JP5091661B2

JP5091661B2 - 超臨界ｃｏ２と錯体相互作用剤を用いる方法によって得られる包接錯体

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Publication number: JP5091661B2
Application number: JP2007505584A
Authority: JP
Inventors: フレス，ベルナール; マルキアック，フロランス; ロシャール，ユベール
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
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Priority date: 2004-04-01
Filing date: 2005-03-29
Publication date: 2012-12-05
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Description

本発明は加圧高密度流体技術、とくにＣＯ₂の加圧高密度流体技術による可溶性包接化合物の調製方法に関するものである。

とくに医薬品分野で利益のある数多くの活性物質は、水に、従って生体液にきわめて溶けにくいか、不溶性である。そのため、これらの活性物質の生物学的利用率は低く、一定の治療目標に達するために患者へ投与する量が大幅に増加し、したがって薬物療法に関連する副作用の可能性の増大をもたらす。

所与の物質の薬物動態学的な特性は、とりわけ対象溶媒に対する接触面、すなわち医薬品分野の場合には水に対する接触面の親和性に依存する。粉体にすることによる比表面積の増加は溶解速度の向上を可能にする。ところで、有効成分の生物学的利用率は、溶解速度が向上すれば大幅に増加させることができる。従って、一つまたは複数の活性物質と、生体液への高い溶解度ゆえに適切に選択された一つまたは複数のホスト分子とで構成された分子錯体の形成は、生体液への活性物質の溶解を増加させることを可能にする。

医薬品分野において、錯体相互作用剤の存在下での、シクロデキストリンを主成分とする錯体形成に関する特許と刊行物がいくつか存在する。しかしながら、大半の文献は産業的方法ではなく、むしろ錯体相互作用剤を媒介とした活性物質／シクロデキストリン錯体の溶解度向上の研究を提案している。実際、ある同一の有効成分について試験を行った錯体相互作用剤、および観察された分析結果が列挙されている。他方で、超臨界溶媒内での錯体形成を提案する文献はほとんどない。

超臨界流体による、シクロデキストリンを用いた錯体形成方法を記載している文献は下記のものである。

包接によって揮発性分子を固定する目的で、ＫａｍｉｈｉｒａＭ．他（Ｊ．ｏｆＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．６，３５０−３５３，１９９０）は、揮発性芳香族化合物の抽出方法、およびシクロデキストリン内への包接による捕集方法を記載している。ゲラニオールとカラシ油を加圧流体によってこのように抽出し、ついでシクロデキストリンを入れた別のリアクター内において動的様式で揮発させる。シクロデキストリン内への芳香族化合物の包接率の測定によって、各種パラメータの影響が研究されている。しかしながら、包接過程は動的様式で行われ、静的様式ではない。他方で、著者らが主張する用途は、包接による揮発性分子の固定に関するものなので、全く別のものである。最後に、この方法は超臨界流体によってではなく、加圧ガスによって実施される。

ＶａｎＨｅｅｓ他（ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１２，１９９９）はその刊行物の中で、超臨界ＣＯ₂によるβ−シクロデキストリン内への市販用のピロキシカムの包接方法を記載している。ピロキシカムは水に溶けにくい非ステロイド系の抗炎症剤であるが、β−シクロデキストリン内に包接されればその水への溶解度の向上が可能になるはずである。該方法は、静的様式に置かれた、加圧したオートクレーブ内に、ピロキシカムとβ−シクロデキストリン（モル比１：２．５）の混合物を置くことから成る。減圧後、得られた混合物を粉砕、均質化する。次に、錯体を乾燥してから、以下によって解析する。
・ＤＳＣ（示差走査熱量分析）
・示差溶解度技術
・分光分析法

これらの分析は、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンとの錯体形成率を決定することを可能にする。このようにして得られた錯体の溶解に対する錯体相互作用剤の重要性は述べられていない。他方で、静的様式での超臨界ＣＯ₂による錯体形成過程において、拡散剤は全く使用されていない。

国際公開第０３／０４３６０４号パンフレットは、ホスト分子内の活性物質の分子錯体の調製方法を記載している。該方法は、場合によっては拡散剤、つまり水の存在の下、静的様式で加圧高密度流体と接触させることによる、分子の拡散過程を実施する。

しかしながら、この過程の後には超臨界ＣＯ₂による必須の洗浄過程が行われる。そのうえ、錯体相互作用剤は全く使用されない。

各種の文献が、錯体相互作用剤の添加による活性物質の溶解度の向上を報告している（Ｒｅｄｅｎｔｉ，Ｅ．他，Ｊ．ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．８９，１−８，２０００）。活性物質単体、錯体相互作用剤の存在の下での活性物質、活性物質／シクロデキストリン二元錯体、そして活性物質／シクロデキストリン／錯体相互作用剤三元錯体の溶解度が研究されている。しかしながら、上述のどの方法も超臨界ＣＯ₂を使用しておらず、拡散剤を用いた静的様式での分子拡散過程をとりわけて使用していない。

例えば、Ｂｕｖａｒｉ−Ｂａｒｃｚａ他（Ｊ．ｏｆＩｎｃｌｕｓｉｏｎＰｈｅｎｏｍｅｎａａｎｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４２，２０９−２１２，２００２）は、酢酸の存在の下での安息香酸／β−シクロデキストリン錯体およびベンゼン／β−シクロデキストリン錯体の溶解度を研究している。ベンゼン／β−シクロデキストリン錯体の溶解度は酢酸の濃度とは無関係であり、一方で安息香酸／β−シクロデキストリン錯体の溶解度は酢酸の濃度とともに上昇する。著者らの解釈は次の通りである：分子／β−シクロデキストリン／酢酸三元錯体において、分子とシクロデキストリンの内部空孔との間の潜在的な水素結合は、シクロデキストリンの外側における他の相互作用を促進する。

同様に、Ｍｕｒａ他（Ｊ．ｏｆＩｎｃｌｕｓｉｏｎＰｈｅｎｏｍｅｎａａｎｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３９，１３１−１３８，２００１）は、シクロデキストリン（α−、β−、γ−、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）とヒドロキシ酸（酒石酸、クエン酸、グルコン酸、リンゴ酸、乳酸）の存在の下でのエコナゾールの溶解度を測定している。三元錯体は、３つの化合物の物理的混合または粉砕、３つの化合物を含む溶液の同時蒸発または凍結乾燥によって調製される。三元錯体の形成の後にＤＳＣを行う。凍結乾燥によってのみ、エコナゾールの融解ピークをもはや示さないＤＳＣのプロフィールを得ることができる。

著者らは三元錯体内における相乗効果が観察されたと判断しているが、それは観察された溶解度がエコナゾール／シクロデキストリン二元錯体の溶解度の最高２０倍まで大きくなったからである。

同じ著者ら（Ｉｎｔ．Ｊ．ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．２６０，２９３−３０２，２００３）は、ナプロキセン／ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン／アミノ酸型の三元錯体も研究している。上述の錯体は、共粉砕、あるいは３つの化合物を含む水／エタノール溶液の同時蒸発によって調製される。

Ｐｉｅｌ他（Ｊ．ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．８６−４，４７５−４８０，１９９７）は、噴霧乾燥または蒸発によって得られたニメスリド／Ｌ−リジン／β−またはγ−シクロデキストリン錯体の溶解度の研究を紹介している。三元錯体の溶解度は、溶液のｐＨによって、ニメスリド単体よりも最高３６００倍まで大きくなる。ここでも、著者らはシクロデキストリンとＬ−リジンの相乗効果を話題にしている。

Ｆｅｎｉｖｅｓｙ他（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅ７ｔｈｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，４１４−４１８，１９９４）は、ヒドロキシ酸の存在の下での、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと、活性物質であるテルフェナジン、ドンペリドン、アステミゾールとの錯体形成に関心を向けている。

二つの特許（欧州特許第０９９１４０７号明細書と欧州特許第１０１８３４０号明細書）は、活性物質／錯体相互作用剤／シクロデキストリン三元錯体の調製を記載している。使用された方法は、混練（ｋｎｅａｄｉｎｇ）、噴霧乾燥（ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ）、蒸発または凍結乾燥である。該方法は、活性物質の塩の錯体を調製すること、あるいは該方法の過程で３つの化合物を同時に接触させることからなる。

Ｃｈｉｅｓｉ他によって出願された特許（欧州特許出願公開第０１５３９９８号明細書）は、とくにアンモニア溶液の存在の下でのピロキシカムとβ−シクロデキストリンとの錯体の調製を記載している。しかしながら、使用された方法では超臨界ＣＯ₂は用いられていない。

錯体相互作用剤の存在の下での超臨界ＣＯ₂による錯体の調製を扱っている文献は次の二つしかない。

先に述べたもの（ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１２，１９９９）と同一の方法に従って、ＶａｎＨｅｅｓ他（ＪｏｕｒｎａｌｏｆｉｎｃｌｕｓｉｏｎＰｈｅｎｏｍｅｎａａｎｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｏ．４４，ｐ２７１−２７４，２００２）は、臨界ＣＯ₂によるピロキシカム／β−シクロデキストリン錯体の調製において、錯体相互作用剤であるＬ−リジンまたはトロメタモールの使用を記載している。

Ｌ−リジンまたはトロメタモールの使用によって、著者らはβ−シクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率を増加させると同時に、形成された錯体の溶解性を向上させることができる。

解析は、以下によって行われる。
・ＤＳＣ（示差走査熱量分析）
・示差溶解度技術
・緩衝溶液内での溶解速度

しかしながら、この過程においていかなる拡散剤も使用されない。

Ｖ．Ｂａｒｉｌｌａｒｏ他（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｏｆｔｈｅ６ｔｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｙｍｐｏｓｉｕｍｏｎＳｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌＦｌｕｉｄｓ，Ｖｅｒｓａｉｌｌｅｓ，ｐ１８９７−１９０２，２００３）は、シクロデキストリン内へのミコナゾールの包接率を増加させるために、酸性錯体相互作用剤の添加によってもたらされる改善にさらに焦点を合わせている。様々な錯体相互作用剤（リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸）ならびに様々なシクロデキストリン（β−シクロデキストリン、ＨＰ−β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ＨＰ−γ−シクロデキストリン）が使用された。

しかしながら、包接過程は静的様式ではなく動的様式で行われる。

上述の二つの文献において、超臨界流体による錯体形成が活性物質／錯体相互作用剤／シクロデキストリンの三元混合物に対して実施され、さらに錯体相互作用剤がアルギニンではないということに注意されたい。

以下に示すピロキシカム分子は、エノール基とピリジン環を有し、溶解溶媒のｐＨの値によって、塩を形成することもしないこともある。

Ｗｉｓｅｍａｎ他（Ａｒｚｎｅｉｍ．−Ｆｏｒｓｃｈ．／ＤｒｕｇＲｅｓ．２６（７）１９７６，１３００−１３０３）は、ジオキサン：水が２：１（ｖ／ｖ）の混合物における、エノール基（ｐＫａ〜２）とピリジン環（ｐＫａ〜６．３）のｐＫａ値を求めている。

溶解溶媒のｐＨの値によって、ピロキシカム分子（ＰＸ）は異なる形で存在する。すなわち、
ｐＨ＜２のとき
・ピリジン環はピリジニウムイオンにプロトン化され（ＮＨ⁺）、
・エノール基はイオン化されない（−ＯＨ）。

２＜ｐＨ＜７のとき
・ピリジン環はプロトン化され（ＮＨ⁺）、
・エノール基はエノラートにイオン化される（Ｏ^-）。
これはピロキシカムの双性イオン構造である。分子の立体配座については、双性イオン構造は平面である。この平面性は、一方ではエノラートの陰イオンとアミド基との間の分子内水素結合、そして他方ではカルボニル基とピリジニウムの陽イオンとの間の分子内水素結合の結果である。

ｐＨ＞７のとき
・エノール基はイオン化され（Ｏ^-）、
・ピリジン環はプロトン化されない（Ｎ）。
国際公開第０３／０４３６０４号パンフレット欧州特許出願公開第０１５３９９８号明細書

発明者らは、錯体形成過程と錯体相互作用剤の添加過程とを分離することによって、それにより得られる錯体の物理化学特性を大幅に向上させることができることを意外にも発見した。さらに、活性物質がピロキシカムであるときに錯体相互作用剤としてアルギニンを用いることで、もっとも興味深い特性を有する錯体を得ることが可能になることにも気づいた。

目的は、非水溶性の活性物質の生体内での溶解性を向上させること、それも、活性物質を可溶性の多孔性担体内に包接し、このようにして形成された系の物理化学特性を変化させることによって向上させることである。

したがって、本発明は、一つまたは複数のホスト分子内に包接された、水性溶媒に溶けにくい一つまたは複数の活性物質を含む可溶性包接化合物の調製方法であって、下記の連続する過程を含むことを特徴とする方法に関するものである。
（ａ）一つまたは複数の活性物質と一つまたは複数のホスト分子との接触、
（ｂ）一つまたは複数の拡散剤の存在の下で、加圧高密度流体と過程（ａ）で得られた混合物とを静的様式で接触させることによる、分子拡散過程の実施、
（ｃ）このように形成された、活性物質−ホスト分子の分子錯体の回収、
（ｄ）活性物質−ホスト分子の分子錯体に、錯体相互作用剤を添加し混合することから成る過程の実施、
（ｅ）このように形成された可溶性包接化合物の回収。

本発明による方法において、過程（ｃ）と（ｄ）の間に超臨界ＣＯ₂による洗浄過程はない。

別の有利な実施態様によれば、過程（ｅ）の後に可溶性の相互作用化合物の乾燥過程（ｆ）があり、有利には６０℃〜８０℃の間、有利な仕方では一晩の間行われる。

このように、本発明による方法は、次の二つの段階の連続によって構成される。
・超臨界溶媒内での活性物質とホスト分子との間の包接錯体の形成（過程（ａ）、（ｂ）および（ｃ））
・とくにその物理化学特性を向上させるために、得られた錯体に、錯体相互作用剤を非共有結合させることによる「固定」（過程（ｄ）および（ｅ））

したがって、本発明は五つの過程からなる方法である。

●熟成と呼ばれる最初の三つの過程は、加圧高密度溶媒内、とりわけ、ホスト分子、とくにシクロデキストリン内に活性物質を包接することのできる超臨界溶媒内での分子拡散段階で主として構成される。この拡散段階の過程で求められる目的は、活性物質とホスト分子との間の包接化合物の形成である。

「包接錯体または分子錯体」は、本発明において、活性物質とホスト分子とが非共有結合的に結びついた一切の錯体を意味する。有利には、本発明による方法の過程（ｂ）から生じた錯体のことである。

「可溶性包接化合物」は、本発明において、一方では錯体相互作用剤の結びつき、他方では分子錯体の結びつきによって形成された、一切のものを意味する。有利には、本発明による方法によって得られた最終生成物のことである。

「錯体相互作用剤」は、本発明において、ホスト分子内に包接された活性物質との、共有結合のない相互作用によって、あるいは分子錯体との直接的な相互作用によって、分子錯体の物理化学特性、とくに水性溶媒内での溶解特性を向上させる一切の有機剤または無機剤を意味する。有利には、錯体相互作用剤はラウリル硫酸ナトリウムまたはＴｗｅｅｎなどの界面活性剤、酸または塩基である。有利には、それは酸または塩基である。酸性の相互作用剤または塩基性の相互作用剤の選択は、活性物質の酸性または塩基性に依存する。例えば、好適には酸性の相互作用剤は塩基性の活性物質を含む分子錯体に、塩基性の相互作用剤は酸性の活性物質を含む分子錯体に使用される。

有利には、錯体相互作用剤は、アミノ酸、カルボン酸、酢酸塩、カルボン酸塩、アミン、または有利には２８％アンモニア溶液の形のアンモニア水から選択される。さらに有利には、酢酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、リンゴ酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、Ｌ−リジン、Ｌ−バリン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−アルギニン、またはアンモニア水の中から選択される。さらに有利には、それはアンモニア水である。

「加圧高密度流体」は、本発明において、その臨界値を超える温度または圧力で使用される一切の流体を意味する。有利には、それは純粋ＣＯ₂、または当業者によって従来用いられている有機溶剤と混合したＣＯ₂である。

「水性溶媒に溶けにくい活性物質」は、本発明において、水性溶媒にほとんどあるいは全く溶けない、とくに溶解度が少なくとも２０μｇ／ｍｌ未満である一切の活性物質を意味する。とくにそれは医薬品成分（例えば、鎮痛剤、解熱剤、アスピリンとその誘導体、抗生物質、抗炎症剤、抗潰瘍剤、降圧剤、鎮静剤、抗うつ剤、治療活性のあるオリゴヌクレオチド、治療活性のあるペプチド、治療活性のある蛋白質）、化粧品成分、あるいは栄養補助食品成分である。有利には、アニリド誘導体、エピポドフィロトキシン誘導体、ミノキシジル、ピロキシカム、吉草酸、オクタン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、チアプロフェン酸、オメプラゾール、エコナゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、アステミゾール、シクロベンザプリン、ニメスリド、イブプロフェン、テルフェナジン、ドンペリドン、ナプロキセンおよびエフルシミブを含む群から選択される活性物質であり、有利にはピロキシカムである。

「ホスト分子」は、本発明において、活性物質を捕捉することができる一切の物質を意味する。有利には、ホスト分子は多糖類および単糖類、とくにシクロデキストリンとそれらの混合物によって構成される群から選ばれる。有利には、それはβ−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。有利には、β−シクロデキストリンである。

シクロデキストリンは、「かご」とよばれる分子であるが、それは、それらの構造の中に、他の分子を閉じこめるか封入することができる、比較的硬質で疎水性の空孔を有するからである。錯体形成の現象は、最も安定した熱力学状態へと導く多数の相互作用（基質／溶剤、溶剤／溶剤、およびシクロデキストリン／溶剤）の結果である：
（１）ファンデルワールス相互作用、
（２）疎水性相互作用、
（３）水素結合、
（４）ゲスト分子による置換の際の高いエネルギーによる水分子の遊離、
（５）錯体形成の際のシクロデキストリン分子内での歪みエネルギーの放出。

有利には、可溶性包接化合物は、ピロキシカム、シクロデキストリンおよびアルギニン、有利にはＬ−アルギニンの結びつきから成る。

「拡散剤」は、本発明において、活性物質とホスト分子との相互作用を促進するあらゆる溶剤を意味する。有利には、この拡散剤は、界面活性剤の有無を問わず、アルコール、ケトン、エーテル、エステル、および水、ならびにそれらの混合物から構成された群から選択される。より有利には、水である。

「静的様式」は、本発明において、全ての試薬が同時に存在する状態で反応を進むがままにさせる反応または方法を意味する。例えば、本発明の過程（ｂ）において、一つないし複数の活性物質、水および超臨界ＣＯ₂をオートクレーブに入れて数時間反応させる。生成物の質量は反応の間で変化しない。逆に、動的様式では、反応または生成の進行に応じて試薬を入れる。しばしば動的様式において、流体の循環または攪拌がある。生成物の質量は生成の間で変化する。

過程（ａ）において、活性物質とホスト分子は固体または液体として容器の中に入れられ、過程（ｂ）において、その中に、適切に選択された割合で加圧高密度流体と拡散剤が注入される。圧力条件、温度条件ならびに処理時間は、一つないし複数の活性物質と一つないし複数のホスト分子の種類に応じて、一切の適切な方法によって決定される。

有利には、本発明による方法の分子の拡散過程（ｂ）は攪拌のもとで行われる。

拡散剤は１〜５０質量％、好適には１０〜２５質量％の間に含まれる量で、連続的にあるいは不連続的に添加することができる。

活性物質：ホスト分子：錯体相互作用剤のモル比は、ホスト分子内での活性物質の最良の包接を確実にするように選択することができる。例えば、有利には、活性物質：ホスト分子のモル比は１：１〜１：１０の間に、有利には１：１〜１：５の間に、有利には１：２〜１：２．５の間に含まれ、さらに有利には１：２．５である。同様に、有利には活性物質：錯体相互作用剤のモル比は１：１〜１：３の間に含まれ、有利には１：１、より有利には１：１．２である。

過程（ｂ）の分子拡散に必要な時間は一切の適切な方法によって決定される。この過程（ｂ）は、十分な溶解速度を得るために望ましい回数だけ反復することができる。有利には、過程（ｂ）は約１〜１６時間持続する。

過程（ｂ）の圧力条件と温度条件は分子拡散を促進するように選択される。有利には、超臨界流体の圧力は０．５ＭＰａ〜５０ＭＰａの間に含まれ、温度は０〜２００℃の間に含まれる。

有利には、本発明による方法の過程（ｂ）は、閉じたリアクター、とくにオートクレーブ内で実施される。

該方法はバッチ式または連続的に実施することができる。有利には、本発明による方法はバッチ式で実施される。

有利には、本発明による方法の過程（ｂ）は、必要に応じて攪拌され、場合によっては、連続して高密度流体と活性物質溶液が供給される、閉じたリアクター内で実施される。

●最後の二つの過程（（ｄ）および（ｅ））は、活性物質−ホスト分子錯体に錯体相互作用剤を添加し、混合することから成る。

この錯体相互作用剤は二つの確かな前提に従って相互作用する。それは、前の過程でホスト分子内に包接された活性物質との強い相互作用および／または先に形成された錯体との強い相互作用である。

これにより、生体液とくに水の中での錯体の溶解特性を主として向上させ、かつ／場合によっては、ホスト分子内への活性物質の包接率を増加させることができる。

形成された系の物理化学特性、とくに溶解特性の向上の元になるのは、
・活性物質、ホスト分子あるいはその両者と錯体相互作用剤との、非共有結合性の相互作用（錯体形成、塩形成・・・）
・溶解溶媒のｐＨの局所的変動
・共融系の獲得
・系とその溶解溶媒との間の界面の変化（界面活性作用、粒度分布の変化）
である。

有利には、本発明による方法の過程（ｄ）は半固体の媒質内で実施され、錯体相互作用剤を添加する前に、錯体を水性溶媒に溶解させない。従って、この相互作用剤は、錯体を湿らせるか、あるいは錯体と共にペーストを形成するだけである。有利には、過程（ｄ）は攪拌して行われる。

本発明はまた、本発明の方法によって得ることができる、一つまたは複数のホスト分子内に包接された、水性溶媒に溶けにくい一つまたは複数の活性物質と錯体相互作用剤とを含む、可溶性包接化合物に関するものである。

有利には、本発明による可溶性包接化合物内への活性物質の包接率は、後述のＤＳＣ分析の計算によると９５％を超え、有利には９８％を超え、有利には９９％に近い。

有利には、本発明による錯体の形で存在するときの有効成分の溶解度は２．５ｇ／ｌを超え、有利には少なくとも３ｇ／ｌに等しい。有利には、５〜１２０分間攪拌した後に３８℃で測定した、水１Ｌに対して活性物質４ｇの溶液における活性物質の可溶化率は６３％を超え、有利には少なくとも７５％に等しい。有利には、活性物質はピロキシカムであり、溶解度と可溶化率はｐＨ＝６．３で測定される。

有利には、ホスト分子はシクロデキストリンであり、活性物質はピロキシカムである。

有利には、ピロキシカムは双性イオン構造で本発明による錯体内に存在する。

本発明の枠内において、「可溶化率」は、水とピロキシカムの混合物を３７℃で５〜１２０分間攪拌した後に可溶化したピロキシカムの百分率である。通常この可溶化率の測定には、水１Ｌに対してピロキシカム４ｇの混合物を使用する。この可溶化率は、後述のような可溶化率試験（ピロキシカムの可溶化率試験）によって測定することができる。

本発明はさらに、ピロキシカム、シクロデキストリンおよびアルギニンを含む錯体であって、５〜１２０分間攪拌した後に３７℃で測定した、水１Ｌに対してピロキシカム４ｇの溶液におけるピロキシカムの可溶化率が９０％を超え、有利には９５％を超え、有利には９９％に等しいことを特徴とする錯体にも関するものである。

「シクロデキストリン」は、本発明において、シクロデキストリン、修飾されたシクロデキストリンおよびそれらの混合物を意味する。有利には、それはβ−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。有利には、β−シクロデキストリンである。

有利には、本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体は優れた結晶性を示し、有利には、この錯体は４０重量％未満のアモルファス相を示し、より有利には３０重量％未満のアモルファス相を示し、有利にはアモルファス相の量は２０重量％以下である。

有利には、後述の示差熱量分析で測定した、本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体内におけるピロキシカムの包接率は９８％を超え、有利には９９％を超え、有利には１００％に近い。

本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体は、上述のような本発明による方法によって得ることができる。しかしながら、下記の方法によっても得ることができる。

したがって、本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体の調製方法は、下記の連続する過程を含む。
（１）ピロキシカムと、シクロデキストリンおよびアルギニンとの接触、
（２）一つまたは複数の拡散剤の存在の下で、加圧高密度流体と過程（１）で得られた混合物とを静的様式で接触させることによる、分子拡散過程の実施、
（３）このようにして形成されたピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体の回収。

この方法は、ピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体の場合、特定の特性を有する錯体を得ることを可能にする。

熟成過程と呼ばれる静的様式での分子拡散過程（２）は、シクロデキストリン内にピロキシカムを包接することを可能にする、とりわけ超臨界の加圧高密度溶媒内での分子拡散段階で主として構成される。この拡散段階で求められる目的は、ピロキシカム、シクロデキストリンおよびアルギニンの間での包接錯体の形成である。このようにして形成された錯体はピロキシカム、シクロデキストリンおよびアルギニンを非共有結合的に結びつける。

相互作用剤の役割を果たすアルギニンは、二つの確かな前提に従って相互作用する。それは、シクロデキストリン内に包接されたピロキシカムとの強い相互作用および／または形成された錯体との強い相互作用である。

アルギニンの存在により、生体液、およびとくに水の中での錯体の溶解特性を主として向上させることができる。

形成された系の物理化学特性、とくに溶解特性の向上の元になるのは、
・ピロキシカム、シクロデキストリンあるいはその両者とアルギニンとの非共有結合性の相互作用（錯体形成、塩形成・・・）、
・溶解溶媒のｐＨの局所的変動、
・共融系の獲得、
・系とその溶解溶媒との間の界面の変化（界面活性作用、粒度分布の変化）。

「拡散剤」は、本発明において、ピロキシカムとシクロデキストリンの相互作用を促進するあらゆる溶剤を意味する。

有利には、この拡散剤は、界面活性剤の有無を問わず、アルコール、ケトン、エーテル、エステル、および水、ならびにそれらの混合物から成る群から選択される。より有利には、水である。

「静的様式」は、本発明において、全ての試薬が同時に存在する状態で反応を進むがままにさせる反応または方法を意味する。例えば、本発明の過程（２）において、ピロキシカム、水、アルギニンおよび超臨界ＣＯ₂をオートクレーブに入れて、数時間反応させる。生成物の質量は反応の間で変化しない。逆に、動的様式では、反応または生成の進行に応じて試薬を導入する。しばしば動的様式において、流体の循環がある。生成物の質量は生成の間で変化する。

有利には、本発明による方法の分子拡散過程（２）は攪拌して行われる。

本発明の特定の実施態様において、過程（１）の際にピロキシカム、アルギニンおよびシクロデキストリンは固体または液体として容器の中に入れられ、その中に、適切に選択された割合で加圧高密度流体と拡散剤が注入される。圧力条件、温度条件ならびに処理時間は、一切の適切な方法によって決定される。

ピロキシカム：シクロデキストリン：アルギニンのモル比は、シクロデキストリン内でのピロキシカムの最良の包接を確実にするように選択することができる。例えば、有利には、ピロキシカム：シクロデキストリンのモル比は１：１〜１：１０の間に、有利には１：１〜１：５の間に、有利には１：２〜１：２．５の間に含まれ、さらに有利には１：２．５である。同様に、有利にはピロキシカム：アルギニンのモル比は１：１〜１：３の間に含まれ、有利には１：１、より有利には１：１．２である。

拡散剤は、混合物の総質量に対して１〜５０質量％、有利には混合物の総質量に対して２０〜２５質量％の間に含まれる量で、連続的に、あるいは不連続的に添加することができる。

過程（２）の分子拡散に必要な時間は一切の適切な方法によって決定される。この過程（２）は、十分な溶解速度を得るために望ましい回数だけ反復することができる。有利には、過程（２）は約２〜１６時間、有利には１時間持続する。

過程（２）の圧力条件と温度条件は分子拡散を促進するように選択される。有利には、超臨界流体の圧力は５ＭＰａ〜４０ＭＰａの間に含まれ、有利には１５ＭＰａであり、温度は０〜１２０℃の間に含まれ、有利には１００℃である。

有利には、本発明による方法の過程（２）は閉じたリアクター、とくにオートクレーブ内で実施される。

有利には、本発明による方法の過程（２）は、必要に応じて攪拌され、場合によっては、連続して高密度流体とピロキシカムが供給される、閉じたリアクター内で実施される。

拡散剤が存在する加圧高密度溶媒における分子拡散過程の実施は、ピロキシカム粒子とシクロデキストリンの強い相互作用を可能にし、それにより水性溶媒内での溶解が促進する。

本発明はさらに、本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体と、場合によっては、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬品組成物に関するものである。

本発明はさらに、有利には抗炎症作用を有し、有利には炎症リウマチ、多発性関節炎、変形性関節症、腱炎、または運動器官の外傷後障害の治療に充てられる薬剤としての、本発明によるピロキシカム−シクロデキストリン−アルギニン錯体、または本発明による医薬品組成物にも関するものである。

以下の実施例は非限定的に例示されるものである。

提案する様々な実施例は、活性物質としてピロキシカムを、ホスト分子としてβ−シクロデキストリンを、拡散剤として水を用いて行った。錯体相互作用剤として、アンモニア水またはアルギニンを用いた。

図面の説明
図１は実施例７によって得られた錯体のＮＭＲスペクトルを示している。

図２は実施例７によって得られた錯体の分子内のＲＯＥＳＹ−ＮＯＥスペクトルを示している。

図３は次の方法を用いたβ−シクロデキストリンのＴＧ−ＤＴＧ（熱重量分析）のプロフィールを示している：４５０℃まで毎分５℃の温度上昇、ついで８０℃まで毎分１０℃の温度低下。

図４は次の方法を用いたβ−シクロデキストリンのＤＳＣのプロフィールを示している：０℃で平衡、ついで２４０℃まで毎分５℃で温度上昇。

図５は図３と同じ方法を用いたＬ−アルギニンの熱重量分析のプロフィールを示している。

図６は図４と同じ方法を用いたＬ−アルギニンのＤＳＣのプロフィールを示している。

図７は図６と同じ方法を用いたピロキシカムのＤＳＣのプロフィールを示している。

図８は、２０５℃で平衡させ、０℃まで毎分２０℃で温度低下させ、２２０℃まで毎分５℃で温度上昇させる方法を用いて行った、２６０℃で融解し、ついで０℃に冷却したピロキシカムのサンプルの、ＤＳＣのプロフィールを示している。

図９は、０℃で平衡させ、２４０℃まで毎分５℃で温度上昇させ、ついで８０℃まで毎分５℃で温度低下させる方法を用いて行った、実施例７によって得られた錯体のＤＳＣのプロフィールを示している。

図１０は、４５０℃まで毎分５℃で温度上昇させ、ついで８０℃まで毎分１０℃で温度低下させる方法を用いて行った、実施例７によって得られた錯体のＴＧ−ＤＴＧのプロフィールを示している。

図１１〜１６は、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデルを示している。特に、図１１は水素原子を特定したプロフィールを、図１２は水素原子を特定していないプロフィールを、図１３は水素原子を特定したベンゾチアジン環側の空孔を、図１４は水素原子を特定していないベンゾチアジン環側の空孔を、図１５は水素原子を特定したピリジン環側の空孔を、図１６は水素原子を特定していないピリジン環側の空孔を示している。

図１７は、実施例７によって得られた錯体と、欧州特許第０１５３９９８号明細書の方法によって得られた錯体のＸ線回折図を示している。

分析
ホスト分子内への活性物質の包接率を、示差走査熱量分析（ＤＳＣ）によって評価した。

実施例１〜６によって得られた錯体のＤＳＣ分析は次のように行った。

ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＤＳＣ７装置を用いて、試験する生成物に窒素流の下で温度勾配にかける。

錯体形成効率は、結晶の形で「遊離したままの」有効成分の融解と関係する熱ピークの低下（または消失）の測定によって評価する。

実施例７によって得られた錯体のＤＳＣ分析は次のように行った。

ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＤＳＣＱ１００装置は、５０ｍＬ／分の窒素流の下でインジウムの融解シグナルを用いて調整した。サンプルは５℃／分の密閉容器内で分析した。

熱重量分析は、サンプルの熱安定領域を決定するために、ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＨＲＴＧＡ２９５０装置を用いて行った。装置は室温で、またニッケルの３６０．４６℃のキュリー点で調整した。秤の精度はシュウ酸カルシウムのサンプルの分析によって確認した。

分析は２５℃〜４５０℃で６０ｍＬ／分の窒素流の下で行った。

サンプル中の水の量は、ＭｅｔｔｌｅｒＫＦＤＬ３７クーロメータを用いてクーロメトリーによって求めた。装置は標準酒石酸ナトリウム二水和物（Ｈ₂Ｏ％＝１５．６６±０．０５％）で測定した。

粉末のＸ線回折は次の装置と条件で行う。
・ＰｈｉｌｉｐｓＸｐｅｒｔＭＰＤ回折計、Ｐｈｉｌｉｐｓ発電機、電圧４０ｋＶ、電流２０ｍＡ
・銅製対陰極（Ｋａｌｐｈａ＝１．５４１８３６７オングストローム）、Ｎｉフィルタ
・入射スリット１／８
・Ｘｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器
・連続走査モード
・プラケット上の粉砕粉末サンプル
・４〜１００の角度領域（２θ゜）
・走査時間：８０秒

相の分析は、ＶｉｓｕａｌＣＲＹＳＴＡＬソフトウェアを用いて行う。

ラマン散乱スペクトルは下記の装置と条件で得られる。
・ＪｏｂｉｎＹｖｏｎＲａｍａｎＬａｂｒａｍＨＲ８００分光計
・温度：２２℃
・サンプル：顕微鏡のカバーガラス上の粉末
・励起波長：７５２ｎｍ、サンプルに対するレーザー出力１０ｍＷ
・スペクトル分解能２ｃｍ^-1、拡散量約１μｍ³（６００本のグレーティング）

プロトンＮＭＲスペクトルは、Ｚ軸方向の磁場勾配のアクセサリーを備えた広帯域インバースプローブを用いて、４００ＭＨｚの公称周波数で、ＢｒｕｋｅｒＤＰＸＡＶＡＮＣＥ分光計で記録した。分光計は、可溶化溶剤の重水素の共鳴周波数、この場合はジメチルスルホキシド−ｄ₆にあらかじめ固定した（Ｅｕｒｉｓｏｔｏｐ，ｒｅｆ．Ｄ３１０Ｂ，ｌｏｔＡ２７３１）。化学シフトは、内部標準として使用したＴ．Ｍ．Ｓ．（テトラメチルシラン）に対するｐ．ｐ．ｍ．で表している。

ＲＯＥＳＹ（ＲｏｔａｔｉｎｇｆｒａｍｅＯｖｅｒｈａｕｓｅｒＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐＹ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ社のパルスのマイクロプログラム「ｒｏｅｓｙｔｐ．２」を適用して得た。

記録は、１０２４増分で増分あたり７２走査、すなわち生成物あたり５３時間の合計実験時間で位相モードで行った。取得は、６４１０．２５６Ｈｚのスペクトル窓、２ｓの緩和時間、３５０ｍｓのスピンロック時間を選択して行った。スペクトル記録に先立って、分子内、分子間のＮＯＥ効果を最大限に観察するために、サンプルを正確にガス抜きした。

錯体が水に溶けにくいことと、発明者らが有するＮＭＲ分光計の感度を考慮して、錯体濃度が２％（ｐ／ｖ）に達することが可能な重水素化ジメチルスルホキシドで作業することにした。

分子モデル化：ピロキシカム／β−シクロデキストリン（１：２）包接錯体の至適化は、Ｈｙｐｅｒｃｈｅｍ（登録商標）ソフトウェア、バージョン６．０２（Ｈｙｐｅｒｃｕｂｅ，Ｇａｉｎｓｖｉｌｌｅ，ＵＳＡ）をＨＰＶｅｃｔｒａＰｅｎｔｉｕｍ（登録商標）ＩＩＩモデルのパソコン上で実行して行った。

最小化の計算のために使用したピロキシカムの分子構造は、ＪｏｎＢｏｒｄｎｅｒ共著（ＡｃｔａＣｒｙｓｔ．，１９８４，Ｃ４０，９８９−９９０）の刊行物から引用した。

β−シクロデキストリンの分子構造は、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃＤａｔａｂａｓｅ（Ｍ．Ｒ．Ｃａｉｒａ他，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ，１９９４，１０６１−１０６２）からのものである。

錯体の幾何のエネルギーおよび立体配座のエネルギーの最小化は、ＭＭ２力場を用いて行う。

ピロキシカム分子からの物理化学特性（ｐＫａ、ｌｏｇＤおよび可溶性）のシミュレーションは、ソフトウェアＡＣＤ／ｌｏｇＤセット（ＡＣＤ／ｌａｂｓｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いて行う。

粉末の溶解特性を測定するために、４ｇ／ｌ相当のピロキシカムを３７℃で水溶液に溶解する。１５分後、サンプルを採取し、ついでＨＰＬＣによって溶解したピロキシカムの量を測定し、結果を水１リットルに対して溶解したピロキシカムのグラム数で表す。この方法によれば、水に対する純粋なピロキシカムの溶解度は０．２ｇ／ｌ未満である。

ピロキシカム可溶化試験
操作手順：
溶解溶液内のピロキシカムの定量はＨＰＬＣによって行う。

使用器具：
ＨＰＬＣＷＡＴＥＲＳシステム
・分離モジュール２６９５
・ＵＶ検出器２４８７

クロマトグラフィーの条件：
カラム：ＷＡＴＥＲＳＸ−ＴｅｒｒａＭＳＣ１８２５０×４．６ｍｍ
１．１．１．１．１．１移動相：レーンＡ
希釈したＨ₃ＰＯ₄ ＲでｐＨ調節した、ｐＨ＝３．５、６．８１ｇ／ｌのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液６０％、アセトニトリル４０％
流量：１ｍｌ／分
検出波長：２３０ｎｍ
検出感度：２ＡＵＦＳ
注入量：２０μｌ
炉温度：４０℃
分析時間：１２分

対照溶液の調製：
対照溶液：ＳＭ：１００ｍｌのフラスコの中に５０ｍｇの対照ピロキシカムを入れる。２０ｍｌのジメチルホルムアミドで溶解し、メタノールで量を補う。
希釈度：
Ｔ１：４０アセトニトリル／６０水でＴ３を１／２０に希釈
Ｔ２：４０アセトニトリル／６０水でＴ３を１／１０に希釈
Ｔ３：４０アセトニトリル／６０水でＳＭを１／１００に希釈
Ｔ４：４０アセトニトリル／６０水でＳＭを１／５０に希釈
Ｔ５：４０アセトニトリル／６０水でＳＭを１／２０に希釈

４ｇ／ｌでの溶解速度試験の操作条件

試験の実施：
操作条件：
１００ｍｌの三角フラスコ内に、ピロキシカム２００ｍｇ相当の試料を入れる。５０ｍｌの水を加える。３７℃±２℃の恒温槽内で、毎分４００回転の磁気攪拌にかける。磁気攪拌のもと、５、３０、６０、１２０分の時点で２ｍｌを採取する。採取物をポリプロピレン０．４５μｍＧｅｌｍａｎＧＨＰＡｃｒｏｄｉｓｃフィルタで濾過する。溶液は澄んでいなければならない。採取物を移動相で１／２００に希釈する。

方法、結果の表現方法：
それぞれの対照溶液を２０μｌ入れる。
濃度に対するピロキシカムのピーク領域の線形回帰を行う。相関係数は０．９９５を超えなければならない。
２０μｌの試験溶液を入れる。
それぞれの試験溶液のピロキシカムのピーク領域を測定する。
そこから、対照の回帰直線に従ったμｇ／ｍｌ単位の濃度Ｘを差し引く。
行った希釈の逆数（すなわち２００）を掛けて、可溶化したピロキシカムの濃度（μｇ／ｍｌ）を計算する。

ピロキシカムの可溶化率は、可溶化したピロキシカムの濃度を開始溶液の総ピロキシカム濃度で割って計算する。

実施例１：本発明による方法を用いて得られた結果

８グラムのピロキシカム、７６グラムのβ−シクロデキストリン、２５．２ｇの水を混合し、２リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力２００バール、温度１５０℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

いわゆる熟成過程の後、回収した粉末の一部（１２ｇ）を２．１１ｇの２８％アンモニア溶液に混合し、ついで一晩の間６０℃の通風乾燥機内に置いた。

ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は９９％、ピロキシカムの溶解は３．０１９ｇ／ｌである。

比較例２：錯体相互作用剤を添加しない熟成過程の後に得られた結果

４グラムのピロキシカム、３８グラムのβ−シクロデキストリン、８．９５グラムの水を混合し、２リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力１５０バール、温度１５０℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

溶液の減圧の後、回収した粉末の一部を一晩の間６０℃の通風乾燥機内に置いた。ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は８０％、ピロキシカムの溶解は０．２４６ｇ／ｌである。

比較例３：熟成過程（ｂ）の際に錯体相互作用剤が存在するときに得られた結果

２ｇのピロキシカム、１９ｇのβ−シクロデキストリン、３．７５ｇの水および１．５ｇの２８％アンモニア溶液を混合し、２リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力２００バール、温度１６０℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

溶液の減圧の後、回収した粉末の一部を一晩の間６０℃の通風乾燥機内に置いた。ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は５０％、ピロキシカムの溶解は１．０７５ｇ／ｌである。

比較例４：熟成過程（ｂ）の前にホスト分子に相互作用剤を固定しようとしたときに得られた結果

１９ｇのβ−シクロデキストリン、２．１１ｇの２８％アンモニア溶液および３．１５ｇの精製水を混合し、６０℃の通風乾燥機内に一晩置いた。つぎに２ｇのピロキシカムと６．７５ｇの水を添加する。つぎに混合物を２リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力２００バール、温度１６０℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は９２％、ピロキシカムの溶解は０．２３ｇ／ｌである。

比較例５：熟成過程（ｂ）の前に活性物質に相互作用剤を固定しようとしたときに得られた結果

２ｇのピロキシカムと２ｇの２８％アンモニア溶液を混合し、６０℃の通風乾燥機内に一晩置いた。つぎに１４．３ｇのβ−シクロデキストリンと３．３ｇの水を添加する。つぎに混合物を２リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力１５０バール、温度１５０℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は５６％、ピロキシカムの溶解は１．３７０ｇ／ｌである。

実施例６：半工業規模のロット（１２．５ｋｇ）に本発明による方法を用いて得られた結果

１．１ｋｇのピロキシカム、１０．６ｋｇのβ−シクロデキストリン、１．３ｋｇの水を混合し、５０リットルのリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力１５０バール、温度１００℃でリアクター内に入れた。全体を二時間この操作条件に維持する。

粉末の一部を一晩の間８０℃の乾燥機内に置いた。

ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は８９％、ピロキシカムの溶解は１．９３７ｇ／ｌである。

回収した粉末（１２．６ｋｇ）を２．６ｋｇの２８％アンモニア溶液に混合し、ついで６０℃の通風乾燥機内に置いた。

ＤＳＣ分析によるシクロデキストリン内へのピロキシカムの包接率は１００％、ピロキシカムの溶解は３ｇ／ｌ超である。

得られた結果のまとめ
下記の表１は上記の異なる例１〜６の結果をまとめたものであり、本発明による方法の付加価値を確認することができる。

実施例７：ピロキシカム／β−シクロデキストリン／アルギニン錯体

４３グラムのピロキシカム、３８４グラムのβ−シクロデキストリン、２５グラムのアルギニン、および６１グラムの拡散剤（水）をリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力１５ＭＰａ、温度１００℃でリアクター内に入れた。全体を一時間この操作条件に維持する。

得られた錯体について、上述の「ピロキシカム可溶化試験」に記載のごとく溶解速度と可溶化率を測定する。結果は下の表２にまとめた。

ＮＭＲ：
実施例７に従って得られた錯体の¹ＨＮＭＲスペクトル（図１）は、この化合物の化学組成と一致する。

１３．５ｐ．ｐ．ｍ．で観察されたシグナルは、ピリジニウムのプロトンによるもので、実施例７によって得られた錯体の中にピロキシカムの双性イオン構造が存在することのさらなる証拠になる。

ＲＯＥＳＹスペクトル分析（図２）
空間内で近接したプロトン間の磁化移動の研究を可能にするこの研究は、β−シクロデキストリン内へのピロキシカムの包接態様を明らかにし、対応する錯体のモデル化を可能にするであろう。

ＲＯＥＳＹのマップから、分子内（同一分子のプロトン間）のＮＯＥ効果と分子間（異なる分子に属するプロトン間）のＮＯＥ効果を区別することができる。分子内のＮＯＥ効果は、もちろん、立体配座の分析の面で有益であるが、β−シクロデキストリン内へのピロキシカム封入の証拠となる分子間のＮＯＥ効果だけを挙げることにする。

実施例７によって得られた錯体について記録したＲＯＥＳＹスペクトル分析（図２）は、ピロキシカムのＨ−９／１０とβＣＤのＨ−５’との間の、ついでピロキシカムのＨ−７、Ｈ−６、Ｈ−３とβ−シクロデキストリンのＨ−３’との間の交差緩和ピークを明らかに示している。これらの結果はピロキシカム：β−シクロデキストリンが１：２である包接錯体と一致している。

熱分析と水の定量：β−シクロデキストリンの熱重量分析（図３）は７０．６℃と３１３℃での二つの遷移を示している。第一の変化は、クーロメータによって求めた水の量（１４．１％）と一致する１３．４％の重量損失に対応し、第二の遷移はβ−シクロデキストリンの熱分解による。

ＤＳＣ分析（図４）は、脱水現象に対応する１６２℃を中心とした大きな吸熱を示している。アルギニンの熱重量分析（図５）は、アルギニンが約２３０℃までは安定で、その後分解することを示している。ＤＳＣプロフィール上で二つの吸熱が観察され（図６）、最初のものは２１５．６℃（融解または相転移）、第二ものは２３４℃で分解現象に関連する。

ピロキシカムのＤＳＣプロフィールは、１０４Ｊ／ｇのエンタルピーで２０１℃で融解が起きることを示している（図７）。

加熱冷却サイクルを実施し、その中でピロキシカムのサンプルを２０５℃で融解し、ついで０℃に冷却する。このサンプルのＤＳＣのプロフィール（図８）は、１２２℃で結晶化するアモルファス状態の特徴である６２℃でのガラス転移の存在を明らかにしている。１７８℃でのわずかな吸熱の後に発熱が生じ、ついで１９７℃で最後の吸熱が生じ、ピロキシカムのいくつもの結晶形の存在（同質異像）を反映している。

１７８℃と１９７℃での二つの吸熱は、それぞれＩＩＩ型とＩＩ型の融解によるのに対し、熱処理前の初期サンプルはＩ型（２０１℃で融解）に対応するであろう（Ｆ．Ｖｒｅｃｅｒ，Ｓ．ＳｒｃｉｃｉａｎｄＪ．Ｓｍｉｄ−Ｋｏｒｂａｒ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ６８（１９９１）３５−４１）。

実施例７によって得られた錯体の水含有率は、次の表３に示したように１０％ｐ／ｐ程度である。

実施例７によって得られた錯体のＤＳＣのプロフィール（図９）は、１００％に近い包接を示唆する１９８〜２００℃および２１８℃での変化を示していない。

実施例７によって得られた錯体のＴＧＤＴＧのプロフィール（図１０）は、１９１℃での変化を示している。この変化はアルギニン分解によるものである。

実際、アルギニン分解の第一の過程は３９．２％程度の重量喪失に対応し、錯体内の約６％ｐ／ｐ（ＮＭＲによる測定）のアルギニン含有率を計算に入れると、この重量損失は２．３５％ｐ／ｐ程度になるはずで、１９１℃でのＴＧおよびＤＴＧのプロフィールで観察されるものときれいに一致する（２．４０％）。

分子モデル化：
ピロキシカム：β−シクロデキストリン（１：２）包接錯体の最小構造を図１１〜１６に示した。この至適構造は、ＲＯＥＳＹスペクトル測定によって観察された空間的相互作用を考慮したものである。

Ｇ．Ｍ．Ｅｓｃａｎｄａｒ（Ａｎａｌｙｓｔ，１９９９，１２４，５８７−５９１）の刊行物の中に指摘されているように、ピロキシカム分子は大きすぎるので（約６×１３．７Å）、β−シクロデキストリンの空孔内に完全に封入できない。ＰＸ：（βＣＤ）₂錯体では、ピロキシカム分子は完全に包接される。

物理化学特性のシミュレーション：溶解溶媒のｐＨに応じたピロキシカムの溶解度の変動。双イオン性構造はｐＨ２〜６の間で存在し、溶解度は最小である。他方で、ｌｏｇＤの値は逆の方向に変化する。ｐＨ２〜６の範囲では、分子は比較的疎水性であり、これは封入を促進するもう一つの相互作用を示している。ｐＨ６とｐＨ７．５の間にも双イオンは存在し、溶解度の値はｐＨに応じて大幅に増加する。そのため、一方では封入、他方ではピロキシカムの塩化という二つの可溶化の作用を付加するために、このｐＨ域内で錯体を調製するのが好い。ｐＨの測定値は以下の通りである：実施例７によって得られた錯体１３．９ｍｇ／１０ｍｌＨ₂Ｏ＝ｐＨ７．８７。

実施例７によって得られた錯体と、欧州特許第０１５３９９８号明細書に記載の方法によって得られた錯体のＸ線回折：
回折図を図１７に示した。実施例７によって得られた錯体の粉末の回折図は、きわめて強く、分解能の高い回折線を示し、欧州特許第０１５３９９８号明細書の方法による錯体と比較してこのサンプルの結晶性が優れていることの証拠になっている。ＶｉｓｕａｌＣＲＹＳＴＡＬソフトウェアによれば、実施例７によって得られた錯体はアモルファス相の重量が１６％〜２０％である。

実施例８：ピロキシカム／β−シクロデキストリン／アルギニン錯体

４００グラムのピロキシカム、３８３２グラムのβ−シクロデキストリン、２５３グラムのアルギニン、および６１３グラムの拡散剤（水）をリアクター内に入れた。つぎに二酸化炭素を圧力１５ＭＰａ、温度１００℃でリアクター内に入れた。全体を一時間この操作条件に維持する。

得られた錯体について、上述の「ピロキシカム可溶化試験」に記載のごとく、溶解速度と可溶化率を測定する。結果は下の表４にまとめた。

実施例７によって得られた錯体のＮＭＲスペクトルを示した図。実施例７によって得られた錯体の分子内のＲＯＥＳＹ−ＮＯＥスペクトルを示した図。 β−シクロデキストリンのＴＧ−ＤＴＧのプロフィールを示した図。 β−シクロデキストリンのＤＳＣのプロフィールを示した図。図３と同じ方法を用いたＬ−アルギニンの熱重量分析のプロフィールを示した図。図４と同じ方法を用いたＬ−アルギニンのＤＳＣのプロフィールを示した図。図６と同じ方法を用いたピロキシカムのＤＳＣのプロフィールを示した図。２６０℃で融解し、ついで０℃に冷却したピロキシカムのサンプルの、ＤＳＣのプロフィールを示した図。実施例７によって得られた錯体のＤＳＣのプロフィールを示した図。実施例７によって得られた錯体のＴＧ−ＤＴＧのプロフィールを示した図。水素原子を特定した、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル。水素原子を特定していない、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル。水素原子を特定した、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル（ベンゾチアジン環側の空孔）。水素原子を特定していない、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル（ベンゾチアジン環側の空孔）。水素原子を特定した、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル（ピリジン環側の空孔）。水素原子を特定していない、ピロキシカムとβ−シクロデキストリンが１：２の包接錯体の最小構造の分子モデル（ピリジン環側の空孔）。実施例７によって得られた錯体と、欧州特許第０１５３９９８号明細書の方法によって得られた錯体のＸ線回折図。

Claims

一つまたは複数のホスト分子内に包接された、水性溶媒に溶けにくい一つまたは複数の活性物質を含む可溶性包接化合物の調製方法であって、下記の連続する過程：
（ａ）一つまたは複数の活性物質と一つまたは複数のホスト分子との接触、
（ｂ）一つまたは複数の拡散剤の存在の下で、加圧高密度流体と過程（ａ）で得られた混合物とを静的様式で接触させることによる、分子拡散過程の実施、
（ｃ）このように形成された活性物質−ホスト分子の分子錯体の回収、
（ｄ）活性物質−ホスト分子の分子錯体に錯体相互作用剤を添加し混合することから成る過程の実施、
（ｅ）このように形成された可溶性包接化合物の回収、
を含み、ホスト分子がシクロデキストリンであり、錯体相互作用剤がアンモニア水であり、１つまたは複数の活性物質がピロキシカムであり、拡散剤が水であることを特徴とする方法。
加圧高密度流体が二酸化炭素であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
高密度流体の圧力が０．５ＭＰａ〜５０ＭＰａの間に、温度が０〜２００℃の間に含まれることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
分子拡散過程（ｂ）が攪拌して実現されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一つに記載の方法。
拡散剤が、１〜５０質量％の間に含まれる量で、連続的に、あるいは不連続的に添加されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つに記載の方法。
方法の過程（ｂ）が、高密度流体と活性物質溶液が供給される、閉じたリアクター内で実施されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一つに記載の方法。