JP4956739B2 - Benzochromenone compounds - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ベンゾクロメノン化合物、および当該化合物を含む蛍光標識化用試薬に関する。さらに、本発明は、当該化合物より調製されるポリマー、当該ポリマーを含む蛍光試薬、および当該ポリマーの使用方法に関する。 The present invention relates to a benzochromenone compound and a fluorescent labeling reagent containing the compound. Furthermore, the present invention relates to a polymer prepared from the compound, a fluorescent reagent containing the polymer, and a method of using the polymer.
蛍光法は一分子でも検出可能なほど高感度であり、現在までに多くの蛍光試薬が開発されている。最近、蛍光試薬の新しい利用例として、外部刺激に伴うタンパク質や合成高分子の構造変化を環境応答性の蛍光団のラベルによって追跡する報告や、その蛍光応答から外部刺激の程度を測定する報告がなされている（非特許文献１〜４）。現在のところ、これらの研究には、溶媒の極性低下に伴い蛍光量子収率（Φｆ）が増加する環境応答性の蛍光団が用いられており、高分子の局所的な極性が低下する場合に蛍光シグナルが得られる。逆に局所的な極性の増加に対しては、それに伴ってΦｆ値が増加する蛍光団の適用が望ましい。 The fluorescence method is so sensitive that even a single molecule can be detected, and many fluorescent reagents have been developed so far. Recently, as a new application example of fluorescent reagents, there are reports that track changes in the structure of proteins and synthetic polymers associated with external stimuli using environmentally responsive fluorophore labels, and reports that measure the extent of external stimuli from the fluorescence response. (Non-Patent Documents 1 to 4). At present, these studies use environmentally responsive fluorophores that increase the fluorescence quantum yield (Φ f ) as the polarity of the solvent decreases, and the local polarity of the polymer decreases. Gives a fluorescent signal. Conversely, for a local increase in polarity, it is desirable to apply a fluorophore that increases the Φ f value accordingly.
溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光団としては、ピレン−３−カルボキサルデヒドおよび７−メトキシ−４−メチルクマリンの二例が報告されている（非特許文献５および６）。しかし、前者は安定性の面からさらなる官能基の導入に制約があり標識化試薬としての利用が難しい。後者は吸収、蛍光波長が３１８、３８０ｎｍ程度と短波長であるため、測定系に共存する芳香環により検出妨害を受けやすいという欠点を有している。 Two examples of pyrene-3-carboxaldehyde and 7-methoxy-4-methylcoumarin have been reported as environmentally responsive fluorophores in which the Φ f value increases with increasing polarity of the solvent (non-patent literature). 5 and 6). However, the former has restrictions on introduction of further functional groups from the viewpoint of stability, and is difficult to use as a labeling reagent. Since the latter has a short absorption and fluorescence wavelength of about 318 and 380 nm, it has a drawback that it is susceptible to detection interference by an aromatic ring coexisting in the measurement system.
本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規な化合物、特に、溶媒の極性増加など、周囲の環境の変化に伴ってΦｆ値が変動する環境応答性の蛍光特性を有する化合物、ならびに当該化合物を含む蛍光標識化試薬、および蛍光試薬を提供することである。さらに、本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規なポリマーおよび当該ポリマーの新規な用途を提供することである。 An object of the present invention is to provide a novel compound containing a fluorescent functional group, in particular, a compound having an environmentally responsive fluorescence characteristic in which the Φ f value varies with changes in the surrounding environment such as an increase in the polarity of the solvent, and the compound A fluorescent labeling reagent, and a fluorescent reagent. Furthermore, an object of the present invention is to provide a novel polymer containing a fluorescent functional group and a novel use of the polymer.
本発明者は、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光特性を有する２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン化合物を見出し、本発明を完成させた。 The present inventor has intensively studied to achieve the above-mentioned problem. As a result, 2H-benzo [g] chromene-2-2 having environmentally responsive fluorescence characteristics in which the Φ f value increases as the polarity of the solvent increases. The on-compound was found and the present invention was completed.
本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）： According to one aspect of the present invention, the formula (I):
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩が提供される。
[Wherein, R 1 independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, cyano, nitro, carboxy, —SO q R 5 , C 1-6 alkyl (the alkyl is independently a halogen atom, hydroxy, cyano, , Nitro, carboxy, C 1-6 alkoxy, optionally substituted with one or more substituents selected from —NR 11 R 12 , —SO 2 OH), C 1-6 alkoxy, C 1-6 alkylthio , —NR 13 R 14 and C 1-6 alkoxycarbonyl;
q is selected from an integer of 1-2;
R 5 is hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, amino, C 1-6 alkylamino or di (C 1-6 alkyl) amino;
n is selected from an integer from 1 to 6;
X is O or S;
R 2 represents a hydrogen atom or C 1-6 alkyl (the alkyl group is independently selected from a halogen atom, hydroxy, cyano, nitro, carboxy, C 1-6 alkoxy, —NR 15 R 16 , —SO 2 OH). Optionally substituted by one or more substituents);
Q is a C 1-10 alkylene group;
Y is a halogen atom, hydroxy, mercapto, —NCS, —NCO, halocarbonyl, carboxy, C 1-6 alkoxycarbonyl, —NR 17 R 18 , maleimide, C 2-6 alkenylthio, C 2-6 alkenylsulfonyl, It is -CH (NHR 21) COOR 22 or -X 1 -Z;
X 1 is O or NR 19 ;
Z is C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 2-6 alkenylcarbonyl, C 2-6 alkynylcarbonyl, or — (CH 2 ) m CH (NHR 23 ) COOR 24 ;
m is selected from an integer from 1 to 6;
R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 , R 17 , R 18 and R 19 are independently selected from a hydrogen atom and C 1-6 alkyl;
R 21 and R 23 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 7-14 aralkyloxycarbonyl, and fluoren-9-ylmethyloxycarbonyl;
R 22 and R 24 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 7-14 aralkyl, C 7-14 aralkyloxy C 1-6 alkyl. ]
Or a salt thereof is provided.
式（Ｉ）において、基−Ｑ−ＹおよびＲ１は、ベンゾクロメノン環に含まれる置換可能ないずれの炭素原子に連結していてもよい。
本発明の別の側面によれば、式（Ｉａ）：
In formula (I), the groups -QY and R 1 may be linked to any substitutable carbon atom contained in the benzochromenone ring.
According to another aspect of the present invention, the formula (Ia):
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙは既に定義したとおりである］
で表される、上記の化合物またはその塩が提供される。
本発明の１つの態様において、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）においてＸはＯであってもよい。また本発明の１つ態様において、Ｒ１は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択されてもよい。
[Wherein R 1 , n, X, R 2 , Q, Y are as defined above]
Or a salt thereof represented by the formula:
In one embodiment of the present invention, in the above formula (I) or (Ia), X may be O. In one embodiment of the present invention, R 1 may be independently selected from a hydrogen atom and C 1-6 alkyl.
本発明の１つの態様において、Ｙは、ハロゲン原子またはヒドロキシであってもよい。また、本発明の別の態様において、Ｙがアクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシであってもよい。 In one embodiment of the present invention, Y may be a halogen atom or hydroxy. In another embodiment of the present invention, Y may be acryloyloxy or methacryloyloxy.
本発明の別の側面によれば、 式（ＩＩ）： According to another aspect of the present invention, the formula (II):
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりであり；
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）である］
で表される繰り返し単位を含むポリマーが提供される。本発明の１つの態様において、本発明のポリマーは、式（ＩＩＩ）：
[Wherein R 1 , n, X, R 2 , Q and X 1 are as defined above;
R 3 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl (eg, methyl)]
A polymer comprising a repeating unit represented by In one embodiment of the invention, the polymer of the invention has the formula (III):
［式中、Ｒ３１は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）であり；
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含んでいてもよい。本発明の１つの態様において、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位および式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位からなるポリマーもまた提供される。
[Wherein R 31 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl (eg, methyl);
R 32 is hydroxy, amino, C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino or di (C 1-10 alkyl) amino, wherein the C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino, di ( C 1-10 alkyl) amino is each independently substituted with one or more substituents selected from hydroxy, amino, C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino or di (C 1-10 alkyl) amino It may be done]
It may further contain a repeating unit represented by In one embodiment of the present invention, a polymer comprising a repeating unit represented by the formula (II) and a repeating unit represented by the formula (III) is also provided.
本発明の１つの側面によれば、式（ＩＩａ）： According to one aspect of the present invention, the formula (IIa):
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｒ３、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりである］
で表されるモノマー、および式（ＩＩＩａ）：
[Wherein R 1 , n, X, R 2 , R 3 , Q and X 1 are as defined above]
And a monomer represented by formula (IIIa):
（ＩＩＩａ）
［式中、Ｒ３１およびＲ３２は既に定義したとおりである］
で表されるモノマーから調製されうるポリマーが提供される。
(IIIa)
[Wherein R 31 and R 32 are as defined above]
A polymer is provided that can be prepared from the monomer represented by:
本発明のポリマーにおいて、分子中に含まれる全繰り返し単位数に対する、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位数の比は、特に限定はされないが、例えば０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜１％であってもよい。また、本発明のポリマーの重量平均分子量は、特には限定されないが、例えば５０００〜１００００００、好ましくは１００００〜２０００００である。 In the polymer of the present invention, the ratio of the number of repeating units represented by the formula (II) to the total number of repeating units contained in the molecule is not particularly limited, but is, for example, 0.001 to 10%, preferably 0.8. It may be 01 to 1%. Moreover, the weight average molecular weight of the polymer of this invention is although it does not specifically limit, For example, it is 5000-1 million, Preferably it is 10000-200000.
本発明の別の側面によれば、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）で表される化合物を含む、蛍光標識化用試薬が提供される。
さらに、本発明の別の側面によれば、上記のポリマーを含む蛍光試薬が提供される。当該蛍光試薬の用途は特には限定されないが、例えば液体の温度の測定に使用されうる。
According to another aspect of the present invention, there is provided a fluorescent labeling reagent comprising a compound represented by the above formula (I) or (Ia).
Furthermore, according to another aspect of the present invention, a fluorescent reagent comprising the above polymer is provided. Although the use of the said fluorescent reagent is not specifically limited, For example, it can be used for the measurement of the temperature of a liquid.
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｂ）： Furthermore, according to another aspect of the present invention, the formula (Ib):
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬が提供される。
[Wherein, R 1 independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, cyano, nitro, carboxy, —SO q R 5 , C 1-6 alkyl (the alkyl is independently a halogen atom, hydroxy, cyano, , Nitro, carboxy, C 1-6 alkoxy, optionally substituted with one or more substituents selected from —NR 11 R 12 , —SO 2 OH), C 1-6 alkoxy, C 1-6 alkylthio , —NR 13 R 14 and C 1-6 alkoxycarbonyl;
q is selected from an integer of 1-2;
R 5 is hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, amino, C 1-6 alkylamino or di (C 1-6 alkyl) amino;
n is selected from an integer from 1 to 6;
X is O or S;
R 2 represents a hydrogen atom or C 1-6 alkyl (the alkyl group is independently selected from a halogen atom, hydroxy, cyano, nitro, carboxy, C 1-6 alkoxy, —NR 15 R 16 , —SO 2 OH). Optionally substituted by one or more substituents);
Q is a C 1-10 alkylene group;
Y 1 represents a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, mercapto, —NCS, —NCO, halocarbonyl, carboxy, C 1-6 alkoxycarbonyl, —NR 17 R 18 , maleimide, C 2-6 alkenylthio, C 2−. 6 alkenylsulfonyl, —CH (NHR 21 ) COOR 22 or —X 1 —Z;
X 1 is O or NR 19 ;
Z is C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 2-6 alkenylcarbonyl, C 2-6 alkynylcarbonyl, or — (CH 2 ) m CH (NHR 23 ) COOR 24 ;
m is selected from an integer from 1 to 6;
R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 , R 17 , R 18 and R 19 are independently selected from a hydrogen atom and C 1-6 alkyl;
R 21 and R 23 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 7-14 aralkyloxycarbonyl, and fluoren-9-ylmethyloxycarbonyl;
R 22 and R 24 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 7-14 aralkyl, C 7-14 aralkyloxy C 1-6 alkyl. ]
The fluorescent reagent containing the compound represented by these, or its salt is provided.
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｄ）： Furthermore, according to another aspect of the present invention, the formula (Id):
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙ１は既に定義したとおりである］
で表される化合物またはその塩を含む、既に記載の蛍光試薬が提供される。上記蛍光試薬は、例えば溶液の極性の変化の測定に使用されうる。
[Wherein R 1 , n, X, R 2 , Q, Y 1 are as defined above]
An already described fluorescent reagent comprising a compound represented by the formula: The fluorescent reagent can be used, for example, for measuring the change in polarity of a solution.
さらに、本発明の別の側面によれば、液体に前記蛍光試薬を溶解する工程；および励起光照射下、蛍光強度を測定する工程、を含む、液体の温度測定方法もまた提供される。 Furthermore, according to another aspect of the present invention, there is also provided a method for measuring a temperature of a liquid, comprising: dissolving the fluorescent reagent in a liquid; and measuring fluorescence intensity under excitation light irradiation.
本発明の化合物は、蛍光標識化試薬または蛍光試薬として好適な特性を有する。特に本発明の化合物に含まれる蛍光官能基であるベンゾクロメノンイル基は、酸性条件下およびアルカリ性条件下でも安定であり、官能基導入のための種々の反応に適用可能である。また、本発明の化合物の蛍光波長は極性溶媒中で約４６０ｎｍ以上であり、蛍光の検出について測定系に共存する芳香環による影響を受けにくいという特性を有する。さらに、本発明の化合物は、溶媒の極性増加などの環境応答に伴って蛍光量子収率（Φｆ）が増加するという蛍光特性を有するので、当該化合物を含む溶液中の環境変化または当該化合物で標識化した分子の変化を追跡するための蛍光試薬としても使用することができる。 The compound of the present invention has characteristics suitable as a fluorescent labeling reagent or fluorescent reagent. In particular, the benzochromenonyl group which is a fluorescent functional group contained in the compound of the present invention is stable even under acidic conditions and alkaline conditions, and can be applied to various reactions for introducing functional groups. Further, the fluorescence wavelength of the compound of the present invention is about 460 nm or more in a polar solvent, and has a characteristic that the detection of fluorescence is not easily influenced by an aromatic ring coexisting in the measurement system. Furthermore, since the compound of the present invention has a fluorescence characteristic that the fluorescence quantum yield (Φ f ) increases with an environmental response such as an increase in the polarity of the solvent, the environmental change in the solution containing the compound or the compound It can also be used as a fluorescent reagent for tracking changes in labeled molecules.
以下、本発明を更に具体的に説明する。
本明細書において「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルキルなども含まれる。
Hereinafter, the present invention will be described more specifically.
As used herein, “C 1-6 alkyl” means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl. I-propyl, n-butyl, s-butyl, i-butyl, t-butyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 4-methylpentyl , 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3-ethylbutyl, and 2-ethylbutyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclopropylmethyl, and the like, for example, C 1-4 alkyl And C 1-3 alkyl are also included.
本明細書において「Ｃ２−６アルケニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、１−メチルビニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルケニルおよびＣ２−３アルケニルなども含まれる。 In the present specification, “C 2-6 alkenyl” means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, such as vinyl, 1-propenyl, 2 -Propenyl (allyl), 1-methylvinyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl and the like, for example, C 2-4 alkenyl, C 2-3 alkenyl and the like are also included.
本明細書において「Ｃ２−６アルキニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル（プロパルギル）、２−シクロプロピルエチニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ２−３アルキニルなども含まれる。 In the present specification, “C 2-6 alkynyl” means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, such as ethynyl, 1-propynyl, 2 -Propynyl (propargyl), 2-cyclopropylethynyl and the like, for example, C 2-4 alkynyl and C 2-3 alkynyl and the like are also included.
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルオキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、３−メチルブトキシ、２−メチルブトキシ、１−メチルブトキシ、１−エチルプロポキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、４−メチルペントキシ、３−メチルペントキシ、２−メチルペントキシ、１−メチルペントキシ、３−エチルブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロプロピルメチルオキシなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−３アルコキシなども含まれる。また、本明細書において「Ｃ１−４アルコキシ」には、例えばＣ１−３アルコキシなども含まれる。 In the present specification, “C 1-6 alkoxy” means an alkyloxy group having an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which has already been defined as an alkyl moiety. For example, methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy N-butoxy, s-butoxy, i-butoxy, t-butoxy, n-pentoxy, 3-methylbutoxy, 2-methylbutoxy, 1-methylbutoxy, 1-ethylpropoxy, n-hexyloxy, 4-methylpen Toxic, 3-methylpentoxy, 2-methylpentoxy, 1-methylpentoxy, 3-ethylbutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, cyclopropylmethyloxy, etc. are included, for example, C 1-4 alkoxy and C 1 -3 alkoxy and the like are also included. In the present specification, “C 1-4 alkoxy” includes, for example, C 1-3 alkoxy and the like.
本明細書において「Ｃ１−６アルキルカルボニル」とは、アルキル部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルキルカルボニル基を意味し、例えばＣ１−６アルキルカルボニルが含まれる。 As used herein, “C 1-6 alkylcarbonyl” means an alkylcarbonyl group having a C 1-6 alkyl group already defined as an alkyl moiety, and includes, for example, C 1-6 alkylcarbonyl.
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」とは、アルコキシ部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルコキシカルボニル基を意味し、例えばＣ１−３アルコキシカルボニルが含まれる。 As used herein, “C 1-6 alkoxycarbonyl” means an alkoxycarbonyl group having a C 1-6 alkyl group already defined as an alkoxy moiety, and includes, for example, C 1-3 alkoxycarbonyl.
本明細書において「Ｃ７−１４アラルキル」とはアリール基を含む炭素数が７〜１４のアリールアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチルなどが含まれる。 In the present specification, “C 7-14 aralkyl” means an arylalkyl group having 7 to 14 carbon atoms including an aryl group, such as benzyl, 1-phenethyl, 2-phenethyl, 1-naphthylmethyl, 2- Naphthylmethyl and the like are included.
本明細書においてハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子などが挙げられる。
本明細書において「Ｃ１−１０アルキレン」とは、炭素数１〜１０の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキレン基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどが含まれる。
In this specification, examples of the halogen atom include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom and an iodine atom.
In the present specification, “C 1-10 alkylene” means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, such as methylene, ethylene, propylene, butylene. Etc. are included.
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルチオ」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルチオ基を意味し、例えばビニルチオ、アリルチオなどが含まれる。 As used herein, “C 2-6 alkenylthio” means an alkenylthio group having a C 2-6 alkenyl group already defined as an alkenyl moiety, and includes, for example, vinylthio, allylthio and the like.
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルスルホニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルスルホニル基を意味し、例えばビニルスルホニル、アリルスルホニルなどが含まれる。 As used herein, “C 2-6 alkenylsulfonyl” means an alkenylsulfonyl group having a C 2-6 alkenyl group already defined as an alkenyl moiety, and includes, for example, vinylsulfonyl, allylsulfonyl and the like.
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルカルボニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルカルボニル基を意味し、例えばアクリロイル、メタクリロイルなどが含まれる。 As used herein, “C 2-6 alkenylcarbonyl” means an alkenylcarbonyl group having a C 2-6 alkenyl group already defined as an alkenyl moiety, and includes, for example, acryloyl, methacryloyl, and the like.
本明細書において「Ｃ２−６アルキニルスルホニル」とは、アルキニル部分として既に定義したＣ２−６アルキニル基を有するアルキニルカルボニル基を意味し、例えばエチニルカルボニルなどが含まれる。 As used herein, “C 2-6 alkynylsulfonyl” means an alkynylcarbonyl group having a C 2-6 alkynyl group which has already been defined as an alkynyl moiety, and includes, for example, ethynylcarbonyl and the like.
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキル」には、例えばベンジルオキシメチルなどが含まれる。
本明細書における「Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル」には、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、２−メトキシエチル、１−メトキシエチルなどが含まれる。
“C 7-14 aralkyloxy C 1-6 alkyl” in the present specification includes, for example, benzyloxymethyl and the like.
The “C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl” in the present specification includes, for example, methoxymethyl, ethoxymethyl, 2-methoxyethyl, 1-methoxyethyl and the like.
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニル」には、例えばベンジルオキシカルボニルなどが含まれる。
本明細書における「ハロカルボニル」には、例えばクロロカルボニルなどが含まれる。
“C 7-14 aralkyloxycarbonyl” in the present specification includes, for example, benzyloxycarbonyl and the like.
As used herein, “halocarbonyl” includes, for example, chlorocarbonyl and the like.
本明細書において「−ＳＯｑＲ５」には、例えば、−ＳＯ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルコキシスルフィニル、Ｃ１−６アルコキシスルホニル、スルファモイル、Ｃ１−６アルキルスルファモイル、ジ（Ｃ１−６アルキル）スルファモイルなどが含まれる。 The "-SO q R 5", as used herein, for example, -SO 2 OH, C 1-6 alkylsulfinyl, C 1-6 alkylsulfonyl, C 1-6 alkoxysulfinyl sulfinyl, C 1-6 alkoxy sulfonyl, sulfamoyl , C 1-6 alkylsulfamoyl, di (C 1-6 alkyl) sulfamoyl and the like.
本明細書において「Ｃ１−６アルキルチオ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルチオ基を意味し、例えば、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｉ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｓ−ブチルチオ、ｉ−ブチルチオ、ｔ−ブチルチオなどが含まれる。 As used herein, “C 1-6 alkylthio” means an alkylthio group having an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms already defined as the alkyl moiety, and examples thereof include methylthio, ethylthio, n-propylthio, i-propylthio, n-butylthio, s-butylthio, i-butylthio, t-butylthio and the like are included.
上記式（Ｉ）および（Ｉａ）で表される化合物に関する本発明には、互変異性体、幾何異性体、光学異性体等の各種の立体異性体、およびそれらの混合物が含まれる。
本発明の化合物の塩とは、有機化学において通常使用されうる塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等の有機酸酸との酸付加塩が挙げられる。
The present invention relating to the compounds represented by the above formulas (I) and (Ia) includes various stereoisomers such as tautomers, geometric isomers and optical isomers, and mixtures thereof.
The salt of the compound of the present invention is not particularly limited as long as it can be usually used in organic chemistry. Examples of the salt formed by the compound of the present invention with a base include salts with inorganic bases such as sodium, potassium, magnesium, calcium and aluminum; salts with organic bases such as methylamine, ethylamine and ethanolamine. The salt may be an acid addition salt. Specific examples of the salt include hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and other mineral acids; and formic acid, Examples include acid addition salts with organic acid acids such as acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, and ethanesulfonic acid. .
更に、本発明化合物には、水和物、各種溶媒和物や結晶多形等も含まれる。
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、例えば、以下のスキームに示す工程により合成することができる。
Furthermore, the compound of the present invention includes hydrates, various solvates, crystal polymorphs and the like.
The compounds of formulas (I) and (Ia) according to the present invention can be synthesized, for example, by the steps shown in the following scheme.
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４１はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物１−１とアセト酢酸エステルを酸性条件下で縮合させることにより調製することができる。ここで、化合物１−１に反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物１−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
[Wherein R 1 , X, R 2 , Q and Y are as defined above, or the contained functional group may be protected by an appropriate protecting group, and p is selected from 1 to 5 And R 41 is C 1-6 alkyl]
The compound of the present invention can be prepared by condensing compound 1-1 and acetoacetate under acidic conditions. Here, when a reactive functional group is contained in Compound 1-1, the above compound is protected with an appropriate protecting group, followed by the above reaction, and then subjected to appropriate deprotection conditions to give the desired compound 1-2. You can also get Examples of the acid to be used include sulfuric acid, sulfamic acid, perchloric acid, p-toluenesulfonic acid and the like. Although the said process is not specifically limited, For example, 0-100 degreeC, Preferably it is 20-30 degreeC reaction temperature, for example, for 0.1 to 24 hours, Preferably it can carry out with the reaction time of 1 to 8 hours.
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４２はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物２−１とβ−ケトカルボン酸エステルを酸性条件下で縮合させることによっても調製することができる。ここで、化合物１−１またはβ−ケトカルボン酸エステルに反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物２−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
[Wherein R 1 , X, R 2 , Q and Y are as defined above, or the contained functional group may be protected by an appropriate protecting group, and p is selected from 1 to 5 And R 42 is C 1-6 alkyl]
The compounds of the present invention can also be prepared by condensing compound 2-1 and β-ketocarboxylic acid ester under acidic conditions. Here, when a reactive functional group is contained in the compound 1-1 or β-ketocarboxylic acid ester, the above reaction is carried out after protecting this with an appropriate protective group, and then subjected to appropriate deprotection conditions. The target compound 2-2 can also be obtained. Examples of the acid used include sulfuric acid, sulfamic acid, perchloric acid, and toluenesulfonic acid. Although the said process is not specifically limited, For example, 0-100 degreeC, Preferably it is 20-30 degreeC reaction temperature, for example, for 0.1 to 24 hours, Preferably it can carry out with the reaction time of 1 to 8 hours.
本発明のポリマーは、上記式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を有する限りにおいて、特に限定はされないが、例えば、ポリエチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸アミド、ポリアクリル酸エステル、ポリスチレン、ポリスチレン誘導体などとのコポリマーであってもよい。 The polymer of the present invention is not particularly limited as long as it has a repeating unit represented by the above formula (II). For example, polyethylene, polyacrylic acid, polyacrylic acid amide, polyacrylic acid ester, polystyrene, polystyrene derivative It may be a copolymer with
本発明のポリマーは、当業者に周知の通常の重合条件、好ましくはラジカル重合の条件を使用して調製することができる。使用する反応溶媒としては、例えば、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ベンゼン、メタノールなどが挙げられる。使用するラジカル開始剤としては、例えば、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（以下、ＡＩＢＮとも称する）、過酸化ベンゾイル、過硫酸アンモニウムを使用することができる。該重合反応の条件は使用するモノマーおよびの量などに依存して決定されるが、例えば０〜１００℃、好ましくは５０〜７０℃の反応温度、および例えば１〜２４時間、好ましくは８〜１２時間の反応時間で行うことができる。 The polymers of the present invention can be prepared using conventional polymerization conditions well known to those skilled in the art, preferably radical polymerization conditions. Examples of the reaction solvent to be used include dioxane, dimethylformamide, benzene, methanol and the like. As the radical initiator to be used, for example, α, α-azobisisobutyronitrile (hereinafter also referred to as AIBN), benzoyl peroxide, and ammonium persulfate can be used. The conditions for the polymerization reaction are determined depending on the monomer used and the amount of the polymerization reaction, but are, for example, 0 to 100 ° C., preferably 50 to 70 ° C., and for example 1 to 24 hours, preferably 8 to 12 It can be performed with a reaction time of hours.
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、蛍光標識化試薬および当該試薬を調製するための合成中間体として使用されうる。例えば、式（Ｉ）および（Ｉａ）においてＹが−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニルである化合物は、ヒドロキシ基またはアミノ基を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。特にＹが−ＮＣＳである化合物はペプチドまたはタンパク質中のリシン残基などの修飾による蛍光標識化に使用することができる。同様に、Ｙがカルボキシである化合物を、適当な試薬を用いて活性エステルに変換し、ペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することができる。ここで、用いられ得る活性エステル化試薬としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ′−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、ペンタフルオロフェノールなどが挙げられる。 The compounds of formula (I) and (Ia) according to the present invention can be used as fluorescent labeling reagents and synthetic intermediates for preparing the reagents. For example, compounds in formulas (I) and (Ia) where Y is —NCS, —NCO, halocarbonyl can be used for fluorescent labeling of compounds containing hydroxy or amino groups. In particular, a compound in which Y is -NCS can be used for fluorescent labeling by modification of a lysine residue or the like in a peptide or protein. Similarly, compounds where Y is carboxy can be converted to active esters using appropriate reagents and used for fluorescent labeling of peptides or proteins. Here, examples of the active esterification reagent that can be used include dicyclohexylcarbodiimide, N-ethyl-N′-3-dimethylaminopropylcarbodiimide, p-nitrophenol, N-hydroxysuccinimide, and pentafluorophenol. .
Ｙにメルカプト基を含む化合物は、二重結合への付加反応による分子中に二重結合を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。また、システイン残基などとＳ−Ｓ結合を形成することによるペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することもできる。 A compound containing a mercapto group in Y can be used for fluorescent labeling of a compound containing a double bond in the molecule by addition reaction to the double bond. It can also be used for fluorescent labeling of peptides or proteins by forming SS bonds with cysteine residues or the like.
Ｙに二重結合または三重結合を含む化合物（例えば、Ｙがマレイミド、アクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシである化合物）は、システイン残基などとの付加反応によりペプチドまたはタンパク質の標識化に使用することができる。 A compound containing a double bond or a triple bond in Y (for example, a compound in which Y is maleimide, acryloyloxy or methacryloyloxy) can be used for labeling a peptide or protein by an addition reaction with a cysteine residue or the like. .
Ｙにアミノ酸構造を有する化合物は、蛍光標識化されたペプチドまたはタンパク質の合成に使用することができる。
蛍光標識化試薬は、本発明の化合物に加えて、任意の添加物（例えば、溶媒、安定化剤など）を含んでいてもよい。
A compound having an amino acid structure at Y can be used for the synthesis of a fluorescently labeled peptide or protein.
The fluorescent labeling reagent may contain an optional additive (for example, a solvent, a stabilizer, etc.) in addition to the compound of the present invention.
以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
試薬およびデータ測定
試薬は特に言及がない限り購入したものをさらに精製することなく使用した。１Ｈ−ＮＭＲは、ＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥ４００スペクトロメーター（４００ＭＨｚ）を使用して測定し、ケミカルシフトはｐｐｍで表示した。質量分析はＢＲＵＫＥＲ ｍｉｃｒＯＴＯＦ−０５スペクトロメーターを使用し、元素分析はＹａｎａｃｏ ＭＴ−６ ＣＨＮ ＣＯＲＤＥＲスペクトロメーターを使用して行った。融点の測定はＹａｎａｃｏ Ｍｉｃｒｏ Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｐｏｉｎｔ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＭＰ−Ｊ３を使用して測定し、補正は行わなかった。数平均分子量、重量平均分子量はＪＡＳＣＯ ＧＰＣ ｓｙｓｔｅｍ（ＪＡＳＣＯ ＰＵ−２０８０ポンプ、ＪＡＳＣＯ ＲＩ−２０３１示差屈折計、ＪＡＳＣＯ ＣＯ−２０６０カラムオーブン、Ｓｈｏｄｅｘ ＧＰＣ ＫＤ−８０６Ｍカラム）を使用し、ポリスチレン標準試料により得られる較正曲線を用いて算出した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、関東化学ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｎ（４０−５０μｍ）を使用した。
EXAMPLES Hereinafter, although the preferable Example of this invention is described in detail, this invention is not limited to these Examples.
Reagents and data measurement Unless otherwise stated, purchased reagents were used without further purification. 1 H-NMR was measured using a BRUKER AVANCE 400 spectrometer (400 MHz), and chemical shifts were expressed in ppm. Mass spectrometry was performed using a BRUKER microOTOF-05 spectrometer, and elemental analysis was performed using a Yanaco MT-6 CHN CORDER spectrometer. The melting point was measured using a Yanaco Micro Melting Point Apparatus MP-J3 without any correction. Number average molecular weight and weight average molecular weight are obtained from polystyrene standard samples using JASCO GPC system (JASCO PU-2080 pump, JASCO RI-2031 differential refractometer, JASCO CO-2060 column oven, Shodex GPC KD-806M column). Calculated using a calibration curve. For silica gel column chromatography, Kanto Chemical Silica gel 60N (40-50 μm) was used.
［実施例１］８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン Example 1 8-Methoxy-4-methyl-2H-benzo [g] chromen-2-one
７−メトキシ−２−ナフトール（２００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（１．５ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下３−オキソブタン酸エチル（０．４ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−ヘキサン＝１：１→塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（８４ｍｇ，３０％）として得た。 7-Methoxy-2-naphthol (200 mg, 1.15 mmol) was suspended in 80% aqueous sulfuric acid (1.5 mL), ethyl 3-oxobutanoate (0.4 mL) was added in an ice bath, and then at room temperature. Stir for 14 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into water (100 mL), and an extraction operation was performed using methylene chloride (200 mL). The obtained methylene chloride layer was washed with water (100 mL) and then dehydrated with anhydrous sodium sulfate. The methylene chloride solution was evaporated to dryness under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography (methylene chloride-hexane = 1: 1 → methylene chloride used as a developing solvent) to give the title compound as white crystals (84 mg, 30% ).
融点 ２２２〜２２３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．５５（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），２．５１（３Ｈ，ｓ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２４１［Ｍ＋Ｈ］＋；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ３） Ｃ：７４．９９、Ｈ：５．０３；測定値 Ｃ：７４．８３、Ｈ：５．３１。 Melting point 222-223 ° C .; 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ 7.97 (1H, s), 7.79 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.55 (1H, s), 7.13 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.09 (1H, s), 6.27 (1H, s), 3.95 (3H, s), 2.51 (3H, s); ESI- MS: m / z 241 [M + H] + ; elemental analysis: calculated value (C 15 H 12 O 3 ) C: 74.99, H: 5.03; measured value C: 74.83, H: 5.31.
［実施例２］４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン [Example 2] 4-Chloromethyl-8-methoxy-2H-benzo [g] chromen-2-one
７−メトキシ−２−ナフトール（１ｇ，５．７４ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（８ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下４−クロロアセト酢酸エチル（２ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（７１ｍｇ，４．５％）として得た。 7-Methoxy-2-naphthol (1 g, 5.74 mmol) was suspended in 80% aqueous sulfuric acid solution (8 mL), ethyl 4-chloroacetoacetate (2 mL) was added in an ice bath, and the mixture was stirred at room temperature for 14 hours. . After completion of the reaction, the reaction solution was poured into water (100 mL), and extraction operation was performed using methylene chloride (200 mL). The obtained methylene chloride layer was washed with water (100 mL) and then dehydrated with anhydrous sodium sulfate. The methylene chloride solution was dried under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography (using methylene chloride as a developing solvent) to obtain the title compound as yellow crystals (71 mg, 4.5%).
融点 ２３４−２３５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０７（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｓ），４．７８（２Ｈ，ｓ），３．９７（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＣｌＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋２７５．０４７５；測定値２７５．０４８６；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＣｌＯ３） Ｃ：６５．５８、Ｈ：４．０４；測定値 Ｃ：６５．０１、Ｈ：４．１７。 Melting point 234-235 ° C .; 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ 8.07 (1H, s), 7.84 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.64 (1H, s), 7.17 (1H, dd, J = 9.1, 2.4 Hz), 7.13 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.58 (1H, s), 4.78 (2H, s), 3 .97 (3H, s); HR-ESI-MS: m / z; Elemental analysis: Calculated value (C 15 H 12 ClO 3 ) [M + H] + 275.0475; measured value 275.0486; Elemental analysis: calculated value (C 15 H 11 ClO 3) C: 65.58, H: 4.04; measured value C: 65.01, H: 4.17.
［実施例３］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート Example 3 (8-Methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（５０ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）の混合液に懸濁させ、アクリル酸（１ｍＬ）を加えた後、８０℃にて１３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（４５ｍｇ，８０％）として得た。 4-Chloromethyl-8-methoxy-2H-benzo [g] chromen-2-one (50 mg, 0.182 mmol) was suspended in a mixture of acetonitrile (1 mL) and triethylamine (1 mL), and acrylic acid (1 mL). Then, the mixture was stirred at 80 ° C. for 13 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into water (100 mL), and extraction operation was performed using methylene chloride (200 mL). The obtained methylene chloride layer was washed with water (100 mL) and then dehydrated with anhydrous sodium sulfate. The methylene chloride solution was evaporated to dryness and then purified by silica gel column chromatography (using methylene chloride as a developing solvent) to give the title compound as yellow crystals (45 mg, 80%).
融点 ２３７−２３８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９５（１Ｈ，ｓ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．４，１０．４Ｈｚ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），５．５１（２Ｈ，ｓ），３．９６（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１８Ｈ１５Ｏ５）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１１．０９２０、測定値３１１．０９１９。 Melting point 237-238 ° C .; 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ 7.95 (1H, s), 7.81 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.64 (1H, s), 7.17 (1H, dd, J = 9.1, 2.4), 7.13 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.58 (1H, d, J = 17.4 Hz), 6.52 ( 1H, s), 6.27 (1H, dd, J = 17.4, 10.4 Hz), 6.00 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.51 (2H, s), 3. 96 (3H, s); HR -ESI-MS: m / z calcd (C 18 H 15 O 5) [M + H] + 311.0920, measured 311.0919.
［実施例４］４−ヒドロキシメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン Example 4 4-Hydroxymethyl-8-methoxy-2H-benzo [g] chromen-2-one
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（１０ｍｇ，０．０３２２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ、５ｍＬ）を加えた後、６０℃にて１時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−メタノール＝１０：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（５．９ｍｇ，７１％）として得た。 (8-Methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate (10 mg, 0.0322 mmol) was dissolved in ethanol (15 mL) and an aqueous sodium hydroxide solution (0.1 mol / L, 5 mL), and then stirred at 60 ° C. for 1 hour. After completion of the reaction, the reaction solution was evaporated to dryness and purified by silica gel column chromatography (using methylene chloride-methanol = 10: 1 as a developing solvent) to give the title compound as white crystals (5.9 mg, 71%).
融点 ２１０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．２４（１Ｈ，ｓ），７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），６．５７（１Ｈ，ｓ），５．０６（２Ｈ，ｓ），３．９８（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１３Ｏ４）［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５７．０８１４；測定値２５７．０８５１。 Melting point 210 ° C .; 1 H-NMR (acetone-d 6 ) δ8.24 (1H, s), 7.96 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.70 (1H, s), 7.39 (1H, d, J = 2.4 Hz), 7.18 (1H, dd, J = 9.1, 2.4 Hz), 6.57 (1H, s), 5.06 (2H, s), 3 .98 (3H, s); HR -ESI-MS: m / z calcd (C 15 H 13 O 4) [M + H] + 257.0814; measured 257.0851.
［実施例５］８−メトキシ−４−［メチル（オクチル）アミノ］メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン Example 5 8-Methoxy-4- [methyl (octyl) amino] methyl-2H-benzo [g] chromen-2-one
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（１０ｍｇ，０．０３６４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−メチル−ｎ−オクチルアミン（５００μＬ）、トリエチルアミン（４．４ｍｇ）を加えた後４０℃にて３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒は塩化メチレン-メタノール＝１０：１）にて精製を行い、白色結晶（１３．２ｍｇ，９５％）を得た。 4-Chloromethyl-8-methoxy-2H-benzo [g] chromen-2-one (10 mg, 0.0364 mmol) was dissolved in acetonitrile (10 mL), and N-methyl-n-octylamine (500 μL), triethylamine ( (4.4 mg) was added, followed by stirring at 40 ° C. for 3 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was evaporated to dryness and purified by silica gel column chromatography (developing solvent: methylene chloride-methanol = 10: 1) to obtain white crystals (13.2 mg, 95%). .
融点９９−１００℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３１（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．４Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），３．７０（２Ｈ，ｓ），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２９（３Ｈ，ｓ），１．５６（２Ｈ，ｍ），１．３０（１０Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ２４Ｈ３２ＮＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８２．２３８２；測定値３８２．２３７４。 Melting point: 99-100 ° C .; 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ 8.31 (1H, s), 7.79 (1H, d, J = 8.9 Hz), 7.60 (1H, s), 7.13 (1H, dd, J = 8.9, 2.4 Hz), 7.10 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.52 (1H, s), 3.95 (3H, s), 3 .70 (2H, s), 2.50 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.29 (3H, s), 1.56 (2H, m), 1.30 (10H, m), 0.87 (3H, t, J = 6.9Hz); HR-ESI-MS: m / z calcd (C 24 H 32 NO 3) [M + H] + 382.2382; measured 382.2374.
［実施例６］９−ブロモ−８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン Example 6 9-Bromo-8-methoxy-4-methyl-2H-benzo [g] chromen-2-one
８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン（３０ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（２ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２５ｍｇ，１．１ｅｑ）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（１ｍｇ）を加えた。溶液の溶存酸素を除去した後、７０℃にて２時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン：ｎ−ヘキサン＝３：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（２５ｍｇ，６３％）として得た。 8-Methoxy-4-methyl-2H-benzo [g] chromen-2-one (30 mg, 0.125 mmol) was dissolved in carbon tetrachloride (2 mL) and N-bromosuccinimide (25 mg, 1.1 eq), α, α-Azobisisobutyronitrile (1 mg) was added. After removing dissolved oxygen from the solution, the solution was stirred at 70 ° C. for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was evaporated to dryness and purified by silica gel column chromatography (using methylene chloride: n-hexane = 3: 1 as a developing solvent) to give the title compound as yellow crystals (25 mg, 63%).
融点 ＞２８０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１２（１Ｈ，ｓ），８．０４（１Ｈ，ｓ），７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｓ），４．０７（３Ｈ，ｓ），２．５４（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＢｒＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１８．９９７０；測定値３１８．９９５２；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＢｒＯ３） Ｃ：５６．４５、Ｈ：３．４７；測定値 Ｃ：５６．７２、Ｈ：３．７３。 Melting point> 280 ° C .; 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ 8.12 (1H, s), 8.04 (1H, s), 7.93 (1H, d, J = 9.0 Hz), 7.30 ( 1H, d, J = 9.0 Hz), 6.33 (1H, s), 4.07 (3H, s), 2.54 (3H, s); HR-ESI-MS: m / z calculated value ( C 15 H 12 BrO 3 ) [M + H] + 318.9970; measured value 318.9955; elemental analysis: calculated value (C 15 H 11 BrO 3 ) C: 56.45, H: 3.47; measured value C: 56.72, H: 3.73.
［実施例７］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体 [Example 7] (8-methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate / N- (3- (dimethylamino) propyl) acrylamide / Nn-propylacrylamide copolymer Coalescence
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ；以下、ＢＣとも称する）、Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド（３９．１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ；以下、ＤＭＡＰＡＭとも称する）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（２５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ；以下、ＮＮＰＡＭとも称する）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ、以下、ＡＩＢＮとも称する）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１６８ｍｇ、５６％）として得た。 (8-methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate (776 μg, 2.5 μmol; hereinafter also referred to as BC), N- (3- (dimethylamino) propyl) acrylamide ( 39.1 mg, 0.25 mmol; hereinafter also referred to as DMAPAM), Nn-propylacrylamide (255 mg, 2.25 mmol; hereinafter also referred to as NNPAM), α, α-azobisisobutyronitrile (4.11 mg, 25 μmol, hereinafter also referred to as AIBN) was dissolved in dioxane (5 mL), and dissolved oxygen was removed by passing nitrogen gas for 30 minutes. Then, it was made to react at 60 degreeC for 8 hours, and the reaction solution was poured into diethyl ether (100 mL). The obtained crystals were collected by filtration and purified by reprecipitation (acetone 5 mL-diethyl ether 100 mL) to give the title copolymer as white crystals (168 mg, 56%).
数平均分子量：３９１００、重量平均分子量：９６１００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＤＭＡＰＡＭ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５８：１０：９０。なお、共重合体におけるＤＭＡＰＡＭユニットとＮＮＰＡＭユニットの割合は１Ｈ−ＮＭＲ測定における積分値より、ＢＣユニットの割合はメタノール中の吸光度を８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オンの吸光度（３４３ｎｍにおいてモル吸光係数１８４００Ｍ−１ｃｍ−１）と比較することにより算出した。 Number average molecular weight: 39100, weight average molecular weight: 96100, composition ratio of each unit of copolymer BC: DMAPAM: NNPAM = 0.058: 10: 90. In addition, the ratio of the DMAPAM unit and the NNPAM unit in the copolymer is the integrated value in 1 H-NMR measurement, and the ratio of the BC unit is the absorbance in methanol of 8-methoxy-4-methyl-2H-benzo [g] chromene- It was calculated by comparing with the absorbance of 2-one (molar extinction coefficient 18400 M −1 cm −1 at 343 nm).
［実施例８］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体 Example 8 (8-Methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate / Nn-propylacrylamide copolymer
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（ＮＮＰＡＭ、２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１９４ｍｇ、６８％）として得た。 (8-methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate (776 μg, 2.5 μmol), Nn-propylacrylamide (NNPAM, 283 mg, 2.5 mmol), AIBN (4 .11 mg, 25 μmol) was dissolved in dioxane (5 mL) and dissolved oxygen was removed by passing nitrogen gas for 30 minutes. Then, it was made to react at 60 degreeC for 8 hours, and the reaction solution was poured into diethyl ether (100 mL). The obtained crystals were collected by filtration and purified by reprecipitation (acetone 5 mL-diethyl ether 100 mL) to give the title copolymer as white crystals (194 mg, 68%).
数平均分子量；３７８００，重量平均分子量；８７１００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５０：１００。 Number average molecular weight; 37800, weight average molecular weight; 87100, composition ratio of each unit of copolymer BC: NNPAM = 0.050: 100.
［実施例９］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルアクリルアミド共重合体 Example 9 (8-Methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate / N-isopropylacrylamide copolymer
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ；以下、ＮＩＰＡＭとも称する）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（ジオキサン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（２１９ｍｇ、７６％）として得た。 (8-methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate (776 μg, 2.5 μmol), N-isopropylacrylamide (283 mg, 2.5 mmol; hereinafter also referred to as NIPAM), AIBN (4.11 mg, 25 μmol) was dissolved in dioxane (5 mL) and dissolved oxygen was removed by passing nitrogen gas through for 30 minutes. Then, it was made to react at 60 degreeC for 8 hours, and the reaction solution was poured into diethyl ether (100 mL). The obtained crystals were collected by filtration and purified by reprecipitation (dioxane 5 mL-diethyl ether 100 mL) to give the title copolymer as white crystals (219 mg, 76%).
数平均分子量：５１５００，重量平均分子量：１４８０００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＡＭ＝０．０４９：１００。 Number average molecular weight: 51500, weight average molecular weight: 148000, composition ratio of each unit of copolymer BC: NIPAM = 0.049: 100.
［実施例１０］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド共重合体 Example 10 (8-Methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate / N-isopropyl methacrylamide copolymer
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド（ＮＩＰＭＡＭ、３１８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ，２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて１６時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ｎ−ヘキサン１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１５０ｍｇ、４７％）を得た。 (8-methoxy-2-oxo-2H-benzo [g] chromen-4-yl) methyl acrylate (776 μg, 2.5 μmol), N-isopropylmethacrylamide (NIPMAM, 318 mg, 2.5 mmol), AIBN (4. 11 mg, 25 μmol) was dissolved in dioxane (5 mL), and dissolved oxygen was removed by passing nitrogen gas for 30 minutes. Then, it was made to react at 60 degreeC for 16 hours, and the reaction solution was poured into diethyl ether (100 mL). The obtained crystals were collected by filtration and purified by reprecipitation (acetone 5 mL-n-hexane 100 mL) to give the title copolymer as white crystals (150 mg, 47%).
数平均分子量：１５６００、重量平均分子量：２９９０００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＭＡＭ＝０．１４：１００。 Number average molecular weight: 15600, weight average molecular weight: 299000, composition ratio of each unit of copolymer BC: NIPMAM = 0.14: 100.
蛍光特性測定
実施例１で製造した化合物（以下、化合物１と称する）の吸光および蛍光特性を以下の手順により測定した。吸光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ Ｖ−５５０紫外可視光分光光度計を使用した。紫外部吸収スペクトル用純溶媒を用い、２５℃、濃度１０μＭの条件で測定を行った。蛍光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用した。蛍光分析用純溶媒を用い、２５℃、濃度１〜１０μＭの条件で測定を行った。各溶媒を用いた際の励起波長は、最大吸収波長とし、蛍光量子収率の算出には硫酸キニーネを標準試料（蛍光量子収率：０．５４６）として用いた。
Fluorescence property measurement The absorption and fluorescence properties of the compound produced in Example 1 (hereinafter referred to as Compound 1) were measured by the following procedure. A JASCO V-550 ultraviolet-visible light spectrophotometer was used for the test of the light absorption characteristics. Measurement was carried out using a pure solvent for ultraviolet absorption spectrum at 25 ° C. and a concentration of 10 μM. A JASCO FP-6500 spectrofluorometer was used for the fluorescence property test. Measurement was performed using a pure solvent for fluorescence analysis under the conditions of 25 ° C. and a concentration of 1 to 10 μM. The excitation wavelength when using each solvent was the maximum absorption wavelength, and quinine sulfate was used as a standard sample (fluorescence quantum yield: 0.546) for calculation of the fluorescence quantum yield.
測定結果を表１および図１に示す。 The measurement results are shown in Table 1 and FIG.
化合物１は非極性溶媒であるヘキサン中では全く蛍光を示さない一方で、極性溶媒であるメタノールや、水−メタノールの混合液中では強い蛍光性を示した。さらに、極性溶媒中における蛍光波長は約４６０ｎｍ以上であり、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する性質が知られている他の蛍光試薬と比較しても長波長であることが判明した。吸収波長と蛍光波長の差であるストークスシフトは、極性溶媒中において１００ｎｍ以上であった。また、化合物１は、上記の溶媒中で光照射下、安定に存在しうることを確認した。 Compound 1 did not show any fluorescence in hexane, which is a nonpolar solvent, but showed strong fluorescence in methanol, which is a polar solvent, or a mixture of water and methanol. Furthermore, the fluorescence wavelength in a polar solvent is about 460 nm or more, and it turns out that it is a long wavelength compared with other fluorescent reagents known to have the property that the Φ f value increases as the polarity of the solvent increases. did. The Stokes shift, which is the difference between the absorption wavelength and the fluorescence wavelength, was 100 nm or more in the polar solvent. In addition, it was confirmed that Compound 1 can exist stably in the above solvent under light irradiation.
安定性試験
化合物１のアルカリ条件下における安定性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ９）を用いた。化合物２の初期濃度は１０μＭとし、測定中、化合物１の最大励起波長である３４７ｎｍの光を連続照射した。
Stability test The stability test of Compound 1 under alkaline conditions was performed according to the following procedure. A JASCO FP-6500 spectrofluorometer was used, and 0.01M borate buffer (pH 9) was used as a solvent. The initial concentration of Compound 2 was 10 μM, and light of 347 nm, which is the maximum excitation wavelength of Compound 1, was continuously irradiated during the measurement.
試験結果を図２に示す。ｐＨ９、６０℃の条件下、化合物１は少なくとも２．５時間蛍光強度に認められず、塩基性条件下における光照射に対しても化合物１は安定であることが確認された。 The test results are shown in FIG. Under the conditions of pH 9 and 60 ° C., Compound 1 was not observed in fluorescence intensity for at least 2.5 hours, and it was confirmed that Compound 1 was stable even under light irradiation under basic conditions.
感熱応答性試験
実施例７、８、９および１０で製造した共重合体（それぞれ以下、化合物２、３、４および５と称する）の感熱応答性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０５Ｍフタル酸緩衝液（ｐＨ４）を用いた。化合物２、３，４および５の初期濃度は０．０１ｗ／ｖ％とし、励起波長は３４５ｎｍとした。溶液の温度制御にはＪＡＳＣＯ ＥＴＣ−２７３Ｔ水冷ペルチェ式恒温セルホルダを使用し、付属の熱電対により温度を測定した。
試験結果を図３に示す。いずれの化合物も、低温領域で強い蛍光を示し、温度の変化に鋭敏に反応して蛍光強度が変化することが確認された。この挙動は、本発明により導入された蛍光性官能基が、温度上昇に伴う高分子の構造変化による官能基近傍の極性低下を感知していることによると考えられる。
Thermal Sensitivity Test A thermal responsiveness test of the copolymers produced in Examples 7, 8, 9 and 10 (hereinafter referred to as compounds 2, 3, 4 and 5) was carried out by the following procedure. A JASCO FP-6500 spectrofluorometer was used, and 0.05 M phthalate buffer (pH 4) was used as a solvent. The initial concentrations of compounds 2, 3, 4 and 5 were 0.01 w / v%, and the excitation wavelength was 345 nm. A JASCO ETC-273T water-cooled Peltier thermostatic cell holder was used for temperature control of the solution, and the temperature was measured with an attached thermocouple.
The test results are shown in FIG. All of the compounds showed strong fluorescence in the low temperature region, and it was confirmed that the fluorescence intensity changed in response to the change in temperature. This behavior is considered to be due to the fact that the fluorescent functional group introduced by the present invention senses a decrease in the polarity in the vicinity of the functional group due to the structural change of the polymer as the temperature rises.
Claims (14)
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
ＸはＯであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキルであり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ １４ 、Ｒ １７ 、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩。 Formula (Ia):
q is selected from an integer of 1-2;
R 5 is hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, amino, C 1-6 alkylamino or di (C 1-6 alkyl) amino;
n is selected from an integer from 1 to 6;
X is O;
R 2 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl;
Q is a C 1-10 alkylene group;
Y is a halogen atom, hydroxy, mercapto, —NCS, —NCO, halocarbonyl, carboxy, C 1-6 alkoxycarbonyl, —NR 17 R 18 , maleimide, C 2-6 alkenylthio, C 2-6 alkenylsulfonyl, It is -CH (NHR 21) COOR 22 or -X 1 -Z;
X 1 is O or NR 19 ;
Z is C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 2-6 alkenylcarbonyl, C 2-6 alkynylcarbonyl, or — (CH 2 ) m CH (NHR 23 ) COOR 24 ;
m is selected from an integer from 1 to 6;
R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 17 , R 18 and R 19 are independently selected from a hydrogen atom and C 1-6 alkyl;
R 21 and R 23 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 7-14 aralkyloxycarbonyl, and fluoren-9-ylmethyloxycarbonyl;
R 22 and R 24 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 7-14 aralkyl, C 7-14 aralkyloxy C 1-6 alkyl. ]
Or a salt thereof.
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキルである］
で表される繰り返し単位を含むポリマー。 Formula (II):
R 3 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl]
The polymer containing the repeating unit represented by these.
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含む、請求項５に記載のポリマー。 Formula (III):
R 32 is hydroxy, amino, C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino or di (C 1-10 alkyl) amino, wherein the C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino, di ( C 1-10 alkyl) amino is each independently substituted with one or more substituents selected from hydroxy, amino, C 1-10 alkoxy, C 1-10 alkylamino or di (C 1-10 alkyl) amino It may be done]
The polymer according to claim 5, further comprising a repeating unit represented by:
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
ＸはＯであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキルであり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ １４ 、Ｒ １７ 、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬。 Formula (Id):
q is selected from an integer of 1-2;
R 5 is hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, amino, C 1-6 alkylamino or di (C 1-6 alkyl) amino;
n is selected from an integer from 1 to 6;
X is O;
R 2 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl;
Q is a C 1-10 alkylene group;
Y 1 represents a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, mercapto, —NCS, —NCO, halocarbonyl, carboxy, C 1-6 alkoxycarbonyl, —NR 17 R 18 , maleimide, C 2-6 alkenylthio, C 2−. 6 alkenylsulfonyl, —CH (NHR 21 ) COOR 22 or —X 1 —Z;
X 1 is O or NR 19 ;
Z is C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 2-6 alkenylcarbonyl, C 2-6 alkynylcarbonyl, or — (CH 2 ) m CH (NHR 23 ) COOR 24 ;
m is selected from an integer from 1 to 6;
R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 17 , R 18 and R 19 are independently selected from a hydrogen atom and C 1-6 alkyl;
R 21 and R 23 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 7-14 aralkyloxycarbonyl, and fluoren-9-ylmethyloxycarbonyl;
R 22 and R 24 are independently selected from a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 7-14 aralkyl, C 7-14 aralkyloxy C 1-6 alkyl. ]
A fluorescent reagent comprising a compound represented by the formula:
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