JP3738847B2 - 診断薬用粒子の製造方法 - Google Patents
診断薬用粒子の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3738847B2 JP3738847B2 JP2003077547A JP2003077547A JP3738847B2 JP 3738847 B2 JP3738847 B2 JP 3738847B2 JP 2003077547 A JP2003077547 A JP 2003077547A JP 2003077547 A JP2003077547 A JP 2003077547A JP 3738847 B2 JP3738847 B2 JP 3738847B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- particles
- magnetic
- polymerization
- polymer layer
- particle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Graft Or Block Polymers (AREA)
- Soft Magnetic Materials (AREA)
- Polymerisation Methods In General (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生化学・医薬品分野での診断薬用粒子の製造方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
粒子径分布が比較的均一でかつ磁性体を複合化させる粒子の製造法としては、モノマーに磁性体を分散させその存在下で懸濁重合もしくはミニエマルジョン重合を行い、磁性体を粒子内に取り込ませ、この粒子をさらに分級する方法がある。しかし、この方法では、重合終了時に得られた粒子の粒子径分布は非常に広く、複数回の分級を繰り返さなければ目的の均一な粒子径を得ることができず、さらに分級を繰り返すことにより収量が減る結果となり、作業効率、収率のバランスに欠ける。また、水中で粒子上に金属化合物を析出させる方法として、Ｆｅ塩を中和し、水酸化鉄としてＮＨ２、ＮＯ２基を持つ多孔粒子に析出させて酸化する方法（特公平５−１０８０８号公報）が提案されている。しかし、この方法は、製造工程が極めて煩雑でありかつ大量生産には不適切であった。また、ヘテロ凝集を利用する方法（米国特許第５，６４８，１２４号）が提案されている。しかし、この方法では、反対電荷物質投入時の凝集コントロールが困難であり、複合化を優先させるために多くの場合凝集反応が過剰となるため、できあがった粒子は再分散が困難な程度にまで凝集体を形成しており、粒子径の均一性に欠ける。さらに、ポリマーコア粒子表面において、モノマーと磁気的に応答する金属酸化物を同時に重合させてポリマー粒子に磁性体を導入する方法（特許第２７３６４６７号公報）が提案されている。しかし、この方法では、磁性体導入後の粒子は完全にポリマーコートされておらず、粒子表面に磁性体が存在している構造であることから、磁性体の脱落、鉄イオンなどの磁性体成分に由来する物質の溶出などの問題があった。この問題は、該粒子を診断薬用の担体に用いたときに特に悪影響として働くことが知られている。生化学分野の分析方法である酵素免疫測定法(ＥＩＡ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ)において、o-フェニレンジアミン(OPD)のようなある種の発色基質を測定に用いた場合、Ｆｅが干渉物質として働き、測定のバックグランドを押し上げて測定値を誤らせる原因となることが報告されている。（Ｒｅｖ．ｅｓｐ．Ｆｉｓｉｏｌ．，４５（１），４１‐４６，１９８９） そこで、表面に磁性体が存在せず、磁性体の脱離、鉄イオンの溶出などの問題のない、ＥＩＡ法などの診断薬用担体としても利用可能な磁性粒子が望まれていた。
【０００３】
【特許文献１】
特許第２７３６４６７号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、磁性体の脱落、鉄イオンなどの磁性体成分に由来する物質の溶出がなく、均一粒子径を有した診断薬用粒子を簡便かつ効率的に製造することを目的とするものである。
【０００５】
本発明の診断薬用粒子の製造方法は、核粒子の表面に磁性体層が形成された母粒子であって、該磁性体層は、Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４の少なくとも一方を含み、前記Ｆｅ ２ Ｏ ３ およびＦｅ ３ Ｏ ４ の少なくとも一方はトルエンに分散するように疎水化されており、該核粒子の平均粒子径が０．４〜２００μｍである該母粒子の存在下で重合により該磁性体層上にポリマー層を形成する工程を含む。
【０００６】
本発明で使用する核粒子は、基本的に非磁性物質であり、有機物質および無機物質のいずれも使用可能であり、診断薬用粒子の使用目的などによって適宜選択することができる。
【０００７】
有機物質の代表例としては、例えばポリマーを挙げることができる。かかるポリマーとしては、特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレートなどの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【０００８】
上述した特定範囲の平均粒子径を有する核粒子としてのポリマー粒子は、例えば上記のビニル系モノマーの懸濁重合、あるいはポリマーバルクの粉砕によって得ることもできる。均一な粒子径を有する核粒子の作製法としては、特公昭５７−２４３６９号公報記載の膨潤重合法、ジャーナル オブポリマーサイエンス ポリマーレター エディション（Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ Ｅｄ．）記載の重合方法、あるいは本発明者らが先に提案した重合方法（特開昭６１−２１５６０２号、同６１−２１５６０３号、同６１−２１５６０４号）によって容易に製造することができる。
【０００９】
本発明で使用する核粒子の平均粒子径は、０．４〜２００μｍ、好ましくは０．８〜１００μｍ、さらに好ましくは１．０〜５０μｍである。核粒子のＣＶ（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ）値は、２０％以下、好ましくは１５％以下、より好ましくは１０％以下である。核粒子の平均粒子径が１μｍ未満では、たとえば粒子の高速撹拌による衝突エネルギーが不十分で磁性体微粒子の吸着が困難になる。一方、核粒子の平均粒子径が２００μｍを超えると、微粒子としての特性が失われてしまう。また、ＣＶ値が上記範囲をはずれると、得られる磁性体複合粒子の粒子径の均一性が不十分となる。
【００１０】
本発明において核粒子の材質は、複合化の際の加工性、軽量性の観点からポリマーなどの有機物質が好ましい。なお、本発明における平均粒子径および粒子径分布は、電子顕微鏡写真上にて１００個の粒子の粒子径を無作意に測定して求めたものである。
【００１１】
本発明で使用する磁性体層を構成する磁性体微粒子としては、酸化鉄系の物質が代表的であり、ＭｎＦｅ２Ｏ４（Ｍｎ＝Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｌｉ０．５Ｆｅ０．５等）で表現されるフェライト、Ｆｅ３Ｏ４で表現されるマグネタイト、あるいはγ−Ｆｅ２Ｏ３が挙げられ、飽和磁化が強く、かつ残留磁化が少ないγ−Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４のいずれか一方を含むことが必要である。
【００１２】
本発明で使用する磁性体微粒子の平均粒子径は、好ましくは核粒子の平均粒子径の１／５以下であり、より好ましくは１／１０以下であり、さらに好ましくは１／２０以下である。磁性体微粒子の平均粒子径が核粒子の平均粒子径の１／５を超えると核粒子表面に均一かつ十分な厚みを持った被覆層を形成することができにくい。
【００１３】
本発明での核粒子と磁性体微粒子との比（核粒子：磁性体微粒子）は、重量比で９５：５〜２０：８０が好ましい。磁性体微粒子がこの範囲の量より少ないと、複合化効果が少なくなる。磁性体微粒子がこの範囲の量より多いと、核粒子の対する量が過剰となり、複合化されない磁性体微粒子が多くなる。
【００１４】
本発明で使用する磁性体微粒子は、核粒子と後工程で使用する単量体モノマーとの親和性、相溶性との観点から表面が疎水化されたものが望ましい。磁性体微粒子の表面の疎水化処理方法としては、磁性体微粒子と極めて親和性の高い部分と疎水性の部分とを分子内に有する化合物を磁性体微粒子に接触させて結合させる方法を挙げることができる。このような親和性の高い部分と疎水性の部分とを分子内に有する化合物としては、シランカップリング剤に代表されるシラン化合物を挙げることができる。
シラン化合物により磁性体微粒子を疎水化することによって、薬品耐性、特にアルカリ耐性に優れ、診断薬として使用中に磁性体微粒子が核粒子から剥離し磁気性能が低下する問題、あるいは脱離した磁性体微粒子が診断薬反応液中に浮遊する事により生じる汚染物混入を効果的に防止することができる。
本発明においては、疎水化された磁性体微粒子が、たとえばトルエンに良好に分散することができる場合に、十分に疎水化されているということができる。
【００１５】
シランカップリング剤に代表されるシラン化合物としては、ビニルトリクロロシラン、ビニルトリメトキシシラン、ビニルトリス（β−メトキシエトキシ）シラン、β−（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、γ−グリシドオキシプロピルトリメトキシシラン、γ−メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−β（アミノエチル）−γ−アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−β（アミノエチル）−γ−アミノプロピルトリメトキシシラン、ドデシルトリメトキシシラン、ヘキシルトリメトキシシラン、メチルトリメトキシシラン、メチルトリエトキシシラン、フェニルトリメトキシシラン、ドデシルトリクロロシラン、ヘキシルトリクロロシラン、メチルトリクロロシラン、フェニルトリクロロシランなどがある。
【００１６】
これらのシラン化合物を磁性体微粒子に結合させる方法としては、例えば、磁性体微粒子と、シラン化合物とを水などの無機媒質またはアルコール、エーテル、ケトン、エステルなどの有機媒質中で混合し、撹拌しながら加熱した後、磁性体微粒子をデカンテーションなどにより分離して減圧乾燥により無機媒質または有機媒質を除去する手段を挙げることができる。また、磁性体微粒子とシラン化合物とを直接混合し加熱させて両者を結合させてもよい。これらの手段において、加熱温度は通常３０〜１００℃であり、加熱温度は０．５〜２時間程度である。また、シラン化合物の使用量は、磁性体微粒子の表面積によって適宜定められているが、通常磁性体微粒子１００重量部に対して１〜５０重量部、好ましくは２〜３０重量部である。
【００１７】
本発明において核粒子の表面に磁性体微粒子の被覆する磁性体層を形成するには、先ず核粒子と磁性体微粒子とを混合し、核粒子の表面に磁性体微粒子を物理的に吸着させる。本発明で述べる物理的吸着法とは、化学反応を伴わない吸着法、結合法を指すものである。
【００１８】
核粒子の表面に磁性体微粒子を吸着させるには、物理的に強い力を外部から加えることにより複合化を実現させる方法も有効である。例えば乳鉢、自動乳鉢、ボールミル、ブレード加圧式粉体圧縮法、メカノフュージョン法のようなメカノケミカル効果を利用するもの、あるいはジェットミル、ハイブリダイザーなど高速気流中衝撃法を利用するものが挙げられる。
効率よくかつ強固に複合化を実施するには物理的吸着力が強いことが望ましい。その方法としては攪拌翼付き容器中で攪拌翼の周速度が好ましくは１５ｍ/秒以上、より好ましくは３０ｍ/秒以上、さらに好ましくは４０〜１５０ｍ/秒で実施することが挙げられる。撹拌翼の周速度が15m/秒より低いと、被覆層を形成する十分なエネルギーを得ることができないことがある。なお、撹拌翼の周速度の上限については、特に制限はないが、使用する装置、エネルギー効率などの点から自ずと決定される。
本発明において、核粒子の表面に形成された磁性体層の厚さは ０．００５〜２０μｍ、好ましくは ０．０１〜５μｍであり、厚みは均一であることが好ましい。磁性体層の厚さが、０．００５μｍより小さい場合、磁性体含有量が小さくなり、充分な磁気分離性が得られず、２０μｍを超える場合は、磁性体層の強度が低下し、磁性体層がこわれるおそれがある。
また、核粒子の表面は完全に磁性体層で被覆されていることが好ましく、核粒子表面の少なくとも９０％以上は磁性体層で被覆されていることが必要である。
【００１９】
次に、上記のようにして製造された母粒子の表面に形成するポリマー層（以下、「第１コーティングポリマー層」ともいう）について述べる。
【００２０】
かかるポリマー層は、母粒子の存在下で、主原料としての共重合性モノマーと、副原料である重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤などが必要に応じて添加され液体中で重合を行うことにより形成される。このようにポリマー層を重合によって形成することにより、当該ポリマー層の表面に所望の官能基を導入することができるなど、表面加工性にすぐれる。
【００２１】
ポリマー層の成分としては特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステル、アクロレインなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。
【００２２】
また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、無類マレイン酸、クロトン酸などのモノまたはジカルボン酸化合物、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、グリセロールモノアクリレート、グリセロールモノメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、連鎖数２〜４０のポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを側鎖とする（メタ）アクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、スチレンスルホン酸およびそのナトリウム塩、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸およびそのナトリウム塩、イソプレンスルホン酸およびそのナトリウム塩などの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【００２３】
重合開始剤としては、水への溶解性の観点から分類すると、油溶性重合開始剤が好ましい。水溶性の重合開始剤を用いると複合粒子表面での重合でなく、磁性体被覆粒子を含まない疎水性重合重合モノマーのみが重合した新粒子が多量に生じる傾向がある。
【００２４】
油溶性重合開始剤としては、ベンゾイルペルオキシド、ラウロイルペルオキシド、ターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート、３，５，５−トリメチルヘキサノイルペルオキシド、アゾビスイソブチロニトリル等の過酸化化合物、アゾ化合物などを挙げることができる。
【００２５】
水溶性開始剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、過酸化水素、2-2アゾビス（2-アミノプロパン）鉱酸塩、アゾビスシアノ吉草酸およびそのアルカリ金属塩およびアンモニウム塩等があげられ、また、過硫酸塩、過酸化水素塩と重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化第一鉄等を組み合わせたレドックス開始剤もあげられ、中でも過硫酸塩が好適に用いられる。これらの重合開始剤のモノマー全体に対する割合は0.01〜8重量％の範囲が好適に用いられる。
【００２６】
乳化剤としては、通常使用されている陰イオン性界面活性剤または非イオン性界面活性剤等、を単独もしくは組み合わせて用いることができる。例えば反応性陰イオン性界面活性剤としては、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アルキルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルの硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルのリン酸エステル塩、ナフタレンスルホン酸ナトリウムのホルマリン縮合物などの陰イオン性界面活性剤の他、ラテムルＳ−１８０Ａ（花王（株）製）、エレミノールＪＳ−２（三洋化成（株）製）、アクアロンＨＳ−１０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（旭電化工業（株）製）などを挙げることができる。
【００２７】
また、非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルなどのほか、アクアロンＲＳ−２０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＮＥ−２０（旭電化工業（株）製）などの反応性非イオン性界面活性剤を挙げることができる。
【００２８】
ポリマー層の形成におけるモノマーの重合系への添加方法は、とくに制限されず、一括方式、分割方式あるいは連続添加方式のいずれであっても良い。重合温度は重合開始剤によって異なるが、通常１０〜９０℃好ましくは３０〜８５℃であり、重合に要する時間は通常１〜３０時間程度である。
【００２９】
また、ポリマー層形成後、エチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルのアルカリ加水分解、ビニルエステルのアルカリけん化などの方法により官能基を改変することも可能である。
【００３０】
本発明において、ポリマー層の厚さは ０．００５〜２０μｍ、好ましくは０．０１〜５μｍである。また、ポリマー層は磁性体層を完全に被覆していることが好ましい。
【００３１】
上記のようにポリマー層を形成した粒子は、そのまま診断薬用粒子として用いることが可能であるが、さらに診断薬用粒子として好適な粒子表面を形成するために、コーティングポリマー層に、再度ポリマー層を形成することも可能である（以下、再度形成されたポリマー層を「第２コーティングポリマー層という）。この場合、第１コーティングポリマー層は、磁性体層を被覆することを主目的とし、第２コーティングポリマー層は、診断薬用粒子として好適な粒子表面を形成するための官能基導入を主目的とできるので、それぞれのポリマー層の形成を最適な条件で行うことが可能であり、診断薬用粒子の製造法として好ましい。
【００３２】
第２コーティングポリマー層の形成方法は、第１コーティングポリマー層の形成方法と基本的には同様に行なうことができ、第１コーティングポリマー層が形成された粒子の存在下で、主原料としての共重合性モノマーと、副原料である重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤などが必要に応じて添加され液体中で重合を行うことにより形成される。
【００３３】
第２コーティングポリマー層の成分としては特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。
【００３４】
また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、無類マレイン酸、クロトン酸などのモノまたはジカルボン酸化合物、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、グリセロールモノアクリレート、グリセロールモノメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、連鎖数２〜４０のポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを側鎖とする（メタ）アクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、スチレンスルホン酸およびそのナトリウム塩、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸およびそのナトリウム塩、イソプレンスルホン酸およびそのナトリウム塩などの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【００３５】
重合開始剤としては、水への溶解性の観点から分類すると、油溶性重合開始剤が好ましい。水溶性の重合開始剤を用いると複合粒子表面での重合でなく、磁性体被覆粒子を含まない疎水性重合重合モノマーのみが重合した新粒子が多量に生じる傾向がある。
【００３６】
油溶性重合開始剤としては、ベンゾイルペルオキシド、ラウロイルペルオキシド、ターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート、３，５，５−トリメチルヘキサノイルペルオキシド、アゾビスイソブチロニトリル等の過酸化化合物、アゾ化合物が挙げられる。
【００３７】
水溶性開始剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、過酸化水素、2-2アゾビス（2-アミノプロパン）鉱酸塩、アゾビスシアノ吉草酸およびそのアルカリ金属塩およびアンモニウム塩等があげられ、また、過硫酸塩、過酸化水素塩と重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化第一鉄等を組み合わせたレドックス開始剤もあげられ、中でも過硫酸塩が好適に用いられる。これらの重合開始剤のモノマー全体に対する割合は0.01〜8重量％の範囲が好適に用いられる。
【００３８】
乳化剤としては、通常使用されている陰イオン性界面活性剤または非イオン性界面活性剤等、を単独もしくは組み合わせて用いることができる。例えば陰イオン性界面活性剤としては、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アルキルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルの硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルのリン酸エステル塩、ナフタレンスルホン酸ナトリウムのホルマリン縮合物などの陰イオン性界面活性剤の他、ラテムルＳ−１８０Ａ（花王（株）製）、エレミノールＪＳ−２（三洋化成（株）製）、アクアロンＨＳ−１０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（旭電化工業（株）製）などの反応性イオン界面活性剤を挙げることができる。
【００３９】
また、非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルなどのほか、アクアロンＲＳ−２０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＮＥ−２０（旭電化工業（株）製）などの反応性非イオン性界面活性剤を挙げることができる。
【００４０】
第２コーティングポリマー層の形成におけるモノマーの重合系への添加方法は、とくに制限されず、一括方式、分割方式あるいは連続添加方式のいずれであっても良い。重合温度は重合開始剤によって異なるが、通常１０〜９０℃好ましくは３０〜８５℃であり、重合に要する時間は通常１〜３０時間程度である。
【００４１】
また、第２コーティングポリマー層を形成した後、エチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルのアルカリ加水分解、ビニルエステルのアルカリけん化などの方法により官能基を改変することも可能である。
【００４２】
本発明において、第２コーティングポリマー層の厚さは、第１コーティングポリマー層に比較して薄くすることが可能であり、 ０．００５〜５μｍ、好ましくは０．００５〜１μｍである。
【００４３】
本発明の方法により得られる診断薬用粒子は、粒子からの不純物の溶出、あるいは磁性体そのものの溶出あるいは磁性体からの不純物の溶出がないので診断薬用担体として好適である。このような診断薬用担体用途においては、ポリマー層の表面の特性を目的に応じて選択することができる。
診断薬用担体としての利用方法として、本発明の方法により得られる診断薬用担体粒子にタンパク質等の抗原あるいは抗体を結合し、測定対象である抗体あるいは抗原との抗原抗体反応に基づく受身凝集反応による溶液の濁度変化を利用した定量・定性検出用途、担体に抗体を結合し抗原であるウイルス・細菌・細胞・ホルモン・ダイオキシン類等の化学物質、などを結合して回収・濃縮する用途、担体にDNAなどの核酸アナログを結合して、核酸のハイブリダイゼーションを利用した核酸の回収・検出や、核酸に結合するタンパク質や色素等の化学物質を回収・検出する用途、担体にアビジンまたはビオチンを結合してビオチンあるいはアビジンを有する分子を回収して検出する用途、担体に抗体や抗原を結合し、比色法や化学発光を利用した酵素免疫測定法用の担体としての用途があげられる。従来、９６穴プレート等を担体として用いていた診断項目であれば、本発明の方法により得られる診断薬用粒子を用いることによって、磁性を利用した自動分析機に置き換えて使用できる。診断の対象となる物質としては、生体由来のタンパク質、黄体形成ホルモン、甲状腺刺激ホルモン等のホルモン、各種ガン細胞や、前立腺特異マーカー、膀胱ガンマーカー等のガンのマーカーとなるタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルスなどのウイルス、淋菌、MRSA等の細菌、カンジダ、クリプトコックス等の真菌、トキソプラズマ等の原虫・寄生虫、あるいはそれらウイルス・細菌・真菌・原虫・寄生虫などの構成要素であるタンパク質や核酸、ダイオキシン類等の環境汚染物質、抗生物質や抗てんかん剤など医薬品等の化学物質、などがあげられる。
【００４４】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【００４５】
１．核粒子の作製
特公昭５７−２４３６９号公報記載の膨潤重合法、ジャーナル オブポリマーサイエンス ポリマーレター エディション（Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ Ｅｄ．）記載の重合方法、あるいは本発明者らが先に提案した重合方法（特開昭６１−２１５６０２、同６１−２１５６０３、同６１−２１５６０４）を参考に以下の粒子を作製した。核粒子１〜５は平均粒子径、ＣＶ値とも本願発明の範囲内のものであり、核粒子６はＣＶ値が本願発明の範囲より大きく、かつ不均一な粒子である。下記核粒子は、重合後遠心分離により粒子のみ取り出したものをさらに水洗し、乾燥、粉砕した。
【００４６】
核粒子１；メチルメタクリレート／ジビニルベンゼン＝８０／２０共重合体
(平均粒子径１．８μｍ ＣＶ値２．２％)
核粒子２；スチレン／ジビニルベンゼン＝８０／２０共重合体
(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値２．３％)
核粒子３；ポリメチルメタクリレート
(平均粒子径２．３μｍ ＣＶ値９．５％)
核粒子４；ポリスチレン
(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値１１．３％)
核粒子５；ポリシクロヘキシルメタクリレート
(平均粒子径２．４μｍ ＣＶ値３．５％)
核粒子６；ポリスチレン(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値２５．５％)
【００４７】
２．核粒子への磁性体の被覆（磁性体層の形成）
被覆方法１；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の超常磁性体（平均粒子径：０．０１μｍを得た。なおこの磁性体は界面活性剤により疎水化処理された表面を有するものである。得られた磁性体をトルエン／水（重量比１：１）に添加し、十分に攪拌した後静置したところ、磁性体はトルエンのみに分散されており、表面が疎水化されたことを確認した。ついで、核粒子５ｇに、疎水化された磁性体を５ｇ混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムNHS−０型（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度100m/秒（16200rpm）で３分間処理した。
【００４８】
被覆方法２；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の超常磁性体（平均粒子径：０．０１μｍを得た。なおこの磁性体は界面活性剤により疎水化処理された表面を有するものである。この界面活性剤を除去すべく、大量の２００ｍＭのＮａＯＨ水溶液で磁性体を洗浄し、ついで蒸留水で余剰のＮａＯＨを取り除いて乾燥させた。次に、この乾燥磁性体１０ｇにイソブチルトリメトキシシラン１００ｇを添加し、５０℃において８時間混合させて表面の疎水化処理を行い、磁性体を得た。この磁性体を回収し乾燥させた。得られた磁性体をトルエン／水（重量比１：１）に添加し、十分に攪拌した後静置したところ、磁性体はトルエンのみに分散されており、表面が疎水化されたことを確認した。
【００４９】
ついで、核粒子５ｇに、疎水化された磁性体を５ｇ混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−０が他（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ/秒（１６２００ｒｐｍ）で３分間処理した。
【００５０】
３．母粒子の表面のコーティング重合（コーティングポリマー層の形成）
表面コーティング重合１（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５１】
表面コーティング重合２（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇの混合物を２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５２】
表面コーティング重合３（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合２のシクロヘキシルメタクリレートをスチレンとした以外は全て表面コーティング重合２の方法に基づいて実施した。
【００５３】
表面コーティング重合４（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてポリビニルアルコール（ＰＶＡ）「ゴーセノールＧＬ−０３」（日本合成化学製；ケン化度８６．５〜８９．０ｍｏｌ％、重合度３００〜４００）の０．５％水溶液７５０ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液１５０ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて、２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５４】
表面コーティング重合５（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液３７５ｇと、アニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液３７５ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、ジビニルベンゼン０．６ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液７５ｇおよびアニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液７５ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて、２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５５】
表面コーティング重合６（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合５のシクロヘキシルメタクリレートをスチレンとした以外は全て表面コーティング重合５の方法に基づいて実施した。
【００５６】
表面コーティング重合７（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合６のメタクリル酸をアクリル酸とした以外は全て表面コーティング重合６の方法に基づいて実施した。
【００５７】
表面コーティング重合８（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液３７５ｇと、アニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液３７５ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてスチレン、メタクリル酸１．５ｇ、ジビニルベンゼン０．６ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液７５ｇおよびアニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液７５ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５８】
表面コーティング重合９（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合２で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５９】
表面コーティング重合１０（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合３で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６０】
表面コーティング重合１１（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合５で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３ｇ、ジビニルベンゼン０．２ｇ、メタクリル酸０．５ｇ、ポリエチレングリコール（ｎ＝９）モノメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６１】
表面コーティング重合１２（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、アクリル酸０．２ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６２】
表面コーティング重合１３（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、グリシジルメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６３】
表面コーティング重合１４（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、メタクリル酸０．５ｇ、グリセロールモノメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６４】
参考例１（重合により磁性体層およびコーティングポリマー層を同時に形成する方法）；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、得られた超常磁性体粉体４．８ｇを０．５％ラウリル硫酸ナトリウム４２０ｇに分散させ、さらにスチレン４．２ｇを添加しイカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下５５℃で１時間撹拌した。この混合物に過硫酸カリウム８ｇと０．５％ラウリル硫酸ナトリウム５６０ｇに分散させた核粒子１（ポリスチレン；平均粒子径２．１μｍ、ＣＶ値１．５％)３０ｇを添加した。さらに６時間後にスチレン４．２ｇと過硫酸カリウム７ｇを添加しさらに１５時間撹拌した。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。得られた粒子５ｇ（固形分）を０．５％ラウリル硫酸ナトリウム１５０ｇに分散させ、スチレン２ｇ、メタクリル酸１ｇ過硫酸カリウム１ｇを添加しイカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下５５℃で４時間撹拌した。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６５】
実施例１〜１２よび比較例１〜３；
上記の核粒子の作製方法、核粒子への磁性体の被覆方法、磁性体被覆粒子の表面コーティング重合方法を表１（実施例）および表２（比較例）に示すとおり組み合わせて診断薬用粒子を製造した。得られた粒子につき以下の評価を行った。
【００６６】
評価１；磁気捕捉率の評価
得られた診断薬用粒子を分散媒である水に分散させ、１重量％の試験液が得られるよう調整した。この試験液の１ｍｌをエッペンドルフチューブに入れ、撹拌後に横方向から４０００ガウスの磁気を１分間かけた場合の磁気捕捉率を測定した。
【００６７】
評価２；ＥＩＡ用担体としての評価
実施例１〜１４および比較例１〜３で得られた診断薬用粒子の２．０ｍｇをテストチューブに取り分けた。ここへ、基質反応液（o-フェニレンジアミン:１３ｍｇ，０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）：５０ｍＬ，３０％過酸化水素:１５μＬ）を０．５ｍＬ加え、遮光下、室温で１時間反応させた。その後、遠心分離で粒子を除き、上澄みの吸光度（波長４４６ｎｍ）を測定した。
【００６８】
結果１；磁気捕捉率の評価結果
実施例の診断薬用粒子は、いずれも磁気捕捉率が９９重量％以上であった。これは粒径分布が狭く磁気応答性が均一であることが理由として挙げられる。
【００６９】
一方、比較例の診断薬用粒子は、いずれも磁気捕捉率９９重量％以上が得られなかった。比較例１，２においては診断薬用粒子の粒径分布が広く磁気応答性が不均一であることが、比較例３においては磁性体含量が１１％と低いことに起因している事が理由としてあげられる。
【００７０】
結果２；ＥＩＡ用担体としての評価結果
ＥＩＡ用担体として粒子を用いる場合、粒子自身は分析結果を妨げないよう、基質溶液と一切相互作用せず、発色等の影響を示さない必要がある。実施例のいずれの粒子も総じて吸光度が低く、異常な発色を示さなかった。これは、粒子表面への磁性体の露出、あるいは粒子からの磁性体あるいは鉄イオンの溶出が極めて少ないためである。この結果は、これら粒子が、ＥＩＡ法等を利用した診断薬用担体として用いた場合、測定値に悪影響を与えることがないため、好適であることを示している。
【００７１】
一方、比較例３は異常に高い発色を示した。この方法（参考例１）で造られた粒子は磁性体のポリマーコーティングが不完全で磁性体の露出が原因であると推察される。この結果は、これら粒子が分析のバックグランド値を押し上げる原因となり、測定感度の低下をもららし、診断薬用担体としては不適であることを示している。
【００７２】
【表１】
【００７３】
【表２】
【００７４】
【発明の効果】
本発明の方法によれば、従来になく均一粒子径を有した診断薬用粒子を簡便かつ効率的に作製することができる。この診断薬用粒子は診断薬用担体などの生化学用担体、応用例としては医療用診断薬用途、特に自動測定器対応粒子に応用が可能である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、生化学・医薬品分野での診断薬用粒子の製造方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
粒子径分布が比較的均一でかつ磁性体を複合化させる粒子の製造法としては、モノマーに磁性体を分散させその存在下で懸濁重合もしくはミニエマルジョン重合を行い、磁性体を粒子内に取り込ませ、この粒子をさらに分級する方法がある。しかし、この方法では、重合終了時に得られた粒子の粒子径分布は非常に広く、複数回の分級を繰り返さなければ目的の均一な粒子径を得ることができず、さらに分級を繰り返すことにより収量が減る結果となり、作業効率、収率のバランスに欠ける。また、水中で粒子上に金属化合物を析出させる方法として、Ｆｅ塩を中和し、水酸化鉄としてＮＨ２、ＮＯ２基を持つ多孔粒子に析出させて酸化する方法（特公平５−１０８０８号公報）が提案されている。しかし、この方法は、製造工程が極めて煩雑でありかつ大量生産には不適切であった。また、ヘテロ凝集を利用する方法（米国特許第５，６４８，１２４号）が提案されている。しかし、この方法では、反対電荷物質投入時の凝集コントロールが困難であり、複合化を優先させるために多くの場合凝集反応が過剰となるため、できあがった粒子は再分散が困難な程度にまで凝集体を形成しており、粒子径の均一性に欠ける。さらに、ポリマーコア粒子表面において、モノマーと磁気的に応答する金属酸化物を同時に重合させてポリマー粒子に磁性体を導入する方法（特許第２７３６４６７号公報）が提案されている。しかし、この方法では、磁性体導入後の粒子は完全にポリマーコートされておらず、粒子表面に磁性体が存在している構造であることから、磁性体の脱落、鉄イオンなどの磁性体成分に由来する物質の溶出などの問題があった。この問題は、該粒子を診断薬用の担体に用いたときに特に悪影響として働くことが知られている。生化学分野の分析方法である酵素免疫測定法(ＥＩＡ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ)において、o-フェニレンジアミン(OPD)のようなある種の発色基質を測定に用いた場合、Ｆｅが干渉物質として働き、測定のバックグランドを押し上げて測定値を誤らせる原因となることが報告されている。（Ｒｅｖ．ｅｓｐ．Ｆｉｓｉｏｌ．，４５（１），４１‐４６，１９８９） そこで、表面に磁性体が存在せず、磁性体の脱離、鉄イオンの溶出などの問題のない、ＥＩＡ法などの診断薬用担体としても利用可能な磁性粒子が望まれていた。
【０００３】
【特許文献１】
特許第２７３６４６７号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、磁性体の脱落、鉄イオンなどの磁性体成分に由来する物質の溶出がなく、均一粒子径を有した診断薬用粒子を簡便かつ効率的に製造することを目的とするものである。
【０００５】
本発明の診断薬用粒子の製造方法は、核粒子の表面に磁性体層が形成された母粒子であって、該磁性体層は、Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４の少なくとも一方を含み、前記Ｆｅ ２ Ｏ ３ およびＦｅ ３ Ｏ ４ の少なくとも一方はトルエンに分散するように疎水化されており、該核粒子の平均粒子径が０．４〜２００μｍである該母粒子の存在下で重合により該磁性体層上にポリマー層を形成する工程を含む。
【０００６】
本発明で使用する核粒子は、基本的に非磁性物質であり、有機物質および無機物質のいずれも使用可能であり、診断薬用粒子の使用目的などによって適宜選択することができる。
【０００７】
有機物質の代表例としては、例えばポリマーを挙げることができる。かかるポリマーとしては、特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレートなどの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【０００８】
上述した特定範囲の平均粒子径を有する核粒子としてのポリマー粒子は、例えば上記のビニル系モノマーの懸濁重合、あるいはポリマーバルクの粉砕によって得ることもできる。均一な粒子径を有する核粒子の作製法としては、特公昭５７−２４３６９号公報記載の膨潤重合法、ジャーナル オブポリマーサイエンス ポリマーレター エディション（Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ Ｅｄ．）記載の重合方法、あるいは本発明者らが先に提案した重合方法（特開昭６１−２１５６０２号、同６１−２１５６０３号、同６１−２１５６０４号）によって容易に製造することができる。
【０００９】
本発明で使用する核粒子の平均粒子径は、０．４〜２００μｍ、好ましくは０．８〜１００μｍ、さらに好ましくは１．０〜５０μｍである。核粒子のＣＶ（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ）値は、２０％以下、好ましくは１５％以下、より好ましくは１０％以下である。核粒子の平均粒子径が１μｍ未満では、たとえば粒子の高速撹拌による衝突エネルギーが不十分で磁性体微粒子の吸着が困難になる。一方、核粒子の平均粒子径が２００μｍを超えると、微粒子としての特性が失われてしまう。また、ＣＶ値が上記範囲をはずれると、得られる磁性体複合粒子の粒子径の均一性が不十分となる。
【００１０】
本発明において核粒子の材質は、複合化の際の加工性、軽量性の観点からポリマーなどの有機物質が好ましい。なお、本発明における平均粒子径および粒子径分布は、電子顕微鏡写真上にて１００個の粒子の粒子径を無作意に測定して求めたものである。
【００１１】
本発明で使用する磁性体層を構成する磁性体微粒子としては、酸化鉄系の物質が代表的であり、ＭｎＦｅ２Ｏ４（Ｍｎ＝Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｌｉ０．５Ｆｅ０．５等）で表現されるフェライト、Ｆｅ３Ｏ４で表現されるマグネタイト、あるいはγ−Ｆｅ２Ｏ３が挙げられ、飽和磁化が強く、かつ残留磁化が少ないγ−Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４のいずれか一方を含むことが必要である。
【００１２】
本発明で使用する磁性体微粒子の平均粒子径は、好ましくは核粒子の平均粒子径の１／５以下であり、より好ましくは１／１０以下であり、さらに好ましくは１／２０以下である。磁性体微粒子の平均粒子径が核粒子の平均粒子径の１／５を超えると核粒子表面に均一かつ十分な厚みを持った被覆層を形成することができにくい。
【００１３】
本発明での核粒子と磁性体微粒子との比（核粒子：磁性体微粒子）は、重量比で９５：５〜２０：８０が好ましい。磁性体微粒子がこの範囲の量より少ないと、複合化効果が少なくなる。磁性体微粒子がこの範囲の量より多いと、核粒子の対する量が過剰となり、複合化されない磁性体微粒子が多くなる。
【００１４】
本発明で使用する磁性体微粒子は、核粒子と後工程で使用する単量体モノマーとの親和性、相溶性との観点から表面が疎水化されたものが望ましい。磁性体微粒子の表面の疎水化処理方法としては、磁性体微粒子と極めて親和性の高い部分と疎水性の部分とを分子内に有する化合物を磁性体微粒子に接触させて結合させる方法を挙げることができる。このような親和性の高い部分と疎水性の部分とを分子内に有する化合物としては、シランカップリング剤に代表されるシラン化合物を挙げることができる。
シラン化合物により磁性体微粒子を疎水化することによって、薬品耐性、特にアルカリ耐性に優れ、診断薬として使用中に磁性体微粒子が核粒子から剥離し磁気性能が低下する問題、あるいは脱離した磁性体微粒子が診断薬反応液中に浮遊する事により生じる汚染物混入を効果的に防止することができる。
本発明においては、疎水化された磁性体微粒子が、たとえばトルエンに良好に分散することができる場合に、十分に疎水化されているということができる。
【００１５】
シランカップリング剤に代表されるシラン化合物としては、ビニルトリクロロシラン、ビニルトリメトキシシラン、ビニルトリス（β−メトキシエトキシ）シラン、β−（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、γ−グリシドオキシプロピルトリメトキシシラン、γ−メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−β（アミノエチル）−γ−アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−β（アミノエチル）−γ−アミノプロピルトリメトキシシラン、ドデシルトリメトキシシラン、ヘキシルトリメトキシシラン、メチルトリメトキシシラン、メチルトリエトキシシラン、フェニルトリメトキシシラン、ドデシルトリクロロシラン、ヘキシルトリクロロシラン、メチルトリクロロシラン、フェニルトリクロロシランなどがある。
【００１６】
これらのシラン化合物を磁性体微粒子に結合させる方法としては、例えば、磁性体微粒子と、シラン化合物とを水などの無機媒質またはアルコール、エーテル、ケトン、エステルなどの有機媒質中で混合し、撹拌しながら加熱した後、磁性体微粒子をデカンテーションなどにより分離して減圧乾燥により無機媒質または有機媒質を除去する手段を挙げることができる。また、磁性体微粒子とシラン化合物とを直接混合し加熱させて両者を結合させてもよい。これらの手段において、加熱温度は通常３０〜１００℃であり、加熱温度は０．５〜２時間程度である。また、シラン化合物の使用量は、磁性体微粒子の表面積によって適宜定められているが、通常磁性体微粒子１００重量部に対して１〜５０重量部、好ましくは２〜３０重量部である。
【００１７】
本発明において核粒子の表面に磁性体微粒子の被覆する磁性体層を形成するには、先ず核粒子と磁性体微粒子とを混合し、核粒子の表面に磁性体微粒子を物理的に吸着させる。本発明で述べる物理的吸着法とは、化学反応を伴わない吸着法、結合法を指すものである。
【００１８】
核粒子の表面に磁性体微粒子を吸着させるには、物理的に強い力を外部から加えることにより複合化を実現させる方法も有効である。例えば乳鉢、自動乳鉢、ボールミル、ブレード加圧式粉体圧縮法、メカノフュージョン法のようなメカノケミカル効果を利用するもの、あるいはジェットミル、ハイブリダイザーなど高速気流中衝撃法を利用するものが挙げられる。
効率よくかつ強固に複合化を実施するには物理的吸着力が強いことが望ましい。その方法としては攪拌翼付き容器中で攪拌翼の周速度が好ましくは１５ｍ/秒以上、より好ましくは３０ｍ/秒以上、さらに好ましくは４０〜１５０ｍ/秒で実施することが挙げられる。撹拌翼の周速度が15m/秒より低いと、被覆層を形成する十分なエネルギーを得ることができないことがある。なお、撹拌翼の周速度の上限については、特に制限はないが、使用する装置、エネルギー効率などの点から自ずと決定される。
本発明において、核粒子の表面に形成された磁性体層の厚さは ０．００５〜２０μｍ、好ましくは ０．０１〜５μｍであり、厚みは均一であることが好ましい。磁性体層の厚さが、０．００５μｍより小さい場合、磁性体含有量が小さくなり、充分な磁気分離性が得られず、２０μｍを超える場合は、磁性体層の強度が低下し、磁性体層がこわれるおそれがある。
また、核粒子の表面は完全に磁性体層で被覆されていることが好ましく、核粒子表面の少なくとも９０％以上は磁性体層で被覆されていることが必要である。
【００１９】
次に、上記のようにして製造された母粒子の表面に形成するポリマー層（以下、「第１コーティングポリマー層」ともいう）について述べる。
【００２０】
かかるポリマー層は、母粒子の存在下で、主原料としての共重合性モノマーと、副原料である重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤などが必要に応じて添加され液体中で重合を行うことにより形成される。このようにポリマー層を重合によって形成することにより、当該ポリマー層の表面に所望の官能基を導入することができるなど、表面加工性にすぐれる。
【００２１】
ポリマー層の成分としては特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステル、アクロレインなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。
【００２２】
また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、無類マレイン酸、クロトン酸などのモノまたはジカルボン酸化合物、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、グリセロールモノアクリレート、グリセロールモノメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、連鎖数２〜４０のポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを側鎖とする（メタ）アクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、スチレンスルホン酸およびそのナトリウム塩、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸およびそのナトリウム塩、イソプレンスルホン酸およびそのナトリウム塩などの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【００２３】
重合開始剤としては、水への溶解性の観点から分類すると、油溶性重合開始剤が好ましい。水溶性の重合開始剤を用いると複合粒子表面での重合でなく、磁性体被覆粒子を含まない疎水性重合重合モノマーのみが重合した新粒子が多量に生じる傾向がある。
【００２４】
油溶性重合開始剤としては、ベンゾイルペルオキシド、ラウロイルペルオキシド、ターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート、３，５，５−トリメチルヘキサノイルペルオキシド、アゾビスイソブチロニトリル等の過酸化化合物、アゾ化合物などを挙げることができる。
【００２５】
水溶性開始剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、過酸化水素、2-2アゾビス（2-アミノプロパン）鉱酸塩、アゾビスシアノ吉草酸およびそのアルカリ金属塩およびアンモニウム塩等があげられ、また、過硫酸塩、過酸化水素塩と重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化第一鉄等を組み合わせたレドックス開始剤もあげられ、中でも過硫酸塩が好適に用いられる。これらの重合開始剤のモノマー全体に対する割合は0.01〜8重量％の範囲が好適に用いられる。
【００２６】
乳化剤としては、通常使用されている陰イオン性界面活性剤または非イオン性界面活性剤等、を単独もしくは組み合わせて用いることができる。例えば反応性陰イオン性界面活性剤としては、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アルキルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルの硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルのリン酸エステル塩、ナフタレンスルホン酸ナトリウムのホルマリン縮合物などの陰イオン性界面活性剤の他、ラテムルＳ−１８０Ａ（花王（株）製）、エレミノールＪＳ−２（三洋化成（株）製）、アクアロンＨＳ−１０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（旭電化工業（株）製）などを挙げることができる。
【００２７】
また、非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルなどのほか、アクアロンＲＳ−２０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＮＥ−２０（旭電化工業（株）製）などの反応性非イオン性界面活性剤を挙げることができる。
【００２８】
ポリマー層の形成におけるモノマーの重合系への添加方法は、とくに制限されず、一括方式、分割方式あるいは連続添加方式のいずれであっても良い。重合温度は重合開始剤によって異なるが、通常１０〜９０℃好ましくは３０〜８５℃であり、重合に要する時間は通常１〜３０時間程度である。
【００２９】
また、ポリマー層形成後、エチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルのアルカリ加水分解、ビニルエステルのアルカリけん化などの方法により官能基を改変することも可能である。
【００３０】
本発明において、ポリマー層の厚さは ０．００５〜２０μｍ、好ましくは０．０１〜５μｍである。また、ポリマー層は磁性体層を完全に被覆していることが好ましい。
【００３１】
上記のようにポリマー層を形成した粒子は、そのまま診断薬用粒子として用いることが可能であるが、さらに診断薬用粒子として好適な粒子表面を形成するために、コーティングポリマー層に、再度ポリマー層を形成することも可能である（以下、再度形成されたポリマー層を「第２コーティングポリマー層という）。この場合、第１コーティングポリマー層は、磁性体層を被覆することを主目的とし、第２コーティングポリマー層は、診断薬用粒子として好適な粒子表面を形成するための官能基導入を主目的とできるので、それぞれのポリマー層の形成を最適な条件で行うことが可能であり、診断薬用粒子の製造法として好ましい。
【００３２】
第２コーティングポリマー層の形成方法は、第１コーティングポリマー層の形成方法と基本的には同様に行なうことができ、第１コーティングポリマー層が形成された粒子の存在下で、主原料としての共重合性モノマーと、副原料である重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤などが必要に応じて添加され液体中で重合を行うことにより形成される。
【００３３】
第２コーティングポリマー層の成分としては特に、ビニル系ポリマーが好ましく、その製造に使用するビニル系モノマーとしては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲン化スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類、アクリロニトリルなどの不飽和ニトリル、メチルアクリレート、エチルアクリレート、エチルメタクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ラウリルメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、シクロヘキシルアクリレート、シクロヘキシルメタクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルなどを例示することができる。このビニル系ポリマーは単独重合体であっても、あるいは上記ビニル系モノマーから選ばれた２種以上のモノマーからなる共重合体であってもよい。
【００３４】
また、上記ビニル系モノマーとブタジエン、イソプレンなどの共役ジオレフィン、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、無類マレイン酸、クロトン酸などのモノまたはジカルボン酸化合物、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、グリセロールモノアクリレート、グリセロールモノメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、連鎖数２〜４０のポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを側鎖とする（メタ）アクリレート、ジアリルフタレート、アリルアクリレート、アリルメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、スチレンスルホン酸およびそのナトリウム塩、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸およびそのナトリウム塩、イソプレンスルホン酸およびそのナトリウム塩などの共重合可能なモノマーとの共重合体も使用することができる。
【００３５】
重合開始剤としては、水への溶解性の観点から分類すると、油溶性重合開始剤が好ましい。水溶性の重合開始剤を用いると複合粒子表面での重合でなく、磁性体被覆粒子を含まない疎水性重合重合モノマーのみが重合した新粒子が多量に生じる傾向がある。
【００３６】
油溶性重合開始剤としては、ベンゾイルペルオキシド、ラウロイルペルオキシド、ターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート、３，５，５−トリメチルヘキサノイルペルオキシド、アゾビスイソブチロニトリル等の過酸化化合物、アゾ化合物が挙げられる。
【００３７】
水溶性開始剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、過酸化水素、2-2アゾビス（2-アミノプロパン）鉱酸塩、アゾビスシアノ吉草酸およびそのアルカリ金属塩およびアンモニウム塩等があげられ、また、過硫酸塩、過酸化水素塩と重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化第一鉄等を組み合わせたレドックス開始剤もあげられ、中でも過硫酸塩が好適に用いられる。これらの重合開始剤のモノマー全体に対する割合は0.01〜8重量％の範囲が好適に用いられる。
【００３８】
乳化剤としては、通常使用されている陰イオン性界面活性剤または非イオン性界面活性剤等、を単独もしくは組み合わせて用いることができる。例えば陰イオン性界面活性剤としては、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アルキルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルの硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェニル）エーテルのリン酸エステル塩、ナフタレンスルホン酸ナトリウムのホルマリン縮合物などの陰イオン性界面活性剤の他、ラテムルＳ−１８０Ａ（花王（株）製）、エレミノールＪＳ−２（三洋化成（株）製）、アクアロンＨＳ−１０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（旭電化工業（株）製）などの反応性イオン界面活性剤を挙げることができる。
【００３９】
また、非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルなどのほか、アクアロンＲＳ−２０（第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープＮＥ−２０（旭電化工業（株）製）などの反応性非イオン性界面活性剤を挙げることができる。
【００４０】
第２コーティングポリマー層の形成におけるモノマーの重合系への添加方法は、とくに制限されず、一括方式、分割方式あるいは連続添加方式のいずれであっても良い。重合温度は重合開始剤によって異なるが、通常１０〜９０℃好ましくは３０〜８５℃であり、重合に要する時間は通常１〜３０時間程度である。
【００４１】
また、第２コーティングポリマー層を形成した後、エチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルのアルカリ加水分解、ビニルエステルのアルカリけん化などの方法により官能基を改変することも可能である。
【００４２】
本発明において、第２コーティングポリマー層の厚さは、第１コーティングポリマー層に比較して薄くすることが可能であり、 ０．００５〜５μｍ、好ましくは０．００５〜１μｍである。
【００４３】
本発明の方法により得られる診断薬用粒子は、粒子からの不純物の溶出、あるいは磁性体そのものの溶出あるいは磁性体からの不純物の溶出がないので診断薬用担体として好適である。このような診断薬用担体用途においては、ポリマー層の表面の特性を目的に応じて選択することができる。
診断薬用担体としての利用方法として、本発明の方法により得られる診断薬用担体粒子にタンパク質等の抗原あるいは抗体を結合し、測定対象である抗体あるいは抗原との抗原抗体反応に基づく受身凝集反応による溶液の濁度変化を利用した定量・定性検出用途、担体に抗体を結合し抗原であるウイルス・細菌・細胞・ホルモン・ダイオキシン類等の化学物質、などを結合して回収・濃縮する用途、担体にDNAなどの核酸アナログを結合して、核酸のハイブリダイゼーションを利用した核酸の回収・検出や、核酸に結合するタンパク質や色素等の化学物質を回収・検出する用途、担体にアビジンまたはビオチンを結合してビオチンあるいはアビジンを有する分子を回収して検出する用途、担体に抗体や抗原を結合し、比色法や化学発光を利用した酵素免疫測定法用の担体としての用途があげられる。従来、９６穴プレート等を担体として用いていた診断項目であれば、本発明の方法により得られる診断薬用粒子を用いることによって、磁性を利用した自動分析機に置き換えて使用できる。診断の対象となる物質としては、生体由来のタンパク質、黄体形成ホルモン、甲状腺刺激ホルモン等のホルモン、各種ガン細胞や、前立腺特異マーカー、膀胱ガンマーカー等のガンのマーカーとなるタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルスなどのウイルス、淋菌、MRSA等の細菌、カンジダ、クリプトコックス等の真菌、トキソプラズマ等の原虫・寄生虫、あるいはそれらウイルス・細菌・真菌・原虫・寄生虫などの構成要素であるタンパク質や核酸、ダイオキシン類等の環境汚染物質、抗生物質や抗てんかん剤など医薬品等の化学物質、などがあげられる。
【００４４】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【００４５】
１．核粒子の作製
特公昭５７−２４３６９号公報記載の膨潤重合法、ジャーナル オブポリマーサイエンス ポリマーレター エディション（Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ Ｅｄ．）記載の重合方法、あるいは本発明者らが先に提案した重合方法（特開昭６１−２１５６０２、同６１−２１５６０３、同６１−２１５６０４）を参考に以下の粒子を作製した。核粒子１〜５は平均粒子径、ＣＶ値とも本願発明の範囲内のものであり、核粒子６はＣＶ値が本願発明の範囲より大きく、かつ不均一な粒子である。下記核粒子は、重合後遠心分離により粒子のみ取り出したものをさらに水洗し、乾燥、粉砕した。
【００４６】
核粒子１；メチルメタクリレート／ジビニルベンゼン＝８０／２０共重合体
(平均粒子径１．８μｍ ＣＶ値２．２％)
核粒子２；スチレン／ジビニルベンゼン＝８０／２０共重合体
(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値２．３％)
核粒子３；ポリメチルメタクリレート
(平均粒子径２．３μｍ ＣＶ値９．５％)
核粒子４；ポリスチレン
(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値１１．３％)
核粒子５；ポリシクロヘキシルメタクリレート
(平均粒子径２．４μｍ ＣＶ値３．５％)
核粒子６；ポリスチレン(平均粒子径２．１μｍ ＣＶ値２５．５％)
【００４７】
２．核粒子への磁性体の被覆（磁性体層の形成）
被覆方法１；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の超常磁性体（平均粒子径：０．０１μｍを得た。なおこの磁性体は界面活性剤により疎水化処理された表面を有するものである。得られた磁性体をトルエン／水（重量比１：１）に添加し、十分に攪拌した後静置したところ、磁性体はトルエンのみに分散されており、表面が疎水化されたことを確認した。ついで、核粒子５ｇに、疎水化された磁性体を５ｇ混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムNHS−０型（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度100m/秒（16200rpm）で３分間処理した。
【００４８】
被覆方法２；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の超常磁性体（平均粒子径：０．０１μｍを得た。なおこの磁性体は界面活性剤により疎水化処理された表面を有するものである。この界面活性剤を除去すべく、大量の２００ｍＭのＮａＯＨ水溶液で磁性体を洗浄し、ついで蒸留水で余剰のＮａＯＨを取り除いて乾燥させた。次に、この乾燥磁性体１０ｇにイソブチルトリメトキシシラン１００ｇを添加し、５０℃において８時間混合させて表面の疎水化処理を行い、磁性体を得た。この磁性体を回収し乾燥させた。得られた磁性体をトルエン／水（重量比１：１）に添加し、十分に攪拌した後静置したところ、磁性体はトルエンのみに分散されており、表面が疎水化されたことを確認した。
【００４９】
ついで、核粒子５ｇに、疎水化された磁性体を５ｇ混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−０が他（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ/秒（１６２００ｒｐｍ）で３分間処理した。
【００５０】
３．母粒子の表面のコーティング重合（コーティングポリマー層の形成）
表面コーティング重合１（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５１】
表面コーティング重合２（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇの混合物を２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５２】
表面コーティング重合３（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合２のシクロヘキシルメタクリレートをスチレンとした以外は全て表面コーティング重合２の方法に基づいて実施した。
【００５３】
表面コーティング重合４（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてポリビニルアルコール（ＰＶＡ）「ゴーセノールＧＬ−０３」（日本合成化学製；ケン化度８６．５〜８９．０ｍｏｌ％、重合度３００〜４００）の０．５％水溶液７５０ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液１５０ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて、２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５４】
表面コーティング重合５（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液３７５ｇと、アニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液３７５ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３０ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、ジビニルベンゼン０．６ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液７５ｇおよびアニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液７５ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて、２時間にわたり連続添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５５】
表面コーティング重合６（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合５のシクロヘキシルメタクリレートをスチレンとした以外は全て表面コーティング重合５の方法に基づいて実施した。
【００５６】
表面コーティング重合７（第１コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合６のメタクリル酸をアクリル酸とした以外は全て表面コーティング重合６の方法に基づいて実施した。
【００５７】
表面コーティング重合８（第１コーティングポリマー層の形成）；
被覆方法１、２で得られた磁性体被覆粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液３７５ｇと、アニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液３７５ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。ついで、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下６０℃とした。これに、モノマーとしてスチレン、メタクリル酸１．５ｇ、ジビニルベンゼン０．６ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）１．５ｇ、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液７５ｇおよびアニオン性乳化剤ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０．５％水溶液７５ｇの混合物を１０℃以下において超音波微分散により乳化させて添加して反応させた。その後、さらに温度を８０℃とし３時間継続し反応を完結させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５８】
表面コーティング重合９（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合２で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇと、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００５９】
表面コーティング重合１０（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合３で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン６ｇ、メタクリル酸１．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６０】
表面コーティング重合１１（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合５で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてシクロヘキシルメタクリレート３ｇ、ジビニルベンゼン０．２ｇ、メタクリル酸０．５ｇ、ポリエチレングリコール（ｎ＝９）モノメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６１】
表面コーティング重合１２（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、アクリル酸０．２ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６２】
表面コーティング重合１３（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、グリシジルメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６３】
表面コーティング重合１４（第２コーティングポリマー層の形成）；
表面コーティング重合８で得られた第１コーティングポリマー層に覆われた粒子３０ｇ（固形分）と、分散剤としてノニオン性乳化剤「エマルゲン１５０」（花王製）の０．５％水溶液９００ｇとを１Ｌセパラブルフラスコに投入し充分に分散させた。これに、モノマーとしてスチレン３ｇ、メタクリル酸０．５ｇ、グリセロールモノメタクリレート０．５ｇ、重合開始剤としてターシャリーブチルペルオキシ２−エチルヘキサネート（日本油脂社製；パーブチルＯ）０．６ｇを添加し、イカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下８０℃で８時間反応させた。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６４】
参考例１（重合により磁性体層およびコーティングポリマー層を同時に形成する方法）；
油性磁性流体「ＦＶ５５」［松本油脂（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、得られた超常磁性体粉体４．８ｇを０．５％ラウリル硫酸ナトリウム４２０ｇに分散させ、さらにスチレン４．２ｇを添加しイカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下５５℃で１時間撹拌した。この混合物に過硫酸カリウム８ｇと０．５％ラウリル硫酸ナトリウム５６０ｇに分散させた核粒子１（ポリスチレン；平均粒子径２．１μｍ、ＣＶ値１．５％)３０ｇを添加した。さらに６時間後にスチレン４．２ｇと過硫酸カリウム７ｇを添加しさらに１５時間撹拌した。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。得られた粒子５ｇ（固形分）を０．５％ラウリル硫酸ナトリウム１５０ｇに分散させ、スチレン２ｇ、メタクリル酸１ｇ過硫酸カリウム１ｇを添加しイカリ型撹拌羽２００ｒｐｍ撹拌、Ｎ２ガス気流下５５℃で４時間撹拌した。その後、室温に冷却し５００メッシュステンレス製網で粗大物を除去し、さらに磁気精製において非磁性成分を除去した。
【００６５】
実施例１〜１２よび比較例１〜３；
上記の核粒子の作製方法、核粒子への磁性体の被覆方法、磁性体被覆粒子の表面コーティング重合方法を表１（実施例）および表２（比較例）に示すとおり組み合わせて診断薬用粒子を製造した。得られた粒子につき以下の評価を行った。
【００６６】
評価１；磁気捕捉率の評価
得られた診断薬用粒子を分散媒である水に分散させ、１重量％の試験液が得られるよう調整した。この試験液の１ｍｌをエッペンドルフチューブに入れ、撹拌後に横方向から４０００ガウスの磁気を１分間かけた場合の磁気捕捉率を測定した。
【００６７】
評価２；ＥＩＡ用担体としての評価
実施例１〜１４および比較例１〜３で得られた診断薬用粒子の２．０ｍｇをテストチューブに取り分けた。ここへ、基質反応液（o-フェニレンジアミン:１３ｍｇ，０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）：５０ｍＬ，３０％過酸化水素:１５μＬ）を０．５ｍＬ加え、遮光下、室温で１時間反応させた。その後、遠心分離で粒子を除き、上澄みの吸光度（波長４４６ｎｍ）を測定した。
【００６８】
結果１；磁気捕捉率の評価結果
実施例の診断薬用粒子は、いずれも磁気捕捉率が９９重量％以上であった。これは粒径分布が狭く磁気応答性が均一であることが理由として挙げられる。
【００６９】
一方、比較例の診断薬用粒子は、いずれも磁気捕捉率９９重量％以上が得られなかった。比較例１，２においては診断薬用粒子の粒径分布が広く磁気応答性が不均一であることが、比較例３においては磁性体含量が１１％と低いことに起因している事が理由としてあげられる。
【００７０】
結果２；ＥＩＡ用担体としての評価結果
ＥＩＡ用担体として粒子を用いる場合、粒子自身は分析結果を妨げないよう、基質溶液と一切相互作用せず、発色等の影響を示さない必要がある。実施例のいずれの粒子も総じて吸光度が低く、異常な発色を示さなかった。これは、粒子表面への磁性体の露出、あるいは粒子からの磁性体あるいは鉄イオンの溶出が極めて少ないためである。この結果は、これら粒子が、ＥＩＡ法等を利用した診断薬用担体として用いた場合、測定値に悪影響を与えることがないため、好適であることを示している。
【００７１】
一方、比較例３は異常に高い発色を示した。この方法（参考例１）で造られた粒子は磁性体のポリマーコーティングが不完全で磁性体の露出が原因であると推察される。この結果は、これら粒子が分析のバックグランド値を押し上げる原因となり、測定感度の低下をもららし、診断薬用担体としては不適であることを示している。
【００７２】
【表１】
【表２】
【発明の効果】
本発明の方法によれば、従来になく均一粒子径を有した診断薬用粒子を簡便かつ効率的に作製することができる。この診断薬用粒子は診断薬用担体などの生化学用担体、応用例としては医療用診断薬用途、特に自動測定器対応粒子に応用が可能である。
Claims (5)
- 核粒子の表面に磁性体層が形成された母粒子であって、該磁性体層は、Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４の少なくとも一方を含み、前記Ｆｅ ２ Ｏ ３ およびＦｅ ３ Ｏ ４ の少なくとも一方はトルエンに分散するように疎水化されており、該核粒子の平均粒子径が０．４〜２００μｍである該母粒子の存在下で重合により該磁性体層上にポリマー層を形成する工程を含む、診断薬用粒子の製造方法。
- 請求項１において、
前記Ｆｅ ２ Ｏ ３ およびＦｅ ３ Ｏ ４ の疎水化は、シランカップリング剤を用いて行われる、診断薬用粒子の製造方法。 - 請求項１または２において、
前記母粒子は、ＣＶ値が２０％以下の前記核粒子と、Ｆｅ２Ｏ３およびＦｅ３Ｏ４の少なくとも一方を含む磁性体微粒子とを混合し、該核粒子の表面に該磁性体微粒子を物理的に吸着させることにより形成される、診断薬用粒子の製造方法。 - 請求項１ないし３のいずれかにおいて、
前記ポリマー層を形成する工程は、前記母粒子を水系媒体中に分散する工程と、前記母粒子の存在下に重合性モノマーを乳化重合する工程と、を含む、診断薬用粒子の製造方法。 - 請求項１ないし４のいずれかにおいて、
さらに、前記ポリマー層上に、重合によりさらにポリマー層を形成する工程を含む、診断薬用粒子の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003077547A JP3738847B2 (ja) | 2002-03-25 | 2003-03-20 | 診断薬用粒子の製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002083733 | 2002-03-25 | ||
| JP2002314730 | 2002-10-29 | ||
| JP2003077547A JP3738847B2 (ja) | 2002-03-25 | 2003-03-20 | 診断薬用粒子の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004205481A JP2004205481A (ja) | 2004-07-22 |
| JP3738847B2 true JP3738847B2 (ja) | 2006-01-25 |
Family
ID=32830504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003077547A Expired - Lifetime JP3738847B2 (ja) | 2002-03-25 | 2003-03-20 | 診断薬用粒子の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3738847B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7732051B2 (en) | 2006-07-26 | 2010-06-08 | Jsr Corporation | Polymer-coated magnetic particles comprising a 2,3-hydroxypropyl group, and probe-bonded particles |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4540314B2 (ja) * | 2003-07-30 | 2010-09-08 | 積水化学工業株式会社 | 金属含有樹脂粒子の製造方法 |
| JP4513463B2 (ja) * | 2004-08-31 | 2010-07-28 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性粒子およびその製造方法 |
| JP4614064B2 (ja) * | 2004-11-04 | 2011-01-19 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性粒子の製造方法、ならびに生化学用担体 |
| JP2006266719A (ja) * | 2005-03-22 | 2006-10-05 | Jsr Corp | 診断薬用粒子 |
| JP4655711B2 (ja) * | 2005-03-22 | 2011-03-23 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性体複合粒子の製造方法 |
| JP4548598B2 (ja) * | 2005-03-28 | 2010-09-22 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性粒子およびその製造方法、ならびに生化学用担体 |
| JP4811565B2 (ja) * | 2005-03-31 | 2011-11-09 | Ｊｓｒ株式会社 | 多孔質表面を有する磁性粒子およびその製造方法、生化学用担体、ならびにビオチン類結合用粒子 |
| JP2006307126A (ja) * | 2005-03-31 | 2006-11-09 | Jsr Corp | 多孔質表面を有する磁性粒子およびその製造方法、ならびに生化学用担体 |
| EP1780544B1 (en) | 2005-11-01 | 2009-12-09 | JSR Corporation | Magnetic particles for diagnostics |
| JP4803366B2 (ja) * | 2006-03-20 | 2011-10-26 | Ｊｓｒ株式会社 | 有機ポリマー粒子およびその製造方法、プローブ結合用有機ポリマー粒子およびその製造方法、ならびにプローブ結合粒子およびその製造方法 |
| DE102005058979A1 (de) * | 2005-12-09 | 2007-06-21 | Qiagen Gmbh | Magnetische Polymerpartikel |
| JP4935973B2 (ja) * | 2006-02-08 | 2012-05-23 | Ｊｓｒ株式会社 | 有機ポリマー粒子およびその製造方法 |
| JP4716034B2 (ja) * | 2006-03-24 | 2011-07-06 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性粒子およびその製造方法 |
| JP4683225B2 (ja) * | 2006-03-24 | 2011-05-18 | Ｊｓｒ株式会社 | 診断薬用磁性ポリマー粒子およびその製造方法 |
| JP5003867B2 (ja) * | 2006-09-27 | 2012-08-15 | Ｊｓｒ株式会社 | 磁性粒子およびその製造方法、ならびにプローブ結合粒子 |
| JP5003868B2 (ja) | 2006-09-28 | 2012-08-15 | Ｊｓｒ株式会社 | 有機ポリマー粒子およびその製造方法 |
| JP5656339B2 (ja) | 2007-03-28 | 2015-01-21 | Jsr株式会社 | タンパク質固定化担体およびその製造方法 |
| JP6278395B2 (ja) * | 2013-03-22 | 2018-02-14 | 国立大学法人東京工業大学 | 磁性体含有樹脂粒子の製造方法 |
| EP3078035B1 (en) * | 2013-12-04 | 2021-01-20 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Improved process for producing magnetic monodisperse polymer particles |
| JP2015189812A (ja) * | 2014-03-27 | 2015-11-02 | 東ソー株式会社 | 被覆された微粒子の製造方法 |
| JP6464563B2 (ja) * | 2014-03-27 | 2019-02-06 | 東ソー株式会社 | 被覆された微粒子の製造法 |
| CN109154609B (zh) * | 2016-05-24 | 2022-08-05 | Jsr株式会社 | 复合粒子、被覆粒子、复合粒子的制造方法、含有配体的固相载体以及对试样中的靶物质进行检测或分离的方法 |
| JP6609026B2 (ja) * | 2017-12-22 | 2019-11-20 | 財團法人工業技術研究院 | 磁気ビーズ及びその製造方法 |
| US20220187287A1 (en) | 2019-03-26 | 2022-06-16 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Magnetic responsive particle and immunoassay method using same, reagent for immunoassay |
| JP7647055B2 (ja) * | 2019-10-09 | 2025-03-18 | 東ソー株式会社 | 免疫測定用磁性粒子およびその製造方法 |
| JP7701109B2 (ja) | 2020-03-25 | 2025-07-01 | 積水メディカル株式会社 | 磁気応答性粒子及びそれを用いた免疫測定方法、免疫測定用試薬 |
| CN113621112B (zh) * | 2020-05-06 | 2024-06-25 | N科研中心私人投资有限公司 | 一种单分散超顺磁粒子及制备方法 |
-
2003
- 2003-03-20 JP JP2003077547A patent/JP3738847B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7732051B2 (en) | 2006-07-26 | 2010-06-08 | Jsr Corporation | Polymer-coated magnetic particles comprising a 2,3-hydroxypropyl group, and probe-bonded particles |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2004205481A (ja) | 2004-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3738847B2 (ja) | 診断薬用粒子の製造方法 | |
| US5814687A (en) | Magnetic polymer particle and process for manufacturing the same | |
| US5356713A (en) | Magnetizable composite microspheres of hydrophobic crosslinked polymer, process for preparing them and their application in biology | |
| US20080160277A1 (en) | Magnetic particles, method for producing same, and biochemical carrier | |
| EP1348731B1 (en) | Process for producing particles for diagnostic reagent | |
| CN109154609B (zh) | 复合粒子、被覆粒子、复合粒子的制造方法、含有配体的固相载体以及对试样中的靶物质进行检测或分离的方法 | |
| JP2006307126A (ja) | 多孔質表面を有する磁性粒子およびその製造方法、ならびに生化学用担体 | |
| JP3646461B2 (ja) | 磁性ポリマー粒子およびその製造方法 | |
| JP4273315B2 (ja) | 免疫測定用粒子および免疫測定法 | |
| EP0097516B1 (en) | Filler-containing polymer particles useful as carriers for supporting a biological substance | |
| JP4811565B2 (ja) | 多孔質表面を有する磁性粒子およびその製造方法、生化学用担体、ならびにビオチン類結合用粒子 | |
| US7282540B2 (en) | Process for producing particles for diagnostic reagent | |
| JP4426819B2 (ja) | 磁性体内包粒子の製造方法 | |
| JP3743072B2 (ja) | 磁性ポリマー粒子の製造方法 | |
| JP4548598B2 (ja) | 磁性粒子およびその製造方法、ならびに生化学用担体 | |
| JP5003867B2 (ja) | 磁性粒子およびその製造方法、ならびにプローブ結合粒子 | |
| JP4404208B2 (ja) | 磁性粒子分散体および診断薬用粒子 | |
| JP4614064B2 (ja) | 磁性粒子の製造方法、ならびに生化学用担体 | |
| JP4485823B2 (ja) | 磁性体内包粒子及び免疫測定用粒子 | |
| JP4639696B2 (ja) | 磁性体複合粒子およびその製造方法 | |
| JP2006266719A (ja) | 診断薬用粒子 | |
| JP2005083904A (ja) | 磁性粒子 | |
| JP4655711B2 (ja) | 磁性体複合粒子の製造方法 | |
| JP4513463B2 (ja) | 磁性粒子およびその製造方法 | |
| JPH0762044A (ja) | 単分散重合体粒子の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20050310 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050315 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050512 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20051012 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20051025 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 3738847 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091111 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091111 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091111 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101111 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101111 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111111 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111111 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121111 Year of fee payment: 7 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121111 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121111 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131111 Year of fee payment: 8 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |