、
（６）上記（２）に記載の化合物の結晶、
（７）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、図２に示すＸ線回折図を有する上記（６）に記載の結晶、
（８）銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝７．６６、１５．３６、１９．０８、２３．７６、２５．２６、及び２７．０４（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、上記（６）に記載の結晶、
（９）上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物、
（１０）エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達又は細胞活性化に起因する炎症性メディエーターの産生を抑制するために用いられる、上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物、
（１１）上記（１）又は（２）に記載の化合物を有効成分として含有する、敗血症の予防及び／又は治療薬、
（１２）上記（１）乃至（８）のいずれか１に記載の結晶を含有する医薬組成物、
（１３）エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−［Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラートの溶液又は懸濁液にポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物の酢酸エチル溶液を滴下することを特徴とする、上記（１）に記載の化合物の製造方法、又は、
（１４）ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物の酢酸エチル溶液に、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−［Ｎ−（２−ブロモ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラートを滴下することを特徴とする、上記（２）に記載の化合物の製造方法である。
本発明によれば、保存及び取扱安定性に優れた置換シクロアルケン誘導体の結晶を提供することが可能となる。本発明の置換シクロアルケン誘導体のカリウム塩（結晶）は、エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達又は細胞活性化に起因する炎症性メディエーターの産生を抑制し、敗血症の予防及び／又は治療薬として有効である。
本発明は、下記式（１）
で表わされる、ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド（以下、本明細書において化合物（１）と記載する場合がある。）、又は、
下記式（２）
下記式（２）
で表わされる、ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド（以下、本明細書において化合物（２）と記載する場合がある。）の結晶に関する。ここで、結晶とは、その内部構造が三次元的に構成原子（又はその集団）の規則正しい繰り返しからなる固体を示し、そのような規則正しい内部構造を有さないアモルファス状の固体とは区別される。ある固体が結晶であるか否かは、結晶学的に周知の方法（例えば、粉末Ｘ線回折測定、示差走査熱量分析等）で調べることができる。例えば、ある固体について銅のＫα線の照射で得られるＸ線による粉末Ｘ線回折測定を行い、そのＸ線回折図において明確なピークが観測される場合には、その固体は結晶であると決定され、明確なピークが観測されない場合にはその固体はアモルファス状であると決定される。当該ピークを読み取ることはできるがピークが明確でない（例えば、ブロードである）場合には、その固体は結晶化度の低い結晶であると決定され、そのような結晶化度の低い結晶も本発明の結晶に包含される。
同じ化合物の結晶であっても、結晶化の条件によって、複数の異なる内部構造及び物理化学的性質を有する結晶（結晶多形）が生成することがあるが、本発明の結晶は、これら結晶多形のいずれであってもよく、２以上の結晶多形の混合物であってもよい。
本発明の結晶は、大気中に放置しておくことにより、水分を吸収し、付着水が付く場合や通常の大気条件下において２５乃至１５０℃に加熱すること等により、水和物を形成する場合がある。さらには、本発明の結晶は付着残留溶媒または溶媒和物中に、結晶化時の溶媒を含む場合もある。
本明細書において、本発明の結晶を粉末Ｘ線回折のデータに基づき表すことがあるが、粉末Ｘ線回折は、通常、当該分野において用いられる手法により測定・解析を行えばよく、例えば、実施例に記載の方法により行うことができる。また、一般に、水和物や脱水物は結晶水の着脱によって、その格子定数が変化し、粉末Ｘ線回折における回折角（２θ）に変化を与えることがある。また、ピークの強度は、結晶の成長面等の違い（晶癖）等によって変化することもある。従って、本発明の結晶を粉末Ｘ線回折のデータに基づき表した場合、粉末Ｘ線回折におけるピークの回折角およびＸ線回折図が一致する結晶のほか、それらから得られる水和物および脱水物も本発明の範囲に包含される。
銅のＫα線を使用した粉末回折測定においては、通常、銅のＫα線（Ｋα１線及びＫα２線が分離されていないもの）が試料に照射される。Ｘ線回折図は、Ｋα線に由来する回折を解析して得ることができ、また、Ｋα線に由来する回折から取り出されたＫα１線に由来する回折のみを解析して得ることもできる。本発明において、Ｋα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折図は、Ｋα線に由来する回折ピークを解析して得られるＸ線回折図、及び、Ｋα１線に由来する回折を解析して得られるＸ線回折図を包含し、好適には、Ｋα１線に由来する回折を解析して得られるＸ線回折図である。
本発明の結晶の１つの好適な形態は、化合物（１）で表わされる、ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニドの結晶である。化合物（１）の結晶は、銅のＫα線の照射で得られる粉末回折図において、図１に示すＸ線回折図を有する。また、化合物（１）の結晶は、回折角度２θ（度）＝３．８２、７．６４、１１．４８、１９．０６、２３．０８、２５．２２、及び２６．９８に特徴的なピークを有する。ここで、「特徴的ピーク」とは、粉末Ｘ線回折において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度９以上のピークを意味する。
本発明の結晶の別の１つの好適な形態は、化合物（２）の結晶で表わされる、ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニドの結晶である。化合物（２）の結晶は、銅のＫα線の照射で得られる粉末回折図において、図２に示すＸ線回折図を有する。また、化合物（２）の結晶は、回折角度２θ（度）＝７．６６、１５．３６、１９．０８、２３．７６、２５．２６、及び２７．０４に特徴的なピークを有する。ここで、「特徴的ピーク」とは、粉末Ｘ線回折において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１０以上のピークを意味する。
図１及び図２の粉末Ｘ線回折図において、縦軸には回折強度［カウント／秒（ｃｐｓ）］を示し、横軸には回折角度２θ（度）を示す。２θは、測定条件等によりその位置及び相対強度が多少変化し得るものであるため、２θがわずかに異なる場合であっても、適宜スペクトル全体のパターンを参照して結晶形の同一性は認定されるべきである。その誤差は、通常±２の範囲であり、好ましくは±１の範囲であり、より好ましくは±０．５の範囲であり、更に好ましくは±０．２の範囲である。
また、それぞれの回折ピークの強度についても、結晶学の分野において周知であるように、多数の因子（特定の結晶形態から生じる優先方位および粒子サイズの影響を含む）に起因して変化し得るものであり、本発明の結晶を特定するための上記主要ピークの相対強度も変化し得るものであるが、それらの結晶も本発明の結晶に包含される。
本発明の化合物（１）又は（２）は、エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達又は細胞活性化に起因する炎症性メディエーターの産生を抑制する活性を有し、更に、優れた保存、取扱安定性を有するため、医薬として有用である。また、上記医薬は、好適には、温血動物用であり、更に好適には、ヒト用である。
本発明の化合物（１）および化合物（２）を、上記疾患の治療薬又は予防薬として使用する場合には、それ自体又は適宜の薬理学的に許容される、賦形剤、希釈剤等と混合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口的又は注射剤若しくは坐薬等による非経口的に投与することができる。
これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール若しくはソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α澱粉若しくはデキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；又は、プルランのような有機系賦形剤；或いは、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム若しくはメタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；又は、硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤であり得る。）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；ビーズワックス若しくはゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；Ｄ，Ｌ−ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム若しくはラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸若しくは珪酸水和物のような珪酸類；又は、上記澱粉誘導体であり得る。）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、又は、前記賦形剤と同様の化合物であり得る。）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム若しくは内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム若しくは架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾された水溶性高分子類；又は、上記澱粉誘導体であり得る。）、乳化剤（例えば、ベントナイト若しくはビーガムのようなコロイド性粘土；水酸化マグネシウム若しくは水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸ナトリウム若しくはステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤；塩化ベンザルコニウムのような陽イオン界面活性剤；又は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル若しくはショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面活性剤であり得る。）、安定剤（例えば、メチルパラベン若しくはプロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール若しくはフェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール若しくはクレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；又は、ソルビン酸であり得る。）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料又は香料等であり得る。）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
以下、実施例、試験例により、本発明を更に詳細に説明する。
（実施例１）
ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド
ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド
エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート[国際公開番号 ＷＯ２００７/０３２３６２に実施例１６２の低極性化合物、第１ピークとして記載の化合物]１００ｍｇ（０．２０８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル１ｍｌに溶解し、室温攪拌下、ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物３８ｍｇ（０．２０８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液２ｍｌを加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物９２ｍｇをアモルファスとして得た。次いでこのものを酢酸エチルに溶解し、１３０℃で２時間加熱還流した。冷却後、析出した固形物を濾取し、酢酸エチルで洗浄することにより、標記の化合物を白色結晶として得た。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６ ）δｐｐｍ：
7.40 (1H, dd, J=9Hz, 6Hz), 7.07-6.97 (1H, m), 6.84-6.75 (1H, m), 6.46 (1H, s),
4.98 (1H, t, J=6Hz), 4.82 (1H, t, J=6Hz), 4.11-4.02 (1H, m), 4.02-3.93 (1H, m),
3.93-3.80 (3H, m), 3.63-3.41 (4H, m), 2.78-2.65 (1H, m), 2.34-2.25 (1H, m),
1.87-1.74 (1H, m), 1.65-1.58 (1H, m), 1.14 (3H, t, J=7Hz)
粉末Ｘ線回折パターンを図1に示す。
＜別法＞
エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート３００ｍｇ（０．６２５ｍｍｏｌ）を酢酸エチル２ｍｌに溶解し、室温攪拌下、ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物１１４ｍｇ（０．６２５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液４ｍｌを加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物をアモルファスとして得た。次いでこのものを酢酸エチル３ｍｌに溶解し、前法で得た種晶を添加し、１００℃で５分間加熱還流した。冷却後、析出した固形物を濾取し、酢酸エチルで洗浄することにより、標記の化合物２３６ｍｇを白色結晶として得た（収率７３％）。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６ ）δｐｐｍ：
7.40 (1H, dd, J=9Hz, 6Hz), 7.07-6.97 (1H, m), 6.84-6.75 (1H, m), 6.46 (1H, s),
4.98 (1H, t, J=6Hz), 4.82 (1H, t, J=6Hz), 4.11-4.02 (1H, m), 4.02-3.93 (1H, m),
3.93-3.80 (3H, m), 3.63-3.41 (4H, m), 2.78-2.65 (1H, m), 2.34-2.25 (1H, m),
1.87-1.74 (1H, m), 1.65-1.58 (1H, m), 1.14 (3H, t, J=7Hz)
粉末Ｘ線回折パターンを図1に示す。
＜別法＞
エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート３００ｍｇ（０．６２５ｍｍｏｌ）を酢酸エチル２ｍｌに溶解し、室温攪拌下、ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物１１４ｍｇ（０．６２５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液４ｍｌを加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物をアモルファスとして得た。次いでこのものを酢酸エチル３ｍｌに溶解し、前法で得た種晶を添加し、１００℃で５分間加熱還流した。冷却後、析出した固形物を濾取し、酢酸エチルで洗浄することにより、標記の化合物２３６ｍｇを白色結晶として得た（収率７３％）。
（実施例２）
ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド
ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニド
ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物４２２ｍｇ（２．３１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル２３ｍｌに溶解し、室温攪拌下、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−［Ｎ−（２−ブロモ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート[国際公開番号 ＷＯ２００７/０３２３６２に実施例１６６の低極性化合物、第１ピークとして記載の化合物]１．２１５ｇ（２．３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物９５４ｍｇをアモルファスとして得た。次いでこのものを酢酸エチル６ｍｌに溶解し、７０℃で５分間加熱攪拌した。冷却後、析出した固形物を濾取し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルで洗浄することにより、標記の化合物８５０ｍｇを白色結晶として得た（収率６５％）。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ：
7.39 (1H, dd, J=9Hz, 6Hz), 7.17 (1H, dd, J=9Hz, 3Hz), 6.83 (1H, dt, J=9Hz, 3Hz), 6.45 (1H, s), 4.98 (1H, t, J=5Hz), 4.83 (1H, t, J=5Hz), 4.13-3.81 (5H, m), 3.64 -3.41 (4H, m), 2.84-2.63 (1H, m), 2.35-2.26 (1H, m), 1.85-1.73 (1H, m), 1.65-1.56 (1H, m), 1.14 (3H, t, J=7Hz)
粉末Ｘ線回折パターンを図２に示す。
＜別法＞
ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物１０２ｍｇ（０．５６０ｍｍｏｌ）を酢酸エチル５ｍｌに溶解し、室温攪拌下、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−ブロモ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート２８０ｍｇ（０．５３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物をアモルファスとして得た。次いでこのものをエタノール１ｍｌに溶解し、７０℃で１分間加熱攪拌した。冷却後、析出した固形物を濾取し、エタノールおよびジエチルエーテルで洗浄することにより、標記の化合物１９７ｍｇを白色結晶として得た（収率６６％）。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ：
7.39 (1H, dd, J=9Hz, 6Hz), 7.17 (1H, dd, J=9Hz, 3Hz), 6.83 (1H, dt, J=9Hz, 3Hz), 6.45 (1H, s), 4.98 (1H, t, J=5Hz), 4.83 (1H, t, J=5Hz), 4.13-3.81 (5H, m), 3.64 -3.41 (4H, m), 2.84-2.63 (1H, m), 2.35-2.26 (1H, m), 1.85-1.73 (1H, m), 1.65-1.56 (1H, m), 1.14 (3H, t, J=7Hz)
粉末Ｘ線回折パターンを図２に示す。
＜別法＞
ポタシウム ２−エチルヘキサノエート 水和物１０２ｍｇ（０．５６０ｍｍｏｌ）を酢酸エチル５ｍｌに溶解し、室温攪拌下、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−ブロモ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート２８０ｍｇ（０．５３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した固形物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄することにより、粗生成物をアモルファスとして得た。次いでこのものをエタノール１ｍｌに溶解し、７０℃で１分間加熱攪拌した。冷却後、析出した固形物を濾取し、エタノールおよびジエチルエーテルで洗浄することにより、標記の化合物１９７ｍｇを白色結晶として得た（収率６６％）。
（実施例３）粉末Ｘ線回折の測定
(株) Ｒｉｇａｋｕ社製Ｒｉｎｔ ＴＴＲ−ＩＩＩ (シンチレーション計数管, Ｋβ線除去用長尺スリット付)を用い、試料を無反射試料ホルダー上に均し、下記条件にて測定した。
＜分析条件＞
X線種: Cu Ka（波長: 1.54A）、管電圧: 50kV、管電流: 300mA、走査速度: 2°/min、ステッフ゜: 0.02°、走査範囲(2q):2~60°、発散スリット: 0.5mm、散乱スリット: 0.5mm、受光スリット: 0.5mm
＜測定結果＞
実施例１で得た化合物の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１に示す。図１において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度９以上のピークを表１に示す。
(株) Ｒｉｇａｋｕ社製Ｒｉｎｔ ＴＴＲ−ＩＩＩ (シンチレーション計数管, Ｋβ線除去用長尺スリット付)を用い、試料を無反射試料ホルダー上に均し、下記条件にて測定した。
＜分析条件＞
X線種: Cu Ka（波長: 1.54A）、管電圧: 50kV、管電流: 300mA、走査速度: 2°/min、ステッフ゜: 0.02°、走査範囲(2q):2~60°、発散スリット: 0.5mm、散乱スリット: 0.5mm、受光スリット: 0.5mm
＜測定結果＞
実施例１で得た化合物の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１に示す。図１において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度９以上のピークを表１に示す。
実施例２で得た化合物の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２に示す。図２において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１０以上のピークを表２に示す。
（実施例４）吸湿性試験
試料をガラス製サンプルカップに秤量し, 以下に示す条件にて重量を測定した。
＜測定条件＞
測定機器:DVS Advantage, Surface Measurement System製,
測定湿度: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 95, 90, 85, 80,
75, 70, 65, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 10％RH
測定温度: 25°C、最小曝露時間: 15min,
最大曝露時間: 120min、Step移行条件: 0.006wt.%以内
測定終了時の外観を確認した。
＜測定結果＞
表４、図３、図４、及び図５に示すように、比較例として用いた、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート（国際公開番号 ＷＯ２００７/０３２３６２に実施例１６２の低極性化合物、第１ピークとして記載の化合物：フリー体）は、いずれの測定湿度においても高い吸湿性を示したが（図３参照）、実施例１及び実施例２の化合物は吸湿性を示さなかった（図４及び５参照）。特に、実施例１の化合物はいずれの湿度においても、安定して吸湿性を示さなかった（図４参照）。
試料をガラス製サンプルカップに秤量し, 以下に示す条件にて重量を測定した。
＜測定条件＞
測定機器:DVS Advantage, Surface Measurement System製,
測定湿度: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 95, 90, 85, 80,
75, 70, 65, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 10％RH
測定温度: 25°C、最小曝露時間: 15min,
最大曝露時間: 120min、Step移行条件: 0.006wt.%以内
測定終了時の外観を確認した。
＜測定結果＞
表４、図３、図４、及び図５に示すように、比較例として用いた、エチル （２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−８−[Ｎ−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファモイル]−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−７−カルボキシラート（国際公開番号 ＷＯ２００７/０３２３６２に実施例１６２の低極性化合物、第１ピークとして記載の化合物：フリー体）は、いずれの測定湿度においても高い吸湿性を示したが（図３参照）、実施例１及び実施例２の化合物は吸湿性を示さなかった（図４及び５参照）。特に、実施例１の化合物はいずれの湿度においても、安定して吸湿性を示さなかった（図４参照）。
（実施例５）溶解性試験
＜試験方法＞
実施例１、実施例２及び比較例１の化合物の１５０ｍｇをそれぞれ、塩化ナトリウムを含むリン酸塩水溶液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ３・２Ｈ２Ｏより成る）５ｍＬに溶解した。ｐＨを測定しながら３０分攪拌後、懸濁液０．５ｍＬを採取し、シリンジフィルターにてろ過した。ろ液１００μＬを１０ｍＬメスフラスコに移し、５０％ＭｅＣＮ水溶液でメスアップし、試料溶液とした。懸濁液にｃｏｎｃ ＨＣｌを滴下し、ｐＨを７．５付近に調製した。
以下の条件にてＨＰＬＣを用いて測定した。
＜分析法条件＞
HPLCシステム:Water’s Alliance
Column:XTerra MS C18 3.5 μm, Column Size: 4.6x100mm
Column Temp:40 ℃, Flow Rate: 1.2 mL/min
Solvent A:0.1% リン酸 水、Solvent B:０．１％リン酸 MeCN
Gradient Schedule
＜試験方法＞
実施例１、実施例２及び比較例１の化合物の１５０ｍｇをそれぞれ、塩化ナトリウムを含むリン酸塩水溶液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ３・２Ｈ２Ｏより成る）５ｍＬに溶解した。ｐＨを測定しながら３０分攪拌後、懸濁液０．５ｍＬを採取し、シリンジフィルターにてろ過した。ろ液１００μＬを１０ｍＬメスフラスコに移し、５０％ＭｅＣＮ水溶液でメスアップし、試料溶液とした。懸濁液にｃｏｎｃ ＨＣｌを滴下し、ｐＨを７．５付近に調製した。
以下の条件にてＨＰＬＣを用いて測定した。
＜分析法条件＞
HPLCシステム:Water’s Alliance
Column:XTerra MS C18 3.5 μm, Column Size: 4.6x100mm
Column Temp:40 ℃, Flow Rate: 1.2 mL/min
Solvent A:0.1% リン酸 水、Solvent B:０．１％リン酸 MeCN
Gradient Schedule
＜測定結果＞
表４に示すように、比較例の化合物（フリー体）は、低い溶解性であったが、実施例１及び実施例２は、それぞれ、１３．８ｍｇ／ｍＬ、９．６ｍｇ／ｍＬの溶解性を示した。
表４に示すように、比較例の化合物（フリー体）は、低い溶解性であったが、実施例１及び実施例２は、それぞれ、１３．８ｍｇ／ｍＬ、９．６ｍｇ／ｍＬの溶解性を示した。
（実施例６）溶液安定性試験
＜試験方法＞
本発明の化合物（実施例１、実施例２及び比較例）のそれぞれを精密に秤量し、１０ｍＬメスフラスコに入れ、ｐＨ６のＰＢＳに溶解した。１Ｎ ＨＣｌを加えて、実施例１の化合物はｐＨ６に、実施例２の化合物はｐＨ７に、比較例の化合物はｐＨ８に調整した。２５℃に光試験器に上記のフラスコ及び、対照としてアルミホイルで遮光したフラスコを入れ、１日経過後に、５０％ＭｅＣＮにてメスアップする。上述の溶解性試験で使用したＨＰＬＣ条件にて、溶液濃度を算出し、対照からの濃度変化を算出した。
＜測定結果＞
表４に示すように、１日保管した際の溶液安定性は、比較例の化合物（フリー体）では、９９．４％、実施例１の化合物では、９９．９％、実施例２の化合物では、９９．４％であった。
＜試験方法＞
本発明の化合物（実施例１、実施例２及び比較例）のそれぞれを精密に秤量し、１０ｍＬメスフラスコに入れ、ｐＨ６のＰＢＳに溶解した。１Ｎ ＨＣｌを加えて、実施例１の化合物はｐＨ６に、実施例２の化合物はｐＨ７に、比較例の化合物はｐＨ８に調整した。２５℃に光試験器に上記のフラスコ及び、対照としてアルミホイルで遮光したフラスコを入れ、１日経過後に、５０％ＭｅＣＮにてメスアップする。上述の溶解性試験で使用したＨＰＬＣ条件にて、溶液濃度を算出し、対照からの濃度変化を算出した。
＜測定結果＞
表４に示すように、１日保管した際の溶液安定性は、比較例の化合物（フリー体）では、９９．４％、実施例１の化合物では、９９．９％、実施例２の化合物では、９９．４％であった。
（実施例７）化学的安定性評価
＜試験方法＞
低湿室（２５℃、３０％ＲＨ）にて、試料を石英サンプルカップに精密に秤量し、１０ｍＬメスフラスコに入れた。シリカゲルを入れたデシケーターに開栓状態で３日間放置した。さらに、開栓状態で２５°Ｃ、湿度３０％の環境で４週間保管した。実施例５の溶解性試験と同じＨＰＬＣ条件で、残存量を測定した。
＜測定結果＞
表４に示ように、比較例の化合物（フリー体）は、吸湿性のため本試験の実施が不可能であったが、実施例１及び実施例２の化合物はそれぞれ、９８．９％および９８．８％の残存量を示し、実施例１及び２の化合物は安定であることが示された。
＜試験方法＞
低湿室（２５℃、３０％ＲＨ）にて、試料を石英サンプルカップに精密に秤量し、１０ｍＬメスフラスコに入れた。シリカゲルを入れたデシケーターに開栓状態で３日間放置した。さらに、開栓状態で２５°Ｃ、湿度３０％の環境で４週間保管した。実施例５の溶解性試験と同じＨＰＬＣ条件で、残存量を測定した。
＜測定結果＞
表４に示ように、比較例の化合物（フリー体）は、吸湿性のため本試験の実施が不可能であったが、実施例１及び実施例２の化合物はそれぞれ、９８．９％および９８．８％の残存量を示し、実施例１及び２の化合物は安定であることが示された。
（試験例１）エンドトキシン刺激による細胞のＴＮＦ−α産生に対する抑制効果（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）
ヒト単球系細胞株Ｕ９３７をエンドトキシン刺激した際のＴＮＦ−α産生に対する本発明の化合物の抑制率を測定した。すなわち、非働化新生仔牛血清を１０％（容積％）含むＲＰＭＩ１６４０培地に、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセテートを終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加した。該培地にＵ９３７細胞を懸濁し、９６穴培養プレート（スミロン）へ、１穴あたりの細胞数／容量が２×１０４個／０．１ｍｌとなるように播き、３７℃にて、５％ＣＯ２、湿度１００％の炭酸ガスインキュベーター中で３日間培養した。培養終了後、培養上清を除去した。各穴へ、種々の濃度の本発明の化合物を添加し、併せてリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４、シグマ）を、終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加した。培養プレートを再び炭酸ガスインキュベーター中にて４．５時間培養した後、培養上清を回収した。３８４半穴ブラックプレート（グライナー）ならびにシス バイオ インターナショナル社製のＨＴＲＦ定量キットを用い、培養上清中のＴＮＦ−α濃度をディスカバリー（パッカード社）にて時間分解蛍光として測定した。ＬＰＳ非存在下の測定値（Ｘ）、本発明の化合物の非存在下の測定値（Ｙ）および本発明の化合物の存在下の測定値（Ｚ）より、下記の計算式［Ｉ］を用いてＴＮＦ−α産生抑制率を求めた。
ヒト単球系細胞株Ｕ９３７をエンドトキシン刺激した際のＴＮＦ−α産生に対する本発明の化合物の抑制率を測定した。すなわち、非働化新生仔牛血清を１０％（容積％）含むＲＰＭＩ１６４０培地に、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセテートを終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加した。該培地にＵ９３７細胞を懸濁し、９６穴培養プレート（スミロン）へ、１穴あたりの細胞数／容量が２×１０４個／０．１ｍｌとなるように播き、３７℃にて、５％ＣＯ２、湿度１００％の炭酸ガスインキュベーター中で３日間培養した。培養終了後、培養上清を除去した。各穴へ、種々の濃度の本発明の化合物を添加し、併せてリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４、シグマ）を、終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加した。培養プレートを再び炭酸ガスインキュベーター中にて４．５時間培養した後、培養上清を回収した。３８４半穴ブラックプレート（グライナー）ならびにシス バイオ インターナショナル社製のＨＴＲＦ定量キットを用い、培養上清中のＴＮＦ−α濃度をディスカバリー（パッカード社）にて時間分解蛍光として測定した。ＬＰＳ非存在下の測定値（Ｘ）、本発明の化合物の非存在下の測定値（Ｙ）および本発明の化合物の存在下の測定値（Ｚ）より、下記の計算式［Ｉ］を用いてＴＮＦ−α産生抑制率を求めた。
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝｛１−（Ｚ−Ｘ）／（Ｙ−Ｘ）｝×１００ ［Ｉ］
＜ＴＮＦ−α産生抑制効果（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）＞
＜ＴＮＦ−α産生抑制効果（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）＞
表５に示すように、本試験において本発明の化合物は、エンドトキシン刺激による細胞のＴＮＦ−α産生に対して、優れた抑制効果を示した。
（試験例２）血中ＴＮＦ−α濃度上昇に対する抑制効果（ｉｎ ｖｉｖｏ）
血中ＴＮＦ−α濃度上昇に対する本発明の化合物の抑制果を検討した。血中ＴＮＦ−α濃度上昇試験はＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４７巻、第１６４項（１９９０年）に記載のＰａｒａｎｔらの方法に準じて実施した。
試験には、雄性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（８〜９週齢）を１群３〜４匹として用いた。
血中ＴＮＦ−α濃度上昇に対する本発明の化合物の抑制果を検討した。血中ＴＮＦ−α濃度上昇試験はＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４７巻、第１６４項（１９９０年）に記載のＰａｒａｎｔらの方法に準じて実施した。
試験には、雄性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（８〜９週齢）を１群３〜４匹として用いた。
ＬＰＳ投与４時間前に生理食塩液に溶解したムラミルジペプチド（１ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌ／ｋｇの割合で尾静脈より投与した。ＬＰＳ投与０．５時間前にペントバルビタール（４０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、５％ジメチルアセトアミド／９５％ポリエチレングリコール４００溶液に溶解した本発明の化合物を右大腿静脈より1ｍｌ／ｋｇの割合で投与した。対照群には、５％ジメチルアセトアミド／９５％ポリエチレングリコール４００溶液を１ｍｌ／ｋｇの割合で投与した。生理食塩液に溶解したＬＰＳ（３μｇ／ｍｌ）を１ｍｌ／ｋｇの割合で左大腿静脈より投与した。ＬＰＳ投与２時間後に抗凝固剤として３．８％（ｗ／ｖ）クエン酸ナトリウム溶液を用いて採血し、遠心（１０，０００ｇ、５分間、４℃）により血漿を分離した。ＴＮＦ−α定量キット（バイオソース インターナショナル社）を用いて、血漿中のＴＮＦ−α濃度を測定した。対照群の血中ＴＮＦ−α濃度（Ｘ）、本発明の化合物投与群の血中ＴＮＦ−α濃度（Ｙ）より、下記の計算式［ＩＩ］を用いてＴＮＦ−α産生抑制率を求めた。
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝｛１−Ｙ／Ｘ｝×１００ ［ＩＩ］
＜ＴＮＦ−α産生抑制効果（ｉｎ ｖｉｖｏ）＞
＜ＴＮＦ−α産生抑制効果（ｉｎ ｖｉｖｏ）＞
表６に示すように、本試験において本発明の化合物は、血中ＴＮＦ−α濃度上昇に対して優れた抑制効果を示した。
本発明によれば、保存及び取扱安定性に優れた置換シクロアルケン誘導体の結晶を提供することが可能となる。本発明の置換シクロアルケン誘導体のカリウム塩は、エンドトキシンにより引き起こされる細胞内シグナル伝達又は細胞活性化に起因する炎症性メディエーターの産生を抑制し、敗血症の予防及び／又は治療薬として有効である。
Claims (2)
- 銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝３．８２、７．６４、１１．４８、１９．０６、２３．０８、２５．２２、及び２６．９８（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、下記式（１）
で表わされる、ポタシウム （２−クロロ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニドの結晶。 - 銅のＫα線の照射で得られる粉末Ｘ線回折において、回折角度２θ（度）＝７．６６、１５．３６、１９．０８、２３．７６、２５．２６、及び２７．０４（それぞれ±２）に特徴的なピークを示す、下記式（２）
で表わされる、ポタシウム （２−ブロモ−４−フルオロフェニル）｛[（２Ｒ，３Ｒ，８Ｒ）−７−（エトキシカルボニル）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ[４．５]デカ−６−エン−８−イル]スルホニル｝アザニドの結晶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012535063A JP5778161B2 (ja) | 2010-09-24 | 2011-09-22 | 置換シクロアルケン誘導体の結晶 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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