JP5530875B2 - メラニン産生抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、紫外線等による皮膚の黒化を抑制するメラニン産生抑制剤、並びに美白効果に優れ、安全性の高い美白化粧料に関する。更に本発明は、紫外線による皮膚の黒化を抑制する美白効果に優れかつ安全性の高い美白化粧料における、サラシノールのメラニン産生抑制剤としての使用に関する。

近年、日焼けやシミ、ソバカスといった皮膚の色変化を防止又は回復する、いわゆる美白が注目されている。
日光や紫外線灯等に含まれる紫外線に皮膚が曝露されると、皮膚は炎症を生じ、皮膚組織は傷害され、いわゆるつや、きめ、潤い等を失う。特に真皮が紫外線により傷害されると、シワやタルミを生じ、いわゆる光加齢の原因となる。
紫外線暴露により発生する活性酸素やその影響により皮膚の細胞から放出される種々の因子は、メラノサイトにおけるチロシナーゼ活性を亢進させる。皮膚の色調に関与するメラニンは、メラノサイトでチロシンがチロシナーゼによって酸化されることにより産生される。紫外線によりチロシナーゼが活性化されると、メラニンが過剰に産生され、表皮細胞に受け渡され、皮膚の色調が変化し、黒化すると考えられている。よって、美白効果を得るために、メラニン産生を抑制することが求められている。

これまで、アスコルビン酸、コウジ酸、アルブチン、エラグ酸、又はその誘導体、或いは種々の植物エキスを含有する美白化粧料が提案されている。

一方、後記構造式（１）で示されるサラシノールは、サラシア属植物から発見された化合物である。サラシア属植物の根や幹はインドやスリランカの伝統医学アーユルヴェーダにおいて糖尿病の予防や初期治療に有効であることが伝承されている。近年ではサラシア属植物に血糖値上昇抑制作用があり、その作用メカニズムがαグルコシダーゼ活性阻害に基づく糖吸収抑制作用によるものであることが報告されている。
また、サラシア属植物の粗抽出物は、これまでにいわゆる美白剤への応用も提案されている（特許文献１及び２）。

特開２００６−１８８４６３号公報 特開２００８−１２０７７４号公報

これまで知られていた美白作用のある成分は、処方系中での安定性や溶解性が芳しくなく、また生体における作用も充分ではなく、更に皮膚にかぶれを起こすなど、安全性の面でも満足いくべきものではなかった。サラシア属植物の粗抽出物を用いても、美白作用が充分ではなく、また、作用を強めるために高濃度で使用すると細胞毒性が生じ、適していないことがわかった。
よって、高い美白作用があり、細胞毒性が低い美白成分が求められていた。

本発明者等は、このような状況に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、式（１）で表されるサラシノールが優れたメラニン産生抑制効果を有し、かつ、安定性及び安全性が高いことを見いだした。これにより、安全で安定な美白化粧料を提供できるに至った。
即ち本発明は、下記構成を有する。
＜１＞
下記構造式（１）で表される化合物を有効成分とするメラニン産生抑制剤であって、下記構造式（１）で表される化合物が、サラシア属植物及びその抽出物から単離精製、又は、合成することによって得られる化合物である、メラニン産生抑制剤。

＜２＞
美白化粧料の製造における、＜１＞に記載のメラニン産生抑制剤の使用。
本発明は、前記＜１＞及び＜２＞に係る発明であるが、以下、それ以外の事項（例えば、下記１〜３）についても記載している。
１．
下記構造式（１）で表される化合物を有効成分とするメラニン産生抑制剤。

２．
上記１に記載のメラニン産生抑制剤を含有することを特徴とする美白化粧料。
３．
美白化粧料の製造における、上記１に記載された構造式（１）で表される化合物のメラニン産生抑制の有効成分としての使用。

本発明により、メラニン産生抑制効果が高く、かつ、安定性及び安全性が高いメラニン産生抑制剤、詳しくは紫外線等による皮膚の色変化を抑制する美白化粧料が提供される。

サラシノール及び比較対照のメラニン産生抑制曲線を示す図である。 サラシノール及び比較対照の細胞生存曲線を示す図である。

以下、本発明の実施形態について詳述する。
なお、本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる化合物の製造例、実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

本発明のメラニン産生抑制剤は、下記構造式（１）で表される化合物を有効成分として含有する。

構造式（１）で表される化合物は、サラシノールと呼ばれ、サラシア属植物及びその抽出物から既知の方法、例えば分取クロマトグラフィーを用いて単離精製して得ることができる。
サラシア属植物とは、主としてスリランカやインドや東南アジア地域に自生するニシキギ科の植物で、より具体的にはサラシア・レティキュラータ（Ｓａｌａｃｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サラシア・オブロンガ（Ｓａｌａｃｉａ ｏｂｌｏｎｇａ）、サラシア・プリノイデス（Ｓａｌａｃｉａ ｐｒｉｎｏｉｄｅｓ）、サラシア・キネンシス（Ｓａｌａｃｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、サラシア・ラティフォリア（Ｓａｌａｃｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）、サラシア・ブルノニアーナ（Ｓａｌａｃｉａ ｂｕｒｕｎｏｎｉａｎａ）、サラシア・グランディフローラ（Ｓａｌａｃｉａ・ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ）、サラシア・マクロスペルマ（Ｓａｌａｃｉａ ｍａｃｒｏｓｐｅｒｍａ）から選ばれる１種類以上の植物が用いられる。
サラシア属植物の抽出物とは、根、幹、葉、花、果実など可食部の粉砕物、乾燥物、抽出物又はその乾燥粉末（エキス末）などを意味する。１種類以上の部位を混合して使用しても良い。より好ましくは根、幹から抽出したエキス末が用いられる。

該エキス末は、前述の可食部等から溶媒抽出によって得られたものを乾燥させたものである。抽出溶媒としては、水、又はメタノール、エタノールを初めとするアルコール類、あるいは水とアルコール類又はアセトンなどのケトン類との混合溶媒から選択されてよい。好ましくは水、アルコール、含水アルコールを用いる。より好ましくは、抽出溶媒として熱水若しくはエタノールあるいは含水エタノールを用いる。前記含水アルコールのアルコール濃度は、好ましくは３０〜９０質量％、より好ましくは４０〜７０質量％の濃度のものを使用すればよい。
乾燥方法は噴霧乾燥、凍結乾燥などが挙げられるが、これに限られるものではない。

また、既知の合成法、例えば特開２００９−５２８２９９号（国際公開第２００７−０９８５６７号）に記載の方法等を用いて合成したものを使用することもできる。

本発明におけるサラシノールの配合量は、メラニン産生抑制剤又は美白化粧料の総量を基準としてそれぞれ０．０００５〜１０．０質量％（以下、単に％と記する）が好ましい。この範囲の配合量とすることで、本発明の目的とする効果が十分となり、好ましい。

また、本発明において、美白化粧料を製造するにあたり、サラシノールをメラニン産生抑制の有効成分として使用する場合、その配合量は、上記と同様、美白化粧料の総量を基準として０．０００５〜１０．０質量％が好ましい。配合するサラシノールは、固体状、溶液状等、いかなる性状であってもよく、美白化粧料の製造工程中の適当な時期に添加して配合すればよい。

美白とは、より詳しくは皮膚の黒化、具体的にはメラニンの過剰産生による日焼け、シミやソバカスといった皮膚の色調・色素変化を予防又は回復し、皮膚本来の色調を維持又は復活、例えば肌を白くする作用である。
本発明のメラニン産生抑制剤又はそれを含有する美白化粧料を皮膚に用いることにより、美白効果を得ることができ、メラニンの過剰産生に起因する色素斑（例えば老人性色素斑（シミ）、雀卵斑（ソバカス）、肝斑、炎症後色素沈着、母斑等）の治療を行うこともできる。

本発明の美白化粧料は、一般に皮膚に塗布する形の化粧料の他、入浴剤として用いてもよい。
化粧料の場合も入浴剤の場合も、剤型は特に制限されず、一般に用いられる形態で使用でき、例えば水溶液、エマルション（Ｗ／Ｏ型又はＯ／Ｗ型）、或いは顆粒剤その他の粉末、錠剤等とすることが考えられ、賦形剤等を更に含んでいてもよい。より具体的にはクリーム、乳液、化粧水、パック、ジェル、スティック、シート、パップ等が挙げられる。
これらのいずれも通常の方法で製造でき、例えば乳液等の場合、水相及び油相をそれぞれ加熱溶解し、乳化分散して冷却することで製造することができる。

また、本発明の美白化粧料は、既に公知である、他の美白剤であるハイドロキノン、アルブチン、エラグ酸、ビタミンＣ誘導体、ビフェニル誘導体、４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ブタノール等を適宜組み合わせて配合し、その効果を増強あるいは補強させるなどしてもよい。

なお、本発明の化粧料、より詳しくは皮膚外用剤として用いる化粧料には、上記の他にも、通常化粧料に含有しうる他の成分を含有していてもよく、例えば色素（例えばタール系色素）、顔料（例えば酸化鉄、酸化チタン等）、保湿剤（例えばヒアルロン酸、グリセリン、多価アルコール、糖アルコール等）、防腐剤（パラベン等）、陰イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、脂肪酸セッケン、セチル硫酸ナトリウム等）、非イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、多価アルコール脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等）、陽イオン性界面活性剤（テトラアルキルアンモニウム塩等）、両イオン性界面活性剤（ベタイン型、スルホベタイン型、スルホアミノ酸型、Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム等）、天然物系界面活性剤（レシチン、リゾフォスファチジルコリン等）、天然高分子（ゼラチン、カゼイン、デンプン、アラビアガム、カラヤガム、グアガム、ローカストビーンガム、ドラガカントガム、クインスシード、ペクチン、カラギーナン、アルギン酸ソーダ等）、半合成高分子（メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース等）、合成高分子（ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル及びコーポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸ソーダ、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンオキシドポリマー等）、増粘剤（キサンテンガム等）、抗酸化剤（ジブチルヒドロキシトルエン等）等を含有することができる。

以下、実施例、製造例に基づいて本発明を詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。

製造例１〔サラシノールの単離精製〕
サラシア属植物の抽出物１ｋｇを酢酸エチル／メタノールで分液し、メタノール画分を減圧下で濃縮し、アミドカラムによる分取クロマトグラフィーにより成分を分取し、サラシノールを５００ｍｇ得た。得られたサラシノールは、ＮＭＲ及びＭＳ等を測定し、文献値と比較することにより同定した。分取クロマトグラフィーの条件を下記に示す。
カラム：ＴＯＳＯＨ ＴＳＫ−ＧＥＬ Ａｍｌｄｅ８０ １０μ１ φ２１．５ｘ３０ｃｍ
流速：１５ｍＬ ／ｍｉｎ
移動相：９０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）（０．１％酢酸）
検出：Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＥＳＩ ３３３

製造例１で得られたサラシノールを用いて、下記のメラニン産生抑制試験、細胞毒性試験を行った。なお、比較対照として、サラシア粗抽出物及び既知の美白有効成分を用いた。

実施例１
〔メラニン産生抑制試験〕
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地（ウシ胎児血清含有最小基本培地）で、１２穴培養プレートに２．５×１０^５個／ｗｅｌｌとなるように播種し、常法にて２４時間前培養した。
前培養後、試験培地に培地交換し、７２時間培養を行った。試験培地としては、上記前培養用培地にテオフィリンを０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、ジメチルスルホキシドを０．５％（ｖ／ｖ）、各種評価試料を表に記載の濃度となるように添加したものを使用した。
サラシア粗抽出物は、以下の方法で調製した。サラシア・レティキュラータ（Salacia reticulata）、サラシア・オブロンガ（Salacia oblonga）、サラシア・キネンシス（Salacia chinensis）の根及び幹の部分０．５ｋｇを粉砕後、１０Ｌの水を加え、１００℃、１時間の条件で抽出し、得られた抽出液を１００メッシュのフィルターでろ過した後スプレー乾燥し、５０ｇのエキス末として得たものを用いた。
エラグ酸は、和光純薬工業（株）製のエラグ酸二水和物を用いた。
アルブチンは、シグマアルドリッチ製のβアルブチンを用いた。
培養終了後、細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝液）で洗浄した後、１０％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシドを含有する１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を添加し、５０℃で３０分間超音波処理した後、溶解液の波長４００ｎｍにおける吸光度を測定し、ｗｅｌｌ中のメラニン量とした。また、同時に別の培養プレートにてＭＴＴアッセイによる生細胞数測定を実施した（試験条件は実施例２に準ずる）。最後にｗｅｌｌ中のメラニン量をＭＴＴアッセイによる測定値で規格化することで、単位細胞あたりのメラニン量とした。
評価試料を添加しない場合の単位細胞あたりのメラニン量を１００として、評価試料を添加した場合のメラニン産生抑制率（％）を求めた。

〔結果〕
結果を表１に示す。またサラシノール及び比較対照のメラニン産生抑制曲線を図１に示す。このメラニン産生抑制曲線より、メラニン産生を５０％抑制するＩＣ５０値を読み取った。結果を表２に示す。

本発明のサラシノールは、濃度依存的で顕著なメラニン産生抑制効果を示した。また、その効果は既存の美白有効成分であるアルブチン、コウジ酸、４−メトキシサリチル酸カリウムと比較しても、顕著に強いことがわかった。
サラシア粗抽出物もメラニン産生抑制効果を示したが、実施例２で示すように３００μｇ／ｍLを越えると細胞毒性が強く、ＩＣ５０の算出はできなかった。

実施例２
〔細胞毒性試験〕
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で、２４穴培養プレートに１．２５×１０^５個／ｗｅｌｌとなるように播種し、常法にて２４時間前培養した。
前培養後、試験培地に培地交換し、７２時間培養を行った。試験培地としては、上記前培養用培地にテオフィリンを０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、ジメチルスルホキシドを０．５％（ｖ／ｖ）、各種評価試料を表に記載の濃度となるように添加したものを使用した。
培養終了後、細胞をＰＢＳで洗浄した後、０．５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ溶液を５００μＬ／ｗｅｌｌ加え、インキュベーターで２時間保温した。その後、ジメチルスルホキシド１．５ｍＬを添加し、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定し生細胞数の指標とした。
評価試料を添加しない場合の生細胞数を１００として、評価試料を添加した場合の細胞生存率（％）を求めた。
〔結果〕
結果を表３に示す。またサラシノール及び比較対照の細胞生存曲線を図２に示す。

本発明のサラシノールは、メラニン産生を２９％まで抑制する濃度域（〜６６．６μｇ／ｍＬ）でも細胞毒性はほとんど見られなかったのに対し、サラシノールより強いメラニン産生抑制効果を示すエラグ酸は高濃度域（〜２０．３μｇ／ｍＬ）における細胞毒性が見られた。サラシア粗抽出物も濃度依存的に細胞毒性が見られた。
また、実施例１で比較対照に用いたアルブチン、コウジ酸、４−メトキシサリチル酸カリウムも高濃度域における細胞毒性が見られた（データ示さず）。
このことから、サラシノールはメラニン産生抑制効果に優れ、安全性の高い美白剤であることがわかった。

Claims (2)

1. 下記構造式（１）で表される化合物を有効成分とするメラニン産生抑制剤であって、下記構造式（１）で表される化合物が、サラシア属植物及びその抽出物から単離精製、又は、合成することによって得られる化合物である、メラニン産生抑制剤。
   

   
2. 美白化粧料の製造における、請求項１に記載のメラニン産生抑制剤の使用。

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