JP3228791B2 - 検体中の抗原又は抗体の測定法 - Google Patents
検体中の抗原又は抗体の測定法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は免疫反応を原理として、
生体中に微量存在する免疫反応の成分を高感度で測定す
る方法に関するものである。
生体中に微量存在する免疫反応の成分を高感度で測定す
る方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】例えば、血液や髄液などの各種体液、便
や尿などの排泄物、各種組織の抽出液などの生体試料中
に含まれている微量物質の測定には、放射免疫測定法
（ＲＩＡ）や酵素免疫測定法（ＥＩＡ）などの免疫測定
法が採用されている。
や尿などの排泄物、各種組織の抽出液などの生体試料中
に含まれている微量物質の測定には、放射免疫測定法
（ＲＩＡ）や酵素免疫測定法（ＥＩＡ）などの免疫測定
法が採用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】免疫測定法は、特異性
が高く非常に高感度であることから微量成分の測定法と
しての重要性が増している。しかしながら、不均一相で
の免疫測定法には、抗原と抗体の特異的な反応の検出を
妨害する種々の干渉のあることが知られている。これら
は、“マトリックス効果”、“バックグラウンド”又は
“非特異吸着”と呼ばれている。この非特異的な妨害
は、測定試料中に含まれている成分に起因し、この成分
は、通常、免疫測定における“干渉物質”と呼ばれてい
る。
が高く非常に高感度であることから微量成分の測定法と
しての重要性が増している。しかしながら、不均一相で
の免疫測定法には、抗原と抗体の特異的な反応の検出を
妨害する種々の干渉のあることが知られている。これら
は、“マトリックス効果”、“バックグラウンド”又は
“非特異吸着”と呼ばれている。この非特異的な妨害
は、測定試料中に含まれている成分に起因し、この成分
は、通常、免疫測定における“干渉物質”と呼ばれてい
る。
【０００４】これまで、干渉物質による非特異的な妨害
を減少させるため、ゼラチンやケラチンの水解物を添加
する方法（特開昭５６−４２１４２）、及び界面活性剤
を添加する方法（特開昭５８−１８７８６２、特開昭６
０−５３８４６及び、特開昭６１−２６０１６３）等が
既に知られており、これらの手法の活用により測定精度
の部分的な改良は期待できるが、いまだ不満足な状況に
あった。
を減少させるため、ゼラチンやケラチンの水解物を添加
する方法（特開昭５６−４２１４２）、及び界面活性剤
を添加する方法（特開昭５８−１８７８６２、特開昭６
０−５３８４６及び、特開昭６１−２６０１６３）等が
既に知られており、これらの手法の活用により測定精度
の部分的な改良は期待できるが、いまだ不満足な状況に
あった。
【０００５】更に、他の問題点として、免疫反応を行な
う容器の汚染がある。全自動免疫測定装置を用いる場
合、免疫反応から発色・蛍光・発光などの検出反応まで
の全ての反応を同一反応容器で行なったり、免疫反応の
容器を簡単な洗浄工程を経て、繰り返し使用することが
しばしば行なわれている。この場合、免疫反応の際の容
器の汚染は、著しいブランク値の上昇や測定精度の低下
を起こす。
う容器の汚染がある。全自動免疫測定装置を用いる場
合、免疫反応から発色・蛍光・発光などの検出反応まで
の全ての反応を同一反応容器で行なったり、免疫反応の
容器を簡単な洗浄工程を経て、繰り返し使用することが
しばしば行なわれている。この場合、免疫反応の際の容
器の汚染は、著しいブランク値の上昇や測定精度の低下
を起こす。
【０００６】また、免疫反応の促進のため、界面活性剤
等を添加し、免疫測定法の精度の向上を計る試みも行な
われている。たとえば、ポリエチレングリコールを用い
る方法（P. TIJSSEN著、石川栄治監訳、生化学実験法１
１（「エンザイムイムノアッセイ」東京化学同人）、及
び界面活性剤を用いる方法（特開昭６２−７１８６１）
等の報告があるが、上記の干渉物質による非特異反応
（非特異的な妨害）の減少や免疫反応を行なう容器の汚
染を低下させることを同時に満足できるものではなかっ
た。
等を添加し、免疫測定法の精度の向上を計る試みも行な
われている。たとえば、ポリエチレングリコールを用い
る方法（P. TIJSSEN著、石川栄治監訳、生化学実験法１
１（「エンザイムイムノアッセイ」東京化学同人）、及
び界面活性剤を用いる方法（特開昭６２−７１８６１）
等の報告があるが、上記の干渉物質による非特異反応
（非特異的な妨害）の減少や免疫反応を行なう容器の汚
染を低下させることを同時に満足できるものではなかっ
た。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決すべく種々の研究を重ねた結果、免疫反応の成
分の１つが固相に存在する免疫測定系に非イオン界面活
性剤から選ばれる特定の界面活性剤を特定の量添加する
ことにより、上記課題を同時に解決できることを見出し
て本発明を完成した。
点を解決すべく種々の研究を重ねた結果、免疫反応の成
分の１つが固相に存在する免疫測定系に非イオン界面活
性剤から選ばれる特定の界面活性剤を特定の量添加する
ことにより、上記課題を同時に解決できることを見出し
て本発明を完成した。
【０００８】即ち、本発明は、水不溶性の支持体に結合
した抗体又は抗原を用いて検体中の抗原又は抗体を測定
する際に、１２〜１９のＨＬＢ（Hydrophile Lipophile
Balance）値を有する非イオン界面活性剤を抗原−抗体
反応系に１．５〜６ w/w％の濃度となるように存在させ
て抗原−抗体反応を行なうことを特徴とする検体中の抗
原又は抗体の測定法、に関する。
した抗体又は抗原を用いて検体中の抗原又は抗体を測定
する際に、１２〜１９のＨＬＢ（Hydrophile Lipophile
Balance）値を有する非イオン界面活性剤を抗原−抗体
反応系に１．５〜６ w/w％の濃度となるように存在させ
て抗原−抗体反応を行なうことを特徴とする検体中の抗
原又は抗体の測定法、に関する。
【０００９】本発明によれば、不均一相における免疫測
定法において、反応容器の免疫反応の際の汚染を防止で
き、又、干渉物質による非特異的な妨害を減少させるこ
とにより、バックグラウンドを下げ、特に低値における
測定結果の再現性を向上させることができ、更に、免疫
反応が促進され、これにより、低値における測定精度が
向上し、分析時間が短縮する。
定法において、反応容器の免疫反応の際の汚染を防止で
き、又、干渉物質による非特異的な妨害を減少させるこ
とにより、バックグラウンドを下げ、特に低値における
測定結果の再現性を向上させることができ、更に、免疫
反応が促進され、これにより、低値における測定精度が
向上し、分析時間が短縮する。
【００１０】以下、本発明について詳細に説明する。
【００１１】本発明において、水不溶性の支持体に結合
した抗体又は抗原即ち固相化した抗体又は抗原を用いる
が、水不溶性の支持体即ち固相化担体としては、例え
ば、ビーズ、磁性粒子、マイクロタイタープレート、チ
ューブ、膜など種々のものが使用でき、特に限定されな
い。
した抗体又は抗原即ち固相化した抗体又は抗原を用いる
が、水不溶性の支持体即ち固相化担体としては、例え
ば、ビーズ、磁性粒子、マイクロタイタープレート、チ
ューブ、膜など種々のものが使用でき、特に限定されな
い。
【００１２】固相化担体に結合させる抗体又は抗原とし
ては、各種のものが使用でき、特に限定されないが、検
体中の測定すべき物質に応じて選択されることは言うま
でもない。固相化担体に対する抗体又は抗原の結合は、
化学的結合であっても物理的結合（吸着）であってもよ
い。
ては、各種のものが使用でき、特に限定されないが、検
体中の測定すべき物質に応じて選択されることは言うま
でもない。固相化担体に対する抗体又は抗原の結合は、
化学的結合であっても物理的結合（吸着）であってもよ
い。
【００１３】検体としては種々のものが使用でき、特に
限定されない。例えば、血清、血漿、血液、髄液等の各
種体液や尿等の排泄物、便等の希釈物から固形分を除去
したもの、各種組織の抽出液等が挙げられ、特に限定さ
れない。
限定されない。例えば、血清、血漿、血液、髄液等の各
種体液や尿等の排泄物、便等の希釈物から固形分を除去
したもの、各種組織の抽出液等が挙げられ、特に限定さ
れない。
【００１４】本発明において、抗原−抗体反応、即ち免
疫反応による検体中の抗原又は抗体の測定は公知の方法
によって行なうことができる。例えば、酵素免疫測定法
（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定
法（ＦＩＡ）等の免疫測定法により行なうことができ
る。又、サンドイッチ法、競合法、二抗体法等種々の方
法で行なうことができ、固相化した抗体又は抗原を使用
する方法ならいずれの方法であってもよい。なお、これ
らは、例えば石川栄治ら共編、「酵素免疫測定法」、第
２版、医学書院、１９８２年；山村雄一監修、医化学実
験法講座、第４巻「免疫化学」中山書店、１９７２年；
入江實編、「続ラジオイムノアッセイ」、講談社、１９
７９年等に記載されている。
疫反応による検体中の抗原又は抗体の測定は公知の方法
によって行なうことができる。例えば、酵素免疫測定法
（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定
法（ＦＩＡ）等の免疫測定法により行なうことができ
る。又、サンドイッチ法、競合法、二抗体法等種々の方
法で行なうことができ、固相化した抗体又は抗原を使用
する方法ならいずれの方法であってもよい。なお、これ
らは、例えば石川栄治ら共編、「酵素免疫測定法」、第
２版、医学書院、１９８２年；山村雄一監修、医化学実
験法講座、第４巻「免疫化学」中山書店、１９７２年；
入江實編、「続ラジオイムノアッセイ」、講談社、１９
７９年等に記載されている。
【００１５】なお、免疫反応は通常４〜４５℃及びｐＨ
＝４〜９において行なうのが好ましく、又、免疫反応の
後、常法によりＢ／Ｆ分離及び検出を行なう。
＝４〜９において行なうのが好ましく、又、免疫反応の
後、常法によりＢ／Ｆ分離及び検出を行なう。
【００１６】本発明において、免疫反応を行なう容器と
しては種々のものが使用でき、特に限定されない。
しては種々のものが使用でき、特に限定されない。
【００１７】固相化担体としてマイクロタイタープレー
トやチューブを用いる場合は、固相化担体自体を反応容
器とすることができるが、固相化担体とは別途に各種の
反応容器を用いることもできる。これら別途に用いる各
種の反応器としては、ガラス又はプラスチック製のチュ
ーブ、多数のチューブが一体成形された専用のトレイ、
マイクロタイタープレート、凍結乾燥した磁性ビーズを
１回測定分づつシールし保存容器をかねるプラスチック
製の容器（たとえば、東ソー社製ＡＩＡシリーズ用の試
薬の容器）、専用に設計され、洗浄しながら繰り返し使
用する全自動ＥＩＡ測定装置用の反応管（オリンパス社
製ＰＫシーズ用の反応管）などが挙げられる。
トやチューブを用いる場合は、固相化担体自体を反応容
器とすることができるが、固相化担体とは別途に各種の
反応容器を用いることもできる。これら別途に用いる各
種の反応器としては、ガラス又はプラスチック製のチュ
ーブ、多数のチューブが一体成形された専用のトレイ、
マイクロタイタープレート、凍結乾燥した磁性ビーズを
１回測定分づつシールし保存容器をかねるプラスチック
製の容器（たとえば、東ソー社製ＡＩＡシリーズ用の試
薬の容器）、専用に設計され、洗浄しながら繰り返し使
用する全自動ＥＩＡ測定装置用の反応管（オリンパス社
製ＰＫシーズ用の反応管）などが挙げられる。
【００１８】これらの反応容器は、節約のために、交換
することなく全工程（例えばＥＩＡの場合、１次（２
次）免疫反応、Ｂ／Ｆ分離、検出反応となる）を通して
同一の反応容器を使用したり、さらには、一度使用した
反応容器を、簡単な洗浄後、何度も繰り返し使用するこ
ともできる。
することなく全工程（例えばＥＩＡの場合、１次（２
次）免疫反応、Ｂ／Ｆ分離、検出反応となる）を通して
同一の反応容器を使用したり、さらには、一度使用した
反応容器を、簡単な洗浄後、何度も繰り返し使用するこ
ともできる。
【００１９】本発明の特徴は、上記免疫反応を行なう際
に、１２〜１９のＨＬＢ値を有する非イオン界面活性剤
を１．５〜６ w/w％の濃度となるように抗原−抗体反応
系に存在させる点にある。
に、１２〜１９のＨＬＢ値を有する非イオン界面活性剤
を１．５〜６ w/w％の濃度となるように抗原−抗体反応
系に存在させる点にある。
【００２０】非イオン界面活性剤としては、ＨＬＢ値が
１２〜１９であれば特に限定されないが、好ましくは、
ポリオキシエチレン系非イオン界面活性剤及び多価アル
コール系非イオン界面活性剤からなる群から選ばれる化
合物が挙げられる。
１２〜１９であれば特に限定されないが、好ましくは、
ポリオキシエチレン系非イオン界面活性剤及び多価アル
コール系非イオン界面活性剤からなる群から選ばれる化
合物が挙げられる。
【００２１】たとえば、ポリオキシエチレンノニルフェ
ニルエーテル（具体的には、ノニオンＮＳ−２０８．
５、ノニオンＮＳ−２２０、及びノニオンＮＳ−２７０
（日本油脂製）など）、ポリオキシエチレンオレイルエ
ーテル（具体的には、ノニオンＥ−２１５（日本油脂
製）など）、ポリオキシエチレンモノステアレート（具
体的には、ノニオンＳ−１５．４、及びノニオンＳ−４
０（日本油脂製）など）、並びにポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート（具体的には、ツウィーン２０
など）、等である。
ニルエーテル（具体的には、ノニオンＮＳ−２０８．
５、ノニオンＮＳ−２２０、及びノニオンＮＳ−２７０
（日本油脂製）など）、ポリオキシエチレンオレイルエ
ーテル（具体的には、ノニオンＥ−２１５（日本油脂
製）など）、ポリオキシエチレンモノステアレート（具
体的には、ノニオンＳ−１５．４、及びノニオンＳ−４
０（日本油脂製）など）、並びにポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート（具体的には、ツウィーン２０
など）、等である。
【００２２】本発明で使用する非イオン界面活性剤の免
疫反応系への添加量は、１．５〜６w/w％であるが、好
ましくは、２〜５ w/w％である。
疫反応系への添加量は、１．５〜６w/w％であるが、好
ましくは、２〜５ w/w％である。
【００２３】添加量が１．５ w/w％未満においては、免
疫反応容器の汚染を防止し、かつ免疫反応を促進させる
効果が得られない。また、６ w/w％を越えると、かえっ
て非特異反応によるブランク値の上昇をきたすことにな
る。
疫反応容器の汚染を防止し、かつ免疫反応を促進させる
効果が得られない。また、６ w/w％を越えると、かえっ
て非特異反応によるブランク値の上昇をきたすことにな
る。
【００２４】本発明において非イオン界面活性剤を免疫
反応系に添加する場合、免疫反応系がいくつかのステッ
プに分かれている時は、特定のステップのみに加える場
合と、全ての免疫反応系のステップに加える場合がある
が、このいずれであっても良く、特に限定されるもので
はない。
反応系に添加する場合、免疫反応系がいくつかのステッ
プに分かれている時は、特定のステップのみに加える場
合と、全ての免疫反応系のステップに加える場合がある
が、このいずれであっても良く、特に限定されるもので
はない。
【００２５】非イオン界面活性剤の添加時期は、少なく
とも免疫反応の際にその系内に非イオン界面活性剤が存
在すれば特に制限されない。たとえば、免疫反応媒体、
標識成分、特異的免疫成分（抗体又は抗原）、又は検体
等に添加しておいてもよく、また免疫反応時に、検体、
標識成分、必要により特異的免疫成分を加えた免疫反応
媒体（即ち免疫反応系）中に別に添加してもよい。
とも免疫反応の際にその系内に非イオン界面活性剤が存
在すれば特に制限されない。たとえば、免疫反応媒体、
標識成分、特異的免疫成分（抗体又は抗原）、又は検体
等に添加しておいてもよく、また免疫反応時に、検体、
標識成分、必要により特異的免疫成分を加えた免疫反応
媒体（即ち免疫反応系）中に別に添加してもよい。
【００２６】非イオン界面活性剤は、そのまま添加して
も、水溶液または分散液として添加してもよい。
も、水溶液または分散液として添加してもよい。
【００２７】
【実施例】次に、実施例によって、本発明を具体的に説
明するが、これらによって本発明が限定されるものでは
ない。
明するが、これらによって本発明が限定されるものでは
ない。
【００２８】実施例１ 各種界面活性剤の効果を下記のサンドイッチ法によるＮ
ＣＣ−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べ
た。
ＣＣ−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べ
た。
【００２９】免疫反応用緩衝液（１％牛血清アルブミン
含有リン酸生理食塩水）およびペルオキシダーゼ標識Ｎ
ＣＣ−ＳＴ−４３９抗体を免疫反応用緩衝液で希釈した
酵素標識抗体液に、各種界面活性剤を３ w/w％になるよ
うに添加した。
含有リン酸生理食塩水）およびペルオキシダーゼ標識Ｎ
ＣＣ−ＳＴ−４３９抗体を免疫反応用緩衝液で希釈した
酵素標識抗体液に、各種界面活性剤を３ w/w％になるよ
うに添加した。
【００３０】測定操作は以下のように行った。
【００３１】サンドイッチ法によるＮＣＣ−ＳＴ−４３
９抗原の酵素免疫測定法 反応用トレイにＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合した直
径６．２５mmのポリスチレンビーズを入れ、これに０ｕ
／ml，２．５ｕ／mlおよび１００ｕ／mlの標準抗原溶液
を５０μｌ採取し、免疫反応用緩衝液を２００μｌ加
え、３７℃で２時間の免疫反応を行った。１mlの生理食
塩水で３回ビーズを洗浄し、次いで免疫反応用緩衝液と
同一の界面活性剤を含有する酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えて室温で１時間反応した。さらに、ビーズを１ml
の生理食塩水で３回洗浄したのち別の試験管に移し、
２．８７ｍＭ ２，２’−アジノビス（３−エチルベン
ゾチアゾリン−６−スルホン酸）および０．０１４％過
酸化水素を含む発色液３００μｌを加えて室温で１時間
反応した。その後、０．１４mMアジ化ナトリウムを含む
反応停止液を２ml加えて精製水を対照に４２０nmの吸光
度を測定した。
９抗原の酵素免疫測定法 反応用トレイにＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合した直
径６．２５mmのポリスチレンビーズを入れ、これに０ｕ
／ml，２．５ｕ／mlおよび１００ｕ／mlの標準抗原溶液
を５０μｌ採取し、免疫反応用緩衝液を２００μｌ加
え、３７℃で２時間の免疫反応を行った。１mlの生理食
塩水で３回ビーズを洗浄し、次いで免疫反応用緩衝液と
同一の界面活性剤を含有する酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えて室温で１時間反応した。さらに、ビーズを１ml
の生理食塩水で３回洗浄したのち別の試験管に移し、
２．８７ｍＭ ２，２’−アジノビス（３−エチルベン
ゾチアゾリン−６−スルホン酸）および０．０１４％過
酸化水素を含む発色液３００μｌを加えて室温で１時間
反応した。その後、０．１４mMアジ化ナトリウムを含む
反応停止液を２ml加えて精製水を対照に４２０nmの吸光
度を測定した。
【００３２】測定は５回の多重測定で行い、吸光度の平
均値、変動係数（ＣＶ）および０ｕ／mlの場合の吸光度
に対する２．５ｕ／mlの場合の吸光度の比（ＳＮ比）を
求め比較した。
均値、変動係数（ＣＶ）および０ｕ／mlの場合の吸光度
に対する２．５ｕ／mlの場合の吸光度の比（ＳＮ比）を
求め比較した。
【００３３】対照として界面活性剤無添加および免疫反
応促進効果の知られるポリオキシエチレングリコール
（ＰＥＧ）を添加した系でも同様の測定を行った。
応促進効果の知られるポリオキシエチレングリコール
（ＰＥＧ）を添加した系でも同様の測定を行った。
【００３４】結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】表１から明らかなごとく、１２から１９の
ＨＬＢ値を有する非イオン界面活性剤を添加することに
よって、ＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗原濃度が０ｕ／mlの場
合の発色は低くなり、２．５および１００ｕ／mlの場合
の発色は高くなっており、変動係数も小さくなった。ま
たＳＮ比も対照に比べ大きくなった。
ＨＬＢ値を有する非イオン界面活性剤を添加することに
よって、ＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗原濃度が０ｕ／mlの場
合の発色は低くなり、２．５および１００ｕ／mlの場合
の発色は高くなっており、変動係数も小さくなった。ま
たＳＮ比も対照に比べ大きくなった。
【００３７】このことは免疫反応を促進しながらバック
グラウンドは下がり、低値における免疫反応の測定感度
及び測定精度は向上したことを示している。
グラウンドは下がり、低値における免疫反応の測定感度
及び測定精度は向上したことを示している。
【００３８】実施例２ 界面活性剤濃度の影響をサンドイッチ法によるＮＣＣ−
ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べた。
ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べた。
【００３９】界面活性剤としてポリオキシエチレンノニ
ルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）およびポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１
６．７）を用い、実施例１と同一の免疫反応用緩衝液お
よび酵素標識抗体液に０．１から８．０ w/w％になるよ
うに添加して実施例１と同様の測定操作で測定した。
ルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）およびポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１
６．７）を用い、実施例１と同一の免疫反応用緩衝液お
よび酵素標識抗体液に０．１から８．０ w/w％になるよ
うに添加して実施例１と同様の測定操作で測定した。
【００４０】測定は５回の多重測定で行い、吸光度の平
均値、変動係数（ＣＶ）を求め比較した。
均値、変動係数（ＣＶ）を求め比較した。
【００４１】対照として界面活性剤無添加及びポリオキ
シエチレングリコール２００００を添加した系でも同様
の測定を行った。
シエチレングリコール２００００を添加した系でも同様
の測定を行った。
【００４２】結果を表２に示す。
【００４３】低濃度の界面活性剤添加ではバックグラウ
ンドを下げる効果も免疫反応の促進効果も十分でなく、
高濃度では逆にバックグラウンドが高くなることが判っ
た。１．５から６．０ w/w％の添加で良好な効果が得ら
れた。
ンドを下げる効果も免疫反応の促進効果も十分でなく、
高濃度では逆にバックグラウンドが高くなることが判っ
た。１．５から６．０ w/w％の添加で良好な効果が得ら
れた。
【００４４】
【表２】
【００４５】実施例３ 反応容器の汚染防止効果をサンドイッチ法によるＮＣＣ
−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べた。
−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法により調べた。
【００４６】２ w/w％のポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレート（ＨＬＢ値１６．７）を実施例１と同一
の免疫反応用緩衝液および酵素標識抗体液に添加して検
討した。
モノラウレート（ＨＬＢ値１６．７）を実施例１と同一
の免疫反応用緩衝液および酵素標識抗体液に添加して検
討した。
【００４７】オリンパス社製自動酵素免疫分析装置ＰＫ
３１０用反応Ｕ字管にＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合
した直径６．２５mmのポリスチレンビーズを入れ、これ
に０ｕ／mlの標準抗原溶液５０μｌを採取し、免疫反応
用緩衝液を２００μｌ加え、３７℃で２時間免疫反応を
行った。１mlの生理食塩水で３回ビーズを洗浄し、酵素
標識抗体液２５０μｌを加えて室温で１時間反応した。
さらに、ビーズを１mlの生理食塩水で３回洗浄したのち
別の試験管に移した。ビーズおよび免疫反応に使用した
反応Ｕ字管にそれぞれ２．８７ｍＭ ２，２’−アジノ
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）
および０．０１４％過酸化水素を含む発色液３００μｌ
加えて室温で１時間反応した。その後、０．１４mMアジ
化ナトリウムを含む反応停止液を２ml加えて精製水を対
照に４２０nmの吸光度を測定した。
３１０用反応Ｕ字管にＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合
した直径６．２５mmのポリスチレンビーズを入れ、これ
に０ｕ／mlの標準抗原溶液５０μｌを採取し、免疫反応
用緩衝液を２００μｌ加え、３７℃で２時間免疫反応を
行った。１mlの生理食塩水で３回ビーズを洗浄し、酵素
標識抗体液２５０μｌを加えて室温で１時間反応した。
さらに、ビーズを１mlの生理食塩水で３回洗浄したのち
別の試験管に移した。ビーズおよび免疫反応に使用した
反応Ｕ字管にそれぞれ２．８７ｍＭ ２，２’−アジノ
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）
および０．０１４％過酸化水素を含む発色液３００μｌ
加えて室温で１時間反応した。その後、０．１４mMアジ
化ナトリウムを含む反応停止液を２ml加えて精製水を対
照に４２０nmの吸光度を測定した。
【００４８】対照として界面活性剤無添加の系でも同様
の測定を行った。
の測定を行った。
【００４９】結果を表３に示す。
【００５０】
【表３】
【００５１】ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ
ート（ＨＬＢ値１６．７）を免疫反応系に添加すること
により、反応Ｕ字管の汚染が防止された。
ート（ＨＬＢ値１６．７）を免疫反応系に添加すること
により、反応Ｕ字管の汚染が防止された。
【００５２】実施例４ 同一反応容器の連続使用による再現性をサンドイッチ法
によるＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法によ
り調べた。
によるＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗原の酵素免疫測定法によ
り調べた。
【００５３】界面活性剤としてポリオキシエチレンノニ
ルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）およびポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１
６．７）を用い、実施例１と同一の免疫反応用緩衝液お
よび酵素標識抗体液に２．０ w/w％になるように添加し
て検討した。
ルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）およびポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１
６．７）を用い、実施例１と同一の免疫反応用緩衝液お
よび酵素標識抗体液に２．０ w/w％になるように添加し
て検討した。
【００５４】測定操作はオリンパス社製自動酵素免疫分
析装置ＰＫ３１０を使用し、０ｕ／mlの標準抗原溶液又
は血清検体５０μｌと免疫反応用緩衝液２１０μｌを、
ＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合した直径６．２５mmの
ポリスチレンビーズを入れた反応Ｕ字管に採取し第１反
応を３７℃で１５．７５分間行った。Ｂ／Ｆ分離用緩衝
液で洗浄した後、酵素標識抗体液３００μｌを分注し、
第２反応を３７℃で１６．７５分間行った。再びＢ／Ｆ
分離用緩衝液で洗浄した後、ｏ−フェニレンジアミン−
過酸化水素系の発色剤３００μｌを分注し、３７℃で１
６分間反応させた。希釈液を７００μｌ分注して４９２
nmと８００nmの吸光度差を測定した。同一反応管により
連続３回測定し変動係数を求めた。
析装置ＰＫ３１０を使用し、０ｕ／mlの標準抗原溶液又
は血清検体５０μｌと免疫反応用緩衝液２１０μｌを、
ＮＣＣ−ＳＴ−４３９抗体が結合した直径６．２５mmの
ポリスチレンビーズを入れた反応Ｕ字管に採取し第１反
応を３７℃で１５．７５分間行った。Ｂ／Ｆ分離用緩衝
液で洗浄した後、酵素標識抗体液３００μｌを分注し、
第２反応を３７℃で１６．７５分間行った。再びＢ／Ｆ
分離用緩衝液で洗浄した後、ｏ−フェニレンジアミン−
過酸化水素系の発色剤３００μｌを分注し、３７℃で１
６分間反応させた。希釈液を７００μｌ分注して４９２
nmと８００nmの吸光度差を測定した。同一反応管により
連続３回測定し変動係数を求めた。
【００５５】対照として界面活性剤無添加の系でも同様
の測定を行った。
の測定を行った。
【００５６】結果を表４に示す。
【００５７】
【表４】
【００５８】界面活性剤を添加した系はバックグラウン
ドが低く連続使用による吸光度の上昇傾向も見られなか
った。また、変動係数も小さく、明らかに添加効果が見
られた。
ドが低く連続使用による吸光度の上昇傾向も見られなか
った。また、変動係数も小さく、明らかに添加効果が見
られた。
【００５９】実施例５ ＨＢｓ抗原測定キットの酵素標識抗体液へのポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１６．
７）の添加効果を調べた。
エチレンソルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１６．
７）の添加効果を調べた。
【００６０】ダイナボット社製ＨＢｓ抗原測定キットの
酵素標識抗体液に２．０ w/w％のポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１６．７）を添加し
て所定の操作法に従って陰性および陽性検体をサンドイ
ッチ法により測定した。
酵素標識抗体液に２．０ w/w％のポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート（ＨＬＢ値１６．７）を添加し
て所定の操作法に従って陰性および陽性検体をサンドイ
ッチ法により測定した。
【００６１】対照として界面活性剤無添加の系でも同様
の測定を行った。
の測定を行った。
【００６２】結果を表５に示す。
【００６３】
【表５】
【００６４】陰性検体の吸光度は下がり、陽性検体の吸
光度は高くなり、明らかに陰性と陽性の差が大きくなっ
ていた。
光度は高くなり、明らかに陰性と陽性の差が大きくなっ
ていた。
【００６５】実施例６ ＣＥＡ測定キットの酵素標識抗体液へのポリオキシエチ
レンノニルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）の添
加効果を調べた。
レンノニルフェニルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）の添
加効果を調べた。
【００６６】ロシュ社製ＣＥＡ測定キットの酵素標識抗
体液に３．０ w/w％のポリオキシエチレンノニルフェニ
ルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）を添加して所定の操作
法に従って０および２０ng／mlの標準抗原をサンドイッ
チ法により測定した。
体液に３．０ w/w％のポリオキシエチレンノニルフェニ
ルエーテル（ＨＬＢ値１８．７）を添加して所定の操作
法に従って０および２０ng／mlの標準抗原をサンドイッ
チ法により測定した。
【００６７】対照として界面活性剤無添加の系でも同様
の測定を行った。
の測定を行った。
【００６８】結果を表６に示す。
【００６９】
【表６】
【００７０】０ng／ml標準抗原の吸光度は下がり、２０
ng／ml標準抗原の吸光度は高くなった。バックグラウン
ドの低下は低濃度の測定感度及び測定精度の向上を示
し、かつ免疫反応が促進されているのも明らかである。
ng／ml標準抗原の吸光度は高くなった。バックグラウン
ドの低下は低濃度の測定感度及び測定精度の向上を示
し、かつ免疫反応が促進されているのも明らかである。
【００７１】
【発明の効果】本発明によれば、反応容器の汚染が防止
され、バックグラウンドを下げ、免疫反応が促進され、
特に低値における測定感度及び測定精度並びに再現性を
向上させることができる。
され、バックグラウンドを下げ、免疫反応が促進され、
特に低値における測定感度及び測定精度並びに再現性を
向上させることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田辺 敏雄 群馬県高崎市岩鼻町16−３ (72)発明者 高木 久子 群馬県高崎市竜見町13−５ (72)発明者 岩本 政之 群馬県高崎市岩鼻町239 Ｆ−32 (56)参考文献 特開 平３−237358（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−187862（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 - 33/98
Claims (2)
- 【請求項１】 水不溶性の支持体に結合した抗体又は抗
原を用いて検体中の抗原又は抗体を測定する際に、１２
〜１９のＨＬＢ値を有する非イオン界面活性剤を抗原−
抗体反応系に１．５〜６ w/w％の濃度となるように存在
させて抗原−抗体反応を行なうことを特徴とする検体中
の抗原又は抗体の測定法。 - 【請求項２】 前記非イオン界面活性剤を抗原−抗体反
応系に２〜５ w/w％の濃度となるように存在させること
を特徴とする請求項１記載の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21998592A JP3228791B2 (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 検体中の抗原又は抗体の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21998592A JP3228791B2 (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 検体中の抗原又は抗体の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0666798A JPH0666798A (ja) | 1994-03-11 |
| JP3228791B2 true JP3228791B2 (ja) | 2001-11-12 |
Family
ID=16744118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21998592A Expired - Fee Related JP3228791B2 (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 検体中の抗原又は抗体の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3228791B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
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|---|---|---|---|---|
| KR100523685B1 (ko) * | 1997-08-04 | 2005-10-26 | 가부시끼가이샤 센탈 세메 가가꾸 겐꾸쇼 | Ｃ형 간염 바이러스의 코어 영역의 아미노산 서열을 인지하는 모노클로날 항체 |
| WO2010021399A1 (ja) * | 2008-08-22 | 2010-02-25 | デンカ生研株式会社 | シスタチンｃ吸着抑制剤 |
| KR101921012B1 (ko) | 2009-10-30 | 2018-11-21 | 교와 메덱스 가부시키가이샤 | 검체 중의 측정 대상 성분의 측정 방법 및 측정용 키트 |
| JP2012198125A (ja) * | 2011-03-22 | 2012-10-18 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫測定法 |
| KR101673401B1 (ko) * | 2015-08-13 | 2016-11-07 | 오장섭 | 음식물 처리기용 송풍장치 |
-
1992
- 1992-08-19 JP JP21998592A patent/JP3228791B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0666798A (ja) | 1994-03-11 |
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