JP5649585B2

JP5649585B2 - ベンゾアリールウレイド化合物、及びこれを含有する神経退行性脳疾患予防又は治療用組成物

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Publication number: JP5649585B2
Application number: JP2011544372A
Authority: JP
Inventors: ハン，ホ−ギュ; ナム，キ−ダル; シン，ドン−ユン; パク，チャン−ホ; チョ，ソン−ウ; キム，ウン−ア; ナム，キル−ス; チェ，キョン−イル; ソ，ソン−ヒ; シン，ヒ−ソプ; キム，ドン−ジン; ペ，エ−ニム; チョン，ヘ−ジン; チュ，ヒョン−ア; イム，ヘ−ウォン; チョ，ヨン−ソ; ノ，ウン−ジュ; クム，キョ−チャン; チェ，キ−ヒョン; シン，ケ−ジョン
Original assignee: コリア・インスティテュート・オブ・サイエンス・アンド・テクノロジー
Priority date: 2008-12-29
Filing date: 2009-12-29
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2029-12-29
Also published as: US9012481B2; WO2010077068A3; KR20100077552A; US20110319456A1; KR101064258B1; JP2012514032A; WO2010077068A2

Description

発明の詳細な説明

［技術分野］
本発明は、新規なベンゾアリールウレイド化合物及びこれを有効成分として含有する神経退行性脳疾患の予防又は治療用組成物に関する。前記神経退行性脳疾患は、アルツハイマー病、痴呆、パーキンソン病、脳卒中、アミロイド症、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ルー・ゲーリッグ病、遺伝性進行性舞踏病（ハンチントン舞踏病）、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病などであり得る。

［背景技術］
最近、韓国の各種の疾病の中で、脳疾患は、国家的な問題として取り上げられている。脳疾患は、去る１０年間の死亡原因として最も大きな上昇幅を示しているが、他の疾患に比べて診断及び治療が困難であり、これによる被害は増加する見通しである。

特に、痴呆は、記憶力障害及び判断力喪失などの全般的な精神機能障害を招いて、人生の質を損なう疾患である。痴呆の原因は多岐に渡っており、約５０％はアルツハイマー型痴呆であり、２０−３０％は血管性痴呆、アルコール性痴呆又はパーキンソン病痴呆などであり、約１５−２０％は、アルツハイマー型と血管性痴呆の両方に起因するものである。

中でも、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ、以下、「ＡＤ」と称する。）痴呆は、老人性痴呆とも呼ばれ、４０代から多く発症している。発症原因は明らかではあるが、老化と深い関係があることが知られている。

痴呆は、神経細胞の損傷やアセチルコリンの濃度低下によって発症することが報告されている。神経細胞損傷は、自由ラジカル、グルタマート、カルシウム過多、窒素、アミロイドベータタンパク質及びサイトカインなどの各種の要因によって引き起こされ、中でも、アルツハイマー病を有する患者の神経細胞の場合、過量のベータ−アミロイド（β−Ａｍｙｌｏｉｄ）を含む神経塩プラークを示す。このようなベータ−アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ、以下、「ＡＰＰ」と称する。）から形成され、健常人の場合には、前記アミロイド前駆体タンパク質からＰ３アミロイドを形成することとなる。

しかしながら、アルツハイマー病患者の場合には、ＡＰＰが変形されてベータ−アミロイドタンパク質からなるアミロイドプラーク（神経細胞の外部に形成される）と、神経細胞の構造を維持して神経の伝達を手伝う作用をするタウ（ｔａｕ）タンパク質が過剰に酸化されて形成される神経原線維濃縮体（神経細胞の内部に形成される）など２種類の特徴的な病変を示す。

上述したように、過量のベータ−アミロイドの形成は、神経退行的な段階の開始点に代表され得る。脳におけるベータ−アミロイド集合体の形成は、現在、神経塩プラークの形成を引き起こす神経細胞における様々な毒性の効果であると見なされる。

細胞内外的な実験の両方において、神経細胞の細胞自滅の誘発を含むベータ−アミロイドの神経毒性効果が証明されている。例えば、培養された中枢神経系ニューロン及び神経細胞ＰＣ１２がベータ−アミロイドに露出されれば、神経細胞自滅死を引き起こす（Ｌｏｏｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９３，７９５１−７９５５；Ｉｖｉｎｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏＣｈｅｍ，１９９９，２１０７− ２１１２）。ベータ−アミロイドは、小膠細胞の存在下において中間脳又は皮質ニューロンに対して神経細胞毒性を大幅に増加させる。小膠細胞の活性化及び過酸化物自由ラジカルの形成が神経細胞毒性を増加させることが知られている（Ｇａｏｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，１２８５−１２９７；Ｑｉｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，９７３−９８３）。脳における炎症はパーキンソン病及びアルツハイマー病などを含む様々な神経退行性疾病において重要な役割を果たすことが広く認識されている。炎症媒介性神経細胞退行は、ニューロンが神経退行を引き起こすのに影響を及ぼすエイコサノイド、サイトカイン、反応性酸素中間物、窒素酸化物などを含む前炎症及び神経毒性因子を生産する、脳に存在する免疫細胞である小膠細胞の活性化を随伴する（Ｑｉｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，９７３−９８３）。先行研究においては、小膠細胞のベータ−アミロイド依存性活性化と、アルツハイマー病患者の脳において起こるニューロン死滅の様々な特徴的なマーカーとの間の相関関係を証明している（Ｃｏｍｂｓｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ．，２００１，１１７９−１１８８）。

興味深いことに、ベータ−アミロイドは、小膠細胞の存在下における中間脳及び皮質ニューロンの両方に対して大幅に増加された神経細胞毒性を有している（Ｇａｏｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，１２８５−１２９７；Ｑｉｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，９７３−９８３）。このため、アミロイドペプチドは、アルツハイマー病に加えて、ＰＤ（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓＤｉｓｅａｓｅ）などの他の神経細胞退行的な疾病の発症機序に随伴され得る（ＰｕｇｌｉｅｌｌｉａｎｄＫｏｖａｃｓ，ＲｅｖＭｅｄＣｈｉｌ．，２００１，５６９−５７５；Ｓｍａｌｌｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．，２００１，５９５−５９８）。パーキンソニズム症状は、アルツハイマー病患者にとっても一般的であり、アルツハイマー病患者における認知力（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）の減少は、パーキンソニズムの進行と関連していることが判明している（Ｗｉｌｓｏｎｅｔａｌ．，ＰｓｙｃｈｏｌＡｇｉｎｇ，２０００，１８−２８）。ドーパミンニューロンは、酸化刺激に弱いことが知られているため（Ｇｒｅｅｎａｍｙｒｅｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＳｙｍｐ１９９９，８５−９７）、小膠細胞の活性抑制が潜在的な治療物質の開発に対する効果的な戦略であり得る。

この理由から、神経細胞退行性疾患の治療と予防において、ベータ−アミロイドと小膠細胞活性抑制効果を有する物質の探索及び開発が極めて有用であることが期待され、これに関する研究が望まれる。

［図面の簡単な説明］
図１Ａ及び図１Ｂは、ＢＶ−２細胞において、ベータ−アミロイドによる神経細胞毒性（Ａβ２５−３５−ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）に対する化合物ＫＨＧ２５９６７の保護効果を示すものであり、図１Ａは、顕微鏡分析結果を示すものであり、図１Ｂは、ＭＴＴ結果に対する細胞生存率の定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ベータ−アミロイドを処理せず、５％ＤＭＳＯのみを２６時間処理した対照群、
Ａｂ：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯをさらに投与して２４時間処理した場合、
Ａｂ＋ＫＨＧ２５９６７：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを２４時間処理した場合）
図２Ａから図２Ｃは、ＢＶ−２細胞において、ＥＲＫ１とＥＲＫ２のリン酸化活性及びＣａｓｐａｓｅ３の活性に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、図２Ａは、リン酸化−ＥＲＫ１、リン酸化−ＥＲＫ２、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、及びｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ３に対する免疫ブロット分析結果であり、図２Ｂは、図２Ａに対するｐ−ＥＲＫの定量分析結果であり、図２Ｃは、図２Ａに対するｃａｓｐａｓｅ３の定量分析結果である。各レーンに対する条件は、図１と同様である。

図３Ａ及び図３Ｂは、ＢＶ−２細胞において、ＬＰＳにより引き起こされたサイトカインに対するＫＨＧ２５９６７のｉｎｖｉｔｒｏ保護効果を示すものであり、図３Ａは、インターロイキン−１ベータの定量分析結果であり、ＬＰＳ処理後の反応結果を１００％として比較した相対的な％数値で計算した結果を示すものであり、図３Ｂは、腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果であり、ＬＰＳ処理後の反応結果を１００％として比較した相対的％数値で計算した結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ＰＢＳを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、化合物５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを６時間処理した場合）。

図４Ａから図４Ｄは、ＬＰＳにより引き起こされたＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅの脳と血液のサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、図４Ａ及び図４Ｂは、脳内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果であり、図４Ｃ及び図４Ｄは、血液（血清）内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与した後、ＰＢＳを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７（１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与により毎日繰り返して２週間処理した後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合）

［発明の概要］
［発明が解決しようとする課題］
上述したニーズに応えるために、本発明の一実施形態は、ベータ−アミロイド形成による神経退行性脳疾患の予防又は治療に有用であり、しかも、副作用が少ない化合物と、これを含有する効果的な神経退行性脳疾患の予防又は治療用組成物を提供することを目的とする。

本発明の他の実施形態は、前記化合物の神経退行性脳疾患治療のための用途、及び前記化合物の有効量を神経退行性脳疾患の治療を必要とする患者に投与する段階を含む神経退行性脳疾患の治療方法を提供することを目的とする。

［課題を解決するための手段］
上記の目的を達成するために、本発明は、新規なベンゾアリールウレイド化合物、及びこれを有効成分として含有する神経退行性脳疾患の予防又は治療用組成物を提供する。前記神経退行性脳疾患は、痴呆、パーキンソン病、脳卒中、アミロイド症、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ルー・ゲーリッグ病、遺伝性進行性舞踏病、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病などであり得る。

以下、本発明をより具体的に説明する。

本発明の一実施形態は、新規なベンゾアリールウレイド化合物を提供する。前記ベンゾアリールウレイド化合物は、下記の一般式１で表される構造を有するものであってもよい：

式中、
Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＨ、及びＮＣＨ_３よりなる群から選ばれたものであり、
Ｙは、Ｏ又はＳであり、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン原子、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及び炭素数１〜５のアルコキシよりなる群からそれぞれ選ばれたものであり、
Ｒ_３は、ＯＨ、シアノ、炭素数１〜５のアルコキシ、ＣＯＯＲ_４、テトラゾール、フェニル基、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル置換されたフェニル及び炭素数１〜５のアルコキシ置換されたフェニルよりなる群から選ばれたものであり、Ｒ_４は、Ｈ、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及びアルカリ金属よりなる群から選ばれたものであり、
ｎは、１〜５の整数である。

本発明の好適な実施形態において、
Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＨ、及びＮＣＨ_３よりなる群から選ばれたものであり、
Ｙは、Ｏ又はＳであり、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、炭素数１〜３のアルキル及び炭素数１〜３のアルコキシよりなる群からそれぞれ選ばれたものであり、
Ｒ_３は、ＯＨ、シアノ、炭素数１〜５のアルコキシ、ＣＯＯＲ_４、テトラゾール、フェニル、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル置換されたフェニル及び炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルコキシ置換されたフェニルよりなる群から選ばれたものであり、このとき、Ｒ_４は、水素、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及びＫよりなる群から選ばれたものであり、
Ｎは、１〜３の整数であってもよい。

本発明の一実施形態において、ｎが１である場合、ＸはＯ又はＮＣＨ_３であるか、ＹがＳであるか、Ｒ_１及びＲ_２のうちいずれか一方以上はハロゲン原子であるか、Ｒ_３は、フェニル基、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル又はアルコキシ置換されたフェニル、シアノ、炭素数１〜５のアルコキシ、テトラゾール、ＯＨ及びＣＯＯＲ_４（但し、Ｒ_４は、Ｈ、メチル、炭素数３〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及びアルカリ金属よりなる群から選ばれたもの）よりなる群から選ばれたものであってもよい。

また、ＸがＳであり、ＹがＯであり、Ｒ_１及びＲ_２が両方とも水素であり、ｎが２又は３である場合、Ｒ_３は、フェニル基、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル又はアルコキシ置換されたフェニル、シアノ、炭素数１〜５のアルコキシ、テトラゾール、ＯＨ及びＣＯＯＲ_４（但し、Ｒ_４は、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及びアルカリ金属よりなる群から選ばれたもの）よりなる群から選ばれたものであってもよい。

ＸがＮＣＨ_３である場合、ＹはＳであるか、あるいは、Ｒ_１及びＲ_２のうちいずれか一方以上は、ハロゲン原子、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及び炭素数１〜５のアルコキシよりなる群から選ばれたものであってもよい。

Ｘ及びＹが両方ともＳである場合、Ｒ_１及びＲ_２のうちいずれか一方以上は、ハロゲン原子、炭素数１〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及び炭素数１〜５のアルコキシよりなる群から選ばれたものであるか、Ｒ_３は、フェニル、炭素数１〜３のアルキル置換されたフェニル、炭素数１〜３のアルコキシ置換されたフェニル、シアノ、炭素数１〜３のアルコキシ、テトラゾール、ＯＨ及びＣＯＯＲ_４（但し、Ｒ_４は、Ｈ、メチル、炭素数３〜５の直鎖状又は分岐状アルキル及びＫよりなる群から選ばれたものである）よりなる群から選ばれたものであってもよい。

本発明者らは、ベータ−アミロイドによって誘導された神経細胞の死滅に対抗する効果的な神経細胞保護剤の開発に関心をもって研究する間に、様々なベンゾアリールウレイド化合物を合成し、これを培養されたＰＣ１２細胞及び中間脳（ｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ）及び皮質（ｃｏｒｔｉｃａｌ）ニューロン−膠細胞に適用して実験を行った結果、前記一般式１で表される構造を有するベンゾアリールウレイド化合物が優れたベータ−アミロイド合成抑制能、小膠細胞活性抑制能及びこれによる優れた神経細胞保護能を有していることを見出した。

前記ベンゾアリールウレイド化合物が神経細胞保護剤の能力を有するかどうかは、ＴＵＮＥＬ（Ｉｎｓｉｔｕｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ）ラベリング測定法、ＴＨ抗体を用いて神経細胞の退行有無を免疫生化学的に分析する方法によって調べることができ、てんかん、痙攣、発作などの原因となるＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒａｔｅ）の減少率及び／又は神経伝達物質であるドーパミンの減少率測定、ＥＲＫ（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ）リン酸化度合いの測定、ＭＡＰ−２（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ）染色法及び／又はＬＤＨ（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）放出分析によって調べることができる。

ＧＡＢＡは、興奮を抑制するシナプスに代表的に見られるアミノ酸類の神経伝達物質であり、全身のうち、中枢神経系に高濃度（３０ｍＭ）にて分布する。ベータ−アミロイドによって減少していたＧＡＢＡの量が回復することは、神経伝達物質の機能を正常に行い得る濃度に達することを意味する。すなわち、脳が正常的な機能のために回復することを意味するのである。ドーパミンニューロンにおいて主として現れるドーパミン吸収の減少が弱化することも、前記ＧＡＢＡの場合と同様に解釈することができる。このため、ＧＡＢＡ及び／又はドーパミン含量を測定することにより、神経細胞保護作用を評価することができる。

また、ＥＲＫリン酸化は、細胞が枯死するための信号伝達体系の一部分であり、外部の刺激又は内部の細胞死滅時に活性化（リン酸化）され得る。このため、前記ＥＲＫリン酸化は、神経細胞の死滅を示す指標として利用され得る。また、ＭＡＰ−２染色法は、皮質神経細胞又は神経突起の形状変化において、細胞が損傷される度合いを示す指標として利用され得る。さらに、刺激により細胞膜が損傷される場合、細胞の外部にＬＤＨが遊離される特徴を用いて、ＬＤＨ分析により細胞損傷及び神経細胞の死滅を測定することができる。

本発明においては、上述した測定方法によって、前記一般式１で表される構造を有するベンゾアリールウレイド化合物が神経退行性疾患の直接的な原因となる神経細胞の死滅又は変性の予防又は治療効能を確認することにより、これらのベンゾアリールウレイド化合物が神経退行性疾患に予防又は治療効果があることを確認した。

このため、本発明の他の側面において、本発明は、前記一般式１で表される構造を有する化合物、及びこの薬学的に許容可能な塩よりなる群から選ばれたいずれか一種以上を有効成分として含有する退行性脳疾患の予防及び／又は治療用組成物を提供する。また、本発明の他の実施形態は、一般式１で表される構造を有する化合物及びこれらの薬学的に許容可能な塩よりなる群から選ばれたいずれか一種以上の神経退行性疾患の予防及び／又は治療のための用途を提供する。さらに、本発明のさらに他の実施形態は、一般式１で表される構造を有する化合物及びこの薬学的に許容可能な塩を神経退行性疾患の予防及び／又は治療を必要とする患者に投与する段階を含む神経退行性疾患の予防及び／又は治療方法を提供する。

本発明のさらに他の側面において、本発明は、前記一般式１で表される構造を有する化合物、及びこれらの薬学的に許容可能な塩よりなる群から選ばれたいずれか一種以上を含有する神経退行性疾患の予防又は改善用健康機能性食品を提供する。

前記神経退行性疾患は、ベータ−アミロイドによる脳神経細胞死滅に起因するものであり、例えば、アルツハイマー病、痴呆、パーキンソン病、脳卒中、アミロイド症、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ルー・ゲーリッグ病、遺伝性進行性舞踏病、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病などよりなる群から選ばれたものであってもよい。

前記ベンゾアリールウレイド化合物は、組成物内に単独で使用されてもよく、その他に、薬理学的に許容可能な担体又は賦形剤をさらに含んでいてもよい。この場合、前記組成物内ベンゾアリールウレイド化合物は、０．１〜９９重量％であってもよいが、より好ましくは、組成物の使用方法によって適切に調節する。

本発明において使用可能な担体又は賦形剤は、剤形に応じて適切な物質を選択して使用することができるが、剤形化する場合、通常の充填剤、増量剤、湿潤剤、崩壊剤又は界面活性剤を使用することができる。希釈剤又は賦形剤の代表例としては、水、デキストリン、カルシウムカーボネート、ラクトース、プロピレングリコール、流動パラフィン、タルク、異性化糖、ソジウムメタバイサルファイト、メチルパラベン、プロピルパラベン、ステアリン酸マグネシウム、乳糖、生理食塩水、香料及び色素が挙げられる。

本発明の神経退行性疾患予防又は治療用組成物は、薬剤、食品添加剤又は食品として使用することができ、薬剤として使用する場合、投与方法は、経口であってもよく、非経口であってもよい。前記組成物の剤形は、使用方法によるが、硬膏剤（ＰＬＡＳＴＥＲＳ）、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、ローション剤（ＬＯＴＩＯＮＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳＡＮＤＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エアロゾル剤（ＡＥＲＯＳＯＬＳ）、軟膏剤（ＯＩＮＴＭＥＮＴＳ）、流エキス剤（ＦＲＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、乳剤（ＥＭＵＬＳＩＯＮＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＴＥＳＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、注射剤（ＩＮＪＥＣＴＩＯＮＳ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）及び丸剤（ＰＩＬＬＳ）などであってもよい。

神経退行性疾患予防又は治療用組成物の投与量は、服用者の年齢、性別、状態、体内における活性成分の吸収度、不活性率及び併用薬物を考慮して決定することが好ましく、一日有効成分を基準としたとき、１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）で投与すればよい。

本発明の神経退行性疾患防止用組成物は、ベータ−アミロイドにより発生する脳細胞の退行及び損傷を防止するアリールウレイドアセタート化合物を含んで、細胞毒性が少ない退行性脳疾患を予防又は治療する効果を有する。

［実施例］
以下、本発明の好適な実施例を記載する。但し、下記の実施例は、本発明の好適な実施例に過ぎず、本発明が下記の実施例により限定されることはない。

［製造例］
ＫＨＧ２５９６７
［２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）酢酸］の製造

加水分解方法により前記化合物を製造した。水１０ｍｌにエチル２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）アセタート１００ｍｇとＫＯＨ６０ｍｇを加え、２時間かけて１００℃に加熱還流した。反応混合物を室温において３０分間攪拌後、氷浴中において冷却し、濃い塩酸１ｍｌを加えて反応混合物を酸性化させた。白い固体である２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）酢酸７４ｍｇを得た。

ＫＨＧ２６０２７
［エチル３−（３−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イルウレイド）プロパノアート］の製造

エステル化方法により前記化合物を製造した。２−アミノ−ベンズイミダゾール（０．１６２ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３ｍＬに溶解させた溶液にエチル３−イソシアナトプロピオナート（０．１７４ｇ、０．１６ｍＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を加え、４０分間６６℃に加熱還流した。反応混合物を室温まで冷却し、生成された沈殿物をろ過して白い固体７９ｍｇを得た。

ＫＨＧ２６０９６
［ポタシウム２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）アセタート］の製造

下記の反応式１−１に示す方法と同様にして、本発明に係る代表的なアルカリ金属塩化合物を製造した。

２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）酢酸（０．２６ｍｍｏｌ、７０ｍｇ）をＫＯＨ１５ｍｇを溶かした水溶液０．５５ｍｌに加えて室温において２時間攪拌した後、ＭｉｌｌｅｐｏｒｅＳｔｅｒｉｖｅｘ−ＧＶ（０．２２ｕｍｆｌｉｔｅｒｕｎｉｔ）を用いてろ過した。凍結乾燥器を用いて溶媒を除去して、白い固体６４ｍｇ（収率：８０％）を得た。

ＫＨＧ２６３４２
［Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−シアノアセトアミド］の製造
本発明に係るチアゾール基を有する化合物を反応式１−２のようにして合成した。

ベンゾチアゾール０．３ｇをテトラヒドロフラン５０ｍｌに溶かした後、氷浴において前記溶液にカルボジイミド０．３２ｇを滴加した。得られた反応混合物を室温において１０時間かけて攪拌した。生成された白い固体をろ過してＮ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキサミドを得た（０．２６１ｇ、５４％）。Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキサミド（３０ｍｇ）をテトラヒドロフラン５ｍｌに溶かした後、２−アミノアセトニトリル１１．１ｍｇを滴加し、酢酸２９μｌを滴加した。３０℃において１８時間攪拌した後、薄い茶色の固体であるＮ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−シアノアセトアミド（１０ｍｇ）を得た。

ＫＨＧ２６３４５
［Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）アセトアミド］の製造
反応式１−３に示す方法と同様にして、本発明に係るチアゾール基を有する化合物を合成した。

Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−シアノアセトアミド（０．１ｇ）とＮＨ_４Ｃｌ（５．０ｅｑ、０．１ｇ）、ＮａＮ_３（５．２ｅｑ、０．１３ｇ）をＤＭＦ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）２．１ｍＬに溶かした後、１２０℃において６時間加熱した。減圧蒸留してＤＭＦを除去した後、水１０ｍｌと５％ＮａＯＨ溶液を加えた。水層をＥｔ２Ｏ１５ｍｌにより洗浄した後、活性炭により処理後、反応混合物に１０％塩酸水を加えてｐＨ＝２になるようにし、メチレンクロリドにより抽出して薄い黄色の固体であるＮ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）アセトアミド（２０％、２１ｍｇ）を得た。

上述した方法により下記表１の化合物を製造した。

同定データ
ＫＨＧ２５９４８
１−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−３−（４−メチルベンジル）ウレア

収率：７３％
ｍｐ：２５７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １０．７５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｄ，１Ｈ， ^３Ｊ＝７．８３Ｈｚ，ＮＨ），７．１３−７．６２（ｍ，８Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３２（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７３Ｈｚ，ＣＨ_２），２．２７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２５９５４
ブチル２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）アセタート

収率：８％
ｍｐ：２９４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．０１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８−７．１９（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．０９（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３），３．９７（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），１．５７（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３），１．３４（ｍ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３），０．８８（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２５９５６
エチル２−（３−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：３０％
ｍｐ：２９１℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．０５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８２−７．１７（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．１３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９６（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２５９６７
２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）酢酸

収率：８５％
ｍｐ：２１７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．１８−７．８９（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．０１（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＮＨ），３．８９（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２５９８９
エチル２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：２１％
ｍｐ：２２５℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．５５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．６２−７．２３（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１２（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ_２），４．０５（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．５Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２５９９０
エチル２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：３１％
ｍｐ：２３３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．３１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．６１−７．１４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．４３（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ_２），２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６００４
エチル４−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）ブタノアート

収率：５６％
ｍｐ：２７８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８７−７．１７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．０５（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．１６（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），２．３３（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．７７−１．６７（ｍ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．１７（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６００５
エチル３−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）プロパノアート

収率：８９％
ｍｐ：２５６℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．７６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９０−７．２０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９２（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＮＨ），４．１１（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．４２（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ_２），２．５６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２２（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０１９
エチル２−（３−（６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：７９％
ｍｐ：２８１．９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．８６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５３−６．９３（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．１３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９５（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），３．３２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０２５
４−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）ブタン酸

収率：９９％
ｍｐ：２１０℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．６（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨ，ＣＯＯＨ），７．８８−７．１８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＮＨ），３．１８（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），２．２７（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．７５−１．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６０２６
３−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）プロパン酸

収率：７０％
ｍｐ：２４３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．１７−７．８７（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），６．８９（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．５Ｈｚ，ＮＨ），３．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．４７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６０２７
エチル３−（３−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イルウレイド）プロパノアート

収率：２３％
ｍｐ：２６４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ １１．３３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．８９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．３４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．２５（ｓ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９９−７．０２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．０５−４．１２（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．９Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．１Ｈｚ，エチル−ＣＨ_２），３．３７−３．４６（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝１１．１Ｈｚ， ^３Ｊ＝１７．７Ｈｚ，ＣＨ_２），２．５２−２．５７（ｔ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．６Ｈｚ， ^３Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ_２），１．１９（ｔ，３Ｈ， ^２Ｊ＝７．２Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．１Ｈｚ，エチル−ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０２８
エチル４−（３−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イルウレイド）ブタノアート

収率：１６％
ｍｐ：２７７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．３０（ｓ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０４−７．０７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．０３−４．１０（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．９Ｈｚ， ^３Ｊ＝１５．６Ｈｚ，エチル−ＣＨ_２），３．２６−３．３３（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．９Ｈｚ， ^３Ｊ＝１３．５Ｈｚ，ＣＨ_２），２．３１−２．３６（ｔ，２Ｈ， ^２Ｊ＝７．８Ｈｚ， ^３Ｊ＝１５．０Ｈｚ，ＣＨ_２），１．８５−１．９２（ｍ，２Ｈ， ^２Ｊ＝１２．０Ｈｚ， ^３Ｊ＝１９．２Ｈｚ，ＣＨ_２），１．１９（ｔ，３Ｈ， ^２Ｊ＝７．２Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．４Ｈｚ，エチル−ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０２９
エチル２−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：３８％
ｍｐ：１５７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．１０−７．１７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１９−４．２６（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝７．２Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．４Ｈｚ，エチル−ＣＨ_２），４．０７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２），３．５４（ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ_３），１．２９（ｔ，３Ｈ， ^２Ｊ＝７．５Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．４Ｈｚ，エチル−ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０３０
エチル３−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）プロパノアート

収率：８％
ｍｐ：１０５℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．１２−７．２３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１３−４．２０（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．９Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．１Ｈｚ，エチル−ＣＨ_２），３．５８−３．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ_２），３．５４（ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ_３），２．５９−２．６３（ｔ，２Ｈ， ^２Ｊ＝５．７Ｈｚ， ^３Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２７（ｔ，３Ｈ， ^２Ｊ＝７．５Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．４Ｈｚ，エチル−ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０３１
エチル４−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）ブタノアート

収率：８％
ｍｐ：８１℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．１２−７．２３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１３−４．２０（ｑ，２Ｈ， ^２Ｊ＝６．９Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．１Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．５８−３．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ_２），３．５４（ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ_３），２．５９−２．６３（ｔ，２Ｈ， ^２Ｊ＝５．７Ｈｚ， ^３Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２７（ｔ，３Ｈ， ^２Ｊ＝７．５Ｈｚ， ^３Ｊ＝１４．４Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６０９６
ポタシウム２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）アセタート

収率：８６．７％
ｍｐ：２３４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．７５−７．２０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６１７２
ポタシウム２−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：７６．６１％
ｍｐ：２２９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．２０−７．０７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６１７５
ポタシウム２−（３−（６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：７１．３８％
ｍｐ：２６４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．３４−６．８３（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７０（ｄ，３Ｈ， ^４Ｊ＝１．５Ｈｚ，ＯＣＨ_３），３．６７（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝１．８Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６１７６
ポタシウム２−（３−（６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：４４％
ｍｐ：２４６℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．４０−６．８８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．００（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．７７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），１．３５（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６１７７
ポタシウム２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：２４％
ｍｐ：２３７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．６１−７．２６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６１７８
ポタシウム２−（３−（４−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：５０％
ｍｐ：２５９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．５７−７．０７（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６１８０
ポタシウム２−（３−（５，６−ジメチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：９２．５％
ｍｐ：２７８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．３４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．２４（ｄ，６Ｈ， ^５Ｊ＝４．５Ｈｚ，２×ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６２１６
ポタシウム２−（３−（６−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：４８．２％
ｍｐ：２３６℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．０７−７．３７（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．２６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６２１７
ポタシウム２−（３−（４−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：５６．１％
ｍｐ：２６４．４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．０７−７．５４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６２２０
ポタシウム３−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）プロパノアート

収率：５４．９％
ｍｐ：２４９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．１９−７．７３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．３５（ｔ， ^３Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．３７（ｔ， ^３Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６２２１
ポタシウム４−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルウレイド）ブタノアート

収率：６３．８％
ｍｐ：２４１℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．６６−７．１５（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．１１（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３），２．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３），１．７４（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６２２２
ポタシウム３−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）プロパノアート

収率：５．５％
ｍｐ：２１９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．２１−７．１４（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．４２（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２），３．３（ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ_３），２．４５（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２，ＣＨ_２ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６２２３
ポタシウム３−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）プロパノアート

収率：５７．１％
ｍｐ：２２２℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ７．０４−７．４０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），３．１３（ｑ， ^３Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．８９（ｔ， ^３Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．６２（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６２７９
１−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−３−（２−ヒドロキシエチル）ウレア

収率：２７．２％
ｍｐ：２２３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．１７−７．８７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．８４（ｑ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ），３．４７（ｑ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２），３．２２（ｑ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ）。

ＫＨＧ２６２８０
２−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９１．８％
ｍｐ：２００℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．２８−７．６３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．９１（ｄ， ^３Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０３
エチル２−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：５８．５％
ｍｐ：１８５℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．２８−７．６３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．１１（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９１（ｄ， ^３Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），３．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．１７（ｔ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０４
エチル２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルチオウレイド）アセタート

収率：１８．５％
ｍｐ：２０４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．２６−７．９２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．４０（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．１５（ｑ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．２２（ｔ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０５
エチル２−（３−（６−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：４０％
ｍｐ：２９０．８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５７−７．１２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３０（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ_２），４．２４（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），２．３３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．２９（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０６
エチル２−（３−（４−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：１０．０％
ｍｐ：２１９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５９−７．０２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．４３（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ_２），４．１７（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．２３（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０７
エチル２−（３−（５，６−ジメチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：３２．５％
ｍｐ：２５５℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．１２−７．６５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３９（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．１５（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），２．２９（ｄ， ^４Ｊ＝４．５Ｈｚ，２×ＣＨ_３），１．２２（ｔ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０８
エチル２−（３−（６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：２３．２％
ｍｐ：３２４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．２９−６．７８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３１（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＣＨ_２），４．２４（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），１．３１（ｔ，３Ｈ， _３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３０９
エチル２−（３−（６−エトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：２６．０％
ｍｐ：１８３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．１２−７．６５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３９（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．１５（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．２２（ｔ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３１０
エチル２−（３−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：５．４％
ｍｐ：１６０℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５９−６．９９（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３９（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．１５（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．２２（ｔ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３１１
エチル２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：１５．２％
ｍｐ：１８４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．７７−７．１９（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３１（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＣＨ_２），４．２４（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．２９（ｔ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３１２
エチル２−（３−（４−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）アセタート

収率：１２．３％
ｍｐ：１９８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．８３−６．９６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３１（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＣＨ_２），４．２４（ｑ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．２９（ｔ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３１６
２−（３−ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルチオウレイド）酢酸

収率：９３．３％
ｍｐ：２００℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．０５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９７−７．１８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３２（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３３２
１−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−３−エチルウレア

収率：７３％
ｍｐ：１９７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．６６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８７−７．１７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．７１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，ＮＨ），３．２３−３．１４（ｍ，２Ｈ，エチルＣＨ_２），１．０８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３３４
２−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）チオウレイド）酢酸

収率：６７％
ｍｐ：１７２℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １３．２４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．６３−７．１８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．９２（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ_２），３．５２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３３５
２−（３−（５，６−ジメチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）酢酸

収率：９１％
ｍｐ：２１２℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６５−７．４３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３２（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ_２），２．３０（ｄ，６Ｈ， ^３Ｊ＝３．９Ｈｚ，２×ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３３６
２−（３−（６−エトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）酢酸

収率：２４％
ｍｐ：２００℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５５−６．９８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３４（ｄ，２Ｈ，３Ｊ＝Ｈｚ，ＣＨ２），４．０５（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．３４（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３４０
２−（３−（４−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）酢酸

収率：６０％
ｍｐ：２１４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．７５−７．１６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３４（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＣＨ_２），２．５８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３４２
Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−シアノアセトアミド

収率：５４％
ｍｐ：１４３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．４３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９１−７．２０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．４４（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＮＨ），４．２３（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３４４
１−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−３−（２−メトキシエチル）ウレア

収率：８０％
ｍｐ：２５７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．６２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９−７．１９（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．４３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．１Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２），３．３０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．２（ｂｒｓ２Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３４５
Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）アセトアミド

収率：２０％
ｍｐ：２４９℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ８．３０−７．１９（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０４（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＮＨ），３．８９（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３４６
２−（３−（６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９５％
ｍｐ：１９８．３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５３−６．９３（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．８７（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），３．７８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３４７
エチル２−（３−（６−エトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：８１％
ｍｐ：２６４℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １０．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５２−６．９２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．１３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），４．０３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９５（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）１．３３（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３４８
２−（３−（６−エトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９７％
ｍｐ：１９７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５２−６．９２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９８（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＮＨ），４．０３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．８８（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）１．３３（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３４９
エチル２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：９３％
ｍｐ：２９５℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．１５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０２−７．３６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．１３（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９６（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３５０
２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：８７％
ｍｐ：２１６℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ８．０２−７．３５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０１（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＮＨ），３．８９（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３５１
エチル２−（３−（４−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：９６％
ｍｐ：２１３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．５９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８−７．１８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．１３（ｑ，２Ｈ，３Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９５（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２），１．２１（ｔ，３Ｈ， ^３Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３５２
２−（３−（４−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９８％
ｍｐ：１９８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １１．５２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９−７．１８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．８８（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３５３
エチル２−（３−（５，６−ジメチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）アセタート

収率：９７％
ｍｐ：２６８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ。

ＫＨＧ２６３５４
２−（３−（５，６−ジメチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：８９％
ｍｐ：１９８℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６１−７．４１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．８７（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２），２．２７（ｄ，６Ｈ， ^３Ｊ＝２．７Ｈｚ，２×ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３５５
２−（３−（６−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９０％
ｍｐ：２０１℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６６−７．１５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０５（ｔ，１Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＮＨ），３．８８（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ_２），２．３７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３５６
２−（３−（４−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）ウレイド）酢酸

収率：９６％
ｍｐ：２０３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６９−７．０８（ｍ，３Ｈ，ＮＨ），６．９２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．８８（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＣＨ_２），２．５２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）。

ＫＨＧ２６３５７
３−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）プロパン酸

収率：３７．５％
ｍｐ：２３７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ １２．３５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５４−７．２６（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），３．４２（ｑ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ_２），２．５０（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３５８
４−（３−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ウレイド）ブタン酸

収率：５２％
ｍｐ：１９７℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．３６−７．１１（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．６４（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），３．３３（ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ_３），２．２７（ｔ，２Ｈ， ^３Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２），１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）。

ＫＨＧ２６３４１
２−（３−（６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チオウレイド）酢酸

収率：３８％
ｍｐ：１９３℃
^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ８．０６−７．４２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．３１（ｄ，２Ｈ， ^３Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ_２）。

［実験例１］
＜ベータ−アミロイドの処理＞
ベータ−アミロイド（Ａβ_{２５−３５}、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）は、無菌の脱塩水及び保存溶液（１ｍＭ、ＧＩＢＣＯ）により希釈し、零下７０℃において部分標本として保管した。処理のためにベータ−アミロイド保存溶液を処理培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ）において所望の濃度に合わせて希釈した。試薬は、ＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）下において保存溶液（１０ｍＭ）として新たに準備され、処理培地において所望の濃度に希釈した。

＜細胞培養＞
ＢＶ−２小膠細胞（亜洲大学薬理学教室から分譲）は、５％牛胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）５０Ｕ／ｍＬペニシリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）及び５０μｇ／ｍLストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）が補充されたＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）培地において５％ＣＯ_２及び９５％空気を含む大気条件下、３７℃において培養された。前記培地を１日につき１回ずつ交換し、細胞をそれぞれの実験規模に応じて適切な密度で平板培養した。

＜細胞生存率の測定＞
ＢＶ−２細胞を９６ウェルプレートに５×１０^４の密度で平板培養し、細胞生存率を通常のＭＴＴ分析法及びラクタートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）分析法によって測定した。前記ＭＴＴ分析法は、生存細胞のミトコンドリア代謝能によって異なり、細胞内酸化還元状態を反映する。培養後、細胞をＭＴＴ溶液（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）により４時間処理した。元の細胞に形成された藍色のホルマザン結晶を溶解バッファーに溶解させ、マイクロプレートリーダーにより５９５ｎｍにおける吸光度を測定した。前記培養培地から放出されたＬＤＨ活性を測定し、これを細胞死滅指数として評価した。前記培養培地をソジウムラクタート、ＮＡＤＨ及びソジウムピルバートを含有する試薬（ｔｅｓｔ、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）に添加した後、ＮＡＤＨによる３４０ｎｍにおける吸光度減少を測定した。未処理対照群の均等液におけるＬＤＨ活性を１００％として結果値を計算した。

＜サイトカイン測定＞
リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＬＰＳ）により処理された細胞（６ウェルの５×１０^５セル／３ｍＬ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を寄せ集めてリン酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）により洗浄した。遠心分離後、前記細胞を４℃においてＰｒｏ−ｐｒｅｐｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒを用いて溶解させた。溶解させた細胞溶解液からインターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファを測定するために酵素結合免疫吸着剤分析法プレート（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓｉｎｃ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を用いて測定した。マイクロプレートリーダーにより４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。なお、サイトカイン測定システム（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓｉｎｃ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を用いてサイトカインを測定した。

＜動物実験＞
１２〜１４週齢（２０−２５ｋｇ）のＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅ（ＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙｉｎｃ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を用いてｓｔｒｅｏｔａｘｉｓにより動物実験を行った。ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ（ＩＣＶ）注入方法は、Ｃｒａｆｔｅｔａｌ．、２００４ｂの脳室注入システムに準拠した。特定病原体未感染（ＳＰＦ）の施設において概ね１２時間明るさ／暗さの繰り返しを経験させた後、特定病原体未感染の施設において推奨する食餌及び水を供給した。全ての手順は、動物施設委員会において承認された手順に従い行った。

＜ウェスターンブロット分析＞
ベータ−アミロイドにより処理された細胞（６ウェルの５×１０^５セル／３ｍＬ、亜洲大学薬理学教室から分譲）を寄せ集めて、リン酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）により洗浄した。遠心分離後、前記細胞を４℃において０．１ｍＬのＲＩＰＡバッファー（１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％ソジウムジオキシコラート、０．１％ＳＤＳ、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、５０ｍＭグリセロホスファート、２０ｍＭＮａＦ、２０ｍＭＥＧＴＡ、１ｍＭＤＴＴ、１ｍＭＮａ_３ＶＯ_４及びプロテアーゼ抑制剤を含む）下において１５分間激しく振とうして溶解させた。氷において１０分間培養後、溶解質を５分間１４，０００ｒｐｍにて遠心分離した。細胞溶解質から得たタンパク質２０μｇを加熱して沸騰し、１２％ポリアクリルアミドゲルにおいて還元条件下において電気泳動した。１時間ブロッキングバッファー（２０ｍＭＴｒｉｓ、５％無脂肪乾燥牛乳を含む０．１％ツイン２０を含有するｐＨ７．４−バッファー食塩水）において培養して非特異的結合を抑制した。

一次抗体（抗ＥＲＫ１、抗ＥＲＫ２、抗リン酸−ＥＲＫ１及び抗リン酸−ＥＲＫ２、ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｃ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡから入手）を９０分メンブレインに露出させた。洗浄後、ブロットを１：１，０００にて希釈したセイヨウワサビ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）過酸化酵素接合型抗マウスＩｇＧと一緒に１時間かけて培養し、化学発光物質（ＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＳｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて製造者の使用説明書に従い１分間検出し、Ｘ−レイフィルムにより可視化させた。

＜統計学的分析＞
細胞生存率の変化をＡＮＯＶＡ（ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｖａｒｉａｎｃｅ）によって分析後、スチューデントのｔ検定を行った。ｐ値が０．０５以下である場合を統計学的な有意差ありとした。

＜結果及び考察＞
１．ＢＶ−２細胞においてベータ−アミロイドにより誘導された細胞炎症に対するＫＨＧ２５９６７の効果
ＢＶ−２細胞を５０μＭのベータ−アミロイドにより２時間かけて前処理し、前記ベータ−アミロイドにより処理された細胞に５０ｎＭＫＨＧ２５９６７を２４時間かけて処理した。顕微鏡分析に際しては、ＢＶ−２細胞を６ウェルプレートに５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌを使用し、ＭＴＴ分析に際しては、９６ウェルプレートにＢＶ−２細胞５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌを使用した。

前記試験において得られたＫＨＧ２５９６７化合物のＢＶ−２細胞におけるベータ−アミロイドにより誘起された毒性予防効果を図１Ａ及び図１Ｂに示す。図１Ａは、前記細胞を顕微鏡分析して得られた形態変化を示すものであり、図１Ｂは、ＭＴＴ分析による細胞生存率を測定して示すものであり、より具体的に、図１Ａは、ベータ−アミロイド及びＫＨＧ２５９６７を処理しなかった対照群、ベータ−アミロイド５０μＭを２４時間かけて処理した場合、及びベータ−アミロイド５０μＭを２時間処理後に５０ｎＭＫＨＧ２５９６７を２４時間処理した場合を示しており、図１Ｂは、図１Ａの各場合に対する細胞生存率の分析結果である。

図１Ａに示すように、正常のＢＶ−２細胞（対照群）と比較して、ベータ−アミロイドにより処理された細胞は神経細胞のような突起を示し、底面から離脱して凝集された状態で存在していたが、ＫＨＧ２５９６７を処理した場合には、損傷細胞の形態学的な特徴が緩和されることが確認できた。

また、図１Ｂに示すように、ベータ−アミロイドを処理した場合（対照群）の細胞生存率は３５％であったが、ここにＫＨＧ２５９６７を処理した場合には、細胞生存率が８３％と対照群と比較して格段に増加した。

一方、ＢＶ−２細胞におけるベータ−アミロイドによる神経細胞退行において、ベータ−アミロイドを添加する前に、予めＫＨＧ２５９６７を添加した培養液における神経退行に対する保護効果の結果も、上記のＫＨＧ２５９６７を後処理した場合とほとんど同様であることが確認できた。

２．ベータ−アミロイドにより誘起されたＥＲＫ１／２とｃａｓｐａｓｅ３の活性に及ぼすＫＨＧ２５９６７の効果
化合物ＫＨＧ２５９６７のベータ−アミロイドによるＥＲＫのリン酸化とｃａｓｐａｓｅ３発現に及ぼす効果を調べるために、ベータ−アミロイドにより刺激されたＢＶ−２細胞培養液においてＥＲＫ１／２（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ１＆２）とｃａｓｐａｓｅ３の可能なタンパク質発現を測定した。

ＥＲＫの活性は、トレオニン及びチロシンのリン酸化によるため、特異的な抗ホスホ−ＥＲＫ１／２抗体及び抗ＥＲＫ１／２抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｃ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）を用いた免疫ブロット分析により測定した。

Ｃａｓｐａｓｅ３活性は、アスパラギン酸とセリンが刺激により開裂されることを抗クリービッジ−ｃａｓｐａｓｅ３抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｃ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）を用いて免疫ブロット分析により測定した。対照群としては、ベータ−アクチン（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を用いて相対的な発現の度合いを測定した。

上記において得られた結果を図２Ａから図２Ｃに示す。図２Ａは、ＢＶ−２細胞においてＬＰＳにより誘起されたｐ−ＥＲＫ及びｃａｓｐａｓｅ３に対するＫＨＧ２５９６７の阻害度をウェスターンブロットを用いて示すものであり、ＢＶ−２細胞培養において５０ｎＭＫＨＧ２５９６７の存在下においてベータ−アミロイドを処理した場合、ベータ−アミロイドによるホスホ−ＥＲＫ１／２の増加が格段に抑えられることが分かった。

また、図２Ｂは、ＢＶ−２細胞においてＬＰＳにより誘起されたｐ−ＥＲＫに対するＫＨＧ２５９６７の阻害度を濃度計測的な分析により示すものであり、ＫＨＧ２５９６７と一緒に処理された培養液におけるホスホ−ＥＲＫ１及びホスホ−ＥＲＫ２の発現の度合いは、ベータ−アミロイドのみ処理された場合に比べて、９０％及び７０％減少されていることが分かる。

また、図２Ｃは、ＢＶ−２細胞においてＬＰＳにより誘起されたｃａｓｐａｓｅ３に対するＫＨＧ２５９６７の阻害度を濃度計測的な分析により示すものであり、ＫＨＧ２５９６７と一緒に処理された培養液におけるクリービッジ−ｃａｓｅｐａｓｅ３の発現の度合いは、ベータ−アミロイドのみ処理された場合に比べて９３％減少されていることが分かる。

３．ＢＶ−２細胞においてＬＰＳにより誘起された神経炎症変化によるサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果
ＢＶ−２細胞を１μｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）により２時間かけて前処理した後、５０ｎＭＫＨＧ２５９６７を６時間さらに処理した。細胞溶解液（ＩｎｔｒｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）から溶解させた溶解液からインターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファのサイトカイン変化量を測定した。インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファのサイトカインは、神経細胞炎症反応において特異的に上昇する物質であり、酵素結合免疫吸着剤の分析は特異的なサイトカインを測定することができる。

このようにして得られたＢＶ−２細胞培養においてＫＨＧ２５９６７による炎症性サイトカインＩＬ−１β及びＴＮＦ−αの生成阻害効果を図３Ａ及び図３Ｂにそれぞれ示す。図３Ａ及び図３Ｂに示すように、ＬＰＳを処理したもののサイトカインを１００％としたとき、ＬＰＳと５０ｎＭＫＨＧ２５９６７を一緒に処理した場合に、インターロイキン−１ベータは７０％、腫瘍怪死因子−アルファは６１％抑制された。

４．Ｃ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅｂｒａｉｎにおいてＬＰＳにより誘起された神経炎症変化によるサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７のｂｒａｉｎ特異的な効果
１２−１４週齢のＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅを用いてｉｎｖｉｖｏにおける前炎症性サイトカインの変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を調べてみた。Ｃｏｎｔｒｏｌ群は２週間ＰＢＳのみを投与した後、さらにＰＢＳを６時間かけて処理した。ＬＰＳ群は２週間ＰＢＳのみを投与後、ＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇをｓｔｒｅｏｔａｘｉｓを用いて脳に投与した。ＫＨＧ２５９６７処理群は、ＫＨＧ２５９６７（１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与により毎日繰り返して２週間処理した後、ＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇをｓｔｒｅｏｔａｘｉｓを用いて脳に投与した。ＬＰＳ投与６時間後に心臓や腹大靜脈を通じてｂｌｏｏｄ（血清）を寄せ集め、ｂｒａｉｎを取り出して溶解させた後、ｂｌｏｏｄとｂｒａｉｎ内における前炎症性サイトカイン（インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファ）の変化量を測定した。

このようにして得られたＫＨＧ２５９６７の経口投与による中枢神経系炎症に対する選択性結果を図４Ａから図４Ｄに示す。図４Ａは、脳におけるインターロイキン−１ベータ変化量を、図４Ｂは、脳における腫瘍怪死因子−アルファの変化量を、図４Ｃは、血清におけるインターロイキン−１ベータ変化量を、そして図４Ｄは、血清における腫瘍怪死因子−アルファの変化量を示すものである。図４Ａ及び図４Ｂに示すように、ＬＰＳのみ処理したもののサイトカインを１００％としたとき、ＫＨＧ２５９６７を２週間投与した後にＬＰＳを処理した群においては、インターロイキン−１ベータは５５％、腫瘍怪死因子−アルファは約４２％減少していた。

これに対し、図４Ｃ及び図４Ｄに示すように、ｂｌｏｏｄにおけるインターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファは、ＫＨＧ２５９６７の経口投与にも拘わらず、大したレベル差を示さなかった。このように抹消血液における前炎症性サイトカインの変化量と脳内サイトカインの変化量を比較してみたとき、ＫＨＧ２５９６７の脳特異的な効果を確認することができた。

［実験例２］生物活性（細胞死滅抑制）試験結果
ＢＶ−２細胞を５０μＭのベータ−アミロイドにより２時間かけて前処理し、前記ベータ−アミロイドにより処理された細胞に各薬物を２４時間かけて処理した。ＭＴＴ分析に際しては、９６ウェルプレートにＢＶ−２細胞５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌを使用した。ＭＴＴ結果に対する細胞生存率の定量分析結果（単位：％）を下記表２に示し、濃度別に実験を３回繰り返し行って得られた平均値である。

図１Ｂから明らかなように、本発明に係る化合物を処理することなく、ベータ−アミロイドのみ処理された細胞（ｃｏｎｔｒｏｌ）の生存率が３５％であることを考慮するとき、上記表２に示すほとんどの化合物は、ｃｏｎｔｒｏｌと比較して、有意な細胞死滅抑制効果を示し、３５％以下を示す化合物はいずれも５００ｎＭ以下の低濃度における結果であるため、濃度を高めることにより、ｃｏｎｔｒｏｌと比較して有意な細胞死滅抑制効果が得られることが期待される。

図１Ａは、ＢＶ−２細胞において、ベータ−アミロイドによる神経細胞毒性（Ａβ２５−３５−ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）に対する化合物ＫＨＧ２５９６７の保護効果を示すものであり、顕微鏡分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ベータ−アミロイドを処理せず、５％ＤＭＳＯのみを２６時間処理した対照群、
Ａｂ：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯをさらに投与して２４時間処理した場合、
Ａｂ＋ＫＨＧ２５９６７：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを２４時間処理した場合）
図１Ｂは、ＢＶ−２細胞において、ベータ−アミロイドによる神経細胞毒性（Ａβ２５−３５−ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）に対する化合物ＫＨＧ２５９６７の保護効果を示すものであり、ＭＴＴ結果に対する細胞生存率の定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ベータ−アミロイドを処理せず、５％ＤＭＳＯのみを２６時間処理した対照群、
Ａｂ：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯをさらに投与して２４時間処理した場合、
Ａｂ＋ＫＨＧ２５９６７：ベータ−アミロイド５０μＭを２時間かけて処理した後、５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを２４時間処理した場合）
図２Ａは、ＢＶ−２細胞において、ＥＲＫ１とＥＲＫ２のリン酸化活性及びＣａｓｐａｓｅ３の活性に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、リン酸化−ＥＲＫ１、リン酸化−ＥＲＫ２、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、及びｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ３に対する免疫ブロット分析結果である。各レーンに対する条件は、図１と同様である。図２Ｂは、ＢＶ−２細胞において、ＥＲＫ１とＥＲＫ２のリン酸化活性及びＣａｓｐａｓｅ３の活性に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、図２Ａに対するｐ−ＥＲＫの定量分析結果である。各レーンに対する条件は、図１と同様である。図２Ｃは、ＢＶ−２細胞において、ＥＲＫ１とＥＲＫ２のリン酸化活性及びＣａｓｐａｓｅ３の活性に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、図２Ａに対するｃａｓｐａｓｅ３の定量分析結果である。各レーンに対する条件は、図１と同様である。図３Ａは、ＢＶ−２細胞において、ＬＰＳにより引き起こされたサイトカインに対するＫＨＧ２５９６７のｉｎｖｉｔｒｏ保護効果を示すものであり、インターロイキン−１ベータの定量分析結果であり、ＬＰＳ処理後の反応結果を１００％として比較した相対的な％数値で計算した結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ＰＢＳを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、化合物５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを６時間処理した場合）。
図３Ｂは、ＢＶ−２細胞において、ＬＰＳにより引き起こされたサイトカインに対するＫＨＧ２５９６７のｉｎｖｉｔｒｏ保護効果を示すものであり、腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果であり、ＬＰＳ処理後の反応結果を１００％として比較した相対的％数値で計算した結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ＰＢＳを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、５％ＤＭＳＯを６時間処理した場合、
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１μｇ／ｍｌを２時間前処理した後、化合物５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７５０ｎＭを６時間処理した場合）。
図４Ａ、ＬＰＳにより引き起こされたＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅの脳と血液のサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、脳内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与した後、ＰＢＳを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７（１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与により毎日繰り返して２週間処理した後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合）
図４Ｂ、ＬＰＳにより引き起こされたＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅの脳と血液のサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、脳内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与した後、ＰＢＳを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７（１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与により毎日繰り返して２週間処理した後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合）
図４Ｃは、ＬＰＳにより引き起こされたＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅの脳と血液のサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、血液（血清）内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果を示すものである。

（Ｃｏｎｔｒｏｌ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与した後、ＰＢＳを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ：２週間５％ＤＭＳＯのみを投与後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合
ＬＰＳ＋ＫＨＧ２５９６７：５％ＤＭＳＯに溶かしたＫＨＧ２５９６７（１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与により毎日繰り返して２週間処理した後、ＰＢＳに溶かしたＬＰＳ１０ｍｇ／ｋｇを６時間かけて処理した場合）
図４Ｄは、ＬＰＳにより引き起こされたＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅの脳と血液のサイトカイン変化に対するＫＨＧ２５９６７の効果を示すものであり、血液（血清）内インターロイキン−１ベータと腫瘍怪死因子−アルファの定量分析結果を示すものである。

Claims

下記の一般式１で表される構造を有する下記の表のいずれか一つである化合物又はこの薬学的に許容可能な塩：

上記式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びｎは、下記の表１−１のとおりである；
（表１−１）
下記の一般式１で表される構造を有する下記の表のいずれか一つである化合物又はこの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有するアルツハイマー病、痴呆、パーキンソン病、脳卒中、アミロイド症、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ルー・ゲーリッグ病、遺伝性進行性舞踏病及びクロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病よりなる群から選ばれる神経退行性脳疾患予防又は治療用組成物：

上記式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びｎは、下記の表１−２のとおりである；
（表１−２）
前記組成物は、硬膏剤、顆粒剤、ローション剤、散剤、シロップ剤、液剤、エアロゾル剤、軟膏剤、流エキス剤、乳剤、懸濁剤、浸剤、錠剤、注射剤、カプセル剤及び丸剤よりなる群から選ばれる剤形として剤形化されたものである、請求項２に記載の組成物。
下記の一般式１で表される構造を有する下記の表のいずれか一つである化合物又はこの薬学的に許容可能な塩のアルツハイマー病、痴呆、パーキンソン病、脳卒中、アミロイド症、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ルー・ゲーリッグ病、遺伝性進行性舞踏病及びクロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病よりなる群から選ばれる神経退行性脳疾患の予防又は治療用組成物の製造のための使用：

上記式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びｎは、下記の表１−２のとおりである；
（表１−２）