JP5551791B2 - ケラチン繊維の損傷評価方法 - Google Patents

Description

第１の態様では、本発明は、カチオン性アンモニウム基を含み、カルボキシル及び／又はスルホニル基を含まないカチオン性蛍光化合物を使用する、ケラチン繊維の損傷評価方法に関する。第２の態様では、本発明は、前記カチオン性蛍光化合物を使用する、異なるケラチン繊維の損傷を比較する方法に関する。これらの方法は、ケラチン繊維の損傷の程度を、定量的及び／又は定性的に評価するために有用であり、また、異なる由来の繊維、異なる繊維の部分、並びに／又は異なる化粧品処置、化学的処置、及び／若しくは機械的処置によって処置された繊維の損傷を比較するためにも有用である。前記方法は、組成物及び／又は処置の、他に対する優位性についての広告内容を裏付けるために有用である。

ケラチン繊維、具体的には、ヒトの毛髪繊維は、経時的に損傷し得る。損傷は、繊維の外層（すなわち、キューティクル）及び／又は内層（すなわち、皮質及び髄質）に関与してもよい。キューティクルは、重なり合う細胞（スケール）からなり、それらは近位端（基端部）にて接続されていて、毛髪繊維の遠位端（先端部）に向かって尖っている表面損傷がない場合、キューティクルは、通常滑らかな無傷のスケール端部とスケール表面を含む。対照的に、毛髪繊維が損傷される場合、スケール端部が損傷されている。損傷、特にキューティクルへの損傷は、化学的及び機械的な破壊、及び弾性及び引張変形、ベンディング及び繊維硬さ、並びにねじり及び繊維剛性を含む、挙動及び化粧品の挙動に及ぼす衝撃に対して毛髪をより脆弱にする。

損傷は、空気の汚染、日光への曝露、水プール、及び／又は雨を含めた、環境要因によって引き起こされる場合がある。損傷はまた、グルーミング（化粧品）処置、化学的処置、及び／又は機械的処置を、繊維に適用することによっても引き起こされる場合がある。グルーミング処置、特にシャンプーは、毛髪を洗うために一般的に用いられている。しかし、シャンプーは、異なる方法で毛髪を損傷する可能性がある。それらは、磨耗及び／又は侵食によって毛髪を損傷し得、並びに毛髪から構造脂質及び蛋白質性物質をゆっくりと溶解又は除去することによっても損傷し得る。化学的処置は、通常、毛髪の構造を改変することを伴い、毛髪繊維に深刻な損傷を付与し得る。これは、例えば毛髪の減少（パーマネントウェーブ過程）、毛髪の漂白並びに／又は酸化染料及び／若しくは永久染毛剤を用いる染毛が挙げられる。機械的処置、特にブラッシング、コーミング、タオル乾燥及びブロー乾燥は、磨耗及び／又は侵食によって毛髪を損傷し得る。

損傷は、適切な処置を適用することによって、予防され得及び／又は少なくとも部分的に修復され得る。特に、コンディショニング組成物は、損傷を予防及び／又は修復するために一般的に使用されている。それらは、長鎖脂肪アルコール及び／又は他の脂質化合物と組み合わせたカチオン性界面活性剤を含んでもよい。それらはまた、シリコーン系化合物を含んでもよい。

毛髪に生じた損傷の程度を評価することは、ケラチン繊維に対しての、様々な環境要因の影響、並びに化粧品（グルーミング）処置、化学的処置、及び機械的処置の影響を理解する目的において、興味深い。そのような評価はまた、毛髪の損傷の予防及び／又は修復に使用される処置の有効性を立証する目的においても、興味深い。種々の解析方法を使用する、毛髪の損傷を評価するためのいくつかの試みが、これまでに報告されている。しかしながら、そのような方法は、複雑で高価な技術的装置を通常必要とし、及び／又は信頼性あるデータを提供しない。特に、いくつかの蛍光化合物を使用する方法が既に報告されている。しかしながら、例えば、健康な毛髪（すなわち未損傷）と損傷した毛髪とを比較する場合、両毛髪間から取得されたデータは、著しくは異ならないように見える。

したがって、ケラチン繊維、具体的には、ヒトの毛髪繊維の損傷を評価する方法を提供する必要性が存在する。具体的には、化粧品処置、化学的処置、及び／又は機械的処置を使用して処置されたケラチン繊維の損傷を評価する方法を提供する必要性が存在する。更には、異なるケラチン繊維の損傷、例えば、処置されていない繊維の損傷と、処置された繊維、又は異なる処置によって処置された繊維の損傷とを、評価及び比較する方法を提供する必要性も存在する。化粧品用組成物（具体的には、コンディショニング組成物）に関しては、このような組成物の、毛髪繊維の損傷の予防及び／又は修復に関する有効性を評価する方法を提供する必要性が存在する。毛髪繊維の損傷の予防及び／又は処置に関する、２種以上の化粧品用組成物、具体的にはコンディショニング組成物の、有効性を比較する方法を提供する必要性も存在する。最終的には、毛髪繊維の損傷の予防及び／又は修復に関する、組成物の有効性についての（又は、比較組成物に対するこの組成物の優位性についての）広告内容を裏付ける方法を提供する必要性が存在する。

本発明は、ケラチン繊維の損傷を評価するための方法に関し、本方法は、特定のカチオン性蛍光化合物で繊維の少なくとも１つのサンプルを標識付けする工程と、標識付けされた繊維の蛍光を評価する工程と、を含む。本発明はまた、ケラチン繊維の損傷を評価し比較するための方法に関し、特に繊維の少なくとも２つの異なるサンプルを提供する工程と、それらを特定のカチオン性化合物で標識付する工程と、標識付された繊維の蛍光を評価し、次いで比較する工程と、を含む。なお、本発明では、カチオン性蛍光化合物として、式Ｉのチアゾール化合物を用いる。これらの方法は、環境曝露への露出後及び化粧品を使用しての処置後、化学的又及び／又は機械的処置後、の繊維の損傷の程度を評価し比較する工程を可能にする。これらの方法はまた、毛髪への損傷を予防及び／又は修復するための組成物の効能も評価することを可能にする。更には、これら方法は、毛髪への損傷の予防及び／又は修復のための組成物の効能を評価し比較する工程を可能にする。

第１の態様では、本発明は、ケラチン繊維の損傷を評価するための方法に関し、本方法は、
−ケラチン繊維の少なくとも１つのサンプルを提供する工程と、
−第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
−前記繊維のサンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
−適切な励起波長を提供する発生源を使用して、標識付された繊維の蛍光を評価する工程と、を含む。

驚くべきことに、発明者らは、ケラチン繊維表面の損傷が、蛍光顕微鏡を使用することによって並びに使用される蛍光化合物を注意深く選択することによって、定性的かつ定量的の双方にわたって評価され得ることを見出した。ただし、発明者らは、少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物が、適切な励起波長を放射する装置と組み合わされて用いられた場合、繊維の蛍光を評価するために有用なデータを取得し、並びにそのような蛍光が損傷の特定の程度と相関することを見出した。同様に、これら特定なカチオン性蛍光化合物は、データの取得が、処置された繊維の蛍光を未処置の繊維、又は２つの異なる処置で処置された繊維の蛍光に対して比較することを可能にする。理論によって拘束されるものではないが、少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物が、未損傷の繊維に対して損傷した繊維により顕著に相互作用し、そのような相互作用が繊維の損傷の程度を増加させると信じられている。特に、少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、これらカチオン性蛍光化合物は、特に静電気による引力によって、損傷したスケール端部及び表面に特異的に相互作用する（損傷した繊維で典型的）と信じられている。これとは対照的に、それらは滑らかな未損傷のスケール端部及びスケール表面にはるかに少なく相互作用するか、全く相互作用しない場合もある（健康又は未損傷の繊維で典型的）。

本発明による、この方法は、少なくとも１つのケラチン繊維のサンプルを提供する工程（いわゆる、「提供工程」）を含む。前記サンプルは、１本の繊維、２本又は数本の繊維を含んでもよい。前記サンプルが少なくとも２本の繊維を含む場合、前記繊維は、その一端にて、あるいは両端にて、互いに束ねられてもよい。通常、前記サンプルは、同一の由来（例えば、同一人物、及び身体の同一領域）の繊維、並びに／又は同一の部分（例えば、毛髪繊維の、根元端部又は先端端部）の繊維を含み、並びに／又は同一の化粧品処置、化学的処置、及び／若しくは機械的処置が施されている。

繊維は、カチオン性蛍光化合物と接触されるのに十分な長さ、並びにそれらの蛍光が評価されるために十分な長さであり得る。繊維は、好ましくは、１ｃｍ〜１０ｃｍの長さ、より好ましくは、１ｃｍ〜５ｃｍの長さ、更により好ましくは、２ｃｍ〜５ｃｍの長さを有する。

繊維は、哺乳類の毛から、好ましくはヒトの毛髪から、より好ましくはヒト女性の毛髪から、選択することができる。ヒトの毛髪の由来は、白人、アフリカ人、アジア人、又は任意の他の由来であってもよい。

毛髪繊維は、身体の任意の部位から、例えば、脚、腕、胴体、顔面又は頭皮から得ることができる。毛髪繊維は、頭皮から得ることが好ましい。

方法は、少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程（いわゆる「提供工程」）を更に含む。本化合物は、負に荷電されたケラチン繊維と相互作用することが可能である。本化合物はまた、カチオン性蛍光プローブと呼ばれてもよい。特に、前記相互作用は、カチオン性蛍光化合物の正荷電された第四級アンモニウム基とケラチン繊維の負荷電された基との間の静電気による引力によって、発生してもよい。驚くべきことに、発明者らは、カチオン性蛍光化合物と毛髪繊維との間の相互作用（並びに、したがって、蛍光強度）が、損傷の程度に関連性がある、ケラチン繊維の全体の負電荷に密接に関係していることを見出した。したがって、これらの特定なカチオン性蛍光化合物の使用は、蛍光強度とケラチン繊維の損傷の程度との間の明確な相関を立証することを可能にする。これとは対比的に、発明者らは、少なくとも１つのカルボキシル基及び／又はスルホニル基を含むカチオン性蛍光化合物を使用した場合、特に、未損傷の毛髪繊維に対して働いた場合、蛍光強度の大きな変動が得られることも見出した。このような化合物は、例えばエタンアミニウム、Ｎ−［９−（２−カルボキシフェニル）−６−（ジエチルアミノ）−３Ｈ−キサンチン−３−イルイデン］−Ｎ−エチル−、塩化物である。このような変動が、蛍光強度と損傷度との間の相関性を表示することは困難である。

カチオン性蛍光化合物は、少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まず、アクリデン、アゾ、ジアリールメタン、ユーロジン、オキサゾン、チアゾール、トリアリールメタン、サフラニン、又はそれらの混合物の部類に属する、カチオン性蛍光化合物のグループから選択されてもよい。

特に、カチオン性蛍光化合物は、色指数（これ以降「Ｃ．Ｉ．」と呼ぶ）番号４６００５、４１０００、５００４０、５１１８０、４９００５、４２０００、４２０４０、４２５００、４２５１０、４２５２０、４２５５５、４２５６３、４２５８５、４２６００、４４０４５、４４０８５、５０２４０、又はそれらの混合物の化合物のグループから選択されてもよい。前記化合物は、４６００５（アクリジンオレンジ、ベーシックオレンジ１４、Ｃ₁₇Ｈ₂₀Ｎ₃Ｃｌ）、４１０００（アウラミンＯ、ベーシックイエロー２、Ｃ₁₇Ｈ₂₂Ｎ₃）、５００４０（ニュートラルレッド、ベーシックレッド５、Ｃ₁₅Ｈ₁₇Ｎ₄Ｃｌ）、５１１８０（ナイルブルー、ベーシックブルー１２、Ｃ₂₀Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₂）、４９００５（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔ、ベーシックイエロー１、Ｃ₁₇Ｈ₁₉Ｎ₂ＳＣｌ）、４２０００（マラカイトグリーン、ベーシックグリーン４、Ｃ₂₃Ｈ₂₅Ｎ₂Ｃｌ）、４２０４０（ブリリアントグリーン、ベーシックグリーン１、Ｃ₂₇Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₄Ｓ）、４２５００（パラロサニリン、ベーシックレッド９、Ｃ₁₉Ｈ₁₈Ｎ₃Ｃｌ）、４２５１０（ロサニリン、ベーシックバイオレット１４、Ｃ₂₀Ｈ₂₀Ｎ₃Ｃｌ）、４２５２０（ニューフクシン、ベーシックバイオレット２、Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｎ₃Ｃｌ）、４２５５５（クリスタルバイオレット、ベーシックバイオレット３、Ｃ₂₅Ｈ₃₀Ｎ₃Ｃｌ）、４２５６３（ビクトリアブルー、ベーシックブルー８、Ｃ₃₄Ｈ₃₄Ｎ₃Ｃｌ）、４２５８５（メチルグリーン、ベーシックグリーン２０、Ｃ₂₆Ｈ₃₃Ｎ₃Ｃｌ₂）、４２６００（エチルバイオレット、ベーシックバイオレット４、Ｃ₃₁Ｈ₄₂Ｎ₃Ｃｌ）、４４０４５（ビクトリアブルー、ベーシックブルー２６、Ｃ₃₃Ｈ₃₂Ｎ₃Ｃｌ）、４４０８５（ナイトブルー、ベーシックブルー１５、Ｃ₃₈Ｈ₄₂Ｎ₃Ｃｌ）、５０２４０（サフラニン、ベーシックレッド２、Ｃ₂₀Ｈ₁₉Ｎ₄Ｃｌ（ジメチル）及びＣ₂₁Ｈ₂₁Ｎ₄Ｃｌ（トリメチル））のように、それらの一般名、Ｃ．Ｉ．名、及び／又は経験式によって更に定義されてもよい。カチオン性蛍光化合物は、本化合物が少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まず、負に荷電したケラチン繊維と相互作用する限りにおいて、任意の別個の化合物であってもよい。

カチオン性蛍光化合物は、ヨウ化メチルなどのような任意な適切なアルキル化剤を用いて、第一級、第二級及び／又は第三級アンモニウム基を含む、カチオン性蛍光化合物を四級化することによって得られてもよい。例えば、カチオン性蛍光化合物は、２１０００（ビスマルクブラウン、ベーシックブラウン１、Ｃ₁₈Ｈ₂₀Ｎ₈Ｃｌ₂）、５２０１５（メチレンブルー、ベーシックブルー９、Ｃ₁₆Ｈ₁₈Ｎ₃ＳＣｌ）、５２０２０（メチレングリーン、ベーシックグリーン５、Ｃ₁₆Ｈ₁₇Ｎ₄Ｏ₂ＳＣｌ）、５２０２０（トルイジンブルー、ベーシックブルー１７、Ｃ₁₅Ｈ₁₆Ｎ₃ＳＣｌ）のＣ．Ｉ．番号（一般名、Ｃ．Ｉ．名及び／又は経験式）の化合物のグループから選択された化合物から入手し得る。

カチオン性蛍光化合物は、チアゾールの部類に属する化合物のグループから選択されるのが好ましい。好適な実施形態では、カチオン性蛍光化合物は、式Ｉ：

のチアゾール化合物である。式Ｉの前記チアゾール化合物は、一般的に知られていて、以降Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔと呼ぶ。Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔは、３１８．９の分子量を有し、４００ｎｍ〜４４０ｎｍの励起波長にて４５０ｎｍ〜６００ｎｍの放射波長の蛍光を放射する。特に、Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔは、５００ｎｍ〜５６０ｎｍの励起波長で緑色蛍光を放射する。式Ｉの前記チアゾール化合物の市販されている発生源は、例えばＳｉｇｍａからのＴｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔである。Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔを提供することは、発明者らによって見出されたように、本化合物とケラチン繊維との間の相互作用が、ケラチン繊維が損傷しているか否かによって、並びに損傷の程度によって著しく異なることが特に有益である。したがって、Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔは、異なる由来の、異なる部分からの及び／又は異なる処置を施された、ケラチン繊維間の損傷の程度を比較するために特に好適である。

カチオン性蛍光化合物は、任意の適切な形状、例えば、粉末、液体又は固体形状で提供されてもよい。カチオン性蛍光化合物は、溶液の形で提供されるのが好ましく、水溶液で提供されることがより好ましい。溶液は、組成物の総重量で１ｐｐｍ〜３０００ｐｐｍの、好ましくは１００ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍの、より好ましくは４００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍの、前記化合物を含む。溶液は、好適な水性担体、好ましくは水を含んでもよい。

方法は、繊維のサンプルをカチオン性蛍光化合物で標識付する工程（いわゆる「標識付工程」）を更に含む。標識付工程は、カチオン性蛍光化合物が繊維と相互作用するために、適切な方法によって、並びに十分な所定の期間の時間で、サンプルをカチオン性蛍光化合物と接触するように配置することによって実行され得る。本工程を実行後、繊維を以降「標識付繊維」と称することができる。

カチオン性蛍光化合物が溶液の形状で提供される場合、サンプルは、前記サンプルを溶液中に浸漬させることによって、カチオン性蛍光化合物と接触させるよう配置される。

カチオン性蛍光化合物が繊維と相互作用するために十分な時間を有することを確実にするために、繊維は、１秒〜１０分間、より好適には１秒〜１分間、蛍光化合物と接触するよう配置されるのが好ましい。

該方法は、適切な励起波長を提供する発生源を使用して、標識付繊維の蛍光を評価する工程（いわゆる「評価工程」）を更に含む。励起波長は、使用されるカチオン性蛍光化合物に依存するであろう。ただし、それぞれのカチオン性蛍光化合物は、特定な吸収スペクトルを有する。励起状態における化合物を得るために（化合物が特定的な波長にて光を放射するために、以降「放射波長」と称する）、発生源は適切な励起波長を提供するべきである。特定的な波長を提供する任意の市販の発生源が使用されてもよい。

Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔは、励起状態にある場合、つまり４５０ｎｍ〜６００ｎｍ（特に緑色蛍光に関しては５００ｎｍ〜５６０ｎｍ）の「蛍光性」放射波長で、４４０ｎｍにて最大吸収を有する。Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ Ｔを励起させるために、４００ｎｍ〜４４０ｎｍの励起波長が提供されるべきである。

標識付繊維の蛍光を評価する工程は、カチオン性蛍光化合物によって放射された波長（すなわち蛍光）を検出するために好適な、必要な場合は表示及び／又は記録するために適した任意の装置を使用して実行されてもよい。検出は、蛍光顕微鏡を使用して実行されてもよい。市販の蛍光顕微鏡は、例えば、Ｎｉｋｏｎから入手可能なＥｃｌｉｐｓｅ ８０ｉ又はＰａｒｔｅｃから入手可能なＣｙｓｃｏｐｅである。蛍光の評価は、好適なソフトウェアを使用して補助されてもよい。観測のための市販のソフトウェアは、例えば、Ｍｉｔａｎｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能なＤｙｎａｍｉｃＥｙｅ ＲＥＡＬ及びＭｉｔａｎｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能なＬｕｍｉｎａＶｉｓｉｏｎである。画像解析のための市販のソフトウェアは、例えばＭｉｔａｎｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能なＬｕｍｉｎａＶｉｓｉｏｎである。

サンプルの蛍光は、双眼鏡を通しての観測などのような直接的目視検査によって、又は写真解析などのような間接的目視検査のいずれかの目視検査によって定性的に評価されてもよい。サンプルの蛍光は、データ解析によって定量的に評価されてもよい。

方法はまた、繊維のサンプルを処置する工程（いわゆる「処置工程」）を含んでもよい。この処置工程は、好ましくは、提供工程の後、並びに標識付け工程の前に実行される。処置工程は、任意の好適な化粧品用組成物、化学的処置、及び／又は機械的処置を使用して、繊維のサンプルを処置することにより、実行することができる。

本工程は、化粧品用組成物を、ケラチン繊維に対して適用することにより、実行することができる。シャンプー、コンディショニング組成物、ヘアーリンスオフトリートメント、ヘアーリーブオントリートメント、スタイリング組成物などのような当業者に既知のいずれかの好適な化粧品用組成物が使用され得る。例えば、商標名Ｐａｎｔｅｎｅ（登録商標）及びＨｅａｄ ＆ Ｓｈｏｕｌｄｅｒｓ（登録商標）の、いずれの市販のシャンプー、コンディショナー、ヘアリンスオフトリートメント、及びヘアリーブオントリートメントも使用することができる。

１つのみの組成物が繊維に適用されてもよい。別の方法としては、２つ又はいくつかの組成物を、同時に又は順次に、適用してもよい。更には、各組成物の適用の前、及び／又は適用の後に、繊維を更に、湿潤させ、すすぎ洗いし、及び／又は乾燥させてもよい。１つの実施形態では、この処置工程は、シャンプーで繊維を処置（洗浄）し、次いで洗浄した繊維を水ですすぎ洗いし、次いで繊維を乾燥させることを含む。別の実施形態では、処置工程は、シャンプーで繊維を処置（洗浄）し、次いで洗浄した繊維を水ですすぎ洗いし、次いでコンディショニング組成物で繊維を処置し、次いで処置した繊維を水ですすぎ洗いし、次に、繊維を乾燥させることを含む。別の実施形態では、処置工程は、シャンプーで繊維を処置（洗浄）し、次いで洗浄した繊維を水ですすぎ洗いし、次いでコンディショニング組成物で繊維を処置し、次いで処置した繊維を水ですすぎ洗いし、次いでヘアリンスオフトリートメントで繊維を少なくとも１回処置し、次いで処置した繊維を水ですすぎ洗いし、次いで繊維を乾燥させることを含む。

択一的に又は相補的に、本工程は、化学的処置を使用して繊維のサンプルを化学的に処置することによって実行されてもよい。パーマネントウェーブ処置、ブリーチ処置、及び／又は色染め処置などの、当該技術分野において既知の、いずれの好適な化学的処置も使用することができる。

択一的に又は相補的に、本工程は、繊維を機械的に処置することによって実行されてもよい。ブラッシング、コーミング、タオル摩擦、及び／又はブロー乾燥などの、当該技術分野において既知の、いずれの好適な機械的処置も使用することができる。

方法はまた、過剰のカチオン性蛍光化合物をすすぎ洗いする工程を含んでもよい（いわゆる「すすぎ洗い工程」）。すすぎ洗い工程は、標識付工程後並びに評価工程前に実行されてもよい。過剰のカチオン性蛍光化合物、すなわち繊維と相互作用しない化合物（いわゆる「遊離化合物」）を除去するための繊維のすすぎ洗い工程は、遊離化合物の存在によって衝撃を受ける繊維の蛍光の評価を回避するために有益である。繊維は、水を使用してすすぎ洗いされてもよい。特に、本工程は、過剰のカチオン性蛍光化合物を除去するために十分な所定の期間時間で、水溶液中で繊維のサンプルを浸漬することによって実行され得る。水溶液は水が好ましく、脱イオン水がより好ましい。その期間時間は、好ましくは１秒〜１０分、更に好ましくは１秒〜１分である。

本発明の方法はまた、前記評価を利用して広告内容を裏付ける工程（いわゆる、「広告工程」）も含み得る。ただし、本発明は、ケラチン繊維の損傷度を蛍光強度と相関させることが可能である。１つの処置（例えば、コンディショニング組成物）を広告する場合、本発明の方法を使用して得られたデータ及び／又は写真は、前記処置が繊維損傷を予防及び／又は修復するという広告内容の、裏付け及び／又は立証のために使用することができる。

第２の態様では、本発明は、
−ケラチン繊維の２つの異なるサンプルを提供する工程と、
−少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
−前記繊維のサンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
−適切な励起波長を提供する発生源を使用して、それぞれの繊維のサンプルの蛍光を評価する工程と、
−サンプル間の蛍光を比較する工程と、
を含む方法に関する。

該方法は、少なくとも２つ、好ましくは２〜４つ、より好ましくは２つのケラチン繊維の異なるサンプルを提供する工程を含む。本明細書で使用するとき、「異なるサンプル」は、繊維の由来、繊維の部分及び／又は繊維に適用された処置によって、互いに異なっているサンプルを指す。

１つの実施形態では、サンプルは異なるヒトから得られてもよい。あるいは、サンプルは、同一人物からではあるが、身体の異なる部分から得られてもよい。

別の実施形態では、一方のサンプルは、繊維の先端部分を含み得、他方のサンプルは、同一繊維の根元部分を含み得る。同一繊維の、異なる部分を提供して比較すること、具体的には、先端と根元とを提供して比較することにより、繊維の成長につれての、経時的な損傷の程度の差異を評価することが可能になる。

別の実施形態では、一方のサンプルは未処理繊維を含み得、他方のサンプルは、化粧品用組成物で処置された繊維を含み得る。他方のサンプルは、シャンプー、及び／又はコンディショニング組成物、及び／又はヘアリンスオフトリートメント、及び／又はリーブオントリートメント、及び／又は任意の他の好適な化粧品用組成物で処置することができる。処置された繊維と未処置の繊維との比較は、シャンプーなどの組成物の、毛髪に対する損傷効果を評価するために、また対照的に、繊維の損傷の予防及び／又は修復に関する、コンディショニング組成物などの組成物の利益を評価するために、有益である。

別の実施形態では、サンプルは、異なる化粧品用組成物で処置することができる。例えば、網羅的なものではないが、（１）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置し、他方のサンプルを別のシャンプーで処置することができる。（２）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置することができ、他方のサンプルを同じシャンプーで処置し、次いで１つのコンディショナーで処置することができる。（３）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置し、次いで１つのコンディショナーで処置することができ、他方のサンプルを同じシャンプーで処置し、次いで別のコンディショナーで処置することができる。（４）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置し、次いで１つのコンディショナーで処置することができ、他方のサンプルを同じシャンプーで処置し、次いで同じコンディショナーで処置し、次いでリンスオフトリートメントで処置することができる。（５）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置し、次いで１つのコンディショナーで処置することができ、他方のサンプルを同じシャンプーで処置し、次いで同じコンディショナーで処置し、次いでリーブオントリートメントで処置することができる。（６）一方のサンプルを１つのシャンプーで処置し、次いで１つのコンディショナーで処置することができ、他方のサンプルを別のシャンプーで処置し、次いで同じコンディショナーで処置することができる。（７）一方のサンプルを１つのシャンプーで１回処置し、他方のサンプルを同じシャンプーで２回又は数回処置することができる。（８）一方のサンプルを１つのコンディショナーで１回処置し、他方のサンプルを同じコンディショナーで２回又は数回処置することができる。異なる処置がなされた繊維を比較することは、異なるシャンプーの損傷効果の比較のために有益であり（（１）を参照）、コンディショナーの、シャンプー処置に対する緩和効果の評価のために有益であり（（２）を参照）、繊維の損傷の予防及び／又は修復に関する、コンディショニング組成物の利益の比較のために有益であり（（３）を参照）、リンスオフトリートメントの、シャンプー処置に対する緩和効果の評価のために有益であり（（４）を参照）、リーブオントリートメントの、シャンプー処置に対する緩和効果の評価のために有益であり（（５）を参照）、１つのコンディショナーの、異なるシャンプー処置に対する緩和効果の比較のために有益であり（（６）を参照）、繊維に対する反復処置の効果の比較のために有益である（（７）及び（８）を参照）。

別の実施形態では、一方のサンプルは、未処置の繊維を含み得、他方のサンプルは、化学的に処置されている繊維を含む。別の方法としては、サンプルは、異なる化学的処置で処置された繊維を含み得る。

別の実施形態では、一方のサンプルは、未処置の繊維を含み得、他方のサンプルは、機械的に処置されている繊維を含む。別の方法としては、サンプルは、異なる機械的処置で処置された繊維を含み得る。

提供（カチオン性蛍光化合物）工程、任意の／択一的処置工程、標識付工程、任意の洗い流し工程、評価工程、及び任意の広告工程は、本発明の第１の態様と共にこれまでに定義されている。

該方法はまた、サンプルの蛍光を比較する工程（いわゆる「比較工程」）を含む。サンプルの蛍光は、双眼鏡を通しての観測などのような直接的目視検査によって、又は写真解析などのような間接的目視検査のいずれかの目視検査によって定性的に比較されてもよい。サンプルの蛍光はまた、データ解析によって定量的に比較されてもよい。比較工程は、例えば、繊維上への１つの処置の効果を比較するために（処置なしに対して）、少なくとも２つの異なる処置の損傷効果を比較するために、繊維の損傷を予防及び／又は修復するための少なくとも２つの異なる処置の効能を比較するために有益である。

本発明の方法はまた、前記評価を利用して広告内容を裏付ける工程（いわゆる、「広告工程」）も含み得る。２つの異なるサンプル間の比較の結果に基づいた広告工程を行なうことは、例えば、繊維の損傷の予防及び／若しくは修復に関する処置の有効性の広告のために、並びに／又は損傷の予防及び／又は修復に関する、１つの処置の、別の処置に対する優位性の広告のために、有益である。１つの処置（例えば、コンディショニング組成物）を別の処置と比較して広告する場合、本発明の方法を使用して得られたデータ及び／又は写真は、繊維の損傷の予防及び／又は修復に関して、前記処置が他の処置と比べて優れた効能を提供するという広告内容の、裏付け及び／又は立証のために使用することができる。

特定の実施形態では、本発明はケラチン繊維の損傷を評価するための方法に関し、方法は、
−ケラチン繊維の少なくとも１つのサンプルを提供する工程と、
−前記サンプルを化粧品、化学的及び／又は機械的処置で処置する工程と、
−少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
−過剰なカチオン性蛍光化合物をすすぎ洗いする工程と、
−前記処置したサンプルを前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
−適切な励起波長を提供する発生源を使用して、標識付処置したサンプルの蛍光を評価する工程と、
−必要に応じて、繊維の損傷を予防及び／又は修復するための処置の効能及び／又は性能についての広告内容を裏付けるために、前記評価を使用する工程と、
を含む。

別の特定の実施形態では、本発明は、異なるケラチン繊維の損傷を評価し比較するための方法に関し、この方法は、
−ケラチン繊維の２つの異なるサンプルを提供する工程と、
−サンプルの１つを化粧品、化学的及び／又は機械的処置で処置する工程と、
−少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
−過剰のカチオン性蛍光化合物をすすぎ洗いする工程と、
−未処置サンプルと処置サンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
−適切な励起波長を提供する発生源を使用して、標識付した、未処置サンプル（対照）及び標識付した処理サンプルの蛍光を評価する工程と、
−両サンプルの蛍光を比較する工程と、
−必要に応じて、繊維の損傷を予防及び／又は修復するために、対照に対する処置の効能及び／又は性能についての広告内容を裏付けるために、前記評価及び比較を使用する工程と、
を含む。

別の特定の実施形態では、本発明は、異なるケラチン繊維の損傷を評価し比較するための方法に関し、方法は
−ケラチン繊維の２つの異なるサンプルを提供する工程と、
−異なる化粧品、化学的及び／又は機械的処置で、両サンプルを処置する工程と、
−少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
−過剰のカチオン性蛍光化合物をすすぎ洗いする工程と、
−処置された両サンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
−適切な励起波長を提供する発生源を使用して、標識付され、処置されたサンプルの双方の蛍光を評価する工程と、
−両サンプルの蛍光を比較する工程と、
−必要に応じて、繊維の損傷を予防及び／又は修復するための第２の処置に対する第１の処置の優位性についての広告内容を裏付けるために、前記評価及び比較を用いる工程と、
を含む。

材料
毛髪繊維：２５ｃｍの長さのアジア系女性の毛髪繊維
カチオン性蛍光化合物：Ｓｉｇｍａから入手のＴｈｉｏｆｌａｖｉｎ Ｔ
顕微鏡：Ｎｉｋｏｎから入手のＥｃｌｉｐｓｅ ８０ｉ
ソフトウェア：Ｍｉｔａｎｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手のＤｙｎａｍｉｃＥｙｅ ＲＥＡＬ及びＬｕｍｉｎａＶｉｓｉｏｎ
クレンジングシャンプー：硫酸アンモニウムＡＥ３（５１．２％）、ラウリル硫酸アンモニウム（３６．４％）、コカミドＤＥＡ（２．３％）、アンモニウムキシレンスルホネート（３．５％）、ＥＤＴＡ（０．１％）、防腐剤（＜１％）、残部の（１００％とする）水、を含む、ｐＨ＝５〜７の組成物。
シャンプー：ラウレス硫酸アンモニウム（８．５％）、ラウリル硫酸アンモニウム：（１．７％）、コカミドプロピルベタイン（１．７％）ラウロアンホ酢酸ナトリウム（１．７％）、ジステアリン酸グリコール（１．５％）、コカミドＭＥＡ（０．８％）、脂肪アルコール（０．６％）、ジメチコン（０．６％）、ポリクオタニウム−１０（０．４％）、水素化ポリデセン（０．２％）、プロビタミン（＜０．１％）、アミノ酸（＜０．１％）、防腐剤（０．４％）、プロビタミン（＜０．１％）、残部の（１００％とする）水、を含む、ｐＨ＝５〜７の組成物。
コンディショニング組成物：ベヘントリモニウムメトサルフェート／イソプロピルアルコール（２．３％）、脂肪族アルコール（５．２％）、末端アミノジメチコン（４．０％）、防腐剤（０．６％）、残部の（１００％とする）水、を含む、ｐＨ＝５〜７の組成物。
リンスオフトリートメント：塩化ベヘントリモニウム（２．８％）、末端アミノジメチコン（２．０％）、脂肪アルコール（６．５％）、ベンジルアルコール（０．４％）、ＥＤＴＡ（０．１％）、プロビタミン（＜０．１％）、アミノ酸（＜０．１％）、防腐剤（＜０．１％）、残部の（１００％とする）水、を含む、ｐＨ＝５〜７の組成物。

化合物の百分率は、組成物の総重量当たりの重量パーセントである。

プロトコル
実行される方法に応じて、工程の一部、例えば処置工程は、省略される場合がある。
１．［提供工程］１本の毛髪繊維の根元部分（毛髪の根元から「３ｃｍ〜６ｃｍ」部分）のサンプル又は１本の毛髪の先端部分（毛髪の根元から「１４ｃｍ〜２０ｃｍ」部分）のサンプルのいずれか１つのサンプルが提供される。それぞれのサンプルがクレンジングシャンプー溶液（１０％）で洗浄される。
２．［提供工程］５００ｐｐｍのＴｈｉｏｆｌａｖｉｎ Ｔ（Ｓｉｇｍａ）（以降は「Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ Ｔ溶液」と称する）を含む水溶液が提供される。
３．［処置工程］以下に記載されたように、シャンプー、次いでコンディショニング組成物、次いでリンスオフトリートメントを適用することによって、サンプルが処置される。これらのサンプルは、以降は、「処置サンプル」と称される。
３．１それぞれのサンプルが、５０％シャンプー溶液中に２秒間、完全に浸漬される。次いで、サンプルが取り出され、根元から先端部分の方向で１０回擦られる。次いで、サンプルが脱イオン水で１０秒間すすぎ洗いされる。
３．２それぞれのサンプルが、１００％コンディショニング組成物中でに２秒間、完全に浸漬される。次いで、サンプルが取り出され、根元から先端部に向かって２回擦られる。次いで、サンプルが脱イオン水で１秒間すすぎ洗いされる。
３．３それぞれのサンプルが、１００％リンスオフトリートメント中で２秒間、完全に浸漬される。次いで、サンプルが取り出され、根元から先端部に向かって２回擦られる。次に、サンプルが脱イオン水で１秒間すすぎ洗いされる。
３．４それぞれのサンプルが、一夜、周囲温度で乾燥される。
４．［標識付工程］それぞれの処置されたサンプルが、Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ Ｔ溶液中に１０秒間、完全に浸漬される。
５．［すすぎ洗い工程］次いで、過剰のカチオン性蛍光化合物（すなわち、遊離化合物）を除去するために、それぞれの処置され、標識付されたサンプルが、脱イオン水中で１０秒間、撹拌しながら（振盪して）、完全に浸漬される。
６．［評価工程］それぞれの処置され、標識付されたサンプルが、両面接着テープでスライドガラス上に固定される。以下の表Ｉ中に詳説されたパラメータを用いて、反射モードにての蛍光画像及び正像を獲得することによって、蛍光の評価が実行される。視野内の全毛髪表面上の緑色蛍光強度及び蛍光データが報告／記録される。

毛髪繊維の根元部分の損傷に対する毛髪の先端部分の損傷の評価及び比較
同一の繊維の２つのサンプル（すなわち、先端部分と根元部分）が提供される。サンプルが未処置のままにされる。省略される工程３を除いては、上述のプロトコルにしたがって、蛍光が評価される。

表ＩＩに提供されたデータによって示されるように、未処置の先端部分から放射された蛍光は、未処置の根元部分よりは著しく高い（ペアｔ検定＠９５％信頼水準による）。このことが、本発明による方法が、毛髪繊維の蛍光の強度（繊維に相互作用するカチオン性蛍光化合物を介しての）を損傷の程度と相関させるために好適であることを立証している。毛髪がより損傷すると、蛍光はより強くなる。

毛髪繊維の未処置先端部分並びに異なる処置をされた毛髪の先端部分に対する処置された先端部分の損傷の評価及び比較
同一繊維の２つのサンプルの２つのグループが提供される。それぞれのグループは、処置された先端部分対未処置先端部分（対照１及び２）を含む。蛍光強度が、上記プロトコルにしたがって評価される。対照１及び２に関しては、工程３が省略される。処置された先端部分に関しては、以下の表ＩＩ中に記載されたように、工程３が導入される。

表ＩＶ中に提供されたデータで示されるように、処置された先端部分の蛍光強度は、未処置の先端部分のものよりも著しく低い（ペアｔ検定＠９５％信頼水準による）。このことは、処置された損傷繊維（毛髪先端部分）の損傷の程度が、未処置の損傷した繊維に対して著しく低減されることを示している。このことは、本発明による方法が、コンディショニング組成物及び／又はリンスオフトリートメントの、毛髪繊維への損傷を修復する、並びに伸張された部分によって毛髪繊維への損傷を予防する効能を評価するために好適であることを立証している。

表ＩＶ中に提供されたデータによって示されるように、グループ２の処置された先端部分の蛍光強度は、グループ１の処置された先端部分の蛍光強度よりも著しく低い（ペアｔ検定＠８０％信頼水準による）。このことは、グループ２の処置（リンスオフトリートメントでの追加的処置を含む）が、グループ１の処置よりも損傷した繊維の損傷の程度をはるかに低減することを示している。このことは、本発明による方法が、毛髪繊維への損傷を修復する、並びに伸張された部分によって毛髪繊維への損傷を予防するための、２つの異なる処置の効能を評価し、比較するために好適であることを立証している。

本明細書に開示した寸法及び値は、記述された正確な数値に厳しく限定されるものと理解すべきでない。むしろ、特に言及しない限り、そのようなそれぞれの寸法は、記述された値と、その値の周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味することを意図する。例えば、「４０ｍｍ」として開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することを意図する。

相互参照される又は関連するあらゆる特許又は出願書類を含め、本明細書において引用される全ての文献は、明示的に除外ないしは制限されない限り、その全体を参考として本明細書に組み込まれる。いかなる文献の引用も、それが本明細書において開示され請求されるいずれかの発明に関する先行技術であること、又はそれが単独で若しくは他のいかなる参照とのいかなる組み合わせにおいても、このような発明を教示する、提案する、又は開示することを認めるものではない。いかなる文献の引用も、それが本明細書において開示され請求されるいずれかの発明に関する先行技術であること、又はそれが単独で若しくは他のいかなる参照とのいかなる組み合わせにおいても、このような発明を教示する、提案する、又は開示することを認めるものではない。

本発明の特定の諸実施形態を図示し、記載したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を実施できることが当業者には自明である。したがって、本発明の範囲内にあるそのような全ての変更及び修正を添付の「特許請求の範囲」で扱うものとする。

Claims (15)

1. ケラチン繊維の損傷を評価するための方法であって、
   −ケラチン繊維の少なくとも１つのサンプルを提供する工程と、
   −少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
   −前記繊維のサンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
   −適切な励起波長を提供する発生源を使用して、前記繊維の前記蛍光を評価する工程と、
   を含み、該カチオン性蛍光化合物が、式Ｉ：
   

   

   のチアゾール化合物である、方法。
2. 異なるケラチン繊維の損傷を評価し比較する方法であって、
   −ケラチン繊維の少なくとも２つの異なるサンプルを提供する工程と、
   −少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含み、カルボキシル基及び／又はスルホニル基を含まない、カチオン性蛍光化合物を提供する工程と、
   −前記繊維のサンプルを、前記カチオン性蛍光化合物で標識付する工程と、
   −適切な励起波長を提供する発生源を使用して、繊維のそれぞれのサンプルの前記蛍光を評価する工程と、
   −前記サンプルの蛍光を比較する工程と
   を含み、該カチオン性蛍光化合物が、式Ｉ：
   

   

   のチアゾール化合物である、方法。
3. 前記繊維が、哺乳類の体毛から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記哺乳類の体毛が、ヒトの毛である、請求項３に記載の方法。
5. 前記ヒトの毛が、女性の毛である、請求項４に記載の方法。
6. 前記カチオン性蛍光化合物が、前記組成物と水性担体の総重量で１ｐｐｍ〜３０００ｐｐｍの前記化合物を含む水溶液の形態で提供される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
7. 蛍光顕微鏡を使用して、前記繊維の蛍光が評価される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
8. サンプルの前記蛍光が、目視による検査によって定性的に評価され、及び／又はサンプルの前記蛍光が、ソフトウェア実装装置を使用して定量的に評価される、請求項７に記載の方法。
9. 化粧品の、化学的及び／又は機械的処置を使用して、繊維の前記サンプルを処置する工程を更に含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記サンプルが、前記繊維の由来、前記繊維の部分及び／又は前記繊維に適用された処置によって互いに異なる、請求項２〜９のいずれか一項に記載の方法。
11. 一方のサンプルが、未処置の繊維を含み、他方のサンプルが、化粧品用組成物、化学的組成物、及び／又は機械的組成物で処置された繊維を含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記サンプルが、異なる化粧品の、化学的及び／又は機械的処置で処置される、請求項１０に記載の方法。
13. 前記化粧品の処置が、シャンプー、コンディショニング組成物、リンスオフトリートメント、リーブオントリートメント又はそれらの組み合わせの群から選択される、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記過剰なカチオン性蛍光化合物をすすぎ流す工程を更に含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記評価及び／又は比較を利用する工程を更に含み、対照に対する処置の効能及び／又は他の処置に対する１つの処置の優位性についての広告内容を裏付ける、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。