JP3279362B2 - 糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置 - Google Patents
糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置Info
- Publication number
- JP3279362B2 JP3279362B2 JP29074092A JP29074092A JP3279362B2 JP 3279362 B2 JP3279362 B2 JP 3279362B2 JP 29074092 A JP29074092 A JP 29074092A JP 29074092 A JP29074092 A JP 29074092A JP 3279362 B2 JP3279362 B2 JP 3279362B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- support
- diabetic patient
- stationary phase
- saliva
- charged
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/38—Flow patterns
- G01N30/46—Flow patterns using more than one column
- G01N30/461—Flow patterns using more than one column with serial coupling of separation columns
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、糖尿病判定方法及び糖
尿病判定装置に関する。本発明は、迅速性及び確実性を
要する臨床診断等に広く利用される。
尿病判定装置に関する。本発明は、迅速性及び確実性を
要する臨床診断等に広く利用される。
【０００２】
【従来の技術】糖尿病の判定方法としては、血糖値をみ
るものが一般に知られている。また、他の方法として、
血漿中の１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールの測定
が挙げられる。
るものが一般に知られている。また、他の方法として、
血漿中の１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールの測定
が挙げられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記血糖値に
よる方法では、血糖値自身が不安定であり、また飲食物
に依存し易いので適用上の制限があり、更に、長い試験
時間が必要である等の問題がある。また、上記血漿中の
１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールを測定する方法
においても、測定条件を管理しにくく、試料調整時間が
長く、更に脱蛋白が必要であるという問題があった。ま
た、この１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール値が減
少している糖尿病患者のものを使用すると、その測定の
信頼性が小さい。即ち、非糖尿病患者の１，５−アンヒ
ドロ−Ｄ−グルシトールの範囲（２４．６±７．２ｍｇ
／リットル）のうち下限に近いものは、糖尿病患者の範
囲（７．３±７．２ｍｇ／リットル）のうちの上限値に
近いからである。従って、この方法は他の臨床試験に関
連した時のみ使用されることとなり、適用上の制限があ
る。
よる方法では、血糖値自身が不安定であり、また飲食物
に依存し易いので適用上の制限があり、更に、長い試験
時間が必要である等の問題がある。また、上記血漿中の
１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールを測定する方法
においても、測定条件を管理しにくく、試料調整時間が
長く、更に脱蛋白が必要であるという問題があった。ま
た、この１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール値が減
少している糖尿病患者のものを使用すると、その測定の
信頼性が小さい。即ち、非糖尿病患者の１，５−アンヒ
ドロ−Ｄ−グルシトールの範囲（２４．６±７．２ｍｇ
／リットル）のうち下限に近いものは、糖尿病患者の範
囲（７．３±７．２ｍｇ／リットル）のうちの上限値に
近いからである。従って、この方法は他の臨床試験に関
連した時のみ使用されることとなり、適用上の制限があ
る。
【０００４】また、分析成分（イオン）の分離・分析方
法としては、イオン交換樹脂固定相を用いたイオンクロ
マトグラフィーが知られている。このイオンクロマトグ
ラフィーとして、イオン交換法（Anal. Chem. 1975, 4
7, 1801-1809)、イオン排除法(Anal. Chem. 1989, 61,
1485-1489) 、イオン相互作用法(Anal. Chem. 1982, 5
4, 2601-2603, Anal. Chem. 1986, 58, 2226-2233)、コ
ロイド粒子除外法(Anal.Chem. 1988, 60, 1511-1516)
、電気泳動クロマトグラフィー(J.Chromatog. 51(197
0), 339-342)、及び逆相クロマトグラフィーとイオン排
除法との組合せ法（特開平４−１１０６５７号公報）等
が知られている。しかし、これらを用いて、糖尿病の有
無を判定する方法は、知られていない。
法としては、イオン交換樹脂固定相を用いたイオンクロ
マトグラフィーが知られている。このイオンクロマトグ
ラフィーとして、イオン交換法（Anal. Chem. 1975, 4
7, 1801-1809)、イオン排除法(Anal. Chem. 1989, 61,
1485-1489) 、イオン相互作用法(Anal. Chem. 1982, 5
4, 2601-2603, Anal. Chem. 1986, 58, 2226-2233)、コ
ロイド粒子除外法(Anal.Chem. 1988, 60, 1511-1516)
、電気泳動クロマトグラフィー(J.Chromatog. 51(197
0), 339-342)、及び逆相クロマトグラフィーとイオン排
除法との組合せ法（特開平４−１１０６５７号公報）等
が知られている。しかし、これらを用いて、糖尿病の有
無を判定する方法は、知られていない。
【０００５】本発明は、上記欠点を克服するものであ
り、敏速、簡便に、確実に且つ飲食物の影響を受けにく
い糖尿病の判定方法、及びそのための判定装置を提供す
ることを目的とする。
り、敏速、簡便に、確実に且つ飲食物の影響を受けにく
い糖尿病の判定方法、及びそのための判定装置を提供す
ることを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的を
達成するために血糖値や、血漿を測定する方法以外の方
法で、糖尿病を判定できないかを種々鋭意検討した結
果、特殊な成分が糖尿病患者の唾液にのみ見出され、こ
れを分離・分析することにより、本発明を完成するに至
ったのである。
達成するために血糖値や、血漿を測定する方法以外の方
法で、糖尿病を判定できないかを種々鋭意検討した結
果、特殊な成分が糖尿病患者の唾液にのみ見出され、こ
れを分離・分析することにより、本発明を完成するに至
ったのである。
【０００７】即ち、本発明の糖尿病判定方法は、分離カ
ラム内に充填された固定相の一端側に、糖尿病患者の唾
液を注入し、その後、溶離液である燐酸塩緩衝液を展開
させて該唾液中に含まれる分析成分を分離し、次いで、
この分離された各分析成分を紫外線検出器にて検出して
所定のクロマトグラムを得る静電気イオンクロマトグラ
フィーを行い、その際、上記固定相としては、支持担体
と、該支持担体の表面上に、直接に又は間接に、アンモ
ニウム塩部、及びスルホン酸イオン部若しくはカルボン
酸イオン部を備える化合物が被覆されて形成される両荷
電層と、を備える両荷電具備固定相を用い、そして、上
記クロマトグラムには、上記糖尿病患者の唾液にのみ含
まれる糖尿病患者特有成分のクロマトピークが現れ、そ
の存在を以て糖尿病患者であると判定することを特徴と
する。
ラム内に充填された固定相の一端側に、糖尿病患者の唾
液を注入し、その後、溶離液である燐酸塩緩衝液を展開
させて該唾液中に含まれる分析成分を分離し、次いで、
この分離された各分析成分を紫外線検出器にて検出して
所定のクロマトグラムを得る静電気イオンクロマトグラ
フィーを行い、その際、上記固定相としては、支持担体
と、該支持担体の表面上に、直接に又は間接に、アンモ
ニウム塩部、及びスルホン酸イオン部若しくはカルボン
酸イオン部を備える化合物が被覆されて形成される両荷
電層と、を備える両荷電具備固定相を用い、そして、上
記クロマトグラムには、上記糖尿病患者の唾液にのみ含
まれる糖尿病患者特有成分のクロマトピークが現れ、そ
の存在を以て糖尿病患者であると判定することを特徴と
する。
【０００８】本発明の糖尿病判定装置は、溶離液を供給
するポンプと、該ポンプに接続される分離カラムと、該
分離カラムにより分離される分析成分を検出する紫外線
検出器と、分離結果を記録する記録装置と、上記分離カ
ラムと上記ポンプの間に接続される接続管内に糖尿病患
者の唾液を注入するための唾液注入器と、からなり、上
記分離カラムには、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、アンモニウム塩部、及びスルホ
ン酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合
物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両荷電
具備固定相が充填され、上記記録装置により検出される
糖尿病患者特有成分のクロマトピークの存在を以て糖尿
病患者であると判定することを特徴とする。
するポンプと、該ポンプに接続される分離カラムと、該
分離カラムにより分離される分析成分を検出する紫外線
検出器と、分離結果を記録する記録装置と、上記分離カ
ラムと上記ポンプの間に接続される接続管内に糖尿病患
者の唾液を注入するための唾液注入器と、からなり、上
記分離カラムには、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、アンモニウム塩部、及びスルホ
ン酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合
物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両荷電
具備固定相が充填され、上記記録装置により検出される
糖尿病患者特有成分のクロマトピークの存在を以て糖尿
病患者であると判定することを特徴とする。
【０００９】上記両発明において、「両荷電具備固定
相」に用いられる支持担体の材質、形状、大きさ等は特
に限定されず、その表面上に所定の両荷電層が形成でき
るものであればよい。例えば、その材質としてシリカゲ
ル、ポリスチレン等を例示でき、またその表面は担持し
易いように多孔性のものが好ましい。更に、両荷電層
は、使用する支持担体上に、化学的に反応させたり、又
は物理的に吸着させて直接形成させてもよいし、またこ
の支持担体の表面に疎水性層を接着層として形成し、こ
の表面に両荷電層を形成（即ち支持担体の表面上に間接
に形成）させてもよい。
相」に用いられる支持担体の材質、形状、大きさ等は特
に限定されず、その表面上に所定の両荷電層が形成でき
るものであればよい。例えば、その材質としてシリカゲ
ル、ポリスチレン等を例示でき、またその表面は担持し
易いように多孔性のものが好ましい。更に、両荷電層
は、使用する支持担体上に、化学的に反応させたり、又
は物理的に吸着させて直接形成させてもよいし、またこ
の支持担体の表面に疎水性層を接着層として形成し、こ
の表面に両荷電層を形成（即ち支持担体の表面上に間接
に形成）させてもよい。
【００１０】例えば、上記「両荷電具備固定相」におい
て、支持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持
担体の表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎
水性層が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷
電層が吸着形成されているものとすることができる。こ
のアルキルシランのアルキル基としては、疎水性を付与
するために、その炭素数が１２〜２４程度のものが好ま
しく、通常、１８のものが用いられる。
て、支持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持
担体の表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎
水性層が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷
電層が吸着形成されているものとすることができる。こ
のアルキルシランのアルキル基としては、疎水性を付与
するために、その炭素数が１２〜２４程度のものが好ま
しく、通常、１８のものが用いられる。
【００１１】また、上記「アンモニウム塩部、及びスル
ホン酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化
合物」としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート、又は
３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニ
オ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート等と
することができる。
ホン酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化
合物」としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート、又は
３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニ
オ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート等と
することができる。
【００１２】上記「溶離液」（移動相ともいう。）は、
燐酸塩緩衝液、即ち燐酸塩を含み緩衝作用のあるもので
あり、種々の公知の燐酸塩（ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 、ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋クエン酸、ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋
ＮａＨＣＯ3 等）を用いることができ、またその溶媒と
しては通常、水（純水等）を用いるが、これに限らず、
燐酸塩を溶解させるものであればよい。このイオン濃度
も種々選択できる。分離された分析成分を「検出する手
段」としては、紫外線（以下、ＵＶという。）検出器を
用いる。糖尿病患者及び非糖尿病患者の唾液の分析成分
（特に、特有成分）がＵＶ領域である約２００〜２４０
ｎｍにて吸収されるからである。
燐酸塩緩衝液、即ち燐酸塩を含み緩衝作用のあるもので
あり、種々の公知の燐酸塩（ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 、ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋クエン酸、ＮａＨ2 ＰＯ4 ＋
ＮａＨＣＯ3 等）を用いることができ、またその溶媒と
しては通常、水（純水等）を用いるが、これに限らず、
燐酸塩を溶解させるものであればよい。このイオン濃度
も種々選択できる。分離された分析成分を「検出する手
段」としては、紫外線（以下、ＵＶという。）検出器を
用いる。糖尿病患者及び非糖尿病患者の唾液の分析成分
（特に、特有成分）がＵＶ領域である約２００〜２４０
ｎｍにて吸収されるからである。
【００１３】
【作用】イオンは荷電粒子であり、同じ荷電や反対の荷
電の間には静電気反撥力と静電気吸引力を生じる。本ク
ロマトグラフィーにおいて用いられる静電気固定相に
は、支持担体の表面上に、陽イオン及び陰イオンの両荷
電部を有する化合物が被覆形成されている両荷電層を有
する。従って、図２に示すように、分析成分が溶離液
（移動相）によって運搬されて、この静電気固定相を通
過する時、静電気固定相の両荷電部から静電気反撥力と
静電気吸引力が同時に生じる。そして、この静電気反撥
・吸引力の連合（総和）は、荷電の数若しくはその強さ
（程度）と水和イオンの半径等に依存し、その力は数１
に示すものとなる。
電の間には静電気反撥力と静電気吸引力を生じる。本ク
ロマトグラフィーにおいて用いられる静電気固定相に
は、支持担体の表面上に、陽イオン及び陰イオンの両荷
電部を有する化合物が被覆形成されている両荷電層を有
する。従って、図２に示すように、分析成分が溶離液
（移動相）によって運搬されて、この静電気固定相を通
過する時、静電気固定相の両荷電部から静電気反撥力と
静電気吸引力が同時に生じる。そして、この静電気反撥
・吸引力の連合（総和）は、荷電の数若しくはその強さ
（程度）と水和イオンの半径等に依存し、その力は数１
に示すものとなる。
【００１４】
【数１】
【００１５】ここで、ｎは分析成分の荷電の数、ε1 、
ε2 は静電気伝導度、ｑ（ｓ）+ 、ｑ（ｓ）- は固定相
の陰陽荷電の電子密度、ｑA は分析成分の電子密度、ｒ
及びｒ′はそれぞれ静電気作用距離を示す。この静電気
力の連合作用力（ΔＦ）は分離カラムの一段の分離能力
となる。このΔＦ＜０の場合、これは静電気反撥力が吸
引力よりも大きいことを意味し、このとき、分析成分は
静電気カラムに保留されない。それに対して、ΔＦ＞φ
（φは移動相の輸送力）の時、この場合、分析成分はカ
ラムから溶離することができない。しかしΔＦがφ≧Δ
Ｆ≧０の条件を満足する時、分析成分はカラム上で分離
することができる。即ち、この場合は、分析成分は溶離
液（移動相）で静電気カラムから運び出すことができ
る。そして、上記クロマトグラムには、上記糖尿病患者
の唾液にのみ含まれる糖尿病患者特有成分のクロマトピ
ークが現れるので、その存在を以て糖尿病患者であると
判定できる。
ε2 は静電気伝導度、ｑ（ｓ）+ 、ｑ（ｓ）- は固定相
の陰陽荷電の電子密度、ｑA は分析成分の電子密度、ｒ
及びｒ′はそれぞれ静電気作用距離を示す。この静電気
力の連合作用力（ΔＦ）は分離カラムの一段の分離能力
となる。このΔＦ＜０の場合、これは静電気反撥力が吸
引力よりも大きいことを意味し、このとき、分析成分は
静電気カラムに保留されない。それに対して、ΔＦ＞φ
（φは移動相の輸送力）の時、この場合、分析成分はカ
ラムから溶離することができない。しかしΔＦがφ≧Δ
Ｆ≧０の条件を満足する時、分析成分はカラム上で分離
することができる。即ち、この場合は、分析成分は溶離
液（移動相）で静電気カラムから運び出すことができ
る。そして、上記クロマトグラムには、上記糖尿病患者
の唾液にのみ含まれる糖尿病患者特有成分のクロマトピ
ークが現れるので、その存在を以て糖尿病患者であると
判定できる。
【００１６】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 （１）静電気イオンクロマトグラフィー用装置及びその
使用条件 本装置は、図１に示すように、溶離液を供給するポンプ
１と、このポンプ１に接続される分離カラム３と、この
分離カラム３から分離される分析成分を検出するＵＶ検
出器４と、分離結果を記録する記録装置５と、上記分離
カラム３とポンプ１の間に接続される接続管内に唾液を
注入するための試験液注入器２と、からなる。
る。 （１）静電気イオンクロマトグラフィー用装置及びその
使用条件 本装置は、図１に示すように、溶離液を供給するポンプ
１と、このポンプ１に接続される分離カラム３と、この
分離カラム３から分離される分析成分を検出するＵＶ検
出器４と、分離結果を記録する記録装置５と、上記分離
カラム３とポンプ１の間に接続される接続管内に唾液を
注入するための試験液注入器２と、からなる。
【００１７】ポンプ１としては、０．５ｍｌ気密注射器
（「ＭＳ−ＧＡＮ ０５０」、伊藤富士社製）を備えた
「ＭＦ−２マイクロフィーダー」（東電気工業社製）を
用いた。試験液注入器２としては、マイクロバルブ試料
注入部（商品名；「ＭＬ−５５２」、ＪＡＳＣＯ社製、
注入量０．０２μｌ）を用いた。分離カラム３として
は、まず、５μｍの「Develosil デベロシルＯＤＳ−
５」（商品名、野村化学社製、多孔性シリカゲルにオク
タデシルシラン（ＯＤＳ）を反応させたもの、ＯＤＳ担
体という。）を内部に充填したもの〔１５０ｍｍ×０．
３５ｍｍ（内径）〕を準備した。その後、図２に示すよ
うに、３−〔（３−コールアミドプロピル）ジメチル・
アンモニオ〕−１−プロパンスルホネート（以下、ＣＨ
ＡＰＳという。両極イオン表面活性剤、同仁社製、図３
に示す。）６３を、このＯＤＳ担体（ＯＤＳ層６２、そ
の支持担体６１）の表面上に担持（被覆）させて、両荷
電具備固定相６を作製した。
（「ＭＳ−ＧＡＮ ０５０」、伊藤富士社製）を備えた
「ＭＦ−２マイクロフィーダー」（東電気工業社製）を
用いた。試験液注入器２としては、マイクロバルブ試料
注入部（商品名；「ＭＬ−５５２」、ＪＡＳＣＯ社製、
注入量０．０２μｌ）を用いた。分離カラム３として
は、まず、５μｍの「Develosil デベロシルＯＤＳ−
５」（商品名、野村化学社製、多孔性シリカゲルにオク
タデシルシラン（ＯＤＳ）を反応させたもの、ＯＤＳ担
体という。）を内部に充填したもの〔１５０ｍｍ×０．
３５ｍｍ（内径）〕を準備した。その後、図２に示すよ
うに、３−〔（３−コールアミドプロピル）ジメチル・
アンモニオ〕−１−プロパンスルホネート（以下、ＣＨ
ＡＰＳという。両極イオン表面活性剤、同仁社製、図３
に示す。）６３を、このＯＤＳ担体（ＯＤＳ層６２、そ
の支持担体６１）の表面上に担持（被覆）させて、両荷
電具備固定相６を作製した。
【００１８】この担持方法は、以下の通りである。即
ち、上記ＯＤＳ担体を詰めたマイクロカラムに、ＣＨＡ
ＰＳのコロイド粒子水溶液（表面活性剤の濃度；例えば
３０ｍｍｏｌ／ｌ）を、２．８μｌ／分の流速で２０分
間、通過させてＯＤＳ担体上に吸着させた。尚、この表
面活性剤の濃度は、臨界コロイド粒子濃度（ＣＭＣ）よ
り高くなければならない。ＵＶ検出器（検出波長；２１
５ｎｍ）４としては、フローセル付の「ＵＶＩＤＥＣ−
１００Ｖ」（商品名、ＪＡＳＣＯ社製）を用い、記録装
置５としては、「クロマトパックＣ−Ｒ４ＡＸデータ・
プロセッサー」（商品名、島津製作所社製）を用いた。
溶離液（移動相）としては、燐酸塩緩衝液（水溶液、Ｎ
ａＨ2 ＰＯ4 １０ｍｍｏｌ＋Ｎａ2 ＨＰＯ4 １０ｍｍｏ
ｌ／リットル）を用い、その流速は２．８μｌ／分、分
離は室温で行った。
ち、上記ＯＤＳ担体を詰めたマイクロカラムに、ＣＨＡ
ＰＳのコロイド粒子水溶液（表面活性剤の濃度；例えば
３０ｍｍｏｌ／ｌ）を、２．８μｌ／分の流速で２０分
間、通過させてＯＤＳ担体上に吸着させた。尚、この表
面活性剤の濃度は、臨界コロイド粒子濃度（ＣＭＣ）よ
り高くなければならない。ＵＶ検出器（検出波長；２１
５ｎｍ）４としては、フローセル付の「ＵＶＩＤＥＣ−
１００Ｖ」（商品名、ＪＡＳＣＯ社製）を用い、記録装
置５としては、「クロマトパックＣ−Ｒ４ＡＸデータ・
プロセッサー」（商品名、島津製作所社製）を用いた。
溶離液（移動相）としては、燐酸塩緩衝液（水溶液、Ｎ
ａＨ2 ＰＯ4 １０ｍｍｏｌ＋Ｎａ2 ＨＰＯ4 １０ｍｍｏ
ｌ／リットル）を用い、その流速は２．８μｌ／分、分
離は室温で行った。
【００１９】（２）糖尿病患者の判定 以上の装置及び条件により、以下に述べる実験を行っ
た。まず、糖尿病患者及び非糖尿病患者の唾液試料を各
々、注射器にて採取した。この際、唾液中の固体粒子を
除去するために、注射器の針の先端を綿ウールで被った
まま採取し、その綿ウールは唾液試料をマイクロバルブ
試料注入部へ注入する前に除去した。
た。まず、糖尿病患者及び非糖尿病患者の唾液試料を各
々、注射器にて採取した。この際、唾液中の固体粒子を
除去するために、注射器の針の先端を綿ウールで被った
まま採取し、その綿ウールは唾液試料をマイクロバルブ
試料注入部へ注入する前に除去した。
【００２０】そして、５０人の糖尿病患者と３０人の非
糖尿病患者の各唾液分析試験を行った。尚、これらの多
数の糖尿病患者及び非糖尿病患者ともに、飲食の制限は
全くなく、ある者は食事後、ある者は食事前、更にある
ものは飲料を飲んだ後等に採取し、また採取時間も午前
若しくは午後とまちまちである。一例として、そのうち
のある糖尿病患者のクロマトグラムを図５に、ある非糖
尿病患者のクロマトグラムを図６に示す。この比較か
ら、糖尿病患者特有成分のクロマトピークは、図５に示
すＡピーク（３．７分の保持時間）であることが判明し
た。このピークは、上記５０人の糖尿病患者全てから検
出され、一方、上記３０人の非糖尿病患者から全く検出
されなかったことから、明らかである。
糖尿病患者の各唾液分析試験を行った。尚、これらの多
数の糖尿病患者及び非糖尿病患者ともに、飲食の制限は
全くなく、ある者は食事後、ある者は食事前、更にある
ものは飲料を飲んだ後等に採取し、また採取時間も午前
若しくは午後とまちまちである。一例として、そのうち
のある糖尿病患者のクロマトグラムを図５に、ある非糖
尿病患者のクロマトグラムを図６に示す。この比較か
ら、糖尿病患者特有成分のクロマトピークは、図５に示
すＡピーク（３．７分の保持時間）であることが判明し
た。このピークは、上記５０人の糖尿病患者全てから検
出され、一方、上記３０人の非糖尿病患者から全く検出
されなかったことから、明らかである。
【００２１】更に、糖尿病患者と非糖尿病患者の各クロ
マトグラムを二重に記録させた図を図７に示す。この図
においても、糖尿病患者のクロマトグラムにおいては、
保持時間；３．７分の糖尿病患者特有成分のピークＡが
現れているが、非糖尿病患者のクロマトグラムにおいて
は、全く現れていない。尚、他のＢ1 、Ｂ2 、Ｂ3 、Ｂ
4 及びＢ5 ピークは、糖尿病患者及び非糖尿病患者とも
に現れている。
マトグラムを二重に記録させた図を図７に示す。この図
においても、糖尿病患者のクロマトグラムにおいては、
保持時間；３．７分の糖尿病患者特有成分のピークＡが
現れているが、非糖尿病患者のクロマトグラムにおいて
は、全く現れていない。尚、他のＢ1 、Ｂ2 、Ｂ3 、Ｂ
4 及びＢ5 ピークは、糖尿病患者及び非糖尿病患者とも
に現れている。
【００２２】以上より、上記両イオン具備固定相を用い
れば、非糖尿病患者には示さず且つ糖尿病患者のみに示
す特有成分をうまく分離でき、更にこの分離成分をクロ
マトグラムにおいてうまくクロマトピークとして検出で
きたので、この特有のピークの有無により、糖尿病患者
の有無を簡便に且つ確実に判定できた。また、本方法で
は、飲食物の摂取の影響を受けないので、判定の信頼性
が向上し、また試験者にとって好都合である。
れば、非糖尿病患者には示さず且つ糖尿病患者のみに示
す特有成分をうまく分離でき、更にこの分離成分をクロ
マトグラムにおいてうまくクロマトピークとして検出で
きたので、この特有のピークの有無により、糖尿病患者
の有無を簡便に且つ確実に判定できた。また、本方法で
は、飲食物の摂取の影響を受けないので、判定の信頼性
が向上し、また試験者にとって好都合である。
【００２３】尚、上記ＣＨＡＰＳの代わりに、図２に示
すＣＨＡＰＳＯ〔３−〔（３−コールアミドプロピル）
ジメチル・アンモニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパ
ンスルホネート（同仁社製）〕を用いて同様に試験して
も、同結果を得た。一方、図３に示すＮａＴＤＣ〔タウ
ロデオキシコール酸ナトリウム（シグマ社（米国）
製）〕及びＮａＴＣ〔タウロコール酸ナトリウム（シグ
マ社（米国）製）〕を同様に用いた所、うまく糖尿病患
者特有成分が分離しなかった。
すＣＨＡＰＳＯ〔３−〔（３−コールアミドプロピル）
ジメチル・アンモニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパ
ンスルホネート（同仁社製）〕を用いて同様に試験して
も、同結果を得た。一方、図３に示すＮａＴＤＣ〔タウ
ロデオキシコール酸ナトリウム（シグマ社（米国）
製）〕及びＮａＴＣ〔タウロコール酸ナトリウム（シグ
マ社（米国）製）〕を同様に用いた所、うまく糖尿病患
者特有成分が分離しなかった。
【００２４】尚、本発明においては、前記具体的実施例
に示すものに限られず、目的、用途に応じて本発明の範
囲内で種々変更した実施例とすることができる。即ち、
上記実施例において、判定方法はクロマトグラムを用い
て目視により判定したが、これに限らず、例えば、所定
の糖尿病患者特有成分のクロマトピークの存在を機械的
に（自動的に）読み取って、判定してもよいし、この場
合、判定の結果をランプ等で表してもよい。
に示すものに限られず、目的、用途に応じて本発明の範
囲内で種々変更した実施例とすることができる。即ち、
上記実施例において、判定方法はクロマトグラムを用い
て目視により判定したが、これに限らず、例えば、所定
の糖尿病患者特有成分のクロマトピークの存在を機械的
に（自動的に）読み取って、判定してもよいし、この場
合、判定の結果をランプ等で表してもよい。
【００２５】
【発明の効果】本発明の判定方法及び判定装置によれ
ば、糖尿病患者のみに示す特有成分のクロマトピークが
うまく検出できるので、その特有のピークの有無によ
り、糖尿病患者の有無を、迅速に、簡便に、確実に且つ
飲食物の影響を受けることなく判定でき、大変便利であ
る。
ば、糖尿病患者のみに示す特有成分のクロマトピークが
うまく検出できるので、その特有のピークの有無によ
り、糖尿病患者の有無を、迅速に、簡便に、確実に且つ
飲食物の影響を受けることなく判定でき、大変便利であ
る。
【図１】実施例で用いた糖尿病判定装置の概略説明図で
ある。
ある。
【図２】実施例で用いた両荷電具備固定相に分析成分を
通過させた状態を示す模式的説明図である。
通過させた状態を示す模式的説明図である。
【図３】ＣＨＡＰＳ及びＣＨＡＰＳＯの各化学構造を示
す説明図である。
す説明図である。
【図４】ＮａＴＤＣ及びＮａＴＣの化学構造を示す説明
図である。
図である。
【図５】実施例において糖尿病患者の唾液を分析して得
たクロマトグラムの説明図である。
たクロマトグラムの説明図である。
【図６】実施例において非糖尿病患者の唾液を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
得たクロマトグラムの説明図である。
【図７】実施例において糖尿病患者及び非糖尿病患者の
各唾液によるクロマトグラムを二重に記録させたクロマ
トグラムの説明図である。
各唾液によるクロマトグラムを二重に記録させたクロマ
トグラムの説明図である。
１；ポンプ、２；試料注入器、３；分離カラム、４；検
出器、５；記録装置、６；両荷電具備固定相、６１；支
持担体、６２；ＯＤＳ層、６３；両荷電層、Ａ；糖尿病
患者特有成分のクロマトピーク、Ｂ1 、Ｂ2 、Ｂ3 、Ｂ
4 及びＢ5 ；糖尿病患者及び非糖尿病患者ともに現れる
ピーク。
出器、５；記録装置、６；両荷電具備固定相、６１；支
持担体、６２；ＯＤＳ層、６３；両荷電層、Ａ；糖尿病
患者特有成分のクロマトピーク、Ｂ1 、Ｂ2 、Ｂ3 、Ｂ
4 及びＢ5 ；糖尿病患者及び非糖尿病患者ともに現れる
ピーク。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 30/48 G01N 30/02 G01N 30/74 G01N 30/88 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (6)
- 【請求項１】 分離カラム内に充填された固定相の一端
側に、糖尿病患者の唾液を注入し、その後、溶離液であ
る燐酸塩緩衝液を展開させて該唾液中に含まれる分析成
分を分離し、次いで、この分離された各分析成分を紫外
線検出器にて検出して所定のクロマトグラムを得る静電
気イオンクロマトグラフィーを行い、その際、上記固定
相としては、支持担体と、該支持担体の表面上に、直接
に又は間接に、アンモニウム塩部、及びスルホン酸イオ
ン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合物が被覆
されて形成される両荷電層と、を備える両荷電具備固定
相を用い、 そして、上記クロマトグラムには、上記糖尿病患者の唾
液にのみ含まれる糖尿病患者特有成分のクロマトピーク
が現れ、その存在を以て糖尿病患者であると判定するこ
とを特徴とする糖尿病判定方法。 - 【請求項２】 上記両荷電具備固定相において、上記支
持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持担体の
表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎水性層
が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層が
吸着形成されている請求項１記載の糖尿病判定方法。 - 【請求項３】 アンモニウム塩部、及びスルホン酸イオ
ン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合物は、３
−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕
−１−プロパンスルホネート、又は３−〔３−コールア
ミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−２−ヒドロキシ
−１−プロパンスルホネートである請求項１又は２記載
の糖尿病判定方法。 - 【請求項４】 溶離液を供給するポンプと、該ポンプに
接続される分離カラムと、該分離カラムにより分離され
る分析成分を検出する紫外線検出器と、分離結果を記録
する記録装置と、上記分離カラムと上記ポンプの間に接
続される接続管内に糖尿病患者の唾液を注入するための
唾液注入器と、からなり、 上記分離カラムには、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、アンモニウム塩部、及びスルホ
ン酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合
物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両荷電
具備固定相が充填され、上記記録装置により検出される
糖尿病患者特有成分のクロマトピークの存在を以て糖尿
病患者であると判定することを特徴とする糖尿病判定装
置。。 - 【請求項５】 上記両荷電具備固定相において、上記支
持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持担体の
表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎水性層
が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層が
吸着形成されている請求項４記載の糖尿病判定装置。 - 【請求項６】 上記アンモニウム塩部、及びスルホン酸
イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合物
は、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモ
ニオ〕−１−プロパンスルホネート、又は３−〔３−コ
ールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−２−ヒド
ロキシ−１−プロパンスルホネートである請求項４又は
５記載の糖尿病判定装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29074092A JP3279362B2 (ja) | 1992-10-05 | 1992-10-05 | 糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置 |
| US08/107,122 US5500374A (en) | 1992-10-05 | 1993-08-17 | Method for diagnosing diabetes mellitus and device therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29074092A JP3279362B2 (ja) | 1992-10-05 | 1992-10-05 | 糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0772132A JPH0772132A (ja) | 1995-03-17 |
| JP3279362B2 true JP3279362B2 (ja) | 2002-04-30 |
Family
ID=17759915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29074092A Expired - Lifetime JP3279362B2 (ja) | 1992-10-05 | 1992-10-05 | 糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5500374A (ja) |
| JP (1) | JP3279362B2 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ332323A (en) * | 1996-03-15 | 1999-05-28 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Chromatographic method for removing unconventional transmissible agents from a protein solution |
| US6623698B2 (en) | 2001-03-12 | 2003-09-23 | Youti Kuo | Saliva-monitoring biosensor electrical toothbrush |
| US20040115754A1 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-17 | Umax Data Systems Inc. | Method for establishing a long-term profile of blood sugar level aiding self-control of the same |
| TW200411178A (en) * | 2002-12-31 | 2004-07-01 | Veutron Corp | Method for determining the resolution of blood glucose by using rising time curve |
| TW592667B (en) * | 2003-04-04 | 2004-06-21 | Veutron Corp | Method for determining the resolution of blood glucose |
| JP2009069050A (ja) | 2007-09-14 | 2009-04-02 | Nec Corp | 化合物のカラム担体への固定化方法 |
| WO2009133152A1 (en) * | 2008-04-29 | 2009-11-05 | Becton, Dickinson And Company | Method and system for measuring a sample to determine the presence of and optionally treat a pathologic condition |
| US20210278422A1 (en) * | 2018-09-12 | 2021-09-09 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Reagent and method for measuring hemoglobins |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4168147A (en) * | 1977-12-02 | 1979-09-18 | Isolab, Inc. | Method to determine a diagnostic indicator of blood sugar condition, and, a liquid chromatographic microcolumn therefor |
| US4735777A (en) * | 1985-03-11 | 1988-04-05 | Hitachi, Ltd. | Instrument for parallel analysis of metabolites in human urine and expired air |
| US5055398A (en) * | 1987-05-22 | 1991-10-08 | Kabushiki Kaisha Meidensha | Process for measuring the concentration of a component in body fluid such as urine or blood |
| AU609824B2 (en) * | 1987-06-15 | 1991-05-09 | Southern Cross Biotech Pty Ltd. | Production of proteins in active forms |
| US5032503A (en) * | 1988-06-22 | 1991-07-16 | Microgenics Corporation | Liquid single reagent for air enzyme complementation assay |
| US4895808A (en) * | 1988-07-26 | 1990-01-23 | Romer Labs, Inc. | Method and apparatus for adsorption detection |
| US5139023A (en) * | 1989-06-02 | 1992-08-18 | Theratech Inc. | Apparatus and method for noninvasive blood glucose monitoring |
| US5231031A (en) * | 1990-08-17 | 1993-07-27 | Fox Chase Cancer Center | Method for assessing risk of diabetes-associated pathologic conditions and efficacy of therapies for such conditions |
| DE4028120C2 (de) * | 1990-09-05 | 1996-09-19 | Hoechst Ag | Verfahren zur Reinigung von Insulin und/oder Insulinderivaten |
-
1992
- 1992-10-05 JP JP29074092A patent/JP3279362B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-08-17 US US08/107,122 patent/US5500374A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5500374A (en) | 1996-03-19 |
| JPH0772132A (ja) | 1995-03-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4708933A (en) | Immunoliposome assay-methods and products | |
| Hu et al. | Surface-modified wooden-tip electrospray ionization mass spectrometry for enhanced detection of analytes in complex samples | |
| AU748387B2 (en) | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use | |
| US5753517A (en) | Quantitative immunochromatographic assays | |
| EP0553229B1 (en) | Improvement in solid phase binding assay | |
| JP3279362B2 (ja) | 糖尿病判定方法及び糖尿病判定装置 | |
| Mattiasson et al. | Non-equilibrium enzyme immunoassay of gentamicin. | |
| Liu et al. | Capillary electrophoretic enzyme immunoassay for digoxin in human serum | |
| JP3351572B2 (ja) | イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法 | |
| Xu et al. | Novel polystyrene/antibody nanoparticle-coated capillary for immunoaffinity in-tube solid-phase microextraction | |
| Saito et al. | Mix-mode TiO-C18 monolith spin column extraction and GC-MS for the simultaneous assay of organophosphorus compounds and glufosinate, and glyphosate in human serum and urine | |
| US4307190A (en) | Immunoassay using ascitic fluid | |
| EP1662257A1 (en) | Tool for measuring object to be measured, measuring device, and measuring method | |
| Aizawa et al. | An immunosensor for syphilis | |
| JP3319812B2 (ja) | リウマチ判定方法及びリウマチ判定装置 | |
| Edwards et al. | Flow‐injection liposome immunoanalysis (FILIA) with electrochemical detection | |
| JP4670084B2 (ja) | 化学センサ装置用の検出子およびその利用 | |
| Za'abi et al. | Analyses of acute kidney injury biomarkers by ultra‐high performance liquid chromatography with mass spectrometry | |
| Andrlova et al. | The dried blood spot sampling method in the laboratory medicine. | |
| Hu et al. | Determination of inorganic anions in biological fluids with direct sample injection by electrostatic ion chromatography using zwitterionic micelles in both stationary and mobile phases | |
| Nikoleli et al. | Development of an electrochemical biosensor for the rapid detection of cholera toxin using air stable lipid films with incorporated ganglioside GM1 | |
| JP4653574B2 (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法 | |
| US6720193B2 (en) | Analysis of free analyte fractions by rapid affinity chromatography | |
| JP2007003411A (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法及びヘモグロビンＡ１ｃ測定用キット | |
| Saito et al. | GC-MS assay for acetaminophen in human hair segments |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090222 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090222 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100222 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110222 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120222 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130222 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130222 Year of fee payment: 11 |